Mae Lefel Ymarfer Corff Priodol yn Gwanhau Dysbiosis Perfedd Ac Asid Valerig i Wella Niwroplastigedd A Gweithrediad Gwybyddol Ar ôl Llawdriniaeth mewn Llygod Rhan 3

DEUNYDDIAU A DULLIAU

Cymeradwywyd y protocolau a'r gweithdrefnau arbrofol gan Bwyllgor Gofal a Defnydd Anifeiliaid Sefydliadol Prifysgol Virginia (Charlottesville, VA, UDA; rhif protocol: 3114).

Mae cof yn un o'r galluoedd y mae angen i ni eu defnyddio'n aml yn ein bywydau bob dydd. Gall wneud pobl yn gallach, yn fwy sensitif, ac yn fwy ffafriol i berthnasoedd gyrfa a rhyngbersonol. Felly, mae llawer o bobl eisiau gwella eu cof. Mae perthynas rhwng protocolau arbrofol a chof. Gadewch i ni archwilio'r mater hwn nesaf.

Yn gyntaf, gall protocolau arbrofol helpu pobl i wella eu cof. Yn yr arbrawf, mae angen i bobl ddilyn camau penodol i gwblhau'r llawdriniaeth arbrofol. Gall y gweithgaredd cam wrth gam hwn roi'r ymennydd dynol mewn cyflwr o sylw a chrynodiad uchel, gan hyrwyddo perfformiad swyddogaethau'r ymennydd. Ar yr un pryd, mae angen i chi gofio rhai data arbrofol a chamau arbrofol yn ystod yr arbrawf, a fydd hefyd yn ymarfer swyddogaeth cof yr ymennydd. Trwy ymarfer yn y modd hwn dro ar ôl tro, bydd eich cof yn gwella'n raddol.

Yn ail, mae'r profiad synhwyraidd yn ystod y broses gof hefyd yn gysylltiedig yn agos â dyluniad y cynllun arbrofol. Mewn arbrofion, mae dylunwyr yn aml yn gosod rhai tasgau penodol yn ystod yr arbrawf, fel bod angen i gyfranogwyr ailadrodd yr un llawdriniaeth sawl gwaith, megis cof ac ysgrifennu rhifau, cof a chydnabod blociau lliw, ac ati. Gall y profiad ailadroddus hwn gryfhau profiad pobl. gallu sylw a chof, gan ei gwneud hi'n haws i bobl brosesu'r wybodaeth hon i gof hirdymor.

Yn ogystal, mewn arbrofion, gall defnyddio deunyddiau ysgogi cynrychioliadol (fel delweddau, synau, arogleuon, ac ati) hefyd gynhyrchu canlyniadau da. Oherwydd bod yr ysgogiadau hyn yn gallu sbarduno prosesau cyffro a chof yr ymennydd, a thrwy hynny wella gallu cof pobl. Ar yr un pryd, gellir cyplysu'r ysgogiadau hyn hefyd â'r amgylchedd a sefyllfaoedd mewn bywyd, a thrwy hynny leihau'r achosion o ddatgysylltu a gwneud y wybodaeth yn haws i'w chofio ac yn fwy cydlynol.

I grynhoi, mae'r cynllun arbrofol yn chwarae rhan hanfodol wrth wella cof dynol. Trwy gynnal arbrofion, gall pobl ymarfer eu galluoedd gwybyddol, gwella eu lefelau cof, ac ar yr un pryd hyrwyddo gweithrediad yr ymennydd. Felly, dylem barhau i ddysgu dulliau arbrofol newydd a chymryd rhan mewn mwy o arbrofion i wella ein lefelau cof a gwneud mwy o gyfraniadau i'n gyrfaoedd, ein perthnasoedd a'n hiechyd. Gellir gweld bod angen i ni wella'r cof, a gall Cistanche deserticola wella'r cof yn sylweddol, oherwydd mae gan Cistanche deserticola effeithiau gwrthocsidiol, gwrthlidiol a gwrth-heneiddio, a all helpu i leihau ocsidiad ac adweithiau llidiol yn yr ymennydd, a thrwy hynny amddiffyn y iechyd y system nerfol. Yn ogystal, gall Cistanche deserticola hefyd hyrwyddo twf ac atgyweirio celloedd nerfol, gan wella cysylltedd a swyddogaeth rhwydweithiau niwral. Gall yr effeithiau hyn helpu i wella cof, gallu dysgu, a chyflymder meddwl, a gallant hefyd atal datblygiad camweithrediad gwybyddol a chlefydau niwroddirywiol.

Cliciwch Gwybod Cof Tymor Byr sut i wella

Perfformiwyd yr holl arbrofion anifeiliaid gan Ganllaw'r Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol ar gyfer Gofal a Defnydd o Anifeiliaid Labordy (cyhoeddiadau NIH rhif 80-23) a ddiwygiwyd yn 2011. Rhestrwyd ffynonellau deunyddiau allweddol yn y Tabl Adnoddau Allweddol yn y Deunyddiau Atodol.

Anifeiliaid a Dylunio Arbrofol

Roedd llygod gwrywaidd wyth wythnos oed C57BL/6 J yn pwyso 19-22 g yn cael eu cartrefu mewn ystafell a gynhelir o dan amodau amgylcheddol cyson (tymheredd 22-24 gradd, cylch golau / tywyll 12 h, a lleithder 50 ± 10%) gyda mynediad am ddim i fwyd a dwr.

Caniatawyd i bob un ohonynt ymgynefino am wythnos cyn arbrofion. Cawsant eu neilltuo ar hap i'r grwpiau canlynol yn yr arbrawf cyntaf: (1) grŵp rheoli (ddim yn agored i anesthesia a llawdriniaeth), (2) grŵp ymarfer corff (yn ymarfer ar gapasiti mwyaf posibl 35-40%, ond heb fod yn agored i anesthesia a llawdriniaeth) , (3) grŵp llawdriniaeth (datguddiad rhydweli chwithcarotid am 15 munud o dan anesthesia isoflurane am 2 h), a(4) i (6) grwpiau Exe-l+Sur, Exe-m+Sur ac Exe-h+Sur: wedi'i ymarfer yn 35 –40%, 55–60% a 75–80% capasiti mwyaf, yn y drefn honno, ac yn destun anesthesia a llawdriniaeth.

Defnyddiwyd yr anifeiliaid ar gyfer dysgu a phrofion cof yn dechrau 4 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=20) neu cynaeafwyd eu hymennydd ar gyfer profion biocemegol am 6 h, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, a 7 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=9 neu 14), ar gyfer staenio immunofluorescent 48h a 19 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=6), ac ar gyfer staenio Golgi 19 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=8).

Cynaeafwyd gwaed a charthion llygod o'r 4 grŵp cyntaf ar gyfer mesur SCFAs 7 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=7) ac ar gyfer dadansoddiadau 16 S 3 a 7 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=8) neu ar diwedd 4-protocol ymarfer wythnos (n=8) ​​neu ar yr amser cyfatebol yn y 2 grŵp cyntaf (n=16). Roedd llygod ar gyfer cynaeafu meinweoedd yn wahanol garfanau o micethat a ddefnyddiwyd ar gyfer dysgu a phrofion cof. Yn yr ail arbrawf, neilltuwyd llygod ar hap i (1) y grŵp Transcontrol+Sur a (2) y grŵp Trans-exe+Sur.

Derbyniodd llygod yn y grŵp cyntaf hydoddiant fecal 500 ul gan y grŵp rheoli trwy gavage gastrig a600 ul gan enema unwaith y dydd am 7 diwrnod yn olynol ar ôl triniaeth wrthfiotig i ddileu microbiota'r perfedd brodorol yn y derbynwyr. Derbyniodd llygod yn yr ail grŵp hydoddiant fecal 500 ul o lygod ymarfer corff bygastrig a 600 ul gan enema unwaith y dydd am 7 diwrnod yn olynol ar ôl y driniaeth wrthfiotig. Cynaeafwyd feces gan y derbynwyr 14 diwrnod ar ôl trawsblaniad fecal ar gyfer dadansoddiad 16 S. Roedd y llygod wedyn yn destun llawdriniaeth.

Gwerthuswyd dysgu a chof o 4 diwrnod ar ôl llawdriniaeth (n=15). Cynaeafwyd yr ymennydd ar gyfer astudiaethau biocemegol fel yn yr arbrawf cyntaf (n=10). Yn y trydydd arbrawf, neilltuwyd llygod ar hap i (1) y grŵp Transcontrol, a (2) y grŵp Trans-control+Sur. Derbyniodd llygod yn y ddau grŵp drawsblannu feces gan lygod rheoli. Cafodd yr ail grŵp lawdriniaeth 14 diwrnod ar ôl trawsblaniad fecal. Cynaeafwyd yr hippocampus 2 ddiwrnod ar ôl llawdriniaeth i fesur GDNF (n=10). Yn y pedwerydd arbrawf, neilltuwyd llygod ar hap i (1) y grŵp rheoli (llygod naïf nad oeddent yn agored i unrhyw amodau arbrofol a ddisgrifir yn yr astudiaeth hon), (2) y grŵp gwrthfiotig a gafodd wrthfiotigau am 7 diwrnod, a (3) Grŵp traws-reolaeth a gafodd drawsblannu feces o lygod rheoli.

Aseswyd dysgu a chof 19 diwrnod ar ôl cwblhau trawsblaniad fecal (26 diwrnod ar ôl cwblhau triniaeth wrthfiotig yn y grŵp gwrthfiotig) (n=12). Yn y pumed arbrawf, neilltuwyd llygod ar hap i (1) y grŵp rheoli, (2) y grŵp Traws-reolaeth a gafodd drawsblannu feces o lygod rheoli, a (3) y grŵp Traws-lawfeddygaeth a gafodd droseddau trawsblannu gan lygod llawdriniaeth. 

Perfformiwyd trawsblaniad fecal fel y disgrifiwyd yn yr ail arbrawf. Cafodd feces gan y derbynwyr eu cynaeafu14 diwrnod ar ôl trawsblannu fecal ar gyfer dadansoddiad 16 S (n=10). Aseswyd dysgu a chof 4 diwrnod ar ôl i'r sampl fecal gael ei gynaeafu (n=17). Yn y chweched arbrawf, neilltuwyd llygod ar hap i (1) llawdriniaeth plws grŵp halwynog arferol a dderbyniodd 200 µl chwistrelliad intraperitoneol halwynog arferol (NS) unwaith wythnos am 4 wythnos ac yna llawdriniaeth, (2) grŵp llawdriniaeth ymarfer corff a saline arferol a gafodd 200 µl pigiad mewnperitoneol NSby unwaith yr wythnos yn ystod yr wythnos 4-ymarfer corff ar uchafswm o 35–40% o gapasiti ac yna llawdriniaeth, (3 ) grŵp llawdriniaeth asid plwsfalerig ymarfer corff a gafodd asid valeric (200 mg/kg mewn 200 µl) drwy chwistrelliad mewnperitoneol unwaith yr wythnos yn ystod yr wythnos 4-ymarfer corff ar y cynhwysedd mwyaf posibl o 35–40% ac yna llawdriniaeth.

Rhoddwyd y pigiad ar fore diwrnod ymarfer cyntaf yr wythnos. Cafwyd un pigiad ychwanegol ar ddiwrnod y llawdriniaeth. Aseswyd canlyniadau ymddygiadol(n=13) a biocemegol (n=10) fel yn yr ail arbrawf. Yn y seithfed arbrawf, 13-wythnos oed (yn pwyso 23–27 g) gwryw C57BL/ Neilltuwyd llygod 6 J ar hap i (1) y grŵp rheoli, (2) y grŵp NS a dderbyniodd 4 µl NS trwy bigiadau intracerebroventricular unwaith y dydd am 4 diwrnod yn olynol, a (3) grŵp asid valeric a dderbyniodd 4 mg / kg mewn 4 µlby intracerebroventricular pigiad unwaith y dydd am 4 diwrnod yn olynol. Chwistrellwyd cerebrofentriglau chwith a dde ar amserlen arall. Aseswyd dysgu a chof 4 diwrnod ar ôl y pigiad (n=15).

Yn yr wythfed arbrawf, neilltuwyd llygod ar hap i (1) llawfeddygaeth ynghyd â grŵp dimethyl sulfoxide (DMSO) a dderbyniodd chwistrelliad trwy fewntracerebrofentriglaidd DMSO unwaith y dydd am 4 diwrnod yn olynol gan ddechrau ar ddiwrnod y llawdriniaeth, (2) llawdriniaeth ynghyd â grŵp antagonydd C3ar a dderbyniodd antagonist C3ar (SB290157 ) trwy chwistrelliad mewnserebrofentriglaidd unwaith y dydd am 4 diwrnod gan ddechrau ar ddiwrnod y llawdriniaeth, (3) ymarfer corff plws DMSO ynghyd â grŵp llawdriniaeth a gafodd DMSO trwy chwistrelliad mewnserebrofentriglaidd unwaith y dydd am 4 diwrnod yn olynol gan ddechrau ar y llawdriniaeth ddiwrnod ar ôl 4-ymarfer wythnos yn 35 –40% o’r capasiti mwyaf, a(4) ymarfer corff ynghyd ag agonist C3ar ynghyd â grŵp llawdriniaeth a gafodd chwistrelliad mewngrofentriglaidd C3argonist unwaith y dydd am 4 diwrnod yn olynol gan ddechrau ar ddiwrnod y llawdriniaeth ar ôl yr 4-ymarfer wythnos ar 35–40% o’r capasiti mwyaf . Dechreuwyd profion ymddygiad o 4 diwrnod ar ôl llawdriniaeth fel y nodwyd uchod (n=15).

Yn y nawfed arbrawf, neilltuwyd llygod ar hap i (1) y grŵp rheoli, (2) y grŵp llawdriniaeth, (3) y grŵp llawdriniaeth ynghyd â GDNF a dderbyniodd chwistrelliad mewncerebrofentriglaidd GDNF trwy lawdriniaeth, a (4) llawdriniaeth plws GDNF anweithredol gwres grŵp a dderbyniodd chwistrelliad GDNF anweithredol gan wres trwy fewntracerebrofentriglaidd pan gawsant lawdriniaeth. Cafodd hippocampi eu cynaeafu ar 48 h ar ôl llawdriniaeth ar gyfer astudiaeth ELISA (n=12). Ar ôl wythnos o ymaddasu, defnyddiwyd hen lygod (18-gwrywaidd mis oed C57BL/6 Jmice) yn pwyso 30–36 g yn tair astudiaeth. Yn yr arbrawf cyntaf, neilltuwyd hen lygod ar hap i (1) y grŵp rheoli, (2) y grŵp ymarfer corff lle cafodd llygod 4-ymarfer wythnos gyda 35-40% o gapasiti mwyaf posibl, (3) y grŵp llawdriniaeth, a (4) y grŵp Exe+Sur lle cafodd llygod 4-ymarfer wythnos gyda chynhwysedd uchaf o 35-40% cyn llawdriniaeth. Defnyddiwyd yr anifeiliaid ar gyfer profion dysgu a chof yn dechrau 4 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=12) neu cynaeafwyd eu hymennydd ar gyfer profion biocemegol am 48 awr ar ôl y llawdriniaeth (n=10 neu 12), ar gyfer imiwnofflworoleuol yn 48 h. a 19 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=6), ac ar gyfer Golgistaining 19 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=8).

Cynaeafwyd gwaed a charthion llygod o'r 4 grŵp ar gyfer mesur SCFA 7 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=7) ac ar gyfer dadansoddiadau 16 S ar 3 a 7 diwrnod ar ôl y llawdriniaeth (n=8) neu ar y diwedd o 4-brotocol ymarfer corff wythnos neu ar yr amser cyfatebol yn y 2 grŵp cyntaf (n=16). Roedd llygod ar gyfer cynaeafu meinwe yn garfanau gwahanol a ddefnyddiwyd ar gyfer dysgu a phrofion cof. Yn yr ail arbrawf, neilltuwyd hen lygod ar hap i (1) y grŵp Trans-Old Control+Sur, a (2) y grŵp Trans-Old Exe+Sur. Bu'r llygod hyn yn destun llawdriniaeth 14 diwrnod ar ôl trawsblaniad fecal fel y disgrifir yn y ail arbrawf o lygod oedolion ifanc. Gwerthuswyd dysgu a chof o 4 diwrnod ar ôl llawdriniaeth (n =10).

Yn y trydydd arbrawf, cafodd hen lygod eu neilltuo ar hap i (1) o lawfeddygaeth ynghyd â grŵp NS; (2) ymarfer corff yn ogystal â grŵp llawdriniaeth NS ynghyd; a (3)grŵp ymarfer corff ac asid valeric plws llawdriniaeth. Derbyniodd y llygod hyn gyflyru ymarfer corff ac asid valeric fel y disgrifiwyd yn y chweched arbrawf o lygod oedolion ifanc. Profwyd canlyniadau ymddygiadol gan ddechrau 4 diwrnod ar ôl llawdriniaeth (n=11). Roedd meintiau'r samplau (n) a ddisgrifiwyd uchod yn cynrychioli nifer yr anifeiliaid a gafodd eu haposod ym mhob grŵp/cyflwr. Roedd y niferoedd hyn o anifeiliaid yn gyfanswm o 3 atgynhyrchiad o leiaf o bob arbrawf. Cafodd anifeiliaid eu dosbarthu ar hap i grwpiau yn seiliedig ar dablau hapnodi a gynhyrchwyd gan gyfrifiadur ym mhob arbrawf.

Penderfyniad a hyfforddiant ymarfer corff mwyaf posibl

Cyn llawdriniaeth, roedd llygod yr wythnos a 18-mis oed yn cael eu hamlygu i 4-ymarfer aerobig melin draed yr wythnos ar ôl penderfynu faint o lygod unigol oedd yn gallu gwneud ymarfer corff. Perfformiwyd y penderfyniad hwn mewn ffordd debyg i'r rhai a ddisgrifiwyd o'r blaen [47, 48]. Yn fyr, roedd y llygod wedi ymgynefino â'r felin draed ar y diwrnod cyntaf gyda gosodiadau cychwynnol y grid sioc ar 25 V, 0.3mA, a 2 Hz a'r cyflymder a'r gogwydd yn sero am 10 munud. Yna cynyddwyd cyflymder y felin draed i 10 cm/s gyda gogwydd wedi'i osod i 50 am 10 munud. Nesaf, cynyddwyd cyflymder a gogwydd y felin draed i 15 cm / tywod 100 am 5 munud.

The speed was then increased by 5 cm/s every 5 min to an average maximal speed of 70 cm/s in young mice and 60 cm/s in old mice (around 65–75 cm/s and 55–65 cm/s, respectively), as they reached the criteria for exercise-induced exhaustion. These criteria were: (1) 10 consecutive seconds on the electric grid; (2) spending >50% o'r amser ar y grid; a/neu (3) diffyg cymhelliant i brolio â llaw. Tynnwyd y llygoden ar unwaith o'r lôn briodol unwaith y byddai un neu fwy o'r meini prawf hyn wedi'u bodloni. Y diwrnod wedyn, roedd llygod yn rhedeg ar yr un felin draed ar hanner y cyflymder uchaf cyfartalog (35 cm/s mewn llygod ifanc neu 30 cm/s mewn hen lygod) a 100 o duedd nes iddynt gyrraedd un o’r meini prawf gorludded eto, a hyd y cofnodwyd ymarfer parhaus fel cynhwysedd ymarfer mwyaf posibl pob llygoden. Ar ôl y ddau brotocol hyn, rhoddwyd cartref i lygod ar wahân am 30 munud er mwyn osgoi ymddygiad ymosodol amlwg yn dilyn ymarfer corff.

After resting for 2 days, mice assigned to exercise training groups were subjected to a 4-week protocol of forced treadmill running at 35–40%, 55–60%, or 75–80% of the maximal capacity, respectively, for 5 days a week. Mice that were shocked for >5% of the total daily exercise time in 2 consecutive days or >Byddai 3% o gyfanswm yr amser mewn 3 diwrnod olynol yn cael ei eithrio.

Gosodwyd y grwpiau anymarferol yn yr un set o arbrofion â'r grwpiau ymarfer ar felin droed di-symud bob dydd am tua 30-40 munud. Cawsant 10 sioc am gyfanswm o 5 s, sef y swm cyfartalog o siociau a gafodd llygod mewn grŵp ymarfer corff bob dydd, yn ystod eu harhosiad ar felin draed nad yw'n symud. Os nad oedd gan set o arbrofion grŵp ymarfer, ni chafodd unrhyw lygod yn y set o arbrofion siociau.

Triniaeth gwrthfiotig

Er mwyn hwyluso cytrefu'r microbiota a drawsblannwyd, rhoddwyd triniaeth wrthfiotig i lygod derbyn unwaith y dydd am 7 diwrnod yn olynol i ddileu eu microbiota perfedd gwreiddiol fel y disgrifir gennym ni ac eraill [11, 36]. Yn gryno, ar ôl puro gyda 10% magnesiwm sylffad (200 ul / 10 g, dwywaith gyda chyfnodau 3 h) gan gavage gastrig ar y diwrnod cyntaf, llygod C57BL / 6 J derbyn amoxicillin / asid clavulanic (200 mg / kg), metronidazole ( 200 mg/kg) a cefazolin (2 g/kg) gan andenema gavage gastrig (mewn 300 ul ar gyfer gavage gastrig a 400 ul NS ar gyfer enema) yn y bore unwaith y dydd am 7 diwrnod yn olynol, ac amoxicillin / clavulanicacid (20 mg / kg ), metronidazole (20 mg / kg) a cefazolin (300 mg / kg) mewn 200 ul NS bob dydd trwy chwistrelliad mewnperitoneol am yr un 7 diwrnod (ar 4 pm i 5 pm). Er mwyn atal croeshalogi bacteriol, roedd technegwyr yn gwisgo gŵn glân a menig mewn cwfl wedi'i awyru yn trin llygoden a newidiadau dyddiol mewn cawell a photeli dŵr. Cynaeafwyd feces o'r llygod hyn 24 awr ar ôl y driniaeth ddiwethaf ar gyfer dadansoddiadau 16 S i bennu'r effaith.

Trawsblannu fecal

Pelenni fecal ffres a gasglwyd o fewn 30 munud ar ôl symudiad coluddyn fromcontrol llygod, llygod yn syth ar ôl cwblhau'r 4-ymarfer wythnos, ormice 2 i 8 diwrnod ar ôl llawdriniaeth eu gwanhau â 100 mg/ml hallt di-haint.Pob pelenni fecal o 7 –Cafodd 10 o roddwyr gyda phob cyflwr arbrofol eu cymysgu a'u hail-hongian gyda'i gilydd mewn halwynog. Yn gryno, roedd y mater fecal yn gymysg â fortecs am 5 munud ac yna'n cael ei basio trwy hidlydd celloedd neilon 70 μm i gael gwared ar fwyd a deunyddiau gronynnol heb eu treulio. Derbyniodd y derbynnydd micereceived 500 ul ateb fecal cyfatebol gan gavage gastrig yn y bore a 600 ul gan enema yn y prynhawn o 24 h ar ôl y dos olaf o wrthfiotigau am 7 diwrnod yn olynol. Roedd llygod wedi'u trawsblannu yn cael eu cynnal am 2 wythnos ar ôl trawsblaniad fecal cyn iddynt gael eu cyflwyno i gasgliad fecal ar gyfer dadansoddiadau 16 S a llawdriniaeth.

Anesthesia a llawdriniaeth

Gadawyd amlygiad i'r rhydweli carotid i'r llawdriniaeth fel y disgrifiwyd gennym o'r blaen [6]. Yn gryno, cafodd llygod eu hanestheteiddio â 2% o isoflurane a chadw anadliadau digymell gyda mwgwd wyneb a gyflenwyd ag 100% o ocsigen yn ystod y weithdrefn. Roedd tymheredd rhefrol yn cael ei fonitro a'i gynnal ar 37 gradd gyda chymorth blanced wresogi. Cyflawnwyd toriad gwddf canol 2-cm a dyraniad meinwe meddal gyda 1-cm o amlygiad rhydweli cyffredin o hyd heb unrhyw niwed i'r nerf fagws ar ôl i'r llygoden gael ei anestheteiddio gan isoflurane am o leiaf 20 munud. Yna cafodd y clwyf ei ddyfrhau a'i gau trwy ddefnyddio pwyth llawfeddygol 4-0. Perfformiwyd y driniaeth lawfeddygol dan amodau anhaint a pharhaodd tua 15 munud mewn llygod ifanc a 12 munud o lygod hen. Cyfanswm hyd anesthesia cyffredinol oedd 2 awr. Ar ôl y llawdriniaeth, derbyniodd pob anifail chwistrelliad isgroenol o 3 mg/kgbupivacaine. Ni welwyd unrhyw ymateb i binsio bysedd traed yn ystod yr anesthesia.

Pigiadau intracerebroventricular

Fel y disgrifiwyd uchod, derbyniodd rhai grwpiau o lygod chwistrelliad mewncerebrofentriglaidd. Yn gryno, gosodwyd y llygod hyn mewn ffrâm pen stereotactig yn y safle tueddol. Roedd safle'r pigiad wedi'i leoli fel: 1.00 mm mediolateral, −0.3 mm anteroposterior o Bregma, a −2.5 mm dyfnder dorsoventral.Micethe mewn llawdriniaeth ynghyd â grŵp GDNF wedi derbyn pigiad mewncerebrofentriglaidd o 1{{ 20}} ug/kg llygoden ailgyfunol GDNF mewn halwynog 3 ul wedi'i glustogi â ffosffad (PBS) fel y disgrifiwyd mewn astudiaethau blaenorol [6, 26], a llygod mewn grŵp GDNF heb ei actifadu â gwres o lawdriniaeth dderbyn chwistrelliad o ddadnatureiddio gwres (5 minat 1000C). ) Datrysiad GDNF. Derbyniodd llygod mewn llawdriniaeth ynghyd â grŵp antagonydd C3ar 10 ug/kg SB290157 mewn 3 ul PBS yn cynnwys 5% DMSO ar 0 h, 24 h, 48 h, a 72 h ar ôl llawdriniaeth. Derbyniodd llygod yn yr ymarfer a grŵp llawdriniaeth C3ar 1 ug/kg gweithydd C3ar mewn 3 ul PBS yn cynnwys 5% DMSO ar yr un pryd ag ar gyfer SB290157. Derbyniodd llygod mewn grŵp asid valeric o’r chweched arbrawf 4 mg/kg o asid valeric mewn 4 µl am 4 diwrnod yn olynol.

Profi ymddygiad

Gwerthuswyd dysgu a chof gan adnabod gwrthrychau newydd a phrawf drysfa Barnes. Cynhaliwyd pob prawf ymddygiad am 10:00 am−5:00pm mewn ystafell ynysig. Ni ddefnyddiwyd llygod a ddefnyddiwyd yn y profion dysgu a chof ar gyfer unrhyw astudiaethau biocemeg i osgoi effeithiau'r profion hyn.

Prawf adnabod gwrthrych newydd

Fel y disgrifiwyd gennym ni ac eraill o'r blaen [20, 49, 50], rhoddwyd llygod mewn siambr cae agored am 5 munud ar gyfer cynefino 4 diwrnod ar ôl llawdriniaeth. Perfformiwyd y prawf yn y modd canlynol. Gosodwyd dau o'r un gwrthrychau ar onglau cyfagos y siambr ar y diwrnod dysgu. Rhoddwyd llygod yn y siambr gyda'u cefnau wedi'u troi tuag at y gwrthrychau a chaniatáu iddynt archwilio'r siambr yn rhydd am 5 munud. Cafodd yr anifail ei ddileu os oedd cyfanswm yr amser archwilio ar ddau wrthrych<5 s. One of the objects was replaced by a novel object 30 seconds or 24 hours later. The mouse was put into the chamber with their backs turned toward the objects and allowed to explore for 5 min. Animal behavior was recorded by ANY-maze behavioral tracking software (Stoelting Co., IL). Exploratory time of new (T2) and old (T1) objects within 5 min was recorded and the memorization ability of the mouse was quantified by discrimination index: DI = T2 / (T1 + T2). The DIs at 30 s and 24 hours after the training reflected the instant and long-term memory, respectively. The field was always provided with even light, and the objects and fields were cleaned with 70% ethanol after each test.

drysfa Barnes

Saith diwrnod ar ôl llawdriniaeth, bu anifeiliaid yn destun drysfa Barnes i brofi eu dysgu gofodol a'u cof fel y disgrifiwyd gennym yn flaenorol [6, 49]. Mae drysfa Barnes yn blatfform cylchol gydag 20 o dyllau â bylchau cyfartal (SDInstruments, San Diego, CA). Roedd un o'r tyllau wedi'i gysylltu â siambr dywyll a elwid yn flwch targed. Dechreuodd y prawf trwy osod anifeiliaid yng nghanol drysfa Barnes. Defnyddiwyd sied gwrthsŵn (85 dB) a golau llachar (200W) ar y platfform i annog llygod i ddod o hyd i'r blwch hwn. Ar ôl hyfforddi am 4 diwrnod, profwyd eu cof cyfeirio ar ddiwrnod 5 a diwrnod 12. Ni chynhaliwyd unrhyw brawf yn ystod y cyfnod o ddiwrnod 5 i ddiwrnod 12. Cofnodwyd yr hwyrni i fynd i mewn i'r blwch targed yn ystod pob treial gan system olrhain fideo ANYMaze (SD Instruments).

For more information:1950477648nn@gmail.com