Mae Carvedilol, Atalydd Adrenergig, yn Atal Synthesis Melanin Trwy Atal Llwybr Signalau CAMP/CREB mewn Melanocytes Dynol A Diwylliant Croen Dynol Ex Vivo

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Myoung Eun Choi 1,†, Hanju Yoo 1,2,†, Ha-Ri Lee 2,3, Ik Joon Moon 1, Woo Jin Lee 1, Youngsup Song 3,*,‡ a Sung Eun Chang 1

Crynodeb:Mae catecholamines yn gweithredu trwy dderbynyddion cyplydd protein G, gan sbarduno cynnydd mewn lefelau mewngellol o 30, 50- monoffosffad adenosine cylchol (cAMP) mewn celloedd amrywiol. Mae catecholaminebiosynthesis a'r derbynnydd -adrenergic yn bodoli ynmelanocytes; felly, gall catecolaminau chwarae rhan hanfodol mewn pigmentiad croen. Fodd bynnag, nid yw eu gweithredoedd a'u mecanweithiau sy'n cyfryngu melanogenesis croen annynol wedi'u hymchwilio eto. Felly, archwiliwyd effaith gwrth-melanogenetig bosibl carvedilol, rhwystrwr nonselective gyda 1-gweithgareddau blocio gwan. Llai o gynnwys melanin cerfiedig a gweithgaredd tyrosinase cellog heb beryglu hyfywedd cellog mewn dynol arferolmelanocytesyn ogystal ag yn Mel-Ab melanocytes llygoden anfarwol. Ffactor trawsgrifio cysylltiedig â microffthalmia (MITF) a reoleiddir gan Carvediloldown, tyrosinase, protein sy'n gysylltiedig â thyrosinase (TRP)-1, a TRP-2. Arweiniodd triniaeth Carvedilol at is-reoleiddio protein sy'n rhwymo elfen ffosffor-cAMPresponse (CREB). At hynny, roedd y cynnydd mewn lefelau cAMP ar driniaeth â forskolin yn gwrthdroi gweithred gwrth-melanogenig carvedilol. Yn ogystal, gostyngodd carvedilol y mynegai melanin mewn diwylliannau croen dynol arbelydredig uwchfioled yn sylweddol. Gyda'i gilydd, mae ein canlyniadau yn nodi bod carvedilol yn atal melanogenesis mewn dynol yn effeithiolmelanocytesa chroen ex vivohuman trwy atal signalau cAMP/protein kinase A/CREB. Mae gan effeithiau gwrth-melanogenig carvedilol arwyddocâd posibl i groengwynnuasiantau.

Geiriau allweddol:cerfiedig; atalydd adrenergig;synthesis melanin; signalau cAMP/CREB

Cistancheyn gallu atal synthesis melanin

1. Rhagymadrodd

Mae ystod eang o anhwylderau croen pigmentaidd yn cael effaith seicolegol a chymdeithasol sylweddol ar gleifion. Mae gwahanol ddulliau triniaeth, gan gynnwys asiantau systemig ac amserol yn ogystal â therapi laser, wedi'u datblygu [1-3]. Fodd bynnag, mae'r canlyniadau'n aml yn anfoddhaol ac mae adweithiau niweidiol, megis hyperbigmentation aspost-inflammatory (PIH) a hypopigmentation, o driniaeth yn gyffredin. Yn ogystal, mae'r driniaeth yn ddrud ac yn cymryd llawer o amser [4-6].

Mae catecholamines, sy'n cynnwys dopamin, epineffrîn, a norepinephrine, yn foleciwlau signalau sy'n gweithredu fel niwrodrosglwyddyddion a hormonau endocrin. Yn y croen, mae biosynthesis a diraddiad catecholamines yn digwydd mewn keratinocytes dynol, ond mae synthesis catecholamine mewn melanocytes ychydig yn wahanol [7-9]. Mae catecholamines yn gweithredu trwy dderbynyddion cyplydd protein G (GPCRs). Mae rhwymo catecholamines i'r GPCRs yn sbarduno actifadu adenylatecyclase mewngellol, sy'n syntheseiddio 30, 50-monoffosffad adenosine cylchol (cAMP) o ATP [10]. Mae'r secondmessenger cAMP yn cyflawni ei weithgaredd trwy rwymo'r R-is-uned o brotein kinase A (PKA), gan arwain at ffosfforyleiddiad protein elfen-rwymol ymateb cAMP (CREB). Mae GPCRs yn cael eu actifadu ganaminau a pheptidau, gan gynnwys glwcagon, hormon parathyroid, secretin, a calcitonin [10].

Mae antagonyddion derbynyddion adrenergig yn cynnwys antagonyddion -derbynnydd a -derbynnydd. -Mae gwrth-derbynyddion yn cael eu his-gategori yn asiantau annethol, 1-dewisol, a 2-dewisol, tra bod gwrthwynebwyr -derbynyddion yn cael eu his-ddosbarthu fel rhai nad ydynt yn ddewisol, 1-dewisol, a 2-dewisol asiantau yn seiliedig ar eu gweithgareddau blocio dethol. Yn wahanol i antagonyddion -derbynyddion nad ydynt yn ddetholus cenhedlaeth gyntaf, megis propranolol, timolol, a nadolol, mae carvedilol yn atalydd trydydd cenhedlaeth nad yw'n ddewisol sy'n arddangos gweithredoedd fasodilator trwy rwystro 1-adrenoreceptors (1-ARs) [11]. Felly, mae carvedilol yn -atalydd an-ddewisol gyda 1-gweithgareddau blocio gwan [12]. Fe'i defnyddir yn bennaf fel meddyginiaeth lafar i reoli pwysedd gwaed uchel a chlefyd gorlenwad y galon, yn debyg i atalyddion eraill [12]. Fodd bynnag, mae atalyddion trydydd cenhedlaeth yn arddangos gweithgareddau angiogenig, gwrthocsidiol, gwrth-amlhau, gwrth-hypertroffig, a gwrth-apoptotig y mae angen eu hegluro ymhellach [11]. Yn y maes dermatologig, oherwydd ei weithredoedd gwrthocsidiol a gwrthlidiol, defnyddir carvedilol yn aml mewn fformwleiddiadau llafar i drin rosaceathematotelangiectatic [13,14]. Ar ben hynny, mae gweithgaredd gwrthocsidiol carvedilol yn arwain at atal carcinogenesis croen a achosir gan uwchfioled (UV), gan ei wneud yn asiant deniadol ar gyfer rheoli clefydau croen sy'n gysylltiedig â UV [15-18]. Fodd bynnag, nid yw effeithiau cemopreventive carvedilolar yn cael eu cyfryngu'n uniongyrchol trwy ARs. [19] Er bod yr union fecanwaith yn gymharol anhysbys, gallai llwybr signalau cAMP / PKA a PKC-δ fod yn gysylltiedig â phriodweddau metastasis yn erbyn croen carvedilol [20].

Yn y camau cynnar o ymchwilio i bigmentiad, dynolmelanocytescanfuwyd eu bod yn mynegi -1-AR signalau ar ôl anwythiad allgellog gyda norepinephrine. Fodd bynnag, ni chanfuwyd -ARs ar ôl ysgogiad gyda signalau adrenergig i mewnmelanocytes[8]. I'r gwrthwyneb, mae Cillbro et al. dangosodd yn ddiweddarach fod signal 2-AR swyddogaethol penodol yn bodoli mewn melanocytes dynol a bod 2-ARsymbyliad yn arwain at bigmentiad trwy'r llwybr 2-AR/cAMP [7]. Felly, awgrymwyd rôl catecholamines wrth reoli pigmentiad, ac ystyrir cAMP fel y prif echel ar gyfer rheoli catecholamine melanogenesis.

Mae melanogenesis yn broses gymhleth sy'n cynnwys nifer o lwybrau. Tyrosinase, protein sy'n gysylltiedig â thyrosinase 1 (TRP-1), a TRP-2, a elwir hefyd yn dopachrome tautomerase (DCT), yw'r tri phrif ensymau melanocyte-benodol sy'n ymwneud âsynthesis melanin[21]. Mae melanogenesis yn cael ei achosi gan nifer o ffactorau, gan gynnwys hormonau, cytocinau, niwrodrosglwyddyddion, ffactorau twf, a micromoleciwlau [21-23].

Y rheolydd cadarnhaol pwysicaf yw'r derbynnydd melanocortin-1 a'i ligandau, melanocortins a hormon adrenocorticotropig [23]. Fodd bynnag, ffactorau amrywiol sy'n ymwneud â melanogenesis yw -endorphin, estrogens, androgens, fitamin D3, a catecholamines [23]. Mae tystiolaeth gronnus wedi awgrymu bod L-tyrosine a L-DOPA, sy'n swbstradau a chanolradd melanogenesis, yn gweithredu fel asinducers a rheolyddion cadarnhaol y llwybr melanogenig, yn ogystal â rheolyddion swyddogaethau cellog eraill [24]. Ar ben hynny, mae Jeff Howe et al. Awgrymodd bod sefydlu a rheoleiddio melanogenesis gan L-tyrosine yn cael ei gyfryngu trwy actifadu derbynyddion adrenergig yn uniongyrchol gan L-tyrosine, yn hytrach na'i achosi gan ei gynhyrchion metabolaidd fel catecholamines [25]. Yn eu hastudiaethau, roedd norepinephrine ac epinephrine yn ysgogi gweithgaredd tyrosinase, ond mae eu heffaith anwythol arsynthesis melaninyn gymharol is na L-tyrosine [25].

Gall catecholamines chwarae rhan bwysig yn y system pigmentiad croen; fodd bynnag, nid yw eu heffeithiau ar melanogenesis o ran gweithredu atalydd trydydd cenhedlaeth nad yw'n ddewisol wedi'u harchwilio eto. Felly, yn yr astudiaeth bresennol, ein nod oedd ymchwilio i weld a yw carvedilol yn effeithio armelanogenesis ac archwilio ei fecanweithiau gweithredu mewn pobl.melanocytesa chroen dynol ex vivo a'i ddefnydd posibl fel agwynnucynnyrch.

atal ffurfio melanin gydacistanches llysieuol

2. Canlyniadau

2.1. Mae Carvedilol yn Atal Melanogenesis

Sytowenwyndra carvedilol yn erbyn dynol arferolmelanocytesAseswyd celloedd Mel-ab gan asesiad amlhau celloedd WST. Dechreuodd crynodiad carvedilol o 10 µM ddangos sytowenwyndra yn erbyn celloedd NHM a Mel-ab (Ffigur 1A, B). Felly, mewn asesiadau pellach, defnyddiwyd 8 µM o garvedilol, nad yw'n sytotocsig i NHMs.

Lleihaodd triniaeth â carvedilol y cynnwys melanin mewn modd sy'n dibynnu ar ddos ​​heb effeithio ar hyfywedd NHMs (Ffigur 1C). Gostyngwyd y cynnwys melanin 28.36 y cant ar ôl triniaeth carvedilol 96 hof 8 µM (Ffigur 1C). Roedd ychwanegu 100 mg/mL arbutin yn lleihau'r cynnwys melanin i raddau llai na charvedilol (Ffigur 1C). Ar ôl 4 diwrnod o driniaeth carvedilol, gostyngodd y cynnwys melanintrig mewn modd sy'n dibynnu ar amser (Ffigur 1D). Fodd bynnag, arweiniodd triniaeth â forskolin (FSK) am 4 diwrnod ar ôl cyn-driniaeth â chervedilol i gynnydd yn y cynnwys melanin (Ffigur 1E). Mae FSK yn cynyddu trawsgrifiad MITF i'r graddau mwyaf ar 2 h yn NHMs a chredir ei fod yn gweithredu trwy'r cAMP llwybr /PKA/CREB (Ffigur 1F).

2.2. Mae Carvedilol yn Atal Mynegiant MITF a'i Genynnau Targed ac yn Lleihau Lefelau Ffosffo-CREB mewn NHMs

Oherwydd bod carvedilol wedi lleihau croniad melanin, gwnaethom ymchwilio i weithgaredd tyrosinase cellog. Gostyngodd gweithgaredd tyrosinase 28.48 y cant ar ôl 96 h o driniaeth carvedilol 8 µM (Ffigur 2A). Fe wnaethom benderfynu nesaf a yw carvedilol yn effeithio ar fynegiant MITF, sy'n chwarae rhan hanfodol wrth reoleiddio genynnau tyrosinase a melanogenig i lawr yr afon. Cynyddodd triniaeth FSK lefelau cAMP mewngellol a gwrthdroi gweithredoedd gwrth-melanogenig carvedilol. Gostyngodd Carvedilol lefelau protein MITF yn sylweddol, ffactor trawsgrifio canolog o melanogenesis, ar 72 h (Ffigur 2B). Ymhellach, gostyngwyd mynegiant ei genynnau targed, megis tyrosinase a TRP-1, ar ôl triniaeth cervedilol (Ffigur 2B). Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod carvedilol yn atal melanogenesis trwy israddio signalau MITF.

Nesaf, gwnaethom ymchwilio i lwybrau signalau mewngellol melanogenesis, sy'n rheoleiddio trawsgrifio MITF, trwy fesur lefelau mynegiant phospho-CREB a phospho-ERK. Ni newidiodd lefelau ffosffo-ERK dros amser yn dilyn triniaeth carvedilol; fodd bynnag, gostyngwyd lefelau ffosffo-CREB (Ffigur 2B). Yn gyson ag arsylwadau blaenorol, datgelodd ein canlyniadau fod carvedilolin yn atal melanogenesis trwy atal llwybr signalau cAMP/PKA/CREB. At hynny, fe wnaeth triniaeth FSK wrthdroi gweithred gwrth-melanogenig carvedilol trwy gynyddu lefelau cAMP.

2.3. Mynegai Melanin a Lliwio Imiwnohistocemegol yn Niwylliant Croen Dynol Ex Vivo

Canfuwyd y dwysedd melanocyte epidermaidd a mynegai melanin mewn adrannau meinwe diwylliant croen dynol ex vivo gan staenio Melan-A a Fontana-Masson, yn y drefn honno. Ni effeithiodd Carvedilol ar nifer y Melan-A ( plws )melanocytesyn y sbesimen a gafodd ei drin â charvedilol ynghyd â phelydriad UV (UVR) o'i gymharu â'r sbesimen a gafodd ei drin ag UVR yn unig (Ffigur 3A). Gall HMB45(plws) melanocytes nodi bod gweithgaredd melanocytig wedi cynyddu ar driniaeth UVR a'i fod wedi'i reoleiddio'n wrthdro yn dilyn triniaeth carvedilol (Ffigur 3B). Fodd bynnag, gostyngwyd cynnwys melanin yn sylweddol mewn sbesimenau a gafodd eu trin â charvedilol ynghyd â UVR o gymharu â sbesimenau wedi'u trin â UVR yn unig (Ffigur 3C). Ar gyfer cyfrifo'r mynegai melanin, cafodd y ffracsiwn o staen Fontana-Masson dros yr arwynebedd cyfan rhwng sbesimen sy'n agored i UVR a sbesimen i carvedilol ynghyd ag UVR ei gyfrifo a'i gymharu (Ffigur 3D). Dadansoddwyd lysates celloedd pob sbesimen gan Western blotassay, a ddatgelodd fod tyrosinase, TRP1, a DCT wedi'u cynyddu gan UVR a thriniaeth gancarvedilol wedi'i is-reoleiddio (Ffigur 3E). O ganlyniad, gostyngodd carvedilol y mynegai melanin a phroteinau sy'n gysylltiedig â melanogenesis yn sylweddol, gan ddangos ei effaith gwrth-melanogenig ar groen dynol wedi'i drin â UVR.

3. Trafodaeth

Melanin yw'r pigment sy'n gyfrifol am liw croen a gwallt ac mae'n cael ei syntheseiddio mewn melanosomau ganmelanocytes. Er bod melanin epidermaidd yn chwarae rhan amddiffynnol bwysig yn erbyn UVR, mae gorgynhyrchu melanin a chroniad yn y croen yn achosi anhwylderau hyperpigmentary croen trafferthus, megis PIH, dyspigmentation sy'n gysylltiedig â photoaging, melasma, a lentiginau solar [18,26]. Felly, mae atal melanogenesis wedi bod yn ffocws triniaethau meddyginiaethol a chosmetig ar gyfer harddwch ac iechyd y croen. Mae ymdrechion sylweddol wedi eu gwneud i adnabod asiantau gwrth-bigmentu newydd ac effeithiol. Fodd bynnag, mae mecanweithiau gwrth-melanogenesis yr asiantau penodol yn ansicr ar hyn o bryd ac yn gyffredinol wedi'u gwerthuso mewn celloedd llygoden, sy'n rhoi canlyniadau nad ydynt bob amser yn gyson â rhai treialon croen dynol [27,28]. Ar ben hynny, gan fod melanogenesis melanocytes yn cael ei reoleiddio'n dynn gan keratinocytes a chelloedd cyfagos eraill, mae celloedd dynol cyd-ddiwylliedig neu groen dynol ex vivo yn leoliadau arbrofol mwy dibynadwy ar gyfer archwilio effeithiol.gwynnuasiantau [29]. Gall y rhan fwyaf o gyfryngau croenwyn, boed yn deillio'n naturiol neu'n gemegol, achosi gwenwyndra neu lid y croen, y gellir ei ragweld i raddau gan ddefnyddio profion hyfywedd celloedd in vitro gyda melanocytes. Yn ein hastudiaeth ni, ni ddangosodd carvedilol sytowenwyndra pan gaiff ei ddefnyddio mewn dosau cymedrol.

bienfaits cistanche

Gall hufenau amserol hydroquinone arwain at anhwylderau hypopigmentation annymunol a gwenwyndra croen [30-32]. Ymhellach, mae rhaigwynnumae colur yn cael canlyniadau trychinebus trwy ysgogihypopigmentation trwy ddiraddio proteinau tyrosinase [33-35]. Gellir defnyddio asiantau gwynnu ar ddognau uwch yn dibynnu ar y defnyddiwr i wneud y mwyaf o wynnu briwiau hyperpigmentary.

Felly, cynlluniwyd yr astudiaeth bresennol i'w chynnal mewn celloedd dynol arferol a chroen ex vivohuman. Ar ben hynny, yn seiliedig ar fecanwaith gweithredu sefydledig catecholamines o signalau G, sy'n cynyddu'r lefel cAMP cellog, roeddem yn credu y gallai atalydd adrenergig ostwng lefelau cAMP ac atal llwybr signalau UVR / cAMP / CREB, sef y prif fecanwaith ar gyfer gor-bigmentu croen a achosir gan UV. [36,37]. Felly, gwnaethom ragdybio bod atalwyr adrenergig sy'n lleihau lefelau cAMP yn lleihausynthesis melanin.

Yn ogystal, i ddatblygu diogelgwynnuasiantau, dylid mynd ar drywydd mecanweithiau dibynadwy ac atgynhyrchadwy o gwrth-melanogenesis ochr yn ochr. Yr ysgogiad mwyaf arwyddocaol yn ffisiolegol yw UV, ac ymhlith signalau UVR i epidermaiddmelanocytes, echel CREB yw'r llwybr mwyaf sefydledig ar gyfer rheoleiddio melanogenesis yn yr epidermis dynol [29]. Dod i gysylltiad â chynhyrchiad actifaduscAMP UV yn olynol, PKA, a'r ffactor trawsgrifio CREB, sydd, yn ei dro, yn ysgogi mynegiant MITF a genynnau melanogenig targed i lawr yr afon [38,39]. Yn ogystal â ffosfforyleiddiad CREB gan PKA, mae astudiaethau diweddar wedi dangos bod angen recriwtio cydysgogydd trawsgrifio a reoleiddir gan CREB (CRTC) 3 i gyfadeilad trawsgrifio CREB hefyd ar gyfer MITF a symbylir gan cAMP. Mae MITF yn cyflawni'r rôl fwyaf hanfodol wrth reoleiddiosynthesis melanina'r trawsgrifiad canlyniadol o ensymau melanogenig [26,40,41]. Yn ystod y broses signalau mewngellol hon, mae melanogenesis yn cael ei reoleiddio gan ensym allweddol, tyrosinase, a phroteinau ensymatig ychwanegol, megis TRP-1 a DCT [1-4]. Yn yr astudiaeth bresennol, lleihaodd carvedilol ffosfforyleiddiad CREB i bob pwrpas, a oedd yn yn nodi ei fod wedi lleihau proteinau MITF a thyrosinase trwy atal trawsgrifio MITF (Ffigur 4). O ystyried bod rheoliad genynnau MITF mRNA yn cael ei reoli a'i achub yn gywrain gan foleciwlau signalau mewngellol a chydweithredolwyr eraill, mae rheoliad lefel trawsgrifiadol MITF yn strategaeth addawol ar gyfer archwilio cynhwysion gwynnu croen iach oherwydd bod swyddogaeth goroesi MITF yn cael ei chadw a'i hachub [1,38,40]. Yn wir, pan wnaethom ymchwilio i drawsgrifiad MITF a achosir gan FSK, canfuwyd bod gan MITF mRNA ei gromlin ymateb brig ei hun ar gyfer melanogenesis a goroesiad cellog ar gyfer homeostasis cellog. Mae swyddogaethau biolegolmelanocytesymddangos fel pe bai'n cael ei reoleiddio'n gynhenid ​​gan signalau adborth arall mewn melanocytes dynol. Ar ben hynny, mae gan carvedilol risg is o ddigwyddiadau andwyol o hypobigmentation gan ei fod yn gwanhau gweithgaredd tyrosinase cellog dros amser, yn hytrach nag yn sydyn.

Mae catecholamines yn cynnwys dopamin, epineffrîn, a norepinephrine ac yn cael eu syntheseiddio o tyrosin dietegol trwy weithred ensymau [42]. Mae biosynthesis a diraddiad catecholamines yn digwydd mewn ystod eang o gelloedd, gan gynnwys niwronau nerfau sympathetig a'r ymennydd, celloedd adrenomedullary, celloedd endothelaidd, neutrophils, a chelloedd mononiwclear [43-45]. Mewn croen dynol, mae catecholaminesynthesis yn digwydd mewn keratinocytes. I'r gwrthwyneb, mae melanocytes hefyd yn mynegi mRNA ac ensymau ar gyfer synthesis theautocrine o norepinephrine ond nid epinephrine [7,42]. Yn ddynolmelanocytes, -1-Gall AR fod yn bwysig yn yr adwaith i norepinephrine, ondsynthesis melaninyn cael ei ddylanwadu hefyd gan 2-signaling AR [7,8] swyddogaethol. Yn ddiddorol, mae cleifion â fitiligo wedi cynyddu 2-Dwysedd AR mewn keratinocytes [46]. Mae lefelau norepinephrine cynyddol i'w cael yn wrin a phlasma cleifion â fitiligo nad yw'n segmentol, sy'n awgrymu y gall metaboledd catecholamine fod yn gysylltiedig â datblygiad a chynnydd fitiligo. [47]. Ar ben hynny, yn ogystal â niwrodrosglwyddyddion straen clasurol, mae melanocytes yn cynhyrchu niwropeptidau a hormonau, megis ffactor sy'n rhyddhau corticotropin a proopiomelanocortin.Mae'r cynhyrchiad hwn yn cael ei ysgogi gan UVR ac asiantau eraill sy'n gweithredu o fewn y niwroendocrinesystem croen [48]. Felly, mae cysylltiad agos rhwng gweithrediad catecholamines a swyddogaeth melanocytig mewn amrywiaeth o lwybrau cymhleth. Ar ben hynny, gallai carvedilol ymyrryd â'r adweithiau cemegol yn y llwybr melanogenig a dylid astudio'r posibilrwydd hwn ymhellach. Gall fod manteision i Carvedilol gan ei fod yn cael effeithiau gwrthlidiol ar yr un pryd, gan fod y rhan fwyaf o anhwylderau hyperbigmentaidd yn PIH yn glinigol neu'n is-glinigol mewn cleifion â chroen tywyll. Gan fod treiddiad carvedilol trwy'r croen wedi'i astudio in vitro ac ex vivo, gellir datblygu carvedilol fel pwnc amserol.gwynnuasiant yn y dyfodol [49–51].

Gall gweinyddu carvedilol systemig achosi bradycardia, pendro, isbwysedd, cur pen, a phenysgafn. Nid yw cymhwyso carvedilol yn amserol fel arfer yn achosi symptomau systemig; fodd bynnag, dylem roi sylw gofalus i'r symptomau hyn wrth ei gymhwyso i gleifion â rhwystrau croen diffygiol, megis y rhai â dermatitis atopig. Ar ben hynny, adroddir ecsema, pruritus, a ffrwydrad cenoid mewn achosion prin wrth gymryd carvedilol. Dylid hefyd ystyried y sgîl-effeithiau dermatolegol hyn yn ogystal â dermatitis cyffyrddiad wrth gymhwyso carvedilol fel pwnc amserol.gwynnuasiant.

I gloi, gwnaethom ddangos bod carvedilol yn lleihau melanogenesis mewn dynol i bob pwrpasmelanocytesa chroen dynol ex vivo trwy atal y llwybr cAMP/CREB/MITF, sy'n awgrymu y gallai gael ei ddefnyddio fel cyfrwng gwynnu effeithiol. Dylid dilyn ymchwiliad pellach i gyfranogiad swyddogaethol y derbynnydd adrenergic gan carvedilol mewn melanocytes dynol.

4. Defnyddiau a Dulliau

4.1. Defnyddiau

Prynwyd Carvedilol, 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA), colera toxin (CT), ac 12-Otetradecanoylphorbol-13-asetad (TPA) gan Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, UDA).Prynwyd halwynog wedi'i glustogi â ffosffad Dulbecco gan WelGENE (Daegu, Korea). Prynwyd serwm buchol ffetws (FBS), gwrthfiotig-antimycotig, a trypsin-EDTA gan Gibco (Grand Island, NY, UDA). Canolig 254 (CascadeBiologics, Portland, OR, USA) a FSK ([3R-(3 ,4a ,5 ,6 ,6a ,10 ,10a ,10b )]-5-(Acetyloxy)-3-ethenyldodecahydro{ {24}},10,10b-trihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1H-naphtho[2,1-b]pyran-1-un ) eu prynu oddi wrth Tocris Bioscience (Bryste, DU).

4.2. Llinellau Cell a Diwylliant Cell

Cafodd NHMs cynradd a gafwyd gan Invitrogen (Carlsbad, CA, UDA) eu cynnal yn 254 Canolig (Thermo Fisher, Waltham, MA, UDA) wedi'u hategu ag Atodiad Twf Melanocyte Dynol (Thermo Fisher). Cafwyd celloedd Mel-ab, llinell gell melanocyte anfarwoledig sy'n deillio o lygoden, gan Fanc Llinell Cell Corea (KCLB, Seoul, Korea) a'i gynnal yn DMEM wedi'i ategu â 10 y cant FBS, penisilin-streptomycin, 100 nM TPA, ac 1 nM CT. Roedd pob cell yn cael ei chynnal yn rheolaidd ar 37 ◦C mewn amgylchedd llaith o 5 y cant o CO2.

4.3. Gwrthgyrff a Blotiau Gorllewinol

Cafodd y celloedd eu golchi unwaith gyda PBS oer a'u gorchuddio mewn byffer lysis protein (1 y cant SDS mewn 10 mMTris a 5 mM EDTA, pH 7.4), ac yna deor ar 98 ◦C am 10 munud. Gwahanwyd y samplau protein gan electrofforesis gel SDS-polyacrylamid 8 y cant, eu blotio ar bilenni nitrocellulose (GE Healthcare Life Sciences, Chicago, IL, UDA), ac yna eu rhwystro â halwynog wedi'i glustogi Tris yn cynnwys 0.5 y cant Tween 20 a 5 y cant BSA, a yn destun imiwnoblotting. Prynwyd gwrthgyrff Tyrosinase a TRP{-1 gan Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, UDA), a phrynwyd MITF oddi wrth Abcam (Caergrawnt, DU). -tubulin (Gentex, Holland, MI, UDA) yn cael ei ddefnyddio fel rheolaeth llwytho mewnol.

4.4. Cynnwys Melanin

Gwerthuswyd effaith sytotocsig carvedilol gan ddefnyddio Pecyn Asesu Hyfywedd Celloedd Ez-Cytox (Dogen-Bio Co., Ltd., Seoul, Korea) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Cafodd celloedd Mel-Ab a NHM eu hadu mewn platiau chwe ffynnon. ar ddwysedd o 6 × 105 a 3 × 105cells/ffynnon, yn y drefn honno. Cafodd celloedd eu trin â charvedilol, fel y dangosir yn y ffigurau, am 3 neu 5 diwrnod (d). Cyn mesur y cynnwys melanin, arsylwyd y celloedd o dan ficrosgop cyferbyniad cam a llun (Olympus, Tokyo, Japan). Diddymwyd celloedd mewn 550 µL o 1 N NaOH ar 100 ◦C am 30 munud a'u centrifugio ar 13,000 rpm am 5 munud. Mesurwyd amsugnedd y supernatants ar 405 nm gan ddarllenydd microplate. Cyflwynwyd y cynnwys melanin mewngellol fel canran mewn perthynas â rheolaeth y celloedd heb ei drin. Defnyddiwyd Arbutin (100 mg / mL) fel rheolaeth gadarnhaol.

4.5. Gweithgaredd Tyrosinase Cellog

Gwerthuswyd y gweithgaredd tyrosinase trwy fesur cyfradd ffurfio dopachrome o L-DOPA.Ar ôl deori â cervedilol, golchwyd y celloedd mewn PBS oer iâ a'u gorchuddio mewn byffer lysis tyrosinase (byffer ffosffad, pH 6.8, yn cynnwys 1 y cant Triton X{ {5}}) gyda chylchoedd rhewi/dadmer dro ar ôl tro. Cafodd y lysates eu hegluro trwy allgyrchu ar 15,000 rpm ar 4 ◦C am 10 munud. Ar ôl meintioli lefelau protein y lysate ac addasu'r crynodiadau protein gyda byffer lysis, cafodd 90 µL o uwch-radd wedi'i gymysgu â 10 µL o 10 mM L-DOPA mewn byffer tyrosinase lysis ei ddeor ar 37 ◦C. Mesurwyd gweithgaredd tyrosinase cellog trwy ddarllen yr amsugnedd 475 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate bob 10 munud am o leiaf 1 h. Defnyddiwyd Arbutin (100 mg / mL) fel asiant rheoli cadarnhaol.

cistanches llysieuol

4.6. Dadansoddiad Imiwnohistocemegol

Cafodd meinweoedd croen dynol wedi'u mewnblannu â pharaffin eu torri'n ddarnau 6-µm-trwchus a'u staenio â Melan-A (Novocastra, Newcastle, DU), citiau Fontana-Masson (labordai adnabod, Llundain, ON, Canada), a HMB45 (Santa Clara). , CA, UDA), yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwyr. Penderfynwyd ar y mynegai melanin trwy fesur canran yr arwynebedd lliw i gyfanswm arwynebedd y meinwe gan ddefnyddio ImageJ 1.52asoftware (Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol, Bethesda, MD, UDA).

4.7. Dadansoddiad Ystadegol

Cyflwynir y data fel y modd ± gwall safonol y cymedr (SEM), a phennwyd arwyddocâd ystadegol gan brawf-t Myfyriwr heb ei baru gan ddefnyddio meddalwedd GraphPad Prism5 (San Diego, CA, UDA). Yn yr astudiaeth hon, ystyriwyd bod p < 0.05,="" p="">< 0.01,="" a="" p="">< 0.001="" yn="" ystadegol="" arwyddocaol="" ac="" fe'u="" cynrychiolir="" gan="" *,="" **,="" ac="" ***,="" yn="" y="" drefn="">

Cyfeiriadau

1. Gillbro, JM; Olsson, MJ Melanogenesis a mecanweithiau cyfryngau ysgafnhau'r croen - Dulliau presennol a dulliau newydd. Int. J. Cosmet. Sci. 2011, 33, 210–221. [CrossRef] [PubMed]

2. Lee, YJ; Shin, HJ; Na, TK; Choi, KH; Chang, Triniaeth Melasma i'r De-ddwyrain a Hiperbigmentiad Ôl-Lidiol gan Laser Alexandrite Picosecond 755-nm mewn Cleifion Asiaidd. Ann. Dermatol. 2017, 29,779–781. [CrossRef] [PubMed]

3. Lee, YJ; Parc, JH; Lee, DY; Lee, JH Caffaeledig Dyspimentu Dwyochrog ar Wyneb a Gwddf: Dulliau Clinigol Briodol. J. Corëeg Med. Sci. 2016, 31, 2042–2050. [CrossRef] [PubMed]

4. Kang, HJ; Na, JI; Lee, JH; Roh, MR; Ko, JY; Chang, SE Gorbigmentiad ôl-lid sy'n gysylltiedig â thrin lentiginau solar gan ddefnyddio laser Q-Switched 532- nm Nd: YAG: Arolwg amlganolfan.J. Dermatolog. Trin. 2017, 28, 447–451. [CrossRef] [PubMed]

5. Kato, H.; Araki, J.; Eto, H. ; Doi, K.; Hirai, R. ; Kuno, S.; Higashino, T.; Yoshimura, K. Astudiaeth wedi'i rheoli ar hap o asid tranexamig trwy'r geg ar gyfer atal hyperpigmentation postinflammatory ar ôl laser rhuddem Q-switsh. Dermatol. Surg. 2011, 37, 605–610. [CrossRef] [PubMed]

6. Taylor, CR; Anderson, RR Triniaeth aneffeithiol o felasma anhydrin a hyperbigmentation ôl-lid gan laser rhuddem â chyfnewidiad Q. J. Dermatol. Surg. Oncol. 1994, 20, 592–597. [CrossRef]

7. Gillbro, JM; Marles, LK; Hibberts, NA; Mae Schallreuter, biosynthesis catecholamine Autocrine KU a signal thebeta-adrenoceptor yn hyrwyddo pigmentiad mewn melanocytes epidermaidd dynol. J. Ymchwilio. Dermatol.2004, 123, 346–353. [CrossRef]

8. Schallreuter, KU; Korner, C. ; Pittelkow, MR; Swanson, NN; Gardner, ML Anwythiad system trawsgludo signal adrenoceptor thealpha ar felanosytau dynol. Exp. Dermatol. 1996, 5, 20–23.[CrossRef]

9. Sivamani, RK; Shi, B. ; Griffiths, E.; Vu, SM; Lev-Tov, HA; Dahle, A.S.; Chigbrow, M. ; La, TD; Mashburn, C.;Peavy, TR; et al. Mae clwyfo acíwt yn newid y signalau adrenergig beta a llwybrau synthetig catecholamine mewn keratinocytes. J. Ymchwilio. Dermatol. 2014, 134, 2258–2266. [CrossRef]

10. Emery, Derbynyddion Catecholamine AC: Prototeipiau ar gyfer darganfod cyffuriau yn seiliedig ar GPCR. Adv. Ffarmacol. 2013, 68,335–356.

11. Do Vale, GT; Ceron, CS; Gonzaga, NA; Symlicio, JA; Padovan, JC Tair Cenhedlaeth o atalyddion beta: Hanes, Gwahaniaethau Dosbarth, a Chymhwysedd Clinigol. Curr. Hypertens. Dat. 2019, 15, 22–31. [PubMed]

12. McTavish, D.; Campoli-Richards, D.; Sorkin, EM Carvedilol: Adolygiad o'i briodweddau ffarmacodynamig a ffarmacocinetig, a'i effeithiolrwydd therapiwtig. Cyffuriau 1993, 45, 232–258. [CrossRef] [PubMed]

13. Hsu, CC; Lee, JY Fflysio wyneb amlwg ac erythema parhaus o rosacea wedi'i drin yn effeithiol gan carvedilol, atalydd beta-adrenergig nad yw'n ddewisol. J. Am. Acad. Dermatol. 2012, 67, 491–493. [CrossRef][PubMed]

14. Pietschke, K. ; Schaller, M. Rheolaeth hirdymor o fflysio wyneb amlwg ac erythema ofrosacea parhaus trwy driniaeth â cervedilol. J. Dermatolog. Trin. 2018, 29, 310–313. [CrossRef] [PubMed]

15. Chang, A. ; Yeung, S.; Thakkar, A.; Huang, KM; Liu, MM; Kansas, RS; Parsa, C. ; Orlando, R.;Jackson, EK; Andresen, BT; et al. Atal carcinogenesis croen gan y beta-atalydd carvedilol. CanserCyn. Res. 2015, 8, 27–36. [CrossRef] [PubMed]

16. Chen, M. ; Liang, S.; Shahid, A.; Andresen, BT; Huang, Y. Y beta-Atalydd Carvedilol Atal Difrod Uwchfioled-Gyfryngol i Gelloedd Epidermal Murine a Chroen Dynol 3D wedi'i Ail-greu. Int. J.Mol. Sci. 2020, 21, 798. [CrossRef] [PubMed]

17. Huang, KM; Liang, S.; Yeung, S.; Oiyemhonlan, E. ; Cleveland, KH; Parsa, C. ; Orlando, R.; Meyskens, FL, Jr.;Andresen, BT; Huang, Y. Mae Carvedilol Cymhwysol yn Topig yn Gwanhau Carcinogenesis Croen a Achosir gan Ymbelydredd Solar Uwchfioled. Canser Cyn. Res. 2017, 10, 598–606. [CrossRef]

18. Brenner, M. ; Clyw, VJ Rôl amddiffynnol melanin rhag difrod UV mewn croen dynol. Ffotochem.Photobiol. 2008, 84, 539–549.

19. Cleveland, KH; Liang, S.; Chang, A. ; Huang, KM; Chen, S.; Guo, L. ; Huang, Y.; Mae Andresen, BT Carvedilolin yn atal JB6 P wedi'i gyfryngu gan EGF ynghyd â ffurfio cytref trwy fecanwaith sy'n annibynnol ar adrenoceptors.PLoS ONE 2019, 14, e0217038. [CrossRef]

20. Dzong, G. ; Zhongbing, M.; Qinye, F.; Zhigang, Y. Mae Carvedilol yn atal mudo a goresgyniad celloedd malaen y fron trwy anactifadu Src sy'n cynnwys llwybr signalau cAMP/PKA a PKCdelta. J. Canser Res. Ther.2014, 10, 998–1003.

21. Rzepka, Z. ; Bussman, E.; Beberok, A.; Wrzesniok, D. O tyrosine i melanin: Llwybrau signalau a ffactorau sy'n rheoleiddio melanogenes. Postepy Hig. Med. Dosw. Ar-lein 2016, 70, 695–708. [CrossRef]

22. Kim, Y.; Cho, JY; O, SW; Kang, M. ; Lee, De-ddwyrain; Jung, E. ; Parc, YS; Lee, J. Mae adiponectin globular yn gweithredu fel signal melanogenig mewn melanocytes epidermaidd dynol. Br. J. Dermatol. 2018, 179, 689–701. [CrossRef][PubMed]

23. Slominski, A.; Tobin, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Melanin pigmentiad mewn croen mamalaidd a rheoleiddio eihormonaidd. Physiol. Parch 2004, 84, 1155–1228. [PubMed]

24. Slominski, A. ; Zmijewski, MA; Pawelek, J. L-tyrosine, a L-dihydroxyphenylalanine fel rheolyddion hormon tebyg i swyddogaethau melanocyte. Melanoma Cell Pigment Res. 2012, 25, 14–27. [CrossRef] [PubMed]

25. Howe, J. ; Costantino, R.; Slominski, A. Ar fecanwaith tybiedig sefydlu a rheoleiddio melanogenesis gan L-tyrosine. Acta Derm Venereol. 1991, 71, 150–152.

26. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, C.C.; Askarian-Amiri, ME Llwybrau Signalau yn Melanogenesis. Int. J.Mol. Sci. 2016, 17, 1144. [CrossRef]

27. Jung, JA; Kim, BJ; Kim, MS; Ti, HJ; Yoon, ES; Dhong, ES; Parc, SH; Kim, DW Effaith Amddiffynnol Tocsin Botwlinwm yn erbyn Pigmentu Croen a Achosir gan Uwchfioled. Plast. Ail-gyfansoddi. Surg. 2019, 144, 347–356.[CrossRef]

28. Jeong, YM; O, WK; Tran, TL; Kim, WK; Canwyd, SH; Bae, K. ; Lee, S.; Sung, JH Aglycone o Rh4inhibits synthesis melanin mewn celloedd melanoma B16: Ymwneud posibl y protein kinase A path.Biosci. Biotechnol. Biocemeg. 2013, 77, 119–125. [CrossRef]

29. Kim, YH; Kim, D.; Hong, AR; Kim, JH; Yoo, H.; Kim, J.; Kim, I.; Kang, SW; Chang, SE; Cân, Y.Potensial Therapiwtig o Rottlerin ar gyfer Anhwylderau Gor-bigmentaidd y Croen trwy Lesteirio Gweithgaredd Trawsgrifio Cydweithredolwyr Trawsgrifio a Reoleiddir gan CREB. J. Ymchwilio. Dermatol. 2019, 139, 2359–2367.e2.[CrossRef]

30. Das, A. ; Ghosh, A. ; Kumar, P. Leukoderma cemegol oherwydd hydroquinone: Ffenomen anarferol. Indiaidd J.Dermatol. Venereol. gwahanglwyf. 2019, 85, 567. [CrossRef]

31. Jow, T. ; Hantash, BM Depigmentation a achosir gan Hydroquinone: Adroddiad achos ac adolygiad o'r llenyddiaeth. Dermatitis 2014, 25, e1–e5. [CrossRef]

32. Kersey, P.; Stevenson, CJ Vitiligo ac amlygiad galwedigaethol i hydroquinone o beiriannau sy'n gwasanaethu eu hunain yn tynnu lluniau. Cysylltwch â Dermat. 1981, 7, 285–287. [CrossRef] [PubMed]

33. Sasaki, M.; Kondo, M.; Sato, K.; Umeda, M.; Kawabata, K.; Takahashi, Y.; Suzuki, T.; Mae Matsunaga, K.;Inoue, S. Rhododendron, cyfansoddyn ffenolig sy'n achosi dadbigiad, yn rhoi sytowenwyndra melanocyte trwy fecanwaith sy'n ddibynnol ar tyrosinase. Melanoma Cell Pigment Res. 2014, 27, 754–763. [CrossRef] [PubMed]

34. Yoshikawa, M.; Sumikawa, Y.; Hida, T.; Kamiya, T.; Kase, K.; Ishii-Osai, Y.; Kato, J.; Kan, Y. ; Kamiya, S.;Sato, Y.; et al. Dadansoddiad clinigol ac epidemiolegol mewn 149 o achosion o leukoderma a achosir gan rhododendron.J. Dermatol. 2017, 44, 582–587. [CrossRef] [PubMed]

35. Harris, JE Fitiligo a Achosir gan Gemegol. Dermatol. Clin. 2017, 35, 151–161. [CrossRef] [PubMed]

36. Li-Sha, G. ; Yi-He, C.; Na-Dan, Z.; Teng, Z. ; Yue-Chun, L. Effeithiau triniaeth carvedilol ar fynegiant protein sy'n rhwymo elfen ymateb cAMP cardiaidd a ffosfforyleiddiad mewn coxsackievirus acíwt B3-myocarditis a achosir. Cardiofasg BMC. Anhwylder. 2013, 13, 100. [CrossRef] [PubMed]

37. Zhang, F.; Amryffurfiau Steinberg, SF S49G ac R389G o'r signalau dylanwad derbynnydd adrenergig beta(1) trwy'r llwybrau cAMP-PKA ac ERK. Physiol. Genom. 2013, 45, 1186–1192. [CrossRef]

38. Lee, AY; Noh, M. Rheoleiddio melanogenesis epidermaidd trwy lwybrau signalau cAMP a/neu PKC: Mewnwelediadau ar gyfer datblygu cyfryngau hypopigmented. Arch. Pharm. Res. 2013, 36, 792–801. [CrossRef]

39. Garcia-Borron, JC; Abdel-Malek, Z.; Jimenez-Cervantes, C. MC1R, y llwybr cAMP, a'r ymateb i UV solar: Ymestyn y gorwel y tu hwnt i bigmentiad. Melanoma Cell Pigment Res. 2014, 27, 699–720.[CrossRef]

40. Lin, CB; Babarz, L.; Liebel, F.; Roydon Price, E.; Kizoulis, M.; Gendimenico, GJ; Fisher, DE; Seiberg, M.Modulation o microphthalmia-gysylltiedig trawsgrifio ffactor mynegiant genynnau newid pigmentation croen.J. Ymchwilio. Dermatol. 2002, 119, 1330–1340. [CrossRef]

41. Kim, JH; Hong, AR; Kim, YH; Yoo, H.; Kang, SW; Chang, SE; Song, Y. Mae JNK yn atal melanogenesis trwy ymyrryd â chydweithredolydd trawsgrifio a reoleiddir gan CREB 3-mynegiant MITF dibynnol. Theranostics2020, 10, 4017–4029. [CrossRef] [PubMed]

42. Rios, M. ; Habecker, B. ; Sasaoka, T.; Eisenhofer, G.; Tian, ​​H.; Landis, S.; Chikaraishi, D.; Mae synthesis Roffler-Tarlov, S.Catecholamine yn cael ei gyfryngu gan tyrosinase yn absenoldeb tyrosine hydroxylase. J. Neurosci. 1999,19, 3519–3526. [CrossRef] [PubMed]

43. Cosentino, M. ; Marino, F.; Bombelli, R.; Ferrari, M.; Lecchini, A.S.; Frigo, G. catecholaminesynthesis mewndarddol, metaboledd, storio a'r nifer sy'n derbyn niwtroffiliau dynol. Gwyddor Bywyd. 1999, 64, 975–981. [CrossRef]

44. Marino, F.; Cosentino, M.; Bombelli, R.; Ferrari, M.; Lecchini, A.S.; Frigo, G. catecholaminesynthesis mewndarddol, storio metaboledd, a'r nifer sy'n cymryd celloedd mononiwclear gwaed ymylol dynol. Exp. Hematol.1999, 27, 489–495. [CrossRef]

45. Sorrento, D. ; Santulli, G. ; Del Giudice, C.; Anastasia, A. ; Trimarco, B. ; Iaccarino, G. Mae celloedd endothelaidd yn gallu syntheseiddio a rhyddhau catecholamines in vitro ac in vivo. Gorbwysedd 2012, 60, 129–136.[CrossRef] [PubMed]

46. ​​Cucchi, ML; Frattini, P.; Santagostino, G.; Preda, S.; Orecchia, G. Mae catecholamines yn cynyddu yn yr wrin o fitiligo ansegmentaidd yn enwedig yn ystod ei gyfnod gweithredol. Cell Pigment Res. 2003, 16, 111–116. [CrossRef][PubMed]

47. Salzer, BA; Schallreuter, KU Ymchwiliad i strwythur personoliaeth cleifion â fitiligo a chysylltiad posibl â metaboledd catecholamine â nam. Dermatoleg 1995, 190, 109–115. [CrossRef][PubMed]

48. Slominski, A. Gweithgaredd niwroendocrin y melanocyte. Exp. Dermatol. 2009, 18, 760–763. [CrossRef]

49. Gannu, R. ; Vishnu, YV; Kishan, V. ; Rao, YM Treiddiad carvedilol in vitro trwy groen mochyn: Effaith cerbydau a gwellawyr treiddiad. PDA J. Pharm. Sci. Technol. 2008, 62, 256–263.

50. Kshirsagar, SJ; Bhalekar, MR; Mohapatra, SK Datblygu a gwerthuso system cyflenwi cyffuriau trawsdermol carvedilol-loaded: Astudiaeth nodweddu in-vitro ac in-vivo. Cyffuriau Dev. Ddiwydiannol Pharm. 2012,38, 1530–1537. [CrossRef]

51. Tanwar, YS; Chauhan, CS; Sharma, A. Datblygu a gwerthuso clytiau trawsdermal cervedilol.Acta Pharm. 2007, 57, 151–159. [CrossRef] [PubMed]