Priodweddau Cemegol Mannoglucan O Cistanche Deserticola

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

1. Deunyddiau

Defnyddiwyd pastau llafar ar gyfer ceffylau gan ddau wneuthurwr gwahanol yn cynnwys 10 mg/g (A) neu 20 mg/g (B) o ivermectin, yn y drefn honno. Perfformiwyd y assay meintiol ar gyfer ivermectin ac roedd y cynnwys yn 104.4-107.7 y cant o'r crynodiad datganedig.

2. prawf diddymu

Perfformiwyd y prawf gyda Ph. Eur. cyfarpar padlo (Prawf Pharma, Heinberg, yr Almaen), ar gynhyrfiadau o 75 rpm neu 50 rpm, ar 37 -0.5 C. Sodiwm lauryl sulfate (BDH Chemicals, Poole, Lloegr) 0.5 y cant (w /v) defnyddiwyd hydoddiant dyfrllyd fel cyfrwng hydoddi (900 ml). Rhoddwyd y past (4 g o A neu 2 g B) yn y llong gyda chwistrell gyda chaniwla (A) neu ollwng y sampl ar wyneb y cyfrwng diddymu (B). Ar ôl y cyfnodau amser (15, 30, 45, 60 munud, a 2 h), tynnwyd sampl o'r cyfrwng diddymu (2 ml), ei hidlo trwy hidlydd gwydr, a'i ddadansoddi.

3. Dadansoddiad HPLC

Perfformiwyd pennu ivermectin gyda dull HPLC wedi'i addasu fel y disgrifir yn Ph. Eur. Gwanhawyd yr atebion a ddadansoddwyd â methanol (1: 10). Roedd y system HPLC yn cynnwys colofn octadecyl (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), integreiddiwr D-12500 A, synhwyrydd UV-Vis L{{7} }, pwmp L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, yr Almaen). Defnyddiwyd cymysgedd o acetonitrile: methanol: dŵr (64: 24: 16) fel y cyfnod symudol gyda chyfradd llif o 1.9 ml/munud. Cyfaint y sampl wedi'i chwistrellu oedd 20 ml a pherfformiwyd canfod ar 254 nm.

4. Astudiaethau hydoddedd

Ysgwyd mynediad o'r sylwedd mewn fflasgiau gwydr wedi'u cau'n dynn gyda thoddydd addas (Tabl 1) am 20 h ar 37 0.1 C. Cafodd yr ataliadau eu hidlo a dadansoddwyd yr hidlydd, ar ôl ei wanhau mewn methanol, gan HPLC .

5. Sefydlogrwydd mewn hydoddiant asidig

Toddiannau ivermectin yn HCl {{0}}.1 M eu storio mewn ffiolau gwydr caeedig dynn ar 20 C a 37 C. Cromatogramau o'r hydoddiannau eu cofnodi ar t ¼ 0 ac ar ôl 1, 2 a 6 h. Cyfrifwyd arwynebedd yr ivermectin (amser cadw 10.5 munud) a brigau ychwanegol.

Cyfeiriadau

Canllawiau FDA ar gyfer diwydiant: Ffurflenni dos semisolid ansterilaidd SUPAC-SS. Newidiadau cynyddol ac ôl-gymeradwyo: cemeg, gweithgynhyrchu a rheolaethau; profion rhyddhau in vitro a dogfennaeth biogywerthedd in vivo. Mai 1997. Canllawiau FIP ar gyfer profi hydoddi cynhyrchion llafar solet (1997) Hydoddol. Technol. 4:5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Canllawiau FIP/AAPS i ddiddymu/profion rhyddhau in vitro o ffurflenni dos newydd/arbennig, AAPS PharmSciTech, 4 (1) erthygl 7 Canolfan Ymchwil Fodern ar gyfer Meddygaeth Tsieineaidd Draddodiadol, Ysgol o Wyddorau Fferyllol, Canolfan Gwyddor Iechyd Prifysgol Peking, Beijing, Tsieina

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Derbyniwyd Chwefror 13, 2004, derbyniwyd Ebrill 4, 2004, yr Athro Dr Pengfei Tu, Canolfan Ymchwil Modern ar gyfer Meddygaeth Tsieineaidd Traddodiadol, Ysgol Gwyddorau Fferyllol, Canolfan Gwyddor Iechyd Prifysgol Peking, Rhif 38, Xueyuan Road , Ardal Haidian, Beijing 100083, Tsieina Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59:815–816 (2004)

Mannoglucan newydd oCistanche deserticolao Tsieina yn cael ei nodweddu. Mae'r cyfansoddyn yn gyfrifol am ysgogiad ysgafn o ymlediad lymffosyt T a B a achosir gan mitogen.

Cistanche deserticolaMae YC Ma yn holoparasite sy'n tyfu ar wreiddiau'r planhigyn dicotyledonous Haloxylon ammodendron Bunge sydd wedi'i ddosbarthu'n eang yng ngogledd-orllewin Tsieina. Gan ei fod yn donig pwysig mewn meddygaeth ddwyreiniol, mae llawer o gydrannau gweithredol a gweithgareddau ffarmacolegol wedi'u hawlio (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Gallai'r priodweddau hyn fod yn gysylltiedig â rhai o gydrannau polysacaridCistanchesydd heb eu hymchwilio eto. Mae polysacaridau pectig mitogenig a polysacaridau niwtral wedi'u hynysu a'u nodweddu oCistanche deserticolao Fongolia (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Yma rydym yn adrodd ar briodweddau cemegol mannogglucan newydd oCistanche deserticolao Tsieina, sy'n gyfrifol am ysgogiad ysgafn o ymlediad lymffosyt T a B a achosir gan mitogen. Ar ôl y coesau oCistanche deserticolaEchdynnwyd YC Ma gyda 95 y cant ethanol, defnyddiwyd dŵr distyll oer i echdynnu'r gweddillion. Cafodd y detholiad dŵr oer ei waddodi ag EtOH, cafodd y protein ei dynnu a'i ddialyzed, gan gael y CCDP polysacarid crai. Cafodd y polysacarid crai ei ffracsiynu ar golofn DEAE a cholofn Sephadex G-150 i fforddio polysacarid di-brotein (CDP-6), a oedd yn cynnwys glwcos (89.2 y cant) a mannose (1{2) }.4 y cant ), ac o'r hyn amcangyfrifwyd mai cyfartaledd Mr oedd 6.8 -104. Roedd y CDP polysacarid-6 yn dangos [a 20 D 42 (c 1, H2O). Pennwyd cyfluniadau absoliwt y siwgrau gan GC o TMS (– )-2-glycosidau biwtyl. Cafodd CDP-6 ei fethyleiddio (Needs et al. 1993), ei hydroleiddio, ei drawsnewid i'r asetadau alditol, a'i ddadansoddi gan GC a GC-MS (Tabl). Mae'r canlyniad hwn ynghyd â data cymarebau molar o ddadansoddiad methylation yn awgrymu bod gan CDP-6 yn bennaf 1,6-Glcp cysylltiedig ac asgwrn cefn 1,6- wedi'i gysylltu i raddau llai wedi'i ganghennu ar O{{ 24 }} o mann. Cadarnhaodd dadansoddiad methylation dau bolymer (CDP-6-1, CDP-6–2) o hydrolysis rhannol fod gan CDP-6 asgwrn cefn sy'n cynnwys 1,6-gweddillion glwcosyl cysylltiedig a 1,6-gweddillion mannosyl cysylltiedig, sy'n cael eu disodli yn O-3 mannose gan ganghennau sy'n cynnwys y derfynell, 1,6- gweddillion glwcosyl cysylltiedig, a 1,3,{{38} }gweddillion mannosyl cysylltiedig. Yn ôl cymarebau molar a'r llenyddiaeth (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), dangosodd sbectrwm 13C NMR o CDP-6 signalau oherwydd carbonau anomerig yr a- d-Glcp (C{{45) }} ar 98.4 ppm), bd-Map (C-1 ar 104.3–104.9 ppm) ac ad-Map (C-1 am 100.0 ppm). Roedd sbectrwm 1 H NMR o CDP-6-2 yn D2O yn dangos signalau proton a oedd yn cyfateb i'r ad-Glcp (H-1 ar 4.94–4.95 ppm) ac a-d-Map (H-1 yn 4.96–5.00 ppm). Roedd y sbectrwm 13C NMR o CDP-6-2 yn D2O yn dangos signalau proton yn cyfateb i'r aD-Glcp (C-1 ar 98.6 ppm) ac ad-Map (C-1 am 98.4ppm). Dywedir bod gan fannoglucans asgwrn cefn 1,4-glwcopyrannan cysylltiedig ac 1,{4-asgwrn cefn mannopyrannan cysylltiedig (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). Mae gan CDP-6 rai nodweddion adeileddol gwahanol gan ei fod wedi cysylltu Glcp a b-1,6-asgwrn cefn Map, ac fe'i hamnewidir gan ganghennau mannogliwcan (Ffig.). Er mwyn ymchwilio i'r defnydd oCistanche deserticolamewn meddygaeth werin, gwerthuswyd effaith CDP-6 ar y systemau celloedd T a B. Canfuwyd ei fod yn ysgogi lledaeniad lymffocytau T a B a achosir gan mitogen yn ysgafn.

Arbrofol

1. Gweithdrefnau cyffredinol

Mesurwyd cylchdro optegol gyda pholarimedr awtomatig W{0}}S. Pennwyd sbectra IR ar sbectromedr Perkin-Elmer 599B. Perfformiwyd dadansoddiad GC ar offeryn Agilent HP6890N, gyda synhwyrydd FID. Perfformiwyd GC-MS ar offeryn Finnigan Trace GC-MS. Amcangyfrifwyd homogenedd a Mr o CDP-6 o gromlin graddnodi cyfaint elution dextrans safonol, a berfformiwyd ar

teclyn cyfres Agilent 1100 gyda cholofn Shodex KS-805.1 H NMR a sbectra 13C NMR eu recordio gydag offeryn INOVA{-500. Dadansoddwyd cynnwys protein yn ôl dull Bradford (Andre et al. 1975). Dadansoddwyd monosacaridau o ran eu alditol asetad ar ôl iddynt gael eu hydrolysu (2 M TFA, 2 h, 110 C), wedi'u lleihau a'u asetio. Dadansoddwyd yr hydrolysadau gan ddefnyddio TLC ar blât gel silica sy'n cynnwys 5 y cant o sodiwm dihydrogen ffosffad yn BuOH-EtOAc-isopropyl alcohol-HOAC-–H2Opyridine (3.5: 10: 6: 3.5 : 3 : 3) a chanfuwyd siwgrau trwy chwistrellu â orcinol -H2SO4. Dadansoddwyd yr asetadau alditol canlyniadol gan GLC gan ddefnyddio colofn capilari HP{-5 (30 m 0.32 mm). Cafodd CDP-6 ei methylated gan y dull Ciucanu, ac yna hydrolysis, a chafodd ei ddadansoddi fel asetadau alditol rhannol fethyledig gan GC-MS. Ar ôl hydrolysis rhannol, cafodd y cynhyrchion eu dialyzed a'u gwahanu, gan gael dau bolymer, CDP{{-6-1 a CDP-6–2.

2. deunydd planhigion

Casglwyd y planhigyn o Dalaith Inner Mongolia yn Tsieina ym mis Awst 2001 ac fe'i nodwyd gan Hu-Biao Chen, Adran Meddygaeth Naturiol, Ysgol Gwyddorau Fferyllol, Canolfan Gwyddor Iechyd Prifysgol Peking. Cafodd sbesimen taleb [E-1-(9)] o'r planhigyn hwn ei adneuo yn Ysgol Gwyddorau Fferyllol, Prifysgol Peking. 3. Echdynnu, ynysu, a phuro CDP polysacarid-6 CoesynCistanche deserticolaEchdynnwyd YC Ma (1500 g) gyda 95 y cant ethanol (6 L) o dan adlif. Cafodd y gweddillion ethanol-anhydawdd sych eu macerated dair gwaith gyda dŵr distyll oer fesul 12 h. Cafodd y echdyniad dŵr oer ei hidlo a'r hidlydd wedi'i allgyrchu. Ar ôl dyddodiad gyda phedair cyfrol o EtOH (gan droi a sefyll am 24 h ar 4 C), cafwyd y cynnyrch gwaddod (35.5 g). Cafodd y protein yn y gwaddod ei dynnu trwy ddull Savage. Ar ôl diddymu mewn dŵr distyll, cafodd y gweddillion (25.5 g) eu dialyzed a'u lyophilized (cynnyrch: 10.6 g). Cafodd y polysacarid crai (8 g) ei hydoddi mewn dŵr distyll (100 mL, 8 y cant w / v) a'i wahanu gan ddefnyddio colofn DEAE (70 5 cm, y graddiant o 0-2 M NaCl, fesul 1.5 L). Cafwyd ffracsiwn heb ddŵr (600 mg). Cafodd sampl (250 mg) ei buro gan gromatograffaeth gel-treiddiad colofn ar golofn Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 mL, 5 mL fesul ffracsiwn). Cafodd ffracsiynau o CDP-6 (1500–1600 ml) eu cronni, eu dialyzed, a'u rhewi-sychu. Ar ôl cael ei dadhalwyno gan Sephadex G-25 (60 1 cm). Cafodd CDP-6 (110 mg) ei sicrhau a'i bennu fel un uchafbwynt gan HPSGC.

Cydnabyddiaeth:Mae'r awdur yn diolch i Dr. Baomei Shao a'r Athro Xiaoming Gao, Ysgol Gwyddorau Meddygol Sylfaenol, Canolfan Gwyddor Iechyd Prifysgol Peking, am fesur gweithgaredd imiwnofodiwleiddio CDP-6.