Effaith Amddiffynnol Cistanches Herba Ar Fyowenwyndra a achosir gan Statin yn Vitro
Mar 24, 2022
Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com
Elaine Wat a,b,1, Chun Fai Ng a,b,1, Chi Man Koon a,b, Eric Chun Wai Wong a,b, Brian Tomlinson c, Clara Bik San Lau a,b,n
Sefydliad Meddygaeth Tsieineaidd, Prifysgol Tsieineaidd Hong Kong, Shatin, Tiriogaethau Newydd, Hong Kong
b Labordy Allweddol y Wladwriaeth o Ffytocemeg ac Adnoddau Planhigion yng Ngorllewin Tsieina, Prifysgol Tsieineaidd Hong Kong, Shatin, Tiriogaethau Newydd, Hong Kong
c Is-adran Ffarmacoleg Glinigol, Adran Meddygaeth a Therapiwteg, Prifysgol Tsieineaidd Hong Kong, Shatin, Tiriogaethau Newydd, Hong Kong
Crynodeb:
Perthnasedd ethnopharmacolegol: HerbaCistanches(HC,Cistancheanialwch, neuCistanchetubulosa) yn berlysiau Tsieineaidd a ddefnyddir yn draddodiadol ar gyfer problemau cyhyrau. Dangosodd astudiaethau blaenorol y gallai dyfyniad HC leihau difrod cyhyrau a gwella storio ATP mewn llygod mawr ar ôl ymarfer corff. Fodd bynnag, nid yw ei effaith ar wenwyndra cyhyrau a achosir gan statin erioed wedi'i ymchwilio.
Nod:Amcan yr astudiaeth hon oedd penderfynu a allai echdyniad dyfrllyd HC (HCE) atal gwenwyndra a achosir gan simvastatin mewn celloedd cyhyrau ysgerbydol llygod mawr L6 ac ai verbascoside yw'r prif gyfansoddyn bioactif sy'n cyfrannu at yr effeithiau.
Deunyddiau a dulliau:Perfformiwyd MTT i bennu effeithiau HCE ({{0}}-2000 mg/ml) neu verbascoside (0-160 mM) ar gelloedd L6 a driniwyd gan simvastatin (10 mM). Perfformiwyd assay apoptosis Annexin V-FITC/PI ac assay Caspase 3 i bennu rôl amddiffynnol HCE ar farwolaeth celloedd a achosir gan simvastatin, ac i werthuso a oedd HCE yn cael ei effaith amddiffynnol trwy'r llwybr caspase. Mesurwyd cynhyrchiad ATP i ymchwilio i weld a allai HCE atal gostyngiad a achosir gan simvastatin mewn cynhyrchiad ATP in vitro.
Canlyniadau:Cynyddodd Simvastatin farwolaeth celloedd apoptotig yn sylweddol mewn celloedd L6. Gwnaeth HCE ostyngiad sylweddol yn dibynnu ar ddos ar gelloedd apoptotig a achosir gan simvastatin, o bosibl trwy lwybr caspase-3. Gostyngodd Simvastatin y cynhyrchiad ATP mewn celloedd L6, a gafodd ei atal yn ddibynnol ar ddos gan HCE. Dim ond tueddiad ond nid effaith sylweddol (ac eithrio ar ddogn uchel) o verbascoside ar amddiffyn gwenwyndra cyhyrau a achosir gan simvastatin.
Casgliadau:I gloi, gwnaethom ddangos am y tro cyntaf y gallai HCE gael effaith amddiffynnol sy'n dibynnu ar ddos ar wenwyndra in vitro a achosir gan simvastatin, a oedd yn annhebygol oherwydd presenoldeb verbascoside. Awgrymodd ein hastudiaeth y defnydd posibl o HC o dan sefyllfa gwenwyndra cyhyrau a achosir gan simvastatin.
Geiriau allweddol:HerbaCistanches, StatinColesterol, Hyperlipidemia, Gwenwyndra Cyhyrau, Verbascoside, Caspase-3
1. Rhagymadrodd
Mae atalyddion reductase HMG-CoA (statins), sef y dosbarth cyffuriau presgripsiwn sy'n gwerthu orau yn y byd mewn hanes, wedi'u dogfennu'n dda i fod o fudd i gleifion o'r ddau ryw ar wahanol oedrannau sydd â risg clefyd cardiofasgwlaidd cymedrol ac uchel (CVD) (Golomb a Evans, 2008). Yna datblygwyd a chymeradwywyd statinau gwahanol yn glinigol gan gynnwys pravastatin, atorvastatin, fluvastatin, lovastatin, pitavastatin, rosuvastatin, a simvastatin. Yn gyffredinol, mae pob statin yn gweithredu trwy atal y gostyngiad mewn HMG-CoA i asid mevalonic yn ystod cyfnod cynnar y llwybr mevalonate i leihau cynhyrchiant colesterol (Kromer a Moosmann, 2009; Thompson et al., 2003). Er bod statinau fel arfer yn cael eu goddef yn dda, un o'r effeithiau andwyol clinigol pwysicaf ac adnabyddus yw gwenwyndra cyhyrau ysgerbydol (rhabdomyolysis) (Kobayashi et al., 2008). Gall annormaleddau cyhyrau ysgerbydol amrywio o fyalgia anfalaen i myopathi difrifol. Er bod cymysgedd o fecanweithiau yn cael eu cynnig ac y gallent fod yn gyfrifol am effeithiau andwyol statin ar gyhyrau, credir bod mecanweithiau mitocondriaidd yn chwarae rhan bwysig (Golomb ac Evans, 2008). Mae Mevalonate nid yn unig yn rhagflaenydd colesterol, ond hefyd ar gyfer cyfansoddion eraill gan gynnwys selenoproteinau, dolichol, ac ubiquinone (Kaufmann et al., 2006; Vaklavas et al., 2009). Felly byddai gallu statinau i atal mevalonate hefyd yn atal cynhyrchu selenoproteinau fel glutathione peroxidase (GPx), sy'n ensymau pwysig wrth gynnal y mecanwaith amddiffyn gwrthocsidiol (Kromer a Moosmann, 2009). Gallai statinau hefyd arwain at ddisbyddu ubiquinone, gan achosi gostyngiad yn y defnydd o ocsigen a synthesis ATP (Beltowski et al., 2009). At hynny, dangosodd astudiaethau in vitro ac in vivo cynyddol y gallai statin hefyd weithredu'n uniongyrchol ar mitocondria meinwe i gymell trawsnewid athreiddedd pilen sy'n ddibynnol ar Ca2þ (MPT) mewn modd sy'n dibynnu ar ddos (Beltowski et al., 2009; Velho et al., 2006 ). Mae hefyd yn gysylltiedig â mwy o rywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) a straen ocsideiddiol mitocondriaidd, gan arwain at farwolaeth celloedd ac felly'n cyfrannu at anaf i'r afu a'r cyhyrau (Beltowski et al., 2009; Velho et al., 2006).
HerbaCistanches, mae planhigyn sych cyfan Cistanche deserticola YC Ma, neu Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight (teulu Orobanchaceae), yn blanhigion parasitig sy'n tyfu'n bennaf yn ardaloedd anialwch gogledd a gogledd-ddwyrain Tsieina (Siu a Ko, 2010).HerbaCistanchesyn berlysieuyn tonig Tsieineaidd sy'n bywiogi Yang a ddefnyddir yn bennaf i drin diffyg arennau gyda symptomau fel analluedd, anffrwythlondeb, ejaculation cynamserol. Mae natur drwm a chloy y perlysiau hefyd yn lleithio'r coluddion ac yn helpu i leddfu rhwymedd. Mae hefyd yn berlysiau Tsieineaidd sy'n cael ei ragnodi'n draddodiadol i gleifion ar gyfer poen yn y lwynau a'r pengliniau ac mae'n berlysiau a ddefnyddir yn gyffredin mewn fformwleiddiadau Tsieineaidd ar gyfer trin problemau cyhyrau (Siu a Ko, 2010; Xiong et al., 1998). Yn ddiddorol, mae hyn hefyd yn gyson â'r astudiaethau gwyddonol modern a ddangosodd weithgareddau gwrth-blinder detholiad o polysacarid-gyfoethog a phenylethanoid-gyfoethog.HerbaCistanchesmewn llygod mawr ar ôl gwneud ymarfer corff trwy leihau difrod cyhyrau a gwella storio ATP (Cai et al., 2010). Dangosodd gwaith diweddar y gallai echdyniad methanol o Herba Cistanches wella cynhyrchu ATP mitocondriaidd (Leung a Ko, 2008). Dangosodd Siu a Ko (2010) hynnyHerbaCistanchesgallai hefyd wella statws glutathione mitocondriaidd trwy gyfryngu lefelau synthesis glutathione a GPx, gan amddiffyn meinweoedd rhag straen ocsideiddiol yng nghalonnau llygod mawr. Dangosodd Siu a Ko (2010) hynny hefydHerbaCistanchesgallai leihau cynnwys Ca2þ mitocondriaidd, a thrwy hynny leihau MPT sy'n ddibynnol ar Ca2þ. Ar ben hynny,HerbaCistanchesprofwyd hefyd ei fod yn wrthocsidydd cryf ac yn sborionwr radical rhydd mewn amrywiol organau, gan leihau'r straen ocsideiddiol a gweithgareddau ROS mewn astudiaethau vivo (Lu et al., 1995; Sui et al., 2011). Yn fwy diddorol, mewn ymgais i bennu'r ffracsiwn gweithredol sy'n cyfrannu at weithgaredd gwrth-blinder oHerbaCistanches, canfuwyd mai verbascoside oedd y prif gyfansoddyn yn y ffracsiwn gweithredol (Cai et al., 2010). Dangoswyd bod Verbascoside hefyd yn lleihau blinder cyhyrau mewn llyffantod, o bosibl oherwydd ei weithgareddau gwrthocsidiol (Liao et al., 1999), gan awgrymu y gallai verbascoside fod yn gydran bioactif sy'n cyfrannu at effeithiau buddiol Herba Cistanches.
Nod yr astudiaeth hon oedd penderfynu a allai defnyddio echdyniad dŵr Cistanches llysieuol (HCE) leihau'r gwenwyndra cyhyrau a achosir gan simvastatin in vitro. Tybiwyd y gallai defnyddio HCE gywiro sgîl-effeithiau gwenwyndra cyhyrau a achosir gan simvastatin. Gwnaed ymgais hefyd i benderfynu a oedd effeithiau buddiolHerbaCistanchesyn cael eu priodoli i bresenoldeb verbascoside.
2. Deunyddiau a dulliau
2.1. Dilysu a pharatoi deunyddiau llysieuol
Deunydd llysieuol crai oHerbaCistanchesei brynu gan gyflenwr enwog yn Guangzhou, Tsieina.HerbaCistancheswedi'i ddilysu'n gemegol gan ddefnyddio cromatograffaeth haen denau (TLC) yn unol â Pharmacopoeia Tsieineaidd (CP), 2010, gyda verbascoside ac echinacoside fel y marcwyr cemegol (data heb ei ddangos). Ar ôl dilysu cemegol, sbesimen taleb herbariwm oHerbaCistanchesei adneuo yn Amgueddfa'r Sefydliad Meddygaeth Tsieineaidd ym Mhrifysgol Tsieineaidd Hong Kong (CUHK), gyda rhif sbesimen taleb 2014-3434.
Yn gryno, cafodd 1 kg o'r perlysiau amrwd ei socian am 1 h, ac yna echdynnu ddwywaith trwy wresogi am 1 h o dan adlif ar 100 gradd gan ddefnyddio 10 dŵr distyll ar gyfer pob echdyniad. Cafodd y darnau dyfrllyd (HCE) eu cyfuno a'u hidlo. Crynhowyd yr hidlif o dan bwysau llai ar 60 gradd. Roedd y dyfyniad crynodedig ei lyophilized i sychder. Canran y cynnyrch oedd 50.1 y cant w/w. Defnyddiwyd ychydig bach i ganfod faint o verbascoside ac echinacoside gan ddefnyddio cromatograffaeth hylif uwch-berfformiad (UPLC). Roedd yr holl bowdr a dynnwyd yn cael ei bacio dan wactod a'i storio nes ei ddefnyddio.
2.2. Dadansoddiad UPLC o'r dyfyniad dyfrllyd
Perfformiwyd dadansoddiadau UPLC gan ddefnyddio System LC Waters Acquity Ultra Performance (Waters, USA). Prynwyd yr holl doddyddion sydd eu hangen ar gyfer dadansoddiadau UPLC gan yr Adran Cemeg ym Mhrifysgol Tsieineaidd Hong Kong. Prynwyd Verbascoside ac echinacoside gan y Sefydliad Cenedlaethol ar gyfer Rheoli Cynhyrchion Fferyllol a Biolegol, Tsieina. Chwistrellwyd yr hydoddiant sampl i golofn Waters Acquity UPLC BEH C18 (10{{20}} 2.1 mm2 id, maint gronynnau 1.7 mm) gyda Waters ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard Pre-Colofn ( 5-2.1 mm2 id, maint gronynnau 1.7 mm). Cafodd pob toddydd ei hidlo ymlaen llaw gyda 0.45 mm disg hidlo Millipore (Millipore) a'i ddad-nwyo. Defnyddiwyd y systemau toddyddion canlynol i wanhau graddiant: cam symudol A – asetonitrile; cam symudol B – dŵr distyll dwbl/asid ffurfig (99.9/ 0.1; v/v). Perfformiwyd yr elution gyda gweithdrefn graddiant fel a ganlyn: 0-5 mun, 88 y cant B; 5-10 mun, o 88 y cant B i 83 y cant B. Y gyfradd llif a ddefnyddiwyd oedd 0.4 ml/munud a pherfformiwyd canfod ar 331 nm yn unol â CP (2010). Chwistrellwyd pob sampl (5 ul) i'r golofn ar ôl ei hidlo trwy ddisg hidlo 0.2 mm. Cyflawnwyd adnabod y marcwyr cemegol trwy gymharu'r amseroedd cadw ac amsugnedd UV y copaon anhysbys â rhai'r safonau. Plotiwyd cromlin raddnodi gan gyfres o grynodiadau o verbascoside ac echinacoside (40, 20, 10, 5, 2.5, ac 1.25 mg/ml) i'w meintioli. Perfformiwyd meintioli verbascoside ac echinacoside o fewn y detholiad llysieuol mewn triphlyg. Cafodd y system ei monitro gan gyfrifiadur gyda Meddalwedd Waters MassLynx ar gyfer casglu, integreiddio a dadansoddi data.
2.3. Diwylliant celloedd
Prynwyd llinell celloedd cyhyrau ysgerbydol llygoden fawr L6 o'r Casgliad Diwylliant Math Americanaidd (ATCC, Manassa, VA, UDA). Cadwyd y celloedd ar ddwysedd is-gydlifiad yn Dulbecco'sModifified Eagle's Medium (DMEM, ATCC, Manassas, VA, UDA) gyda 10 y cant v/v serwm buchol ffetws (FBS) ac 1 y cant penisilin-streptomycin (P/S), a wedi'i ddeor ar 37 gradd mewn awyrgylch llaith sy'n cynnwys 5 y cant o CO2 a 95 y cant o aer.
Er mwyn pennu effeithiau HCE ar wenwyndra cyhyr a achosir gan statin, cafodd celloedd L6 eu trin â simvastatin ar 10 μM am 48 h i gymell gwenwyndra. Ychwanegwyd HCE (mewn crynodiadau 0, 250, 500, 1000, a2000 ug/ml) neu verbascoside (mewn crynodiadau 0, 20, 40, 80, a 160 μM) fel cyd-driniaeth gyda statin i benderfynu a yw'r gallai detholiad llysieuol atal gwenwyndra a achosir gan statin mewn celloedd cyhyrau ysgerbydol a phe gallai verbascoside gael effeithiau amddiffynnol tebyg i'r dyfyniad dyfrllyd llysieuol.
Mae Herba Cistanche yn tynnu effaith amddiffynnol ar wenwyndra a achosir gan simvastatin in vitro
2.4. Sytowenwyndra in vitro
Celloedd L6 (1x105/wel) wedi'u hadu mewn {{0}}blatiau meithrin gwaelod gwastad (Iwaki, Japan) dros nos, wedi'u dilyn gan driniaeth â 10 μM o simvastatin, ynghyd â neu heb ddosau amrywiol o HCE ( 0-2000 ug/ml) neu verbascoside (0-160 μM), am 48 h. Ychwanegwyd cyfrwng plaen (DMEM) at y ffynhonnau rheoli. Diddymwyd y detholiad llysieuol a'r cyfansawdd yn DMEM.
Yn dilyn y driniaeth 48 h, cafodd y cyfrwng o bob cell ei daflu a 30 ul o 5 mg/ml 3-(4,{5}}dimethylthiazol-2-yl)-2,{{{} Ychwanegwyd 8}}bromid deuffenyl-tetrazolium (MTT; Sigma, UDA) mewn halwynog byffer ffosffad (PBS) at bob ffynnon a deorwyd y platiau ymhellach am 3 h ar 37 gradd . Yna tynnwyd y supernatant ac ychwanegwyd 100 ul o DMSO at bob ffynnon i doddi'r crisialau formazan porffor (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. USA). Darllenwyd amsugnedd pob sampl ar 540 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate (Biotek μ-Quant, UDA). Mynegwyd canlyniadau fel canran yr amsugnedd MTT mewn perthynas â chelloedd rheoli.
2.5. Assay staenio FITC/PI Annexin-V
Celloedd L6 (3 x105/well) wedi'u trin â simvastatin, ynghyd â neu heb ddosau amrywiol o HCE neu verbascoside. Yna cafodd celloedd eu casglu, eu golchi a'u staenio â phecyn FITC anecsin-V yn unol â phrotocol y gwneuthurwr (Trevigen, MD, UDA). Yn fyr, golchwyd celloedd ddwywaith gyda byffer rhwymo 1 x ac mewn cubated mewn datrysiad labelu 100 ul sy'n cynnwys 1 ul annexin-V FITCconjugate a 10 ul PI yn y tywyllwch am 15 munud ar dymheredd yr ystafell. Canfuwyd fflworoleuedd y samplau gan sytometreg llif (Becton Dickinson FACSCanto II, UDA).
2.6. Assay gweithgaredd Caspase 3
Penderfynwyd ar weithgaredd Caspase 3 gan ddefnyddio assay ensymau fflworometrig, imiwn-imiwn (Sigma) yn unol â chyfarwyddyd y gwneuthurwr. Yn gryno, cafodd celloedd L6 (3 105/wel) a gafodd eu trin â simvastatin, ynghyd â dosau amrywiol o HCE verbascoside, neu hebddynt, eu gorchuddio gan ddefnyddio byffer lysis. Cafodd 7-amino{5}}methylcoumarin (AMC) rhad ac am ddim a gynhyrchwyd trwy holltiad proteolytig y swbstrad gan Caspase 3 eu mesur a'u meintioli'n fflworometrig gyda'r donfedd cyffroi yn 360 nm, a thonfedd allyriadau ar 460 nm gyda FLUOstarOptimamicroplate BMG darllenydd (BMG LABTECH GmbH, yr Almaen).
2.7. Assay ATP cellog
Celloedd L6 (3x105/well) wedi'u trin â simvastatin, ynghyd â neu heb ddosau amrywiol o HCE neu verbascoside. Yn dilyn triniaeth, casglwyd celloedd a mesurwyd y cynnwys ATP gan ddefnyddio'r pecyn lliwimetrig sydd ar gael yn fasnachol (Abcam, UK) trwy fesur cynnwys glyserol ffosffad y celloedd lysed a darllen ar 570 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate (Biotek μ-Quant, UDA ). Mynegwyd mesuriad cynhyrchu ATP fel canran o'i gymharu â'r grŵp rheoli.
2.8. Dadansoddiad ystadegol
Cyflwynwyd data fel modd7SD, defnyddiwyd Prism 5 ar gyfer Window (fersiwn 5.0c, GraphPad Software, Inc., USA) ar gyfer dadansoddiad ystadegol. Aseswyd gwahaniaethau sylweddol rhwng yr holl grwpiau gan ANOVA unffordd, ac yna Prawf Cymhariaeth Lluosog Bonferroni. Ystyriwyd bod tebygolrwydd po0.05 yn ystadegol arwyddocaol.
3. Canlyniadau
3.1. Dadansoddiad UPLC o echdynnyn dyfrllyd Herba Cistanches
Dangosodd Ffig. S1A broffil UPLC o gymysgedd safonol sy'n cynnwys echinacoside a verbascoside. Cymharwyd pwyntiau amser cadw pob un o'r marcwyr hyn â phroffil UPLC oHerbaCistanchesdyfyniad dyfrllyd (Ffig. S1B). Faint o echinacoside a verbascoside o fewnHerbaCistanchescanfuwyd bod echdyniad dyfrllyd yn {{0}}.45 y cant w/w a 0.085 y cant w/w, yn y drefn honno.
3.2. Effaith HCE a verbascoside ar sytowenwyndra in vitro simvastatin mewn celloedd cyhyrau ysgerbydol L6
Fel y dangosir yn Ffig. 1A, achosodd simvastatin sytowenwyndra sylweddol i gelloedd L6 fel yr adlewyrchir gan y gostyngiad sylweddol yn hyfywedd celloedd L6 ar simvastatin 10 mM. Roedd triniaeth HCE yn dibynnu ar ddos ac yn atal y sytowenwyndra a achosir gan simvastatin yn sylweddol ar 500, 1000, a 2000 mg/ml. Roedd Verbascoside yn dangos tuedd i wella hyfywedd celloedd L6 a gafodd eu trin ar y cyd â simvastatin. Fodd bynnag, nid oedd yr un o'r crynodiadau wedi cyrraedd arwyddocâd ystadegol (Ffig. 1 B).
Ffig. 1. Effaith amddiffynnol (a) HCE; a (b) verbascoside ar sytowenwyndra a achosir gan simvastatin mewn celloedd L6. Mae gwerthoedd yn cynrychioli modd 7SD (n¼3). Gwahaniaeth sylweddol rhwng triniaeth simvastatin yn unig a'r grŵp rheoli sy'n defnyddio prawf-t Myfyriwr: ### po0.{{10}}01. Gwahaniaeth sylweddol rhwng yr holl grwpiau sy'n cael eu trin gan simvastatin gyda neu heb driniaeth ar y cyd HCE verbascoside gan ddefnyddio ANOVA unffordd: ** po0.01, *** po0.001.
3.3. Effaith HCE a verbascoside ar farwolaeth celloedd a achosir gan simvastatin mewn celloedd cyhyrau ysgerbydol L6
Er mwyn archwilio'r modd o farwolaeth celloedd a achosir gan simvastatin a phennu rôl amddiffynnol HCE neu verbascoside ar y farwolaeth celloedd a achosir gan simvastatin, canfuwyd cyfran y celloedd apoptotig gan staenio propidium ïodid (PI). Dangosodd y canlyniadau fod simvastatin wedi achosi cynnydd sylweddol yng nghyfran y celloedd apoptotig cynnar (Atodiad V-FITC positif a PI negatif, Q4-2), a chelloedd apoptotig/marw hwyr (Atodiad V-FITC positif a PI-positif, C2-) 2) o'i gymharu â'r grŵp rheoli. Gostyngodd cyd-driniaeth â HCE gyfran y celloedd apoptotig cynnar, a hwyr apoptotig / marw mewn modd sy'n dibynnu ar ddos hyd at 1000 mg / ml (Ffig. 2 A). Gwelwyd yr effaith amddiffynnol hon hefyd mewn grwpiau cyd-driniaeth verbascoside. Fodd bynnag, nid oedd yr un o'r crynodiadau a brofwyd wedi cyrraedd arwyddocâd ystadegol (Ffig. 2B).
Ffig. 2. Effaith simvastatin gyda neu heb driniaeth HCE neu verbascoside ar allanoli ffosffatidylserine mewn celloedd L6. Cafodd celloedd eu staenio â FITC Annexin-V ac I a'u canfod gan sytometreg llif
3.4. Effaith HCE a verbascoside ar weithgaredd caspase 3 mewn celloedd cyhyrau ysgerbydol L6 wedi'u trin â simvastatin
Fel y dangosir yn Ffig. 3A, ysgogodd 10 mM simvastatin weithgaredd caspase 3 yn sylweddol mewn celloedd L6, gan awgrymu apoptosis a achosir gan simvastatin i gelloedd L6 trwy'r rhaeadr caspase. Fodd bynnag, mewn celloedd L6 a gyd-driniwyd â simvastatin a HCE, roedd HCE yn dibynnu ar ddos yn sylweddol ac wedi lleihau gweithgaredd caspase 3 yn sylweddol, gan awgrymu gallu HCE i atal apoptosis a achosir gan simvastatin trwy'r rhaeadr caspase. Ar y llaw arall, er bod verbascoside hefyd yn dangos tuedd i leihau'r cynnydd a achosir gan simvastatin mewn gweithgaredd ensymau caspase 3, dim ond y crynodiad ar 160 mM a gyrhaeddodd arwyddocâd ystadegol (Ffig. 3 B).
Ffig. 3. Effaith amddiffynnol (a) HCE; a (b) verbascoside ar actifedd ensymatig caspase 3 a achosir gan simvastatin mewn celloedd L6. Mae gwerthoedd yn cynrychioli modd7SD (n¼3–5).Gwahaniaeth sylweddol rhwng triniaeth simvastatin yn unig a grwpiau rheoli gan ddefnyddio prawf-t Myfyriwr: ###po0.001. Gwahaniaeth sylweddol rhwng yr holl grwpiau sy'n cael eu trin gan simvastatin gyda neu heb driniaeth HCE neu verbascoside ar y cyd gan ddefnyddio ANOVA unffordd: *po0.05, **p o0.01, ***po0.001.
3.5. Effaith HCE ar ostyngiad a achosir gan simvastatin mewn cynhyrchiad ATP mewn celloedd cyhyrau ysgerbydol L6
Gostyngodd Simvastatin (10 mM) gynhyrchu ATP yn sylweddol mewn celloedd L6 tua 60 y cant o'i gymharu â'r grŵp rheoli (Ffig. 4A). Gwanhaodd dos cyd-driniaeth HCE yn ddibynnol ar y gostyngiad mewn cynhyrchiad ATP mewn celloedd sy'n cael eu trin â simvastatin, a dim ond y crynodiadau o 500, 1000, a 2000 mg/ml oedd wedi cyrraedd arwyddocâd ystadegol. Ar y llaw arall, er bod verbascoside yn dangos tuedd i adfer cynhyrchiad ATP ar 50 mg/ml, ni chyrhaeddodd arwyddocâd ystadegol (Ffig. 4 B).
Ffig. 4. Effaith amddiffynnol (a) HCE a (b) verbascoside ar leihad a achosir gan simvastatin mewn cynhyrchiad ATP mewn celloedd L6. Mae gwerthoedd yn cynrychioli modd7SD (n¼3–5). Gwahaniaeth sylweddol rhwng triniaeth simvastatin yn unig a grwpiau rheoli gan ddefnyddio prawf-t Myfyriwr: ###po0.001. Gwahaniaeth sylweddol rhwng yr holl grwpiau sy'n cael eu trin gan simvastatin gyda neu heb driniaeth HCE neu verbascoside ar y cyd gan ddefnyddio ANOVA unffordd: *po0.05, **po0.01.
4. Trafodaeth
Gyda nifer cynyddol clefyd cardiofasgwlaidd (CVD) a chleifion sy'n cael diagnosis o hypercholesterolemia yn fyd-eang, mae'r defnydd o statinau wedi dod yn fwy cyffredin. Er bod statinau yn cael eu goddef yn dda iawn ar y cyfan, mae anafiadau cyhyr yn sgîl-effaith a adroddir yn aml yn gysylltiedig â defnyddio statin a all ddigwydd yn ddifrifol wythnosau neu fisoedd ar ôl i'r cyffur gael ei gychwyn (Fine, 2003). Gall symptomau cyhyrau amrywio o broblemau ysgafn, er enghraifft, poen, tynerwch, neu wendid gyda neu heb ddrychiad creatine kinase (CK), i gyflwr mwyaf difrifol rhabdomyolysis (Armitage, 2007; Hu et al., 2012). Oherwydd bod y sgîl-effeithiau hyn yn digwydd, a'r ffaith nad oes triniaeth effeithiol ar gyfer gwenwyndra cyhyr a achosir gan statin, nid yw statinau'n cael eu defnyddio'n ddigonol o hyd. Mewn arolwg eang ar 10,409 o bynciau Ffrengig a gynhaliwyd trwy gyfweliad ffôn, nododd 10 y cant o'r cleifion a gafodd driniaeth statin symptomau cyhyrol, ac o hynny arweiniodd 30 y cant o'r cleifion symptomatig hyn at derfynu triniaeth (Rosenbaum et al., 2013).
Am y tro cyntaf rydym wedi dangos bod y echdynnu dŵr oHerbaCistanches, perlysiau Tsieineaidd traddodiadol a ddefnyddir yn gyffredin, gael effaith amddiffynnol yn erbyn gwenwyndra in vitro a achosir gan simvastatin mewn celloedd cyhyrau ysgerbydol L6, gan awgrymu potensialHerbaCistanchesdyfyniad dyfrllyd (HCE) am ei rôl amddiffynnol gwenwyndra cyhyr a achosir gan statin, sy'n sgîl-effaith gyffredin gydnabyddedig mewn cleifion sy'n cymryd statinau. Byddai gallu cryf HCE i amddiffyn rhag gwenwyndra cyhyrau a achosir gan statin felly o botensial mawr.
Yn ôl y ddamcaniaeth draddodiadol yn TCM, mae Yang yn gysylltiedig â metaboledd ynni mitocondriaidd yn y corff, a chanfuwyd bod rhagnodi perlysiau sy'n bywiogi Yang yn gwella cenhedlaeth ATP mitocondriaidd (Ko a Leung, 2007). Yn ddiddorol, gwelsom ostyngiad mewn cynhyrchiad ATP mewn celloedd cyhyrau ysgerbydol L6 a driniwyd gan simvastatin, a chafodd y gostyngiad hwn mewn cynhyrchiad ATP ei wella'n sylweddol gyda chyd-driniaeth HCE. Yn ein hastudiaeth, gan ddefnyddio celloedd cyhyrau ysgerbydol llygod mawr L6, gwnaethom ddangos gostyngiad yn hyfywedd celloedd a achosir gan simvastatin. Gwellwyd y gostyngiad hwn mewn hyfywedd celloedd yn sylweddol gyda chyd-drinHerbaCistanchesmewn modd sy'n dibynnu ar ddos. Er nad yw union fecanwaith gwenwyndra cyhyr a achosir gan statin wedi’i egluro’n llawn, awgrymwyd bod apoptosis o myocytau iach ysgerbydol a achosir gan statin yn ffactor sy’n cyfrannu at myopathi, sef y sgil-effaith mwyaf cyffredin a brofir gan ddefnyddwyr statin (Dirks a Jones, 2006) . Yn ein hastudiaeth, gwelsom gynnydd sylweddol mewn celloedd apoptotig a achosir gan simvastatin, a oedd yn gysylltiedig â gweithgaredd caspase 3 sylweddol uwch. Mae'r data hyn hefyd yn gyson ag astudiaethau blaenorol, a ddangosodd y gallai statinau amrywiol achosi apoptosis mewn myoblastau ysgerbydol, myotiwbiau, ac mewn celloedd cyhyrau ysgerbydol dynol sylfaenol gwahaniaethol trwy actifadu gweithgareddau caspase-9 a caspase-3 (Dirks a Jones, 2006). Llwyddodd ein HCE i atal y cynnydd hwn a achosir gan simvastatin mewn apoptosis wedi'i actifadu caspase mewn modd a oedd yn dibynnu ar ddos.
HerbaCistanches
Ar ben hynny, roedd llenyddiaeth flaenorol yn awgrymu bod verbascoside yn un o'r prif gyfansoddion gweithredol ynddoHerbaCistanches. Mae Verbascoside, a elwir hefyd yn acteoside, yn perthyn i'r aelod o'r glycosidau ffenylethanoid, grŵp sy'n digwydd yn naturiol o gyfansoddion polyphenolig sy'n hydawdd mewn dŵr (Liao et al., 1999). Yn flaenorol, dangoswyd bod verbascoside yn gwrthocsidydd cryf a allai arddangos gweithgareddau chwilota a gwrthocsidiol cryf ROS (Liao et al., 1999). Yn ein hastudiaeth, i benderfynu ai verbascoside yw'r brif gydran yn ein HCE sy'n cyfrannu at yr effeithiau buddiol a arsylwyd, gwnaethom brofi effeithiau verbascoside ar grynodiadau o 0-160 mM. Gan ein bod wedi dangos bod ein HCE yn weithredol ar yr ystod crynodiad o 250–2000 mg/ml, yn seiliedig ar ein canlyniadau HPLC a awgrymodd fod ein HCE yn cynnwys verbascoside ar y crynodiad o 0.085 y cant wt /wt, dylai'r crynodiad gweithredol o verbascoside amrywio rhwng 0.2125-1.7 mg/ml (hy 0.34-2.72 mM), a ddylai verbascoside fod yn gyfansoddyn gweithredol? Serch hynny, ni wnaethom fethu ag arsylwi effaith fuddiol sylweddol verbascoside gyda'r ystod crynodiad a brofwyd, er i ni arsylwi tueddiad dos-ddibynnol ar gyfer effaith fuddiol verbascoside ar gelloedd cyhyrau ysgerbydol L6. Roedd y data hyn yn awgrymu bod effaith fuddiol ein HCE a welwyd mewn celloedd ysgerbydol L6 yn annhebygol o gael ei phriodoli i effaith verbascoside yn unig, gan awgrymu y gallai cydrannau heblaw verbascoside fod yn gyfrifol am yr effeithiau buddiol a arsylwyd. Mae hefyd yn bosibl y gallai verbascoside ryngweithio â chyfansoddion bioactif eraill yn y darn i gyfrannu at yr effeithiau buddiol. Bydd arbrofion ychwanegol gan ddefnyddio ffracsiynu a arweinir gan fio-dreiddiad yn ddefnyddiol i ddarparu mewnwelediad pellach ar ddarganfod y cydrannau bioactif sy'n gyfrifol am gyfrannu at yr effeithiau amddiffynnol a welwyd o HCE ar wenwyndra cyhyrau a achosir gan simvastatin.
I gloi, mae'r astudiaeth bresennol yn nodi y gallai HCE gael effeithiau amddiffynnol cryf ar leihad a achosir gan simvastatin yn hyfywedd celloedd cyhyrau in vitro. Mae'r canlyniadau hyn yn darparu'r dystiolaeth ragarweiniol sy'n awgrymu y gallai ein detholiad dyfrllyd HC fod o werth therapiwtig fel bwyd swyddogaethol neu faethegol i gleifion hyperlipidemig y mae'n ofynnol iddynt dynnu'n ôl o driniaeth statin oherwydd myowenwyndra a achosir gan statin.
Cydnabyddiaeth Cefnogwyd yr astudiaeth hon yn ariannol gan y Swyddfa Bwyd ac Iechyd HKSAR, Cronfa Ymchwil Iechyd a Meddygol rhif. 11120831.
Cyfeiriadau
Armitage, J., 2007. Diogelwch statinau mewn ymarfer clinigol. Lancet 370, 1781–1790.
Beltowski, J., Wojcicka, G., Jamroz-Wisniewska, A., 2009. Effeithiau andwyol statinau – mecanweithiau a chanlyniadau. Curr. Cyffur Saf. 4, 209–228.
Cai, RL, Yang, MH, Shi, Y., Chen, J., Li, YC, Qi, Y., 2010. Mae'r gweithgaredd antifatigue o ffenylethanoid-gyfoethog dyfyniad o Cistanche deserticola. Phytother. Res. 24, 313–315.
Dirks, AJ, Jones, KM, 2006. Apoptosis a achosir gan statin a myopathi ysgerbydol. Yn. J. Physiol. Cell Physiol. 291, C1208–C1212.
Fine, DM, 2003. Gwenwyndra cyhyr sy'n gysylltiedig â statin. Clin. Ffarmacol. 3, 554.
Golomb, BA, Evans, MA, 2008. Effeithiau andwyol Statin: adolygiad o'r llenyddiaeth a'r dystiolaeth ar gyfer mecanwaith mitocondriaidd. Yn. J. Cardiofasg. Cyffuriau 8, 373–418.
Hu, M., Cheung, BM, Tomlinson, B., 2012. Diogelwch statinau: diweddariad. Ther. Adv. Cyffur Saf. 3, 133–144.
Kaufmann, P., Torok, M., Zahno, A., Waldauser, KM, Brecht, K., Krahenbuhl, S., 2006. Gwenwyndra statinau ar mitocondria cyhyrau ysgerbydol llygod mawr. Cell. Mol. Gwyddor Bywyd. 63, 2415–2425.
Ko, KM, Leung, HY, 2007. Gwella gallu cynhyrchu ATP, gweithgaredd gwrthocsidiol, a gweithgareddau imiwnofodwlaidd gan berlysiau tonifying Tsieineaidd Yang ac Yin. Gên. Med. 2, 3.
Kobayashi, M., Kagawa, T., Narumi, K., Itagaki, S., Hirano, T., Iseki, K., 2008. Ychwanegiad bicarbonad fel ffordd ataliol mewn difrod cyhyrau a achosir gan statinau. J. Pharm. Pharm. Sci. 11, -8.
Kromer, A., Moosmann, B., 2009. Mae'r anaf i'r afu a achosir gan statin yn cynnwys croes-siarad rhwng llwybrau biosynthetig colesterol a selenoprotein. Mol. Pharm. 75, 1421–1429.
Leung, HY, Ko, KM, 2008. Mae detholiad Herba Cistanche yn gwella cenhedlaeth ATP mitocondriaidd mewn calonnau llygod mawr a chelloedd H9C2. Pharm. Biol. 46, 418.
Liao, F., Zheng, RL, Gao, JJ, Jia, ZJ, 1999. Gohiriad blinder cyhyrau ysgerbydol gan y ddau glycosidau ffenylpropanoid: verbascoside a martensite o Pedicularis plicata Maxim. Phytother. Res. 13, 621–623.
Lu, KG, Liu, HB, Gu, QQ, 1995. Astudiaeth ar Gyfansoddion Cemegol Cistanche deserticola Ma. a Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. Gên. Traddodiad. Perlysieuyn. Cyffuriau 26, 143 .
Comisiwn Pharmacopoeia, 2010. Pharmacopoeia Gweriniaeth Pobl Tsieina. Gwasg y Diwydiant Cemegol, Beijing.
Rosenbaum, D., Dallongeville, J., Sabouret, P., Bruckert, E., 2013. Terfynu therapi statin oherwydd sgîl-effeithiau cyhyrol: arolwg mewn bywyd go iawn. Nutr. Metab. Cardiofasg. Dis. 23, 871-875.
Siu, AH, Ko, KM, 2010. Mae detholiad Herba Cistanche yn gwella statws glutathione mitocondriaidd a resbiradaeth mewn calonnau llygod mawr, gydag anwythiad posibl o broteinau dadgyplu. Pharm. Biol. 48, 512–517.
Sui, ZF, Gua, TM, Liu, B., Peng, SW, Zhao, ZL, Li, L., Shi, DF, Yang, RY, 2011. Cyfansoddyn carbohydrad sy'n hydoddi mewn dŵr o gyrff yHerbaCistanches: ynysu a'i effaith scavenging ar radical rhydd yn y croen. Carbohydrad. Polym. 85, 75.
Thompson, PD, Clarkson, P., Karas, RH, 2003. Myopathi sy'n gysylltiedig â Statin. JAMA 289, 1681–1690.
Vaklavas, C., Chatzizisis, YS, Ziakas, A., Zamboulis, C., Giannoglou, GD, 2009. Sail foleciwlaidd myopathi sy'n gysylltiedig â statin. Atherosglerosis 202, 18–28.
Velho, JA, Okanobo, H., Degasperi, GR, Matsumoto, MY, Alberici, LC, Cosso, RG, Oliveira, HC, Vercesi, AE, 2006. Mae statinau yn achosi trawsnewid athreiddedd mitocondriaidd sy'n ddibynnol ar galsiwm. Tocsicoleg 219, 124–132.
Xiong, Q., Hase, K., Tezuka, Y., Tani, T., Namba, T., Kadota, S., 1998. Gweithgaredd hepatoprotective o ffenylethanoids o Cistanche deserticola. Med Planta. 64, 120–125.
