Datblygiadau mewn Dermatoleg Gan Ddefnyddio Arloesedd DNA Aptamer "Aptamin C": Atal Straen Ocsidiol a Mwyhau Effeithiau Fitamin C Trwy Wrthocsidiad

joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Sooho Choi PhD1|Jeongmin Han Ph.D. Ymgeisydd2|Ji Hyun Kim MS Ymgeisydd1|A‐Ru Kim Ph.D. Ymgeisydd3|Sang‐Heon Kim Ph.D. Ymgeisydd3|Weontae Lee Ph.D., athraw2|Moon‐Young Yoon Ph.D., athro3|Gyuyoup Kim PhD1|Yoon‐Seong Kim Ph.D., Athro1

Haniaethol

Cefndir:Fitamin C(a elwir hefyd yn asid L-ascorbig) yn chwarae rhan hanfodol mewn lleihau rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) ac adfywio celloedd trwy amddiffyn celloedd rhag straen ocsideiddiol. Er bod fitamin C yn cael ei ddefnyddio'n helaeth mewn marchnadoedd cosmetig a therapiwtig, mae cryn dystiolaeth bod fitamin C yn dioddef yn hawddocsidiadgan aer, pH, tymheredd, a golau UV wrth storio. Mae'r diffyg hwn o fitamin C yn lleihau ei nerth fel gwrthocsidydd ac yn lleihau oes silff cynhyrchion sy'n cynnwys fitamin C fel ei gynhwysyn. Er mwyn goresgyn diffyg fitamin C, rydym wedi datblygu Aptamin C, sef aptamer DNA arloesol sy'n gwneud y mwyaf o effeithiolrwydd gwrthocsidiol fitamin C trwy rwymo i ffurf llai o fitamin C ac oedi eiocsidiad.

Dulliau:Penderfynwyd ar rwymo Aptamin C â fitamin C gan ddefnyddio dadansoddiad ITC. Cynhaliwyd arbrawf TGCh gyda 0.2 mmol/Lfitamin Ca gafodd ei chwistrellu 25 gwaith mewn aliquots 2 µL i mewn i'r gell sampl 1.8 mL sy'n cynnwys yr Aptamin C mewn crynodiad o 0.02 mmol/L. Gosodwyd y data ar isotherm rhwymo un safle gan ddefnyddio rhaglen tarddiad ar gyfer TGCh v.5.0.

Canlyniadau:Ymchwilio i effaith Aptamin C afitamin Ccymhleth mewn crwyn dynol, cynhaliwyd profion in vitro a chlinigol. Gwelsom fod y cymhleth o Aptamin C a fitamin C yn sylweddol effeithiol o ran gwella wrinkle, effaith gwynnu, a chynnydd hydradiad. Yn y prawf clinigol, dangosodd y pynciau a gafodd eu trin â'r cyfadeilad welliant dramatig mewn cosi croen a chosi. Ni chyflwynwyd unrhyw adwaith andwyol gan gyfadeilad Aptamin C yn y prawf.

Casgliad:Gyda'i gilydd, dangosodd y canlyniadau hyn y dylai Aptamin C, cyfansoddyn newydd arloesol, gael ei wasanaethu o bosibl fel cynhwysyn cosmeeutical allweddol ar gyfer amrywiaeth o gyflyrau croen.

GEIRIAU ALLWEDDOLgwrthocsidiad, Aptamin C (Atamer rhwymo fitamin C),ocsidiad, straen ocsideiddiol,fitamin C(asid L-asgorbig)

cistanchemeddu ar allu cryf o gwrthocsidiad

1|RHAGARWEINIAD

Mae rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) yn rywogaethau cemegol cemegol adweithiol sy'n cynnwys ocsigen, sy'n chwarae rhan bwysig mewn signalau celloedd a homeostasis.1-3 Mae'r rhain yn cynnwys nid yn unig effeithiau cadarnhaol megis anwytho genynnau amddiffyn lletyol a symud systemau cludo ïon ond hefyd rolau mewn apoptosis (marwolaeth celloedd wedi'i raglennu). Gall lefelau 4,5ROS gael eu cynyddu gan straen amgylcheddol, gan arwain at ddifrod i'r strwythurau celloedd.3 Gelwir y ffenomen hon yn "straen ocsideiddiol." Straen ocsideiddiol yw un o brif achosion clefydau amrywiol gan gynnwys clefydau niwroddirywiol, clefyd Lou Gehrig, awtistiaeth, sglerosis ymledol, a chlefydau croen.6-15 Ymhellach, mae straen ocsideiddiol yn cael dylanwad uniongyrchol ar y broses heneiddio croen16; mae proteinau, lipidau, a DNA yn ymateb yn sensitif i straen ocsideiddiol a achosir gan ROS.17 Mae gwrthocsidyddion yn hynod effeithiol wrth amddiffyn y croen gan eu bod yn ymateb yn uniongyrchol i ROS gan eu hatal rhag cyrraedd y moleciwlau targed biolegol.18,19 Gwrthocsidyddion megisfitamin C, fitamin E, coenzyme C10, a chyfansoddion polyphenolic amddiffyn croen rhag difrod a achosir gan ROS. Mae gwrthocsidyddion felly yn helpu i atal a thrin afiechydon croen amrywiol ac arafu'r broses heneiddio croen.20 Mae defnyddio fitamin C mewn diwydiannau yn bennaf oherwydd ei briodweddau gwrthocsidiol, sy'n ganlyniad ifitamin Cgallu i niwtraleiddio radicalau rhydd o ocsigen, trwy broses a elwir yn sborionu radicalaidd.21,22 Fodd bynnag, oherwydd yr un priodweddau gwrthocsidiol hyn, mae'r moleciwl ei hun yn gynhenid ​​agored i ddiraddio trwyocsidiad. Er mwyn datrys y broblem hon, rydym wedi datblygu Aptamin C, atamer DNA sy'n rhwymo'n benodol i fitamin C ac yn atal ocsidiad fitamin C. Mae aptamers yn oligonucleotidau un edefyn DNA neu RNA sy'n gallu rhwymo ystod eang o foleciwlau yn ddetholus. Mae aptamers yn cael eu hadnabod yn gyffredin trwy ddull dethol in vitro y cyfeirir ato fel Esblygiad Systematig Ligands trwy gyfoethogi esbonyddol neu "SELEX." Gwelsom fod Aptamin C yn atal yocsidiadfitamin C o sawl cyfrwng ocsideiddio ac yn cynnal y gweithgaredd gwrthocsidiol yn ystod storio hirdymor. I gadarnhau asesiad diogelwch Aptamin C, cynhaliwyd arbrofion ar y lefel gellog a'u cymhwyso'n uniongyrchol i bobl ac ni welwyd unrhyw wenwyndra. Mae clefydau croen fel dermatitis atopig, soriasis, ac acne yn gysylltiedig â'r ymateb imiwn a ROS.23Fitamin Cyn gallu tynnu'r ROS ac mae ganddo effaith gwrth-lid.24 Mae Aptamin C yn atalocsidiadfitamin c ac yn gwneud y mwyaf o'i effeithiolrwydd trwy ei ryddhau'n araf. Rydym, felly, yn disgwyl y bydd cymhlyg Aptamin C-fitamin C yn dangos yr effaith synergetig.

2|DEUNYDDIAU A DULLIAU

2.1|Sgrinio Aptamer yn erbyn fitamin C gyda llai o graphene-ocsid

Cyflawnwyd y dull hwn trwy addasu dull yr ymchwil blaenorol.25 Yr ymgeiswyr ssDNA a all rwymo'n benodol ifitamin Ceu datblygu o lyfrgell ssDNA ar hap yn cynnwys tua 1X1018 o wahanol ddilyniannau. Ar gyfer y llyfrgell ssDNA, fe wnaethom ddefnyddio dilyniant wedi'i wneud yn arbennig o faint yw 60mer ac sy'n cynnwys 30 o ddilyniannau niwcleotid a gynhyrchir ar hap a safle preimio ar gyfer ymhelaethu (5′-ATGCGGGATCCCGCGC-(N)30-GCGCGAAGCTTGCGC-3′). Fe wnaethom berfformio cyfanswm o bum rownd wrth newid y cyflwr arbrofol i ddewis dilyniant mwy penodol. Cyfanswm cyfaint yr adwaith oedd 200 μL. Tua 20 μL o glustogfa rhwymol 10 × (ychwanegwyd 10 × PBS 10 mmol/L MgCl2), 80 μL o rGO (5 mg/mL, wedi'i wanhau mewn dŵr), a 200 picomol o lyfrgell ssDNA (20 μL o stoc 100 μmol/L ) eu hychwanegu a'u ffeilio dH2O i 200 μL. Aeth yr adwaith ymlaen am 30 munud i glymu'r llyfrgell ssDNA ar rGO, ac yna, cafodd y cymysgedd ei fewngyrchu ar 20 000 g am 20 munud i ddileu'r uwchnatant. Golchwyd y pelen rGO 1 amser gyda 200 μL o glustogiad rhwymo sydd yr un crynodiad â chyflwr rhwymo targed pob rownd. I eliwtio yr ymgeiswyr, 200 nanomoles ofitamin Cwedi'i wanhau mewn 200 μL o byffer rhwymo eu hychwanegu at y pelen rGO, a gwnaeth y cam elution am 1 awr. Rhannwyd ssDNA eluted â centrifugation fe'i gwnaed ar 20 000 g am 20 munud a'i chwyddo. Gwnaethom wlybaniaeth EtOH i ddileu amhureddau ac eithrio ssDNA cyn ymhelaethu. Gwnaethom PCR anghymesur i gael ssDNA chwyddedig. Cymhareb preimio anfon ymlaen i breimiwr gwrthdro PCR anghymesur oedd 10:1. Gwnaethom electrofforesis ar gel agarose 2.5 y cant i gadarnhau'r cynnyrch PCR gydag ychydig o ficrolitrau ohono. Ni all PCR anghymesur gynhyrchu ssDNA yn unig. Felly, gwnaethom y dull gwasgu a socian i ynysu'r ymgeiswyr ssDNA. Ar gyfer y dull, gwnaethom electrofforesis ar gel brodorol polyacrylamid 12 y cant a staenio'r gel â bromid ethidium (EtBr). Er mwyn gwahanu DNA llinyn dwbl (dsDNA) a ssDNA, cafodd y rhan o gel a staeniwyd gan ssDNA ei dorri allan, malurio, a'i dynnu ssDNA gyda byffer gwasgu a mwydo (500 mmol / L NH4OAc, 0.1 y cant SDS, 0.1 mmol / L EDTA) dros nos. Gwahanwyd y gel maluriedig gan centrifugation. Mae'r uwchnatant sy'n cynnwys ssDNA yn cael ei grynhoi a'i buro trwy wneud dyddodiad EtOH. Casglwyd ssDNA sych gyda dH2O wedi'i sterileiddio a defnyddiwyd hwn ar gyfer y rownd nesaf fel llyfrgell.

cynhwysion naturiolcistanche amazon

2.2|Arbrawf calorimetreg titradiad isothermol (ITC).

Perfformiwyd arbrawf calorimetreg titradiad isothermol gan ddefnyddio system VP-ITC (MicroCal Inc Northampton) ar 25 gradd mewn halwynog byffer ffosffad yn cynnwys 1 mmol/L magnesiwm clorid (pH 7.4). Cyn pob arbrawf titradiad, Aptamin C 2 mL afitamin CCafodd 600 µL samplau eu dadnwywi am 30 munud o dan wactod, heb eu troi, ar dymheredd ychydig raddau islaw tymheredd yr arbrawf. Fe wnaethom baratoi 0.2 mmol/L fitamin C a gafodd ei chwistrellu 25 gwaith mewn aliquots 2 µL i mewn i'r gell sampl 1.8 ml sy'n cynnwys yr Aptamin C mewn crynodiad o 0.02 mmol/L. Gosodwyd y data ar isotherm rhwymo un safle gan ddefnyddio rhaglen tarddiad ar gyfer ITC v.5.0 (MicroCal Inc).

2.3|Profion microplate yn seiliedig ar fflworoleuedd ar gyfer ocsidiad fitamin C

Ocsidiadofitamin Cei fesur trwy ganfod y cynnyrch ocsidiedig dehydroascorbate (DHA) gan ddefnyddio fersiwn wedi'i addasu o'r dull a ddisgrifir gan Vislisel et al.7 Yn y dull hwn, canfyddir DHA trwy adwaith ag o-phenylenediamine (OPDA) i ffurfio'r cynnyrch cyddwysiad fflwroleuol 3‐( dihydroxyethyl) furo[3,4-b] quinoxaline-1-one. Perfformiwyd yr assay fel a ganlyn mewn platiau ffynnon du 384 (Greiner Bio-One). Cafodd aptamers eu toddi yn gyntaf mewn halwynog wedi'i glustogi â ffosffad, pH 7.2, sy'n cynnwys 1mM MgCl2, ar grynodiad o 200 µmol/L yna eu plygu trwy wresogi i 95 gradd a'u gadael i oeri'n araf i dymheredd ystafell am 15 munud. Yna cafodd yr addaswyr plyg eu gwanhau 1:1 (v:v) i doddiant ffres o 5 mmol/Lfitamin Cmewn byffer assay [50 mmol/L sodiwm asetad, 1 y cant (w/v) BSA, 0.05 y cant (v/v) Tween 20, 1mM MgCl2 (Sigma, pob cydran) wedi'i addasu i pH 5.5], a deorwyd y gymysgedd am 30 munud ar dymheredd yr ystafell, i ganiatáu i addaswyr rwymo cyn ychwanegu ocsidydd. Yna ychwanegwyd ocsidyddion at yr hydoddiannau fitamin C/aptamer mewn crynodiadau o (EM) H2O2 (Sigma). Cafodd ocsidyddion eu gwanhau ymlaen llaw i'w crynodiadau gweithio mewn byffer assay. Yna cafodd samplau eu deor ar dymheredd ystafell am 10 munud cyn ychwanegu OPDA (Sigma) ar grynodiad o 5.5 mmol/L mewn byffer assay. Yn syth ar ôl ychwanegu OPDA, penderfynwyd fflworoleuedd y samplau ar 425 nm gan ddefnyddio darllenydd plât SpectraMax® i3X (Dyfeisiau Moleciwlaidd) gyda chyffro ar 345 nm, dros gwrs amser o 45 munud gyda mesuriadau'n cael eu gwneud bob 60 eiliad. Roedd yr holl samplau a llestri sy'n cynnwys adweithyddion wedi'u lapio mewn ffoil i'w hamddiffyn rhag golau yn ystod yr holl ddeoriadau a gyflawnwyd ar gyfer y profion fflworoleuedd.

2.4|Mesur gostyngiad fitamin C gan ddefnyddio DCPIP (2,6-Dichlorophenolindophenol)

I benderfynu ar y gostyngiad ofitamin C, cynhaliom yr arbrofion gan ddefnyddio'r adwaith DCPIP. Mae fitamin C yn adweithio â DCPIP, gan newid y lliw o las i ddi-liw. Cafodd y fitamin C a baratowyd ei drin â 5 y cant Aptamin CTM, a chafodd y fitamin C heb ei drin ei ddeor ar dymheredd ystafell am 8 wythnos. Mesurwyd y sampl ar ôl 2, 4, ac 8 wythnos. Ychwanegwyd tua 2 ml o DCPIP at y fflasg gonigol gan ddefnyddio pibed, ac ychwanegwyd y fitamin C cyntaf heb ei drin nes i'r hydoddiant fynd yn ddi-liw. Mae swm yfitamin Cychwanegwyd ei fesur a'i ailadrodd gyda samplau eraill. Cyfrifwyd graddau gostyngiad pob sampl yn ôl y data hwn.

2.5|Astudiaeth in vitro o effaith gwrth-wrinkle mewn ffibroblastau dermol dynol

Er mwyn gwerthuso hyfywedd celloedd mewn ffibroblastau dermol dynol, cafodd celloedd eu trin â chrynodiadau terfynol gwahanol o Aptamin C gydafitamin C(Aptamin C ug ynghyd â fitamin C ug/mL) {{0}}.01 plws 0.5 ug/mL, 0.1 plws 5 ug/mL, 0.5 plws 25 ug /mL, 1 plws 50 ug/mL, a 2 plws 100 ug/mL. Ac yna, cafodd celloedd eu trin mewn crynodiadau o Aptamin C â fitamin C i ganfod colagen mewngellol, collagenase mewngellol (MMP-1), ac elastase.

Dewiswyd ffibroblastau dermol dynol (HDFs) ar sail "Canllawiau ar gyfer gwerthuso effeithiolrwydd colur swyddogaethol (ΙI)" MFDS. Cafodd HDFs eu meithrin mewn cymysgedd DMEM/F12 3:1 cymysgedd glwcos uchel wedi’i ategu â 10 y cant FBS ac 1 y cant Gwrthfiotig-Antimycotig mewn awyrgylch CO2 llaith 5 y cant ar 37˚C.

Cafodd yr HDFs (5 × 104 cell/ffynnon) eu hadu i blatiau 24-ffynnon a'u deor am 24 awr a chawsant eu trin â chrynodiadau amrywiol o Aptamin C gydafitamin Ca'i ddeor am 24 awr. Ar ôl 24 awr, casglwyd y supernatant, a mesurwyd swm y procolagen a ryddhawyd i'r cyfrwng ar 450 nm gan ddefnyddio Pecyn ELISA Math IC-Peptid Procollagen (PIP). Cafodd gradd y cynhyrchiad colagen ei raddnodi yn ôl cyfanswm y cynnwys protein a'i gymharu â TGF-1 fel rheolaeth gadarnhaol. Defnyddiwyd cyfryngau heb ddeunyddiau prawf fel rheolaeth toddyddion.

Cafodd yr HDFs (5 × 104 cell/ffynnon) eu hadu i blatiau 24-ffynnon a'u deor am 24 awr a chawsant eu trin â chrynodiadau amrywiol o Aptamin C gydafitamin Ca'i ddeor am 48 awr. Ar ôl 48 awr, mesurwyd gweithgaredd collagenase ar 450 nm gan ddefnyddio Pecyn ELISA Dynol MMP-1. Aseswyd gweithgaredd MMP-1 yn ôl cyfanswm cynnwys protein a'i gymharu â TGF-1 fel rheolaeth gadarnhaol. Defnyddiwyd cyfryngau heb ddeunyddiau prawf fel rheolaeth toddyddion.

Mynegwyd yr holl ddata fel gwyriad safonol cymedrig ± a daeth o 3 arbrawf annibynnol. Cynhaliwyd dadansoddiad ystadegol trwy brawf-t samplau annibynnol gan ddefnyddio rhaglen feddalwedd SPSS® (IBM) ar lefel arwyddocâd P <>

2.6|Mesur crychau croen gan system dadansoddi delweddau 3D

Cymerodd dau ar hugain o bynciau benywaidd (oedran cyfartalog: 50.05 ± 2.94 oed) ran yn yr astudiaeth hon. Gwerthuswyd wrinkle croen traed y frân gan system dadansoddi delweddau 3D ar waelodlin, 4 ac 8 wythnos. Gwerthuswyd hydradiad croen yn ôl dull cynhwysedd, a gwerthuswyd TEWL trwy ddull tryledu dŵr wyneb y croen ac elastigedd croen trwy ddull sugno ar waelodlin, 2, 4, ac 8 wythnos ar ôl y driniaeth. Hefyd, llenwyd hunan-holiaduron ynghylch effeithiolrwydd gan bynciau 2 a 4 ac 8 wythnos, a llenwyd defnyddioldeb gan bynciau 8 wythnos ar ôl y driniaeth. Cafodd yr holl ddata a gafwyd eu dadansoddi'n ystadegol gan feddalwedd SPSS®. Gwerthuswyd paramedrau wrinkle traed y frân gan ddefnyddio PRIMOS® Premium (GFMesstechnik GmbH). Roedd y system hon yn caniatáu dadansoddiad meintiol o garwedd, dyfnder, arwynebedd a chyfaint yr ymwthio allan ar y crychau croen. Dadansoddwyd y ddelwedd yn yr un ardal o ran paramedrau wrinkle croen (1, Dyfnder cyfartalog wrinkles; 2, dyfnder cymedrig wrinkle mwyaf; 3, Max. dyfnder wrinkle mwyaf; 4, Cyfanswm arwynebedd wrinkle; 5, Cyfanswm wrinkle cyfaint; 6, , Cyfanswm wrinkles ffactor ffurf; 7, Cyfanswm hyd y crychau; 8, Ra; 9, Ry; a 10, Rz) ar y llinell sylfaen, 4 ac 8 wythnos ar ôl triniaeth gan Primos 5.8 E ver. Meddalwedd.

3|CANLYNIADAU

3.1|Roedd angen dull trwyadl o baratoi byffer i berfformio rGO‐SELEX yn llwyddiannus gyda tharged ansefydlog

Cafodd y llyfrgell ssDNA, a oedd yn rhwym i rGO trwy π‐π pentyrru rhyngweithiadau rhwng modrwyau aromatig wyneb y graphene a'r basau DNA 26,27 a ssDNA heb ei rwymo ar rGO, ei wahanu a'i ddileu gan allgyrchu. Cafodd ssDNA a oedd wedi'i arsugno ar wyneb rGO eu hegluro trwy driniaeth gyda'r cyfansawdd targed. Yn ôl adroddiadau llenyddiaeth, mae cydffurfiad yr aptamer yn newid ar ôl rhwymo'r targed a thrwy wanhau'r rhyngweithiadau pentyrru π‐π â rGO.28-31 Ailadroddwyd y broses hon am bum rownd. Aeth pob rownd ddilynol ymlaen gydag amodau clustogi llymach ac amseroedd elution byrrach. Roedd y perfformiad hwn yn ein galluogi i gynnal ssDNA gyda gwell penodoldeb i'r cyfansoddion targed.

Rhoddodd data NGS y llyfrgell gyfoethog a gynhyrchwyd gan y broses rGO-SELEX 404071 o ddilyniannau. Dewiswyd 119 o ddilyniannau o'r data hwn, eu didoli i 11 grŵp yn seiliedig ar debygrwydd strwythur, a dewis dilyniannau cynrychioliadol ar gyfer ymgeiswyr addas (Ffigur 1A).

3.2|Aptamin C dewis

Rhagfynegwyd adeileddau eilaidd ymgeiswyr Aptamin C trwy ddefnyddio meddalwedd rhydd M‐Plyg.32,33 Cafodd yr ymgeiswyr eu grwpio yn ôl eu lleoliad, hyd, siâp, a nifer coesyn a dolen y strwythur potensial uchaf (Ffigur 1B). DHA, ocsid ofitamin C, yn cael ei ganfod gan ei adwaith ag o‐phenylenediamine (OPDA) sy'n chwarae'r rôl fel dangosydd.34 Os yw atamer yn rhwymo ac yn atal eiocsidiad, i fitamin C ac yn atal ei ocsidiad, bydd y signal fflworoleuedd o 3-(dihydroxyethyl)-furo-[3,4-b] quinoxaline-1-one, cynnyrch cyddwysiad fitamin C ac OPDA, yn is na'r hyn o rheolaeth dim-aptamer. Plot o bob ymgeisydd atamer wedi'i gymysgu â fitamin C ac ocsidydd, gyda'r rheolaethau cadarnhaol,fitamin Cynghyd â dilyniannau ocsidydd a sgramblo wedi'u cymysgu â fitamin C ac ocsidydd (Ffigur 1C). Dangoswyd bod pump aptamers, Aptamin Cb, Cc, Cf, Cg, a Ck, yn cael effeithiau gwrthocsidiad.

3.3|Atal ocsidiad fitamin C gan Aptamin C

Mae gan Aptamin C affinedd rhwymol uchel ar gyferfitamin C. Penderfynwyd ar rwymo Aptamin C â fitamin C gan ddefnyddio dadansoddiad ITC. O rwymo iso-therm, gellir cael enthalpi (ΔH), entropi (ΔS), a stoichiometreg (n) yr adwaith rhwymol. Canfuwyd rhwymiad ecsothermig Aptamin Cb o fesuriad ITC, a chyfrifwyd yr enthalpi (ΔH) fel 30 2.5 ± 3.788, cyfrifwyd entropi (ΔS) fel 18.9, cyfrifwyd stoichiometry(n) fel 56.7 ± {{21 }}.426, a chyfrifwyd y cysonion daduniad (Kd) fel 2.13uM ar gyfer fitamin C. Canfuwyd rhwymiad ecsothermig Aptamin Cf o fesuriad ITC, a chyfrifwyd yr enthalpi (ΔH) fel 279.2 ± 2.992, cyfrifwyd entropi (ΔS). fel 18.4, cyfrifwyd stoichiometry(n) fel 167 ± 1.15, a chyfrifwyd y cysonion daduniad (Kd) fel 0.89uM ar gyfer fitamin C. Canfuwyd rhwymiad ecsothermig Aptamin Ck o fesuriad TGCh, a'r enthalpi (ΔH). ) wedi'i gyfrifo fel 250.4 ± 3.742, cyfrifwyd entropi (ΔS) fel 19.8, cyfrifwyd stoichiometry(n) fel 82.2 ± 0.732, a chyfrifwyd y cysonion daduniad (Kd) fel 0.90 µmol/L ar gyfer fitamin C (Ffigur 2A). Mae'r mesuriadau ITC yn datgelu bod y newid mewn entropi ar gysylltiad â'r Aptamin C yn brif ysgogiad ar gyferfitamin C. Er mwyn atalocsidiado fitamin C yn y cyflwr hylif, paratowyd yr holl doddiannau â dŵr deionized wedi'i drin â nitrogen. Mynegwyd y fflworoleuedd a'i ddadansoddi'n feintiol pan rwymwyd OPDA (o‐phenylenediamine) i DHA a gynhyrchir ganocsidiado fitamin C. Cymharwyd a chadarnhawyd graddau ocsidiad fitamin C yn ôl y crynodiad o Aptamin C (125, 250, 500, a 1000 nmol/L) gan assay OPDA. Dangosodd y canlyniadau fod yfitamin Croedd trosi i asid dehydroascorbig yn arafach pan oedd crynodiad Aptamin C yn uwch. (Ffigur 2B). Mae'r data hyn yn profi bod Aptamin C yn atalydd dos-ddibynnol o ocsidiad fitamin C.

Fe wnaethom gynnal arbrofion i benderfynu a allai Aptamin C atal yocsidiadfitamin C dros gyfnod hir o amser. Aptamin C wedi'i drin ar y cydfitamin C, a fitamin C heb ei drin yn agored i olau ac yn cael sefyll ar dymheredd ystafell am 8 wythnos. O ganlyniad, pan adawyd fitamin C heb ei drin ar ei ben ei hun, gostyngwyd gradd y gostyngiad i lai na hanner mewn 2 wythnos, a chafodd bron pob un ohonynt eu ocsideiddio ar ôl 4 wythnos. Ym mhresenoldeb Aptamin C, gostyngwyd fitamin C i tua hanner cymaint ag 8 wythnos (Ffigur 2C). Mae hyn yn awgrymu bod Aptamin C yn atal ocsidiad fitamin C dros gyfnod hir o amser.

bodybuilding cistanche

3.4|Dadansoddiad o weithgaredd collagenase mewngellol (MMP-1) a cholagen

Ar ddadansoddiad o weithgaredd collagenase, gostyngwyd cynhyrchiad matrics metalloproteinase-1 (MMP-1) yn sylweddol mewn modd dibynnol ar ddos, gyda 7.{8}}6 y cant , 9.29 y cant , a 31.81 y cant mewn crynodiadau o {{1{} {12}}}}.01 plws 0.5 ug/mL, 0.1 plws 5 ug/mL, a 0.5 plws 25 ug/ mL, yn y drefn honno (Ffigur 3A). Wrth ddadansoddi synthesis colagen, cynyddwyd y math procolagen Ι carboxy-terminal peptide (PIP) yn sylweddol mewn modd sy'n dibynnu ar ddos, gyda 25.{20}} cynnydd y cant ar 0.01 ynghyd â 0.5 ug/mL , 41.99 y cant ar 0.1 ynghyd â 5 ug/mL, a 71.18 y cant ar 0.5 ynghyd â 25 ug/mL (Ffigur 3B).

3.5|Astudiaeth glinigol o effeithiau gwella wrinkle croen ar groen dynol

Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol o baramedrau wrinkle gan system dadansoddi delweddau 3D, i werthuso effeithiau gwella wrinkle croen y cynnyrch prawf ar groen dynol. O'i gymharu â'r grŵp rheoli, gostyngwyd y paramedr "Dyfnder cyfartalog wrinkles" 4.77 y cant ar 4 wythnos a 4.25 y cant ar 8 wythnos, gostyngodd paramedr "dyfnder cymedrig wrinkle mwyaf" 3.37 y cant yn 4 wythnos a 4.53 y cant ar 8 wythnos, " Max. dyfnder wrinkle mwyaf" paramedr yn gostwng 4.36 y cant ar 4 wythnos a 7.19 y cant ar 8 wythnos, "Cyfanswm hyd wrinkles" paramedr yn gostwng 1.61 y cant ar 4 wythnos a 2.67 y cant ar 8 wythnos, "Ra" paramedr yn gostwng 4.22 y cant ar 4 wythnos a 3.90 y cant ar 8 wythnos, "Ry" paramedr yn gostwng 2.66 y cant ar 4 wythnos a 7.11 y cant ar 8 wythnos, "Rz" paramedr yn gostwng 3.69 y cant ar 4 wythnos a 6.22 y cant ar 8 wythnos, y gostyngiad yn 3.69 y cant ‐7.11 y cant (Ffigur 4).

4|CASGLIAD

Fitamin Cyn foleciwl masnachol bwysig ond ansefydlog, felly mae gwella ei sefydlogrwydd o ddiddordeb i wahanol sectorau marchnad. Mae ein gwaith yn dangos bod Aptamin C, addasyddion DNA, o bosibl yn ymestyn yr oes silff ac yn cynyddu cryfder cynhyrchion o'r fath trwy ohiriofitamin C ocsidiadmewn ateb. Fe wnaethom arddangos effeithiolrwydd clinigol cyfadeilad Aptamin C o ran gwella crychau a hydradu croen. Gallai cymhleth Aptamin C hefyd helpu i leddfu croen yn llym.

gwella gwynnu croen