Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cliciwch yma i gael gwybodaeth am Ran I (Cyflwyniad, deunyddiau, a dulliau) yr erthygl hon.

Ffactor trawsgrifio mitocondriaidd epithelial arennau wedi'i dargedu Mae diffyg yn arwain at ddisbyddiad mitocondriaidd cynyddol sy'n gysylltiedig â'r clefyd systig difrifol--Rhan II

Ken Ishii^1,2,11et al.

TRAFODAETH

Yma rydym yn sefydlu swyddogaeth hanfodol ar gyfer ffactor trawsgrifio mt TFAM mewn homeostasis meinwe arennol. Rydym yn dangos bod anactifadu TFAM yn CHWECH2 ond nid mewn celloedd epil HOXB7 wedi arwain at ddatblygu clefyd systig ôl-enedigol difrifol, a oedd yn gysylltiedig â disbyddiad mt a symudiad metabolaidd o OXPHOS tuag at glycolysis. At hynny, mae gostyngiad mewn lefelau TFAM cellog a chamweithrediad mt yn nodweddion nodweddiadol o PKD murine a dynol(clefyd yr arennau polycystig), gan awgrymu y gallai gostyngiad mewn gweithgaredd TFAM gyfrannu at a/neu fodiwleiddio datblygiad clefyd systig arennol.

Mae cleifion â syndromau clefyd mt yn dueddol o ddatblyguarenpatholeg.Clefyd yr arennauyn y lleoliad hwn yn aml yn amlygu fel camweithrediad tiwbaidd a/neu glefyd tubulointerstitial, tra bod ffurfio codennau arennol yn brin.12,19 22 Er bod mwtaniadau mewn genynnau a reoleiddir gan TFAM, megis MT-CO1, 23 wedi'u nodi mewn cleifion â'r clefyd tubulointerstitial, treigladau yn TFAM ei hun heb eu hadrodd mewn cleifion â chronigclefyd yr arennau. Serch hynny, mae dilyniant clefyd cronig yn yr arennau wedi'i gysylltu'n ddiweddar â llai o weithgarwch TFAM, a arweiniodd at actifadu llwybrau ffibrotig a llidiol oherwydd straen mt.14,24 Mewn cyferbyniad â Six2-Tfam^-/-mwtantiaid, llygod â Ksp-Cre - datblygodd anactifadu Tfam wedi'i gyfryngu â ffibrosis arennol a llid14 ond nid clefyd systig. Mae'r gwahaniaethau ffenoteipaidd rhwng y 2 fodel yn debygol o fod yn adlewyrchiad o ba fathau o gelloedd arennol a dargedwyd yn ogystal â chyflwr gwahaniaethu celloedd Cre-fynegi. Mae Ksp-Cre yn cyfryngu ailgyfuniad yn y neffron distal gyda gweithgaredd Cre amlwg yn y goes esgynnol drwchus medullary o segment Henle a CD sy'n deillio o blagur wreterig,25 tra bod Six2-eGFP/Cre yn cael ei fynegi mewn mesenchyme cap ac nid yw'n targedu wreterig segmentau neffron sy'n deillio o blagur.16 Yn gyson â'r canfyddiadau hyn mae'r cynnydd mewn dyddodiad matrics allgellog ac absenoldeb clefyd systig yn 15-Hoxb mis oed7-Tfam /mutants; Mae Hoxb7-Cre yn targedu segmentau neffron sy'n deillio o blagur wreterig (Ffigur Atodol S5).26 Ymhellach, yn unol â'r syniad o ddibyniaeth cam datblygiadol a math o gelloedd yw'r sylw bod Tfam yn anweithredol gan ddefnyddio Nphs{{16 }}Ni arweiniodd Cre (Podocin-Cre) at ffenoteipiau arennol datblygiadol neu oedolion,27 tra bod Six2-Tfam^-/- datblygodd llygod albwminwria sylweddol.

Acteoside i mewnCistancheyn dda iclefyd yr arennau polycystig

Nid oedd diffygion yng ngwahaniaethu neffron yn gwbl annisgwyl yn Chwe2-Tfam^-/- llygod oherwydd bod gwahaniaethu cellog wedi bod yn gysylltiedig â dibyniaeth gynyddol ar OXPHOS ar gyfer cynhyrchu ATP, tra bod yn well gan gelloedd plwripotent diwahaniaeth glycolysis yn hytrach nag OXPHOS i fodloni gofynion ynni.28 I ba raddau y cyfrannodd colled cynyddol gweithgaredd OXPHOS fel y cyfryw at sytogenesis mewn Chwech{{1} }Tfam^-/-mutants yn gwarantu ymchwiliad pellach. Mae astudiaethau diweddar wedi dangos bod treigladau mewn PKD(clefyd yr arennau polycystig)Mae 1, sy'n gyfrifol am w85 y cant o achosion ADPKD,29 yn gysylltiedig â gwell fflwcs glycolytig.30 Fodd bynnag, nid yw arwyddocâd pathoffisiolegol a therapiwtig y canfyddiad hwn yn gwbl glir oherwydd bod effeithiau amddifadedd glwcos ar amlhau codennau a dilyniant PKD yn ddadleuol. 31,32.

Er nad ydym yn cynnig bod camweithrediad TFAM yn cynrychioli digwyddiad sylfaenol yn natblygiad PKD(clefyd yr arennau polycystig), mae ein hastudiaethau'n codi'r posibilrwydd y gallai camweithrediad TFAM fod â rôl gyfrannol yn ei bathogenesis a/neu ddilyniant. Rydym yn dangos bod lefelau protein TFAM yn gostwng mewn celloedd epithelial leinin sys o feinweoedd murine a dynol PKD a chanfuwyd bod Six2-Tfam^-/- mae meinweoedd yn rhannu nodweddion moleciwlaidd â PKD(clefyd yr arennau polycystig)meinweoedd sy'n gysylltiedig â cystogenesis. Mae swyddogaeth cilia annormal wedi'i gysylltu â phathogenesis clefydau systig arennol.29,33,34 Er bod absenoldeb cilia wedi'i nodi ar gyfer rhai PKD(clefyd yr arennau polycystig)modelau anifeiliaid, 35,36 cilia yn cael eu ffurfio yn Pkd1^-/-celloedd epithelial37 a chawsant eu canfod hefyd mewn codennau arennol o Six2-Tfam^-/- llygod (Ffigur Atodol S3). Mae sawl llwybr signalau sy'n gysylltiedig â sytogenesis yn ymwneud â signalau sy'n gysylltiedig â cilia. Mae'r rhain yn cynnwys protein kinase wedi'i ysgogi gan mitogen / signalau kinase a reoleiddir gan signal allgellog a llwybrau a reoleiddir gan b-catenin.33 Codwyd lefelau p-ERK a b-catenin mewn Chwe2-Tfam^-/- arennau, gan awgrymu bod y llwybrau hyn wedi'u rhoi ar waith. Mae'r canfyddiadau hyn yn gyson ag arsylwadau a wnaed mewn celloedd ADPKD dynol ac mewn sawl PKD murine(clefyd yr arennau polycystig)modelau.38–43.

Gostyngwyd cydweithydd gama derbynnydd a weithredir gan amlhau peroxisome 1a (PGC-1a), rheolydd trawsgrifio i fyny'r afon o TFAM a gyrrwr biogenesis mt, mewn llinellau cell wedi'u hynysu oddi wrth gleifion ag ADPKD a byddai, yn ogystal â TFAM ei hun, cynrychioli targed therapiwtig posibl ar gyfer PKD(clefyd yr arennau polycystig). Gostyngiad mewn PGC-1cynigiwyd mynegiad i hybu amlhau codennau oherwydd cynnydd mewn cynhyrchu mt superoxide mewn PKD(clefyd yr arennau polycystig)1-celloedd diffygiol.44 Er na wnaethom fesur cynhyrchiant mt ROS yn ein model, roedd anactifadu TFAM penodol i feinwe mewn mathau eraill o gelloedd yn gysylltiedig â gostyngiad ac nid cynnydd mewn cynhyrchiad mt ROS.9 Yn ogystal â'r PGC -1echelin a/TFAM, mae astudiaethau diweddar wedi amlygu rôl bosibl ar gyfer hypocsia a'r llwybr ffactor anwytholedig hypocsia yn therapi clefydau mt.45,46 I ba raddau y gellir defnyddio llwybrau sy'n gysylltiedig â hypocsia yn therapiwtig ar gyfer y driniaeth Mae angen ymchwilio ymhellach i glefydau sy'n gysylltiedig â chamweithrediad mt, fel PKD.

I grynhoi, mae ein data yn dangos bod angen ffactor trawsgrifio mt TFAM ar gyfer gwahaniaethu neffron arferol a bod colli gweithgaredd TFAM mewn celloedd epithelial arennol yn atgynhyrchu nodweddion moleciwlaidd a metabolaidd sy'n gysylltiedig â PKD(clefyd yr arennau polycystig). Mae ein canfyddiadau yn rhoi sail resymegol gref ar gyfer ymchwiliadau pellach i rôl iechyd a swyddogaeth mt mewn sytogenesis. Cynigiwn y gallai strategaethau therapiwtig sy'n anelu at wella iechyd mt fod yn fuddiol ar gyfer trin cleifion â PKD(clefyd yr arennau polycystig).

Ffigur 7|Mynegiant ffactor trawsgrifio mitocondriaidd A (TFAM) mewn codennau arennol gan gleifion âclefyd yr arennau polycystigyn cael ei leihau. (a) Delweddau cynrychioliadol o doriadau paraffin wedi'u mewnosod â fformalin o arennau ac arennau dynol normal oclefyd yr arennau polycystig(PKD) cleifion yn cael eu dadansoddi yn ôl immunohistochemistry ar gyfer mynegiant TFAM, gan immunofluorescence (IF) ar gyfer mynegiant foltedd-ddibynnol ar anion-sianel 1 (VDAC) sianel 1 (VDAC), a thrwy hybridization fflwroleuol RNA yn y fan a'r lle ar gyfer cytochrome c oxidase amgodio mitocondrially c oxidase 1 (MT-CO1) a Is-uned bilen synthase ATP 6 (MT-ATP6) mynegiant mRNA wedi'i amgodio'n mitochondrially. Mae saethau'n nodi celloedd epithelial leinin syst, mae arwyddion rhif yn darlunio lumina cyst, ac mae seren yn darlunio glomeruli. Bar =100 mm ar gyfer delweddau chwyddhad isel a 10 mm ar gyfer delweddau chwyddhad uchel. (b) Cynrychioladol 3-delweddau microsgopig goleuo strwythuredig dimensiwn o PKD dynol (clefyd yr arennau polycystig)adrannau arennau wedi'u dadansoddi gydag IF ar gyfer mynegiant VDAC. 4', defnyddiwyd 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) ar gyfer staenio niwclear (fflworoleuedd glas). Mae llinellau doriad yn nodi tiwbiau, ac mae arwyddion rhif yn darlunio lumina tiwbaidd neu goden. Mesurwyd cyfaint mitochondrial (mt) gan ddefnyddio meddalwedd Imaris (n=5). Bar=4 mm. Cynrychiolir data fel cymedr plws -SEM a chawsant eu dadansoddi gan ddefnyddio prawf-t y Myfyriwr. *P < 0.05.="" i="" wneud="" y="" gorau="" o'r="" ddelwedd="" hon,="" gweler="" y="" fersiwn="" ar-lein="" o'r="" erthygl="" hon="" yn="">

Cistancheyn dda iclefyd yr arennau polycystig

DULLIAU

Disgrifiwyd cynhyrchiad yr alel Tfam amodol mewn man arall.9 Ceir disgrifiad manwl o linellau llygoden a dulliau arbrofol yn yr adran Dulliau a Deunyddiau Atodol. Mae setiau data RNAseq yn cael eu rhannu yn geo@ncbi.nlm.hih.gov(rhif derbyn GSE147189).

Dadansoddiad ystadegol

Adroddir data fel SEM cymedrig. Perfformiwyd dadansoddiadau ystadegol gyda meddalwedd Prism 6 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA) gan ddefnyddio prawf-t y Myfyriwr. Dadansoddwyd goroesi gan ddefnyddio dull Kaplan-Meier, a chymharwyd grwpiau yn ôl y prawf rheng log. Ystyriwyd bod gwerthoedd P o lai na 0.05 yn ystadegol arwyddocaol.

Cymeradwyaeth astudio

Perfformiwyd yr holl weithdrefnau sy'n ymwneud â llygod yn unol â chanllawiau'r Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol ar gyfer defnyddio a gofalu am anifeiliaid byw ac fe'u cymeradwywyd gan Bwyllgor Gofal a Defnydd Anifeiliaid Sefydliadol Prifysgol Vanderbilt.

DATGUDDIAD

Ni ddatganodd yr holl awduron unrhyw fuddiannau cystadleuol.

DIOLCHIADAU

Cefnogir VHH gan gadair Krick-Brooks mewn Neffroleg ym Mhrifysgol Vanderbilt, grantiau’r Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol R01-DK101791 ac R01-DK081646, a Gwobr Teilyngdod yr Adran Materion Cyn-filwyr 1I01BX002348. Darparwyd cymorth pellach gan grantiau'r Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol R01-DK103033 (PVT), R01-DK108433 (MS), ac R01-DK56942 (ABF); O'Brien gan VanderbiltArennauCanol (P30-DK114809); Canolfan Ymchwil a Hyfforddiant Diabetes Vanderbilt (P30-DK20593); craidd Adnodd a Rennir Histoleg Ddigidol yng Nghanolfan Feddygol Prifysgol Vanderbilt (www.mc.vanderbilt.edu/dhsr); craidd Adnodd a Rennir Patholeg Drosiadol (P30-CA68485); Canolfan Ffenoteipio Metabolaidd Llygoden Vanderbilt (U24-DK059637); a'r grant Offeryniaeth a Rennir S10-OD023475. Mae gwybodaeth am waith a gyflawnwyd yn labordy Haase ar gael yn www.haaselab.org.

CYFRANIADAU AWDUR

VHH luniodd y prosiect. Cynlluniodd KI, HK, a VHH yr astudiaethau ymchwil, dadansoddi a dehongli data, ysgrifennu'r llawysgrif, a gwneud ffigurau. Perfformiodd KI, HK, NG, KT, AL, CT, OD, a CRB arbrofion a chaffael a dadansoddi data. Darparodd MS, NSC, a PVT adweithyddion llygoden a meinweoedd llygoden a mewnbwn cysyniadol a chynorthwyo i ddehongli data. Darparodd ABF a MEK feinweoedd dynol.

Cistancheyn dda iclefyd yr arennau polycystig

DEUNYDD ATODOL

Ffeil Atodol (PDF)

Ffigur S1. Yn gysylltiedig â Ffigur 1. Nid yw anactifadu heterosygaidd Tfam mewn SIX2 o gelloedd epil yn gysylltiedig âclefyd yr arennau. Dangosir delweddau cynrychioliadol o fformalin, wedi'i fewnosod â pharaffinaren sections from Cre littermate control and heterozygous Six2-Tfam β/ mice at (A) 3 months of age and (B) >10 months of age. Sections were stained with alcian blue/periodic acid–Schiff (AB-PAS) and analyzed by immunohistochemistry (IHC) for a smooth muscle actin (ACTA2) expression. Asterisks depict glomeruli. Bars ¼ 100 mm. Right panels show blood urea nitrogen (BUN) levels and renal mt DNA content in Cre littermate control and Six2-Tfamþ/mutant mice at 3 months of age (n ¼ 5 and 6, respectively) and age>10 mis (n =4 a 3, yn y drefn honno). Cynrychiolir y data fel cymedrig0.01. SEM a chawsant eu dadansoddi gan 2-brawf t Myfyriwr cynffon; **P<>

Ffigur S2. Yn gysylltiedig â Ffigur 1.Tfam^-/- codennau arennol yn deillio o gelloedd gyda mynegiant Six2-eGFP/Cre. Dangosir delweddau cynrychioliadol o adrannau arennau wedi'u mewnosod gan fformalin o Six2-mT/mG;Tfam^-/-llygod wedi'u dadansoddi yn ôl immunofluorescence (IF) gyda gwrthgyrff yn erbyn y protein fflwroleuol gwyrdd gwell (eGFP) a phrotein fflwroleuol coch tdTomato. Mae mynegiant eGFP yn dynodi Chwe2- o ailgyfuniad eGFP/Cre-mediated o'r alel Cre-reporter mT/mG. (A) IF dadansoddiad o fynegiant tdTomato a/neu eGFP ynarennauyn P7, P14, a P29 oed. Mae seren yn darlunio codennau mawr sy'n deillio o Six2-eGFP/ Cre-targedu eGFP-gelloedd mynegi (fflworoleuedd gwyrdd); mae arwyddion rhif yn dangos 2 goden fach sy'n deillio o gelloedd tdTomatoexpressing nad ydynt wedi'u targedu (fflworoleuedd coch). Mae saethau coch yn darlunio celloedd eGFP-negyddol (dim ailgyfuniad). Mae saethau gwyn yn darlunio celloedd leinin codennau eGFP-positif (yn dynodi ailgyfuniad). Bar=100 mm. (B) Dadansoddiad o fynegiad TFAM yn ôl IF yn Cre control a Six2-Tfam^-/-mutants yn P7 oed. Mae saethau gwyn yn darlunio strwythurau tiwbaidd TFAM-positif (fflworoleuedd coch). gl, glomerwlws. Bar=25μm.

Ffigur S3. Yn gysylltiedig â Ffigur 1.Tfam^-/- arennauyn cael eu nodweddu gan gynnydd mewn gweithgaredd ymledol. (A) Delweddau cynrychioliadol o adrannau arennau o Cre littermate control a Six{0}}Tfam^-/-dadansoddwyd llygod yn P14 oed ar gyfer mynegiant Ki67 gan immunohistochemistry (IHC). Mae saethau coch yn darlunio Ki67-gelloedd positif mewn rheolaeth aTfam^-/- arens. Bar =100 mm. (B) Dadansoddiad imiwnoblot o fynegiant ERK, phospho-ERK (p-ERK), a b-catenin yn eu cyfanrwyddarenhomogenates o Cre littermate control a Chwe2- llygod Tfam / mutant yn P14 oed. (C) Caspase hollti 3 ymadrodd mewn fformalin-sefydlog, paraffin-gwreiddioarenadrannau o Cre littermate control a Six2-mT/mG;Tfam^-/- llygod yn P14 oed wedi'u dadansoddi gan IHC. Gosodwyd dotiau coch dros gelloedd caspase 3-positif hollt i ddangos dosbarthiad meinwe wrth chwyddo pŵer isel. Mae saethau coch yn darlunio celloedd caspase 3-positif hollt mewn delweddau chwyddhad pŵer uchel. Barrau =1 mm (brig) a 100 mm (gwaelod). (D) Labelu axoneme Cilial gan immunofluorescence gyda gwrth-asetylated a-tubulin staenio. Dangosir delweddau cynrychioliadol o fformalin, wedi'i fewnosod â pharaffinarenadrannau o Cre littermate control a Six2-Tfam^-/- llygod mutant yn P14 oed. Mae #, ##, ### yn darlunio codennau bach, canolraddol a mawr, yn y drefn honno. Mae saethau gwyn yn darlunio cilia. Barrau =100 mm (brig) a 10 mm (gwaelod).

Ffigur S4. Yn gysylltiedig â Ffigur 2. Mae anactifadu Tfam yn llinach CHWE22 yn atal aeddfedu neffron. Dangosir delweddau cynrychioliadol o fformalin, wedi'i fewnosod â pharaffinarenadrannau o Cre littermate control a Six2-Tfam^-/- llygod mutant yn oed P{{{{10}}}}, P7, a P14 (n=4–6). Dadansoddwyd yr adran gan histocemeg lectin gan ddefnyddio lectin Lotus tetragonolobus (LTL) a Dolichos biflorus agglutinin (DBA) lectin. Dadansoddwyd mynegiant protein tiwmor Wilms 1 (WT1) gan immunofluorescence. Mesurwyd ardaloedd gyda thiwbiau LTL a DBA gyda ImageJ (Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol, Bethesda, MD); cyfrifwyd nifer y glomeruli â llaw. Mae saethau gwyn yn darlunio neffronau yn adweithio â LTL neu DBA, ac mae sêr yn darlunio glomerwli. Bariau ¼ 100 mm. Cynrychiolir data fel SEM cymedrig a chawsant eu dadansoddi gan 2-brawf t Myfyriwr cynffon. **P < 0.01.="" ***p=""><>

Cistancheyn dda iclefyd yr arennau polycystig

Ffigur S5. Yn gysylltiedig â Ffigur 2. Nid yw anactifadu Tfam mewn celloedd epil HOXB7 yn arwain at ddatblygiad syst. (A) Dangosir delweddau cynrychioliadol o fformalin-sefydlog, wedi'i fewnosod â pharaffinarenadrannau o 3-Hoxb heterosygaidd mis oed7-Tfamþ/ a Hoxb7-Tfam^-/- llygod mutant. Cafodd adrannau eu staenio â Masson trichrome (MTrichrome) a'u dadansoddi gan immunofluorescence (IF) ar gyfer mynegiant tdTomato (TDT) a cytochrome oxidase IV (COX IV). Mae arwyddion rhif yn darlunio tiwbiau ymledol mewn rhannau wedi'u lliwio gan MTrichrome, ac mae sêr yn darlunio dwythellau casglu sy'n deillio o gelloedd epilydd tdT-positif HOXB7. (B) IF ac RNA fflwroleuol hybridization in situ (RNA-FISH) o adrannau arennau wedi'u mewnosod gan fformalin, wedi'u mewnblannu â pharaffin o 3-Hoxb heterosygaidd mis oed7-Tfam^-/-a Hoxb7-Tfam^-/- llygod mutant. Dadansoddwyd adrannau ar gyfer mynegiant protein tdT ac AQP2 gan IF a tdT RNA ac is-uned cytochrome c oxidase wedi'i amgodio'n mitochondrially 1 (mt-Co1) mynegiant RNA gan RNA-FISH. Mae seren yn darlunio TD yn mynegi tiwbiau (casglu dwythellau). Yn Hoxb7-Tfam^-/- Nid yw llygod mutant tdT-mynegi tiwbiau yn mynegi AQP2 a mt-Co1. Bar =100 mm. (C) Delweddau cynrychioliadol oarenadrannau o 15-rheolaeth mis oed a Hoxb7-Tfam^-/-llygod wedi'u staenio â MTrichrome. Bar =100 mm. Panel ar y dde, nitrogen wrea gwaed (BUN) o lygod rheoli sbwriel Cre a Hoxb7-Tfam^-/- mutants (n=6 yr un). Cynrychiolir data fel SEM cymedrig a chawsant eu dadansoddi gan ddefnyddio 2-prawf t Myfyriwr cynffon.

Ffigur S6. Yn gysylltiedig â Ffigur 3. Diffyg mynegiant marciwr segment neffron mewn codennau o Six2-Tfam^-/- arennau. Delweddau cynrychioliadol o fformalin-sefydlog, wedi'i fewnosod â pharaffinarenadrannau o Six2-mT/mG;Tfam^-/- llygod yn P14 oed. Dadansoddwyd adrannau yn ôl immunofluorescence gyda gwrthgyrff sy'n benodol ar gyfer protein fflwroleuol gwyrdd gwell (eGFP), megalin, uromodulin, cotransporter sodiwm clorid sy'n sensitif i thiazide (NCC), ac aquaporin 2 (AQP2). Dangosir delweddau cyfun ar y dde. Mae saethau'n nodi strwythurau tiwbaidd sy'n mynegi'r marcwyr segmentau neffron priodol. Bar=100μm.

Ffigur S7. Yn gysylltiedig â Ffigur 4.Tîm^-/- mae celloedd epithelial yn ddiffygiol mewn MT-CO1. (A) Dangosir delweddau cynrychioliadol o fformalin-sefydlog, wedi'i fewnosod â pharaffinarenadrannau o Chwe2-mT/ mG;Tfam^-/- llygod yn P7 oed. Dadansoddwyd adrannau'r arennau yn ôl immunofluorescence ar gyfer mynegi protein fflwroleuol gwyrdd gwell (eGFP) ac is-uned cytochrome c oxidase 1 (MT-CO1) wedi'i amgodio'n mitochondrially. Mae mynegiant eGFP yn dynodi Chwe2-eGFP/ ailgyfuniad Cre-mediated o'r alel Cre-reporter mT/mG. Mae seren yn darlunio tiwbiau eGFP-negyddol (dim ailgyfuniad), sy'n mynegi MT-CO1; mae arwyddion rhif yn darlunio tiwbiau eGFP-positif (ailgyfunol), nad ydynt yn mynegi MT-CO1, sy'n nodi colli swyddogaeth TFAM. Bar =100μm.

Ffigur S8. Yn gysylltiedig â Ffigur 5. Mae anactifadu Tfam mewn SIX2 o gelloedd llinach yn newid mynegiant genynnau metabolig. Perfformiwyd dadansoddiad mynegiant RNA genom-eang gan RNAseq gyda'r cortecs arennol cyfan wedi'i ynysu o sbwriel rheoli Cre a Six2-Tfam^-/- llygod mutant yn P7 oed. Dangosir mapiau gwres sy'n dangos newidiadau ym mhatrymau mynegiant genynnau sy'n ymwneud â ffosfforyleiddiad ocsideiddiol, glycolysis, cludo glwcos, metaboledd asid brasterog, a'r gylchred asid tricarboxylig (n=4 yr un).

Ffigur S9. Yn gysylltiedig â Ffigur 6. Mae mynegiant TFAM yn cael ei leihau mewn codennau arennol Cyscpk/cpk. (A) Dangosir delweddau cynrychioliadol o adrannau arennau wedi'u mewnosod â pharaffin, wedi'u gosod mewn fformalin o Cys^cpk/cpkllygod yn P18 oed. Dadansoddwyd adrannau gan fflwroleuol RNA hybridization in situ ar gyfer is-uned cytochrome c oxidase 1 (mt-Co1) wedi'i amgodio'n mitochondrially ac is-uned bilen synthase ATP wedi'i amgodio'n mitochondrially 6 (mt-Atp6), gan imiwnofflworoleuedd (IF) ar gyfer sianel anion-ddetholus sy'n dibynnu ar foltedd. mynegiant 1 (VDAC), a thrwy histocemeg lectin gyda lotus tetragonolobus lectin (LTL). Mae saethau gwyn yn darlunio celloedd epithelial leinin syst, llinellau toredig yn amlinellu celloedd epithelial leinin syst, ac arwyddion rhif yn darlunio lumina codennau. Bariau ¼ 100 mm (chwyddiad pŵer isel) a 10 mm (chwyddiad pŵer uchel). (B) microsgopeg goleuo strwythuredig 3D (3D SIM) o fath gwyllt sbwrielarenyn P18 oed. Dangosir delweddau cynrychioliadol o adrannau arennau wedi'u staenio â LTL a'u dadansoddi gan IF ar gyfer is-uned cytochrome c oxidase IV (COX IV) a mynegiant VDAC. Bar ¼ 10 mm (delweddau chwyddhad pŵer isel) a 2 mm (delweddau chwyddhad pŵer uchel). Mae seren yn darlunio cnewyllyn cell interstitial.

Ffigur S10. Yn gysylltiedig â Ffigur 7. Mae mynegiant TFAM yn gostwng mewn codennau arennol gan gleifion âclefyd yr arennau polycystig. Lefelau mynegiant TFAM cymharol mewn codennau arennol gan 5 claf âclefyd yr arennau polycystigeu hasesu gan immunohistochemistry (n=5). Dangosir cyfran y codennau â mynegiant TFAM isel neu uchel yn epitheliwm leinin syst. Dangosir nifer y codennau a gyfrifwyd fesul adran mewn gwyn.

Cistanchecynhyrchion yn dda ar gyferclefyd yr arennau polycystig

Wedi'i dynnu o: ' Ffactor trawsgrifio mitocondriaidd epithelial arennau wedi'i dargedu Mae diffyg yn arwain at ddisbyddiad mitocondriaidd cynyddol sy'n gysylltiedig â chlefyd systig difrifol ' gan Ken Ishii1,2,11 et al.

---ArennauRhyngwladol (2021) 99, 657–670

CYFEIRIADAU

1. Gorllewin AP, Shadel GS. DNA mitocondriaidd mewn ymatebion imiwnedd cynhenid ​​​​a phatholeg ymfflamychol. Nat Parch Immunol. 2017; 17:363–375.

2. Chandel NS. Esblygiad mitocondria fel organynnau signalau. Cell Metab. 2015; 22: 204-206.

3. Campbell CT, Kolesar JE, Kaufman BA. Mae ffactor trawsgrifio mitocondriaidd A yn rheoleiddio cychwyn trawsgrifio mitocondriaidd, pecynnu DNA, a rhif copi genom. Biochim Bioffys Acta. 2012; 1819: 921-929.

4. Kukat C, Larsson NG. mae mtDNA yn gwneud tro pedol ar gyfer y niwcleoid mitocondriaidd. Tueddiadau Cell Biol. 2013; 23:457–463.

5. Taanman JW. Y genom mitocondriaidd: strwythur, trawsgrifio, cyfieithu ac atgynhyrchu. Biochim Bioffys Acta. 1999; 1410: 103-123.

6. Larsson NG, Wang J, Wilhelmsson H, et al. Mae ffactor trawsgrifio mitocondriaidd A yn angenrheidiol ar gyfer cynnal a chadw mtDNA ac embryogenesis mewn llygod. Nat Genet. 1998; 18:231–236.

7. Larsson NG, Rustin P. Modelau anifeiliaid ar gyfer clefyd y gadwyn anadlol. Tueddiadau Mol Med. 2001; 7:578–581.

8. Toraco A, Diaz F, Vempati UD, et al. Modelau llygoden o ddiffygion ffosfforyleiddiad ocsideiddiol: offer pwerus i astudio pathobioleg afiechydon mitocondriaidd. Biochim Bioffys Acta. 2009; 1793: 171-180.

9. Hamanaka RB, Glasauer A, Hoover P, et al. Mae rhywogaethau ocsigen adweithiol mitocondriaidd yn hyrwyddo gwahaniaethu epidermaidd a datblygiad ffoligl gwallt. Arwydd Sci. 2013; 6:ra8.

10. Vernochet C, Mourier A, Bezy O, et al. Mae dileu TFAM sy'n benodol i lygod yn cynyddu ocsidiad mitocondriaidd ac yn amddiffyn llygod rhag gordewdra ac ymwrthedd i inswlin. Cell Metab. 2012; 16:765–776.

11. Hall AC, Unwin RJ, Hanna MG, et al. Swyddogaeth arennol a cytopathi mitocondriaidd (MC): mwy o gwestiynau nag atebion? QJM. 2008; 101:755–766.

12. Emma F, Montini G, Parikh SM, et al. Camweithrediad mitocondriaidd mewn clefyd arennol etifeddol ac anaf acíwt i'r arennau. Nat Parch Nephrol. 2016;12:267–280.

13. Kang I, Chu CT, Kaufman BA. Y ffactor trawsgrifio mitocondriaidd TFAM mewn niwroddirywiad: tystiolaeth a mecanweithiau sy'n dod i'r amlwg. FEBS Lett. 2018; 592:793 811.

14. Chung KW, Dhillon P, Huang S, et al. Mae difrod mitocondriaidd a gweithrediad y llwybr STING yn arwain at lid arennol a ffibrosis. Cell Metab. 2019;30:784–799.e785.

15. MH Bach, McMahon AP. Datblygiad arennau mamalaidd: egwyddorion, cynnydd, a rhagamcanion. Oer Spring Harb Perspect Biol. 2012; 4: a008300.

16. Kobayashi A, Valerius MT, Mugford JW, et al. Mae Chwech2 yn diffinio ac yn rheoleiddio poblogaeth effron neffron hunan-adnewyddu aml-rym trwy gydol datblygiad arennau mamaliaid. Cell Bôn-gell. 2008; 3: 169-181.

17. Wredenberg A, Wibom R, Wilhelmsson H, et al. Mwy o fàs mitocondriaidd mewn llygod myopathi mitocondriaidd. Proc Natl Acad Sci UDA A. 2002; 99:15066–15071.

18. Guder WG, Ross BD. Dosbarthiad ensymau ar hyd y neffron. Arennau Int.1984;26:101–111.

19. Guery B, Choukroun G, Noel LH, et al. Sbectrwm cyfranogiad systemig mewn oedolion sy'n cyflwyno gyda briwiau arennol a threiglad genynnol tRNA(Leu) mitocondriaidd. J Am Soc Nephrol. 2003; 14: 2099-2108.

20. O'Toole JF, Liu Y, Davis EE, et al. Mae unigolion sydd â threigladau yn XPNPEP3, sy'n amgodio protein mitocondriaidd, yn datblygu neffropathi tebyg i neffronoffthisis. J Clin Buddsoddi. 2010; 120: 791-802.

21. Alston CL, Morak M, Reid C, et al. Treiglad ffrâmshift MTND5 mitocondriaidd newydd sy'n achosi diffyg I cymhleth ynysig, methiant arennol a myopathi. Anhwylder Neuromuscul. 2010; 20: 131-135.

22. Finsterer J, Scorza FA. Amlygiadau arennol o anhwylderau mitocondriaidd sylfaenol. Cynrychiolydd Biomed 2017; 6:487–494.

23. Fervenza FC, Gavrilova RH, Nasr SH, et al. CKD oherwydd mwtaniad DNA mitocondriaidd newydd: adroddiad achos. Am J Arennau Dis. 2019; 73: 273-277.

24. Huang S, Parc J, Qiu C, et al. Mae Jagged1/Notch2 yn rheoli ffibrosis yr arennau trwy ailraglennu metabolaidd wedi'i gyfryngu gan Tfam. PLoS Biol. 2018;16:e2005233.

25. Shao X, Somlo S, Igarashi P. Ailgyfuniad Cre/lox epithelial-benodol yn y llwybr arennau a'r genhedlol-droethol sy'n datblygu. J Am Soc Nephrol.2002;13:1837–1846.

26. Yu J, Carroll TJ, McMahon AP. Mae draenog sonig yn rheoleiddio amlhau a gwahaniaethu celloedd mesenchymal yn aren metaneffrig y llygoden. Datblygiad. 2002; 129: 5301-5312.

27. Brinkkoetter PT, Bork T, Salou S, et al. Mae glycolysis anaerobig yn cynnal y rhwystr hidlo glomerwlaidd yn annibynnol ar fetaboledd a dynameg mitocondriaidd. Cynrychiolydd Cell 2019;27:1551–1566.e1555.

28. Wanet A, Arnould T, Najimi M, et al. Cysylltu mitocondria, metaboledd, a thynged bôn-gelloedd. Bôn-gelloedd Dev. 2015; 24: 1957-1971.

29. Guay-Woodford LM. Clefydau systig arennol: mae ffenoteipiau amrywiol yn cydgyfarfod ar y cymhlyg cilium/centrosome. Pediar Nephrol. 2006; 21: 1369-1376.

30. Rowe I, Chiaravalli M, Mannella V, et al. Mae metaboledd glwcos diffygiol mewn clefyd yr arennau polycystig yn nodi strategaeth therapiwtig newydd. Nat Med.2013; 19:488–493.

31. Warner G, Hein KZ, Nin V, et al. Mae cyfyngiad bwyd yn lleddfu datblygiad clefyd yr arennau polycystig. J Am Soc Nephrol. 2016; 27: 1437-1447.

32. Chiaravalli M, Rowe I, Mannella V, et al. 2-Mae Deoxy-d-glucose yn lleddfu PKD(clefyd yr arennau polycystig)dilyniant. J Am Soc Nephrol. 2016; 27: 1958-1969.

33. Hildebrandt F, Benzing T, Katsanis N. Ciliopathies. N Engl J Med. 2011;364: 1533–1543.

34. Harris PC, Torres VE. Mecanweithiau genetig a llwybrau signalau mewn clefyd yr arennau polycystig trech awtosomaidd. J Clin Buddsoddi. 2014; 124: 2315-2324.

35. Pazour GJ, Dickert BL, Vucica Y, et al. Mae angen Chlamydomonas IFT88, a'i homolog llygoden, genyn clefyd yr arennau polycystig tg737, ar gyfer cydosod cilia a flagella. J Cell Biol. 2000; 151:709–718.

36. Lin F, Hiesberger T, Cordes K, et al. Mae anactifadu is-uned kinesin-II sy'n benodol i'r arennau yn atal ciliogenesis arennol ac yn cynhyrchu clefyd yr arennau polycystig. Proc Natl Acad Sci US A. 2003;100:5286–5291.

37. Nauli SM, Alenghat FJ, Luo Y, et al. Mae polycystinau 1 a 2 yn cyfryngu mecanosensation yng nghiliwm sylfaenol celloedd yr arennau. Nat Genet. 2003; 33: 129-137.

38. Saadi-Kheddouci S, Berrebi D, Romagnolo B, et al. Datblygiad cynnar clefyd yr arennau polycystig mewn llygod trawsgenig sy'n mynegi mutant actifedig o'r genyn beta-catenin. Oncogene. 2001; 20: 5972-5981.

39. Yamaguchi T, Nagao S, Wallace DP, et al. Mae AMP cylchol yn actifadu B-Raf ac ERK mewn celloedd epithelial syst o arennau polycystig sy'n dominyddu awtosomaidd. Arennau Int. 2003; 63: 1983-1994.

40. Nagao S, Yamaguchi T, Kusaka M, et al. Actifadu arennol kinase allgellog a reoleiddir gan signal mewn llygod mawr â chlefyd yr arennau polycystig sy'n dominyddu awtosomaidd. Arennau Int. 2003; 63:427-437.

41. Qian CN, Knol J, Igarashi P, et al. Neoplasia arennol systig yn dilyn anactifadu amodol o APC yn epitheliwm tiwbaidd arennol llygoden. J Biol Chem. 2005; 280: 3938-3945.

42. Omori S, Hida M, Fujita H, et al. Mae ataliad kinase allgellog a reoleiddir gan signal yn arafu dilyniant clefyd mewn llygod â chlefyd yr arennau polycystig. J Am Soc Nephrol. 2006; 17: 1604-1614.

43. Shibazaki S, Yu Z, Nishio S, et al. Ffurfio codennau ac actifadu'r llwybr kinase allgellog wedi'i reoleiddio ar ôl anactifadu PKD sy'n benodol i'r arennau(clefyd yr arennau polycystig)1. Hum Mol Genet. 2008; 17: 1505-1516.

44. Ishimoto Y, Inagi R, Yoshihara D, et al. Mae annormaledd mitocondriaidd yn hwyluso ffurfio codennau mewn clefyd yr arennau polycystig trech awtosomaidd. Mol Cell Biol. 2017; 37:e00337-17.

45. Jain IH, Zazzeron L, Goli R, et al. Hypocsia fel therapi ar gyfer clefyd mitocondriaidd. Gwyddoniaeth. 2016; 352:54-61.

46. ​​Ferrari M, Jain IH, Goldberger O, et al. Mae triniaeth hypocsia yn gwrthdroi clefyd niwro-ddirywiol mewn model llygoden o syndrom Leigh. Proc Natl Acad Sci US A. 2017;114:E4241–E4250.