Crynodeb:Ymchwiliad ffytocemegol o hadau mandarin oren Aifft (Citrus reticulata Blanco, F. Rutaceae) a roddwyd tri ar ddeg o gyfansoddion hysbys, 1-13. Neilltuwyd strwythurau cyfansoddion ynysig gan ddefnyddio dadansoddiadau 1D a 2D NMR a HRESIMS. I nodweddu gweithgaredd ffarmacolegol y cyfansoddion hyn, cymhwyswyd nifer o arbrofion rhithwir integredig yn seiliedig ar sgrinio a dynameg moleciwlaidd yn seiliedig ar efelychiad. O ganlyniad, tybiwyd bod cyfansoddion 2, 3, a 5 wedi'u nodi fel atalyddion hyaluronidase, xanthine oxidase, ac atalyddion tyrosinase. Gwnaethpwyd y profion in vitro dilynol i ddilysu'r arbrofion mewn silico i dynnu sylw at botensial y flavonoidau hyn fel atalyddion hyaluronidase, xanthine oxidase, a thyrosinase gyda gwerthoedd IC50 yn amrywio o 6.39 ± 0.36 i 73.7 µ 2.33 µM. . Mae'r astudiaeth bresennol yn taflu goleuni ar botensial cynnyrch gwastraff oren mandarin yr Aifft (hy, ei hadau) fel cyfrwng naturiol sy'n hybu iechyd y croen. Yn ogystal, datgelodd gymhwysedd sgrinio rhithwir integredig yn seiliedig ar ddocio gwrthdro ac arbrofion yn seiliedig ar ISD i ragfynegi potensial biolegol cynhyrchion naturiol yn effeithlon.

Gall glycoside cistanche hefyd gynyddu gweithgaredd SOD ym meinweoedd y galon a'r afu, a lleihau'n sylweddol y cynnwys lipofuscin a MDA ym mhob meinwe, gan ysbeilio radicalau ocsigen adweithiol amrywiol (OH-, H₂O₂, ac ati) yn effeithiol a diogelu rhag difrod DNA a achosir. gan OH-radicaliaid. Mae gan glycosidau ffenylethanoid Cistanche allu chwilota cryf o radicalau rhydd, gallu lleihau uwch na fitamin C, gwella gweithgaredd SOD mewn ataliad sberm, lleihau cynnwys MDA, a chael effaith amddiffynnol benodol ar swyddogaeth pilen sberm. Gall polysacaridau cistanche wella gweithgaredd SOD a GSH-Px mewn erythrocytes a meinweoedd yr ysgyfaint llygod senescent arbrofol a achosir gan D-galactos, yn ogystal â lleihau cynnwys MDA a cholagen yn yr ysgyfaint a phlasma, a chynyddu cynnwys elastin, wedi effaith sborion dda ar DPPH, ymestyn amser hypocsia mewn llygod senescent, gwella gweithgaredd SOD mewn serwm, ac oedi dirywiad ffisiolegol yr ysgyfaint mewn llygod senescent arbrofol Gyda dirywiad morffolegol cellog, mae arbrofion wedi dangos bod gan Cistanche y gallu gwrthocsidiol da ac mae ganddo'r potensial i fod yn gyffur i atal a thrin clefydau heneiddio'r croen. Ar yr un pryd, mae gan echinacoside yn Cistanche allu sylweddol i ysbeilio radicalau rhydd DPPH ac mae ganddo'r gallu i ysbeilio rhywogaethau ocsigen adweithiol ac atal diraddio colagen a achosir gan radical rhad ac am ddim, ac mae hefyd yn cael effaith atgyweirio da ar ddifrod anion radical rhad ac am ddim thymin.

Cliciwch Ar Buddion Tabledi Cistanche

【Am ragor o wybodaeth: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1. Rhagymadrodd

Mandarins, C. reticulata, yw rhai o'r cnydau sitrws mwyaf rhyfeddol ar gyfer defnydd ffres [1]. Fe'u cyflwynir yn aml fel 'tangerines;' fodd bynnag, 'Mandarin' yw'r enw mwyaf poblogaidd. Mae sawl hybrid ac amrywiaeth o rywogaethau mandarin yn cael eu dosbarthu mewn natur [1]. Mae'r rhywogaethau mwyaf enwog, soffistigedig yn cynnwys C. unshiu Marcovitch, C. nobilis Loureiro, C. deliciosa Tenore, a C. reticulata Blanco [1,2]. Mae mandarinau ymhlith y prif ffrwythau Sitrws sy'n cael eu cynaeafu mewn llawer o wledydd. Er bod y cnydau'n cael eu cyflogi'n bennaf ar gyfer pwdin, mae ganddyn nhw bwysigrwydd masnachol sylweddol oherwydd eu olewau hanfodol [3]. Mae blasau sitrws yn cael eu cymhwyso mewn diodydd, melysion, cwcis a phwdinau [4]. Hefyd, defnyddir croen C. reticulata ar gyfer cyflasynnau gwirod [4].

Mae tocio gwrthdro yn fath o ddull sgrinio rhithwir y gellir ei drin i ragweld y targedau moleciwlaidd posibl ar gyfer strwythur cyfansawdd penodol. Yn flaenorol, rydym wedi defnyddio'r dull sgrinio rhithwir effeithlon hwn i bennu'r targedau protein gorau ar gyfer sawl cynnyrch naturiol ynysig [5]. Fodd bynnag, nid yw'r sgoriau tocio a ddeilliodd o'r cam sgrinio rhagarweiniol hwn ond yn darparu rhywfaint o wybodaeth am y cyfatebolrwydd strwythurol rhwng y targedau protein a'r strwythur cyfansawdd ymholiad [6]. Yn unol â hynny, mae arbrofion efelychu dynameg moleciwlaidd (MDS), gan gynnwys egni rhydd rhwymol absoliwt (∆ Gbinding) yn darparu canlyniadau mwy trylwyr y gellir ymddiried ynddynt y gellir eu dewis ar gyfer profion in vitro. Yma, bu i ni ddarostwng hadau C. reticulata i ynysu cromatograffig fesul cam er mwyn cael rhyw syniad am y prif ffytocemegol yn y cynnyrch gwastraff hwn. Yn dilyn hynny, gwnaethom ymchwilio i weld a oes gan y ffytogemegau hynny effeithiau ffarmacolegol penodol trwy eu gwneud yn destun dadansoddiad silico fesul cam a gychwynnwyd gan docio gwrthdro cynhwysfawr a ddaeth i ben gyda nifer o arbrofion MDS. Mae potensial y ffytogemegau bioactif sy'n deillio o'r hadau C. reticulata yn taflu goleuni ar allu uchel cynhyrchion gwastraff ffrwythau bwytadwy fel cronfa enfawr ar gyfer asiantau hybu iechyd.

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1. Deunydd Planhigion

Casglwyd ffrwythau C. reticulata ym mis Ionawr 2021 o ranbarth lleol yn Beni-Suef, yr Aifft, a'u dilysu gan uwch fotanegydd, yr Athro Dr Abd El-Halim A. Mohammed Adran Ymchwil Fflora a Ffytotaxonomeg; Sefydliad Ymchwil Garddwriaethol; Docki; Cairo; yr Aifft). Cadwyd sbesimen o'r ffrwythau dan rif taleb 2021-BuPD 80 yn yr Adran Pharmacognosy; Ysgol Fferylliaeth; Prifysgol Beni-Suef; yr Aifft).

2.2. Cemegau ac Adweithyddion

Cafodd asetad ethyl (EtOAc), methanol (MeOH), n-Hexane (n-Hex), ethanol (EtOH), dichloromethane (DCM), a n-butanol (n-BuOH) eu caffael gan El-Nasr Company, yr Aifft. Darparodd Sigma Aldrich, Saint Louis, MO, UDA, doddyddion deuteredig ar gyfer dadansoddiad NMR yn ogystal â thoddyddion purdeb uchel ar gyfer HPLC, sbectrosgopig, a dadansoddiadau cromatograffig (ee, methanol-d4 (CD3OD), dimethyl sulfoxide-d6 (DMSO), clorofform -d (CDCl3), methanol ar gyfer HPLC, dŵr gradd HPLC, ac acetonitrile gradd HPLC). Ar gyfer ynysu cromatograffig, mae Sephadex LH20 (0.25–0.1 mm, GE Healthcare, Sigma-Aldrich; CA, UDA) a gel Silica (E-Merck, Sigma-Aldrich, CA, UDA) eu defnyddio. Ar gyfer cromatograffaeth hylif gwactod, defnyddiwyd gel silica ar gyfer TLC (Pharmaceuticals and Chemicals; El-Nasr Company; Cairo, Egypt) (VLC). Defnyddiwyd gel silica wedi'i orchuddio ymlaen llaw (E-Merck, Darmstadt, yr Almaen) ar gyfer astudiaethau TLC. Nodwyd mannau a gynhyrchwyd gan para anisaldehyde ar ôl gwresogi ar 110 ◦C [7]. Daeth yr holl ddeunyddiau ar gyfer ymchwiliadau biolegol gan Sigma Chemical Company (SCC; CA, UDA).

2.3. Dadansoddiadau Sbectrol

Cafwyd signalau NMR ar 400 ar gyfer 1H-NMR a 100 MHz ar gyfer 13C-NMR. Defnyddiwyd brigau toddyddion CDCl3-d, CD3OD-d4, a DMSO-d6 fel signalau cyfeirio. Cafwyd y signal NMR gan ddefnyddio peiriant NMR Bruker Advance-III 400 MHz (Bruker AG-Billerica, California, MA, UDA).

Casglwyd data màs cydraniad uchel gan ddefnyddio peiriant Cromatograffaeth Hylif Acquity-Ultra-Performance-Hylif wedi'i gysylltu â Sbectromedr-Màs-Hybrid-Hybrid-Time-of-Flight (Waters, Milford, MA, UDA). Defnyddiwyd Agilent/1260-Infinity-preparative-HPLC i gyflawni gwahaniadau cromatograffig HPLC.

2.4. Paratoi Detholiad Had C. reticulata

Prynwyd hadau C. reticulata (1 cilogram) yn ffres ac yna eu sychu yn y cysgod yn yr awyr. Yn dilyn hynny, cafodd yr hadau eu gratio gan ddefnyddio peiriant malu (Henan, Mainland China). Yna echdynnwyd y cynnyrch powdr yn drylwyr gan 70 y cant EtOH (1 L × 5). Crynhowyd y detholiad hylif canlyniadol gan ddefnyddio Anweddydd Rotari (Buchi-Rotavapor-R-300, ColeParmer, Vernon Hills, IL, UDA) o dan wactod ar 45 ◦C i ddarparu 100 g echdynnyn sych amrwd, a gafodd ei rannu wedyn gan ddefnyddio cyfres o doddyddion polaredd cynyddol: n-Hex-DCMEtOac-n-BuOH. Cafwyd ffracsiynau I (24.0 g), II (5.0 g), III (3.0 g), a IV (6.0 g) trwy anweddu'r cyfnod organig gwahanedig ar bwysau gostyngol. Cafodd yr holl echdynion a ffracsiynau eu storio ar 4 ◦C ar gyfer dadansoddiad ffytocemegol a biocemegol dilynol.

2.5. Ynysu Prif Gynhyrchion Naturiol Hadau C. reticulata 

Defnyddiwyd colofn gel TLC-silica i amlygu ffracsiwn I (20 g) i VLC arferol. Defnyddiwyd elution olynol EtOAc ac n-Hex (0–100 y cant , 5 y cant yn cynyddu). Cafwyd tri is-ffracsiwn (I1-I3) trwy gasglu ffracsiynau unfath a'u hanweddu dan bwysau llai. Ar golofn gel silica arall, roedd is-ffracsiwn I1 (1.0 g) wedi'i ffracsiynu'n helaeth. Elution cromatograffig ei wneud gan n-Hex i EtOAc, cymysgeddau graddiant (0-10 y cant , 1 y cant yn codi, 100 ml yr un) i ddarparu cyfansawdd 13. (10 mg).

Cafodd is-ffracsiwn I2 (50 mg) ei gromatograffi ymhellach ar gel silica-60 (100 × 1 cm, 20 g). Gwnaed y weithdrefn gromatograffig gan ddefnyddio DCM: MeOH, cymysgedd isocratig (0.5 y cant , 500 mL) i gynnig cyfansoddion 8 (20 mg) a 9 (15 mg). Roedd is-ffracsiwn I3 wedi'i ffracsiynu braidd ar gel silica 60 (100 × 1 cm, 20 g). Cynhyrchodd Elution ddefnyddio DCM: MeOH, cymysgedd isocratig (0.5 y cant , 500 mL) i fforddio 10 (20 mg).

Defnyddiwyd colofn gel silica TLC i ddatgelu ffracsiwn II (2.5 g). DCM: Defnyddiwyd EtOAc (0–100 y cant , yn codi 5 y cant ) i eliwtio'r samplau. Derbyniwyd yr elifion a gynhyrchwyd mewn rhannau 250 ml. Cafwyd ffracsiynau union yr un fath a'u lleihau i ddau is-ffracsiwn (II1-II2) ar bwysau llai. Ar golofn gel silica arall, roedd is-ffracsiwn I1 (1.0 g) wedi'i ffracsiynu'n helaeth. Cafodd cyfansawdd 5 ei ddiystyru gan ddefnyddio DCM: EtOAc (0-10 y cant, 1 y cant yn codi, 100 ml yr un) (10 mg).

Cafodd is-ffracsiwn I2 (50 mg) ei gromatograffi ymhellach ar gel silica60 (100 × 1 cm, 20 g). Cymhwyswyd elution cromatograffig gan ddefnyddio DCM i MeOH, (elution isocrataidd; 0.5 y cant, 500 mL) i gynnig cyfansoddion 11 (20 mg) a 12 (15 mg).

Ar VLC arferol, gwahanwyd ffracsiwn IV (6.0 g) gan ddefnyddio gel silica. DCM: Defnyddiwyd EtOAc (0-100 y cant , 5 y cant yn codi, 250 ml yr un) i eliwtio'r samplau. Derbyniwyd yr elifion cromatograffig mewn cynyddiadau o 250 ml.

Cafodd ffracsiynau unfath eu grwpio a'u lleihau o dan bwysau llai i gynhyrchu pum isffracsiwn (IV1-V5); Dim ond ychydig o gromatograffi a gafodd is-ffracsiynau IV1, IV2, IV3, ac IV4 ar golofn Sephadex-LH20 wedi'i hegluro â MeOH i gynhyrchu 4 (30 mg), 6 (50 mg), 7 (70 mg), ac 1 (15 mg, yn y drefn honno, tra bod is-ffracsiwn IV5 yn sylweddol pur (10 mg).

2.6. Yn Astudiaeth Silico

2.6.1. Tocio Gwrthdro

Daeth y targedau moleciwlaidd tebygol ar gyfer y flavonoidau wedi'u gwahanu i ben trwy wneud sgrinio rhithwir yn dibynnu ar docio gwrthdro yn erbyn bron pob protein a roddwyd yn y Banc Data Protein; PDB.

Defnyddiwyd platfform ar-lein IdTarget ar gyfer y cam hwn. Mae'r rhaglen sgrinio paltry strwythur rhithwir hon yn defnyddio dull tocio gwrthdro penodol, sef DivideConquer-Docking, sy'n adeiladu rhwydweithiau cyfyngedig sy'n gorgyffwrdd, gan wneud archwilio'r protein yn fwy cyfyngedig. O ganlyniad, gall berfformio nifer fawr o dociau mewn cyfnod byr o amser [8]. Disgrifiwyd y sgoriau canlyniadol fel rhestr o raddfeydd yn amrywio o'r gwaethaf i'r gorau. Er mwyn nodi'r targedau protein gorau posibl ar gyfer pob adeiledd penodol, defnyddiwyd sgôr affinedd o −10 kcal/mol fel gwerth terfyn (Tabl 1).

Cynhaliwyd arbrofion efelychu dynameg moleciwlaidd (MDS) fel yr adroddwyd yn gynharach gan Alhadrami et al. 2021 [6]. Cyflogwyd y peiriant MDS o feddalwedd Maestro (hy, Desmond v. 2.2; Hamburg, yr Almaen) ar gyfer gweithredu arbrofion MDS [9–11]. Defnyddiwyd yr OPLS-Force-Field ar gyfer rhediadau efelychu.

Perfformiwyd y paratoad strwythurau protein gan yr algorithm System-Builder, lle cawsant eu pacio y tu mewn i flwch dŵr orthorhombig (20 Å3 ) gan ddefnyddio model dŵr TIP3P ar y cyd ag ïonau Na plus , a Cl−, {{ 16}}.15 M ar gyfer pob un ohonynt. Yna, roedd y strwythurau wedi'u modelu wedi'u hoptimeiddio yn destun cydbwysedd rhagarweiniol ar gyfer 10 ns. Cafodd strwythurau ligand eu paramedroli'n awtomatig yn ystod y cam paratoi strwythur yn ôl y OPLSForce-Field. Dylid paramedroli proteinau sy'n cynnwys metel fel MMPs sy'n cynnwys histidine-Zn ynghyd â chymhleth 2 yn y safle effeithiol yn ystod y cam ffurfio protein. I fynd ymlaen, dylid sefydlu cyflwr hetero ar gyfer atomau hetero fel Zn (Generate Hetero States). Mae'r swyddogaeth hon yn rhan o ddewin Ffurfiant Protein y maestro. Bydd y cam hwn yn hwyluso datblygiad cyflwr hetero iawn neu gyflwr cofalent cydlynu, ar gyfer yr heteroatom (hy, Zn plws 2) mewn rhwydwaith gyda'r protein fel bod meysydd grym fel OPLS yn gallu arsylwi'r atom sinc yn gyflym. Ar gyfer atgynhyrchiadau a wnaed gan feddalwedd Nano-raddfa Molecular Dynamics (NAMD 3.0) [12], pennwyd topolegau a pharamedrau strwythurau wedi'u modelu gan y llwyfan ar-lein Ligand Reader a Modeler. Cyflogwyd lluoedd harmonig Tcl i ddal Zn plus 2 yn eu lle.

Perfformiwyd cyfrifiad egni rhydd rhwymol (∆ Gbinding) fel y disgrifiwyd yn flaenorol gan Alhadrami et al. 2021 [6]. ∆ Perfformiwyd malu gan ddefnyddio'r weithdrefn aflonyddu ynni am ddim (FEP) [12], y manylir arni yng nghyhoeddiad Kim et al. Yn gryno, mae'r dechneg hon yn cyfrifo'r egni hygyrch gofynnol ∆Rhingo gan ddefnyddio'r hafaliad ∆ Binding=∆GCComplex − ∆GLigand. Cyfrifir gwerth pob ∆ Malu gan ddefnyddio rhaglen NAMD mewn arbrofion ar wahân.

Gellir paratoi'r holl ffeiliau mewnbwn trwy'r wefan CharmmGUI. Defnyddiwyd y ffeiliau wedyn i gynhyrchu'r cyfrifiadau ∆Crwymo cynlluniedig gan ddefnyddio'r protocol FEP yn NAMD. Gosodwyd y cydbwysedd yn ddiweddarach yn y CNPT (300 K, 1 atm, Langevin-Piston-Pressure "Complex" - "Ligand") ym modolaeth y model dŵr TIP3P. Yn ddiweddarach, cynhyrchwyd efelychiadau FEP 10 ns ar gyfer pob strwythur, a chyfrifwyd y 5 ns olaf o'r symiau ynni sydd ar gael ar gyfer y cyfraddau ynni rhydd gorffenedig [12]. Yn y pen draw, rhagwelwyd a gwerthuswyd y ystumiau rhwymol trwy ddefnyddio'r rhaglen VMD [13].

2.7. Assay In Vitro o Weithgaredd Hyaluronidase

Ffurfiwyd gweithgaredd atal hyaluronidase yn unol â'r weithdrefn a sefydlwyd yn gynharach a roddwyd i Chaiyana et al. 2019 [14]. Amcangyfrifwyd yr effaith ataliol tuag at weithgaredd hyaluronidase o'r hafaliad canlynol: ataliad hyaluronidase ( y cant )=(1 − A/B) × 100, lle mae A a B yn gymeriad asid hyaluronig ar ôl triniaeth mewn bodolaeth neu ddiffyg y sampl, ar wahân. Fel rheolydd positif, defnyddiwyd 6-asid O-palmitoyl-Lascorbig. Gwnaed yr arbrawf yn driphlyg.

2.8. Assay In Vitro o Weithgaredd Xanthine Oxidase

Cynhaliwyd potensial ataliol Xanthine oxidase (XO) yn ôl y dull a ddisgrifiwyd yn flaenorol [15]. Mesurwyd y lliw a gynhyrchwyd oherwydd rhyddhau hydrogen perocsid yn ystod y broses o ocsideiddio XO ar 570 nm gan ddefnyddio'r darllenydd plât EPOCH™ "MICROPLATE READER (BIOTEK)". Cymysgwyd pedwar deg pedwar microlitr o glustogiad xanthine oxidase â 2 µL o hydoddiant swbstrad xanthine a 2 µL o XO. Cymhwyswyd L-mimosine fel rheolaeth gadarnhaol. Perfformiwyd yr arbrawf hwn yn driphlyg.

2.9. Assay In Vitro o Weithgaredd Tyrosinase

Gwelwyd gweithgaredd atal tyrosinase pob flavonoid gan ddefnyddio'r broses DOPAchrome sy'n cydymffurfio â chynllun Momtaz et al. 2008 [16], a addaswyd o Nerya et al. 2003 [17] , a Curto et al. 1999 [18]. Mesurwyd y gweithgaredd ataliol tyrosinase o'r hafaliad canlynol: gweithgaredd ataliol ( y cant )=(1 − A/B) × 100, (9) lle mae A a B yn amsugnyddion y cymysgedd ym mhresenoldeb neu absenoldeb prawf flavonoid, yn y drefn honno. Gwnaed pob arbrawf yn driphlyg.

3. Canlyniadau a Thrafodaeth

3.1. Ymchwiliad Ffytocemegol i Hadau C. reticulata

Gan ddefnyddio UV, 1H, a DEPT-Q NMR, ar wahân i gymharu â'r llenyddiaeth a defnyddio rhai samplau dilys, y cyfansoddion hysbys kaempferol 1 [19], kaempferol-40 -O- -Dglucopyranoside 2 [19], kaempferol -7-O- -D-glucopyranoside 3 [19], 2-hydroxy genistein 4 [19], hesperetin 5 [19], 3000 (1000-O- - D-glucopyranosyl)-swcros 6 [20], 6(1000 -O- -Dfructofuranosy)-30 (1"-O- -D-glucopyranosyl)-swcros 7 [20 ], 1-O-elaidoyl-glyserol 8 [21], 1- O-oleoyl-2-palmitoyl-glyserol 9 [22], 1-O-oleoyl-glyserol 10 [ 21], (E)-3-((4-methyl heptyl oxy) carbonyl)asid acrylig 11 [23], (E)-3-((6-methyl nonyl oxy) carbonyl)asid acrylig 12 [23] a -sitosterol 13 [24] (Ffigur 1) eu hadnabod o'r echdyniad ethanolig crai o hadau reticulata C. Gwahanwyd yr holl gyfansoddion a nodwyd 11 a 12 yma am y tro cyntaf o'r genws Sitrws ( Ffigurau 1 ac S1–S28) Mae'n werth nodi, yn wahanol i'r flavanones a'r flavones a ddosbarthwyd yn eang yn rhannau o'r awyr C. reticulata, gan gynnwys y ffrwythau, ymddengys mai flavonols oedd y prif fath o flavonoidau yn yr hadau.

3.2. Mewn Ymchwiliad Silico

Er mwyn nodweddu gweithgaredd biolegol y cyfansoddion ynysig, fe wnaethom eu gwneud yn destun cyfres o ddadansoddiadau mewn-silico. Yn gyntaf, fe wnaethom ganolbwyntio ar y flavonoidau ynysig (1-5) ar gyfer ein cam sgrinio rhithwir cychwynnol oherwydd bod flavonoidau yn fetabolion eilaidd planhigion bioactif adnabyddus. Yn ogystal, mae'r cyfansoddion ynysig sy'n weddill (6-13) yn fetabolion cynradd cyffredin nad ydynt yn debygol o fod ag unrhyw effeithiolrwydd therapiwtig.

Bu strwythurau flavonoidau 1-5 yn destun sgrinio rhithwir yn seiliedig ar docio yn erbyn bron pob protein a gynhaliwyd yn PDB. Defnyddiwyd y platfform ar-lein, sef idTarget ar gyfer y dasg sgrinio rithwir ragarweiniol hon [8]. Adalwyd y sgorau a adferwyd fel rhestr o'r gwerth negyddol mwyaf i'r un lleiaf. Rydym yn gosod sgôr affinedd terfynol o -10 kcal/mol fel gwerth torri allan i nodi'r targedau da ar gyfer pob flavonoid ynysig (1-5). Mae'n debyg bod sawl targed moleciwlaidd diddorol yn dargedau da ar gyfer y cyfansoddion cysylltiedig hyn, gan gynnwys kinases protein a synthases (Tabl 1).

Yn ddiddorol, adroddwyd am dri tharged moleciwlaidd cyffredin rhwng yr ensymau flavonoidau hyn, hyaluronidase, xanthine oxidase, ac tyrosinase. Mae'r ensymau hyn yn gysylltiedig â chynnal croen iach [25-30], ac felly nododd y cam sgrinio rhithwir rhagarweiniol y flavonoidau hyn fel asiantau hybu gofal croen tebygol.

3.3. Efelychu Dynameg Moleciwlaidd a Chyfrifiad Ynni Rhad Ac Rhwymo Absoliwt

Er mwyn cefnogi ymhellach y cam sgrinio rhagarweiniol yn seiliedig ar docio, gwnaethom amcangyfrif yr egni rhydd rhwymol absoliwt (∆ Gbinding) cyfansoddion 1-5 gyda hyaluronidase, xanthine oxidase, a ensymau tyrosinase gan ddefnyddio'r dull MDS-ddibynnol, sef y dull aflonyddu ynni rhydd ( FEP) [26,31].

Fel y dangosir yn Nhabl 2, dim ond cyfansoddion 2, 3, a 5 oedd yn gallu cyflawni'r affinedd uchaf tuag at hyaluronidase, xanthine oxidase, a ensymau tyrosinase gyda gwerthoedd malu ∆ yn amrywio o −8.1 i −9.9 kcal/mol. Cafodd y cyfansoddion sy'n weddill werthoedd ∆ rhwymo yn uwch na −6 kcal/mol.

Perfformiwyd arbrofion MDS 50 ns pellach i ymchwilio i ryngweithiadau a sefydlogrwydd rhwymo cyfansoddion 2, 3, a 5 gyda hyaluronidase, xanthine oxidase, a ensymau tyrosinase. Fel y dangosir yn Ffigur 2, cyflawnodd cyfansoddyn 3 a'r ligand cydgrisialog sefydlogrwydd rhwymo tebyg y tu mewn i safle rhwymo'r ensym trwy gydol ISD gyda RMSD o ~2.8 Å o'r ystumiau tocio cychwynnol. Roedd RMSDs cyfansawdd 2 0 hefyd yn debyg i un cyfansawdd 3 tan 28.7 ns pan fydd yn dechrau gwyro ychydig yn uwch o gyfansoddyn 3 a'r ligand cydgrisialog i gyflawni RMSD cyfartalog o 3.8 Å trwy gydol MDS. Roedd y ciplun olaf sy'n deillio o'r MDS o gyfansoddion 2, a 3 a'r ligand cocristalized yn nodi mai TYR-75, ASP-129, a GLU-131 oedd y gweddillion asid amino rhyngweithiol cyffredin drwy H- bondio.

O ran xanthine oxidase, cyflawnodd cyfansoddyn 3 rwymo sefydlog y tu mewn i'w safle gweithredol trwy gydol ISD, gan gofnodi RMSD cyfartalog o 2.6 Å a oedd yn cydgyfeirio i un yr atalydd cyd-grisialog (RMSD ~2.4 Å). Roedd rhwymo cyfansoddyn 3 mor sefydlog yn amlwg oherwydd y rhwydwaith bondiau H a sefydlodd gyda LYS-771, PHE-798, GLU-802, SER-876, ARG{{). 12}}, PHE-911, ARG-912 a THR-1010 (Ffigur 3).

Yn olaf, roedd cyfansoddyn 5 hefyd yn sefydlog y tu mewn i safle gweithredol y tyrosinase trwy gydol 50 ns MDS gyda gwerth RMSD cyfartalog o 4.9 Å, a oedd yn uwch na gwerth yr atalydd cyd-grisialog (RMSD ~3.8 Å). Fel y dangosir yn y ciplun diwethaf a ddeilliodd o'r MDS, roedd cyfansawdd 5 yn gallu rhyngweithio â'r ddau ïon Zn2 ​​plws yn yr un modd â'r atalydd cyd-grisialog. Yn ogystal, cafodd ei sefydlogi gyda sawl bond H gyda LYS-198, GLY-209, TYR-362, ARG-374, a THR-391 (Ffigur 4 ).

【Am ragor o wybodaeth: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】