Nodweddu Proanthocyanidinau Naturiol Ac Alcalin-Ocsidedig mewn Echdyniadau Planhigion Trwy Gydraniad Uchel UHPLC-MS/MS

Am fwy o wybodaeth. cyswllttina.xiang@wecistanche.com

Haniaethol: Yn yr astudiaeth hon, dadansoddwyd cyfansoddiad proanthocyanidin (PA) o 55 o echdynion planhigion cyn ac ar ôl alcalïaiddocsidiadtrwy gydraniad uchel iawn UHPLC-MS/MS. Fe wnaethom nodweddu'r strwythurau PA naturiol yn fanwl ac astudio'r newidiadau soffistigedig yn y strwythurau PA wedi'u haddasu a'r patrymau a'r modelau adweithiau nodweddiadol o fewn gwahanol ddosbarthiadau PA oherwydd ocsidiad. Y PAs naturiol oedd cyfrifiaduron personol math A a B, PDs, a chymysgeddau PC/PD. Yn ogystal, rydym wedi canfod PAs galoylated. Roedd cyfrifiaduron personol math B mewn gwahanol ddarnau o blanhigion braidd yn sefydlog ac ni ddangoswyd unrhyw addasiad neu fân addasiadau oherwydd yocsidiad alcalïaidd. Ar gyfer rhai samplau, gwnaethom ganfod adweithiau intramoleciwlaidd cyfrifiaduron personol sy'n cynhyrchu cysylltiadau ether math A. Roedd cyfrifiaduron math A hefyd braidd yn sefydlog heb unrhyw addasiadau neu fân addasiadau, ond mewn rhai planhigion, ffurfiwyd ether ychwanegolcysylltiadauei ganfod. Roedd PAs yn cynnwys unedau PD yn fwy adweithiol. Ar ôl ocsidiad alcalïaidd, ni chafodd y PAs hyn na'u cynhyrchion ocsideiddio eu canfod mwyach gan MS er bod math gwahanol a/neu dwmpath PA oedi yn dal i gael ei ganfod gan UV ar 280 nm. Roedd PAs galloylated braidd yn sefydlog o dan ocsidiad alcalïaidd os oeddent yn seiliedig ar PC, ond canfuom y trawsnewid intramoleciwlaidd o fath B i fath A. Roedd PDs galoylated yn fwy adweithiol ac yn adweithio yn yr un modd i PDs heb eu galoyleiddio.

Geiriau allweddol: sbectrometreg màs cydraniad uchel; orbitrap; ocsidiad; tannin; UHPLC-DAD-MS/MS

Cliciwch yma i ddysgu mwy o gynhyrchion

1.Introduction

Proanthocyanidins(PAs, syn. tanninau cyddwys) yn oligomers a pholymerau sy'n cynnwys flafan-3-unedau monomerig (Ffigur 1). Mae amrywiaeth strwythurau PA yn deillio'n bennaf o'u patrymau hydroxylation, trefn ddilyniannol yr unedau flafan-3-ol, a graddau'r polymerization(DP), yn ogystal â gwahaniaethau mewn stereocemeg yn C2 a C3 ac amrywiad yn y lleoliad a stereochemistry o rhyngfflafanoidbondiau [1] . Y PAs mwyaf cyffredin yw procyanidins (PCs) sy'n cynnwys unedau catechin (epi) a phrodelphinidins (PDs) sy'n cynnwys (epi) unedau gallocatechin (Ffigur 1). Mae gan y strwythurau PA a gyflwynir yn y ffigur y cysylltiadau C4→C8. Fodd bynnag, gellir cysylltu PAs hefyd gan fondiau C4→C6, ac ni allwn wahanu'r ddau gysylltiad hyn oddi wrth ei gilydd trwy sbectrometreg màs.

PAs are the most commonly available subgroup of plant tannins, responsible for nearly 90% of the world's overall market for industrial tannins (>100-kilo tunnell lluosog bob blwyddyn), ac maent yn fwy deniadol yn gemegol ac yn economaidd fel bio-polymer [2-5]. Ar hyn o bryd, dim ond ychydig o adnoddau, megis rhisgl neu goedwigoedd plethwaith, mimosa, quebracho, derw, castanwydd, mangrof, sumach, myrobalans, a tara, a ddefnyddir ar gyfer eu cynhyrchu ac yn bennaf ar gyfer gofynion lliw haul lledr, gwin, mwynau. diwydiannau arnofio, a drilio olew, ar gyfer paratoi gludyddion, yn ychwanegol at faeth anifeiliaid [4,6,7]. Fodd bynnag, gallai hyd yn oed gwastraff neu sgil-gynhyrchion o drin a phrosesu ffrwythau, llysiau, ac adnoddau coedwig o'r cymwysiadau diwydiannol a restrir uchod fod yn ffynhonnell bosibl ar gyfer PAs naturiol [8-11]. Gellid hefyd addasu'r PAs ymhellach er mwyn gwella eu defnyddioldeb a'u bioweithgareddau [12,13].

Gellir addasu priodweddau cemegol PAs trwy adweithiau deillio [12]. Mae'r adweithiau hyn yn cynnwys, er enghraifft, O-asyleiddiad trwy adwaith â chloridau asid neu anhydridau neu alkylation â halidau alcyl. Mae deilliadu yn addasu priodweddau ffisiocemegol PAs ar gyfer eu cymwysiadau masnachol a thechnolegau puro. Fodd bynnag, er mwyn deall yn iawn yr adweithiau gwirioneddol sy'n digwydd, mae angen rheoleiddio sawl paramedr, megis yr adweithyddion a'r toddyddion a ddefnyddir, tymheredd, pH, ac amser adwaith [12]. Ffordd syml a chyflym o wella defnyddioldeb PAs planhigion yw eu hocsideiddio i greu PAs newydd gyda strwythurau moleciwlaidd wedi'u newid. Er bod amodau adwaith ocsideiddio yn adnabyddus a bod gwahanol fecanweithiau adwaith wedi'u hawgrymu, mae'r newidiadau strwythurol cyfatebol yn hysbys yn bennaf ar gyfer PAs bach unigol [14-18]. Er enghraifft, mae adweithiau ocsideiddio ac ad-drefnu gwahanol flafanau monomerig a dimeric-3-wedi cael eu trafod yn gain eisoes 30 mlynedd yn ôl, gan ddangos bod cemeg y PAs hyn ar pH alcalïaidd yn cael ei reoleiddio gan ffurfio A-a/neu B-ring quinone-methides fel canolradd adweithiol iawn sy'n achosi'r adweithiau ad-drefnu a thrawsnewid ocsideiddiol math-B i PAs math[15]. Yn lle hynny, nid yw ymddygiad cymysgeddau PA yn y darnau planhigion yn hysbys, ac mae'n debyg bod hyn oherwydd anawsterau wrth ddadansoddi PAs cychwynnol gwahanol yn strwythurol, sy'n cael eu herio hyd yn oed ymhellach ar ôl ocsideiddio. Yn ein hastudiaeth flaenorol, gwnaethom brofi a ellid addasu gwahanol fathau o PAs naturiol yn gemegol i gynhyrchu mathau newydd o PAs ac astudiwyd effeithiau ocsidiad alcalïaidd amhenodol gan ddynwared y broses echdynnu alcalïaidd a ddefnyddir yn aml ar gyfer gwastraff rhisgl [19-23]ar 102 o ddarnau planhigion sy'n cynnwys PA [13]. Roedd y canlyniadau'n dangos adweithedd gwahanol ar gyfer cyfrifiaduron personol a PDs. Roedd y canlyniad yn awgrymu y gellid addasu PAs planhigion ar pH uchel, ac roedd presenoldeb grwpiau PD yn gwella'r tebygolrwydd o adweithiau addasu yn sylweddol. Daethpwyd i'r casgliad bod y prif lwybr adwaith yn fewnfoleciwlaidd, ond ar gyfer PAs llawn PD a gallovlated, nodwyd adweithiau rhyngfoleciwlaidd a rhyngfoleciwlaidd [13]. Yn ogystal, mae astudiaethau eraill wedi dangos bod ocsidiad PAs yn cynnwys adweithiau intramoleciwlaidd a rhyngfoleciwlaidd [14,15,24,25].

Mae'r nodweddiad manwl a'r ddealltwriaeth o PAs naturiol ac ocsidiedig yn heriol, ond mae datblygiadau diweddar mewn offer sbectrometreg màs tandem cromatograffig hylif tra-perfformiad uchel (UHPLC-MS/MS) gyda dadansoddwyr màs cydraniad uchel wedi galluogi nodweddu llawer o wahanol PAs planhigion. [18,26-28]. Mae'r dadansoddwyr màs poblogaidd ar gyfer nodweddu PAs wedi bod yn orbitrap [27,28] a phedwarpol.

amser hedfan(OTOF)[29,30] oherwydd eu priodweddau cydraniad uchel, sy'n caniatáu pennu union fasau a fformiwlâu moleciwlaidd cyfatebol PAs a astudiwyd mewn echdynion planhigion. Mae PAs a geir mewn natur fel arfer yn cynnwys cymysgedd o wahanol strwythurau oligo-a pholymerig, sy'n cynhyrchu ïonau wedi'u gwefru lluosi mewn ïoneiddiad electrochwistrellu, gan ehangu'r ystod màs a ddefnyddir [30-32]. Yn ogystal, mae gan PAs batrymau darnio nodweddiadol adnabyddus, y gellir eu defnyddio ar gyfer eu hadnabod: mae'r rhain yn cynnwys holltiad quinone-methide (QM), ymholltiad cylch heterocyclic (HRF), a darniad retro-Diels-Alder (RDA) [27, 31-33]. Mae'r un patrymau darnio fel arfer yn bresennol ar gyfer PAs math A a math B, ac mae'r gwerthoedd m/z a welir ar gyfer PAs math A gydag un cysylltiad ether yn wahanol o 2 Da i'r PAs math B cyfatebol [26,{{ 19}}].

Yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd UHPLC ynghyd â sbectrometreg màs tandem cydraniad uchel iawn er mwyn (a) astudio'r strwythurau PA naturiol mewn 55 o samplau planhigion cyfoethog PA yn fanwl, (b) i weld y newidiadau soffistigedig yn y strwythurau PA addasedig ar ôl hynny. yr ocsidiad awyr mewn amodau alcalïaidd ac (c) adnabod y patrymau a'r modelau nodweddiadol o adweithiau o fewn gwahanol ddosbarthiadau PA oherwydd yr ocsidiad.

2. Canlyniadau a Thrafodaeth

Dewisasom 55 o samplau planhigion cyfoethog PA yn cynnwys cymysgeddau diddorol ond cymhleth o PAs naturiol yn seiliedig ar ein hastudiaeth flaenorol [13]. Cafodd y samplau planhigion hyn eu ocsidio yn yr un modd gan ocsidiad awyr o dan amodau alcalïaidd fel yn [13] ac ar ôl yr ocsidiad, roedd PAs hyd yn oed yn fwy cymhleth. Astudiwyd y PAs naturiol ac addasedig hyn yma gan UHPLC-DAD wedi'u cysylltu ag MS/MS Q-orbitrap cydraniad uchel iawn er mwyn canfod y newidiadau soffistigedig mewn strwythurau PA. Nodwyd PAs ar sail eu hïonau wedi'u gwefru'n unigol a/neu wedi'u lluosi â'u union fasau cyfatebol a'u fformiwla foleciwlaidd. Cynhaliwyd y dadansoddiadau gan LC cyfnod gwrthdroi, ac felly, roedd PAs oligomeric a pholymerig yn bresennol yn bennaf fel twmpathau heb eu datrys yn y cromatogramau UV ar 280 nm, gweler detholiad dail Ruprechtia salicifolia yn Ffigur 2A am enghraifft. Yng nghyfanswm y cromatogram ïon, roedd ïoneiddiad cyfansoddion ffenolig eraill yn ddwysach nag un y PAs, ac felly, nid oedd y twmpath PA mor amlwg (Ffigur 2B). Fodd bynnag, mae cywirdeb orbitrap yn ei gwneud hi'n haws dehongli canlyniadau MS gan fod patrymau isotopig ïonau â gwefr luosog wedi'u diffinio'n glir, a gellir canfod y gorgyffwrdd posibl o gopaon, gan alluogi pennu union fasau a fformiwlâu moleciwlaidd gwahanol oligo-. a PAs polymerig. Er enghraifft, mae catechin galoylated(epi) ar m/z 441, PCat dimeric galoylated m/z729, a PC trimerig â gallovlated yn m/z 1017 yn dangos copaon wedi'u gwahanu'n dda mewn cromatogramau ïon wedi'u hechdynnu (EICs) yn Ffigur 2C-E, ac maent gellir eu canfod yn hawdd yn seiliedig ar eu UV a sbectra màs, gan gynnwys masau union a'r fformiwla moleciwlaidd cyfatebol. Roedd y canlyniadau a gafwyd yma yn gyson â chanlyniadau blaenorol a gafwyd gan MS/MS, gan ddangos bod dail Ruprechtia salicifolia yn cynnwys 24 mg/g o PAs, a dim ond 3 y cant ohonynt oedd yn PAs yn cynnwys PD, rhai ohonynt wedi'u galoylated, a chanfuwyd y mDP i fod yn 7 [13].

2.1.B-Math PCs yn y Detholiad Planhigion Di-ocsidiedig Cychwynnol

Canfuwyd cyfrifiaduron personol math B yn y darnau planhigion yn seiliedig ar eu hïonau moleciwlaidd â gwefr unigol a lluosog yn ogystal â'r patrymau darnio nodweddiadol. Er enghraifft, mae cyfrifiaduron personol yn Begonia bower yn "Nigra" dyfyniad arddangos cyfres benodol o ïonau [MH] gwahanu gan 288 Da o m/z289 i m/z 1729 sy'n cyfateb i gyfrifiaduron personol math B o fonomer i hecsamer ac o [M{{ 6}}H]' ïonau wedi'u gwahanu gan144 Da o m/z 1008 i m/z 1296 sy'n cyfateb ar gyfer cyfrifiaduron math B o heptamers i enwau (Tabl S1). Roedd sbectra màs cyfrifiaduron monomerig, hy, flavan-3-ols catechin ac epicatechin, yn arddangos ïon darn nodweddiadol ar m/z 245 fel yr adroddwyd yn flaenorol [3132,36].

Yn gyffredinol, dangosodd yr MS/MS o dimers PC math-B y patrymau darnio nodweddiadol sy'n cynhyrchu ïonau ar m/z 287 a 289 (holltiad QM), m/z 425, a 407 (darnio RDA a dileu dŵr dilyniannol) a m /z 451(HRF; Ffigur 3). Ystyrir mai darniad RDA yw'r patrwm darnio pwysicaf ar gyfer nodweddu dimers PC math B a chredir bod y darnio ar yr uned estyn yn fwy ffafriol yn egnïol gan ei fod yn cynhyrchu ïonau darnio gyda system hyperconjugated π-π fwy na'r Darniad RDA ar yr uned derfynell [31-33].

2.2.A-Math PCs yn y Detholiad Planhigion Di-ocsidiedig Cychwynnol

Cadarnhawyd presenoldeb PAs math A yn y darnau planhigion cychwynnol gan eu patrymau darnio nodweddiadol tebyg i PAs math B. Fel enghreifftiau, mae'r llwybrau darnio nodweddiadol a data MS/MS o dimer a thrimer PC math A sydd ag un cysylltiad math A yn cael eu dangos a'u trafod yn fanwl (Ffigurau 4 a 5). Cynhyrchodd darniad y dimer PC math-A bedwar ïon darn (Ffigur 4). Cynhyrchodd darniad RDA yr uned derfynell ïon ar m/z 423, sy'n cadarnhau presenoldeb cysylltiad math A [26,34,35]. Yn ogystal, rydym yn awgrymu y gallai darniad RDA o'r uned estyn a cholli dŵr yn ddilyniannol gynhyrchu'r ïon ar m/z 407. Yr ïon yn m/z 449 yw'r cynhyrchiad HRF, hy canlyniad colli dŵr yr uned ffloroglucinol [26]. Roedd yr ïonau ar m/z 285 a 289 yn cyfateb i holltiad QM. Yn yr un modd, roedd y trimiwr PC math-A yn arddangos ïon moleciwlaidd ar m/z 863 ac ïonau darn nodweddiadol yn MS/MS ar m/z 711.693.573.559,451,411 a 289 fel yr adroddwyd yn flaenorol gan Sui et al.(2016 )[26]. Cynhyrchodd darniad RDA y trimiwr PC math-A ïon ar m/z 711, sydd eto'n cadarnhau presenoldeb cysylltiad math A yn ôl yr astudiaeth flaenorol [26] ac mae'n awgrymu y gallai'r cysylltiad math A fod rhwng dau estyniad unedau. Rydym yn awgrymu bod yr ïon ar m/z 693 yn cyfateb i golled ddilyniannol dŵr ac yn cefnogi lleoliad cyswllt math A, fel y dangosir yn Ffigur 5. Yn ogystal, rydym yn awgrymu bod yr RDA ychwanegol o gylch C heterocyclic y flafan terfynell-3-ol uned yn arddangos yr ïon yn m/z559. Roedd yr ïon hwn yn fach yn ein hastudiaethau. Roedd yr ïonau ar m/z573 a 289 yn cyfateb i holltiad QM y bond rhyng-flafanoid isaf [26]. Fe wnaethom hefyd ganfod ïonau ar m/z 575 a 287. Cynigiwn y gallai'r ïonau yn m/z 451 a 411 gyfateb i HRF cylch C heterocyclic yr uned fflafan ganol sy'n cynnal lleoliad y Cysylltiad math-A rhwng yr unedau estyn yn ôl Ffigur 5.

2.3.Addasiadau o Gyfrifiaduron Math B mewn Echdyniadau Planhigion Oherwydd yr Ocsidiad Alcalin

Ar ôl yr ocsidiad, addaswyd PCs math B mewn gwahanol ddarnau o blanhigion yn wahanol. Ni ddangosodd rhai o'r samplau unrhyw addasiadau neu fân addasiadau; gweler Ffigur 6A, B, er enghraifft, ar gyfer oligomers PC math B byrrach yn y darn dail o bower Begonia yw "Nigra" cyn ac ar ôl ocsideiddio. Pan gafodd y mathau hyn o echdynion planhigion eu hocsidio, roedd cyfanswm sbectra màs y darnau planhigion cychwynnol ac ocsidiedig yn debyg. Fodd bynnag, canfuwyd gwahaniaethau bach iawn yn y data sbectrometrig màs manwl. Er enghraifft, roedd y dimer PC ar m/z 577 yn cyd-fynd â m/z575, a'r trimiwr PC yn m/z865 gyda m/z 863, yn y drefn honno. Pan oedd y symiau o gyfrifiaduron personol yn isel cyn yr ocsidiad, ar ôl yr ocsidiad, roedd eu signalau bron wedi diflannu o'r sbectra màs, gan awgrymu eu bod wedi trosi i anadnabyddadwy neu wedi diraddio oherwydd yr ocsidiad. Gwelwyd y ffenomen hon, er enghraifft, ar gyfer darnau dail Combretum Indicum ac Euphorbia characias sy'n cynnwys symiau isel o ychydig o oligomers PC byr ac a ategwyd gan y data MS / MS blaenorol a ddangosodd fod y cynnwys PA wedi gostwng o 4 mg / mL i 1 mg / mL a 7 mg / mL i 1 mg / mL, yn y drefn honno, oherwydd yr ocsidiad [13]. Gallai'r ffenomen hon fod yn gysylltiedig â'r amodau arbrofol a ddefnyddiwyd, sy'n golygu eu bod yn fwy difrifol pan oedd y cynnwys PA cychwynnol yn isel. Mewn rhai samplau, addaswyd rhan o'r cyfrifiaduron math B yn fwy, gweler Ffigur 6C, D, er enghraifft, ar gyfer PColigomerau math B byrrach yn y dyfyniad taflen o Cyperus owoaii cyn ac ar ôl ocsideiddio. Pan gafodd y mathau hyn o echdynion planhigion eu hocsidio, canfuwyd gwahaniaethau gweladwy yng nghyfanswm y sbectra màs sy'n dangos y gwahaniaeth màs o 2 Da o'i gymharu â PCs cychwynnol (Ffigur 6C, D, Tabl S2).

Mae'n hysbys bod ocsidiad polyffenolau o-dihydroxy, hy, y catechol B-ring o gyfrifiaduron personol, yn nodweddiadol yn cynhyrchu o-quinones gyda gwahaniaeth màs o 2 Da. Mewn gwirionedd, rydym wedi sylwi y gall y math hwn o ocsidiad ddigwydd hefyd mewn dadansoddiadau sbectrometrig màs. Gall fod mân signalau yn y sbectra màs gyda'r gwerthoedd m/z 2 Da yn llai na gwerthoedd m/z cyfrifiaduron personol sy'n cyfateb i ocsidiad posibl neu ffurfiant ffurfiau cwinone o gyfrifiaduron personol yn ystod yr ïoneiddiad (data heb ei gyhoeddi). Mae'n ymarferol bod polyffenolau o-dihydroxy yma yn yr ocsidiad alcalïaidd yn ffurfio'r o-quinones cyntaf. Fodd bynnag, mae'r 0-ffurflenni quinone a ffurfiwyd yn ansefydlog ac yn fwy na thebyg yn ymateb yn gyflym ymhellach. Un canlyniad posibl posibl fyddai trosi PCs math B yn ocsideiddiol i gyfrifiaduron math A, fel yr adroddwyd yn flaenorol yn y llenyddiaeth [15]. Mae trawsnewid cyfrifiaduron math B yn gyfrifiaduron math A yn golygu tynnu'r ïon hydrid yn C2 o'r cylch C fel cam cychwynnol: mae'r amodau sylfaenol cyffredinol yn achosi ocsidiad ymarferoldeb o-dihydroxy y cylch B. i o-quinone, sydd wedyn yn gwasanaethu fel anocsidyddar gyfer trosi dimer procyanidin math-B i fath A-un [15] (Ffigur 7). Mae'r mecanwaith quinone methide hwn hefyd wedi'i brofi mewn gwahanol dymereddau, pH, ac amodau catalytig [37], trwy ocsidiad radical gan ddefnyddio radicalau 1,{6}}diphenyl-2-picrylhydrazyl o dan amodau niwtral [38] a thrwy laccas ( EC1.10.3.2) [39].

Pan astudiwyd y cyfrifiaduron personol wedi'u haddasu gyda'r gwahaniaeth màs o 2 Da yn y darnau ocsidiedig a'u cynyrchiadau a gafwyd gan MS/MS, daethpwyd i'r casgliad eu bod yn debyg i gyfrifiaduron personol math A a'u ïonau darn (fel y trafodwyd uchod yn Adran 2.2). yn dangos y patrymau darnio nodweddiadol sy'n cynhyrchu ïonau ar m/z 285 a 289 (holltiad QM), m/z 423 (darniad RDA) ac m/z449 (HRF). Fel enghraifft, rydym yn dangos trosi'r dimers PC math B o echdyniad taflen o Microgramma Mauritania i dimers PC math A yn Ffigur 8. Yn ydi-oxidizedechdyniad, fe wnaethom ganfod pedwar dimer PC math B gyda gwerthoedd m/z 577 (Ffigur 8A) ond dim pylu PC math A gyda gwerthoedd m/z 575 (Ffigur 8B). Mae'n debyg bod y copaon bach yn yr EIC ar m/z575 yn cyfateb i ocsidiad cyfrifiaduron math B yn y ffynhonnell ïon gan fod yr amseroedd cadw yn union yr un fath ag ar gyfer cyfrifiaduron math B. Yn y dyfyniad ocsidiedig, dim ond olion y cyfrifiaduron personol math B cychwynnol a ganfuwyd gennym yn m/z 577 (Ffigur 8C), ond yn lle hynny, canfuom uchafbwyntiau dwys ar amseroedd cadw diweddarach sy'n cyfateb i gyfrifiaduron personol math A yn m/z 575 (Ffigur 8D). Roedd y copaon bach yn yr EIC ar m/z577 gyda'r un amseroedd cadw yn cyfateb i signalau isotopig y m/z 575. Rhaid nodi bod yr astudiaeth hon yn ansoddol, sy'n golygu na all helaethrwydd yr ïonau fod gymharu fel y cyfryw. Yn ogystal, mae'n rhaid nodi nad oedd trosi PC math B yn PC math A bob amser mor gyflawn ag yn yr enghraifft hon ac nad oedd pob cyfrifiadur math B yn cael ei drosi i gyfrifiaduron math A; amcangyfrif yn fras fod digonedd yr ïonau o oligomers PC math A a math B yn gyfartal. Ar y llaw arall, mewn rhai samplau, rydym yn canfod gwahaniaethau mwy o 2 Da; er enghraifft, gellid cyd-fynd â'r heptamer PC yn m/z 2017 ag ïonau yn m/z2015 a 2013, gan awgrymu ffurfio un a dau gysylltiad math A, yn y drefn honno.

Er ei bod yn ymddangos mai trosi cyfrifiaduron math B i fath A oedd y prif fecanwaith adwaith, ni allwn eithrio adweithiau addasu eraill yn llawn. Roedd PAs yn bresennol fel cymysgeddau cymhleth yn y darnau cychwynnol nad ydynt yn ocsidiedig, ac roedd y cymysgeddau hyn hyd yn oed yn fwy cymhleth ar ôl i'r ocsidiad alcalïaidd gynhyrchu llawer iawn o ddata MS. Er enghraifft, mae astudiaethau blaenorol ar ocsidiad sylfaen-catalyzed ac adweithiau ad-drefnu PAs wedi dangos y gall dimers PC sgwrsio i wahanol gynhyrchion o isomerization C-ring, gan gynnwys tetrahydroxypyranochromenes, a elwir hefyd yn fflorotanninau [15]. Byddai'r cynhyrchion hyn yn arddangos gwerthoedd m/z tebyg iawn ar 577 ond amseroedd cadw gwahanol yn LC a gwahanol batrymau darnio mewn MS. Yn seiliedig ar yr EICs ar m/z 577, ni wnaethom ganfod ad-drefnu o'r math hwn yn yr amodau adwaith a ddefnyddiwyd. Gallai'r aildrefnu ac agor y cylch C heterocyclic hefyd gynhyrchu cynhyrchion eraill trwy regio-isomerization, epimerization, neu 13-ymfudiad aryl [15]. Mae'r epimerization wedi bod yn ymwneud yn bennaf â phrosesau gweithgynhyrchu ac, er enghraifft, mae'r tymereddau uchel sy'n gysylltiedig â rhostio coco yn arwain at golledion fflafan, ond hefyd at epimereiddio flafanau, monomerau ol, dimers. , a trimers [40]. Yn ogystal, adroddwyd bod polyphenol oxidase mewn cnawd ffrwythau banana wedi achosi epimerization (-)-epigallocatechin i (-)-gallocatechin[41]. Gwnaethom edrych ar yr epimereiddiad posibl o flafanau gan ddefnyddio EICs ar m/z289, ac yn gyffredinol, ni wnaethom ganfod epimereiddiad sylweddol a achosir gan yr ocsidiad alcalïaidd a ddefnyddiwyd. Fodd bynnag, ni allwn eithrio'r epimerization yn llawn wrth i ni ganfod symiau uwch o ( plws ) - catechin mewn perthynas â (-)-epicatechin yn echdyniad ocsidiedig blodau blodfresych Pavonia nag yn y dyfyniad anocsidiol cychwynnol (Ffigur S1). Rhaid nodi hefyd bod y darnau ocsidiedig wedi'u niwtraleiddio cyn yr UHPLC-MS/MS, a allai fod wedi achosi adweithiau rhydocs. Yn y ffurfiau ocsidiedig, mae cwinonau yn electroffiliau sy'n gallu adweithio â'r dŵr niwcleoffilig sy'n bresennol, a gallai hyn yn syml arwain at yr adwaith lleihau sy'n cynhyrchu cyfrifiaduron math B, a allai hefyd esbonio pam yr oedd yn ymddangos nad oedd rhai o'r cyfrifiaduron math B wedi'u heffeithio.

2.4.Addasiadau Cyfrifiaduron Personol Math A mewn Echdynion Planhigion oherwydd yr Ocsidiad Alcalïaidd

Ymatebodd PCs math A mewn gwahanol ddarnau o blanhigion yn wahanol oherwydd yr ocsidiad alcalïaidd. Ni ddangosodd rhai o'r samplau unrhyw addasiadau neu fân addasiadau. Pan oedd y mathau hyn o echdynion planhigion yn destun ocsidiad alcalïaidd, ni chanfuwyd unrhyw wahaniaethau arwyddocaol yng nghyfanswm y sbectra màs (er enghraifft, gweler Tabl S3 am y prif ïonau a welwyd yn echdyniad dail Aglaonema commutatum var. maculatum cyn ac ar ôl ocsidiad). Fodd bynnag, gellid canfod gwahaniaethau bach iawn yn y data sbectrometrig màs manwl sydd â'r gwahaniaeth màs o 2 Da ac sy'n awgrymu y gellid ffurfio cysylltiadau ether math A ychwanegol. Roedd y ffenomen hon yn fwy amlwg ar gyfer rhai o'r samplau gyda PC math A; sylwyd bod y cyfrifiaduron math A hyn yn ffurfio cysylltiadau ether math A ychwanegol oherwydd yr ocsidiad alcalïaidd (Ffigur 9). Pan gafodd y mathau hyn o echdynion planhigion eu hocsidio, canfuwyd gwahaniaethau amlwg yng nghyfanswm y sbectra màs sy'n dangos y gwahaniaeth màs o 2 Da o'i gymharu â PCs math A cychwynnol. Roedd yr ïon [MH]-yn m/z 863 yn cyfateb ar gyfer trimer PC ag un bond ether math A a'r ïon ar m/z 861 ar gyfer trimer PC gyda dau gysylltiad ether (Ffigur 9A ). Yn yr un modd, canfuwyd cyfrifiaduron tetramerig ag un, dau, a thri chyswllt ether gan yr ïonau [M -H] yn m/z 1151, 1149, a 1147, yn y drefn honno (Ffigur 9B). Mewn cyfrannedd, mae gan gyfrifiaduron pentameric a hecsamig un darganfuwyd bond ether , dau, a thri gan yr ïonau [M -H]- ar m/z 1439, 1437, a 1435 ac ar m/z 1727,1725, a 1723, yn y drefn honno (Ffigur 9C, D; fodd bynnag, mae'r [M -2H]2-ion ar m/z 861 o hexamer PC yn amlwg yn fwy niferus na'r [MH]-ion ar m/z 1723 ac felly, a ddangosir yn y ffigur).

Roedd ffurfio cysylltiadau math A ychwanegol hefyd yn effeithio ar amseroedd cadw'r oligomers hyn. Roedd yn ymddangos bod nifer y cysylltiadau ether ychwanegol yn cynyddu i ryw raddau wrth i raddau polymerization PCs gynyddu, a ddisgwylir gan fod mwy o safleoedd ar gyfer y bondiau ychwanegol. Fodd bynnag, rhaid sylwi hefyd y gall fod mân signalau gyda'r gwahaniaeth màs o 2 Da sy'n cyfateb i ocsidiad posibl neu ffurfio ffurfiau quinone o gyfrifiaduron personol yn ystod yr ïoneiddiad, fel y trafodwyd uchod. Mae'r copaon hyn hefyd i'w gweld yn y sbectra màs yn Ffigur 9 cyn y prif gopaon sy'n cyfateb i gyfrifiaduron math A. Roedd helaethrwydd yr ïonau, siapiau'r patrymau isotopig, a'r ïonau darn nodweddiadol a gafwyd gan MS/MS yn cadarnhau arsylwi cysylltiadau ether math-A ychwanegol. Mae'n bwysig nodi hefyd nad oedd yn ymddangos bod yr adweithiau mewnfoleciwlaidd hyn a arsylwyd yn effeithio ar faint cymedrig y polymerization gan na chanfuwyd yr oligomers PA uwch neu'r polymerau yn y darnau ocsidiedig o'u cymharu â darnau nad ydynt yn ocsidiedig. Cefnogir yr arsylwi gan Mouls a Fulcrand (2012) [14].

2.5.Echdynion Planhigion gyda Chynorthwywyr Personol sydd ag Is-unedau PC a PD a'u Haddasiadau Oherwydd yr Ocsidiad Akaline

Roedd llawer o'r samplau'n cynnwys PAs ag unedau (epi) catechin ac (epi) gallocatechin, hy, cymysgeddau PC/PD oedd y PAs. Roedd tynged y cymysgeddau PC/PD hyn oherwydd yr addasiad trwy ocsidiad alcalïaidd yn wahanol o gymharu â PCs. Roedd cymysgeddau PC/PD wedi'u canfod yn glir yn y darnau planhigion cyn yr ocsidiad gan UV ac MS; gweler, er enghraifft, yr oligomers PA bach yn y detholiad dail cychwynnol o Podocarpus macrophyllus (Ffigur 10A a Thabl S4). Ar ôl yr ocsidiad, roedd y PAs wedi'u haddasu yn dal i gael eu canfod gan UVat 280 nm fel math gwahanol a / neu dwmpath oedi (Ffigur S2), ond ni chawsant eu canfod mwyach gan MS, gweler, er enghraifft, yr oligomers PA coll yn y ddeilen ocsidiedig. echdyniad o Podocarpus microphallus (Ffigur 10B a Thabl S4). Ni wnaethom ganfod unrhyw signalau eraill a allai gyfateb i'r cymysgeddau PC/PD wedi'u haddasu nac i'w cynhyrchion diraddio posibl. Er enghraifft, ar gyfer y dimer PC yn m/z 577, gallem ganfod y dimer PC math A cyfatebol ar m/z 575 yn y dyfyniad ocsidiedig, ond ni ellid gwneud arsylwadau penodol tebyg ar gyfer pylu neu drimwyr PC/PD (Ffigur 10B). Gall y rheswm dros golli oligomers PC/PD canfyddadwy yn ESI-MS fod, er enghraifft, adweithiau rhyngfoleciwlaidd rhwng PAs [13-15,24,25]. Mae'n hysbys bod yr adweithiau rhyngfoleciwlaidd yn arwain at ffurfio PAs wedi'u haddasu trwy gysylltu dwy gadwyn oligomeric gwahanol, ac yn nodweddiadol, maent yn arwain at gynnydd yn y radd gymedrig o bolymereiddio [14]. Er enghraifft, mae Vernhet et al. (2014) wedi sylwi gan arbrofion gwasgariad pelydr-X bach-ongl, os caiff PAs eu ocsidio mewn toddiannau crynodedig, mae'r PAs wedi'u haddasu yn bolymerau uchel gyda chadwyni llinellol neu ganghennog hir [25]. Gall ocsidiad pellach hefyd arwain at gylchrediad rhwng cylchoedd A a B o wahanol PAs [24]. Yn ogystal, nodwyd bod y bondiau a'r strwythurau newydd hyn yn gallu gwrthsefyll holltiad asid-catalyzedig, ac felly, dim ond trwy ddulliau nad ydynt yn depolymerizing y gellir amcangyfrif y cynnydd yn y radd gymedrig o bolymereiddio [14,24. Fodd bynnag, dangosodd ein canlyniadau nad yw'r PAs addasedig hyn yn cael eu canfod ychwaith o dan yr amodau ESI-MS safonol a ddefnyddir ar gyfer PAs (Ffigur 10). Yn ein hastudiaeth flaenorol, fe wnaethom ddefnyddio dull yn seiliedig ar fonitro adwaith dethol gan bedwarpol triphlyg i ganfod y PAs mewn samplau nad ydynt yn ocsidiedig ac wedi'u hocsidio a sylwi bod cyfansoddiad yr is-uned wedi newid oherwydd yr ocsidiad alcalïaidd, felly nid oedd y dull bellach yn gallu canfod y PAs addasedig [13]. Mae'r canlyniadau MS cydraniad uchel presennol yn cefnogi ein harsylwadau blaenorol fesul pedwarplyg triphlyg bod y PAs wedi'u haddasu yn y darnau ocsidiedig yn llawer mwy cymhleth na'r PAs cychwynnol yn y darnau nad ydynt yn ocsidiedig ac nad ydynt yn cael eu canfod o dan amodau UPLC-MS/MS tebyg. [13].

Mae'r dulliau a ddefnyddir ar gyfer ocsidiad PAs yn y llenyddiaeth ychydig yn wahanol i'n dull ni, ac felly, efallai na fydd modd cymharu'r canlyniadau'n uniongyrchol [14,24,25]. Mewn astudiaethau blaenorol, mae'r ocsidiad wedi'i berfformio mewn dŵr wedi'i asideiddio ag asid trifluoroacetig ar pH 3.5 er mwyn dynwared pH y gwin, a chafwyd yr ocsidiad gwirioneddol trwy droi'r sampl ym mhresenoldeb aer am sawl diwrnod [14,24, 25]. Fe wnaethom ddefnyddio ocsidiad alcalïaidd trwy glustogi carbonad ar pH 10 am awr yn unig.

Roedd y rhan fwyaf o'r echdynion planhigion yn cynnwys PAs gyda PC a PDsubunits, a dim ond mewn dau sampl, gellid ystyried y PAs bron yn PD yn bur. Y ddau sampl hyn oedd detholiadau Callisia gentlei varelegans a Pellaea ooata. Canfuwyd y PDs math-B yn y Callisia gentle var. Elegans dyfyniad cyn yr ocsideiddio; gweler, er enghraifft, yr oligomers PD bach yn Nhabl S5, ond ar ôl yr ocsidiad, ni chanfuwyd y PDs hyn mwyach gan MS. Ni wnaethom ganfod unrhyw signalau eraill a allai gyfateb i'r PDs wedi'u haddasu nac i'w cynhyrchion diraddio posibl. Fodd bynnag, roedd rhai o'r PAs addasedig yn dal i gael eu canfod gan UV ar 280 nm fel twmpath is ac oedi (Ffigur S3). Yn ddiddorol, cyn yr ocsidiad, canfuwyd PDs trimerig math A yn y dyfyniad data Pellaea, ac ar ôl yr ocsidiad, roedd y signalau hyn yn dal i fod yn bresennol, ond roedd eu dwyster yn sylweddol is

gan MS ac, yn ogystal, canfuwyd gwerthoedd m/z sy'n cyfateb i ffurfio cysylltiadau math A ychwanegol mewn trimwyr PD yn yr un modd â PCs math A (Tabl S6). Gallai hyn ddangos, yn ogystal ag adweithiau rhyngfoleciwlaidd a welwyd ar gyfer PDs homo-math a heterogenaidd, y gallai'r PDs math-A hefyd gael adweithiau mewnfoleciwlaidd tebyg a ganfuwyd ar gyfer cyfrifiaduron math A.

2.6. PAs Galloulated mewn Echdynion Planhigion a'u Haddasiadau Oherwydd yr Ocsidiad Alcalïaidd

Roedd rhai o'r planhigion yn cynnwys PAs galoylated. Cadarnhawyd presenoldeb cyfrifiaduron personol, PDs, a PC/PDs mewn echdynion planhigion gan eu patrymau darnio nodweddiadol. Yn gyffredinol, digwyddodd darnio PAs gallovlated mewn dadansoddiad MS yn yr un modd trwy fecanweithiau RDA., HRF, a QM fel y trafodwyd uchod [31-33]. Er enghraifft, mae'r llwybr darnio nodweddiadol a data MS/MS o dimer PC galoylated yn y darn dail o Ruprechtia salicifolia yn cael eu dangos a'u trafod yn fanwl (Ffigur 11). Dim ond dangosol yw lleoliad y grŵp galloyl, a gellid ei gysylltu ag unrhyw grŵp hydrocsyl rhydd arall yn yr uned derfynell. Yr ïon yn m/z603 yw'r cynhyrchiad HRF. Roedd yr ïonau ar m/z 287 a 441 yn cyfateb i holltiad QM. Yn ogystal, canfuwyd holltiad y grŵp galloyl gan arwain at yr ïon sy'n cyfateb i PC dimer yn m/z577 a'r darniad RDA dilynol ag ïon yn m/z425 a holltiad dŵr pellach gydag ïon yn m/z 407. Cynhyrchodd yr HRF o m/z 577 yr ïon darn ar m/z 451. Yn ogystal, canfuwyd ïonau darnau bach ar m/z 109,123, a 125, sy'n cyfateb i'r modrwyau aromatig. Gallai'r PAs galoylated gynnwys sawl grŵp galoyl yn eu strwythurau (Tabl S7).

Roedd y gwahanol PAs galoylated yn ymddwyn yn wahanol yn ystod yr ocsidiad awyr o dan amodau alcalïaidd. Roedd cyfrifiaduron personol wedi'u galoyleiddio braidd yn sefydlog ac yn ymateb yn yr un modd i gyfrifiaduron personol heb eu galw. Er enghraifft, ni chanfuwyd unrhyw newidiadau nodedig ar gyfer y cyfrifiaduron personol â galoyl ag un grŵp galloyl yn eu strwythurau yn y darn dail ocsidiedig o Nepenthes maxima (Tabl S7). Fodd bynnag, rhaid nodi bod dwyster yr ïonau ar gyfer y cyfrifiaduron â galoylated gyda dau neu fwy o grwpiau galloyl yn is yn y dyfyniad ocsidiedig o Nepenthes maxima ac, er enghraifft, nid oedd y pentamers PC galoylated gyda nifer o grwpiau gali bellach i'w canfod (Tabl S7). Mae'r gwerthoedd cyfanrif m/z ar gyfer rhai cyfrifiaduron personol galoylaidd yn debyg i'r gwerthoedd m/z ar gyfer PC/PDs ac, felly, mae angen yr MS cydraniad uchel iawn. Er enghraifft, mae m/z 881 yn cyfateb i PA trimerig sy'n cynnwys dau gyfrifiadur personol ac un uned PD (C4sH3; O19, mcalculated 882.20074) ac i dimer PC galoylated sydd â dau grŵp galoyl (C44H34O20, wedi'i gyfrifo, 882.16435). megis yn y dyfyniad dail ocsidiedig o Coccoloba uvifera, troswyd cyfrifiaduron galloylated i PCs galoylated math A oherwydd ocsideiddio, er bod y PAs galoylated yn y dyfyniad cychwynnol yn ymddangos yn debyg i'r rhai yn Nepenthes maxima. Er enghraifft, roedd y dimer PC a ddyrannwyd ag un galloylgroup ac yn arddangos ïon m/z 729 (Tabl S7) yn sefydlog yn ystod yr ocsidiad alcalïaidd yn echdyniad dail Nepenthes maxima ond wedi'i addasu'n rhannol yn echdyniad dail Coccoloba ugifera gan arddangos ïonau ar m. /z 727 a 729. Roedd yr ïon blaenorol yn cyfateb i PCdimer math A wedi'i galoyleiddio (m/z727.13148, C37H2O16)a dangosodd ddarnau nodweddiadol MS/MS yn cefnogi'r cysylltiad math A:m/z601(cynnyrch HF m/z 727),575(PCdimer math A), 557 (holltiad dŵr o m/z575),449 (HRF o m/z575, gweler Ffigur 4),423(RDA o m/z 575, gweler Ffigur 4),285 (QM o m/z575, gweler Ffigur 4), 169 (asid galig),125 (gweler Ffigur 11)a 109 (gweler Ffigur 11). Un rheswm posibl dros y gwahaniaethau hyn mewn PAs tebyg rhwng echdynion planhigion yw'r cyfansoddion eraill sy'n bresennol yn y darnau ac sy'n effeithio ar adweithiau PAs.

Roedd cymysgeddau PC/PD wedi'u galloylated a PDs yn adweithiol ac wedi'u haddasu'n debyg i'r cymysgeddau PC/PD nongalloylated a PDs. Ar ôl ocsideiddio, ni chanfuwyd y PAs hyn gan MS er eu bod yn dal i fod yn weladwy ar UV ar 280 nm. Ni wnaethom ganfod unrhyw signalau eraill a allai gyfateb i'r PAs diwygiedig hyn nac i'w cynhyrchion diraddio posibl. Mewn un sampl, sef mewn dail Acacia karroo, ni chanfuwyd y PDs wedi'u haddasu â galoylated a nongalloylated gan UV ar 280 nm ychwaith.

Yn ein hastudiaeth flaenorol [13], lle dadansoddwyd PAs mewn darnau nad ydynt yn ocsidiedig ac ocsidiedig trwy ddulliau monitro adwaith dethol, gwnaethom sylwi bod twmpath galloyl clir wedi'i ganfod gyda'r dull MS / MS penodol galloyl yn y samplau ocsidiedig, ond mae'r siâp o'r twmpath wedi newid a symud yn unol â hynny i'r twmpath a welwyd yn y cromatogram UV. Roedd y PAs gallovlated gwreiddiol wedi'u haddasu mewn ffordd y gellid dal i ganfod y galloylgroup gyda'r dull monitro adwaith a ddewiswyd [13]. Mae astudiaethau blaenorol ar (-)-epigallocatechin gallate a (-)-epigallocatechin wedi dangos mai'r cylch B trihydroxyphenyl yw'r prif safle gweithredu ar gyfer ocsideiddio ac nad oes unrhyw gynhyrchion canfyddadwy yn deillio o ocsidiad y moiety galloyl [42]. Fodd bynnag, roedd yr amodau adwaith a ddefnyddiwyd a'r cynhyrchion ocsideiddio a gafwyd yn weddol wahanol o gymharu â'n hastudiaeth gan fod yr ocsidiad wedi'i berfformio gyda radicalau perocsyl a gynhyrchwyd gan thermolysis y cychwynnwr azo 2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile) [42].

Yn ogystal â PAs galoylated, mae dau sampl, sef Cephalotaxus harringtomia subsp. roedd yn ymddangos bod taflenni drupaceous a dail Laurus nobilis yn cynnwys cyfrifiaduron personol glycosylaidd gydag un uned siwgr ynghlwm wrth un strwythur PC. Sylwyd bod rhai o'r cyfrifiaduron math B glycosylaidd hyn yn trosi i gyfrifiaduron math A glycosylaidd yn ystod yr ocsidiad alcalïaidd heb holltiad yr uned siwgr. Yn ogystal, canfuwyd ffurfio cysylltiadau ether ychwanegol â PCs math A.

3. Defnyddiau a Dulliau

Perfformiwyd casglu deunyddiau planhigion, eu prosesu, ac echdynnu, yn ogystal ag ocsidiad ar pH 1{{10}}, fel yr adroddwyd yn flaenorol [13]. Roedd yr astudiaeth gychwynnol yn cynnwys 102 sampl, a dadansoddwyd cyfanswm o 55 sampl arall gennym (Tabl S8). Ar gyfer yr ocsidiad erial, cafodd 20μLof pob echdyniad ei ocsideiddio gyda 18{4{0}}uL o pH 1{{60}}buffer am 1 h ar dymheredd ystafell. Stopiwyd ocsidiad trwy ychwanegu 100 ul o 0.6 y cant o HCOOH dyfrllyd. Yn ogystal, ychwanegwyd 280 μLof dŵr at 20 μL o'r rhai anocsidiedig cychwynnol cyn y dadansoddiad er mwyn cael y cyfaint terfynol o 300 uL ar gyfer samplau nad ydynt yn ocsidiedig ac ocsidiedig. Perfformiwyd y dadansoddiad sbectrometrig màs cydraniad uchel gan UPLC-DAD-ESI-QOrbitrap-MS/MS. Roedd yr offeryn yn cynnwys system Acquity UPLC (Waters Corp., Milford, MA, UDA) ynghyd â sbectromedr màs pedwarpol-Orbitrap (QExactiveTM, Thermo Fisher Scientific GmbH, Bremen, yr Almaen). Y golofn a ddefnyddiwyd oedd colofn Acquity UPLC BEH Phenyl (2.1 × 100 mm, 1.7 um, Waters Corp., Wexford, Iwerddon). Yr eluents oedd A{= acetonitrile a B=0.1 y cant HCOOH. Defnyddiwyd cyfradd llif o 0.5 mLmin-1, ac roedd y proffil elution fel a ganlyn:0-0. 5 mun,0.1 y cant A mewn B(isocrataidd);0.{39}} mun,0.1-30 y cant A yn B(graddiant llinol);5-6munud,30 y cant {{44} } y cant A mewn B (graddiant llinol);6-6.1 mun, 35-90 y cant A yn B (graddiant llinol); 6.1-9.5 mun, golchi colofn ac ail-gydbwyso. Cyfaint y pigiad oedd 5μL. Cofnodwyd y data UV (λ=190-500nm) ac MS drwy gydol y dadansoddiad. Defnyddiwyd ïoneiddiad negyddol mewn ffynhonnell ESI wedi'i gynhesu gyda foltedd chwistrellu o -3.0 kV, cyfradd llif nwy gwain (N2) o 60, cyfradd llif nwy ategol (N2) o 20, cyfradd llif nwy ysgubo o 0, y tymheredd capilari o plws 380 gradd ac yn-ffynhonnell daduniad a achosir gan wrthdrawiad (CID) o 30 eV. Ar gyfer MS sgan llawn, amrediad màs yr orbitrap oedd m/z150-2250, cydraniad 35,000, a'r rheolaeth ennill awtomatig3×10*. Ar gyfer dadansoddiadau MS/MS, sef dd-MS2(TopN), y paramedrau oedd y canlynol: TopN 3; yr egni gwrthdrawiad normaleiddio grisiog 20, 50, ac 80 eV, y datrysiad 17,500, a'r rheolaeth ennill awtomatig 1 × 105. Perfformiwyd y graddnodi gan Pierce ESI Negative Ion Calibration Solution (Thermo Fisher Scentific Inc., Waltham, MA, UDA). Proseswyd y data gyda meddalwedd Porwr Llafar Thermo Xcalibur (Fersiwn 3.0.63, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, UDA). Wrth i'r samplau ocsidiedig gael eu cael gan ddefnyddio byffer sodiwm carbonad (pH 10), ffurfiodd sodiwm ïonau clwstwr ag asid fformig yn ystod dadansoddiad UHPLC-MS/MS. Felly, ar ddechrau pob cromatogram ïon cyfanswm o samplau ocsidiedig, canfuwyd uchafbwynt cryf o glystyrau fformat sodiwm (Tabl S9). Roedd y patrwm yn hawdd ei ganfod ac nid oedd yn effeithio ar y dadansoddiad o CP. Cyflwynir ïonau darn MS/MS o oligomers PA bach yn Nhabl S10.

4. Casgliadau

Yn yr astudiaeth hon, dadansoddwyd cyfansoddiad PA o 55 o echdynion planhigion cyn ac ar ôl ocsidiad alcalïaidd trwy gydraniad uchel iawn UHPLC-MS/MS (Tabl S8). Roedd y strwythurau PA naturiol yn cynnwys cyfrifiaduron personol math A a B, PDs, a chymysgeddau PC/PD yn ogystal â rhai a neilltuwyd. Roedd y cyfansoddiadau PA yn gymhleth, ac roedd angen yr MS cydraniad uchel iawn i fesur yr union fasau a fformiwlâu moleciwlaidd cyfatebol PAs amrywiol. Roedd cyfrifiaduron math B mewn gwahanol ddarnau o blanhigion braidd yn sefydlog ac ni ddangoswyd unrhyw addasiad neu fân addasiadau oherwydd yr ocsidiad alcalïaidd. Ar gyfer rhai samplau, gwnaethom ganfod adweithiau intramoleciwlaidd cyfrifiaduron personol sy'n cynhyrchu cysylltiadau ether math A. Roedd cyfrifiaduron math A hefyd braidd yn sefydlog heb unrhyw addasiadau neu fân addasiadau, ond, mewn rhai planhigion, canfuwyd ffurfio cysylltiadau ether ychwanegol. Roedd echdynion planhigion yn cynnwys unedau PD mewn PAs (naill ai PDs pur neu gymysgeddau PC/PD) yn fwy adweithiol. Ar ôl ocsidiad alcalïaidd, ni chanfuwyd y PAs hyn na'u cynhyrchion ocsideiddio gan MS er bod math gwahanol a/neu dwmpath PA oedi yn dal i gael ei ganfod gan UV ar 280nm. Mae'n debyg bod yr adweithiau rhyngfoleciwlaidd rhwng PA wedi addasu'r PAs hyn fel na chawsant eu canfod o dan amodau safonol ESI-MS. Mae astudiaethau blaenorol wedi dangos na ellir astudio'r PAs diwygiedig hyn naill ai trwy ddulliau diraddio. Felly, byddai angen dull dadansoddol newydd ar gyfer eu hadnabod a'u nodweddu. Roedd PAs galloylated yn gymharol sefydlog o dan ocsidiad alcalïaidd os oeddent yn seiliedig ar PC, ond ffurfiwyd cysylltiadau ether ychwanegol i gefnogi trosi PAs math-B galoylated i PAs math A galoylated. Roedd PAs yn cynnwys dau neu fwy o grwpiau galloyl yn fwy adweithiol na'r rhai oedd yn cynnwys un grŵp yn unig. Roedd cymysgeddau PC/PD wedi'u gallovlated a PDs yn fwy adweithiol ac yn adweithio'n debyg i rai heb eu galw. Fodd bynnag, rhaid nodi nad oedd yr adweithiau rhyngfoleciwlaidd a rhyngfoleciwlaidd yn waharddol, a gallai'r adweithiau hyn ddigwydd ar yr un pryd. Yn ogystal, effeithiodd y matrics planhigion a chyfansoddion eraill a oedd yn bresennol ar y rhyngweithiadau hyn.