Beth Yw Manteision Polysacarid Cistanche Ar Swyddogaeth Imiwnedd

Cyswllt: emily.li@wecistanche.com

Gweithgaredd imiwnolegol a mecanwaith Cistanche Polysacarid

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang

[Haniaethol]Amcan: Astudio'rimiwngweithgaredd oCistanchePolysacarid(CDPS) a mecanwaith eiimiwnrheoleiddio in vitro. Dulliau: Defnyddiwyd y dull lliwimetrig glas thiazole (MTT) i arsylwi effaith reoleiddio CDPS (Polysacarid Cistanche) ar IQS DEX TNF atal lledaeniad lymffocytau thymig llygoden in vitro; CDPS (Polysacarid Cistanche) yn cael ei ddefnyddio i berfformio dadansoddiad cylchred celloedd a chylchred gell gan ddefnyddio cytometreg llif. Pennu Ca2 mewngellol. Canlyniadau: CDPS (Polysacarid Cistanche) gall crynodiad uwch wrthsefyll effaith ataliol ISQDEX ar amlhau lymffocytau ac effaith ataliol crynodiad uchel TNF ar amlhau lymffocytau, a synergeiddio effaith hyrwyddo amlhau crynodiad isel TN F ar lymffocytau; 100ug/ml 200 ug/ml CDPS (Polysacarid Cistanche) yn gallu cynyddu'r celloedd yn sylweddol yn y cyfnod rhannu; crynodiad uwch (100ug/ml) CDPS (Polysacarid Cistanche) yn gallu hyrwyddo'n sylweddol y crynodiad o ïon Ca mewn thymocytes llygoden. Casgliad: CDPS (Polysacarid Cistanche) yn gallu hyrwyddo celloedd i fynd i mewn i'r cyfnod rhannu, a thybir bod ei effaith hyrwyddo ar amlder lymffocytau thymig llygoden yn gysylltiedig â'i hyrwyddo rhyddhau calsiwm mewn lymffocytau thymig llygoden.

Cistanche(CistancheDeserticolaMae YC Ma) yn ddeunydd meddyginiaethol Tsieineaidd prin a gwerthfawr yn fy ngwlad. Fe'i rhestrir fel y radd uchaf yn "Materia Medica Shen Nong".Cistanchemae ganddo swyddogaethau maethlon gwaed, maethu'r aren a chynorthwyo yang, lleithio'r coluddion, ac oedi heneiddio. Mae ymchwil ffarmacolegol modern yn dangos hynnyCistanchePolysacaridyn gallu gwella'r corffimiwnswyddogaeth, hyrwyddo synthesis DNA, cryfhau cryfder corfforol, gwella deallusrwydd, ac mae ganddo effeithiau gwrth-heneiddio amlwg [1]. Astudiodd yr awdur reoleiddio CDPS(Cistanche Polysacarid), cydran polysacarid oCistanche, ar yimiwnswyddogaetho lymffocytau llygoden.

Polysacarid Cistanchehyrwyddoamlhau olymffocytau

1 Deunydd a dulliau

1.1 Adweithyddion a chyffuriau.

RPM, I 1640 canolig: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glutamin: Shanghai Dongfeng Ffatri Adweithydd; Penisilin a Streptomycin: Ffatri Fferyllol Gogledd Tsieina; Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A Company; Phytohemagglutinin (PHA): Labordy Meddygol Shanghai; Isoproterenol (ISO): Shanghai Tianfeng Fferyllol Ffatri; Mercaptoethanol: Cwmni Fluka; Serwm lloi newydd-anedig: Cwmni Biobeirianneg Sijiqing; Cyflwynwyd Dexamethasone (DEX) gan Dr. Ma Liang, Ysbyty Cysylltiedig Cyntaf Ysgol Feddygaeth Prifysgol Zhejiang; Darparwyd Tiwmor Suppressor Factor (TNF) gan Yu Yuehan, Athro, Adran Celloedd, Ysgol Gwyddorau Bywyd, Prifysgol Zhejiang; Mae gweddill yr adweithyddion i gyd yn raddau dadansoddol a gynhyrchir yn ddomestig.

1.2 Anifeiliaid arbrofol.

Prynwyd llygod ICR, gwrywaidd, 68 wythnos oed, sy'n pwyso 18-20g, 22, o Ganolfan Anifeiliaid Arbrofol Zhejiang.

1.3 Echdynnu Polysacarid Cistanche [2]:

CistanchePolysacaridyn cael ei dynnu gan ein labordy! Ar ôl gwasgu'r cyffur craiCistanche, caiff ei drochi mewn ethanol poeth, ei dynnu mewn dŵr berw, a'i waddodi mewn ethanol. Ensym niwtral wedi'i gyfuno â dull Sewag ar gyfer dadbroteineiddio, cromatograffaeth cyfnewid anion DEAE-Sephadex A- 50 a chromatograffaeth hidlo gel Sephacry S-200 i gael un gydran o CDPS (Polysacarid Cistanche)). Cadwch yn sych, defnyddiwch RPMI1640 anghyflawn i wneud crynodiad penodol cyn ei ddefnyddio, a'i sterileiddio trwy hidlo traul

1.4 Paratoi lymffocytau dueg a thymws [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, addaswch grynodiad celloedd dueg i X 10 / ml a chrynodiad y thymocytes i × 10 gradd /ml

1.5 Adwaith amlhau lymffosyt:Yn ôl y dull Mosmanmn [4] Gwelliant: 96-plât meithrin celloedd ffynnon, ychwanegwch 10/ml ataliad cell ddueg neu ddŵr 10/ml ataliad thymocyte 100M1 a chrynodiadau gwahanol o gyffuriau 10041 ym mhob ffynnon. Meithrinwch mewn deorydd CO2.37C am 72 awr. 4 awr cyn diwedd y meithriniad, ychwanegwch 8μ1 o MTT (5 mg/ml) i bob ffynnon. Ar ddiwedd y diwylliant, ychwanegwch 150"1 o'r supernatant o bob ffynnon, ac ychwanegwch 0.5N hydroclorid isopropanol 150M1. Ysgwydwch y micro-sgydwr yn ysgafn i doddi'r crisialau glas yn llwyr. Mesurwch yr OD570 ar y darllenydd microplate. Gosodwch bob un arbrofol pwynt fel tri atgynhyrchu ffynhonnau.

1.6 Pennu'r dylanwad ar gylchred celloedd [5]:

{{0}}plât meithrin cell yn dda, ychwanegu 4 10 ataliad thymocyte gradd /ml 1ml i bob ffynnon, ychwanegu adweithyddion amrywiol a hydoddiant polysacarid i 2ml mewn CO cryf, 37 deoryddion Ar ôl meithrin am 72h, allgyrchydd ar 1500r/munud am 15 munud, taflu'r uwchnafant, ychwanegu 7 ethanol i drwsio'r celloedd dyddodiad, storio ar 4C ar gyfer profion wrth law, golchi'r celloedd ddwywaith gyda PBS, centrifuge ar 1500r/munud am 15 munud, taflu'r supernatant, ac ychwanegu Ar ôl treulio 0.5ml0.1 RNAseA ar 4C am 30 munud, cafodd bromoacetate 50ug/ml ei staenio am 30 munud ar 4C, a mesurwyd dwyster fflworoleuedd y samplau celloedd ar y cytomedr llif FACScan. Casglwyd 10,000 pwynt prawf cell ar gyfer pob sampl, a defnyddiwyd y data dadansoddiad meddalwedd beic tair olwyn Mul.

1.7 Pennu crynodiad ïon calsiwm mewngellol [6]

Cymerwch thymocytes llygoden yn yr un modd ag uchod. Ataliwch mewn cyfrwng diwylliant RPMIl640 anghyflawn ac addaswch grynodiad y gell i × 10'/ml. Ychwanegu 1 ml o daliant thymocyte ac 1 μM at bob tiwb arbrofol Hydoddiant staenio Ffliw 5μ1, 2 y cant F-275 μ1, ar ôl deor yn 37 am 30 munud, golchi ddwywaith gyda RPM1640, 1500r/ anghyflawn min, centrifuge am 10 munud, taflu'r supernatant, ac ychwanegu crynodiadau gwahanol o polysacaridau a polysacaridau i'r celloedd dyddodiad Ar ôl ConA, mesurwyd dwyster fflworoleuedd ar y cytomedr llif FACScan. Casglwyd data o 10,{16}} pwynt prawf cell ar gyfer pob sampl a'u dadansoddi gan feddalwedd CELLQUEST. 1.8 Defnyddiwyd dulliau ystadegol ar gyfer dadansoddi amrywiant, a dadansoddwyd y cylchred gell a mesuriad ïon calsiwm gan feddalwedd y cytomedr llif.

Cistanche Polysacarid o cistanche deserticola

2 Canlyniadau

2.1 Mae Cistanche Polysacarid in vitro yn atal ymlediad lymffocytau thymig llygoden gan ISO DEX TNF

Mae'r agonydd derbynnydd -adrenergig isoproterenol (ISO) a dosbarth o hormon cortecs adrenal dexamethasone (DEX) yn atal amlhau lymffocytau CDPS (Polysacarid Cistanche) ar grynodiad uwch (75 125ug/ml) yn gallu gwrthsefyll effaith ataliol ISO DEX ar amlhau lymffocytau (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Polysacarid) (125ug/ml) ar grynodiad uwch yn gallu gwrthsefyll effaith ataliol TNF , a hyrwyddo amlhau lymffocytau â chrynodiad isel o TNF (Ffigur 2) yn synergyddol

2.2 Cistanche Polysacarid yn rheoleiddio cylchred lymffosyt thymws

CDPS (CistanchePolysacarid) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml gweithredwyd tri chrynodiad ar lymffocytau thymig y llygoden am 72 awr, mesurwyd y cynnwys DNA yn y celloedd gan FACS, a chyfrifwyd y mynegai amlhau (PI) yn ôl y fformiwla. Dengys y canlyniadau y gall 100ug/ml a 200ug/ml gynyddu'r celloedd yn sylweddol yn y cyfnod rhannu, ac mae'r mynegai amlhau (68.0 y cant, 56.6) o'r ddau yn sylweddol uwch na'r grŵp rheoli (44.6), a'r 200ug/ml Mae'r grŵp ychydig yn is na grŵp 100ug / ml oherwydd, ar y crynodiad o 200ug/ml, mae ei effaith ar amlhau celloedd wedi dod yn duedd ar i lawr [7]. Nid oedd gwerth DP (47.5 y cant) y grŵp 25ug/ml yn sylweddol uwch na gwerth y grŵp rheoli.

2.3 Effaith Cistanche Polysacarid ar y crynodiad ïon calsiwm mewn thymocytau llygoden

Mae'r canlyniadau arbrofol yn dangos bod crynodiad uwch (100 ug/ml) o CDPS (Cistanche Polysaccharide) yn gallu hyrwyddo'n sylweddol y cynnydd yn y crynodiad ïon calsiwm mewn thymocytes llygoden O'i gymharu â'r grŵp rheoli, mae gwahaniaeth sylweddol (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Trafodaeth

Cistanche, a elwir yn gyffredin" ginseng anialwch", yn goesyn sych, cennog o gigCistanche.CistancheMae ganddo swyddogaethau yang arennau maethlon, hanfod maethlon, gwaed a'r coluddion. Mae'n perthyn i fath o gyffro y cortex pituitary-adrenal neu mae ganddo effaith tebyg i hormon tebyg i'r cortecs adrenal. Meddyginiaeth Tsieineaidd werthfawr a all reoleiddio'rimiwnswyddogaetho'r corff. Mae ein canlyniadau ymchwil blaenorol yn dangos bod CDPS (Polysacarid Cistanche) gall in vitro hybu ymlediad lymffocytau thymig T nad ydynt wedi'u actifadu na'u actifadu gan ConA PHA. Wedi'i gyfuno â ConA PHA, mae dau fath o symbylydd cell T, credwn fod CDPS (Polysacarid Cistanche) yn Badjuvant ar gyfer celloedd T, a gwelsom hefyd fod CDPS (Polysacarid Cistanche) yn gallu cynyddu secretiad lymffocytau splenig llygoden yn sylweddol ar grynodiadau uwch [8]

Mae rhai astudiaethau wedi canfod y gall TNF ailgyfunol achosi apoptosis o lygoden normal a chlystyrau lymffocyt T dynol in vitro, a gall yr effaith hon gael ei llesteirio gan IIL-2 IL-1 IFN ac IIL-4 gyda dexamethasone (DEX) Gall atal ymlediad lymffocyte trwy atal mynegiant lymffocyt a secretion IL-2 ac is-reoleiddio cynhyrchu IL-2R affinedd uchel. Canfu'r arbrawf hwn fod crynodiad uwch o CDPS (CistanchePolysacarid) yn gallu gwrthweithio effeithiau crynodiad uchel o TN F ar amlhau lymffocytau. Gwaharddiad, synergaidd â chrynodiad isel o TNF i hyrwyddo amlder lymffocytau, a gall wrthsefyll effaith ataliol ISQ DEX ar amlhau lymffocytau. Daw'r effeithiau hyn yn union trwy CDPS (CistanchePolysacarid) hyrwyddo ymlediad lymffocytau T ac sy'n cael eu cwblhau gan gelloedd T IL-2 a sytocinau eraill i'w cwblhau.

Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, bu llawer o astudiaethau ar effeithiau imiwnoffarmacolegol polysacaridau planhigion, ond ychydig o astudiaethau ar yimiwnmecanwaith rheoleiddio polysacaridau, yn enwedig llwybr trosglwyddo signal polysacaridau sy'n gweithredu ar lymffocytau gyda Ca2 fel yr ail negesydd. Nid oes adroddiad. Cynhaliodd yr arbrawf hwn ymchwil rhagarweiniol yn y maes hwn. Mae moleciwlau signalau mewngellol yn cynnwys cAM R Ca", IP3 DG cGMP, ac ati, ac ymhlith y rhain mae Ca" yn cael effaith ffisiolegol hynod bwysig ar gelloedd. Mae'r cynnydd mewn crynodiad Ca² mewngellol yn ffenomen bwysig yng nghyfnod cynnar actifadu ac amlhau lymffocytau. Mae'r broses hon yn digwydd yn bennaf yn y degau cyntaf o eiliadau i funudau pan fydd celloedd yn cael eu gweithredu gan symbylyddion. Y ffordd glasurol o actifadu celloedd T yw ffosffatidylinositol (PIB) i fetaboli cyhyrau ffosffatidyl. Gall y metabolit alcohol 1,4.5-inositol triphosphate (IP3) hyrwyddo rhyddhau Ca" sydd wedi'i storio yn y rhwyll fewnol trwy rwymo i'r derbynyddion rhwyll fewnol, gan gynyddu lefel y Ca2 mewngellol, a chrynodiad Ca2 mewngellol. * yn cynyddu Gall uchel hyrwyddo cynhyrchu NF-AT (ffactor nudeic o gell T wedi'i actifadu), mae'r olaf yn cael yr effaith o hyrwyddo mynegiant genyn IIL-2 Mae canlyniadau arbrofol yn dangos bod crynodiad uwch (100ug/ml ) o CDPS (CistanchePolysacarid) yn effeithiol am 5 10 mun Mae amser yn cael effaith sylweddol ar gynyddu crynodiad Ca* mewn thymocytau llygoden, ac yn cael effaith synergaidd â ConA. Felly, rydym yn dyfalu bod CDPS (Polysacarid Cistanche) yn hyrwyddo rhyddhau calsiwm mewn lymffocytau thymig llygoden i gynyddu'r crynodiad ïon calsiwm mewngellol. Mae'r cynnydd yn hybu mynegiant genyn IL-2 ac yn arwain at amlhau celloedd T, sef un o sylfeini damcaniaetholCistanchePolysacaridaueffaith reoleiddiol ar y corff

Polysacarid Cistanche

Cyfeiriadau

1. YN XiuHin, SU Yuke (sefyllfa gyffredinol ymchwil ffarmacoleg arCistancheSka 【J】. Cyffuriau Traddodiadol a Pherlysiau Tsieineaidd ((meddygaeth lysieuol Tsieineaidd). 1993.24(10. 550-552(mewn Tsieinëeg))

2. ZHANG Weijiee (Techory biocemegol polysacarid cyfansawdd [M]. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press), 1994.16-17 (mewn Tsieinëeg)

3. MA Bo- (Ma Baoli).Tehnique imiwnoleg【M1. Shanghai Medical University Pres (Shanghai Medical University Press), 1984 188-190. (n Tsieina))

4. Mosmann T. Rapiloloimeric assay ar gyfer twf a goroesiad haws cymhwyso i amlhau a sytowenwyndra i ffwrdd [JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.

5. WU yn-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian, ac ati), Effaith zin ar y doreth o gelloedd cylchol ynimiwndadansoddi organ gan ddefnyddio cytometreg llif [J]. Imiwnoleg Tsieineaidd (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10X5: 278-281. (yn Tsieinëeg)

6. Echel TAO. JIYong-yong, GAO Qi-rong, et al (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong, ac ati). Dadansoddiad FACS o newidiadau mewn C2 mewngellol yn ystod y broses o ymledu[J] Cyfnodolyn imiwnoleg Tsieineaidd (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (yn Tsieinëeg)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU suchiang; Puro d polysacdarid oCistancheDeserticolaYC Mfa a'i effeithiau imiwnofodwlaidd ar Tellfunction[J].burnal o Brifysgol Feddygol Zhejiang (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (mewn Tsieinëeg)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH Cytotocsig Efed o TNF a Lymffotocsin ar T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.