Meta-ddadansoddiad o Ganlyniadau Meintioli NAD(P)(H) yn Arddangos Amrywiant Ar draws Meinweoedd Mamalaidd
Jun 01, 2023
Mae Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD plus) yn chwarae rhan bwysig mewn metaboledd ynni a llwybrau signalau sy'n rheoli swyddogaethau cellog hanfodol. Mae'rmwy o ddiddordeb mewn NAD ynghyd â metaboleddaNAD a mwy - rhoi hwb i therapïauwedi atgyfnerthu'r angen am NAD cywir ynghyd â meintioli. Er mwyn archwilio'r mesurau NAD(P)(H) cyhoeddedig ar draws meinweoedd mamalaidd, gwnaethom berfformio ameta-ddadansoddiad o'r data presennol. Canfu chwiliad cronfa ddata Ovid MEDLINE erthyglau gyda chanlyniadau meintioli NAD(P)(H) a gafwyd o feinweoedd mamalaidd a gyhoeddwyd rhwng 1961 a 2021. Gwnaethom sgrinio 4890 o gofnodion a thynnu data meintiol, yn ogystal â'rdulliau meintioli, amodau cyn-ddadansoddol, a nodweddion pwnc. Y crynodiadau NAD(P)(H) ffisiolegol a echdynnwyd ynmeinweoedd amrywiolo lygod, llygod mawr, a bodau dynol, datgelodd amrywioldeb rhyng-ddulliau a rhyng-ddulliau pwysig a oedd yn ymestyn i gyhoeddiadau diweddar. Mae hyn yn amlygu’r potensial cymharol wael ar gyfer dadansoddiadau traws-arbrofol ar gyfer data meintiol NAD(P)(H) a phwysigrwydd safoni ar gyfer dulliau meintioli NAD(P)(H) agweithdrefnau cyn-ddadansoddolar gyfer rhag-glinigol yn y dyfodol aastudiaethau clinigol.
Cliciwch Yma i Gael Priodweddau Gwrth-ocsidiad Cistanche a Chynhyrchion Gwrth-Heneiddio
Mae nicotinamide adenine dinucleotide yn chwarae rôl ddeuol fel arhydwythiad - ocsidiad (redocs)cyd-ensym, yn ei ocsidiedig (NAD(P) plus ) affurflenni llai (NAD(P)H)., ac fel acyd-swbstrad (NAD(P) plws ) ar gyfer ensymau sy'n gysylltiedig â dadysyleiddiad1, mono- a poly-ADP-ribosylation2,3, a chreu ail negeseuwyr seiliedig ar adenin4–7. Mae cymhareb te NAD(P) plws /NAD(P)H yn ddangosydd pwysig o gyflwr rhydocs mewngellol ac mae'n chwarae rhan hanfodol wrth reoleiddio llwybrau metabolaidd allweddol8,9. Er enghraifft, mae NAD plus yn hanfodol ar gyfer glycolysis, ynghyd â'r cylch asid tricarboxylic (TCA), i ddarparu'r hyn sy'n cyfateb i leihau yn ystod cynhyrchu adenosine triffosffad (ATP), prif ffynhonnell ynni'r gell8,9. Pan fydd NAD plus yn gyfyngedig, gellir ei adfywio hefyd o NADH trwy eplesu pyrwfad i gynhyrchu lactad mewn celloedd mamalaidd, a thrwy hynny gynnal cydbwysedd rhydocs cellog25. Gall NAD plus a NADH hefyd gael eu ffosfforyleiddio i NADP a NADPH, yn y drefn honno, gan NAD plus Kinases (NADKs)10,11. Mae NADPH yn hanfodol ar gyfer biosynthesis gostyngol, trawsgludiad signal, ymatebion gwrthocsidyddion cellog, ac yn arbennig, lleihau glutathione12-14. Yn y sytosol, mae NADP plws yn cael ei leihau i NADPH gan y glwcos-6-ffosffad dehydrogenase a 6-ffosffogluconate dehydrogenas y llwybr pentos ffosffad (PPP), ymhlith adweithiau eraill13. Tra yn y mitocondria, mae cynhyrchu NADPH yn cael ei gynnal gan adweithiau amrywiol, gan gynnwys y rhai sy'n dibynnu ar weithgaredd ensymau niwcleotid nicotinamid transhydrogenase (NNT) a dehydrogenases isocitrate (IDH2)15. O ganlyniad, dangoswyd bod statws NAD(P)(H) yn effeithio ar signalau a metaboledd celloedd, homeostasis ynni, biogenesis mitocondriaidd, ymatebion straen ocsideiddiol, a chynnal a chadw ac atgyweirio DNA16-18. Ymhellach, ers datblygiad clefydau sy'n gysylltiedig ag oedran, megis gordewdra19, clefyd yr afu brasterog di-alcohol20,21, niwroddirywiad22, clefydau mitocondriaidd23 a cardiofasgwlaidd24, ac atroffi cyhyrau neu nychdod25, mae wedi'i gysylltu â newidiadau mewn dulliau gweithredu NAD a metabolion sy'n gysylltiedig â NAD. sy'n anelu at gynnal NAD a homeostasis yn destun ymchwiliad ar hyn o bryd.
Y tu hwnt i drawsnewidiadau rhydocs cyffredin, gellir bwyta NADP plus trwy gyfnewid ei grŵp nicotinamid ag asid nicotinig mewn adwaith a gataleiddiwyd gan synthases cADPR, megis CD38, i ffurfio'r ail negesydd NAADP, sy'n ymwneud â symud calsiwm, secretiad hormonau, a chell imiwn. amlhau6,7,26. Gellir bwyta NAD plus hefyd wrth weithredu fel cyd-swbstrad i ffurfio nicotinamid (NAM), y gellir ei ddefnyddio fel swbstrad i adfywio NAD plus trwy lwybr achub NAM. Gellir methylated NAM hefyd i ffurfio 1-methyl NAM (meNAM), y gellir ei ocsidio ymhellach i'r cynhyrchion diraddio N1-methyl-2-pyridone-5-carboxamide (2py) a N1-methyl-4-pyridone-3-carboxamid (4py). Yn y pen draw, gellir clirio'r catabolitau methyl o'r corff trwy wrin27,28. Gall te NAD plus pool hefyd gael ei leihau trwy fwyta NADP plws trwy adwaith cyfnewid sylfaen ar gyfer ffurfio'r ail negesydd NAADP14. Felly, er mwyn cynnal y gronfa o NAD plus , mae angen biosynthesis trwy'r llwybr Preiss-Handler (gan ddechrau gyda'r moleciwl fitamin B3 cyffredin niacin (NA; asid nicotinig)), y llwybr biosynthesis de novo (gan ddechrau gyda'r tryptoffan asid amino (Trp)) neu adfywio o drawsnewid NAM trwy'r llwybr achub i NMN yna i NAD plus . Yn olaf, mae'r llwybr achub hefyd yn bwysig ar gyfer biosynthesis NAD plus o nicotinamide riboside (NR), ffurf amgen o fitamin B3 a geir mewn bwydydd, yn dilyn ei ffosfforyleiddiad gan nicotinamide riboside kinase i NMN ac yna ei drawsnewid i NAD plus trwy'r llwybr achub .
Felly mae deall deinameg y metabolome NAD plus wedi dod yn hanfodol ac yn y pen draw mae angen meintioli metabolyn trwyadl er mwyn deall yn well aflwydd NAD ynghyd â metabolion yn ystod ffisioleg arferol, neu gyda dilyniant afiechyd neu heneiddio'n iach. Mae darlun clir o'r newidiadau hyn yn hanfodol ar gyfer cysylltu newidiadau yn y NAD ynghyd â metabolome ag adweithiau ensymatig neu rhydocs i lawr yr afon, sy'n dal yr allwedd i newidiadau mewn ffenoteipiau meinwe. O ystyried y swm sylweddol o ddata meintiol a adroddwyd yn flaenorol ar NAD ynghyd â metabolion mewn mamaliaid, gan gynnwys nifer cynyddol o adroddiadau mewn bodau dynol, mae'n hanfodol ac yn amserol crynhoi'r newidiadau hyn yn ystod iechyd a chlefydau. Mae nifer o astudiaethau wedi archwilio cydrannau'r NAD ynghyd â metabolome mewn cnofilod a bodau dynol o dan wahanol gyflyrau metabolaidd, oedrannau a chlefydau, ond eto'n dibynnu ar wahanol ddulliau ar gyfer paratoi sampl neu feintioli. Mae paratoi samplau yn bwysig ar gyfer metabolion sy'n ymwneud ag adweithiau rhydocs oherwydd diraddiad posibl a rhyngnewidiadau o dan amodau penodol29,30. Ar gyfer meintioli, credir bod cromatograffaeth hylifol ynghyd â sbectrometreg màs (LC-MS) a sbectrometreg cyseiniant magnetig (MRS) yn ddulliau sensitif a phenodol31–33, tra mai profion cylchredeg ensymau yw'r rhai mwyaf cyffredin. Mae dulliau meintiol LC-MS yn gofyn am gynnwys rheolaethau ansawdd yn gynhwysfawr ar gyfer metabolion unigol sy'n cael eu mesur ac ar gyfer effaith matrics cyffredinol y samplau, effaith sy'n esbonio ymatebion sbectrometrig màs amrywiol ar gyfer dadansoddwr penodol pan gaiff ei fesur mewn atebion gwahanol. Heb y rheolaethau hyn, mae LC-MS yn lled-feintiol ar y gorau. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom nodi amrywiaeth sylweddol mewn mesurau NAD(P)(H) ar draws astudiaethau cnofilod a dynol, gan bwysleisio'r angen am ddulliau priodol o adrodd a phrotocolau prosesu sampl a dadansoddi safonol. At ei gilydd, mae angen setiau data NAD(P)(H) cymaradwy ar draws astudiaethau er mwyn dehongli’r data presennol a’r dyfodol yn ystyrlon ym maes NAD ynghyd â bioleg.
Canlyniadau
Meta-ddadansoddiad o ddulliau meintioli cyffredin, ynghyd â rhywogaethau, rhyw, a meinweoedd a astudiwyd.
Yn hanesyddol, roedd dulliau cynnar a ddefnyddiwyd ar gyfer meintioli NAD(P)(H) yn dibynnu ar briodweddau sbectroffotometrig neu fflworometrig y metabolion hyn34,35. Yn fwy diweddar, mae dulliau beicio ensymau ynghyd â chanfod sbectroffotometrig neu fflworometrig yn cael eu defnyddio'n fwy cyffredin i wahaniaethu rhwng lefelau cyd-ensym NAD(P)(H)36–38. Arweiniodd yr angen cynyddol am sensitifrwydd a datrysiad uchel wrth feintioli'r cyd-ensymau hyn, ynghyd â'r angen i fesur metabolion eraill sy'n gysylltiedig â NAD a mwy, at ddefnyddio cromatograffaeth hylif perfformiad uchel (HPLC) a thechnegau LC-MS. O’r dulliau hyn, LC-MS yw’r dull a ffefrir, gan fod sbectrometreg màs wedi’i chyfuno â chromatograffaeth hylif yn caniatáu ar gyfer adnabod yn benodol cyfansoddion eliwiedig ynghyd â’r budd ychwanegol o gynnwys metabolion isotop NAD(P)(H) fel ansawdd pigyn mewnol. rheolaethau. Er gwaethaf eu manteision dros brofion sbectrophotometrig neu fflworometrig clasurol, mae HPLC ac LC-MS ill dau yn parhau i fod yn ddrud ac yn cymryd llawer o amser, sy'n esbonio pam mae profion beicio ensymau yn parhau mewn astudiaethau diweddar.
Gan ddefnyddio dull systematig, o'r 241 o astudiaethau cymwys (Deunydd Atodol 2), dewiswyd 205 o astudiaethau a oedd yn cynnwys meta-ddadansoddiad meintiol o grynodiadau NAD(P)(H) mewn meinweoedd llygoden, llygod mawr a dynol i'w dadansoddi ymhellach. O'r astudiaethau hyn, defnyddiodd 46.7 y cant brofion beicio ensymau, gan gynnwys canfod lliwimetrig (40.9 y cant) neu fflworometrig (5.8 y cant), tra bod 17.8 y cant yn defnyddio dulliau HPLC (ynghyd â synwyryddion UV neu fflworoleuedd) a 13.2 y cant yn defnyddio profion LC-MS ( Ffig. 1a). Nid oedd y rhan fwyaf o astudiaethau'n cynnwys disgrifiad manwl o'r gweithdrefnau echdynnu metabolion. Fodd bynnag, roedd gweithdrefnau echdynnu a ddefnyddir yn gyffredin yn cynnwys naill ai byfferau echdynnu gyda syrffactyddion neu hebddynt (Triton®, Tris, Dodecyl trimethyl amonium bromid), neu doddyddion organig pegynol fel acetonitrile, methanol, ethanol, neu glorofform. Mae astudiaethau blaenorol wedi dangos bod anactifadu ensymau a'r amodau pH a thymheredd gorau posibl yn effeithlon o ran cadw sefydlogrwydd y gwahanol ffurfiau NAD(P)(H)30,39,40. Pan ddatgelwyd, proseswyd samplau o dan amodau tymheredd isel, ac ni chrybwyllwyd unrhyw ychwanegion rhydocs yn yr astudiaethau a gynhwyswyd. Cyfyngwyd ar adweithiau rhydocs gan anactifadu'r ensymau yn y samplau cyn mesuriadau metabolion NAD(P)(H), fel arfer trwy wlybaniaeth â thoddyddion fel ethanol, methanol, acetonitrile, neu asid perchlorig (PCA). Fodd bynnag, roedd y defnydd o PCA yn brin oherwydd natur asid-labile y ffurfiau llai (hy NADH a NADPH), yn ogystal â'r angen am gam niwtraleiddio ychwanegol. Ymhlith yr astudiaethau sy'n adrodd am ddefnyddio PCA yn ystod echdynnu metabolion (5.4 y cant), nododd 3.7 y cant NAD(P) ynghyd â chanlyniadau yn unig neu ddefnyddio ail ddull echdynnu anasidig ar gyfer meintioli NAD(P)H yn gywir. Dim ond 1.7 y cant o'r astudiaethau a adroddodd ganlyniadau NADH, cyfanswm NAD(H), a/neu NAD plus/NADH gan ddefnyddio echdynnu PCA yn unig. Ni ellid dadansoddi'r gogwydd posibl o'r astudiaethau hyn oherwydd y data cyfyngedig.
Cymariaethau o lefelau ffisiolegol cymedrig NAD(P)(H) ar draws meinweoedd ar gyfer cnofilod a bodau dynol.
Er mwyn helpu i nodi’r lefelau NAD(P)(H) ffisiolegol cymedrig disgwyliedig ar gyfer y meinweoedd llygoden, llygod mawr a dynol a astudiwyd amlaf, casglwyd data gennym o’r holl gohortau rheoli a math o wyllt o bob un o’r astudiaethau a gynhwyswyd (Deunydd Atodol 2). ). Yn benodol, cofnodwyd y lefelau NAD(P)(H) cymedrig wedi'u normaleiddio i bwysau meinwe neu, yn achos gwaed, cyfaint. Cynhwyswyd data o astudiaethau a oedd yn normaleiddio lefelau metabolit i gynnwys protein yn ein set ddata a gasglwyd (Deunydd Atodol 2) ond ni chawsant eu defnyddio ar gyfer dadansoddiad pellach o ystyried y nifer isel o ganlyniadau a adroddwyd. Yn ogystal, pan oedd yn bosibl, fe wnaethom gyfrifo'r cymarebau NAD(P) plws /NAD(P)H, fel adlewyrchiad o'r cyflwr rhydocs, yn ogystal â chyfanswm lefelau NAD(P)(H) (NAD(P) plws NAD (P)(H)) sy'n allbynnau adrodd cyffredin ar gyfer atebion NAD(P)(H). Roedd y data a echdynnwyd hefyd yn cynnwys y rhywogaethau, straen, oedran, rhyw, dull meintioli, amserlen diet a bwydo, math o sampl, dull casglu samplau, ac amser y cynhaeaf (cyn neu post-mortem).
Nododd y meta-ddadansoddiad o ddata NAD(H) y crynodiadau ffisiolegol cymedrig ar gyfer NAD plus a NADH mewn meinweoedd llygoden (Ffig. 2a,b, Ffig Atodol 1a,b) a llygod mawr (Ffig Atodol 2a,b), o anifeiliaid iau na 14 mis ar gyfer llygod a 18 mis ar gyfer llygod mawr. Cafodd yr ystod a echdynnwyd o werthoedd cymhareb NAD plws / NADH ffisiolegol a chyfanswm lefelau NAD(H) (NAD plus plus NADH) eu plotio ar gyfer llygod (Ffig. 2c,d) a llygod mawr (Ffig Atodol 2c,d). Yn wahanol i'r astudiaethau llygoden, nid oedd y rhan fwyaf o'r data llygod mawr a adroddwyd yn cynnwys oedran yr anifeiliaid; fodd bynnag, dewisom gynnwys y data hyn ar yr amod nad oedd yr astudiaeth yn dosbarthu eu carfannau fel rhai oed. O'r meinweoedd a astudiwyd amlycaf, mae'r meta-ddadansoddiad hwn yn dangos bod lefel ganolrifol NAD plus ar gyfer yr afu (596 nmol/g, n=26) yn uwch na'r holl feinweoedd eraill mewn llygod, tra'n syndod cyhyr ysgerbydol (162.8 nmol Mae /g, n=9) yn arddangos un o'r gwerthoedd canolrif isaf fesul gram o feinwe (Ffig. 2a). Gall canlyniadau tese naill ai awgrymu llai o effeithlonrwydd mewn NAD ynghyd ag echdynnu metabolion, oherwydd natur ffibrog iawn y cyhyrau neu fod gwahaniaethau pwysig ym metabolaeth cyhyrau NAD ynghyd â meinweoedd metabolaidd iawn eraill, fel yr afu a'r arennau.
Er gwaethaf ychydig o astudiaethau heneiddio meintiol, gostyngwyd lefelau NAD a mwy o lygod oedrannus ar gyfartaledd yn epitheliwm pigmentog yr afu, y cyhyrau a'r retina (RPE), o'u cymharu â'u carfannau ifanc, ac o'u cymharu â chymedr yr holl astudiaethau a gynhaliwyd gyda llygod iau. na 14 mis oed (Ffig Atodol 3). Nid oedd meta-ddadansoddiad o NADH a'r gymhareb NAD plus/NADH mewn anifeiliaid oed yn bosibl o ystyried mai dim ond un o'r astudiaethau meintiol hyn a gyflawnodd y mesuriadau hyn.
Mae'r data hyn yn dangos diffyg data meintiol NAD(H) mewn anifeiliaid sy'n heneiddio.
Ar gyfer y data a gasglwyd o astudiaethau yn defnyddio bodau dynol iach, roedd yr ystodau oedran yn amrywio'n fawr ar draws astudiaethau (o 15 i 92.3 oed) ac yn y rhan fwyaf o achosion, nid oedd y data wedi'u haenu ar draws yr oedrannau hyn. Roedd y meinweoedd dynol a fesurwyd amlaf yn cynnwys cyhyr ysgerbydol a chydrannau o waed, oherwydd natur lai ymwthiol y casgliad (Ffig. 3a–d). Dangosir canlyniadau o feinweoedd dynol eraill (n= 1–2) yn Ffig. Atodol 4. Roedd y dadansoddiad hwn yn dangos NAD canolrif ynghyd â chrynodiad o 44.62 nmol/ml (n=23) mewn gwaed cyfan, gyda chrynodiadau tebyg Cofnodwyd crynodiadau NAD plws ar gyfer celloedd gwaed coch ar 46.96 nmol/ml (n=7) (Ffig. 3a; Tabl Atodol 1). Fodd bynnag, roedd lefelau NAD plws plasma gwaed yn sylweddol is gyda chanolrif o 0.37 nmol/ml (n=8) (Ffig. 3a). Y lefelau canolrif NAD plws a ganfuwyd yng nghyhyr ysgerbydol bodau dynol oedd 191.9 (n=4) nmol/g mewn paratoadau cyhyrau gwlyb yn erbyn 1713 (n=3) nmol/g mewn paratoadau wedi'u rhewi-sychu, tymheredd isel proses ddadhydradu sy'n debygol o ganolbwyntio metabolion (Ffig. 3a). Yn y meinweoedd a ymchwiliwyd yn fwy cyffredin ar gyfer mesuriadau NADH, y lefelau canolrif mewn celloedd gwaed coch dynol, plasma a chyhyr ysgerbydol wedi'i rewi-sychu oedd 1.75 nmol/ml (n =7), 0.39 nmol/ml (n=8) a 136.8 nmol/g (n=6), yn y drefn honno (Ffig. 3b). Y cymarebau canolrif cyfatebol NAD plws /NADH oedd 23.65 (n=8), 1.57 (n=7) a 12.7 (n=3) (Ffig. 3c). Yn ddiddorol, roedd y gymhareb ganolrifol NAD plus/NADH ar gyfer celloedd gwaed coch (23.65) a chyhyr ysgerbydol wedi'i rewi-sychu (12.7) (Ffig. 3c) sawl gwaith yn uwch na'r rhan fwyaf o feinweoedd llygoden a llygod mawr (Ffig. 2c a Ffig. 2c Atodol) , sy'n dynodi cyflwr rhydocs ocsidiol iawn gyda digonedd o NAD plus ar gael yn y meinweoedd dynol hyn. Yn achos meinwe cyhyrau, gallai hyn fod â goblygiadau wrth ystyried potensial trosiadol astudiaethau cnofilod sydd wedi nodi manteision rhoi hwb i lefelau NAD a mwy mewn cyhyrau. Fodd bynnag, gall cymhareb uwch NAD plws / NADH mewn cyhyr hefyd fod yn ganlyniad i weithdrefnau rhewi sampl gohiriedig mewn amgylchedd clinigol, a allai arwain at newidiadau anffisiolegol yn statws rhydocs sampl.
Casglwyd y lefelau NADP(H) ffisiolegol mewn meinweoedd cnofilod, gyda'r mesuriad mwyaf cyffredin yn yr afu. Roedd iau llygoden yn arddangos gwerth canolrif o 124.2 nmol/g NADP plws (n=13) a 140.2 nmol/g o NADPH (n=4) (Ffig. 4a,b ), tra bod afu llygod mawr yn dangos canolrif o 95.11 nmol/g o NADP plus (n=10) a 240.7 nmol/g o NADPH (n=9) (Ffig Atodol 5a,b). Roedd cymhareb canolrif NADP plws /NADPH, sy'n deillio o astudiaethau a fesurodd y ddau fetabol, yn is nag 1 yn y rhan fwyaf o feinweoedd llygoden a llygod mawr (Ffig. 4c, Ffig Atodol 5c). Cyfanswm canolrif lefelau NADP(H) (NADP plws a NADPH) mewn iau llygoden a llygod mawr oedd 244.4 (n=3) (Ffig. 4d) a 342.1 (n=9) (Ffig Atodol 5d) , yn y drefn honno. Mewn bodau dynol, perfformiwyd y mesurau mwyaf cyffredin o NADP(H) mewn celloedd gwaed coch gan ddangos canolrif o 33.2 nmol/ml ar gyfer NADP plus (n=14) a 22.4 nmol/ml ar gyfer NADPH (n{{30}) }) o astudiaethau nad ydynt yn cyfateb, gyda chymhareb canolrifol NADP plws /NADPH o 1.27 a chyfanswm canolrifol NADP(H) o 52.0 nmol/ml o astudiaethau a fesurodd y ddau fetabol (n=11) (Ffig. 4e– h). Yn gyffredinol, mae swm y data sydd ar gael ar gyfer NADP(H) yn brin ym mhob rhywogaeth gan arwain at lai o hyder yng ngwerthoedd canolrifol pob meinwe.
Dadansoddiad o duedd ac amrywioldeb mewn dulliau meintioli NAD(P)(H).
O ystyried bod mwyafrif yr astudiaethau a gynhwyswyd yn y meta-ddadansoddiad hwn wedi archwilio lefelau NAD plws mewn samplau afu cnofilod (Ffig. 1c, e), defnyddiwyd lefelau ffisiolegol NAD plws iau a llygod mawr i nodi unrhyw ragfarn bosibl yn y canlyniadau sy'n cyfateb. i'r dull meintioli (Ffig. 5a,b). Oedran cymedrig llygod a gynhwyswyd yn y dadansoddiad hwn oedd 17.9 wythnos (Amrediad: 2-55 wythnos), gyda 6 astudiaeth heb ddatgelu oedran yr anifeiliaid. Ar gyfer llygod mawr, ni ddatgelodd y rhan fwyaf o astudiaethau oedran yr anifeiliaid ac eithrio tri a oedd yn amrywio o 2 ddiwrnod i 8 mis. Nid oedd yr un o'r astudiaethau'n nodi bod hen anifeiliaid yn cael eu defnyddio. Yn iau'r llygoden, roedd ystod fawr y crynodiadau a adroddwyd ar gyfer NAD plws yn ymestyn o 1.8 i 1132 nmol/g o'r afu gyda gwerth cymedrig o 596.0 (n=26) (Ffig. 5a) , tra bod crynodiadau NADH yn amrywio o 0.9 i 109 nmol/g o feinwe gyda gwerth cymedrig o 66.43 (n=6) (Ffig Atodol 6a). Yn bwysig, cyfrifwyd cyfernod amrywiad o 52.5 y cant a 76.5 y cant ar gyfer canlyniadau ffisiolegol cymedrig NAD plus a NADH mewn afu llygoden, yn y drefn honno, fel y'i mesurwyd gan ddulliau meintiol lluosog, gan ddangos maint yr amrywioldeb ar draws astudiaethau. Fel y rhagfynegwyd o'r canlyniadau hyn, dangosodd cymhareb cymedrig NAD plws /NADH yn iau'r llygoden (3.41 plws /− 3.16 SD, n=19) ystod yr un mor fawr o amrywioldeb gyda CV o 92.7 y cant (Ffig Atodol 6c) . Gwelwyd amrywioldeb tebyg mewn mesurau NAD plus a NADH hefyd mewn afu llygod mawr (CV=42.6 y cant ar gyfer NAD plus a CV=44.4 y cant ar gyfer NADH). Roedd y crynodiadau cyfatebol ar gyfer NAD plus a NADH mewn afu llygod mawr yn amrywio o 159 i 796 (n=16) a 65 i 265 (n=12) nmol/g, yn y drefn honno (Ffig. 5b, Ffig Atodol 6b). ), tra bod y cymarebau NAD plws /NADH yn arddangos CV o 50.1 y cant (Cymedr: 3.219 plws /− 1.612 SD, n=23) (Ffig Atodol 6d). Dangosir y gwerthoedd cymedrig a gwyriadau safonol ar gyfer NAD plws , NADH, cyfanswm NAD(H) a'r data cymhareb NAD plws /NADH mewn llygoden ac afu llygod mawr, wedi'u grwpio yn ôl dull meintiol, yn Nhabl Atodol 2. Ynghylch lefelau NADP(H) a y gymhareb NADP plws / NADPH, sylwyd amrywioldeb tebyg mewn meinweoedd afu. Roedd lefelau NADP plws yn amrywio o 50.4 i 247.4 nmol/g o feinwe ar gyfer llygod (Ffig Atodol 8a) ac o 45.7 i 171 nmol/g o feinwe ar gyfer llygod mawr (Ffig Atodol 8b), a lefelau NADPH yn amrywio o 28 i 236.9 nmol/g o feinwe ar gyfer llygod (Ffig Atodol 8c) ac o 90 i 409 nmol/g o feinwe ar gyfer llygod mawr (Ffig Atodol 8d). Yn olaf, roedd y gymhareb NADP plws /NADPH yn amrywio o 0.12 i 0.55 yn iau'r llygoden (Ffig. Atodol 8e) ac o 0.12 i 1.44 yn afu llygod mawr (Ffig Atodol 8f).
yn yr ystod fwyaf o ganlyniadau (1.8 i 1132.3 nmol/g). Roedd hyd yn oed yr astudiaethau LC-MS mwyaf diweddar a archwiliwyd yn enghreifftio ystod y gwerthoedd NAD plws hyn, gan gynnwys gwerthoedd 1.8 nmol/g41 a 33.8 nmol/g42 a gwerthoedd llawer uwch o 946.3 nmol/g43 a 1132.3 nmol/g44. Yn ogystal, nid oedd yn ymddangos bod yr ystod fawr o werthoedd LC-MS NAD plus yn cyfateb i astudiaethau a oedd yn eithrio safonau mewnol wedi'u labelu ag isotopau (Ffig. 5a), dull a ddefnyddir i wella adnabyddiaeth y metabolyn a chywirdeb y gwerth meintiol . Fodd bynnag, roedd y ddwy astudiaeth LC-MS a nodwyd a oedd yn dibynnu'n llwyr ar gromlin safonol allanol ar gyfer NAD ynghyd â meintioli, yn hytrach na chynnwys rheolaeth fewnol, ar gyfartaledd yn is na'r cymedr ar gyfer pob mesur (Ffig. 5a). Ymhellach, roedd yr astudiaethau sy'n defnyddio normaleiddio safonol mewnol yn defnyddio gwahanol fathau o safonau mewnol, megis cynnwys un metabolyn cyfeirio wedi'i labelu45,46 neu echdynion metabolyn wedi'u labelu o furum43,44 neu ddiwylliannau celloedd41. Yn ddiddorol, darparodd yr astudiaethau hyn a ddefnyddiodd safonau burum neu ddiwylliant celloedd echdynnu naill ai'r mesurau uchaf neu isaf yn deillio o LC-MS ar gyfer lefelau NAD plws yr afu. Mae hyn o bosibl yn pwysleisio sut y gall echdynion cellog o safonau llawn isotop gyfrannu at yr amrywioldeb mewn mesuriadau NAD ynghyd ag effaith matrics y burum safonol ychwanegol neu'r echdyniad cellog a allai ymyrryd ag effeithlonrwydd ïoneiddiad ac o ganlyniad crynodiadau mesuredig y metabolion targed.
Mae cyfyngiadau'r dadansoddiad hwn o duedd meintioli ac amrywioldeb yn cynnwys gwahaniaethau posibl yn yr amgylchedd, cefndir genetig, aberth, rhyw ac oedran. Daeth yr holl ddata ar gyfer y dadansoddiad hwn o anifeiliaid ar ddiet chow ond gall fod yn wahanol o ran math. Wrth aberthu, adroddir am wahaniaethau yng nghyflwr bwydo neu ymprydio'r anifail a'r amser o'r dydd ar gyfer aberthu. Yn ogystal, er bod y rhan fwyaf o astudiaethau llygoden yn cael eu perfformio ar gefndir C57BL / 6, defnyddiwyd ystod fwy o gefndiroedd ar gyfer llygod mawr ar draws astudiaethau (Wistar: 38 y cant, Albino Wistar: 25 y cant, a 6 y cant ar gyfer Hooded Wistar, Sprague-Dawley, llygod mawr Holtzman, ACI, Long-Evans a Zucker). Ar draws astudiaethau afu llygoden, nid oedd unrhyw wahaniaethau ystadegol rhwng gwerthoedd gwrywaidd neu fenywaidd ar gyfer NAD plus , NADH neu gyfanswm lefelau NAD(H) nac ar gyfer y gymhareb NAD plws / NADH (Ffig Atodol 7). Fodd bynnag, ni allwn ddod i gasgliadau oherwydd nifer cyfyngedig y carfannau benywaidd.
Gofynnwch am fwy:
E-bost:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: ynghyd â 86 15292862950
