Mae Detholiad Cistanche Deserticola yn Cynyddu Ffurfiant Esgyrn mewn Osteoblasts
Mar 05, 2022
Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com
Te-Mao Lia, Hsin-Chih Huangb, Chen-Ming Suc, Tin-Yun Hoa, Chi-Ming Wua, Wen-Chi Chend, Yi-Chin Fonga,ea Chih-Hsin Tangf,c
Haniaethol
Amcanion:Fe wnaethom ymchwilio i effaithCistanche deserticola Ma. (CD) ar ffurfiant esgyrn gan osteoblastau diwylliedig.DulliauDefnyddiwyd y prawf ffurfio nodule wedi'i fwyneiddio i archwilio effeithiau in-vitro CD ar ffurfiant esgyrn. Dadansoddwyd mynegiant mRNA ffosffatase alcalïaidd (ALP), proteinau morffogenetig esgyrn (BMP)-2, a mynegiant mRNA osteopontin (OPN) gan adwaith cadwyn polymeras amser real meintiol. Ymchwiliwyd i fecanwaith gweithredu detholiad CD gan ddefnyddio blotio Gorllewinol. Aseswyd effaith gwrth-osteoporotic in-vivo dyfyniad CD mewn llygod ofariectomized.Canfyddiadau allweddolNi chafodd dyfyniad CD unrhyw effaith ar amlhau, mudo neu wella clwyfau osteoblastau diwylliedig, ond cynyddodd ALP, BMP-2, ac OPN mRNA a mwyneiddiad esgyrn. Roedd atalyddion protein kinase a weithredir gan mitogen (MAPK) neu ffactor niwclear (NF) -kB yn lleihau ffurfiant esgyrn a achosir gan echdynnu CD a mynegiant ALP, BMP{4}}, a OPN. Fodd bynnag, nid oedd dyfyniad CD yn effeithio ar osteoclastogenesis. Yn ogystal, roedd detholiad CD yn atal colled esgyrn a achosir gan ofariectomi in vivo.CasgliadauGall CD fod yn gyfrwng ffurfio esgyrn newydd ar gyfer trin osteoporosis.
Rhagymadrodd
Mae asgwrn yn feinwe gymhleth sy'n cynnwys sawl math o gelloedd sy'n mynd trwy broses barhaus o adnewyddu ac atgyweirio a elwir yn 'ailfodelu esgyrn'. Dau brif fath o gelloedd sy'n gyfrifol am ailfodelu esgyrn yw osteoclastau, sy'n amsugno asgwrn, ac osteoblastau, sy'n ffurfio asgwrn newydd. Mae ailfodelu esgyrn yn cael ei reoleiddio gan nifer o hormonau systemig (ee hormon parathyroid, 1, 25-hydroxyvitamin D3, hormonau rhyw, a calcitonin) a ffactorau lleol (ee ocsid nitrig, prostaglandinau, ffactorau twf, a cytocinau).[1]
Mae osteoporosis yn arwain at achosion lle mae atsugniad a ffurfiant esgyrn yn anghydlynol a bod esgyrn sy'n torri i lawr yn torri i lawr yn uwch na'r esgyrn a adeiladir.[2] Mae triniaethau presennol ar gyfer osteoporosis yn cynnwys bisffosffonadau, calcitonin, ac estrogen, sef atalyddion atsugniad esgyrn sy'n cynnal màs esgyrn trwy atal gweithgaredd osteoclast.[3] Fodd bynnag, mae effaith y cyffuriau hyn o ran cynyddu neu adennill màs esgyrn yn gymharol fach, yn sicr dim mwy na 2 y cant y flwyddyn.[3] Mae angen, felly, am gyfryngau adeiladu esgyrn, megis teriparatide, sy'n ysgogi ffurfio esgyrn newydd ac yn cywiro'r newid mewn micropensaernïaeth trabeciwlar sy'n nodweddiadol o osteoporosis sefydledig.[4,5] Oherwydd bod ffurfio esgyrn newydd yn bennaf yn swyddogaeth o gall yr osteoblast, cyfryngau sy'n gweithredu naill ai trwy gynyddu ymlediad celloedd y llinach osteoblastig neu ysgogi gwahaniaethu'r osteoblastau, wella ffurfiant esgyrn.[5,6]
Er bod mecanweithiau osteoporosis yn parhau i fod yn aneglur, mae'n debygol eu bod yn gysylltiedig â'r gostyngiad yn argaeledd neu effeithiau ffactorau twf esgyrn, megis proteinau morffogenetig esgyrn (BMPs).[7] Cafodd BMPs, sy'n gysylltiedig yn strwythurol â'r uwch-deulu ffactor twf-b sy'n trawsffurfio, eu nodi'n wreiddiol gan eu gallu i gymell esgyrn ectopig i ffurfio mewn cnofilod.[8] Mae BMPs yn chwarae rhan bwysig mewn ffurfio esgyrn a gwahaniaethu celloedd esgyrn trwy ysgogi gweithgaredd ffosffatase alcalïaidd (ALP) yn ogystal â synthesis proteoglycan, colagen, ac osteopontin (OPN).[9] Canfu astudiaeth ddiweddar gysylltiad rhwng osteoporosis a polymorphisms penodol yn y genynnau BMP, ALP, ac OPN, gan awgrymu eu bod yn gysylltiedig â datblygiad osteoporosis.[10]
Cistanche deserticola Ma.Mae (Orobanchaceae; wedi'i dalfyrru fel CD) yn berlysieuyn brodorol yn Tsieina ac fe'i defnyddir yn helaeth mewn meddygaeth draddodiadol fel cyfrwng therapiwtig oherwydd ei briodweddau tawelyddol, poenliniarol ac imiwn-ysgogol.[11] Mae astudiaethau ffarmacolegol modern wedi dangos y gall darnau CD ysgogi imiwnedd, [12] chwilota radicalau rhydd[13], a chynyddu gweithgaredd superoxide dismutase.[14] Mae gan gyfryngau gwrthlidiol a gwrthocsidiol y potensial i drin osteoporosis trwy gynyddu ffurfiant esgyrn a/neu atal atsugniad esgyrn.[15,16] Fodd bynnag, nid yw effaith CD ar weithrediad celloedd esgyrn wedi'i phennu eto. Yma, rydym yn adrodd nad oedd dyfyniad CD yn effeithio ar amlhau, mudo, neu weithgaredd iachau clwyfau osteoblastau diwylliedig, ond wedi cynyddu ALP, BMP-2, a mynegiant OPN a mwyneiddiad esgyrn. Yn ogystal, rydym yn dangos y gallai'r llwybrau signalau kinase protein-activated mitogen (MAPK) a ffactor niwclear (NF) -kB fod yn rhan o'r cynnydd trwy gyfrwng CD mewn mynegiant genynnau a mwyneiddiad esgyrn. Mewn cyferbyniad, nid oedd y dyfyniad CD yn atal osteoclastogenesis in vitro. Yn nodedig, roedd trin llygod â detholiad CD yn atal colled esgyrn a achosir gan ofariectomi in vivo. Mae ein data, felly, yn awgrymu y gellir defnyddio CD i ysgogi ffurfio esgyrn ar gyfer trin osteoporosis.
Cistanche deserticola
Defnyddiau a Dulliau
Dyfyniad a deunyddiau Cistanche deserticola
Prynwyd dyfyniad CD gan Chuang Song-Zong Pharmaceutical Company (Kaohsiung, Taiwan). Dilynwyd echdynnu ac ynysu CD fel y disgrifiwyd yn flaenorol (ar sail data sbectrol maent wedi nodi'r cyfansoddiad cemegol gan gynnwys beta-sitosterol, daucosterol, asid succinic, triacontanol, acteoside, betaine, a polysacarid).[17] Prynwyd gwrthgyrff polyclonaidd cwningen sy'n benodol ar gyfer kinases p-allgellog a reoleiddir gan signal (ERK), ERK, p-p38, p38, pc-Mehefin N-terminal kinases (JNK), JNK, p-p65, a p65 gan Santa Cruz Biotechnology ( Santa Cruz, UDA). Prynwyd y pecyn osteocalcin ELISA gan Biosource Technology (Nivelles, Gwlad Belg). Cafwyd y telopeptidau C-terminal o'r pecyn ELISA colagen math-I gan Cross Laps (Herlev, Denmarc). Darparwyd y mutant p38 dominyddol-negyddol gan Dr. J. Han (Canolfan Feddygol De-Orllewinol, Dallas, UDA). Darparwyd y mutant dominyddol-negyddol JNK gan Dr. M. Karin (Prifysgol California, San Diego, UDA). Darparwyd y mutant dominyddol-negyddol ERK2 gan Dr. M. Cobb (Canolfan Feddygol De-Orllewinol). Cafwyd yr holl adweithyddion eraill gan Sigma-Aldrich (St Louis, UDA).
Diwylliant celloedd
Prynwyd y llinell gell murine osteoblast MC3T3-E1 oddi wrth American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, USA). Cafodd celloedd eu meithrin mewn 95 y cant o aer, 5 y cant CO2 ag a-MEM a ategwyd â 20 mm HEPES a serwm llo ffetws anweithredol 10 y cant, 2 mm-glutamin, penisilin (100 U/ml), a streptomycin (100 mg /ml).
Mesur ffurfiant nodule wedi'i fwyneiddio
Gwerthuswyd ffurfiant nodiwlau mwynol fel y disgrifiwyd.[18] Yn gryno, cafodd osteoblastau eu meithrin mewn cyfrwng sy'n cynnwys fitamin C (50 mg / ml) a b-glycerophosphate (10 mm) am bythefnos, a newidiwyd y cyfrwng bob tri diwrnod. Ar ôl deor gyda detholiad CD am 12 diwrnod, golchwyd celloedd ddwywaith gyda halwynog 20 mm â byffer Tris yn cynnwys
0.15 m NaCl (pH 7.4), wedi'i osod mewn oerfel iâ 75 y cant (v/v) ethanol am 30 munud, ac wedi'i awyrsychu. Penderfynwyd ar ddyddodiad calsiwm gan ddefnyddio staenio coch-S alizarin. Yn fyr, cafodd celloedd a matrics ethanol-sefydlog eu staenio am 1 h gyda 40 mm alizarin coch-S (pH 4.2) a'u rinsio'n helaeth â dŵr. Cafodd y staen rhwymedig ei osgoi â 10 y cant (w / v) cetylpyridinium clorid, a meintolwyd alizarin red-S yn y samplau trwy fesur amsugnedd ar 550 nm a'i gymharu â chromlin safonol. Mae un môl o alizarin red-S yn rhwymo tua dau fôl o galsiwm yn ddetholus.
Adwaith cadwyn polymeras meintiol amser real
Echdynnwyd cyfanswm RNA o osteoblastau gan ddefnyddio pecyn TRIzol (MDBio Inc., Taipei, Taiwan). Perfformiwyd trawsgrifiad o'r cefn gan ddefnyddio RNA cyfanswm o 2 mg a phremiwr oligo(dT).[19,20] Cyflawnwyd adwaith cadwyn polymeras amser real meintiol (qPCR) gan ddefnyddio Cymysgedd Meistr PCR un cam TaqMan® (Cymhwysol Biosystems, Carlsbad, UDA). Ychwanegwyd cyfanswm cDNA (100 ng fesul 25-ml adwaith) gyda paent preimio dilyniant-benodol a stilwyr Taqman®. Prynwyd yr holl breimwyr genynnau targed a chwiliwr yn fasnachol, gan gynnwys b-actin fel rheolaeth fewnol (Biosystemau Cymhwysol). Cynhaliwyd profion qPCR yn driphlyg ar system canfod dilyniant Ste-pOnePlus (Biosystemau Cymhwysol). Yr amodau beicio oedd 10-munud actifadu polymeras ar 95 gradd ac yna 40 cylch o 95 gradd am 15 s a 60 gradd am 60 s. Gosodwyd y trothwy uwchlaw'r cefndir rheoli nad yw'n dempled ac o fewn cyfnod llinol ymhelaethu genyn targed i gyfrifo'r rhif cylch y canfuwyd y trawsgrifiad (CT a ddynodwyd).
Dadansoddiad o blotiau gorllewinol
Paratowyd lysates celloedd fel y disgrifiwyd yn flaenorol.[21,22] Cafodd proteinau eu datrys gan SDS-PAGE a'u trosglwyddo i bilenni polyvinyl defluoride Immobilon (Millipore, Billerica, UDA). Cafodd y blotiau eu rhwystro gydag albwmin serwm buchol 4 y cant am 1 awr ar dymheredd yr ystafell ac yna eu harchwilio â gwrthgyrff gwrth-ddynol cwningen yn erbyn p-65, neu p-p65 (1: 1000) am 1 awr ar dymheredd ystafell. Ar ôl tri golchiad, deorwyd y blotiau â gwrthgorff eilaidd gwrth-gwningen asyn wedi'i gyfuno â peroxidase (1: 1000) am 1 h ar dymheredd ystafell. Delweddwyd y blotiau gan gemioleuedd gwell gan ddefnyddio ffilm X-OMAT LS (Eastman Kodak, Rochester, UDA).
Osteoporosis a achosir gan ofariectomi
Defnyddiwyd llygod ICR benywaidd, pedair wythnos oed, 22 ~ 28 g, ar gyfer yr astudiaeth hon. Roedd llygod yn cael eu hofariectomeiddio yn ddwyochrog o dan anesthesia trichloro-asetaldehyde (100 mg/kg) a llygod rheoli yn cael eu gweithredu â ffug (Sham) er mwyn cymharu. Mesurwyd dwysedd mwynau esgyrn a chynnwys mwynau esgyrn ar ôl rhoi crynodiadau amrywiol o ddarnau CD ar lafar bob dau ddiwrnod am bedair wythnos. Pennwyd cyfanswm dwysedd mwynau asgwrn y corff a chynnwys mwynau esgyrn gan amsugnwr pelydr-X ynni deuol (DEXA; XR-26; Norland, Fort Atkinson, UDA) gan ddefnyddio modd ar gyfer pynciau bach fel y disgrifiwyd yn flaenorol.[18, 23] Roedd pob protocol yn cydymffurfio â chanllawiau sefydliadol ac fe'u cymeradwywyd gan Bwyllgor Gofal Anifeiliaid Prifysgol Feddygol Tsieina.
Dadansoddiad ystadegol
Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol gan ddefnyddio Prism 4.01soft- ware. (GraphPad Software Inc., San Diego, UDA). Y gwerthoedd a roddir yw cymedr ± SEM. Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol rhwng dau sampl gan ddefnyddio prawf-t y Myfyriwr. Perfformiwyd cymariaethau ystadegol o fwy na dau grŵp gan ddefnyddio dadansoddiad un ffordd o amrywiant â phrawf posthoc Bonfer-Roni. Ym mhob achos, ystyriwyd P < 0.05="" yn="">
Dyfyniad Cistanche deserticola
Canlyniadau
Mae dyfyniad Cistanche deserticola yn cynyddu mwyneiddiad esgyrn gan osteoblastau
Nid oedd ychwanegu'r dyfyniad CD am 24 neu 48 h yn effeithio ar doreth o gelloedd osteoblast MC3T3-E1 llygoden mewn assay MTT (data heb ei ddangos). Gan fod gwahaniaethu osteoblast yn broses gymhleth sy'n cynnwys amlhau celloedd a mudo, fe wnaethom hefyd brofi gallu mudol celloedd MC3T3-E1 ar ôl triniaeth gyda detholiad CD. Gan ddefnyddio Transwell a phrofion gwella clwyfau, canfuom nad oedd dyfyniad CD yn effeithio ar ymfudiad osteoblast (data heb ei ddangos). Mae ffurfio nodiwlau wedi'u mwyneiddio yn un o farcwyr aeddfedu osteoblast. Dangosodd staenio coch Alizarin fod nodiwlau mwynol yn ffurfio pan gafodd osteoblastau eu meithrin am bythefnos mewn cyfrwng sy'n cynnwys fitamin C (50 mg/ml) a b-glyceroffosffad (10 mm), a chynyddwyd hyn mewn modd sy'n dibynnu ar grynodiad trwy ychwanegu o CD (Ffigur 1a). Felly, roedd detholiad CD yn achosi i osteoblastau diwylliedig ffurfio nodwlau esgyrn, ond nid eu lledaeniad neu ymfudiad. Fe wnaethom hefyd archwilio rôl dyfyniad CD mewn osteoclastogenesis a achosir gan RANKL ond ni chanfuwyd unrhyw effaith (data heb ei ddangos).
Mae dyfyniad Cistanche deserticola yn cynyddu ffosffatase alcalïaidd, protein morffogenetig esgyrn-2, a mynegiant osteopontin mewn osteoblastau diwylliedig
Mae osteoblastau gwahaniaethol yn arddangos gweithgaredd ALP uchel, sy'n cyfateb i lefelau uchel o fynegiant ensymau.[18] Canfuom fod triniaeth gyda detholiad CD am 72 h yn cynyddu gweithgaredd ALP osteoblast yn sylweddol (Ffigur 1b). O ystyried rôl hanfodol BMP-2, ALP, ac OPN mewn gwahaniaethu osteoblast, gwnaethom brofi a yw detholiad CD yn cael ei effaith ar wahaniaethu osteoblast trwy reoleiddio mynegiant BMP-2, ALP, ac OPN. Cynyddodd triniaeth celloedd â detholiad CD fynegiant mRNA o ALP, BMP-2, ac OPN mewn modd sy'n dibynnu ar ganolbwyntio (Ffigur 1c), gan ddangos bod detholiad CD wedi ysgogi gwahaniaethu osteoblastau trwy ddadreoleiddio ALP, BMP-2 , a mynegiant OPN.
Mae dyfyniad Cistanche deserticola yn cynyddu ffurfiant nodule esgyrn trwy lwybr kinase protein a weithredir gan mitogen
Adroddwyd bod MAPK yn chwarae rhan bwysig mewn ffurfio esgyrn [24,25] felly fe wnaethom archwilio nesaf a yw'r llwybr signalau hwn yn ymwneud â mwyneiddiad esgyrn a achosir gan echdynnu CD. Pretreatment o gelloedd ag atalydd ERK U0126, p38 atalydd SB203580, neu JNK atalydd SP600125 lleihau CD echdynnu-cynyddu mwyneiddiad esgyrn (Ffigurau 2a, 3a, a 4a). Ar ben hynny, roedd yr atalyddion hefyd yn rhwystro ALP a achosir gan echdynnu CD, BMP-2, a mynegiant OPN (Ffigurau 2b–4c). Roedd trawsnewid celloedd gyda ERK2, p38, neu JNK mutant wedi lleihau cynnydd echdynnu CD mewn ALP, BMP-2, a mynegiant mRNA OPN (Ffigurau 2c, 3c, a 4c). Nesaf, fe wnaethom archwilio'n uniongyrchol yr actifadu ERK, p38, a JNK ar ôl triniaeth echdynnu CD. Deori celloedd gyda dyfyniad CD wedi'i achosi ERK, t38, a ffosfforyleiddiad JNK (Ffigurau 2d, 3d, a 4d). Felly, mae ERK, t38, a JNK yn cyfryngu'r ffurfiant esgyrn cynyddol a achosir gan driniaeth CD o osteoblastau.
Mae dyfyniad Cistanche deserticola yn cynyddu ffurfiant nodule esgyrn trwy'r llwybr ffactor-kB niwclear
Fel y crybwyllwyd yn flaenorol, mae angen actifadu NF-kB ar gyfer ffurfio esgyrn.[26,27] Y tro nesaf y gwnaethom drin osteoblastau gyda'r atalyddion NF-kB pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) a N-tosyl-L-phenylalanine cloromethyl ketone (TPCK) o Calbiochem (Darmstadt, yr Almaen) i benderfynu a yw actifadu NF-kB yn rhan o fwyneiddiad esgyrn a achosir gan echdynnu CD. Mae Ffigur 5a yn dangos bod rhag-drin osteoblastau â PDTC neu TPCK wedi atal ffurfio nodule esgyrn a achosir gan echdynnu CD a hefyd wedi lleihau'r cynnydd mewn mynegiant ALP, BMP-2 a OPN (Ffigur 5b a 5c). Mae ffosfforyleiddiad yr is-uned p65 NF-kB yn ddangosydd o actifadu NF-kB; [28] yn gyson â hyn, canfuom fod detholiad CD yn cynyddu ffosfforyleiddiad p65 yn yr osteoblasts (Ffigur 5d). Roedd y canlyniadau hyn yn dangos bod actifadu NF-kB yn bwysig ar gyfer ALP a achosir gan echdynnu CD, BMP-2, a mynegiant OPN a ffurfio nodule esgyrn.
Gwahardd colli esgyrn gan echdyniad Cistanche deserticola mewn llygod ovariectomized
I archwilio effaith dyfyniad CD ar golli esgyrn, ysgogwyd osteoporosis mewn llygod benywaidd gan ofariectomi. Yn ôl y disgwyl, gostyngodd llygod ovariectomized a arddangoswyd dwysedd mwynau asgwrn y corff cyfan a chynnwys mwynau esgyrn (Ffigur 6a a 6b). Roedd triniaeth â detholiad CD am bedair wythnos yn atal colli dwysedd mwynau esgyrn a chynnwys mwynau esgyrn mewn modd sy'n dibynnu ar ddos (Ffigur 6a a 6b). Gall crynodiadau gwaed o ALP adlewyrchu gweithgaredd osteoblastig.[29] Fel y dangosir yn Ffigur 6c, roedd detholiad CD yn atal y gostyngiad mewn gweithgaredd ALP serwm a achosir gan ofariectomi. Yn ogystal, cynyddodd dyfyniad CD hefyd lefel osteocalcin, marciwr ffurfio esgyrn, a gostyngodd lefel y telopeptidau C-terminal o golagen math-I, marciwr atsugniad esgyrn (Ffigur 6d a 6e). Mae'r canfyddiadau hyn felly'n cefnogi cryfder ac effeithiolrwydd dyfyniad CD wrth atal colled esgyrn mewn vivo.
Trafodaeth
Cistanche deserticolaMae Ma, perlysiau brodorol yn Tsieina, yn cael ei ddefnyddio'n helaeth mewn meddygaeth draddodiadol ar gyfer triniaethau therapiwtig amrywiol oherwydd ei weithgaredd tawelyddol, poenliniarol, ac imiwn-ysgogol. ddim yn effeithio ar eu mudo celloedd neu amlhau. Yn ogystal, canfuom fod ALP, BMP-2, ac OPN yn broteinau targed o signalau a achosir gan echdynnu CD, sy'n gofyn am actifadu ERK, p38, JNK, ac NF-kB.
Mae asgwrn yn feinwe gymhleth sy'n cynnwys sawl math o gelloedd sy'n mynd trwy broses o adnewyddu ac atgyweirio'n barhaus.[30] Pan fydd atsugniad a ffurfiant esgyrn yn anghytbwys, mae torrwch esgyrn yn drech na ffurfiant esgyrn a chanlyniadau osteoporosis.[30] Fe ddefnyddion ni lygod ovariectomized i archwilio effaith gwrth-osteoporotic dyfyniad CD. Roedd llygod ovariectomized wedi lleihau dwysedd mwynau esgyrn y corff cyfan a chynnwys mwynau esgyrn, a gafodd ei liniaru gan driniaeth â detholiad CD. Cynyddodd dyfyniad CD hefyd lefelau serwm y marciwr osteogenig ALP ac osteocalcin. Felly, mae'r CD yn gyfrwng ffurfio esgyrn sy'n atal colled esgyrn a achosir gan ofariectomi in vivo.
Er nad yw mecanweithiau osteoporosis yn gwbl glir, mae'n debygol eu bod yn gysylltiedig â'r gostyngiad mewn argaeledd, neu effeithiau gostyngol, o ffactorau twf esgyrn, megis ALP, BMP-2 ac OPN. Mae'r tri ffactor hyn yn chwarae rhan bwysig yn y broses o ffurfio esgyrn ac ailfodelu,[31] ac mae llawer wedi'i ddogfennu bod ysgogiad gwahaniaethu celloedd osteoblast wedi'i nodweddu'n bennaf gan fynegiant cynyddol o ALP, BMP-2 ac OPN.[32] ] Yn yr astudiaeth hon, canfuom fod detholiad CD yn cynyddu mynegiant ALP, BMP-2 a OPN a mwy o fwyneiddiad esgyrn. Felly, mae detholiad CD yn cyfryngu ffurfio esgyrn yn rhannol trwy ddadreoleiddio mynegiant ALP, BMP-2, ac OPN.
Dywedwyd bod t38 yn ymwneud â rheoleiddio mynegiant ALP wrth wahaniaethu rhwng celloedd osteoblastig;[33] yn yr un modd, mae ERK1/2 yn bwysig ar gyfer amlhau a gwahaniaethu osteoblastau.[34,35] Mae JNK yn ymwneud â ffurfio osteoclast. .[36] Fe wnaethom ddangos yma fod detholiad CD wedi achosi ffosfforyleiddiad ERK, p38 a JNK, ac atalyddion yr ensymau hyn yn gwylltio'r gallu i fwynoli esgyrn trwy echdynnu CD, gan awgrymu bod actifadu ERK, p38 a JNK yn chwarae rhan orfodol mewn ffurfio esgyrn a achosir gan echdynnu CD gan osteoblastau. Yn ogystal, mae atalyddion ensymau a mutants dominyddol-negyddol o ERK, p38 a JNK lleihau CD echdynnu-wella ALP, BMP-2 a mynegiant OPN. Mae'r data hyn yn awgrymu bod angen actifadu'r llwybrau ERK, p38 a JNK ar gyfer cynyddu mynegiant ALP, BMP-2 ac OPN ac aeddfedu a achosir gan echdynnu CD mewn osteoblastau. Adroddwyd bod ERK yn cynyddu ymlediad osteoblast a gwahaniaethu.[34,35] Fodd bynnag, ni wnaethom ganfod effaith dyfyniad CD ar amlhau osteoblast. Felly, efallai y bydd llwybrau eraill wedi gwrthweithio effaith ERK ar ôl ysgogiad echdynnu CD, neu fod yn angenrheidiol ar gyfer amlhau. Yn hyn o beth, rydym wedi canfod bod atalyddion PI3K ac Akt hefyd yn lleihau mwyneiddiad esgyrn a achosir gan echdynnu CD a mynegiant ALP, BMP-2 neu OPN mRNA (data heb ei ddangos). Felly, efallai y bydd angen y llwybrau hyn ar gyfer ffurfio esgyrn a achosir gan echdynnu CD.
Dangoswyd bod NF-kB yn rheoli gweithrediad osteoblast yn yr asgwrn.[37] Mae canlyniadau'r astudiaeth hon yn dangos bod actifadu NF-kB yn cyfrannu at fwyneiddiad esgyrn a achosir gan echdynnu CD a mynegiant ALP, BMP-2 a OPN mewn osteoblastau diwylliedig a bod atalyddion y llwybr signalau sy'n ddibynnol ar NF-kB (PDTC a TPCK). ) atal mwyneiddiad esgyrn a achosir gan echdynnu CD a mynegiant ALP, BMP-2 a OPN. Mae p65 yn cael ei ffosfforyleiddio yn Ser536 gan amrywiaeth o kinases mewn sawl llwybr signalau, sy'n gwella'r potensial trawsweithredol p65.[38] Dangosodd canlyniadau'r astudiaeth hon fod detholiad CD yn cynyddu ffosfforyleiddiad p65. Gyda'i gilydd, mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu bod angen actifadu NF-kB ar gyfer ffurfio esgyrn a achosir gan echdynnu CD mewn osteoblastau diwylliedig. Canfuom hefyd fod atalyddion ERK, p38 a JNK yn gwrthdroi gweithgaredd luciferase NF-kB a ysgogwyd gan echdynnu CD (data heb ei ddangos), yn gyson â bod yr ensymau hyn yn gyfryngwyr i fyny'r afon o actifadu NF-kB a achosir gan echdynnu CD. Felly, mae detholiad CD yn ysgogi ffurfio esgyrn trwy'r llwybrau ERK/p38/JNK/ a NF-kB.
Casgliadau
Dangosodd yr astudiaeth hon fod dyfyniad CD yn achosi gwahaniaethu osteoblast ac aeddfedu ond nid amlhau neu fudo. Cynyddodd dyfyniad CD hefyd ALP, BMP-2 a mynegiant OPN a mwyneiddiad esgyrn. Fe wnaethom ddangos bod y llwybrau ERK, t38, JNK ac NF-kB yn ymwneud â ffurfio esgyrn trwy gyfrwng echdynnu CD a mynegiant ALP, BMP-2 a OPN. At hynny, roedd detholiad CD yn atal colled esgyrn mewn-vivo a achosir gan ofariectomi. Felly, gall CD fod yn fuddiol wrth ysgogi ffurfio esgyrn wrth drin clefydau osteoporotig.
