Antimelanogenesis A Gweithgareddau Croen-amddiffynnol O Panax Ginseng Calyx Ethanol Dyfyniad Rhan 1

ABSENOLDEB

Cefndir: Mae effeithiau gwrthocsidiol Panax ginseng wedi'u hadrodd mewn sawl erthygl; fodd bynnag, ychydig a wyddys am yr effaith gwrth-melanogenesis, effaith amddiffynnol y croen, a mecanwaith cellog Panax ginseng, yn enwedig o P. ginseng calyx. Er mwyn deall sut mae echdyniad ethanol o P. ginseng calyx aeron (Pg-C-EE) yn cael effeithiau croen-amddiffynnol, buom yn astudio ei weithgareddau mewn melanocytes actifedig a keratinocytes a achosir gan rywogaethau ocsigen adweithiol (ROS).

Dulliau: I gadarnhau canlyniad gwrth-melanogenesis Pg-C-EE, dadansoddwyd synthesis melanin a secretion a RNA negesydd a lefelau mynegiant protein o enynnau cysylltiedig. Mae uwchfioled B (UVB) a hydrogen perocsid (H2O2) yn achosi difrod i gelloedd trwy gynhyrchu ROS. Er mwyn archwilio a yw Pg-C-EE yn atal y difrod hwn, gwnaethom gynnal profion hyfywedd celloedd a dadansoddiadau mynegiant genynnau a gweithrediad trawsgrifio.

Canlyniadau: Roedd Pg-C-EE yn atal synthesis melanin a secretion trwy rwystro ensymau rheoleiddiol protein activator 1 megis p38, kinases allgellog a reoleiddir gan signal (ERKs), ac ymateb cylchol adenosine monophosphate protein elfen-rhwymo. Roedd Pg-C-EE hefyd yn atal cynhyrchu ROS wedi'i achosi gan H2O2 ac UVB. Gostyngodd triniaeth â Pg-C-EE fynegiant metalloproteinasau matrics, kinases protein a weithredir gan mitogen, a hyaluronidasau a chynyddodd y gyfradd goroesi celloedd.

Casgliad: Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gallai Pg-C-EE gael eiddo gwrth-melanogenesis ac eiddo croen-amddiffynnol trwy reoleiddio protein activator 1 a signalau protein elfen-rwymol ymateb adenosine monophosphate cylchol. Gellir defnyddio Pg-C-EE fel cyfrwng gwella croen, gydag effeithiau cadw lleithder a gwynnu.

1. Rhagymadrodd

Mae arwynebau ein corff yn cael eu hamddiffyn gan epithelia, sy'n gosod rhwystr corfforol rhwng y byd mewnol a'r byd allanol sy'n cynnwys pathogenau. Mae celloedd epithelial yn cael eu dal gan gyffyrdd tynn, sydd i bob pwrpas yn ffurfio sêl yn erbyn yr amgylchedd allanol gan gynnwys haint â phathogenau a cholli dŵr gormodol [1]. Mewn bodau dynol, y croen yw organ fwyaf y system integumentary. Mae gan y croen dair haen o feinwe ectodermaidd: epidermis, dermis, a meinwe isgroenol (hypodermis). Yr haen epidermis yw haen allanol y croen ac mae'n cynnwys celloedd Merkel, keratinocytes, melanocytes, a chelloedd Langerhans. Mae'r haen hon yn chwarae rhan bwysig wrth gynnal tymheredd y corff. Mae'r haen dermis, sydd wedi'i lleoli o dan haen yr epidermis, yn cynnwys llawer o derfynau nerfau, ffoliglau gwallt, chwarennau chwys, chwarennau sebaceous, chwarennau apocrine, pibellau lymffatig, a phibellau gwaed. Mae'r meinwe isgroenol yn gorwedd o dan yr haen dermis ac mae'n cynnwys meinwe gyswllt rhydd, meinwe adipose, elastin, ffibroblastau, macrophages, ac adipocytes [2]. Mae melanin yn haen waelodol yr epidermis yn chwarae rhan bwysig wrth bennu lliw croen a melanogenesis. Cynhyrchir melanin o fewn y croen mewn celloedd o'r enw melanocytes. Er nad yw melanogenesis yn cael ei ddeall yn llawn, mae sylweddau sy'n ysgogi cynhyrchu melanin yn hysbys, megis hormon sy'n ysgogi melanocyte, forskolin, tocsin colera, analogau isobutylmethylxanthine, diacylglycerol, arbelydru uwchfioled (UV), a metabolion fitamin D [2], sy'n sbarduno melanogenesis a afiechydon difrifol fel clefyd Cushing a thiwmor melanocytig. Mae Tyrosinase, ensym sy'n gysylltiedig â melanogenesis, yn ocsidas sy'n rheoli cynhyrchu melanin. Mae'r ensym hwn yn ymwneud â hydroxylation monophenol a thrawsnewid o-diphenol i'r o-quinone cyfatebol, sydd yn ei dro yn cael ei drawsnewid yn felanin trwy sawl adwaith. Mae tyrosinase i'w gael mewn melanosomau ynghyd â phrotein sy'n gysylltiedig â tyrosinase-1 (TRP-1) a phrotein sy'n gysylltiedig â thyrosinase-2 (TRP-2). Mae genynnau sy'n gysylltiedig â melanogenesis yn cynnwys ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microphthalmia (MITF), melanophilin (MLPH), protein sy'n gysylltiedig â ras Rab27a, a myosin-5A (Myo5A). Mae Tyrosinase, TRP-1, a TRP-2 yn ymwneud â synthesis melanin, tra bod MLPH, Rab27a, a Myo5A yn chwarae rhan mewn secretion melanin [3e5].

Yn ôl astudiaethau perthnasol,cistancheyn llysieuyn cyffredin sy'n cael ei adnabod fel "y llysieuyn gwyrthiol sy'n ymestyn bywyd". Ei brif gydran yw cistanoside, sydd ag effeithiau amrywiol megis gwrthocsidiol, gwrthlidiol, a hyrwyddo swyddogaeth imiwnedd. Y mecanwaith rhwngcistancheagwynnu croenyn gorwedd yn effaith gwrthocsidiol glycosidau cistanche. Mae melanin mewn croen dynol yn cael ei gynhyrchu gan ocsidiad tyrosine wedi'i gataleiddio gan tyrosinase, ac mae'r adwaith ocsideiddio yn gofyn am gyfranogiad ocsigen, felly mae'r radicalau di-ocsigen yn y corff yn dod yn ffactor pwysig sy'n effeithio ar gynhyrchu melanin.Cistancheyn cynnwys cistanoside, sy'n gwrthocsidydd a gall leihau'r genhedlaeth o radicalau rhydd yn y corff, gan atal cynhyrchu melanin.

Yn ogystal, mae gan cistanche hefyd y swyddogaeth o hyrwyddo cynhyrchu colagen, a all gynyddu elastigedd a llewyrch y croen a helpu i atgyweirio celloedd croen sydd wedi'u difrodi.CistancheGlycosidau ffenylethanolyn cael effaith is-reoleiddio sylweddol ar weithgaredd tyrosinase, a dangosir bod yr effaith ar tyrosinase yn ataliad cystadleuol a gwrthdroadwy, a all ddarparu sail wyddonol ar gyfer datblygu a defnyddio'r cynhwysion gwynnu yn Cistanche. Felly, mae gan cistanche rôl allweddol mewn gwynnu croen. Gall atal cynhyrchu melanin i leihau afliwiad a diflastod; a hyrwyddo cynhyrchu colagen igwella elastigedd croenapelydru. Oherwydd y gydnabyddiaeth eang o effeithiau hyn cistanche, mae llawer o gynhyrchion gwynnu croen wedi dechrau trwytho cynhwysion llysieuol fel Cistanche i gwrdd â galw defnyddwyr, gan gynyddu gwerth masnachol y cistanche.Cistanchemewn cynhyrchion gwynnu croen. I grynhoi, mae rôl cistanche mewn gwynnu croen yn hollbwysig. Gall ei effaith gwrthocsidiol a'i effaith cynhyrchu colagen leihau afliwiad a diflastod, gwella hydwythedd croen a llewyrch, a thrwy hynny gyflawnieffaith gwynnu. Hefyd, mae cymhwysiad eang Cistanche mewn cynhyrchion gwynnu croen yn dangos na ellir diystyru ei rôl mewn gwerth masnachol.

Cliciwch Ar Cistanche Of Whitening Ar Werth

Gofynnwch am fwy: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Mae arbelydru UV yn arwain at gynhyrchu ffotograffau a rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) yn ogystal â melanogenesis. Mae arbelydru UV yn niweidio'r croen dynol ac yn ysgogi synthesis meteloproteinasau matrics (MMPs) mewn ffibroblastau a keratinocytes. Mae MMPs yn chwarae rhan yn bennaf wrth gynyddu diraddiad colagen dermol yn ystod amlygiad UV. Mae mynegiant cynyddol o MMPs yn achosi problemau difrifol gan gynnwys lluniadu croen a charcinogenesis [6,7]. Y mathau o MMPs a fynegir mewn celloedd croen yw MMP-1 (collagenase interstitial), MMP-2 a -9 (gelatinase-A a -B), a MMP-3 (stromelysin 1 ) [8]. Yn ogystal, gellir cynhyrchu ROS alldarddol trwy ddod i gysylltiad â hydrogen perocsid (H2O2) ac arbelydru UV. Mae ROS yn ysgogi trawsgrifio genynnau sy'n amgodio cytocinau pro-llidiol megis interleukin (IL)-1b, IL-6, IL-8, a cyclooxygenase- 2 (COX{{17) }}) yn ogystal â MMPs trwy kinases protein a weithredir gan mitogen (MAPKs) [9,10]. Yn benodol, mae H2O2 yn rheoleiddio heme oxygenase 1 a ffactor niwclear 2 trwy straen a difrod ocsideiddiol [11]. Fel y soniwyd eisoes, mae cadw lleithder yn chwarae rhan bwysig yn y croen. Mae ffactorau lleithder naturiol (NMF) fel asid hyaluronig (HA) yn ymwneud â chadw lleithder y croen ac maent yn elfen hanfodol o'r matrics allgellog (ECM). Genynnau sy'n gysylltiedig â chynhyrchu NMF yw ffilagrin (FLG, protein rhwystr epidermaidd), trawsglutaminase-1, a synthase asid hyaluronig (HAS)-1, -2, a -3 [12] . Mewn cyferbyniad â genynnau HAS, mae hyaluronidase (HYAL)-1, -2, -3, a -4 yn cataleiddio diraddiad HA. Mae'n hysbys bod Hyaluronidase yn cael ei or-fynegi yn ystod lluniau UV [13].

Mae Panax ginseng wedi cael ei ddefnyddio fel meddyginiaeth lysieuol yn Korea, Tsieina, a Japan ers amser maith. Mae gwerth ginseng fel perlysiau meddyginiaethol yn cael ei briodoli i grŵp effeithiol o gyfansoddion o'r enw ginsenosides. Mae ginsenosides yn cynnwys protopanaxadiol a protopanaxatriol, sydd â nodweddion ffarmacolegol hysbys a gweithgareddau ffisiolegol gan gynnwys effeithiau gwrthocsidiol, imiwnofodiwleiddio, gwrth-diabetig, a gwrthganser [14,15]. P. ginseng calyx yw'r peduncle rhwng yr aeron a gwraidd ginseng. Ni ddefnyddir ginseng calyx fel arfer mewn diwydiannau ginseng; felly, caiff ei dynnu'n bennaf mewn symiau mawr yn ystod y broses o gynaeafu gwreiddiau ginseng. Serch hynny, oherwydd canfuwyd bod gwahanol fathau o ginsenosides yn bodoli'n fawr yn y rhan ginseng calyx, mae ei gymhwysiad diwydiannol wedi'i gynnig. Yn wir, mae astudiaethau blaenorol wedi dangos bod P. ginseng calyx yn cynnwys y swm uchaf o G Re (6 y cant ) ymhlith cyfansoddion protopanaxatriol [16] â swyddogaethau rhwystr croen [17]. Mae effeithiau gwrthocsidiol P. ginseng wedi'u hadrodd mewn sawl erthygl [18,19]. Fodd bynnag, ychydig a wyddys am ei effeithiau gwrth-melanogenesis ac amddiffyn y croen na'r mecanwaith cellog, yn enwedig ar gyfer P. ginseng calyx.

2. Deunyddiau a dulliau

2.1. Defnyddiau

Prynwyd celloedd B16F10, HaCaT, a HEK293 o'r Casgliad Diwylliant Math Americanaidd (Rockville, MD, UDA). Prynwyd cyfrwng addasedig Dulbecco Eagle's (DMEM), serwm buchol ffetws, halwynog wedi'i glustogi â ffosffad (PBS), a phenisilin-streptomycin gan HyClone Laboratories Inc., (Logan, UT, UDA). 3-(4-5- Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromid (MTT) ei brynu o Amresco (Brisbane, Awstralia). hormon ysgogol a-Melanocyte (a-MSH), arbutin, L-dopa-(phenyl-d3) (LDOPA), tyrosinase madarch (tyrosinase), asid kojic, retinol, 2,2- deuffenyl{{19} }picrylhydrazyl (DPPH), asid L-asgorbig, phorbol 12- myristate 13- asetad (PMA), forskolin o Coleus forskohlii (forskolin), a polyethyleneimine eu prynu gan Sigma-Aldrich (St. Louis, MO , UDA). Hydrogen perocsid (H2O2; 35 y cant ) ei brynu o JUNSEI (Chuo-ku, Tokyo, Japan). Prynwyd SB203580 (SB), SP600125 (SP), ac U0126 o Calbiochem (La Jolla, CA, UDA). Prynwyd adweithydd TRIzol gan MRCgene (OH, UDA), a phrynwyd y pecyn synthesis cDNA gan Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, UDA). Cafodd y setiau paent preimio (ymlaen a chefn) ar gyfer adwaith cadwyn polymeras (PCR) eu syntheseiddio gan Macrogen (Seoul, Korea), a phrynwyd y premix PCR gan Bio-D Inc. (Seoul, Korea). Prynwyd y system assay luciferase gan Promega (Madison, WI, UDA). Daeth y bilen polyvinylidenediflfluoride o Merck Millipore (Billerica, MA, UDA). Prynwyd gwrthgyrff gan Cell Signaling Technology (Beverly, MA, UDA) ac Abcam (Caergrawnt, MA, UDA). Paratowyd Pg-C-EE fel y disgrifiwyd mewn adroddiad blaenorol [16].

2.2. Diwylliant celloedd

Cafodd celloedd B16F10 a HaCaT eu meithrin yn DMEM gyda 10 y cant o serwm buchol ffetws ac 1 y cant penisilin-streptomycin ar 37oC mewn deorydd lleithiwyd 5 y cant CO2.

2.3. Assay hyfywedd celloedd

2.4. Cynnwys melanin a dadansoddiad secretion

2.5. Assay Tyrosinase

Ar gyfer y assay tyrosinase, 50 mL o 2 mM L-dopamin, 50 mL o PgC-EE ar ddosau gwahanol (0 mg/mL, 100 mg/mL, 200 mg/mL, a 400 mg/mL) , neu asid kojic 300 mM wedi'i gymysgu â tyrosinase madarch (100 U/mL) am 15 munud ar dymheredd ystafell. Mesurwyd amsugnedd pob sampl ar 475 nm gan ddefnyddio darllenydd dwysedd optegol.

2.6. dadansoddiad RNA negesydd trwy drawsgrifio gwrthdro adwaith cadwyn polymeras

Ar gyfer dadansoddiad RNA negesydd (mRNA) o genynnau sy'n gysylltiedig â melanogenesis, defnyddiwyd pelenni celloedd B16F10 o dan yr un amodau ag ar gyfer yr arbrawf secretion melanin. Cynhaliwyd yr holl ddadansoddiadau mRNA gan ddefnyddio celloedd HaCaT mewn 6-platiau ffynnon. Roedd celloedd HaCaT yn agored i arbelydru UVB a hydrogen perocsid a'u trin â Pg-C-EE (0 mg / mL, 100 mg / mL, 200 mg / mL, a 400 mg / mL) neu retinol (10 mg / mL). Cafodd cyfanswm mRNA ei waddodi gan ddefnyddio adweithydd TRIzol yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Cafodd DNA cyflenwol ei syntheseiddio gan ddefnyddio pecyn synthesis cDNA. Cynhaliwyd adwaith cadwyn polymeras trawsgrifio gwrthdro gan ddefnyddio paent preimio blaen a gwrthdroi penodol. Rhestrir pob dilyniant o setiau paent preimio yn Nhabl 1 (llygoden) a Thabl 2 (dynol).

2.7. Paratoi lysates celloedd a dadansoddiad imiwnoblot

Cafodd celloedd B16F10 a HaCaT eu trin ar y pwyntiau amser a nodwyd gyda Pg-C-EE. Roedd y celloedd wedi'u trin yn cael eu golchi, eu cynaeafu yn PBS, eu centrifugio, a'u gosod mewn byffer lysis cell (1 M Tris-HCl pH 7.5, {{20}}.5 M NaF, 1 M b-glyserolphosphate pH 7.5, 4 M NaCl, 100 y cant NP-40, 2 mg/mL leupeptin, 2 mg/mL aprotinin, 2 mg/mL pepstatin A, 0.1 mM Na3VO4, 1 mM benzamid, 0.1 mM ffenylmethanesulfonyl L fflworid (PMSF), a 1.6 mM pervanadate) am 1 awr ar 4 C. Cafodd cyfanswm y lysates protein ei beledu gan allgyrchiad (12,000 rpm, 10 mun, 4C), a mesurwyd cynnwys protein y supernatants gan ddefnyddio assay Bradford [20] ac wedi'i addasu ar gyfer gwahaniaethau crynodiad ymhlith y samplau. Dadansoddwyd proteinau trwy imiwnoblotting. Gwahanwyd proteinau ar geliau sodiwm dodecyl sylffad-polyacrylamid 10 y cant a'u trosglwyddo i bilenni polyvinylidenedifluoride. Lefelau ffosffor neu gyfanswm p38, kinase allgellog a reoleiddir gan signal (ERK), Jun N-terminal kinase (JNK), a phrotein elfen-rwymo elfen ymateb monoffosffad adenosine cylchol (CREB), a lefelau tyrosinase, TRP1, a 2, a MITF eu pennu gan ddefnyddio dulliau a gyhoeddwyd yn flaenorol [21]. Defnyddiwyd b-Actin fel rheolydd llwytho imiwnoblotting.

2.8. Dadansoddiad DPPH

Cynhaliwyd prawf lliwio DPPH fel mewn adroddiad blaenorol [22]. I fesur actifedd sborion radical, 200 mL o hydoddiant DPPH (0.2 mM mewn methanol) a 200 mL o grynodiadau gwahanol o Pg-C-EE (0 mg/ mL, 50 mg/mL, 100 mg/mL, 200 mg/mL, a 400 mg/mL) neu 200 mL o asid ascorbig 0.5 mM eu cymysgu a'u hysgwyd yn y tywyllwch ar dymheredd ystafell am 30 munud. Mesurwyd amsugnedd ar 517 nm. Mynegwyd y canlyniadau fel canran ataliad: effaith sborion DPPH ¼ [(Acontrol/Asample)/ Acontrol] 100 y cant ; Acontrol yw amsugnedd DPPH, ac Asample yw amsugnedd y sampl (Pg-C-EE neu asid asgorbig).

2.9. Arbelydru UVB

2.10. Triniaeth H2O2

2.11. Newidiadau morffolegol

2.12. Assay genyn gohebydd Luciferase

2.13. Dadansoddiad ystadegol

Gofynnwch am fwy: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501