Mae'r Rheoleiddiwr Epigenetig X-gysylltiedig UTX yn Rheoli Gwahaniaethau Rhyw Cell-gynhenid NK
Dec 27, 2023
Mae canlyniadau heintiau firaol yn rhagfarnu ar sail rhyw, gyda dynion yn gyffredinol yn fwy agored i niwed na menywod. Yn baradocsaidd, mae nifer y celloedd lladd gwrthfeirysol naturiol (NK) yn cynyddu mewn dynion. Rydym yn dangos, er bod nifer y celloedd NK yn cynyddu mewn llygod gwrywaidd, eu bod yn dangos llai o effaith effaith o gymharu â benywod mewn llygod a bodau dynol. Nid oedd y gwahaniaethau hyn yn dibynnu ar hormonau gonadal yn unig, oherwydd eu bod yn parhau mewn llygod gonadectomized. Roedd Kdm6a (sy'n amgodio'r protein UTX), rheolydd epigenetig sy'n dianc rhag anactifadu X, yn is mewn celloedd NK gwrywaidd, tra bod diffyg UTX cell-gynhenid NK mewn llygod benywaidd yn cynyddu niferoedd celloedd NK a llai o ymatebion effeithydd. At hynny, dangosodd llygod â diffyg UTX celloedd-gynhenid NK fwy o farwolaethau i sytomegalofirws llygoden. Datgelodd dadansoddiad integredig aml-omeg rôl hanfodol i UTX wrth reoleiddio hygyrchedd cromatin a mynegiant genynnau sy'n hanfodol ar gyfer homeostasis celloedd NK a swyddogaeth effeithydd. Gyda'i gilydd, mae'r data hyn yn awgrymu UTX fel penderfynydd moleciwlaidd hanfodol o wahaniaethau rhyw mewn celloedd NK.
Mae gwahaniaethau rhyw sydd wedi’u cadw’n esblygiadol yn bodoli mewn ymatebion imiwn cynhenid ac addasol1,2. Er bod dynion yn llai agored i hunanimiwnedd, maent hefyd yn cynyddu ymateb imiwn gwrthfeirysol llai grymus na menywod. Er enghraifft, mae gan wrywod faich uwch o sytomegalofirws dynol (HCMV) ar ôl haint, sy’n awgrymu mwy o dueddiad i fygythiadau firaol4. Mae hyn hefyd wedi'i ddangos yn ddiweddar yn ystod pandemig clefyd coronafeirws 2019 (COVID-19), lle mae'r gogwydd cryf ymhlith dynion ar gyfer clefyd difrifol wedi'i ragdybio i adlewyrchu gwahaniaethau rhyw mewn ymatebion imiwn5. Yn ddiweddar, mae astudiaethau lluosog mewn bodau dynol a llygod wedi nodi gwahaniaethau yn nosbarthiad celloedd imiwnedd a/neu swyddogaeth mewn dynion yn erbyn menywod6,7. Fodd bynnag, mae'r sail foleciwlaidd ar gyfer y gwahaniaethau hyn, a'r mecanweithiau y mae'r gwahaniaethau hyn yn dylanwadu ar ganlyniadau clefydau, yn parhau i fod yn ddiffygiol. Mae gwahaniaethau rhyw mewn mamaliaid yn cael eu diffinio nid yn unig gan hormonau gonadal dargyfeiriol ond hefyd gan ddos cromosom rhyw1. Mae mynegiant is-set o enynnau sy'n gysylltiedig â X, er enghraifft, yn uwch ymhlith menywod (XX) na dynion (XY)8. Tra bod menywod yn cael anactifadu X-cromosomau ar hap (XCI) i gynnal lefelau tebyg o fynegiant protein sy'n gysylltiedig â X rhwng y ddau ryw, mae XCI yn anghyflawn, gyda 3-7% o enynnau cromosom X yn dianc rhag anactifadu mewn llygod a 20-30% yn dianc rhag anactifadu yn bodau8,9. O’r herwydd, mae lefelau gwahaniaethol mynegiant genynnau sy’n gysylltiedig â X ymhlith benywod yn erbyn gwrywod wedi’u cysylltu â gwahaniaethau rhyw mewn ystod eang o gyflyrau gan gynnwys namau ar y tiwb niwral10 a chlefyd awtoimiwn11,12. Fel lymffocytau cynhenid math 1 sy'n cylchredeg, mae celloedd NK yn amddiffyniad cynnar yn erbyn aelodau o'r teulu firws herpes13. Mae pwysigrwydd celloedd NK mewn imiwnedd gwrthfeirysol yn cael ei ddangos mewn cleifion â niferoedd celloedd NK diffygiol neu ymarferoldeb, sy'n agored iawn i haint gan firws herpes fel HCMV a firws Epstein-Barr14. Mewn llygod, mae angen celloedd NK ar gyfer rheoli sytomegalofirws llygoden (MCMV) a heintiau firaol eraill15. Mae llygod â naill ai diffyg genetig yng ngweithrediad celloedd NK neu golli niferoedd celloedd NK yn cynyddu’n sylweddol mewn titerau firaol a marwolaethau yn dilyn haint MCMV15-18. Felly, mae celloedd NK yn hanfodol mewn imiwnedd gwrthfeirysol mewn llygod a bodau dynol.
cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd
O ystyried gweithrediad gwrthfeirysol cryf celloedd NK, roedd yn annisgwyl felly bod gwrywod sy'n agored i firws yn dangos niferoedd uwch o gelloedd NK6,7. Y tu hwnt i rifau celloedd NK, gall nodwedd(ion) celloedd NK rhywiol dimmorffig eraill nas gwerthfawrogir yn flaenorol gyfrif am wahaniaethau rhyw yn ystod haint firaol. Rydym yn dangos, er bod celloedd NK gwrywaidd yn dangos ffitrwydd cellog gwell mewn llygod, eu bod yn dangos llai o effaith effaith mewn llygod a bodau dynol. Nid oedd y rhagfarnau rhyw hyn yng nghyfansoddiad a swyddogaeth celloedd NK yn gyfan gwbl oherwydd gwahaniaethau hormonaidd, oherwydd eu bod yn parhau mewn llygod gonadectomized. Trwy sgrinio mynegiant gwahaniaethol, fe wnaethom nodi'r rheolydd epigenetig cysylltiedig â X a XCI escapee UTX hysbys, a fynegwyd ar lefelau sylweddol is yng nghelloedd NK gwrywaidd a dynol gwrywaidd. Roedd UTX yn rheoleiddio ffitrwydd celloedd NK a swyddogaeth effeithydd mewn modd sy'n dibynnu ar ddosau oherwydd bod digonedd haploinau UTX mewn celloedd NK benywaidd yn ddigon i gynyddu niferoedd celloedd NK tra'n amharu ar gynhyrchu cytocinau a sytowenwyndra. Roedd celloedd NK benywaidd â diffyg UTX yn dangos mwy o ddyfalbarhad mewn vivo ac ymwrthedd i apoptosis ex vivo, yn ogystal â mwy o dueddiad i haint MCMV. Roedd yr effeithiau hyn yn annibynnol ar weithgaredd demethylase cynhenid UTX, gan fod niferoedd celloedd NK ac interferon (IFN) - cynhyrchu heb eu newid mewn llygod yn mynegi mutant UTX 'demethylase-marw'. Dadansoddiad integredig gan ddefnyddio'r assay ar gyfer cromatin hygyrch trawsfeddiant gan ddefnyddio dilyniannu (ATAC-seq), dilyniannu RNA swmp (RNA-seq), a gwrth-UTX CUT&Tag (Cleavage Under Targets and Tagmentation Assay) o fath gwyllt (WT) ac UTX- datgelodd celloedd NK diffygiol rôl hanfodol i UTX wrth reoleiddio mynegiant loci genynnau sy'n ymwneud â ffitrwydd celloedd NK ac ymatebion effeithyddion. Mae ein canfyddiadau yn nodi UTX fel prif yrrwr gwahaniaethau rhyw mewn homeostasis celloedd NK a swyddogaeth effeithydd trwy fodiwleiddio mynegiant genynnau demethylase-annibynnol.
cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd
Cliciwch yma i weld cynhyrchion Gwella Imiwnedd Cistanche
【Gofyn am fwy】 E-bost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Canlyniadau
Mae dimorphism rhywiol NK yn annibynnol ar hormonau rhyw gonadal
Nododd ymchwiliad diweddar a archwiliodd ddueg llygod C57BL/6 fod mwy o gelloedd NK mewn dynion yn erbyn menywod19. Yn gyson â'r data hyn, gwelsom fod celloedd NK splenig (a nodwyd fel CD3 - TCR - NK1. 1+; Data Estynedig Ffig. 1a) yn cynyddu mewn amlder (Ffig. 1a, b) a niferoedd absoliwt (Ffig. 1c). ) mewn llygod C57BL/6 gwrywaidd o gymharu â merched. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu y gallai nodweddion rhywiol dimorffig eraill y tu hwnt i niferoedd celloedd NK gyfrif am fwy o dueddiad gwrywaidd i heintiau firaol. Mewn ymateb i haint firaol, mae celloedd NK yn hanfodol ar gyfer cynhyrchu cytocinau pro-llidiol yn gynnar, yn enwedig IFN- 20-22. I brofi a oes gwahaniaethau rhyw yn bodoli mewn swyddogaeth gynhenid gell NK, gwnaethom gymharu cynhyrchiad cytocinau effeithydd mewn celloedd NK sydd wedi'u hynysu o lygod benywaidd yn erbyn gwrywaidd ex vivo. Arweiniodd ysgogiad gyda'r cytocinau pro-llidiol interleukin (IL)-12 ac IL{-15 at gynhyrchu IFN- is gan gelloedd NK gwrywaidd (Ffig. 1d,e a Data Estynedig Ffig. 1b). Gwelwyd canlyniadau tebyg mewn ymateb i IL-12 ac IL-18 (Data Estynedig Ffig. 1c,d), gan awgrymu diffyg priodol yn ymatebolrwydd celloedd NK gwrywaidd i symbyliad cytocin. Yn ogystal, arweiniodd celloedd NK dynol (TCR − CD3− CD56+ ) sydd wedi'u hynysu o gelloedd mononiwclear gwaed ymylol (PBMCs) a weithredwyd ag IL-12 a chelloedd lewcemia K562 at ganran is o IFN- + (Ffig. 1f a Data Estynedig Ffig. 1e) ac IFN- dwysedd fflworoleuedd cymedrig (MFI; Ffig. 1g) mewn celloedd NK gwrywaidd yn erbyn benywaidd. Felly, er bod niferoedd celloedd NK yn cynyddu, mae cynhyrchiad cytocinau effeithydd celloedd NK gwrywaidd yn cael ei leihau'n gyson mewn llygod a phobl mewn ymateb i cytocinau pro-llidiol a achosir yn ystod haint firaol.
Mae rhyw benywaidd neu wrywaidd yn seiliedig ar gyfansawdd o hormonau gonadal (er enghraifft, estrogens neu androgenau) a chromosomau rhyw (er enghraifft, 46XX neu 46XY)1. Dangosodd astudiaethau blaenorol effeithiau uniongyrchol hormonau gonadal wrth reoleiddio cynhyrchu IFN gan gelloedd NK23, ond mae'n dal yn bosibl y gallai gwahaniaethau rhyw celloedd NK hefyd gael eu priodoli i ffactorau cell-gynhenid. Er mwyn nodi effeithiau wedi'u cyfryngu gan hormonau rhyw, fe wnaethom archwilio helaethrwydd a gweithrediad celloedd NK mewn llygod gonadectomized. Methodd Gonadectomi i ddileu gwahaniaethau rhyw yn amlder celloedd NK (Ffig. 1h a Data Estynedig Ffig. 1f), niferoedd absoliwt (Ffig. 1i) a chynhyrchu protein IFN mewn ymateb i symbyliad cytocin (Ffig. 1j,k a Data Estynedig Ffig. 1g), sy'n nodi nad hormonau gonadal yn unig sy'n gyfrifol am wahaniaethau rhyw mewn celloedd NK. Er bod gan is-setiau aeddfedu celloedd NK a nodwyd gan fynegiant CD11b a CD27 alluoedd gwahaniaethol ar gyfer goroesiad a swyddogaeth effaith24, ni ddangosodd celloedd NK splenig sy'n deillio o naill ai WT neu lygod benywaidd a gwrywaidd gonadectomized wahaniaethau sylweddol yn amlder is-setiau aeddfedu celloedd NK (Ffig Data Estynedig .1h–k). Roedd y canlyniadau hyn yn dangos nad yw'r rhagfarnau rhyw a welwyd yn nifer celloedd NK a swyddogaeth yr effeithydd yn ganlyniad i gyflyrau aeddfedu gwahaniaethol. Felly, gwnaethom ragdybio y gallai dos cromosomau rhyw gyfrannu at helaethrwydd a swyddogaeth gwahaniaethol celloedd NK rhwng y ddau ryw.
cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd
Mae UTX yn dianc rhag anactifadu X ac yn cael ei fynegi'n fwy mewn menywod
Tra bod 46XX o fenywod yn cael XCI i reoli dosau o enynnau sy'n gysylltiedig â X, mae is-set o enynnau yn dianc rhag XCI (a elwir yn XCI escapees), yn aml yn arwain at fynegiant uwch mewn benywod o gymharu â gwrywod25,26. Felly, gallai mwy o fynegiant dianc XCI mewn menywod o gymharu â gwrywod o bosibl gyfryngu gwahaniaethau rhyw mewn celloedd NK. Tra bod genynnau gwahanol yn dianc rhag anactifadu X mewn bodau dynol a llygod, mae pum genyn (XIST, DDX3X, KDM6A, EIF2S3, KDM5C) wedi'u nodi'n flaenorol fel diancwyr XCI yn y ddau27. Cafodd XIST ei eithrio o ddadansoddiad pellach oherwydd nid yw'n cael ei fynegi mewn celloedd gwrywaidd oherwydd ei rôl hysbys yn XCI mewn celloedd benywaidd1. Cafodd pob un o'r pedwar genyn sy'n weddill eu hisreoleiddio'n sylweddol mewn celloedd NK gwrywaidd yn erbyn benywaidd, yn y ddau fodau dynol (Ffig. 2a) a llygod (Ffig. 2b). Roedd lefelau trawsgrifiad Kdm6a (sy'n amgodio UTX) yn dangos y mynegiant mwyaf dimorphic yn rhywiol yng nghelloedd NK dynol a llygoden (Ffig. 2a,b). Mynegodd celloedd NK gwrywaidd hefyd lefelau protein UTX is o gymharu â chelloedd NK benywaidd mewn llygod (Ffig. 2c,d). Parhaodd y gwahaniaethau hyn mewn lefelau trawsgrifio Kdm6a a lefelau protein UTX mewn llygod gonadectomized (Ffig. 2e-g) a llygod Pedwar Genoteip Craidd (FCG) (Data Estynedig Ffig. 2a) lle mae cyflenwad cromosom rhyw (XX neu XY) heb ei gyplu o organ rhyw gonadal (ofarïau neu geilliau)28. Mae'r data hyn yn dangos bod lefelau mynegiant Kdm6a (UTX) â thuedd rywiol mewn celloedd NK ac yn cael eu pennu'n bennaf gan ddos X-cromosom yn hytrach na hormonau gonadal.
Mae UTX yn atal ffitrwydd celloedd NK
Er mwyn penderfynu a yw UTX yn cyfryngu'r gwahaniaethau rhyw a arsylwyd mewn celloedd NK, fe wnaethom gynhyrchu cyfres o lygod gyda cholled UTX yn ddibynnol ar ddos. Yn gyntaf, cynhyrchwyd llygod benywaidd gyda dilead heterosygaidd o UTX mewn celloedd NK (Kdm6afl / WT Ncr1Cre +, y cyfeirir ato o hyn ymlaen fel UTXHet; Tabl Data Atodol 1) i ddynwared y copi sengl o UTX a fynegir mewn gwrywod. Rydym yn cadarnhau mynegiant protein NK cell UTX tebyg rhwng UTXHet benywaidd a gwrywaidd WT (Kdm6afl/y Ncr1Cre-) llygod (Data Estynedig Ffig. 2b). Roedd llygod UTXHet benywaidd yn dangos niferoedd celloedd NK splenig tebyg o gymharu â WT gwrywaidd (Ffig. 3a, b), ac roedd y ddau yn dangos niferoedd uwch o gelloedd NK o'u cymharu â WT benywaidd. Ni welwyd unrhyw wahaniaethau arwyddocaol mewn aeddfedu yn ôl mynegiant CD11b a CD27 rhwng celloedd NK o WT benywaidd, WT gwrywaidd, a llygod UTXHet benywaidd (Data Estynedig Ffig. 2c). Felly, roedd colli un copi o UTX yn ddigon i gynyddu niferoedd celloedd NK mewn modd aeddfedu-annibynnol. Y tro nesaf fe wnaethom gynhyrchu llygod gyda dileu homosygaidd o UTX (Kdm6afl / flNcr1Cre +, y cyfeirir ato o hyn ymlaen fel UTXNKD; Tabl Data Atodol 1), gan arwain at golli'r ddau gopi o UTX mewn celloedd NK. Roedd mynegiant protein UTX yn sylweddol is mewn celloedd benywaidd UTXNKD NK o'i gymharu â chelloedd NK WT benywaidd yn ôl cytometreg llif (Data Estynedig Ffig. 2b), yn ogystal ag yn is o'i gymharu â chelloedd NK gydag un copi UTX (hynny yw, gwrywaidd WT a benywaidd UTXHet ). Cadarnhawyd absenoldeb protein UTX ar y maint a ragwelir (180 kD) mewn UTXNKD benywaidd o'i gymharu â chelloedd WT NK gan blot gorllewinol (Data Estynedig Ffig. 2d). Cynyddodd amlder celloedd NK a niferoedd absoliwt gyda nifer copi UTX yn gostwng (Ffig. 3c, d a Data Estynedig Ffig. 3a). Mae'r data hyn yn ymhlygu UTX wrth reoleiddio amlder celloedd NK a niferoedd absoliwt mewn modd sy'n dibynnu ar ddos.
Ffig. 1|Mae gwahaniaethau rhyw mewn cynhyrchu IFN- a niferoedd celloedd NK yn annibynnol ar hormonau gonadal. a–c, Plotiau dotiau cynrychioliadol (a), amledd (b), a niferoedd absoliwt (c) o gelloedd NK splenig (CD3 - TCR − NK1.1+ ) mewn llygod C57BL/6 benywaidd a gwrywaidd (n { {7}} fesul grŵp). d,e, Canran IFN- + (d) ac IFN-MFI (e) wedi'i normaleiddio o gyfanswm celloedd NK splenig o lygod benywaidd yn erbyn gwrywaidd a feithrinwyd heb unrhyw driniaeth (NT) nac IL{{1{0} } (50 ng ml−1) ac IL-12 (20 ng ml−1) am 4 awr, wedi'i normaleiddio i MFI o IL benywaidd-15/IL{ {18}} triniaeth (n=8 fesul grŵp). f,g, Canran IFN{{20}} (f) a normaleiddio IFN- MFI(g) o CD3− CD56+ benywaidd (n=6) a gwryw (n { {25}}) celloedd NK dynol wedi'u meithrin a'u hysgogi gyda 10 ng ml−1 o IL-12 am 16 h ym mhresenoldeb celloedd K562, wedi'i normaleiddio i MFI IL benywaidd-12 triniaeth. h, i, Amlder (h) a niferoedd absoliwt (i) o gelloedd NK splenig mewn llygod benywaidd a gwrywaidd gonadectomized (n=18 fesul grŵp). j,k, Canran IFN- + (j) ac IFN- MFI (k) wedi'i normaleiddio o gyfanswm celloedd NK splenig wedi'u hynysu o lygod benywaidd a gwrywaidd gonadectomized ac wedi'u meithrin ag NT neu IL-15 (50 ng ml− 1) ac IL-12 (20 ng ml−1) am 4 h (n=12 fesul grŵp). Mae'r data'n cynrychioli 2-4 arbrawf annibynnol. Cymharwyd samplau gan ddefnyddio prawf-t Myfyriwr dwy gynffon heb bâr a chyflwynir pwyntiau data fel llygod unigol gyda'r cymedrig ± sem (*P < 0.05; **P < 0.01; ***P < 0.001; ****P < 0.0001). Mae gwerthoedd P penodol fel a ganlyn: b=0.0002; c=0.006; d=0.0036; e=0.0013; f=0.04; g= 0.03; h < 0.0001; i=0.0006; j=0.0234; k=0.0019.
Er mwyn diffinio'r mecanweithiau sy'n sail i'r cynnydd yn niferoedd celloedd NK mewn llygod UTXNKD (CD45.2+ ), cynhyrchwyd cymhareb 1:1 o lygod simeri mêr esgyrn cymysg (mBMC) gyda WT (CD45.1+ ) . Chwe wythnos ar ôl ailgyfansoddi, gwelsom fantais gystadleuol amlwg o gelloedd NK benywaidd UTXNKD (CD45. { { }} ) o gymharu â WT mewn derbynwyr benywaidd (CD451x2 ) yn dilyn trawsblaniad mêr esgyrn (Data Estynedig Ffig. 3b,c). Mewn cyferbyniad â chelloedd NK, dangosodd celloedd T o'r un rhoddwr (UTXNKD, CD45.2+ ), sy'n ddigon UTX oherwydd i NK ddileu UTX yn benodol, y gymhareb pigiad gwreiddiol (1: 1; Ffig Data Estynedig 3b,c). Mae'r data hyn yn awgrymu bod UTX wedi atal niferoedd celloedd NK mewn ffordd gynhenid gell yn ystod datblygiad. Er mwyn profi a oedd y ffenoteip hwn yn cael ei yrru gan wahaniaethau mewn amlhau, dadansoddwyd y marciwr cellraniad Ki67 mewn celloedd NK splenig mewn llygod WT:UTXNKD mBMC, wedi'i chwistrellu ar gymhareb 4: 1 i normaleiddio rhif celloedd rhwng genoteipiau. Yn baradocsaidd, roedd celloedd UTXNKD NK yn dangos amleddau is o gelloedd Ki{67+ ac yn dangos llai o wanhau CFSE mewn ymateb i IL-15 (Data Estynedig Ffig. 3d,e). Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu nad oedd y niferoedd uwch o gelloedd NK a arsylwyd mewn llygod UTXNKD oherwydd cynnydd ymlediad. O ystyried y canlyniadau hyn, rydym yn rhagdybio y gallai amlder uchel celloedd NK mewn llygod UTXNKD (Ffig. 3c, d) fod oherwydd ffitrwydd cellog gwell celloedd NK yn absenoldeb mynegiant UTX. I brofi'r posibilrwydd hwn, labelwyd celloedd NK splenig WT (CD451x2 ) ac UTXNKD (CD45.2+ ) â Cell Trace Violet (CTV) a'u trosglwyddo i dderbynyddion WT (CD45.1+) ar a Cymhareb 1:1 (Data Estynedig Ffig. 3f). Ar ddiwrnod 7 ar ôl trosglwyddo, roedd y boblogaeth a drosglwyddwyd yn gwyro tuag at gelloedd NK UTXNKD mewn duegau derbynnydd (Ffig. 3e,f), gan ddangos ataliad UTX celloedd-gynhenid o gartrefostasis celloedd NK aeddfed. Nid oedd y gwahaniaeth hwn oherwydd newid ymlediad, oherwydd roedd gwanhau CTV gan y ddwy boblogaeth a drosglwyddwyd yn fach iawn ar ddiwrnod 7 ar ôl trosglwyddo (Data Estynedig Ffig. 3g). Er mwyn profi a oedd UTX yn atal cartrefostasis celloedd NK trwy reoleiddio apoptosis, gwnaethom gymharu mynegiant caspase 3 hollt mewn celloedd NK wedi'u didoli wedi'u deor â naill ai IL-15 yn unig neu ag IL-15 a inducer apoptosis, Nutlin{{42} }}a29. Roedd mynegiant UTX is yn cydberthyn â chelloedd caspase llai holltedig 3+ NK ym mhresenoldeb IL dos isel-15 a Nutlin-3triniaeth (Ffig. 3g,h). Ar ben hynny, roedd celloedd NK gwrywaidd hefyd yn dangos gostyngiad cymedrol ond sylweddol yn amlder celloedd caspase 3+ NK hollt mewn ymateb i Nutlin-3a o gymharu â chelloedd NK benywaidd, a barhaodd hefyd mewn llygod gonadectomized (Data Estynedig Ffig. 3h–k). Ar ben hynny, mae rheoleiddio apoptosis celloedd NK a goroesiad yn dibynnu ar lefelau mynegiant cymharol Bcl-2 (ffactor gwrth-apoptotig)30, y gall Bim (ffactor pro-apoptotig) eu cythruddo31. Dangosodd celloedd UTXNKD NK fynegiant protein mewngellol uwch o Bcl-2 a chynnydd cymedrol mewn Bim (Ffig. 3i, j a Data Estynedig Ffig. 3l) o gymharu â chelloedd WT NK. Arweiniodd hyn at gynnydd sylweddol yn y gymhareb Bcl-2:Bim mewn celloedd UTXNKD NK (Ffig. 3k). Roedd celloedd NK gwrywaidd hefyd yn dangos cynnydd sylweddol yn y gymhareb Bcl-2:Bim (Ffig. 3l), a barhaodd yn dilyn gonadectomi (Ffig. 3m). Gyda'i gilydd, mae'r data hyn yn dangos y gall lefelau UTX newidiol fod yn sail i wahaniaethau rhyw mewn ffitrwydd celloedd NK trwy reoleiddio mynegiant Bcl-2.
Ffig. 2|Mae UTX sy'n gysylltiedig â X yn dangos mynegiant genynnau deumorffig rhywiol yn annibynnol ar hormonau rhyw.a Mynegiant wedi'i normaleiddio o enynnau dianc XCI gan ddefnyddio cronfa ddata DICE data RNA-seq ar gelloedd NK wedi'u didoli o fenywod dynol (n=36) yn erbyn gwrywod (n {{4) }}) normaleiddio i fenywod. b, Mynegiant normaleiddio o enynnau dianc XCI gan PCR meintiol gyda thrawsgrifiad gwrthdro (RT-qPCR) mewn celloedd NK splenig o lygod benywaidd yn erbyn gwrywaidd (C57BL/6; 8 wythnos oed, n=5 fesul grŵp). Mae genynnau yn cael eu harchebu trwy newid plyg cynyddol rhwng benywod a gwrywod o'r chwith i'r dde. c,d, Histogram cynrychioliadol (c) a MFI (d) normaleiddio mynegiant protein UTX mewn celloedd NK splenig o lygod benywaidd naïf yn erbyn gwrywaidd trwy cytometreg llif, wedi'i normaleiddio i MFI llygod benywaidd (C57BL/6; 8 wythnos oed; n { {12}} fesul grŵp). e, Mynegiant cymharol Kdm6a (UTX) gan RT–qPCR o gelloedd NK splenig ynysig wedi'u normaleiddio i fenywod (n=6 fesul grŵp). f,g Histogramau cynrychioliadol (f) ac UTX MFI (g) cymharol o gelloedd NK trwy sytometreg llif o ddueg llygod benywaidd a gwrywaidd gonadectomized (n=6 fesul grŵp) wedi'u normaleiddio i fenyw. Cymharwyd samplau gan ddefnyddio prawf-t Myfyriwr dwy gynffon heb ei baru a chyflwynir pwyntiau data fel llygod unigol gyda'r cymedr ± sem (*P < 0.{{20}}5; **P < 0.01; ***P < 0.001). Mae gwerthoedd P penodol fel a ganlyn: a < 0.001; b: Ddx3x=0.03, Kdm5c=0.0017, Eif2s3 = 0.0113, Kdm6a=0.000087; d=0.003; e=0.008; g=0.0029).
Mae UTX yn gwella swyddogaeth effeithydd celloedd NK
Oherwydd bod celloedd NK gwrywaidd a arddangoswyd wedi gostwng cynhyrchiant IFN (Ffig. 1d,e) yn annibynnol ar hormonau gonadal (Ffig. 1j, k) nesaf fe wnaethom geisio pennu a oedd y ffenoteip hwn yn cael ei reoleiddio gan lefelau UTX. Ar ôl symbyliad cytocin, roedd amlder a niferoedd absoliwt o gelloedd cynhyrchu IFN (Ffig. 4a a Data Estynedig Ffig. 4a,b) yn ogystal ag IFN- MFI (Ffig. 4a) yn debyg rhwng WT gwrywaidd a benywaidd UTXHet NK celloedd. Roedd cynhyrchu IFN gan gelloedd benywaidd UTXHet NK yn ganolraddol rhwng celloedd WT benywaidd a chelloedd NK UTXNKD benywaidd (Ffig. 4a a Data Estynedig Ffig. 4a,b). Gwelwyd y duedd hon hefyd trwy gymharu croniad cell NK IFN gan ELISA (Ffig. 4b). Ar ben hynny, nid oedd y ffenomen hon yn benodol i IFN- , oherwydd gostyngwyd cynhyrchiad ffactor ysgogol cytrefi granulocyte-macrophage (GM-CSF), sef moleciwl effeithydd NK pro-llidiol32, gyda nifer copi UTX yn gostwng mewn celloedd NK benywaidd (Ffig. 4c). ).
Yn ogystal â chynhyrchu cytocin, mae gweithgaredd sytolytig cell NK yn hanfodol ar gyfer amddiffynfeydd gwrthfeirysol33 ac gwrth-tiwmor34. Er mwyn asesu gwahaniaethau rhyw mewn sytowenwyndra celloedd NK, gwnaethom gynnal profion lladd gyda chelloedd MC38 diffygiol dosbarth I-diffyg histocompatibility mawr (MHC) fel targedau. Ar gymhareb effaith 4:1: targed, roedd celloedd gwrywaidd WT NK yn dangos lysis sylweddol is o gelloedd targed o gymharu â WT benywaidd (Ffig. 4d), a gafodd ei gynnal mewn llygod gonadectomized (Data Estynedig Ffig. 4c). Nid oedd amhariad ar ladd celloedd targed gan gelloedd NK gwrywaidd o ganlyniad i wahaniaethau mewn digroeniad, oherwydd bod lefelau CD107a yn debyg rhwng celloedd NK benywaidd a gwrywaidd (Data Estynedig Ffig. 4d,e). Fodd bynnag, cynhyrchodd gwrywod lefelau sylweddol is o foleciwlau sytotocsig perforin a gransym B mewn ymateb i IL-15 a ligation derbynnydd gwrth-NK1.1 (Data Estynedig Ffig. 4d,e). Yn nodedig, dangosodd celloedd UTXHet a gwrywaidd WT NK allu lladd tebyg (Ffig. 4d), a oedd yn ganolraddol rhwng celloedd benywaidd WT a UTXNKD NK (Ffig. 4d). Gyda'i gilydd, mae'r data hyn yn awgrymu bod UTX yn gwella sytowenwyndra celloedd NK mewn modd sy'n dibynnu ar ddos.
cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd
O ystyried yr effeithiau a welwyd o golled UTX ar swyddogaeth effeithydd celloedd NK, archwiliwyd a oedd llygod UTXNKD yn fwy agored i haint firaol. Mae cynhyrchu cyflym IFN- a GM-CSF yn hanfodol ar gyfer rheolaeth gwrthfeirysol celloedd NK20. Yn drawiadol, ildiodd llygod UTXNKD yn gyflym i haint (n=3/8 wedi goroesi) ar ôl eu herio gyda dos sublethal o MCMV (Ffig. 4e). Ar ben hynny, dangosodd celloedd NK splenig diffygiol UTX ddiffyg amlwg mewn cynhyrchu IFN- a chynhyrchu gransym B yng nghyfanswm celloedd NK ar ddiwrnod 1.5 ar ôl haint (Ffig. 4f a Data Estynedig Ffig. 4f,g). Yn ogystal, arsylwyd diffyg tebyg mewn cynhyrchu IFN gan UTXNKD ym mhob is-setiau aeddfedu (Data Estynedig Ffig. 4h), gan awgrymu bod UTX yn rheoli cynhyrchu IFN mewn modd aeddfedu-annibynnol. I gadarnhau a yw'r dos o fynegiant UTX mewn celloedd NK aeddfed yn gysylltiedig â chynhyrchu IFN- yn ystod haint firaol in vivo, fe wnaethom gynhyrchu llygod trawsgenig i gyflawni dilead UTX anwythol tamoxifen (Kdm6afl / fl Rosa26ERT2CRE +, y cyfeirir ato o hyn ymlaen fel iUTX -/ −; Tabl 1 Data Atodol). Cynhyrchwyd llygod mBMC gyda chymysgedd 1:1 o WT (CD45.1+ ) ac iUTX−/− (CD45.2+ ) i gyfyngu ar ddileu UTX i'r adran hematopoietig. WT:iUTX−/− Cafodd llygod BMC eu trin â tamoxifen yn union cyn eu heintio â MCMV i abladu mynegiant UTX (Ffig. 4g). IDX -/ - (CD45. 2+ ) Cynhyrchodd celloedd NK lai o IFN- o gymharu â'u cymheiriaid WT (Ffig. 4h a Data Estynedig Ffig. 4i). Arweiniodd gweinyddiaeth Tamoxifen yn WT:iUTX−/− llygod BMC at raddau gwahaniaethol o golled protein UTX ac arddangosodd gydberthynas gadarnhaol sylweddol rhwng lefelau UTX mewngellol a chynhyrchiad IFN ar ddiwrnod 1.5 ar ôl haint (Ffig. 4i). Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod lefelau UTX celloedd-gynhenid mewn celloedd NK aeddfed yn rheoleiddio cynhyrchu moleciwlau effeithydd ac amddiffyniad dilynol yn erbyn haint MCMV.
Ffig. 3|Mae UTX yn atal ffitrwydd celloedd NK. a,b, Amlder (F ac M WT: n=12; F UTXHet: n=16; a) a rhifau absoliwt (F WT: n=6; M WT: n {{}); 4}}; F UTXHet: n=9; b) o gelloedd NK yn y ddueg o lygod benywaidd (F) WT, gwrywaidd (M) WT a F UTXHet. c,d, Amlder (WT: n=12; UTXHet: n=16; UTXNKD: n=6; c) a rhifau absoliwt (WT: n=8; UTXHet: n {{10}}; UTXNKD: n=6; d) o gelloedd NK yn ddueg llygod F WT, UTXHet ac UTXNKD. e, Plotiau cyfuchlin cynrychioliadol o gelloedd WT (CD451x2 ) ac UTXNKD (CD45.{15}} ) a oedd yn gynhenid wahanol wedi'u trosglwyddo i dderbynyddion WT (CD45.1+ ) ar gymhareb 1:1 cyn y pigiad (chwith) a ar ddiwrnod 7 ar ôl trosglwyddo (ar y dde). f, Amlder celloedd WT ac UTXNKD yn y ddueg o lygod derbynnydd cyn y pigiad a diwrnod 7 ar ôl trosglwyddo (n=6). g,h, Histogramau cynrychioliadol (g) a chanran (h) y caspase holltedig 3+ celloedd NK o lygod benywaidd WT, UTXHet, ac UTXNKD wedi'u meithrin ag IL-15 (5 ng ml−1) a naill ai dimethylsulfoxide (DMSO; F WT: n=7; F UTXHet: n=11; F UTXNKD: n=6) neu 2.5 μM Nutlin-3a (F WT: n { {33}}; F UTXHet: n=7; F UTXNKD: n=3) am 24 h. i–k, Bcl wedi'i Normaleiddio-2 MFI(i), Bim MFI (j), a Bcl-2:cymhareb Bim MFI (k) mewn celloedd NK splenig o lygod benywaidd WT ac UTXNKD (n {{ 39}}). l,m, Bcl{{40}}:cymhareb Bim MFI mewn celloedd NK splenig o WT benywaidd a llygod WT gwrywaidd (n=6; l) a llygod benywaidd a gwrywaidd gonadectomized (n {{ 42}};m). Mae'r data'n cynrychioli 2-4 arbrawf annibynnol. Cymharwyd samplau gan ddefnyddio dadansoddiad unffordd cyffredin o amrywiant (ANOVA; a-d), ANOVA dwy ffordd gyda chywiriad Tukey ar gyfer cymariaethau lluosog (h), neu brawf-t Myfyriwr dwy gynffon heb ei bâr (f, i–m). Llygod unigol yw pwyntiau data gyda'r cymedr ± sem (NS, ddim yn arwyddocaol; *P < 0.05; **P < 0.01; * **P < 0.001; ****P < 0.0001). Mae gwerthoedd P penodol fel a ganlyn: a: F WT yn erbyn M WT=0.0201, M WT yn erbyn UTXHet=0.989, F WT yn erbyn UTXHet=0.0327, WT yn erbyn UTXNKD{ {63}}.001; b: F WT yn erbyn M WT=0.0320, M WT yn erbyn UTXHet < 0.99, F WT yn erbyn UTXHet=0.0029, WT yn erbyn UTXNKD=0.001; c: WT yn erbyn UTXHet=0.0375, UTXHet yn erbyn UTXNKD a WT yn erbyn UTXNKD < 0.0001; d: WT yn erbyn UTXHet=0.0191, UTXHet yn erbyn UTXNKD=0.0278, WT yn erbyn UTXNKD=0.001; f: Rhag-chwistrelliad=0.3304; diwrnod 7=0.001918; h: DMSO < 0.0001, Nutlin-3a–F WT yn erbyn F UTXHet=0.0048, gorffwys < 0.0001; i < 0.0001; j=0.0004; k=0.0025; l= 0.0115; m=0.0227.
Mae UTX yn rheoleiddio celloedd NK mewn modd demethylase-annibynnol
Fel demethylase histone, gall UTX reoli cartrefostasis celloedd NK ac effeithydd rhaglenni mynegiant genynnau trwy gataleiddio tynnu grŵp methyl o histone trimethylated H3 Lys27 (H3K27me3; marc histone gormesol) i osod cromatin ar gyfer mynegiant genynnau gweithredol35. Fodd bynnag, mae UTX hefyd yn meddu ar weithgareddau demethylase-annibynnol trwy ryngweithio â rheolyddion epigenetig ac addaswyr cromatin i gydlynu mynegiant genynnau36,37. Er mwyn archwilio rôl gweithgaredd demethylase UTX wrth fodiwleiddio cartrefostasis celloedd NK a swyddogaeth effeithydd, rydym yn trosoledd llygod sy'n mynegi UTX yn gatalytig anweithredol (UTX 'demethylase-dead' neu llygod UTXDMD; Tabl Data Atodol 1) yn llochesu p.His1146Ala a p.Glu1148Ala treigladau pwynt yn y parth catalytig38. Yn ddiddorol, roedd llygod UTXDMD benywaidd a WT yn arddangos amleddau tebyg a niferoedd absoliwt o gelloedd NK splenig (Ffig. 5a-c), tra bod llygod UTXNKD yn dangos cynnydd mewn niferoedd celloedd NK splenig o'u cymharu â'r ddau. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod gormes UTX o niferoedd celloedd NK yn annibynnol ar demethylase. Ar ben hynny, ni welwyd unrhyw wahaniaethau rhwng celloedd WT a UTXDMD NK yn y gallu i gynhyrchu IFN- mewn ymateb i symbyliad cytocin (Ffig. 5d-f). Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod swyddogaeth UTX wrth atal niferoedd celloedd NK a hyrwyddo cynhyrchu IFN yn annibynnol ar demethylase. Yn ogystal ag un copi o UTX, mae gwrywod yn mynegi'r Kdm6c sy'n gatalytig anweithredol (sy'n amgodio'r protein UTY), sef homolog UTX sy'n gysylltiedig â chromosomau Y. Rydym yn cadarnhau bod UTY yn cael ei fynegi yn unig mewn celloedd NK gwrywaidd gan fodau dynol (Data Estynedig Ffig. 5a) a llygod (Data Estynedig Ffig. 5b) ac ni chafodd ei newid gan gonadectomi mewn llygod (Data Estynedig Ffig. 5b). Fel y trafodwyd uchod, ni welwyd unrhyw wahaniaethau yn niferoedd celloedd NK na swyddogaeth effeithydd rhwng llygod WT gwrywaidd (un copi o UTX ac UTY) a llygod UTXHet benywaidd (un copi o UTX) (Ffig. 3a, b a 4a,d), gan awgrymu rôl gyfyngedig i UTY wrth reoleiddio homeostasis celloedd NK a swyddogaeth effeithydd. Yn ogystal, dangosodd llygod gwrywaidd UTXNKD (Kdm6afl/y Ncr1cre+) amledd celloedd NK uwch a niferoedd absoliwt (Data Estynedig Ffig. 5c,d) a chynhyrchwyd llai o IFN- (Data Estynedig Ffig. 5e–h), o'i gymharu â rheolaethau WT gwrywaidd, sy'n yn adlewyrchu'r newidiadau a welwyd mewn merched â diffyg celloedd NK UTX. (Ffig. 3a,b a 4a,b). Felly, mae colled UTX mewn celloedd NK yn cael effeithiau tebyg mewn benywod a gwrywod.
Mae UTX yn rheoli trawsgrifiad celloedd NK trwy ailfodelu cromatin
Mae astudiaethau diweddar wedi nodi cylchedau rheoleiddio celloedd NK (regulons) sy'n defnyddio celloedd lymffoid cynhenid ar gyfer ymatebion effeithydd cyflym hyd yn oed cyn actifadu celloedd NK 39. Fel addasydd epigenetig, gall UTX newid trawsgrifiad trwy drefnu cromatin ar elfennau rheoleiddiol loci4 genyn targed{{23} }. Er mwyn ymchwilio i'r addasiadau wedi'u cyfryngu gan UTX ar hygyrchedd cromatin a mynegiant genynnau mewn celloedd NK, fe wnaethom berfformio ATAC-seq ar y cyd â swmp RNA-seq ar WT wedi'i ddidoli (CD45.1+) ac UTXNKD (CD45.{{} 9}} ) Celloedd NK o 4:1 WT: UTXNKD llygod MBMC (Data Estynedig Ffig. 6a). Roedd defnyddio llygod mBMC yn caniatáu arbrawf a reolir yn fewnol ac yn lleihau ffactorau dryslyd amgylcheddol. Datgelodd dadansoddiad prif-gydran (PCA) o ddata ATAC-seq a RNA-seq glystyru sampl yn ôl genoteip (Data Estynedig Ffig. 6b). Datgelodd ATAC-seq fod 3,569 o gopaon wedi gostwng a 2,113 o gopaon wedi cynyddu mewn hygyrchedd yn UTXNKD o gymharu â chelloedd WT NK (newid plyg log2 > ±0.5, gwerth P wedi'i addasu < 0.05 , cyfradd darganfod ffug (FDR) < 0.05; Tabl Data Atodol 2). Ar ben hynny, nododd RNA-seq 701 wedi gostwng a 554 wedi cynyddu genynnau yn UTXNKD yn erbyn WT (newid plyg log2 > ±0.5, gwerth P wedi'i addasu < 0.05, FDR < 0.05; Data Estynedig Ffig. 6c a Thabl Data Atodol 3). Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu newidiadau dwys yn nhirwedd cromatin a thrawsgrifiad celloedd NK yn absenoldeb UTX.
system imiwnedd sy'n cynyddu planhigion cistanche
Nododd dadansoddiad integredig o ATAC-seq a RNA-seq 395 o enynnau sy'n hygyrch yn wahaniaethol ac wedi'u mynegi â chydberthynas gadarnhaol sylweddol (cydberthynas Spearman: R=0.62, P < 2.2 × 10−16) rhwng y log cymedrig2 newid plyg o gopaon ATAC-seq a newid plyg log2 mynegiant RNA-seq (Data Estynedig Ffig. 6d). Adnabu c-modd fuzzy clystyru o'r setiau data ATAC-seq a RNA-seq chwe chlwstwr mawr a oedd wedi gostwng yn sylweddol (clystyrau 1, 2, 3 a 6) neu wedi cynyddu (clystyrau 4 a 5) anhygyrchedd (Ffig. 6a) a mynegiant (Ffig. 6b) mewn celloedd UTXNKD NK. Ar gyfer dadansoddiad cyfoethogi swyddogaethol, g: Profiler ei ddefnyddio i ddadansoddi clystyrau o genynnau a fynegwyd yn wahaniaethol a nodwyd gan RNA-seq ( Ffig. 6 c ). Roedd prif lwybrau megis proses y system imiwnedd, cynhyrchu cytocinau, cynhyrchu IFN, actifadu lymffocyt a'r broses effeithydd imiwn yn gysylltiedig â mynegiant gostyngol yn UTXNKD (clystyrau 1, 2, 3 a 6; Ffig. 6c). Yn y cyfamser, roedd llwybrau fel proses ddatblygiadol, proses biosynthetig a phroses metabolig yn gysylltiedig yn sylweddol â mynegiant cynyddol yn UTXNKD (clystyrau 4 a 5; Ffig. 6c). O bwys, datgelodd dadansoddiad o enynnau llwybr marwolaeth celloedd fod genynnau lluosog i'w mynegi'n wahaniaethol (Data Estynedig Ffig. 6e). Yn nodedig, cynyddwyd mynegiant y genyn gwrth-apoptotig Bcl2, tra gostyngwyd y genyn pro-apoptotig Casp3 (Data Estynedig Ffig. 6e). Gyda'i gilydd, mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu colli canlyniadau UTX mewn addasiadau i hygyrchedd cromatin a mynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â homeostasis celloedd NK a swyddogaeth effeithydd.
Ffig. 4|Mae UTX yn gwella swyddogaeth effeithydd celloedd NK ac mae'n ofynnol ar gyfer goroesi yn erbyn haint firaol. a Canran IFN- + ac IFN-MFI wedi'i normaleiddio o gelloedd NK o WT benywaidd (n=8), WT gwrywaidd (n=8), UTXHet benywaidd (n=12) a UTXNKD benywaidd (n=6) llygod heb unrhyw driniaeth (NT) neu IL-15 (5{{70}} ng ml−1) ac IL{{1{{8{ {82}}}}}} (20 ng ml−1) am 4 awr, wedi'i normaleiddio i MFI o driniaeth IL-15/IL-12 benywaidd. b,c, IFN- (b) a GM-CSF (c) crynodiadau wedi'u mesur gan ELISA mewn uwchnaturiaid o WT benywaidd (n=4), UTXHet (n=5) ac UTXNKD (n {{2) 0}}) Celloedd NK gyda NT neu IL-12 (20 ng ml−1) ac IL-18 (1{{1{{1{1{{115}) }8}}4}} ng ml−1) am 4 h. d, lysis penodol o gelloedd MC38 (targed) diffygiol MHCI gan WT benywaidd (n {{30}}), WT gwrywaidd (n=8), UTXHet benywaidd (n=12). ) neu gelloedd benywaidd UTXNKD (n=6) NK (effector) am 16 h ar gymhareb effeithydd 4:1: targed, wedi'i normaleiddio i lysis gan WT benywaidd. e, cromliniau goroesi Kaplan-Meier llygod WT ac UTXNKD sydd wedi'u heintio â MCMV (n=8). Prawf Mantel-Cox (P=0.0093). f, Canran IFN- + (n=14), IFN-MFI (n=14) normaleiddio a gransym B (GzmB) MFI (n=8) o gymharu â WT yn splenic Celloedd NK ar D1.5 ar ôl haint MCMV o lygod 4:1 WT:UTXNKD mBMC. g, Sgematig o 1:1 WT (CD45.1+ ) ac iUTX−/− (CD45.2+ ) mêr esgyrn (BM) wedi'i drosglwyddo i westeion wedi'u disbyddu bysulfan a'u trin â 1 mg tamoxifen am 3 d cyn haint MCMV. h, Canran IFN- + ac IFN-MFI wedi'i normaleiddio o gelloedd NK o 1:1 WT:iUTX−/− llygod MBMC ar D1.5 ar ôl haint MCMV, wedi'i normaleiddio i WT (n=6). i, Cydberthynas Pearson dwy-gynffon o IFN- yn erbyn UTX MFI o gelloedd NK (n=12; r 2=0.775; P < 0.0001). Mae'r data'n cynrychioli 2-3 arbrawf annibynnol. Defnyddiwyd ANOVA dwy ffordd (a–c), ANOVA unffordd gyda chywiriad Tukey ar gyfer cymariaethau lluosog (ch), neu brawf t Myfyriwr dwy-ffordd pâr (f,h). Mae pwyntiau data yn llygod unigol gyda'r cymedr ± sem *P < 0.05; **P < 0.01; ***P < 0.001; ****P < 0.0001. Gwerthoedd P penodol: a: F WT yn erbyn M WT=0.0027, F WT yn erbyn F UTXHet ac F WT yn erbyn F UTXNKD < 0.0001, M WT yn erbyn F UTXHet=0.269, F UTXHet yn erbyn F UTXNKD=0.0007; b: WT yn erbyn UTXHet=0.0037, UTXHet yn erbyn UTXNKD=0.0011, WT yn erbyn UTXNKD < 0.0001; c: WT yn erbyn UTXHet=0.0026, UTXHet yn erbyn UTXNKD=0.0349, WT yn erbyn UTXNKD < 0.0001; d: F WT yn erbyn M WT=0.0005, F WT yn erbyn F UTXHet ac F WT yn erbyn F UTXNKD < 0.0001, M WT yn erbyn F UTXHet=0.1616, F UTXHet yn erbyn F UTXNKD=0. }}.0439; f: %IFN- + < 0.0001, IFN- MFI=0.0024, GzmB=0.0032; g: %IFN- + < 0.0001, IFN- MFI=0.0018. PI, ôl-haint.
Ffig. 5|Mae UTX yn rheoli cartrefostasis celloedd NK a chynhyrchiad IFN yn annibynnol ar weithgaredd demethylase. a–c, Lleiniau dwysedd cynrychioliadol (a), amledd (b), a nifer absoliwt (c) o gelloedd NK yn spleens llygod benywaidd WT, UTXDMD, a UTXNKD (n=5 fesul grŵp). d–f, Lleiniau cyfuchlin cynrychioliadol (d), canran IFN- + (e), ac IFN- MFI (f) wedi'i normaleiddio o gelloedd benywaidd WT, UTXDMD, ac UTXNKD NK (n=5 fesul grŵp) normaleiddio i WT. Mae'r data'n cynrychioli 2-3 arbrawf annibynnol. Cymharwyd samplau gan ddefnyddio ANOVA unffordd â chywiriad Tukey ar gyfer cymariaethau lluosog. Cyflwynir pwyntiau data fel llygod unigol gyda'r cymedr ± sem *P < 0.05; **P < 0.01; ****P < 0.0001. Mae gwerthoedd P penodol fel a ganlyn: b: WT yn erbyn UTXDMD=0.7353, WT yn erbyn UTXNKD ac UTXDMD yn erbyn UTXNKD < 0.0001; c: WT yn erbyn UTXDMD=0.4888, WT yn erbyn UTXNKD ac UTXDMD yn erbyn UTXNKD < 0.0001; e: WT yn erbyn UTXDMD=0.855, WT yn erbyn UTXNKD=0.0030, UTXDMD yn erbyn UTXNKD=0.0380; f: WT yn erbyn UTXDMD=0.1382, WT yn erbyn UTXNKD=0.0079, UTXDMD yn erbyn UTXNKD=0.0166.
O ystyried y gwahaniaethau genom-eang mewn hygyrchedd a mynegiant genynnau a welsom gan ATAC-seq a RNA-seq, fe wnaethom hefyd archwilio effeithiau uniongyrchol wedi'u cyfryngu gan UTX. Fe wnaethom berfformio CUT&Tag gwrth-UTX ac yna dilyniannu, gan ganiatáu canfod rhanbarthau DNA wedi'u rhwymo i UTX gan ddefnyddio dull imiwnoddodiad seiliedig ar wrthgyrff41. Datgelodd CUT&Tag gwrth-UTX ar gelloedd WT ac UTXNKD NK wedi'u didoli 5,746 o gopaon rhwymedig UTX (FDR < 0.01, gwerth P wedi'i addasu < 0.05; Ffig. 6d a Thabl 4 Data Atodol). Datgelodd PCA o ddata ATAC-seq a RNA-seq glystyru sampl yn ôl genoteip (Data Estynedig Ffig. 6f). Rydym yn nodi 191 genynnau a oedd yn UTX rhwymo, yn wahanol gan ATAC-seq a fynegir yn wahaniaethol gan RNA-seq (Ffig. 6d). O fewn y genynnau 191 hyn, roedd mwyafrif o gopaon sy'n rhwym i UTX wedi'u lleoli mewn rhanbarthau hyrwyddwr (20.58%), intronig (46.94%) a rhynggenig (27.4%) (Ffig. 6e). Roedd genynnau nodedig sy'n ymwneud â homeostasis celloedd NK (Bcl2 a Thy1; Ffig. 6f) 30,42 a swyddogaeth effeithydd (Ifng a Csf2) wedi'u rhwymo i UTX, yn hygyrch ac wedi'u mynegi'n wahaniaethol (Ffig. 6g). Ar ben hynny, o'r 191 o enynnau wedi'u rhwymo gan UTX, gostyngwyd mynegiant 140 o enynnau, tra cynyddwyd y 51 o enynnau sy'n weddill (Tabl Data Atodol 3) gan gadarnhau adroddiad blaenorol mewn celloedd T bod UTX yn gweithredu wrth actifadu ac atal trawsgrifio genynnau43. Datgelodd dadansoddiad llwybr Enrichr44 ar y genynnau 191 hyn sy'n rhwym i UTX lai o ymateb llidiol, signalau IFN a llwybrau cytotoxicity cell NK mewn celloedd NK UTXNKD (Data Estynedig Ffig. 6g). I'r gwrthwyneb, gwelwyd cynnydd mewn prosesau catabolaidd cellog a llwybrau signalau apoptosis, sy'n cynnwys genynnau pro-apoptotig a gwrth-apoptotig (er enghraifft, Bcl2, Bbc3 a Gadd45g), mewn celloedd NK UTXNKD. Ymhlith 865 brigau wedi'u rhwymo gan UTX gyda mynegiant UTX-ddibynnol a gwahaniaethau hygyrchedd cromatin (191 o enynnau unigryw), dangosodd dadansoddiad atchweliad llinol gydberthynas gadarnhaol sylweddol (Pearson's R=0.5165, P <0.0001) rhwng cromatin hygyrchedd a mynegiant genynnau (Data Estynedig Ffig. 6h, i). Roedd rhanbarthau a feddiannwyd gan UTX o fewn loci genynnau Bcl2, Thy1, Ifng, a Csf2 yn cyfateb i ranbarthau lle nodwyd gwahaniaethau mewn hygyrchedd a mynegiant genynnau hefyd (Ffig. 6f,g). Mae'r data hyn yn awgrymu bod UTX yn rheoleiddio hygyrchedd cromatin a llwybrau trawsgrifio genynnau sy'n bwysig wrth reoleiddio homeostasis a swyddogaeth celloedd NK.
Mae'n hysbys bod UTX yn rhyngweithio â ffactorau trawsgrifio (TFs) i drefnu trawsgrifio genynnau targed40. Er mwyn nodi motiffau TF tybiedig gyda hygyrchedd gwahaniaethol oherwydd colli UTX, gwnaethom ddadansoddiad motiff 45 TF HOMER (Optimization Hypergeometric of Motif Enrichment) ar gopaon hygyrch gwahaniaethol a nodwyd gan ATAC-seq (Data Estynedig Ffig. 6j). Roedd TFs sy'n gysylltiedig â swyddogaeth effeithydd celloedd NK (er enghraifft, Runt (Runx1 a Runx2)46 a T-box (Eomes, T-bet, Tbr1 a Tbx6)47 o aelodau'r teulu) yn fwy arwyddocaol ac roedd ganddynt ganran uwch o fotiffau targed yn gysylltiedig â llai o hygyrchedd yn UTXNKD (clystyrau 1, 2, 3 a 6; Data Estynedig Ffig. 6j). I'r gwrthwyneb, roedd TFs sy'n gysylltiedig ag amlhau, gwahaniaethu a metaboledd yn y bys sinc a TFs teulu ETS48 yn gysylltiedig yn fwy arwyddocaol â hygyrchedd cynyddol (clystyrau 4 a 5; Data Estynedig Ffig. 6j). At hynny, mae dadansoddiad motiffau TF o gopaon wedi'u rhwymo gan UTX gan UTX CUT&Tag yn ategu'r canlyniadau hyn trwy ddatgelu TFs sy'n hanfodol ym mhrosesau effeithydd celloedd NK (T-bet, Eome, Runx1 a Tbx5) a rhaglenni datblygiadol (ETS1 ac AP-1; Data Estynedig Ffig. 6k). Mae'r data hyn yn awgrymu hygyrchedd gwahaniaethol a rhwymiad uniongyrchol UTX o fotiffau rhwymo TF pwysig sy'n gysylltiedig â rheoleiddio ffitrwydd celloedd NK a phrosesau effeithydd. Mae'r dadansoddiadau hyn yn awgrymu bod UTX yn modiwleiddio'r dirwedd chromatin i reoli mynegiant genynnau sy'n bwysig mewn homeostasis celloedd NK (Bcl2 a Thy1) a swyddogaeth effeithydd (Ifng a Csf2). Yn y pen draw, mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu model lle gall lefelau mynegiant gwahaniaethol UTX fod yn sail i ddimorffedd rhywiol mewn celloedd NK fel rheolydd canolog ffitrwydd celloedd NK a swyddogaeth effeithydd (Ffig. 6h).
Ffig. 6|Newidiadau byd-eang yn hygyrchedd cromatin celloedd NK a thrawsgrifio wedi'u cyfryngu gan UTX. a–c, 4:1 WT: UTXNKD Cafodd mBMCs eu cynhyrchu trwy drosglwyddo mêr esgyrn WT (CD45.1+ ) ac UTXNKD (CD45.2+ ) i lygod gwesteiwr lymffodeplededig (CD451x2 ) a chaniatawyd iddynt ailgyfansoddi ar gyfer 6 wythnos. Didolwyd celloedd NK splenig ar gyfer paratoi llyfrgell ATAC-seq a RNA-seq (n=3 fesul grŵp). Roedd graffiau llinell (chwith) a map gwres (dde) o ddulliau c niwlog yn clystyru copaon hygyrch gwahaniaethol a nodwyd gan ATAC-seq (a) a genynnau wedi'u mynegi'n wahaniaethol a nodwyd gan RNA-seq (b) o gelloedd NK splenig o WT: UTXNKD BMC llygod (gwerth P wedi'i addasu < 0.05 a sgôr aelodaeth > 0.5). Mae graffiau llinell yn dangos cymedrig (llinell ddu) a gwyriad safonol (rhuban coch) gwerthoedd arwyddocâd log2 normaleiddio cymedrig (FDR a gwerth P wedi'i addasu < 0.05). c, Dadansoddiad llwybr o genynnau niwlog arwyddocaol c-yn clystyru genynnau RNA-seq gan ddefnyddio g: Proffil gyda maint pwynt yn nodi −log10(gwerth P; wedi'i gyfrifo gan g: GOSt gan ddefnyddio prawf un gynffon Fisher). d–g, perfformiwyd Anti-UTX CUT&Tag mewn celloedd WT ac UTXNKD NK a nododd 5,746 o gopaon unigryw wedi'u rhwymo gan UTX (n=3 fesul grŵp). d, Diagram Venn yn amlinellu genynnau sy'n gorgyffwrdd â mynediad gwahaniaethol (DA) a nodwyd gan genynnau ATAC-seq a genynnau wedi'u mynegi'n wahaniaethol (DE) a nodwyd gan RNA-seq. e, Lleoliad copaon sy'n rhwym i UTX. f,g, Traciau genynnau cynrychioliadol o Borwr Genom Integredig UCSC o CUT&Tag gwrth-UTX ('gwrth-UTX'), ATAC-seq a RNA-seq o Bcl2 a Thy1 (f) ac Ifng a Csf2 (g); mae echel-y yn dangos cyfrif fesul miliwn (CPM). h, Sgematig o sut mae lefelau mynegiant UTX gwahaniaethol yn sail i wahaniaethedd rhywiol yng nghyfansoddiad a swyddogaeth celloedd NK (chwith). Diagram o sut y gall UTX fod yn rheoleiddio rhaglenni genynnau sy'n ymwneud â niferoedd celloedd NK a swyddogaeth effeithydd yn ystod homeostasis a haint firaol (dde). Crëwyd gyda BioRender.com.
Trafodaeth
Mae rhyw yn newidyn biolegol hollbwysig wrth bennu canlyniadau heintiau firaol3. Dangoswyd hyn yn ddiweddar gyda COVID-19, lle nodwyd rhyw gwrywaidd fel ffactor risg mawr ar gyfer afiechyd difrifol5. At hynny, mae astudiaethau diweddar wedi cysylltu camweithrediad celloedd NK â chlefyd COVID-19 difrifol49. O ystyried pwysigrwydd celloedd NK mewn imiwnedd gwrthfeirysol, bydd deall achosion sylfaenol gwahaniaethau rhyw mewn bioleg celloedd NK yn cael goblygiadau pellgyrhaeddol o ran optimeiddio ymatebion effeithwyr mewndarddol. Yn yr astudiaeth hon, rydym yn dangos bod mynegiant UTX is mewn celloedd NK gwrywaidd yn cyfrannu at eu niferoedd cynyddol a llai o ymarferoldeb effeithydd. Mae angen cell NK UTX ar gyfer rheoli ffitrwydd celloedd NK, modiwleiddio hygyrchedd motiffau rhwymo TF, cynyddu hygyrchedd cromatin ar loci genynnau effeithydd, a pharatoi celloedd NK ar gyfer ymateb cyflym i haint firaol.
Yn ogystal â chelloedd NK, mae dimorphism rhywiol wedi'i adrodd mewn celloedd B, monocytes, neutrophils, celloedd CD4+ T, a chelloedd CD8+ T25. Er bod gwahaniaethau rhyw mewn celloedd imiwn wedi’u hadrodd yn flaenorol i gael eu cyfryngu gan hormonau rhyw gonadal50–52, mae’n dal yn bosibl y gellir priodoli is-set o’r gwahaniaethau hyn hefyd i fynegiant gwahaniaethol UTX. I gefnogi'r posibilrwydd hwn, mae diffyg UTX wedi'i gysylltu â gostyngiad mewn celloedd T a chelloedd NK T amrywiol53-55; ac mae trawsgrifiadau UTX yn is mewn celloedd gwrywaidd a benywaidd ar gyfer mathau lluosog o gelloedd imiwnedd (CD4+ celloedd T, celloedd T CD8+, monocytes, celloedd B) a holwyd yng nghronfa ddata DICE56. Mae angen astudiaethau ffenotypig pellach i bennu rôl UTX wrth fodiwleiddio gwahaniaethau rhyw mewn mathau eraill o gelloedd imiwnedd. Mae swyddogaethau effeithydd cell-gyfryngol NK yn cynnwys cynhyrchu cytocin a mynegiant moleciwl sytotocsig. Mae ein dadansoddiadau aml-omig yn awgrymu bod UTX yn gosod tirwedd cromatin celloedd NK i ymateb yn gyflym i heriau firaol trwy gynyddu hygyrchedd a thrawsgrifio loci effeithydd. Datgelodd yr astudiaethau hyn 191 o enynnau (gan gynnwys Ifng a Csf2) 20,32 a oedd wedi'u rhwymo ar yr un pryd gan UTX, yn hygyrch ac wedi'u mynegi'n wahanol. Mae llai o gynhyrchiad cytocin IFN- a GM-CSF a chynhwysedd cytolytig diffygiol celloedd NK diffygiol UTX yn cefnogi rôl UTX wrth hyrwyddo ymarferoldeb effeithyddion yn ystod llid. Fodd bynnag, efallai y bydd canlyniadau anuniongyrchol ychwanegol i reoleiddio genynnau wedi'u cyfryngu gan UTX sy'n chwarae rhan bwysig yn swyddogaeth effeithydd celloedd NK, fel y dangosir gan y genynnau ychwanegol a fynegir yn wahaniaethol ond nad ydynt wedi'u rhwymo gan UTX.
Fel demethylase H3K27me3, mae UTX yn gosod cromatin ar gyfer mynegiant genynnau gweithredol57. Yn ogystal â'i weithgaredd catalytig, mae UTX yn gweithredu mewn cyfadeiladau multiprotein gyda rheolyddion epigenetig eraill (er enghraifft, SWI / SNF, MLL4/5, a p300) i gyfryngu ailfodelu cromatin mewn modd annibynnol demethylase36,57. Rydym yn adrodd ar swyddogaethau demethylase-annibynnol UTX wrth reoleiddio rhaglenni homeostasis ac effeithydd mewn celloedd NK. Mae hyn yn wahanol i rôl UTX mewn celloedd NK T amrywiol, lle mae angen ei weithgaredd demethylase53. Felly, gall y mecanweithiau moleciwlaidd y gall swyddogaethau UTX eu defnyddio fod yn llinach-benodol. I gefnogi'r ddamcaniaeth hon, adroddwyd bod UTX yn rhyngweithio â TFs llinol-benodol mewn celloedd T i dargedu loci effaith40. Datgelodd ein dadansoddiad motiff HOMER ryngweithiadau posibl UTX â Runx1, Runx2, Eomes, a TFs eraill sy'n bwysig ar gyfer swyddogaeth effeithydd celloedd NK yn ystod haint firaol46,47. At hynny, mae'r dadansoddiadau hyn hefyd yn tynnu sylw at ryngweithiadau UTX â KLF1, KLF5, Sp2, a TFs eraill sy'n gysylltiedig ag amlhau celloedd NK, gwahaniaethu, a metaboledd48. Ymhellach, mae ein canlyniadau yn cefnogi astudiaethau a gyhoeddwyd yn flaenorol lle adroddwyd bod UTX mewn mathau eraill o gelloedd yn cydlynu ymatebion gyda T-bet, Eomes, a Tbx5 (cyf. 40), ETS1 (cyf. 48) ac AP-1 ( cyf.58). Yn olaf, dangoswyd bod Runx1 yn rhyngweithio â chyfadeiladau BRG1 a SWI/SNF a reoleiddir gan UTX46. Fodd bynnag, oherwydd natur gydberthynol dadansoddiad HOMER, mae angen astudiaethau pellach gyda chyd-imiwnedd a sbectrometreg màs i wirio'r rhyngweithiadau hyn yn arbrofol yn y fan a'r lle. Ar ben hynny, fel dihangwr XCI cyfansoddol, efallai y bydd gan UTX fecanweithiau cell-math-benodol trwy ddau bosibilrwydd: (i) cronfa o gydffactorau yn bresennol a (ii) argaeledd ei bartneriaid rhwymo epigenetig. Mae UTX yn dibynnu ar sgil-gynhyrchion llwybrau metabolaidd ar gyfer cofactors (er enghraifft, Fe(II), -ketoglutarate, ac ocsigen) sy'n hanfodol ar gyfer ei weithgaredd ensymatig59. Felly, yn dibynnu ar y cyflwr metabolig, mae cronfeydd gwahanol o gydffactorau ar gael ar gyfer swyddogaeth demethylase UTX, gan ganiatáu lefelau gwahaniaethol o weithgaredd catalytig yn seiliedig ar y math o gell. Yn ogystal, gall swyddogaeth UTX hefyd fod yn amodol ar lefel gweithgaredd a mynegiant ei bartneriaid rhwymol (er enghraifft, MLL3/4, SWI/SNF, a p300) sydd wedi'u hamgodio'n awtomatig.
manteision cistanche ar gyfer dynion-cryfhau system imiwnedd
Bydd ffactorau pwyso sy'n diffinio is-setiau cleifion â gwahanol ymatebion imiwn yn ein galluogi i symud heibio i ddull therapiwtig 'un maint i bawb' tuag at batrwm meddygaeth fanwl. Mae diffyg UTX wedi'i gysylltu â syndrom Kabuki a syndrom Turner60, dau gyflwr dynol sy'n gysylltiedig â dadreoleiddio imiwnedd a heintiau cynyddol. Mae ein canfyddiadau'n awgrymu'r posibilrwydd y gallai diffyg UTX mewn celloedd NK dynol gyfrannu at ostyngiad mewn imiwnwyliad firaol a welwyd yn y cleifion hyn, er y bydd angen gwaith yn y dyfodol i gefnogi'r ddamcaniaeth hon. Ar ben hynny, mae angen deall gwahaniaethau rhyw mewn swyddogaeth celloedd NK i ymgorffori rhyw fel ffactor biolegol mewn penderfyniadau triniaeth. Mewn dynion â salwch firaol difrifol, er enghraifft, gall gwella gweithgaredd celloedd NK UTX ddarparu buddion therapiwtig. Disgwyliwn y bydd y mewnwelediadau hyn yn bwysig nid yn unig wrth osod heintiau firaol ond hefyd mewn heintiau eraill a chanser, lle mae celloedd NK hefyd yn chwarae rhan bwysig. Gall y canfyddiadau hyn hefyd fod â goblygiadau pwysig ar gyfer therapïau cellog mabwysiadol, lle mae celloedd NK yn destun diddordeb dwys61.
Cyfeiriadau
1. Wilkinson, NM, Chen, HC, Lechner, MG & Su, MA Gwahaniaethau rhyw mewn imiwnedd. Annu Parch Immunol. 40, 75–94 (2022).
2. Klein, SL & Flanagan, KL Gwahaniaethau rhyw mewn ymatebion imiwn. Nat. Parch Immunol. 16, 626–638 (2016).
3. Pardue, M.-L. & Wizemann, TM Archwilio'r cyfraniadau biolegol i iechyd dynol: a yw rhyw o bwys? Gwasg yr Academïau Cenedlaethol https://doi.org/10.17226/10028 (2001).
4. Gianella, S. et al. Gwahaniaethau rhyw mewn atgynhyrchu CMV a dyfalbarhad HIV yn ystod CELF ataliol. Heint Fforwm Agored. Dis. 7, ofaa289 (2020).
5. Takahashi, T. & Iwasaki, A. Gwahaniaethau rhyw mewn ymatebion imiwn. Gwyddoniaeth 371, 347–348 (2021).
6. Patin, E. et al. Mae amrywiad naturiol ym mharamedrau celloedd imiwnedd cynhenid yn cael ei yrru'n ffafriol gan ffactorau genetig. Nat. Imiwnol. 19, 302–314 (2018).
7. Huang, Z. et al. Effeithiau rhyw a heneiddio ar y dirwedd celloedd imiwn fel yr aseswyd gan ddadansoddiad trawsgrifomig un gell. Proc. Natl Acad. Sci. UDA 118, e2023216118 (2021).
8. Talebizadeh, Z., Simon, SD & Butler, mynegiant genynnau cromosom MG X mewn meinweoedd dynol: cymariaethau gwrywaidd a benywaidd. Genomeg 88, 675–681 (2006).
9. Fang, H., Disteche, CM & Berletch, JB X anactifadu a dianc: nodweddion epigenetig a strwythurol. Blaen. Cell Dev. Biol. 7, 219 (2019).
10. Chen, X. et al. Mae gwahaniaeth rhyw mewn namau tiwb niwral mewn llygod p53-null yn cael ei achosi gan wahaniaethau yng nghyflenwad genynnau X, nid Y. Dev. Neurobiol. 68, 265–273 (2008).
11. Smith-Bouvier, DL et al. Rôl ar gyfer cyflenwad cromosom rhyw yn y gogwydd benywaidd mewn clefyd hunanimiwn. J. Exp. Med. 205, 1099–1108 (2008).
12. Souyris, M. et al. Mae TLR7 yn dianc rhag anactifadu cromosom X mewn celloedd imiwn. Sci. Imiwnol. 3, eaap8855 (2018).
13. Morthwyl, C., Ruckert, T. & Romagnani, C. Penodoldeb celloedd lladd naturiol ar gyfer heintiau firaol. Nat. Imiwnol. 19, 800–808 (2018).
14. Oren, JS Diffyg celloedd lladd naturiol. J. Alergedd Clin. Imiwnol. 132, 515–525 (2013).
15. Bukowski, JF, Warner, JF, Dennert, G. & Welsh, RM Astudiaethau trosglwyddo mabwysiadol yn dangos effaith gwrthfeirysol celloedd lladd naturiol in vivo. J. Exp. Med. 161, 40–52 (1985).
16. Brown, MG et al. Cyfranogiad hanfodol derbynnydd actifadu celloedd lladd naturiol mewn ymwrthedd i haint firaol. Gwyddoniaeth 292, 934–937 (2001).
17. Cymraeg, RM, Brubaker, JO, Vargas-Cortes, M. & O'Donnell, CL Ymateb celloedd lladdwr naturiol (NK) i heintiau firws mewn llygod â diffyg imiwnedd cyfun difrifol. Mae symbyliad celloedd NK a rheolaeth gell-ddibynnol NK o heintiau firws yn digwydd yn annibynnol ar swyddogaeth celloedd T a B. J. Exp. Med. 173, 1053–1063 (1991).
18. Bancroft, GJ, Shellam, GR & Chalmer, JE Dylanwadau genetig ar y cynnydd mewn celloedd lladd naturiol yn ystod heintiad sytomegalofirws murine: cydberthynas â phatrymau ymwrthedd. J. Immunol. 126, 988–994 (1981).
19. Menees, KB et al. Newidiadau dibynnol ar ryw ac oedran i broffil celloedd imiwnedd splenig a ffenoteipiau celloedd NK a swyddogaeth llygod C57BL/6J. Imiwn. 18 oed, 3 (2021).
20. Mujal, AM, Delconte, RB & Sun, JC Celloedd lladd naturiol: o nodweddion cynhenid i nodweddion addasol. Annu. Parch Immunol. 39, 417–447 (2021).
21. Loh, J., Chu, DT, O'Guin, AK, Yokoyama, WM & Virgin, HWT Mae celloedd lladd naturiol yn defnyddio perforin a gama interfferon i reoleiddio heintiad cytomegalovirws murine yn y ddueg a'r afu. J. Firol. 79, 661–667 (2005).
22. Orange, JS, Wang, B., Terhorst, C. & Biron, CA Gofyniad am interfferon-gamma a gynhyrchir gan gelloedd lladd naturiol i amddiffyn rhag heintiad sytomegalofirws murine a gwella'r llwybr amddiffyn hwn trwy weinyddiaeth interleukin-12. J. Exp. Med. 182, 1045–1056 (1995).
23. Nakaya, M., Tachibana, H. & Yamada, K. Effaith estrogens ar y boblogaeth cell cynhyrchu interfferon-gamma o splenocytes llygoden. Biosci. Biotechnol. Biocemeg. 70, 47–53 (2006).
24. Chiossone, L. et al. Mae aeddfedu celloedd llygoden NK yn 4-rhaglen ddatblygiadol fesul cam. Gwaed 113, 5488–5496 (2009).
25. Wainer Katsir, K. & Linial, M. Genynnau dynol yn dianc rhag anactifadu X a ddatgelir gan ddata mynegiant un-gell. Genomeg BMC 20, 201 (2019).
26. Yang, F., Babak, T., Shendure, J. & Disteche, CM Arolwg byd-eang o ddianc rhag anactifadu X trwy ddilyniannu RNA yn y llygoden. Genom Res. 20, 614–622 (2010).
27. Berletch, JB et al. Mae dianc rhag anactifadu X yn amrywio ym meinweoedd y llygoden. PLoS Genet. 11, e1005079 (2015).
28. Arnold, AP Pedwar genoteip craidd a modelau llygoden XY*: diweddariad ar effaith ar ymchwil SABV. Neurosci. Biobihav. Dat 119, 1–8 (2020).
29. Hasegawa, H. et al. Mae gweithredu p53 gan Nutlin-3a, gwrthweithydd MDM2, yn achosi apoptosis a heneiddedd cellog mewn celloedd lewcemia cell T oedolion. Lewcemia 23, 2090–2101 (2009).
30. Riggan, L. et al. Mae'r ffactor trawsgrifio Fli1 yn cyfyngu ar ffurfio celloedd NK rhagflaenydd cof yn ystod haint firaol. Nat. Imiwnol. 23, 556–567 (2022).
31. Mae Min-Oo, G., Bezman, NA, Madera, S., Sun, JC & Lanier, LL Proapoptotic Bim yn rheoleiddio crebachiad celloedd NK antigen-benodol a chynhyrchu pwll celloedd NK cof ar ôl haint cytomegalovirws. J. Exp. Med. 211, 1289–1296 (2014).
32. Louis, C. et al. Mae GM-CSF sy'n deillio o gelloedd NK yn cryfhau arthritis llidiol ac yn cael ei reoleiddio'n negyddol gan CIS. J. Exp. Med. 217, e20191421 (2020).
33. Bjorkstrom, NK, Strunz, B. & Ljunggren, HG Celloedd lladd naturiol mewn imiwnedd gwrthfeirysol. Nat. Parch Immunol. 22, 112–123 (2022).
34. Smyth, MJ et al. Mae Perforin yn cyfrannu'n fawr at reolaeth celloedd NK o fetastasis tiwmor. J. Immunol. 162, 6658–6662 (1999).
35. Van der Meulen, J., Speleman, F. & Van Vlierberghe, P. Mae'r H3K27me3 demethylase UTX mewn datblygiad arferol a chlefyd. Epigeneteg 9, 658–668 (2014).
36. Wang, SP et al. Mae rhwydwaith rheoleiddio trawsgrifio UTX-MLL4-p300 yn cyd-lunio tirweddau gwella gweithredol ar gyfer denu trawsgrifiad. Mol. Cell 67, 308–321 (2017).
37. Gozdecka, M. et al. Mae gwellaydd trwy gyfrwng UTX ac ailfodelu cromatin yn atal lewcemogenesis myeloid trwy reoleiddio gwrthdro ancatalytig o raglenni ETS a GATA. Nat. Genet. 50, 883–894 (2018).
38. Wang, C. et al. Mae UTX yn rheoleiddio gwahaniaethu mesoderm o fôn-gelloedd embryonig yn annibynnol ar weithgaredd demethylase H3K27. Proc. Natl Acad. Sci. UDA 109, 15324–15329 (2012).
39. Shih, HY et al. Mae caffaeliad datblygiadol o regulomes yn sail i ymarferoldeb celloedd lymffoid cynhenid. Cell 165, 1120–1133 (2016).
40. Mae Miller, SA, Mohn, SE & Weinmann, AS Jmjd3 ac UTX yn chwarae rhan demethylase-annibynnol mewn ailfodelu cromatin i reoleiddio mynegiant genynnau sy'n ddibynnol ar aelod o'r teulu o'r teulu T-box. Mol. Cell 40, 594–605 (2010).
41. Kaya-Okur, HS et al. CUT&Tag ar gyfer proffilio epigenomig effeithlon o samplau bach a chelloedd sengl. Nat. Cymmun. 10, 1930 (2019).
42. Kupz, A. et al. Cyfraniad Thy1+ gelloedd NK at gynhyrchiad IFN-gamma amddiffynnol yn ystod heintiadau Salmonela typhimurium. Proc. Natl Acad. Sci. UDA 110, 2252–2257 (2013).
43. Langmead, B. & Salzberg, SL Aliniad darllen bylchau cyflym â Bowtie 2. Nat. Dulliau 9, 357–359 (2012).
44. Chen, EY et al. Enrichr: offeryn dadansoddi cyfoethogi rhestr genynnau HTML5 rhyngweithiol a chydweithredol. BMC Biowybodeg 14, 128 (2013).
45. Heinz, S. et al. Mae cyfuniadau syml o ffactorau trawsgrifio sy'n pennu llinach yn brif elfennau cis-reoleiddio sydd eu hangen ar gyfer hunaniaeth celloedd macrophage a B. Mol. Cell 38, 576–589 (2010).
46. Rapp, M. et al. Mae ffactorau trawsgrifio beta-beta craidd-rwymol a Runx yn hyrwyddo ymatebion celloedd lladd naturiol addasol. Sci. Imiwnol. 2, eaan3796 (2017).
47. Simonetta, F., Pradier, A. & Roosnek, E. T-bet ac eomesodermin mewn datblygiad celloedd NK, aeddfedu a swyddogaeth. Blaen. Imiwnol. 7, 241 (2016).
48. Presnell, JS, Schnitzler, CE a Browne, WE KLF/SP esblygiad teulu ffactor trawsgrifio: ehangu, arallgyfeirio ac arloesi mewn ewcaryotau. Genom Biol. Evol. 7, 2289–2309 (2015).
49. Kramer, B. et al. Mae llofnodion IFN-alpha cynnar a chamweithrediad parhaus yn nodweddion gwahaniaethol o gelloedd NK mewn COVID difrifol-19. Imiwnedd 54, 2650–2669 (2021).
50. D'Agostino, P. et al. Mae hormonau rhyw yn modiwleiddio cyfryngwyr llidiol a gynhyrchir gan macroffagau. Ann. NY Acad. Sci. 876, 426–429 (1999).
51. Lu, FX et al. Mae cryfder imiwnedd celloedd B mewn macaques rhesws benywaidd yn cael ei reoli gan gelloedd T CD8+ o dan ddylanwad hormonau steroid ofarïaidd. Clin. Exp. Imiwnol. 128, 10–20 (2002).
52. Singh, RP a Bischof, DS Mae hormonau rhyw a rhyw yn dylanwadu ar fynegiant marcwyr celloedd T rheoleiddiol mewn cleifion SLE. Blaen. Imiwnol. 12, 619268 (2021).
53. Cogydd, KD et al. Mae clirio cell-ddibynnol cell cynorthwy-ydd ffoligl T o haint firws parhaus yn gofyn am fynegiant cell T o'r demethylase histone UTX. Imiwnedd 43, 703–714 (2015).
54. Beyaz, S. et al. Mae'r histone demethylase UTX yn rheoleiddio'r rhaglen epigenetig llinol-benodol o gelloedd T lladdwr naturiol amrywiol. Nat. Imiwnol. 18, 184–195 (2017).
55. Mitchell, JE et al. Mae UTX yn hyrwyddo CD8+ amddiffynfeydd gwrthfeirysol wedi'u cyfryngu gan gelloedd T ond yn lleihau gwydnwch celloedd T. Cell Rep. 35, 108966 (2021).
56. Schmiedel, BJ et al. Effaith polymorphisms genetig ar fynegiant genynnau celloedd imiwnedd dynol. Cell 175, 1701–1715 (2018).
57. Bosselut, R. Swyddogaethau pleiotropig demethylases H3K27Me3 mewn gwahaniaethu celloedd imiwnedd. Tueddiadau Immunol. 37, 102–113 (2016).
58. Kechin, A., Boyarskikh, U., Kel, A. & Filipenko, M. cutPrimers: offeryn newydd ar gyfer torri paent preimio yn gywir o ddarlleniadau dilyniannu cenhedlaeth nesaf wedi'i dargedu. J. Cyfrifiadur. Biol. 24, 1138–1143 (2017).
59. Hong, S. et al. Nodi UTX sy'n cynnwys parth JmjC a JMJD3 fel demethylases histone H3 lysin 27. Proc. Natl Acad. Sci. UDA 104, 18439–18444 (2007).
60. Van Laarhoven, PM et al. Genynnau syndrom Kabuki KMT2D a KDM6A: mae dadansoddiadau swyddogaethol yn dangos rolau hanfodol mewn datblygiad cranio-wynebol, y galon a'r ymennydd. Hum. Mol. Genet. 24, 4443–4453 (2015).
61. Rezvani, K. Therapi celloedd mabwysiadol gan ddefnyddio celloedd lladd naturiol peirianyddol. Transpl Mêr Esgyrn. 54, 785–788 (2019).
