Mae Thrombomodulin yn Lliniaru Ffactor Twf sy'n Trawsnewid Clefyd yr Arennau Cronig wedi'i Gyfryngu B1 Trwy'r Derbynnydd Cypledig Protein G-15/Akt Signal Pathway

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Atsuro Takeshita1,2,8 , Taro Yasuma1,2,8 , Kota Nishihama1 , Corina N. D'Alessandro-Gabazza2, Masaaki Toda2 , Toshiaki Totoki4 , Yuko Okano1,2 , Akihiro Uchida1 , Ryo Inoue6 , Liqiang Qien , Ryo Inoue6 , Liqiang , Wang 5 , Liqiang Fridman D'Alessandro2 , Tetsu Kobayashi3 , Yoshiyuki Takei4 , Akira Mizoguchi5 , Yutaka Yano1,9 ac Esteban C. Gabazza2,9

1 Adran Diabetes, Metabolaeth, ac Endocrinoleg, Ysgol Feddygaeth i Raddedigion Prifysgol Mie, Tsu-city, Mie, Japan; 2 Adran Imiwnoleg, Ysgol Feddygaeth i Raddedigion Prifysgol Mie, Tsu-city, Mie, Japan; 3 Adran Meddygaeth yr Ysgyfaint a Gofal Critigol, Ysgol Feddygaeth i Raddedigion Prifysgol Mie, Tsu-city, Mie, Japan; 4 Adran Gastroenteroleg a Hepatoleg, Ysgol Feddygaeth i Raddedigion Prifysgol Mie, Tsu-city, Mie, Japan; 5 Adran Adfywio Niwral a Chyfathrebu Celloedd, Ysgol Feddygaeth i Raddedigion Prifysgol Mie, Tsu-city, Mie, Japan; 6 Sefydliad Canolog ar gyfer Anifeiliaid Arbrofol, Kawasaki-ku, Kawasaki, Kanawaga, Japan; a 7 Adran Neffroleg, Ysbyty Taizhou, Prifysgol Feddygol Wenzhou, Lihai, Talaith Zhejiang, Gweriniaeth Pobl Tsieina.

Kidney International (2020) 98, 1179–1192; https://doi.org/10.1016/ j.kint.2020.05.041

Hawlfraint ª 2020, Cymdeithas Ryngwladol Neffroleg. Cyhoeddwyd gan Elsevier Inc. Mae hon yn erthygl mynediad agored o dan drwydded CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Gohebiaeth: Esteban C. Gabazza, Adran Imiwnoleg, Ysgol Feddygaeth Prifysgol Mie, Edobashi 2-174, Tsu-city, Mie 514-8507, Japan. E-bost: gabazza@doc.medic.mie-u.ac.jp; neu Yutaka Yano, Diabetes, Metabolaeth ac Endocrinoleg, Ysgol Feddygaeth Graddedigion Prifysgol Mie, Edobashi 2-174, Tsu-city, Mie 514-8507, Japan. E-bost: yanoyuta@clin.medic.mie-u.ac.jp 8 Cyfrannodd AT a TY yn gyfartal at y gwaith hwn. 9 Mae YY ac ECG yn gyd-uwch awduron. Derbyniwyd 1 Medi 2019; diwygiedig 24 Ebrill 2020; derbyniwyd 7 Mai 2020

GEIRIAU ALLWEDDOL: apoptosis; clefyd cronig yn yr arennau; Derbynnydd cypledig G-protein; thrombomodulin dynol ailgyfunol; trawsnewid ffactor twf-b1

Ffibrosis yr arennau yw canlyniad cyffredin clefydau cronig yn yr arennau sy'n symud ymlaen yn ddiwrthdro i glefyd yr arennau cam olaf gyda methiant organau y gellir ei drin gyda therapi amnewid yn unig. Gan mai trawsnewid ffactor twf-b1 yw'r prif chwaraewr yn pathogenesis ffibrosis yr arennau, fe wnaethom gyflwyno'r rhagdybiaeth y gall thrombomodulin ailgyfunol liniaru trawsnewid ffibrosis yr arennau cynyddol wedi'i gyfryngu gan ffactor twf-b1 a methiant. Er mwyn cwestiynu ein rhagdybiaeth, fe wnaethom gynhyrchu llygoden drawsenynnol newydd sy'n benodol i glomerulus sy'n trawsnewid ffactor twf-b1 i werthuso effaith therapiwtig thrombomodwlin ailgyfunol. Datblygodd y llygoden drawsgenig hon sglerosis glomerwlaidd blaengar a ffibrosis tubulointerstitial gyda methiant yr arennau. Roedd therapi â thrombomodulin ailgyfunol am bedair wythnos yn atal ffibrosis yr arennau'n sylweddol ac yn gwella gweithrediad organau o gymharu â llygod trawsgenig heb eu trin. Roedd triniaeth â thrombomodulin ailgyfunol yn atal apoptosis a gwahaniaethu mesenchymal o podocytau yn sylweddol trwy ryngweithio â'r derbynnydd cypledig G-protein 15 i actifadu llwybr signalau Akt ac i ddadreoleiddio mynegiant proteinau gwrth-apoptotig gan gynnwys survivin. Felly, mae ein hastudiaeth yn awgrymu'n gryf effeithiolrwydd therapiwtig posibl thrombomodulin ailgyfunol ar gyfer trinclefyd cronig yn yr arennaua methiant organau dilynol.

cistanchecantrin clefyd yr arennaugwella swyddogaeth arennol

Datganiad Trosiadol

Ffibrosis a chamweithrediad yarennauproblemau iechyd mawr ledled y byd ar hyn o bryd. Ar hyn o bryd nid oes cyffur gwrth-ffibrotic wedi'i gymeradwyo ar gyfer trin ffibrosis arennol. Trawsnewid twf ffactor-b1 yw prif ysgogydd a chyffredin fibrogenesis arennol mewn clefyd cronig yn yr arennau a achosir gan lawer o anhwylderau. Canfuom yma fod thrombomodulin ailgyfunol, cyffur a gymeradwywyd yn Japan i drin ceulo mewnfasgwlaidd wedi'i ledaenu, yn atal dilyniant sglerosis glomerwlaidd, ffibrosis tubulointerstitial, a methiant arennol a achosir gan orfynegiant ffactor twf trawsnewid dynol-b1, gan awgrymu ei werth therapiwtig posibl ar gyfer y driniaeth. oclefydau cronig yn yr arennau.

Clefyd arennol cronigyn broblem iechyd cyhoeddus fawr sy'n gysylltiedig ag afiachusrwydd a marwolaethau uchel sy'n effeithio ar tua 13 y cant o'r boblogaeth oedolion mewn gwledydd datblygedig.1 Dywedodd Sefydliad Iechyd y Byd fodclefyd cronig yn yr arennau(CKD) oedd achos 1.5 y cant o farwolaethau ledled y byd yn 2012.1 Ar ben hynny, mae data epidemiolegol diweddar yn dangos cynnydd cyson byd-eang yn nifer y cleifion â CKD.2,3 Yn y rhan fwyaf o achosion, mae'r broses patholegol yn esblygu'n raddol, gan arwain yn y pen draw at ddiwedd- methiant yr arennau cam, y gellir ei drin gyda dialysis gydol oes neu drawsblaniad arennol yn unig.4,5 Diabetes mellitus (DM) a gorbwysedd arterial yw'r achosion amlaf o CKD ac yna isgemia, glomerwlosclerosis o etioleg anhysbys, rhwystrau wrolegol, a heintiau cronig.6 Waeth beth fo'r anhwylder sylfaenol, canlyniad patholegol terfynol a chyffredin CKD yw ffibrosis yr arennau.7 Ffibrosis arennol yw gwella ac ailfodelu adeileddau parenchymal yr arennau sy'n destun anaf hir neu ailadroddus a nodweddir gan bresenoldeb ffibrosis tubulointerstitial, glomerulosclerosis, ac atroffi tiwbaidd.8 Prif yrrwr ffibrogenesis arennol yw trawsnewid ffaith twf neu (TGF)-b1.8,9 Gall TGFb1 hybu ffibrosis trwy ysgogi secretion proteinau matrics allgellog a ffactorau cemotactig neu ffactorau lluosogi ffibroblastau, trwy atal metalloproteinasau, a thrwy hyrwyddo trawsnewid epithelial-mesenchymal.10 Ar wahân i drin y clefyd sylfaenol , nid yw cyffur cymeradwy sy'n targedu ffibrosis arennol yn benodol ar gael ar hyn o bryd.6

Mae thrombomodulin (TM) yn glycoprotein trawsbilen gyda swyddogaethau biolegol lluosog gan gynnwys modiwleiddio'r system geulo, yr ymateb imiwn, adweithiau llidiol, a goroesiad celloedd.11 Mae strwythur moleciwlaidd TM yn cynnwys parth tebyg i lectin, 6 parth twf epidermaidd tebyg i ffactor twf. , parth cyfoethog serine / threonine, dogn trawsbilen, a chynffon cytoplasmig.12 Mae thrombin, ffactor procoagulant a gynhyrchir yn ystod actifadu system ceulo, yn dod yn ffactor gwrthgeulo a gwrthfibrinolytig ar ôl rhwymo i TM.13 Mae'r cymhleth TM-thrombin yn cynyddu'r genhedlaeth o brotein wedi'i actifadu C (APC), gwrthgeulydd â gweithgaredd gwrthlidiol a sytoprotective, trwy actifadu protein C. Yn ogystal, gall TM yn unig ddadreoleiddio'r ymateb llidiol yn uniongyrchol trwy atal gweithgaredd protein grŵp symudedd uchel B-1 (HMGB1), trwy atal celloedd dendritig imiwnogenig, eosinoffiliau, celloedd mast, a'r system ategu.13–18

Mae canlyniadau wedi'u cyhoeddi sy'n dangos effeithiau ataliol TM mewn renopathi diabetig ac anaf arennol isgemia-atlif.19-21 Fodd bynnag, nid oes unrhyw astudiaeth wedi asesu effaith TM ailgyfunol ar ffibrosis yr arennau cynyddol a achosir gan TGFb1, sef gyrrwr cyffredin ffibrosis arennol mewn sawl clefyd sy'n achosi CKD. Fe wnaethom gyflwyno'r ddamcaniaeth y gall TM wella ffibrosis yr arennau cyfryngol TGFb a methiant arennol. Er mwyn cwestiynu'r ddamcaniaeth hon, fe wnaethom werthuso effaith therapiwtig TM ailgyfunol mewn llygoden drawsgenig (TG) TGFb1 sy'n benodol i glomerulus sydd newydd ei datblygu ac sy'n datblygu'n gynyddol.ffibrosis yr arennau a methiant arennol.

cistanche ar gyfer aren

CANLYNIADAU

Mae mwy o ddarnau TM sy'n cylchredeg yn cyfateb i gamweithrediad arennol

Mae TM, glycoprotein cellbilen endothelaidd rhwymedig, wedi'i hollti'n ddarnau, gan golli ei swyddogaethau amddiffynnol yn ystod anaf endothelaidd.22 Mae neffropathi diabetig yn gysylltiedig ag anaf endothelaidd.23,24 Dangosodd cleifion â DM â neffropathi, o'u cymharu â chleifion heb neffropathi, yn sylweddol uchel lefelau cylchredeg TM (4.4 vs. 3.3 pg/ml) a TGFb1 gweithredol (0.28 vs. 0.24 ng/ml) (Tabl Atodol S1, Ffigur Atodol S1A). Mae cydberthynas sylweddol rhwng TM a creatinin, TGFb1 gweithredol, a phodocin hydawdd (Ffigur Atodol S1B). Mae'r arsylwadau hyn yn awgrymu bod colli TM swyddogaethol wedi'i rwymo â philen yn gysylltiedig â rhyddhau mwy o TGFb1 gweithredol a chamweithrediad yr arennau.

Llygoden TG gyda mynegiant glomerwlws-benodol o enyn TGFb1 dynol hyd llawn

Fe wnaethom ddatblygu llygoden TG yn gorfynegi'r genyn TGFb1 dynol hyd llawn mewn podocytau. Cynhyrchwyd y llygoden trwy osod y TGFb1 dynol o dan reolaeth yr hyrwyddwr podocin ar luniad cromosom artiffisial bacteriol (BAC) (Ffigur Atodol S2; Ffigur Atodol S3). Cawsom 5 llygod sylfaenydd yn mynegi 3 chopi a 3 llygod sylfaenydd yn mynegi 1 copi o'r trawsgene dynol TGFb1. Roedd mynegiant y transgene yn benodol i'r arennau, ac roedd epil y sylfaenwyr yn hyfyw (Ffigur Atodol S3). Roedd gan lygod feichiogrwydd tymor llawn ac roedd sbwriel o faint arferol. Ganwyd llygod yn y gymhareb Mendelaidd ddisgwyliedig.

I nodweddu'r llygod TG, fe wnaethom fesur sawl unparamedrau arennolbob 4 wythnos am gyfnod o 16 wythnos (Ffigur Atodol S4). Cynyddwyd crynodiadau plasma ac wrin TGFb1 yn sylweddol yn llygod TG TGFb1- o gymharu â llygod math gwyllt (WT) o wythnosau cynnar ar ôl genedigaeth ac yna arhosodd yn sefydlog ar lefel uchel (Ffigur 1a). TGFb1-Dangosodd llygod TG gynnydd sylweddol yng nghynnwys meinwe arennol hydroxyproline yn y 20fed wythnos (190.5 vs. 96.0 mg/kidney ), ehangiad mesangial o'r 4edd wythnos (sgoriau 1.9 vs. 1.1), ac mewn dyddodiad colagen o'r 12fed wythnos (0.9 y cant yn erbyn 0.1 y cant) ar ôl genedigaeth o'i gymharu â'u cymheiriaid WT (Ffigur 1a-f ). Dangosodd microsgopeg optegol confensiynol ledu pilen islawr capsiwl Bowman, pilen islawr glomerwlaidd yn tewychu, mwy o ddyddodiad colagen mewn gofodau mesangial a rhyngserol, ac atroffi tiwbaidd (Ffigur 1bd). Dangosodd microsgopeg trawsyrru electronau glomerulosclerosis gan gynnwys trawsnewidiad microfilaidd ac elifiad podocytau yn y broses droed, ffenestri endothelaidd capilari glomerwlaidd is, pilen glomerwlaidd islawr yn tewychu, a mwy o ddyddodiad matrics mesangial (Ffigur 2a–i). Crynodiadau wrinol marcwyr cynnar neffropathi Protein sy'n rhwymo asid brasterog (185.1 vs. 87.0 pg/ml) aanaf i'r arennaucafodd moleciwl 1 (441.9 o'i gymharu â 256.9 pg/ml) eu gwella'n sylweddol mewn llygod TGFb o'r 4ydd a'r 8fed wythnos oed, yn y drefn honno, o gymharu â'u llygod WT sy'n cyfateb i oedran (Ffigur Atodol S5). Cynyddwyd cyfanswm y proteinwria a chyfanswm y gymhareb protein-creatinin mewn wrin yn sylweddol ar 4ydd, 8fed, 12fed, 16eg, a 20fed wythnos yn TGFb1-llygod TG o gymharu â'u cymheiriaid WT (Ffigur 3a) . Roedd lefel plasma nitrogen wrea yn y gwaed yn sylweddol uwch o'r 4edd wythnos (5.1 o'i gymharu â 4.1 mg/dl) a chrynodiad creatinin o'r 8fed wythnos (1.1 o'i gymharu â 0.4 mg/dl) mewn llygod TGFb{1-TGFb). o gymharu â'u cymheiriaid WT (Ffigur 3b).

Mae rhTM yn atal glomerulosclerosis a ffibrosis tubulointerstitial

O'u cymharu â TGFb{{0}}Roedd llygod TG a gafodd eu trin â hallt (SAL) a llygod WT a gafodd eu trin â dynol ailgyfunol (RH) TM neu SAL, TGFb1-Roedd llygod TG a gafodd eu trin â rhythm yn dangos llai o fesangial yn sylweddol ehangiad/cellwoldeb (1.3 vs. 3.{{30}} sgôr) a dyddodiad colagen tubulointerstitial arwyddocaol o isel a glomerwlosclerosis (121.3 y cant o'i gymharu â 139.7 y cant) (Ffigur 4a–e). Yn gyson â'r arsylwadau hyn, y cynnwys hydroxyproline (11.7 vs. 19.9 mg/g), crynodiadau meinwe'r arennau o golagen I (101.3 vs. 196.7 ng/mg protein) a periostin (21.7 vs. 40.8 ng/ mg o brotein), a'r mynegiant mRNA cymharol o golagen I wedi gostwng yn sylweddol mewn meinweoedd arennol o TGFb 1- llygod TG a gafodd eu trin â rhTM o gymharu â meinweoedd arennol o lygod rheoli (Ffigur 4f, Tablau Atodol S2, a S3). Dangosodd y microsgopeg electron trawsyrru ostyngiad sylweddol yn elifiad proses traed podocytau a philen islawr glomerwlaidd yn tewychu mewn llygod a gafodd eu trin â rhTM o gymharu â llygod a gafodd eu trin â SAL yn unig (Ffigur Atodol S6AB a B). Yn ogystal, mae crynodiadau meinwe'r arennau o'r protein cytocinau monocyte cemoattractant probrotig-1 (45.0 vs. 76.1 pg/mg protein), interleukin-13 (612.1 vs. 1002.0 pg/mg protein), a TGFb1 gweithredol (131.0 o'i gymharu â 151.5 pg/ mg o brotein) wedi'u lleihau'n sylweddol mewn TGFb1-llygod TG a gafodd eu trin â rhTM o gymharu â llygod rheoli (Ffigur Atodol S7). Bu gostyngiad sylweddol hefyd yng nghrynodiad meinwe'r arennau HMGB1 mewn meinweoedd arennol o lygod TGFb a gafodd eu trin â rhTM o gymharu âmeinweoedd arennolo lygod rheoli (Ffigur Atodol S7). Cynyddwyd y crynodiad plasma o gymhlyg antithrombin thrombin yn sylweddol yn y grŵp TGFb1-TG/SAL o’i gymharu â’r grŵp WT/SAL ond ni ddarganfuwyd unrhyw wahaniaeth rhwng y grwpiau TGFb1-TG/rhTM a WT/rhTM (Ffigur Atodol S8A). Yn ôl y disgwyl, roedd crynodiad uchel o TM yn y plasma o lygod TGFb a WT a gafodd eu trin â rhTM. Roedd crynodiad plasma'r cyfadeilad APC/antitrypsin wedi gostwng yn sylweddol yn y grŵp TGFb1-TG/SAL o'i gymharu â'r grwpiau WT/SAL a TGFb1-TG/rhTM (280.5 vs. 384.6 pg/ml) , ac nid oedd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol yn lefel yr atalydd actifadu plasminogen-1 (Ffigur Atodol S8A). Mae lefelau C5a mewn plasma, wrin, ameinwe arennau(630.1 yn erbyn 1075.0 pg/mg o brotein) a'r podocin hydawdd plasma wedi'u gostwng yn sylweddol mewn TGFb1-Llygod TG a gafodd eu trin â rhTM o gymharu â TGFb1-llygod TG a gafodd eu trin â SAL (Ffigur Atodol S8B). Roedd lefel y podocin mewn wrin yn uwch yn y grŵp TGFb1-TG/SAL nag yn y grwpiau WT/SAL a TGFb1-TG/rhTM (Ffigur Atodol S9A–C).

Ffigur 1|Mae'r llygoden trawsgenig (TG) ffactor twf trawsnewidiol dynol b1 (TGFb1) yn datblygu ffibrosis yr arennau cynyddol. (a) Mesurwyd y crynodiadau o brotein TGFb1 mewn plasma ac wrin gan assay imiwnedd ensymau a'r cynnwys hydroxyproline meinwe gan assay lliwimetrig. (b–ch) Cafodd darnau o feinwe arennol eu staenio â (b) asid cyfnodol – Schiff (barrau ¼ 20 mm) a gyda (c,d) trichrome Masson (barrau ¼ 10{{ 40}} mm) ac yna (e,f) wedi'i feintioli gan ddefnyddio system sgorio neu feddalwedd delweddu WinROOF (Mitani Corporation, Tokyo, Japan). Nifer y llygod ar gyfer gwerthuso meinwe'r arennau: ar gyfer llygod math gwyllt (WT), n ¼ 4 yn 4, 12, a 20 wythnos; ar gyfer llygod TG, n ¼ 7 ar 4 wythnos, n ¼ 8 ar 16 wythnos, ac n ¼ 9 yn 20 wythnos oed. Nifer y llygod ar gyfer gwerthuso plasma ac wrin: ar gyfer llygod WT, n ¼ 12 ar 4 wythnos, n ¼ 8 ar 8 wythnos, n ¼ 7 ar 12 wythnos, ac n ¼ 4 yn 16 ac 20 wythnos; ar gyfer llygod TG, n ¼ 24 ar 4 wythnos, n ¼ 17 yn 8 a 12 wythnos, ac n ¼ 9 yn 16 ac 20 wythnos. Mynegir data fel amrediad rhyngchwartel canolrif. Dadansoddiad ystadegol gan brawf Mann-Whitney U. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ****p="">< 0.0001.="" ns,="" ddim="" yn="" arwyddocaol.="" i="" wneud="" y="" gorau="" o'r="" ddelwedd="" hon,="" gweler="" y="" fersiwn="" ar-lein="" o'r="" erthygl="" hon="" yn="">

Ffigur 2|Darganfyddiadau microsgopig electron trawsyrru yn y model ffibrosis arennau a achosir gan ffactor twf trawsnewidiol b1. Perfformiwyd gosod, trin a thynnu'r arennau o lygod fel y disgrifir yn y Dulliau. (a,b) Trawsffurfiad microfilaidd ac (a,b,d,e,g) elifiad proses traed (pennau saethau gwyn) podocytau, (c–e) ffenestriad endothelaidd capilari glomerwlaidd gostyngol (pennau saethau melyn), (f) tewychu'r pilen islawr glomerwlaidd (seren), a (h,i) mwy o ddyddodiad matrics mesangial (saethau gwyn). CL, lwmen capilari. I wneud y gorau o'r ddelwedd hon, gweler y fersiwn ar-lein o'r erthygl hon yn www.kidney-international.org.

mae rhTM yn lleddfu swyddogaeth arennol

Lefelau protein sy'n rhwymo asid brasterog L (197.0 o'i gymharu â 313.4 pg/ ml),moleciwl anaf i'r arennauGostyngwyd 1 (299.9 yn erbyn 596.2 pg/ml), nitrogen wrea gwaed (12.9 vs 34.8 mg/dl), creatinin (0.5 vs. 1.4 mg/ dl), a'r gymhareb albwmin-creatinin yn sylweddol yn TGFb1-Llygod TG â ffibrosis arennol wedi'u trin â rhTM o'u cymharu â'u cymheiriaid TG heb ei drin (Ffigur 5). Gostyngwyd cyfanswm y protein wrin a'r gymhareb creatinin cyfanswm protein mewn llygod TGFb a gafodd eu trin â rhTM o gymharu â'u cymheiriaid heb eu trin (Ffigur 5).

Mae rhTM yn lleihau apoptosis o gelloedd glomerwlaidd

Dangosodd terfynell deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP Nick Labelu staenio nifer sylweddol is o gelloedd apoptotig mewn glomeruli o TGFb1-llygod TG wedi'u trin â rhTM o gymharu â glomeruli o TGFb1- llygod TG wedi'u trin â SAL (Atodol Ffigur S10A a B). Roedd holltiad caspase-3 hefyd wedi'i leihau'n sylweddol mewn meinweoedd arennau o TGFb1-llygod TG a gafodd eu trin â rhTM o gymharu â meinweoedd yr arennau o TGFb1-Llygod TG a gafodd eu trin â SAL (Ffigur Atodol S10C). Mae'rmeinweoedd yr arennauo TGFb1-Llygod TG a gafodd eu trin â rhTM, o'u cymharu â rhai o TGFb1-dangosodd TG a gafodd ei drin â SAL, ddrychiad sylweddol yn lefelau mRNA o lymffoma B-cell 2 (Bcl-2), B -cell lymphoma-extra large (Bcl-XL), atalydd baculoviral o apoptosis sy'n ailgynnwys 5 (BIRC5, a elwir hefyd yn survivin), a BIRC6 (Apollon) gyda chymhareb Bcl-2-Bax uwch (Ffigur Atodol S11) ).

Ffigur 3|Mae gan y llygoden trawsenynnol ffactor twf dynol b1 (TGFb1) drawsgenig (TG) gamweithrediad arennol. (a) Mesurwyd cyfanswm y protein a (b) nitrogen urea gwaed (BUN) trwy ddulliau lliwimetrig a creatinin trwy ddull ensymatig. Nifer y llygod ar gyfer gwerthuso plasma ac wrin: ar gyfer llygod math gwyllt (WT), n ¼ 12 ar 4 wythnos, n=7 yn 8 a 12 wythnos, ac n=4 yn 16 a 2{ {21}} wythnos; ar gyfer llygod TG, n =24 yn 4 wythnos, n=17 yn 8 a 12 wythnos, ac n=9 yn 16 a 20 wythnos. Mynegir data fel canolrif ± amrediad rhyngchwartel. Dadansoddiad ystadegol gan brawf Mann-Whitney U. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ****="" p=""><>

Mae rhTM yn atal apoptosis podocytes

Gostyngodd cyn-driniaeth podocytes â rhTM yn sylweddol apoptosis podocytes a feithrinwyd ym mhresenoldeb TGFb1 fel yr aseswyd gan nifer y celloedd yn y cyfnod subG1 (3.2 y cant o'i gymharu â 5.2 y cant ), terfynell deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labelu - celloedd positif ( 1.0 yn erbyn 5.4 cell/Fifield) a graddau'r holltiad caspase (0.9 vs. 1.1 cymarebau) (Ffigur 6a–e). Dangosodd sgrinio ffactorau gwrthiapoptotig mewn podocytau diwylliedig fod rhTM yn cynyddu mynegiant mRNA y ffactor gwrthiapoptotig Bcl-2 yn sylweddol o gymharu â mynegiant mewn celloedd heb eu trin (Ffigur Atodol S12). Cynyddodd mynegiant mRNA y ffactor gwrthiapoptotig BIRC5 hefyd mewn celloedd a gafodd eu trin â rhTM o gymharu â mynegiant mewn celloedd heb eu trin (Ffigur Atodol S12). Cafodd mynegiant mRNA y ffactor proapoptotig Bax ei leihau'n sylweddol gan driniaeth rhTM o'i gymharu â dim triniaeth (Ffigur Atodol S12). Roedd triniaeth â rhTM hefyd yn llesteirio mynegiant annexin V a staeniad labelu terfynol nick deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP mewn podocytau a feithrinwyd ym mhresenoldeb hydrogen perocsid (Ffigur Atodol S13A–E) ac o dan gyflwr glwcos uchel (Ffigur Atodol S14A–E). ) cadarnhau ymhellach briodwedd gwrthiapoptotig rhTM ar bodosytau. Dangosodd archwiliad o'r llwybr protein gwrthiapoptotig kinase B (Akt)25 fod rhTM yn gwella ffosfforyleiddiad Akt mewn podocytau sylfaenol dynol a feithrinwyd ym mhresenoldeb hydrogen perocsid neu TGFb1 (Ffigur Atodol S15A a B). Yna fe wnaethom ynysu podocytau o bob grŵp o lygod a gwerthuso ffosfforyleiddiad Akt trwy blotio Gorllewinol. Roedd llawer mwy o ffosfforyleiddiad Akt mewn podocytau wedi'u hynysu o'r grŵp TGFb{{3{0}}TG/rhTM o gymharu â podocytau o'r grŵp heb ei drin (cymhareb 1.1 vs. 0.7) (Ffigur Atodol S16A a B).

GPR15 cyfryngu

Nododd astudiaethau blaenorol fod TM yn actifadu llwybrau mewngellol trwy ryngweithio â derbynnydd ffactor twf ffibroblast 1 (FGFR1) aDerbynnydd cypledig G-protein15 (GPR15).26,27 Mae podocytau yn mynegi FGFR128 ond nid yw'n glir a ydynt yn mynegi GPR15. Yma fe wnaethom ynysu podocytau o bob grŵp o lygod a dangos bod podocytau hefyd yn mynegi GPR15 (Ffigur Atodol S17A–E). Canfuom fod podocytes o reolaeth iach a chlaf â glomerwlosclerosis hefyd yn mynegi GPR15 (Ffigur Atodol S18). Er mwyn egluro a yw FGFR1 neu GPR15 yn cyfryngu'r gweithgaredd ataliol RhTM ar apoptosis podocytau, fe wnaethom werthuso gweithgaredd antiapoptotig rhTM mewn podocytau a driniwyd gan TGFb ym mhresenoldeb atalydd FGFR1 neu ar ôl traws-newid y celloedd â RNA ymyriadol bach (siRNA) yn erbyn FGFR1 neu GPR15. Nid oedd rhag-drin podocytes ag atalydd FGFR1 (Ffigur Atodol S19A a B) neu FGFR1 siRNA (13.2 y cant yn erbyn 7.9 y cant) (Ffigur 7a a b) yn gallu diddymu gweithgaredd ataliol rhTM ar apoptosis podocytes. Fodd bynnag, roedd trawsnewid celloedd â siRNA GPR15 yn diddymu gweithgaredd ataliol rhTM yn llwyr (14.6 y cant yn erbyn 13.8 y cant) arapoptosis o podocytes(Ffigur 7a–c).

Ffigur 4|Mae thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn atal glomerulosclerosis a ffibrosis tubulointerstitial. Cafodd rhannau o feinwe arennol eu staenio (a, b) ag asid cyfnodol - Schiff a (c, d) gyda Masson trichrome ac (e) wedyn eu meintioli gan ddefnyddio system sgorio neu feddalwedd delweddu WinROOF. (e) Cymerwyd gwerth cymedrig y grŵp math gwyllt (WT)/heli (SAL) fel 100 y cant . Dadansoddiad ystadegol gan brawf Mann-Whitney U. (dd) Mesurwyd y cynnwys hydroxyprolin meinwe trwy ddull lliwimetrig, crynodiad o golagen I-a1 (Col1a1) a periostin trwy imiwnoassay ensym, a mynegiant mRNA trwy adwaith cadwynol transcriptase-polymerase gwrthdro. Dadansoddiad ystadegol gan Kruskal Wallis dadansoddiad o amrywiant a phrawf Dunn wedi'i gywiro. n=8 ym mhob grŵp. Barrau {{10}} (a,c) 50 mm a (d) 20 mm. Mynegir data fel canolrif ± amrediad rhyngchwartel. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p="">< 0.001,="" ****p="">< 0.0001.="" tg,="" trawsgenig;="" tgfb1,="" trawsnewid="" ffactor="" twf="" b1.="" i="" wneud="" y="" gorau="" o'r="" ddelwedd="" hon,="" gweler="" y="" fersiwn="" ar-lein="" o'r="" erthygl="" hon="" yn="">

Mae rhTM yn atal EMT podocytes

Roedd arwynebedd sylweddol uwch gyda staenio positif ar gyfer podocin ac actin cyhyr a-llyfn (a-SMA) (1.4 y cant o'i gymharu â 11.2 y cant ) mewn llygod TGFb1-TG/SAL o gymharu â TGFb1-TG / rhTM llygod (Ffigur 8a a b). Yna fe wnaethon ni feithrin podocytau dynol cynradd in vitro, rhag-drin â rhTM cyn ychwanegu protein TGFb1 i'r cyfrwng diwylliant. Cafodd morffoleg tebyg i ffibroblast a mynegiant gwell o a-SMA eu hatal mewn podocytau a gafodd eu trin â rhTM o'u cymharu â chelloedd heb eu trin (Ffigur Atodol S20A). Yn ogystal, roedd rhTM yn atal mynegiant mRNA o ffibronectin a vimentin, er ei fod yn gwella mynegiant mRNA o E-cadherin mewn podocytau o'i gymharu â mynegiant mewn celloedd heb eu trin (Ffigur Atodol S20B). Mae aelodau teulu SMAD 2 (Smad2) a Smad3 yn chwarae rhan hanfodol mewn trawsnewid epithelial-mesenchymal (EMT).29 Roedd triniaeth gyda rhTM yn atal actifadu Smad2 a Smad3 mewn llygod TGFb yn sylweddol. o gymharu â llygod TG heb eu trin (Ffigur 8c) ac mewn podocytau dynol sydd wedi'u meithrin ym mhresenoldeb TGFb1 (Ffigur Atodol S20C).29 Mae llygod TG sy'n cael eu trin â rhTM (TGFb1-TG/rhTM) hefyd yn dangos llai o fynegiant o a-SMA (3.7 y cant yn erbyn 17.2 y cant ) mewn celloedd epithelial tiwbaidd o gymharu â'u cymheiriaid heb eu trin (Ffigur Atodol S21A a B).

Ffigur 5|Mae thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn lleddfu anaf i'r arennau a chamweithrediad arennol. Mesurwyd creatinin trwy ddull ensymatig; cyfanswm protein yn ôl dull lliwimetrig; a nitrogen wrea gwaed (BUN) ac albwmin, moleciwl anaf arennau 1 (KIM-1), protein L-rhwymo asid brasterog (L-FABP), a chyfanswm trawsnewid ffactor twf b1 (TGFb1) gan assay imiwnedd ensymau. n=8 ym mhob grŵp. Mynegir data fel amrediad canolrif ± rhyngchwartel. Dadansoddiad ystadegol gan Kruskal-Wallis dadansoddiad o amrywiant a phrawf Dunn heb ei gywiro. *P < {{10}}.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p="">< 0.001,="" ****="" p="">< 0.0001,="" #p="0.06." ns,="" ddim="" yn="" arwyddocaol;="" sal,="" hallt;="" tg,="" trawsgenig;="" wt,="" math="">

Mae GPR15 yn cyfryngu gweithgaredd ataliol rhTM ar EMT

Nid oedd trawsnewid podocytes â siRNA FGFR1 yn gallu diddymu gweithgaredd ataliol rhTM ar fynegiadau mRNA cymharol colagen I-a1 ac a-SMA mewn podocytau wedi'u trin â TGFb (Ffigur Atodol S22). Fodd bynnag, roedd trawsnewid celloedd â siRNA GPR15 yn sylweddol wedi dileu gweithgarwch ataliol rhTM ar ymadroddion mRNA cymharol colagen I-a1 ac a-SMA mewn podocytau wedi'u trin gan TGFb (Ffigur Atodol S22).

TRAFODAETH

TGFb1 ac anafu celloedd glomerwlaidd

Canlyniad cyffredin anhwylderau sy'n achosi CKD yw ffibrosis arennol.8,30,31 TGFb1 yw'r gyrrwr cyffredin o ffibrogenesis yn yr arennau sy'n gysylltiedig â CKD a achosir gan glefydau gan gynnwys DM, gorbwysedd arterial, ac anhwylderau hunanimiwn.10 Celloedd o'r gofodau glomerwlws a thubulointerstitial yn gallu secretu ffurfiau cudd TGFb1 a all, o'i actifadu'n ormodol yn ystod anaf i feinwe, arwain at greithiau arennol.32 Gan y gall TGFb1 ysgogi ei secretiad ei hun, mae'r broses ffibrotig yn gyffredinol yn dod yn gylch dieflig.8 Digwyddiad cynnar ym mhroses bathogenig TGFb 1- wedi'i gyfrynguffibrosis yr arennauyn anaf i bodosytau a chelloedd endothelaidd glomerwlaidd.33–35 Mae lefel plasma hydawdd TM yn arwydd o anaf endothelaidd. Yn gyson â rôl TGFb1 mewn anaf celloedd arennol, canfuom yma gydberthynas sylweddol o TGFb1 gweithredol â TM hydawdd, podocin hydawdd, a creatinin mewn plasma gan gleifion â DM. Crosstalk rhwng celloedd endothelaidd glomerwlaidd a podocytes yn ystod aanaf arennolyn arwain at fynegiant lleol o broteasau sy'n achosi diraddiad pilen islawr glomerwlaidd.34–36 Gall hyn esbonio'r modd y caiff podocin hydawdd ei ganfod a'i gydberthynas arwyddocaol â TM hydawdd mewn cleifion â DM.

Ffigur 6|Mae thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn atal apoptosis podocytes a achosir gan drawsnewid ffactor twf b1 (TGFb1). (a) ychwanegwyd rhTM at gyfrwng meithrin podocytau 1 awr cyn ysgogi apoptosis gydag 10 ng/ml TGFb1 am 48 awr. (b) Cafodd canran y celloedd yn y cyfnod subG1 ei ganfod gan gyd-cytometreg. (a,b) n=3 ym mhob grŵp. (c,d) Mesurwyd nifer y celloedd â darniad DNA gan ddadansoddiad terfynell deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-labelu (TUNEL) (n=3 mewn grwpiau halwynog [SAL]/SAL a rhTM/SAL; n=6 mewn grwpiau SAL/TGFb1 a rhTM/TGFb1), a (e) mesurwyd gradd holltiad caspase gan blotio Gorllewinol (n=4 ym mhob grŵp). Barrau=100 mm. Mynegir data fel canolrif ± amrediad rhyngchwartel. Dadansoddiad ystadegol gan brawf Mann-Whitney U. *P < 0.05.="" dapi,="" 40="" ,6-diamidino-2-ffenylindole;="" hpf,="" maes="" pŵer="" uchel;="" ns,="" ddim="" yn="" arwyddocaol.="" mae="" histogramau'n="" cael="" eu="" harddangos="" fel="" canran="" uchafswm="" (canran="" o'r="" gwerth="" mwyaf),="" gan="" raddio="" pob="" cromlin="" i="" fodd="100" y="" cant="" .="" i="" wneud="" y="" gorau="" o'r="" ddelwedd="" hon,="" gweler="" y="" fersiwn="" ar-lein="" o'r="" erthygl="" hon="" yn="">

Ffibrosis aren sy'n gysylltiedig â gorfynegiant dynol TGFb1 sy'n benodol i podocyt

Byddai cyffur a all wrthweithio effaith TGFb1 yn ddelfrydol i rwystro ffibrosis arennol. Yma rydym wedi cynhyrchu llygoden TG sy'n gorfynegi'r genyn TGFb1 dynol yn y glomerwlws sy'n datblygu sglerosis glomerwlaidd digymell a chynyddol a ffibrosis tubulointerstitial gyda methiant arennol mor gynnar â 4 wythnos ar ôl genedigaeth. Mae'r model yn dangos glomerwlopathi datblygedig gydag anaf i podocytes a chelloedd endothelaidd glomerwlaidd; tewhau pilen islawr glomerwlaidd ac ehangiad mesangial gyda chreithiau interstitial; mwy o arwyddion o anaf i feinwe'r arennau a chamweithrediad arennol; a mwy o TGFb1 mewn plasma,meinwe arennol, ac wrin. Mae'n bosibl y bydd y cynnydd mewn ysgarthiad wrinol o broteinau, TGFb1, ac actifadu'r system ategu yn esbonio datblygiad cydamserol creithio rhyng-ranol yn ein model presennol.37–40 Datgelodd arbrofion pellach gynnydd mewn celloedd apoptotig ac actifadu proteinau Smad ym meinwe'r arennau o TGFb heb ei drin{ {3}}Llygod TG o gymharu â llygod WT. Ar y cyfan, mae'r canfyddiadau hyn yn tynnu sylw at y llygoden TGFb newydd hon fel model addas ar gyfer darganfod cyffuriau ynddoffibrosis yr arennau.

Ffigur 7|Mae derbynnydd cypledig G-protein (GPR15) yn cyfryngu ataliad o thrombomodulin dynol ailgyfunol apoptosis (rhTM) mewn podocytau. Trawsnewidiwyd celloedd podocyte cynradd dynol â derbynnydd ffactor twf ffibroblast 1 (FGFR1) RNA ymyrryd bach (siRNA), GPR15 siRNA, neu siRNA wedi'i sgramblo am 48 awr, ac yna ychwanegwyd rhTM at y diwylliant celloedd 1 awr cyn ei drin â thrawsnewid ffactor twf b1 (TGFb1). Cafodd celloedd apoptotig eu (a) eu hasesu gan gyd-gytometreg ac (b) wedyn eu meintioli. (c) Paratowyd lysates cell ar gyfer blotio gorllewinol. n{{10}} ym mhob grŵp. Mynegir data fel canolrif ± amrediad rhyngchwartel. Dadansoddiad ystadegol gan brawf Mann-Whitney U. *P < 0.05,="" #p="0.1." sal,="">

Ffigur 8|Atal pontio epithelial-mesenchymal gan thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM). (a) Cafodd podocin ac actin cyhyr a-llyfn (a-SMA) eu staenio fel y disgrifir yn y Dulliau. (b) Cafodd yr ardal bositif ar gyfer staenio SMA ei fesur gan feddalwedd prosesu delweddau WinROOF. n=3 mewn grwpiau math gwyllt (WT)/heli (SAL) a WT/rhTM ac n=5 yntrawsnewid ffactor twf-b1-trawsgenig(TGFb{{{{{{{{{}}}}TG))/SAL a TGFb1-TG/rhTM grwpiau. (c) Cyfanswm (t) a phosphorylated (p) proteinau aelod o'r teulu SMAD (Smad) eu gwerthuso gan blotio Gorllewinol. n=8 ym mhob grŵp. Mynegir data fel canolrif ± amrediad rhyngchwartel. Dadansoddiad ystadegol gan ddadansoddiad Kruskal-Wallis o amrywiant a phrawf Dunn wedi'i gywiro. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p="">< 0.001,="" #p="0.08." i="" wneud="" y="" gorau="" o'r="" ddelwedd="" hon,="" gweler="" y="" fersiwn="" ar-lein="" o'r="" erthygl="" hon="" yn="">

Mae rhTM yn lleddfu ffibrosis yr arennau

Rydym wedi dangos bod rhTM yn lleddfu ffibrosis pwlmonaidd a ddatblygwyd mewn llygod sy'n gorfynegi TGFb1 dynol yn yr ysgyfaint trwy atal apoptosis celloedd epithelial alfeolaidd.41 Mae treialon clinigol hefyd wedi dangos gwelliant mewn ffibrosis idiopathig yr ysgyfaint ar ôl triniaeth rhTM.42,43 Mae'r arsylwadau blaenorol hyn yn awgrymu potensial rhTM ar gyfer therapi ffibrosis organ. Roeddem yn rhagdybio y byddai rhTM yn effeithiol mewn ffibrosis arennau cysylltiedig â TGFb. I brofi'r ddamcaniaeth hon, buom yn trin llygod TGFb sy'n benodol i'r arennau â rhTM.44 Gweinyddu rhTM am 4 wythnos anaf gwanhau'n sylweddol, camweithrediad, a ffibrosis yr arennau. Roedd llygod a gafodd eu trin â rhTM yn dangos lefelau wrinol isel o gyfanswm protein, albwmin, TGFb1, C5a, a lefelau arennol is o cytocinau probrotig, C5a a HMGB1.45 Roedd therapi gyda rhTM hefyd yn atal apoptosis ac EMT o podocytau. Fodd bynnag, ni chafodd rhTM unrhyw effaith ar gymhleth antithrombin thrombin, marciwr actifadu ceulo, er iddo gynyddu'r genhedlaeth o APC, ffactor gwrthgeulo gyda gweithgaredd gwrthlidiol a gwrth-apoptotig.23 Mae'n werth nodi y gallai thrombin, yr ensym procoagulant, yn baradocsaidd hyrwyddo gwrth-geulo o dan gyflyrau prothrombotig gradd isel trwy ffurfio'r cyfadeilad TM / thrombin, sy'n cynyddu cynhyrchu'r APC gwrthgeulydd. Fodd bynnag, mae thrombin yn gweithio'n bennaf fel procoagulant o dan gyflyrau prothrombotig gormodol (ee, sepsis).46 Gall effaith ddeuol a pharadocsaidd thrombin esbonio aneffeithiolrwydd ymddangosiadol rhTM i atal actifadu ceulo yn ein model, sydd mewn cyflwr prothrombotig gradd isel. . At ei gilydd, mae'r arsylwadau hyn yn awgrymu bod ffibrosis graddedig rhTM amelio a chamweithrediad yarennautrwy ymestyn goroesiad neu atal EMT celloedd glomerwlaidd a thrwy atal llid, actifadu ategol, a gweithgaredd ffactor twf yn uniongyrchol neu'n anuniongyrchol trwy actifadu llwybr protein C a lleihau mynegiant HMGB1. Gwelliant neffropathi diabetig mewn llygod gyda mwy o barth tebyg i lectin TM sy'n cylchredeg a dirywiad mewn afiechyd mewn llygod heb y parth tebyg i lectin cefnogi effaith fuddiol rhTM ar ffibrosis arennol.20,21

Atal apoptosis podocyte

Mae podocytau yn chwarae rhan hanfodol wrth gynnal y rhwystr hidlo glomerwlaidd a ffurfio'r diaffram hollt i atal colli proteinau cylchredol hanfodol.47Anaf arennola achosir gan rywogaethau ocsigen adweithiol, glwcos uchel, neu gyfryngwyr llidiol gan gynnwys TGFb1 yn achosi apoptosis o podocytau sy'n arwain at ddisbyddiad podocyte a allai achosi camweithrediad arennol yn y pen draw.47 Ar ôl rhwymo ac actifadu'r serine / threonine kinase transmembrane heteromeric math I a chymhleth derbynnydd math II , mae TGFb1 yn allyrru signalau mewngellol trwy'r teulu Smad o ffactorau trawsgrifio neu drwy lwybrau signalau annibynnol ar Smad.48 Mae'r llwybr sy'n dibynnu ar Smad yn cychwyn. Mae cyfadeilad Smad3/Smad4 yn ysgogi trawsgrifio ffactorau proapoptotig ac yn lleihau ffactorau gwrthiapoptotig sy'n arwain at apoptosis celloedd.49 Yn gyson â hyn, canfuom lefel arennol uchel y ffactor proapoptotig Bax a lefel isel o'r ffactorau gwrthiapoptotig Bcl2 a Bcl-XL mewn llygod TGFb1- TG. Gall TM atal apoptosis o wahanol fathau o gelloedd.21,41,49 Yn gyson â hyn, yma canfuom fod rhTM yn atal apoptosis o podocytau a achosir gan hydrogen perocsid, glwcos uchel, neu TGFb1, a gall y canfyddiad hwn esbonio effaith fuddiol rhTM yn CKD . Yn ogystal, gogwyddodd rhTM y cydbwysedd tuag at atal apoptosis trwy leihau mynegiant Bax, trwy gynyddu mynegiant Bcl2, Bcl-XL, BIRC5, a BIRC6, a thrwy gynyddu actifadu llwybr Akt ynmeinweoedd yr arennau. Yn gyffredinol, mae'r arsylwadau hyn yn awgrymu bod rhTM yn ysgogi goroesiad podocyte trwy ffafrio actifadu Akt a mynegiant ffactor gwrthiapoptotig.

cistanche ar gyfer clefyd cronig yn yr arennau

Atal EMT

Mae EMT podocytes hefyd yn cyfrannu at ffibrosis arennol. Mae podocytau sy'n cael EMT yn rhyddhau proteinau matrics allgellog sy'n cronni ac yn dyddodi yn ystod ffibrogenesis arennol cysylltiedig TGFb.50 Mae TGFb1 yn hyrwyddo EMT trwy actifadu cyfadeilad Smad2/Smad3/Smad4 wedi'i gyfryngu gan dderbynnydd. Mae Smad3 ffosfforylaidd yn hyrwyddo EMT trwy ysgogi trawsgrifio proteinau matrics a thrwy leihau mynegiant marcwyr epithelial.51 Yn gyson â hyn, canfuwyd cynnydd yn EMT podocytes mewn TGFb1-llygod TG a podocytau wedi'u meithrin ym mhresenoldeb TGFb1 neu lai. cyflyrau ocsidydd neu glwcos uchel. Roedd adroddiadau blaenorol yn awgrymu bod rhTM yn atal EMT.52,53 Yma canfuom fod rhTM yn atal EMT podocytes a chelloedd epithelial tubulointerstitial mewn llygod TGFb1-TG. Mae'n ymddangos mai atal actifadu protein Smad yw mecanwaith effaith fuddiol rhTM ar EMT oherwydd bod llygod TGFb a podocytau cynradd a gafodd eu trin â rhTM yn darlunio ffosfforyleiddiad Smad2 a Smad3 yn sylweddol is o gymharu â chyflyrau heb eu trin. Mae'r canfyddiadau hyn yn cefnogi gweithgaredd ataliol TM ar EMT.

Cyfryngu derbynnydd mewn gweithgaredd amddiffynnol rhTM

Mae astudiaethau blaenorol wedi dangos bod GPR15 neu FGFR1 yn cyfryngu gweithgaredd cytoprotective TM.26,27,54 Rydym wedi profi a yw'r derbynyddion hyn yn cyfryngu gweithgaredd amddiffynnol rhTM yn erbyn apoptosis ac EMT. Er bod is-reoleiddio protein GPR15 gan siRNA wedi diddymu gweithgaredd ataliol rhTM yn gyfan gwbl ar TGFb1-apoptosis cyfryngol o podocytes, ni chafodd siRNA FGFR1 na'i atalydd ei ddiddymu, gan awgrymu bod GPR15 yn cyfryngu'r gweithgaredd amddiffynnol rhTM. Roedd ffosfforyleiddiad gwell o Akt mewn podocytau diwylliedig a podocytau wedi'u hynysu o lygod TGFb ar ôl triniaeth gyda rhTM, sy'n awgrymu bod y llwybr Akt mewngellol yn cymryd rhan. Mae gwaith sy'n dangos bod rhTM yn actifadu llwybr Akt mewn celloedd endothelaidd yn cefnogi'r canfyddiad hwn.55 Gall gweithredu llwybr signalau Akt gryfhau'r effaith rhTM ymhellach trwy gynyddu mynegiant arwyneb GPR15.56 Mae'r arsylwadau hyn yn dangos bod rhTM yn amddiffyn podocytau rhag apoptosis yn ein TGFb{ {13}}Llygod TG trwy actifadu echelin GPR15/Akt gan arwain at fynegiant gwell o ffactorau gwrth-apoptotig a mynegiant llai o ffactorau proapoptotig.57 Ar y llaw arall, dangosodd astudiaethau blaenorol y gallai anaffylatocsinau C3a a C5a trwy eu GPRs gyfrannu at CKD trwy anafu podocytau ac y gallai APC atal apoptosis podocyte a ffibrosis yr arennau trwy ei dderbynnydd protein C endothelaidd a derbynnydd a weithredir gan broteas 1.23,58-61 Yma, canfuom fod rhTM yn atal y system gyflenwi ac yn cynyddu'r cynhyrchiad APC. Felly, ar wahân i actifadu’r llwybr GPR15/Akt, gall atal ffactorau ategu a mwy o actifadu protein C a’i dderbynyddion hefyd esbonio effeithiau buddiol rhTM yn ein TGFb{{1-cysylltiedig).model ffibrosis yr arennau.

Yn ogystal, roedd is-reoleiddio GPR15 ond nid FGFR1 yn rhwystro effaith ataliol rhTM ar EMT, gan awgrymu bod GPR15 hefyd yn cyfryngu'r gweithgaredd amddiffynnol rhTM hwn. Mae atal proteinau Smad yn gysylltiedig ag ataliad EMT oherwydd bod triniaeth gyda rhTM yn atal ffosfforyleiddiad Smad2 a Smad3 mewn llygod TG a podocytau diwylliedig TGFb. Fodd bynnag, nid yw union fecanwaith ataliad protein Smad trwy GPR15 yn glir. Mae rhywfaint o dystiolaeth yn dangos y gall llwybr Akt groes-siarad â llwybr signalau Smad a'i reoleiddio,62-64 ac y gall Akt atal ffosfforyleiddiad Smad3 trwy ryngweithio'n uniongyrchol â Smad3 heb ei ffosfforyleiddio i'w atafaelu y tu allan i'r cnewyllyn gan arwain at atal trawsgrifio ac EMT.62- 64 Yn seiliedig ar yr adroddiadau hyn, mae'n bosibl i Akt actifadu ar ôl rhwymo rhTM i atafaelwyr GPR15 Smad3 heb ffosfforyleiddiad gan arwain at ataliad EMT podocyte. Mae'n werth nodi mai dim ond mewn celloedd anfalaen y gwelir yr effaith fuddiol hon wedi'i chyfryngu gan Akt.65-67 Mewn celloedd malaen, gall rhyngweithio TGFb1 â'i dderbynyddion actifadu'r llwybr ffosffoinositid 3-kinase/Akt/Snail) yn uniongyrchol ac achosi EMT.65–67 At ei gilydd, mae canlyniadau ein hastudiaeth yn cefnogi rôl GPR15 fel y derbynnydd sy'n cyfryngu effeithiau buddiol rhTM ar bodosytau.

Casgliad

I grynhoi, yma rydym yn adrodd am y tro cyntaf ar lygoden TG drawsgenig newydd sy'n gorfynegi hyd llawn genyn TGFb1 dynol yn benodol mewn glomeruli sy'n datblygu sglerosis glomerwlaidd digymell a chynyddol, ffibrosis tubulointerstitial amethiant arennol, a gwella ffibrosis yr arennau sefydledig/methiant arennol trwy ryngweithio RhTM â GPR15 sy'n atal apoptosis a thrawsnewidiad mesenchymal podocytau.

DULLIAU

Cynhyrchu llygoden TGFb1 BAC TG

TGFb{0}}Cynhyrchwyd llygoden BAC-TG sy'n mynegi'r genyn TGFb1 dynol hyd llawn o dan reolaeth hyrwyddwr podocin llygoden trwy chwistrelliad proniwclear i embryonau llygoden 392 C57BL/6J (CLEA Japan, Inc., Tokyo, Japan). Aseswyd sylfaenwyr TG a thrawsyriant germline o luniad TG BAC trwy blotio deheuol (Deunyddiau a Dulliau Atodol).

Anifeiliaid arbrofol

Cafodd y llygod TGFb{0}}TG eu bridio am fwy na 10 cenhedlaeth o dan gefndir C57BL/6 cyn eu defnyddio yn yr arbrofion. Defnyddiwyd sbwriel WT fel yr anifeiliaid rheoli. Roedd yr holl anifeiliaid yn cael eu cynnal mewn amgylchedd penodol heb bathogen ac yn destun cylch golau-tywyll o 12-awr ar dymheredd a lleithder amgylchynol yn amrywio rhwng 22 gradd a 26 gradd a 40 y cant a 70 y cant, a chyda mynediad ad libitum i fwyd a dŵr yn nhŷ anifeiliaid Prifysgol Mie (Deunyddiau a Dulliau Atodol).

Datganiad moesegol

Y Pwyllgor Diogelwch Arbrawf DNA Ailgyfunol (rhif cymeradwyo. I-629; dyddiad: Medi 19, 2013) a'r Pwyllgor ar Ymchwilio i Anifeiliaid ym Mhrifysgol Mie (rhif cymeradwyo. 27-4; dyddiad: Awst 19, 2015) cymeradwyo protocolau'r astudiaeth. Perfformiwyd yr holl weithdrefnau anifeiliaid yn unol â chanllawiau sefydliadol Prifysgol Mie ac yn dilyn yr egwyddorion gofal anifeiliaid labordy a gymeradwywyd yn rhyngwladol a gyhoeddwyd gan y Sefydliad Cenedlaethol dros Iechyd (https://olaw.nih.gov/).

Ar gyfer yr ymchwiliad clinigol, rhoddwyd caniatâd gwybodus ysgrifenedig gan bob claf a phwnc iach, a chymeradwywyd protocol yr astudiaeth gan y Pwyllgor Moeseg ar gyfer Ymchwiliad Clinigol i Brifysgol Mie (cymeradwyaeth rhifau 1043 a 2194).

Dyluniad arbrofol

Am nodweddu yarenmodel ffibrosis, fe wnaethom ddyrannu TGFb gwrywaidd{{{= 24}}llygod TG (n=24) a llygod WT gwrywaidd (n=12) 4 wythnos oed ac yn pwyso 20 i 23 g i mewn i 3 grwpiau gydag 8 llygod TGF b1-TG a 4 llygod WT ym mhob grŵp. Cafodd llygod o bob grŵp WT a TGFb1-TG eu ewthaneiddio ar wythnosau 0, 8, neu 16 i gasglu samplau o wrin, gwaed ac arennau ar gyfer asesu newidiadau mewn paramedrau ffibrosis a swyddogaeth arennol dros amser.

Er mwyn gwerthuso effeithiolrwydd therapiwtig rhTM (darparwyd rhTM yn garedig gan Asahi Kasei Pharma Corporation, Tokyo, Japan) mewn ffibrosis arennol, llygod TGFb{0}TG (n= 8) neu sbwriel WT (n {{2}) }}) yn cael eu trin â rhTM (3 mg/kg) trwy chwistrelliad ip, 3 gwaith yr wythnos yn ystod y 4 wythnos cyn i'r llygod gael eu lladd. TGFb1-Defnyddiwyd llygod TG (n =8) neu sbwriel WT (n= 8) ​​sy'n derbyn swm cyfartal o SAL ffisiolegol trwy chwistrelliad ip fel llygod rheoli negyddol.

Roedd protocol yr astudiaeth bresennol yn dilyn canllawiau Ymchwil Anifeiliaid: Adrodd ar Arbrofion In Vivo (ARRIVE) ar gyfer ymchwilio i anifeiliaid. Cafodd llygod eu rhoi ar hap, a chafodd ymchwilwyr a fesurodd baramedrau eu dallu i grwpiau triniaeth.

Dadansoddiad biocemegol

Y crynodiadau o gyfanswm protein (pecyn assay protein BCA; Pierce, Rockford, IL), TGFb1 (System Ymchwil a Datblygu, Minneapolis, MN), protein cemoattractant monocyte-1 (BD Biosciences Pharmingen, San Diego, CA), cymhleth antithrombin thrombin (Mesurwyd Cedarlane Laboratories, Hornby, Ontario, Canada) gan ddefnyddio citiau imiwnoassay ensymau masnachol yn dilyn cyfarwyddiadau'r gwneuthurwr (Deunyddiau a Dulliau Atodol).

Diwylliant celloedd

Prynwyd y celloedd cynradd podocyt dynol gan CELPR OGEN (Torrance, CA). Cafodd celloedd cynradd podocyt dynol eu meithrin yng nghyfrwng Eagle wedi'i addasu ag Dulbecco mewn awyrgylch CO2 llaith, 5 y cant ar 37 gradd . Ategwyd y cyfrwng â serwm buchol ffetws anweithredol 10 y cant (Bio Whittaker, Walkersville, MD), penisilin 100 IU/ml, streptomycin 100 mg/ml, a L-glutamin (Deunyddiau a Dulliau Atodol).

Dadansoddiad ystadegol

Mynegir data fel amrediad canolrif ± rhyngchwartel. Cyfrifwyd y gwahaniaeth ystadegol rhwng newidynnau gan ddadansoddiad Kruskal-Wallis o amrywiant gyda dadansoddiad post hoc gan ddefnyddio prawf Dunn. Defnyddiwyd prawf Mann-Whitney U i werthuso gwahaniaethau rhwng 2 grŵp. Gwnaethpwyd dadansoddiadau ystadegol gan ddefnyddio fersiwn GraphPad Prism 8.0.1 (GraphPad Software, San Diego, CA). Ystyriwyd arwyddocâd ystadegol fel P <>

DATGUDDIAD

Mae gan ECG, CND-G, a YY batent ar y llygoden TGFb1-TG gydaffibrosis arennola ddefnyddir yn yr astudiaeth bresennol. Derbyniodd CND-G a YY grant gan Weinyddiaeth Addysg, Diwylliant, Chwaraeon, Gwyddoniaeth a Thechnoleg Japan ar gyfer yr astudiaeth bresennol. Derbyniodd ECG, TY, CND-G, a MT grant gan Shionogi Pharmaceuticals. Ni ddatganodd yr holl awduron eraill unrhyw fuddiannau cystadleuol.

DIOLCHIADAU

Cefnogwyd yr ymchwil hwn yn rhannol gan grantiau gan Weinyddiaeth Addysg, Diwylliant, Chwaraeon, Gwyddoniaeth a Thechnoleg Japan (Kakenhi rhif. 17K09824 ar gyfer YY; Kakenhi rhif 17K08442 ar gyfer CND-G), ac yn rhannol gan grant gan Shionogi & Co, Ltd, Japan. Nid oedd gan y cyllidwyr unrhyw rôl mewn dylunio astudiaeth, dadansoddi data, penderfyniad i gyhoeddi, neu baratoi'r llawysgrif.

Cyhoeddwyd rhan o'r gwaith hwn ar ffurf haniaethol.

CYFRANIADAU AWDUR

Paratôdd AT y model clefyd ac ysgrifennodd ddrafft cyntaf y llawysgrif. Paratôdd TY, KN, TT, RI, a CND-G y modelau clefyd a pharamedrau mesuredig. Perfformiodd AM a SW yr astudiaeth ficrosgopig trawsyrru. Mesurodd MT, YO, ac AU baramedrau a pherfformio'r arbrofion in vitro. Darparodd YT, LQ, TK, a VFD gyfraniadau deallusol. Cywirodd YY ac ECG ddrafft y llawysgrif a dylunio'r astudiaeth.

cistanche ar gyfer symptomau methiant yr arennau

DEUNYDD ATODOL

Ffeil Atodol (PDF) Deunyddiau a Dulliau Atodol.

Tabl S1. Nodweddion y pynciau.

Tabl S2. Preimio ar gyfer RT-PCR o feinweoedd llygoden.

Tabl S3. Preimio ar gyfer RT-PCR o bodosytau dynol.

Ffigur S1. Mae darnau thrombomodulin hydawdd yn cydberthyn â TGFb1 a creatinin mewn cleifion â DM.

Ffigur S2. TGFb1 dynol – lluniad cromosom artiffisial bacteriol (BAC). Ffigur S3. Llygod sylfaenydd yn mynegi hyd llawn genyn TGFb1 dynol.

Ffigur S4. Nodweddu llygoden trawsenynnol ffactor twf b1 trawsenynnol sy'n benodol i glomerwlws.

Ffigur S5. Mae llygoden drawsenynnol TGFb1 dynol wedi cynyddu marcwyr anaf i'r arennau.

Ffigur S6. Mae therapi â thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn lleihau elifiad proses traed podocytes a thewychu pilen glomerwlaidd islawr.

Ffigur S7. Mae gan lygod trawsenynnol TGFb1 sy'n cael eu trin â thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) grynodiad isel o ffactorau probrotig a HMGB1 mewn meinwe arennol. Ffigur S8. Mae therapi â thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn cynyddu'r cynhyrchiad o brotein wedi'i actifadu C, yn atal y system ategu, yn lleihau podocin hydawdd sy'n cylchredeg, er nad yw'n cael unrhyw effaith ar y system geulo mewn llygod trawsgenig TGFb1.

Ffigur S9. Mae therapi â thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn lleihau'r crynodiad wrin o podocin.

Ffigur S10. Mae therapi â thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn lleihau apoptosis o gelloedd glomerwlaidd.

Ffigur S11. Mae trin ffibrosis yr arennau sy'n gysylltiedig â gorfynegiant TGFb â thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn atal apoptosis mewn meinwe arennol.

Ffigur S12. Mae thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn cynyddu mynegiant ffactorau gwrthiapoptotig mewn podocytau.

Ffigur S13. Mae thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn atal apoptosis o bodosytau a achosir gan hydrogen perocsid.

Ffigur S14. Mae thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn atal apoptosis o bodosytau a achosir gan lefelau glwcos uchel.

Ffigur S15. Mae thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn cynyddu gweithrediad y llwybrau Akt mewn podocytau.

Ffigur S16. Mae therapi gyda thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn cynyddu ffosfforyleiddiad Akt mewn podocytau o lygod TGFb1-TG.

Ffigur S17. Mae podocytau o bob grŵp triniaeth o lygod yn mynegi GPR15 mRNA.

Ffigur S18. Staenio GPR15 mewn podocytau gan unigolyn iach a chlaf â glomerwlosclerosis segmentol ffocal.

Ffigur S19. Nid yw derbynnydd ffactor twf ffibroblast-1 yn ymwneud â gweithgarwch ataliol thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) mewn podocytau.

Ffigur S20. Mae thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn atal y trawsnewidiad epithelial-mesenchymal o podocytau.

Ffigur S21. Mae therapi â thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) yn atal mynegiant cyhyr actin llyfn mewn tiwbiau arennol.

Ffigur S22. Mae derbynnydd cypledig G-protein (GPR15) yn cyfryngu gweithgaredd ataliol thrombomodulin dynol ailgyfunol (rhTM) ar y trawsnewid epithelial-mesenchymal o podocytes.

Cyfeiriadau Atodol.

CYFEIRIADAU

1. Webster AC, Nagler EV, Morton RL, et al. Clefyd cronig yn yr arennau. Lancet. 2017; 389: 1238-1252.

2. Bello AK, Levin A, Tonelli M, et al. Asesiad o statws gofal iechyd yr arennau byd-eang. JAMA. 2017; 317: 1864-1881.

3. Levin A, Tonelli M, Bonventre J, et al. Iechyd yr arennau byd-eang 2017 a thu hwnt: map ffordd ar gyfer cau bylchau mewn gofal, ymchwil a pholisi. Lancet. 2017; 390: 1888-1917.

4. Ackland P. Nifer yr achosion, canfod, gwerthuso a rheoli clefyd cronig yn yr arennau. BMJ. 2014; 348:f7688.

5. Turner JM, Bauer C, Abramowitz MK, et al. Trin clefyd cronig yn yr arennau. Arennau Int. 2012; 81:351–362.

6. Breyer MD, Susztak K. Y genhedlaeth nesaf o therapiwteg ar gyfer clefyd cronig yn yr arennau. Nat Parch Drug Discov. 2016; 15:568–588.

7. Liu Y. Ffibrosis arennol: mewnwelediadau newydd i'r pathogenesis a therapiwteg. Arennau Int. 2006; 69: 213-217.

8. Liu Y. Mecanweithiau cellog a moleciwlaidd ffibrosis arennol. Nat Parch Nephrol. 2011; 7: 684-696.

9. Xavier S, Vasko R, Matsumoto K, et al. Mae cwtogi ar signalau TGF-beta endothelaidd yn ddigon i leihau trawsnewid endothelaidd-mesenchymal a ffibrosis mewn CKD. J Am Soc Nephrol. 2015; 26: 817-829.

10. Higgins SP, Tang Y, Higgins CE, et al. Signalau TGF-beta1/p53 mewn ffibrogenesis arennol. Arwydd Cell. 2018; 43:1-10.

11. Conway EM. Thrombomodulin a'i rôl mewn llid. Immunopathol Semin. 2012; 34: 107-125.

12. Martin FA, Murphy RP, Cummins PM. Thrombomodulin a'r endotheliwm fasgwlaidd: cipolwg ar agweddau swyddogaethol, rheoleiddiol a therapiwtig. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2013; 304:H1585–H1597.

13. Mae Morser J. Thrombomodulin yn cysylltu ceulo â llid ac imiwnedd. Targedau Cyffuriau Curr. 2012; 13:421–431.

14. Roeen Z, Toda M, D'Alessandro-Gabazza CN, et al. Mae thrombomodulin yn atal actifadu eosinoffiliau a chelloedd mast. Cell Immunol. 2015; 293:34-40.

15. Takagi T, Taguchi O, Toda M, et al. Mae atal asthma bronciol alergaidd gan thrombomodulin yn cael ei gyfryngu gan gelloedd dendritig. Am J Respir Crit Care Med. 2011; 183:31-42.

16. Tateishi K, Imaoka M, Matsushita M. Swyddogaethau modiwleiddio deuol thrombomodulin yn y llwybr ategol amgen. Tueddiadau Biosci. 2016; 10:231–234.

17. Toda M, D'Alessandro-Gabazza CN, Takagi T, et al. Mae thrombomodulin yn modiwleiddio celloedd dendritig trwy elyniaeth grŵp symudedd uchel protein B1 a mecanwaith annibynnol. Allergol Int. 2014; 63:57-66.

18. Van de Wouwer M, Plaisance S, De Vriese A, et al. Mae parth thrombomodulin tebyg i lectin yn ymyrryd ag actifadu cyflenwad ac yn amddiffyn rhag arthritis. J Thromb Haemost. 2006; 4: 1813-1824.

19. Sharfuddin AA, Sandoval RM, Berg DT, et al. Mae thrombomodulin hydawdd yn amddiffyn arennau isgemig. J Am Soc Nephrol. 2009; 20: 524-534.

20. Wang H, Vinnikov I, Shahzad K, et al. Mae parth thrombomodulin tebyg i lectin yn lleddfu glomerwlopathi diabetig trwy ataliad cyflenwad. Thromb Haemost. 2012; 108: 1141-1153.

21. Yang SM, Ka SM, Wu HL, et al. Mae parth thrombomodulin 1 yn lleddfu neffropathi diabetig mewn llygod trwy lid gwrth-NF-kappaB/NLRP3 wedi'i gyfryngu â llid, gwella gweithgaredd gwrthocsidiol NRF2, ac atal apoptosis. Diabetoleg. 2014; 57:424–434.

22. Ohlin AK, Larsson K, Hansson M. Gweithgaredd thrombomodulin hydawdd ac antigen thrombomodulin hydawdd mewn plasma. J Thromb Haemost. 2005;3: 976–982.

23. Gil-Bernabe P, D'Alessandro-Gabazza CN, Toda M, et al. Mae protein C wedi'i actifadu alldarddol yn atal dilyniant neffropathi diabetig. J Thromb Haemost. 2012; 10:337–346.

24. Yasuma T, Yano Y, D'Alessandro-Gabazza CN, et al. Gwellhad o ddiabetes gan brotein S. Diabetes. 2016; 65: 1940-1951.

25. Havasi A, Borkan SC. Apoptosis ac anaf acíwt i'r arennau. Arennau Int. 2011; 80:29-40.

26. Kuo CH, Sung MC, Chen PK, et al. Mae FGFR1 yn cyfryngu angiogenesis thrombomodulin ailgyfunol a achosir gan barth. Cardiovasc Res. 2015; 105: 107-117.

27. Pan B, Wang X, Kojima S, et al. Mae'r pumed rhanbarth ffactor twf epidermaidd o thrombomodulin yn lliniaru sepsis a achosir gan LPS trwy ryngweithio â GPR15. Thromb Haemost. 2017; 117:570-579.

28. Lu Y, Ye Y, Bao W, et al. Adnabod genom-eang genynnau sy'n hanfodol ar gyfer sytosgerbydau podocyte yn seiliedig ar ddilyniant RNA ungell. Arennau Int. 2017; 92: 1119-1129.

29. Vigolo E, Marko L, Hinze C, et al. Mae signalau BMP canonaidd mewn celloedd tiwbaidd yn cyfryngu adferiad ar ôl anaf acíwt i'r arennau. Arennau Int. 2019; 95: 108-122.

30. Nangaku M. Hypocsia cronig ac anaf tubulointerstitial: llwybr cyffredin terfynol i fethiant arennol cam olaf. J Am Soc Nephrol. 2006;17:17–25.

31. Thomas R, Kanso A, Sedor JR. Clefyd cronig yn yr arennau a'i gymhlethdodau. Gofal Cychwynnol. 2008; 35:329–344, vii.

32. Mozes MM, Bottinger EP, Jacot TA, et al. Mynegiant arennol o broteinau matrics ffibrotig a thrawsnewid isoformau ffactor twf-beta (TGF-beta) mewn llygod trawsgenig TGF-beta. J Am Soc Nephrol. 1999; 10:271-280.

33. Arif E, Solanki AK, Srivastava P, et al. Mae'r protein modur Myo1c yn rheoleiddio trawsnewid ffactor twf-beta-signalau a ffibrosis mewn podocytes. Arennau Int. 2019; 96: 139-158.

34. Ebefors K, Wiener RJ, Yu L, et al. Mae derbynnydd endothelin-A yn cyfryngu diraddio'r haen arwyneb endothelaidd glomerwlaidd trwy groessiarad patholegol rhwng podocytau actifedig a chelloedd endothelaidd glomerwlaidd. Arennau Int. 2019; 96: 957-970.

35. Fu J, Lee K, Chuang PY, et al. Anaf celloedd endothelaidd glomerwlaidd a thraws-siarad mewn clefyd diabetig yr arennau. Am J Physol Arennol Physiol. 2015; 308:F287– F297.

36. Masum MA, Ichii O, Elewa YHA, et al. Mae microsgopeg electron sganio wedi'i addasu yn datgelu croes-siarad patholegol rhwng celloedd endothelaidd a podocytau mewn model murine o glomerwloneffritis membranoproliferative. Cynrychiolydd Gwyddonol 2018; 8: 10276.

37. Abbad M, Zoja C, Rottoli D, et al. Mae celloedd tiwbaidd procsimol yn hybu ffibrogenesis trwy sefydlu trwy gyfrwng TGF-beta o myofifibroblastau peritubwl. Arennau Int. 2002; 61: 2066-2077.

38. Liu CC, Tang TT, Lv LL, et al. Anaf tiwbyn arennol: grym gyrru tuag at glefyd cronig yn yr arennau. Arennau Int. 2018; 93:568–579.

39. Loeffler I, Wolf G. Trawsnewid twf ffactor-beta a dilyniant clefyd arennol. Trawsblaniad Dial Nephrol. 2014; 29 (cyflenwad 1): i37-i45.

40. Murakami K, Takemura T, Hino S, et al. Ffactor twf trawsnewid wrinol-beta mewn cleifion â chlefydau glomerwlaidd. Pediar Nephrol. 1997; 11:334-336.

41. Fujiwara K, Kobayashi T, Fujimoto H, et al. Atal apoptosis celloedd a lleddfu ffibrosis pwlmonaidd gan thrombomodulin. Am J Pathol. 2017; 187: 2312-2322.

42. Kataoka K, Taniguchi H, Kondoh Y, et al. Thrombomodulin dynol ailgyfunol wrth waethygu acíwt ffibrosis pwlmonaidd idiopathig. Cist. 2015; 148:436-443.

43. Tsushima K, Yamaguchi K, Yokoyama T, et al. Thrombomodulin ar gyfer gwaethygu acíwt ffibrosis pwlmonaidd idiopathig: astudiaeth prawf o gysyniad. Pulm Pharmacol Ther. 2014; 29: 233-240.

44. Umemura Y, Yamakawa K. Y dewis cleifion gorau posibl ar gyfer therapi gwrthgeulydd mewn sepsis: cynnig yn seiliedig ar dystiolaeth o Japan. J Thromb Haemost. 2018; 16:462–464.

45. Chen Q, Guan X, Zuo X, et al. Rôl blwch grŵp symudedd uchel 1 (HMGB1) yn pathogenesis clefydau'r arennau. Acta Pharm Pechod B. 2016; 6:183–188.

46. ​​Miyake Y, D'Alessandro-Gabazza CN, Takagi T, et al. Effeithiau gwahaniaethol thrombin sy'n ddibynnol ar ddos ​​mewn asthma bronciol alergaidd. J Thromb Haemost. 2013; 11: 1903-1915.

47. Assady S, Wanner N, Skorecki KL, et al. Mewnwelediadau newydd i fioleg podocyte mewn iechyd glomerwlaidd ac afiechyd. J Am Soc Nephrol. 2017;28:1707–1715.

48. Derynck R, Zhang YE. Llwybrau dibynnol ar Smad a Smad-annibynnol mewn signalau teulu TGF-beta. Natur. 2003; 425: 577-584.

49. Schuster N, Krieglstein K. Mecanweithiau TGF-beta-mediated apoptosis. Meinwe Cell Res. 2002; 307: 1-14.

50. Greka A, Mundel P. Bioleg celloedd a phatholeg podocytau. Annu Parch Physiol. 2012; 74: 299-323.

51. Isaka Y. Targedu signalau TGF-beta mewn ffibrosis yr arennau. Int J Mol Sci. 2018; 19: 2532.

52. Chang YJ, Cheng YW, Lin RK, et al. Mae thrombomodulin yn dylanwadu ar oroesiad cleifion â chanser colorefrol anfetastatig trwy bontio epithelial-i-mesenchymal (EMT). PLoS Un. 2016;11:e0160550.

53. Zheng N, Huo Z, Zhang B, et al. Mae thrombomodulin yn lleihau potensial tiwmorigenig a metastatig celloedd canser yr ysgyfaint trwy uwch-reoleiddio E-cadherin ac is-reoleiddio mynegiant N-cadherin. Biochem Biophys Res Commun. 2016; 476: 252-259.

54. Pan B, Wang X, Nishioka C, et al. Mae derbynnydd cypledig G-protein 15 yn cyfryngu angiogenesis a swyddogaeth cytoprotective thrombomodulin. Cynrychiolydd Gwyddonol 2017; 7:692.

55. Chen PS, Wang KC, Chao TH, et al. Mae thrombomodulin ailgyfunol yn gweithredu gwrth-awtophagic mewn celloedd endothelaidd ac yn darparu effaith gwrth-atherosglerosis mewn llygod diffygiol apolipoprotein E. Cynrychiolydd Gwyddonol 2017;7: 3284.

56. Chung JJ, Okamoto Y, Coblitz B, et al. Mynegiant arwyneb protein wedi'i gyfryngu gan signalau PI3K/Akt wedi'i synhwyro gan 14-3-3 motiff rhyngweithiol. CHWEFROR J. 2009;276:5547–5558.

57. Sanchez-Capelo A. Rôl ddeuol ar gyfer TGF-beta1 mewn apoptosis. Ffactor Twf Cytokine Diwygiad 2005; 16:15-34.

58. Griffifin JH, Zlokovic BV, Mosnier LO. Protein wedi'i actifadu C, derbynnydd 1 a weithredir gan broteas, a niwroamddiffyniad. Gwaed. 2018; 132: 159-169.

59. Isermann B, Vinnikov IA, Madhusudhan T, et al. Mae protein C wedi'i actifadu yn amddiffyn rhag neffropathi diabetig trwy atal apoptosis endothelaidd a podocyte. Nat Med. 2007; 13: 1349-1358.

60. Klos A, Tenner AJ, Johswich KO, et al. Rôl anaffylatocsinau mewn iechyd ac afiechyd. Mol Immunol. 2009; 46: 2753-2766.

61. Morigi M, Perico L, Corna D, et al. Mae rhwystr derbynnydd C3a yn amddiffyn podocytau rhag anafiadau mewn neffropathi diabetig. Mewnwelediad JCI. 2020; 5: e131849.

62. Conery AR, Cao Y, Thompson EA, et al. Mae Akt yn rhyngweithio'n uniongyrchol â Smad3 i reoleiddio'r sensitifrwydd i apoptosis a achosir gan TGF-beta. Nat Cell Biol. 2004; 6: 366-372.

63. Derynck R, Muthusamy BP, Saeteurn KY. Cydweithrediad llwybr arwyddo mewn cyfnod pontio epithelial-mesenchymal a achosir gan TGF-beta. Curr Opin Cell Biol. 2014; 31:56-66.

64. Remy I, Montmarquette A, Michnick SW. Mae PKB/Akt yn modiwleiddio signalau TGF-beta trwy ryngweithio uniongyrchol â Smad3. Nat Cell Biol. 2004;6:358–365.

65. Hamidi A, Song J, Thakur N, et al. Mae TGF-beta yn hyrwyddo signalau PI3K-AKT a mudo celloedd canser y brostad trwy hollbresennoldeb cyfryngol TRAF o p85alpha. Arwydd Sci. 2017;10:eaal4186.

66. Peng Z, Weber JC, Han Z, et al. Effeithiau deuoliaeth signalau Akt mewn canser y fron. Cancr Mol. 2012; 11:61.

67. Zhou F, Geng J, Xu S, et al. Mae signalau FAM83A yn ysgogi trosglwyddiad mesenchymal epithelial gan y llwybr PI3K / AKT / Malwoden yn NSCLC. Heneiddio (Albany NY). 2019; 11:6069–6088.