COVID{0}} Mae Brechlyn MRNA yn Diogelu Yn Erbyn SARS-CoV-2 Haint Omicron BA.1 mewn Llygod Gordew a achosir gan Ddeiet Trwy Hybu Ymatebion Gwrthfeirysol Cynhenid
Dec 06, 2023
Crynodeb
Cefndir
Mae gordewdra yn epidemig byd-eang ac fe'i hystyrir yn ffactor risg ar gyfer amlygiad difrifol o Glefyd Coronafeirws 2019 (COVID-19). Mae pathogenedd coronafeirws syndrom anadlol acíwt difrifol 2 (SARS-CoV-2) ac ymatebion gwesteiwr i haint, ail-heintio, a brechu mewn unigolion â gordewdra yn parhau i fod yn anghyflawn.
Dulliau
Gan ddefnyddio'r model llygoden gordew a achosir gan ddeiet (DIO), buom yn astudio SARS-CoV-2 Alpha- ac Omicron BA.1-amlygiadau clefyd a achosir ac ymatebion imiwn lletyol i haint, ail-heintio, a COVID- {6}} brechiad mRNA.
Canfyddiadau
Yn wahanol i lygod heb lawer o fraster, ailadroddodd Omicron BA.1 ac Alpha i lefelau tebyg yn ysgyfaint llygod DIO gan arwain at raddfa debyg o niwed i feinwe. Yn bwysig, mae ymatebion imiwn addasol cyfryngol celloedd T a B i haint SARS-CoV neu frechiad mRNA COVID-19 yn cael eu amharu mewn llygod DIO, gan arwain at dueddiad uwch o ail-heintio a brechlyn is effeithiolrwydd. Fodd bynnag, er gwaethaf absenoldeb niwtraleiddio gwrthgorff, mae llygod DIO sydd wedi'u brechu yn cael eu hamddiffyn rhag niwed i'r ysgyfaint ar her Omicron, ynghyd â llawer mwy o gynhyrchiad IFN- ac IFN- ym meinwe'r ysgyfaint. Nododd RNAseq yr ysgyfaint ac arbrofion dilynol fod brechiad mRNA COVID-19 mewn llygod DIO wedi rhoi hwb i ymateb imiwn cynhenid wrthfeirysol, gan gynnwys mynegiant IFN- o'i gymharu â'r rheolaethau heb eu brechu.
system imiwnedd sy'n cynyddu planhigion cistanche
Dehongliad
Roedd ein canfyddiadau'n awgrymu bod brechiad mRNA COVID{0}} yn gwella ymatebion gwrthfeirysol cynhenid westeiwr mewn gordewdra sy'n amddiffyn y llygod DIO i raddau pan nad yw imiwnedd addasol yn optimaidd.
Ariannu
Ceir rhestr lawn o'r cyrff cyllido a gyfrannodd at yr astudiaeth hon yn yr adran Diolchiadau.
Geiriau allweddol: Gordewdra; Llygoden ordew a achosir gan ddeiet; SARS-CoV-2}}; COVID-19; Brechu; Omicron
Rhagymadrodd
Mae Clefyd Coronafeirws 2019 (COVID-19) yn cael ei achosi gan goronafeirws syndrom anadlol acíwt difrifol-2 (SARS CoV-2), sydd wedi arwain at fwy na 630 miliwn o heintiau gyda dros 6.5 miliwn o farwolaethau.1 –3 Mae oedran uwch a chyd-forbidrwydd gan gynnwys gorbwysedd, gordewdra, canserau penodol, a chlefydau cardiofasgwlaidd wedi'u hawgrymu fel ffactorau risg ar gyfer datblygu COVID difrifol-19.4 Ymhlith y cyflyrau hyn, mae gordewdra yn cael ei ystyried ar hyn o bryd yn epidemig byd-eang ac mae'n gysylltiedig â math II diabetes mellitus, clefyd cardiofasgwlaidd, gorbwysedd, a chlefyd yr afu brasterog di-alcohol oherwydd cyflwr llid systemig gradd isel cronig.5 Nododd astudiaethau blaenorol fod llygod gordew a achosir gan ddeiet (DIO) wedi gosod ymatebion imiwnedd cynhenid wedi'u dadreoleiddio ac wedi datblygu niwed difrifol i'r ysgyfaint ar ôl ffliw pandemig H1N1 haint.6–8 Ers dechrau'r pandemig COVID-19, roedd adroddiadau clinigol yn awgrymu bod pobl â chyflyrau sy'n gysylltiedig â gordewdra mewn mwy o berygl o COVID-19 a'u bod yn fwy agored i salwch difrifol. 9,10 Yn ogystal, dangosodd astudiaeth ddiweddar fod gordewdra yn gysylltiedig ag oedi wrth glirio SARS-CoV-2 a phrognosis anffafriol mewn cleifion COVID-11.11 Fodd bynnag, mae pathogenedd SARS-CoV-2 ac mae ymatebion gwesteiwr i ail-heintio a brechu mewn pobl â gordewdra yn parhau i fod heb eu deall yn llwyr.12 Ers iddo ddod i'r amlwg yn 2019, mae SARS-CoV-2 yn parhau i esblygu a chynhyrchu amrywiadau SARS-CoV-2 newydd ( VOCs) gan gynnwys Alffa, Beta, Gamma, Delta, ac Omicron. Mae'r VOCs hyn yn cario treigladau allweddol mewn pigyn a phroteinau firaol eraill sy'n cyd-fodiwleiddio eu pathogenesis, osgoi imiwnedd, a throsglwyddedd. Ar ddiwedd mis Tachwedd 2021, adroddwyd am SARS-CoV-2 Omicron BA.1 gyntaf yn Ne Affrica, a ledaenodd ac a ddisodlodd Delta yn gyflym fel yr amrywiad SARS-CoV sy'n cylchredeg yn bennaf yn gynnar yn 2022. Omicron BA Mae .1 yn cynnwys dros 30 o newidiadau asid amino mewn pigyn o'i gymharu â'r SARS-CoV hynafol-2, sy'n arwain at ei nodweddion firolegol unigryw gan gynnwys llai o bathogenedd, trosglwyddedd uwch13–17 ac osgoi imiwnedd a achosir gan frechlyn.18– 20 Gan mai Omicron a'i islinellau bellach yw'r prif fathau o SARS-CoV-2, mae'n bwysig deall amlygiad haint Omicron yn y boblogaeth ordew. Yn bwysicaf oll, mae effeithiolrwydd brechiad mRNA COVID-19 mewn cyflyrau gordew yn parhau i fod yn anghyflawn.
Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ddefnyddio llygod DIO fel model anifail i efelychu amlygiad Alpha ac Omicron BA.1 yng nghyd-destun pathogenesis SARS-CoV, ail-heintio, a COVID-19 mRNA wedi'i gyfryngu gan frechlyn amddiffyniad mewn unigolion gordew. Yn gyntaf, canfuom fod SARS-CoV-2 wedi arwain at ganlyniadau afiechyd mwy difrifol mewn llygod DIO nag mewn llygod heb lawer o fraster. Yn y cyfamser, canfuom fod ymatebion gwrthgyrff niwtraleiddio serwm ac ymatebion interfferon cell T firaol-benodol a achosir gan naill ai haint firws neu frechiad mRNA COVID-19 wedi'u gwanhau'n ddifrifol mewn llygod DIO, a arweiniodd at fwy o dueddiad i ail-heintio a llai o amddiffyniad brechlyn COVID-19 mRNA rhag llygod DIO o gymharu â llygod heb lawer o fraster. Yn ail, er bod haint Omicron BA.1 wedi achosi afiechydon gwanedig mewn llygod heb lawer o fraster, arweiniodd at afiechyd difrifol mewn llygod DIO tebyg i un Alpha. Yn drydydd, fe wnaethom ddangos bod dau ddos o frechiadau mRNA COVID-19 wedi methu ag achosi gwrthgorff niwtraleiddio serwm yn erbyn Omicron BA.1 ond ei fod yn gallu lleddfu Omicron BA.1-niwed i'r ysgyfaint a achoswyd gan lygod DIO. Dangosodd astudiaethau transcriptomeg o feinweoedd yr ysgyfaint fod yr ymatebion gwrthfeirysol imiwn cynhenid mewn llygod DIO wedi'u huwchreoleiddio'n sylweddol gan frechu, gan ddangos bod y brechiad mRNA COVID-19 yn cynnig amddiffyniad i lygod DIO trwy hybu imiwnedd gwrthfeirysol cynhenid lletywr. Ar y cyfan, datgelodd ein hastudiaeth wybodaeth bwysig am haint SARS-CoV-2 Alpha ac Omicron BA.1, ail-heintio, a brechiad mRNA COVID-19 mewn llygod DIO.
cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd
Cliciwch yma i weld cynhyrchion Gwella Imiwnedd Cistanche
【Gofyn am fwy】 E-bost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Dulliau
Datganiad moeseg
Perfformiwyd yr holl arbrofion yn ymwneud â SARS-CoV-2 byw yn y cyfleuster Lefel Bioddiogelwch yn yr Adran Microbioleg, Prifysgol Hong Kong (HKU) yn unol â'r gweithdrefnau gweithredu safonol. Cymeradwywyd yr holl weithdrefnau arbrofol ar anifeiliaid gan y Pwyllgor ar Ddefnyddio Anifeiliaid Byw wrth Ddysgu ac Ymchwilio'r HKU o dan CULATR 5786-21 a chydymffurfiwyd â chanllawiau defnyddio anifeiliaid.
Firws a bioddiogelwch
Cafodd SARS-CoV-2 B.1.1.7/Alpha (GISAID: EPI_ISL_1273444) a B.1.1.529.1/Omicron BA.1 (GenBank: OM212469)18 eu hynysu gan gleifion COVID-19 a gadarnhawyd gan labordy yn Hong Kong. Cafodd Alpha ac Omicron BA.1 eu meithrin a'u titradu gan assay plac yng nghelloedd VeroE{6-TMPRSS2 a'u storio ar −80 ◦C cyn eu defnyddio.
Anifeiliaid
Cafwyd llygod C57BL/6N gan Ganolfan Ymchwil Meddygaeth Gymharol HKU a'u cadw mewn labordy anifeiliaid BSL{- 2 gyda chylch dydd/nos egwyl o 12-.21 Perfformiwyd anwytho gordewdra fel y disgrifiwyd yn flaenorol. Cafodd 6 3 o lygod benywaidd newydd eu diddyfnu wythnos oed eu rhannu ar hap yn 2 grŵp, cafodd un grŵp ei fwydo â 45 Kcal% o ddeietau braster uchel (D12451, Research Diet Inc, New Brunswick, NJ) am 20 wythnos i gymell diet- llygod gordew ysgogedig (DIO), a bwydwyd y grŵp rheoli â bwyd pelenni safonol sy'n cynnwys dietau 13.2 Kcal% (Diet Cnofilod PicoLab 20, Cod LabDiet 5053, PMI) fel llygod heb lawer o fraster. Pwysau corff cyfartalog y llygoden DIO a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth hon oedd 40-50 g a grŵp llygod heb lawer o fraster rheoli oedd 25-30 g.
Diwylliant celloedd ac ysgogiad
Roedd macroffagau alfeolaidd (AMs) yn cael eu hynysu gan lavage broncoalfeolar (BAL). Yn fyr, Ar ôl i'r llygod gael eu haberthu trwy chwistrelliad mewnperitoneol o bentobarbital, fflysio'r ysgyfaint ag 1 ml PBS oer am dair gwaith i gael hylif lavage broncoalfeolar 3 ml (BALF). Cafodd BALF o lygod yn yr un grŵp ei gronni a'i allgyrchu ar 500 × g am 10 munud ar 4 ◦C i gasglu celloedd dyddodiad, cafodd ACau eu hadu gyda dwysedd o 50,000 o gelloedd/ffynnon yn 96- platiau wedi'u meithrin yn dda yn RPMI 1640 ynghyd ag 1% penisilin-streptomycin ar 37 ◦C mewn awyrgylch llaith o 5% CO2 am 2 awr, yna gallai monolayers ACau gadw at blatiau meithrin, golchwyd celloedd anhyderent o blatiau gyda PBS a chafodd ACau eu meithrin. yn RPMI 1640 ynghyd ag 1% penisilin-streptomycin a 10% serwm buchol ffetws (FBS) gyda neu heb ysgogiad o 1 ug/mL brechlyn mRNA, 100 ug/mL Poly (I: C) neu 100 ng/mL pigyn protein am 24 h. .22 Casglwyd babanod newydd-anedig ar gyfer prawf ELISA. Roedd celloedd yn cael eu golchi'n drylwyr gyda PBS a'u cynaeafu ar gyfer echdynnu RNA.
Her Alffa ac Omicron BA.1 mewn llygod
Roedd DIO a llygod heb lawer o fraster o dan anesthesia gan Ketamine (100 mg/kg) a Xylazine (10 mg/kg)23 yn cael eu brechu mewn trwynol gyda 103 PFU o Alpha neu Omicron BA.1 wedi'u gwanhau mewn halwynog 20 ul wedi'i glustogi â ffosffad (PBS), llygod rheoli eu brechu â'r un cyfaint o PBS. Cafodd pwysau corff a symptomau'r llygod heintiedig eu monitro am 14 diwrnod, roedd symptomau'r afiechyd yn cynnwys ffwr crychlyd, ystum crwm, ac anadlu llafurus, a rhoddwyd un sgôr i bob arwydd. Aberthwyd llygod trwy chwistrelliad mewnperitoneol o bentobarbital ar 2 a 4 diwrnod ar ôl yr haint (dpi), cafodd 3-6 o lygod ym mhob grŵp eu ewthaneiddio i gynaeafu samplau gwaed, meinweoedd tyrbinad yr ysgyfaint a'r trwyn ar gyfer asesiad firolegol, histopatholegol ac imiwnolegol. Casglwyd samplau ysgyfaint o bob llygoden ar gyfer yr asesiadau. Mae pob dot data yn y panel ffigwr yn cynrychioli canlyniad un llygoden.
Gweithdrefn frechu
Rhannwyd llygod ar hap yn grwpiau a rhoddwyd trefn dau ddos o frechiad mRNA COVID iddynt (BNT162b2, lot rhif 1B004A, BioNTech, yr Almaen) bob 14-dyddiau. Mae'r brechlyn yn seiliedig ar mRNA wedi'i addasu â niwcleosid a luniwyd mewn nanoronynnau lipid sy'n amgodio hyd llawn SARS-CoV-2 hynafiadol. Cafodd DIO a llygod heb lawer o fraster eu chwistrellu'n fewngyhyrol gyda 50 ul (5 ug) o frechlyn mRNA COVID-19 neu halwynog arferol fel y rheolydd.24,25 Ar ddiwrnod 14 ar ôl y dos cyntaf o'r brechlyn, casglwyd samplau gwaed ac yna darparwyd yr ail ddos o'r brechlyn mRNA. Ar 14 diwrnod ar ôl yr ail ddos, casglwyd samplau gwaed i asesu ymatebion gwrthgyrff. Wedi hynny, cafodd llygod eu brechu'n fewnnasol â 103 PFU o Alpha neu Omicron BA.1. Ar 2 dpi, aberthwyd llygod trwy chwistrelliad mewnperitoneol o bentobarbital, a chasglwyd samplau gan gynnwys samplau gwaed, ysgyfaint, a meinweoedd tyrbinad trwynol ar gyfer asesiad firolegol, histolegol ac imiwnolegol. Gwahanwyd meinweoedd yr ysgyfaint yn dair rhan, cynaeafwyd yr ysgyfaint chwith ar gyfer asesiad histolegol, casglwyd llabed caudal yr ysgyfaint dde fel homogenad yr ysgyfaint ac roedd gweddill yr ysgyfaint dde ar gyfer echdynnu RNA.
Pennu copïau genynnau SARS-CoV-2 a thiter firaol heintus ym meinweoedd tyrbinad yr ysgyfaint a'r trwyn
Echdynnwyd cyfanswm RNA o feinweoedd yr ysgyfaint a thyrbinad trwynol (NT) llygod â haint Alpha ac Omicron BA.1 gan becyn echdynnu RNA MiniBEST Universal (9766, Takara Bio Inc. Shiga, Japan). SARS-CoV-2 Cafodd copïau genynnau RNA polymeras (RdRp) sy'n ddibynnol ar RNA eu meintioli gan Becyn RT-PCR QuantiNova Probe (208354, Qiagen). qRT-PCR ar gyfer canfod SARS-CoV-2 Cyflawnwyd copïau genynnau RdRp a'r genyn cadw tŷ -actin i'w normaleiddio ar system LightCycler 96 (Roche Applied Sciences, Indianapolis, UDA).21 Ar gyfer titradiad firws heintus, homogenates o perfformiwyd yr ysgyfaint (llabed caudal yr ysgyfaint cywir) a meinweoedd NT wedi'u heintio ag Alpha ac Omicron BA.1 gan assay dos heintus meithriniad meinwe o 50% (TCID50) yng nghelloedd VeroE6-TMPRSS2.26 Roedd homogenadau yn {{9766 19}plygiad gwanhau cyfresol a'i ddeor â chelloedd VeroE6-TMPRSS2 mewn 96-plât ffynnon am 1 awr mewn deorydd 37 ◦C, cafodd gornatyddion eu taflu a deorwyd celloedd ymhellach ar 37 ◦C ar gyfer 72 h. Arsylwyd effaith cytopathig (CPE) a phenderfynwyd 50% o titer heintus meinwe gan ddull cyfrifo endpoint Reed & Munch.26
Histopatholeg, imiwn-histocemeg, a staenio imiwnfflworoleuedd o adrannau meinwe tyrbinad yr ysgyfaint a'r trwyn
Arsylwyd staenio Haematocsilin ac Eosin (H&E) o ddarnau meinwe wedi'u gosod mewn fformalin a pharaffin (4 μm yr un) ar gyfer newidiadau histopatholeg. Rhoddwyd sgôr i ddifrifoldeb histopatholeg yn yr ysgyfaint o dan guddio cyflawn27 trwy asesiad o dagfeydd ysgyfeiniol, ymdreiddiad interstitial, ymdreiddiad alfeolaidd, a hemorrhage a sgoriodd 0–4 fel y disgrifiwyd yn flaenorol.26 Defnyddiwyd y meini prawf canlynol ar gyfer sgorio: 0, toriad ysgyfaint arferol; 1, tagfeydd pibellau gwaed, ymdreiddiad perifasgwlaidd neu peribronchiolar; 2, yn ychwanegol at 1 gyda thagfeydd wal alfeolaidd gwasgaredig ac ymdreiddiad; 3, ymdreiddiad gofod aer, exudation, hemorrhage o alfeolitis lleol; 4, arsylwyd alfeolitis gwasgaredig. Perfformiwyd staenio imiwnohistocemeg gan becyn swbstrad DAB (3,3′ -diaminobenzidine) (Labordai Vector) fel y disgrifiwyd gennym yn flaenorol.28 Yn gryno, Ar gyfer canfod antigen ACE2, roedd gwrthgyrff monoclonaidd cwningen ailgyfunol ACE2 (MA{-, Invitrogen) yn ei ddefnyddio a'i ddilyn gyda datblygiad lliw trwy ddefnyddio'r pecyn swbstrad DAB. Canfuwyd y protein ACE2 gan hematoxylin ac yna'r adrannau meinwe gyda'r cyfrwng mowntio parhaol VectaMount (Labordai Vector). Ar gyfer mynegiant antigen SARS-CoV-2, cafodd sleidiau o feinweoedd yr ysgyfaint a NT eu staenio â gwrthgorff mewnol o brotein niwcleocapsid gwrth-SARS-CoV-2 cwningen (NP) ac yna gwrthgorff eilaidd o FITC –IgG gwrth-gwningen gafr cyfun (65-6111, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA). Defnyddiwyd y meini prawf canlynol ar gyfer sgorio NP. Ysgyfaint: "Sgôr 0" - dim signal staenio fflworoleuedd; "Sgôr 1" - dim ond mewn 1-3 epitheliwm bronciolaidd â chelloedd antigen-positif N; "Sgôr 2" - mwy na 3 epitheliwm bronciolaidd gyda chelloedd antigen-positif N; "Sgôr 3" - epitheliwm bronchiolar gydag ychydig o gelloedd positif yn yr alfeolar cyfagos; "sgôr 4" - ffocysau lluosog neu arwynebedd mawr o alfeoli gyda chelloedd N antigen-positif. NT: "Sgôr 0" - dim signal staenio fflworoleuedd; "Sgôr 1" - ychydig o gelloedd N antigen-positif wedi'u gwasgaru yn yr epitheliwm; "Sgôr 2" - epitheliwm yn dangos ffocws antigen N positif yn barhaus mewn celloedd cyfagos; "Sgôr 3" - mwy o antigen N positif o ffocws epithelial wedi'i ddosbarthu mewn ardal wahanol. Cafodd delweddau eu dal trwy ddefnyddio microsgop o fflworoleuedd lled-fodurol Olympus BX53 neu faes llachar gyda Meddalwedd Safonol CellSense OLYMPUS.
cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd
Ynysu RNA ac adwaith cadwyn polymeras gwrth-drawsgriptio amser real
Tynnwyd cyfanswm RNA o homogenadau meinwe (cynaeafwyd y llabedau cranial, canol ac affeithiwr ar gyfer yr ysgyfaint) a pherfformiwyd trawsgrifiad gwrthdro ar gyfer cDNA gan MiniBEST Universal RNA Extraction Kit a RT Reagent Kit (RR036A Takara Bio Inc.) yn dilyn cyfarwyddyd y gwneuthurwr . Canfuwyd lefelau mynegiant cytocinau, cemocinau ac interfferonau gan qRT-PCR gyda phremwyr penodol (Tabl Atodol S1) gan ddefnyddio Pecyn SYBR Premix Ex Taq II (RR820A, Takara Bio Inc.). Cafodd gwerthoedd pob genyn eu normaleiddio gyda genyn cadw tŷ -actin a'u cyflwyno fel 2−ΔCt fel y disgrifiwyd gennym yn flaenorol.28,29
Assay immunosorbent-gysylltiedig ag ensymau (ELISA)
Roedd SARS-CoV-2 niwcleoprotein (N), parth rhwymo derbynyddion protein pigyn (RBD), a SARS-CoV anweithredol-2 wedi'u gorchuddio mewn 96-imiwnoblastau ffynnon (Modiwlau Nunc-Immuno; Nunc A; /S, Roskilde, Denmarc) yn 0.05 M NaHCO3 a deorwyd ar 4 ◦C, dros nos. Cafodd samplau serwm eu 2-plygiad cyfresol a'u hychwanegu at y plât wedi'i orchuddio, eu deor ar 4 ◦C am 1 awr ac yna gwrthgyrff eilaidd wedi'u cyfuno â marchruddygl perocsidas (HRP) (IgG gwrth-lygoden cwningen, IgG1 gwrth-lygoden gafr,) IgG2a, IgG2b, ab6728, ab98693, M32307, M32507, Abcam ac Invitrogen) ar 37 ◦C am 1 h. Perfformiwyd datblygiad lliw gyda datrysiad 3,3 ′, 5,5 ′ -tetramethylbenzidine (# N301, Thermo Fisher Scientific) ar 37 ◦C am 15 munud a'i stopio gyda H2SO4. Darllenwyd y gwerthoedd dwysedd optegol (OD) ar 450 nm. Pennwyd teitrau gwrthgyrff gan werth OD torbwynt a osodwyd ar y OD cymedrig o serwm heb ei heintio ym mhob gwanediad ynghyd â 3 gwyriad safonol, a phennwyd y gwanhad uchaf sy'n cynhyrchu gwerth OD uwchlaw'r torbwynt fel titer gwrthgorff o serum.30 IFN- , IFN- , Albumin, a chrynodiadau haemoglobin eu pennu gan ddefnyddio llygoden IFN- (Invitrogen, UDA), IFN- (systemau ymchwil a datblygu, UDA), albwmin a hemoglobin (Abcam, Caergrawnt, DU) ELISA pecyn yn dilyn y cyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.
Assay microniwtraleiddio (MNT).
Cafodd samplau serwm eu gwanhau'n gyfresol 2-plygiad gan ddechrau o 1:10 mewn PBS a'u cymysgu â 100 TCID 50 o SARS-CoV-2 am 1 awr ar 37 ◦C, ychwanegwyd y cymysgedd i VeroE wedi'i hadu ymlaen llaw 6-celloedd TMPRSS2 mewn 96-plât ffynnon ar 37 ◦C am 72 h. Arsylwyd CPE a phennwyd niwtraleiddio teitrau gwrthgyrff fel y gwanhad uchaf o serwm a oedd yn atal yr effaith sytopathig yn llwyr.
Ffig. 1: SARS-CoV-2 Mae Alpha ac Omicron BA.1 yn achosi clefydau mwy difrifol mewn llygod DIO nag mewn llygod main.
Assay man imiwno-gysylltiedig ag ensymau (ELISpot).
Canfuwyd celloedd cynhyrchu IgG firws-benodol trwy hadu ataliad cell sengl (2.5 × 105 celloedd / fesul ffynnon) o feinweoedd yr ysgyfaint a'r ddueg i blât ELISpot gyda SARS-CoV anweithredol-2 (5 ug/mL) yn 37 ◦C am 48 h. Penderfynwyd ar gelloedd cynhyrchu IgG gyda gwrthgorff IgG gwrth-lygoden gwrth-lygoden alcalïaidd ffosffatase (62-6522, Invitrogen).31 Ar gyfer canfod celloedd sy'n cynhyrchu IFN sy'n benodol i firws, 2.5 × 105 o gelloedd/fesul gell sengl yn dda. deorwyd ataliad meinweoedd yr ysgyfaint a'r ddueg mewn plât IFN- ELISpot ysgogol gyda SARS-CoV-2 pwll peptid RBD a phrotein N ar 37 ◦C am 48 h, pennwyd celloedd cynhyrchu IFN gan ddefnyddio llygoden IFN- ELISpot SYLFAENOL cit (3321-2A, Mabtech, Inc., Stockholm, Sweden) gan ddilyn cyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.32
Dilyniannu RNA a dadansoddi data
Cafodd cyfanswm RNA o gelloedd meinwe ysgyfaint DIO a llygod heb lawer o fraster (n Mwy na neu'n hafal i 3 y grŵp) ei ynysu gan ddefnyddio NucleoSpin RNA Kit (740955.250, MACHEREY-NAGEL, Duren, yr Almaen) . Defnyddiwyd RNA wedi'i ddihysbyddu a'i buro â DNA i adeiladu llyfrgell cDNA dwbl (ds) gan ddefnyddio set adweithydd paratoi Llyfrgell MGIEasy (MGI, Shenzhen, Tsieina) gan ddilyn y protocol safonol. Hidlwyd data dilyniannu gyda v0.20.1 cyflym i gael gwared ar yr addasydd a darlleniadau o ansawdd isel.33 Cafodd darlleniadau RNA ribosomaidd (rRNA) eu hidlo ag URMAP v1.0. Defnyddiwyd 1480 (Edgar, 2020), a 34 HISAT2 v2.2.0 i fapio’r darlleniadau yn erbyn genom cyfeirnod y llygoden (GRCm38/ ENSEMBL 84).35 Defnyddiwyd y ffeil aliniad ar gyfer cydosod trawsgrifiadau, amcangyfrif eu helaethrwydd, a chanfod mynegiant gwahaniaethol o genynnau, cafodd y lefelau mynegiant genynnau eu mesur gan StringTie v2.1.5.36 Prif ddadansoddiad cydrannau (PCA) gyda R v4.0. Genynnau a fynegwyd yn wahaniaethol (DEGs) ac a benderfynwyd yn seiliedig ar gyfrif genynnau gyda DESeq2 v3.15.37 DEGs rhwng gwahanol grwpiau triniaeth a nodwyd yn ôl clwstwrProfile gyda throthwy |log2FC| Gwerth > 1 a FDR < 0.05, ac fe'i defnyddiwyd ar gyfer dadansoddiad cyfoethogi yn cynnwys Gene Ontology (GO), Gwyddoniadur Genynnau a Genomau Kyoto (KEGG).38 Defnyddiwyd pob genyn yn genom y llygoden fel cefndir cyfoethogi. ImmuCellAI_Defnyddiwyd llygoden i ganfod helaethrwydd celloedd imiwnedd yn seiliedig ar ddata RNAseq.39
Dadansoddiad ystadegol
Mae data'n cynrychioli modd a gwyriadau safonol. Gwerthuswyd gwahaniaethau ystadegol rhwng y ddau grŵp gyda phrawf t Myfyrwyr gan ddefnyddio GraphPad Prism 8. Gwerthuswyd gwahaniaethau ystadegol rhwng tri grŵp neu fwy gydag ANOVA un ffordd neu ddwy ffordd gan ddefnyddio GraphPad Prism 9. Ystyriwyd gwahaniaethau yn ystadegol arwyddocaol pan oedd p < { {5}}.05. Paratowyd y ffigurau a'r graffiau yn y llawysgrif gyda GraphPad Prism 8, Adobe Illustrator, neu BioRender.com.
Dilysu adweithydd
Mae gwrthgyrff a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth wedi'u dilysu gan y ffynhonnell fasnachol y cânt eu prynu ohoni. Mae gwybodaeth fanwl am adweithyddion a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth i'w gweld yn y Ffeil Dilysu Adweithydd o Ddata Atodol (Tabl Atodol S2).
Rôl cyllidwyr
Nid oedd gan y ffynonellau ariannu unrhyw rôl yng nghynllun yr astudiaeth, casglu data, dadansoddi neu ddehongli, nac ysgrifennu'r adroddiad.
manteision cistanche ar gyfer dynion-cryfhau system imiwnedd
Canlyniadau
Mae SARS-CoV-2 Alpha ac Omicron BA.1 yn arwain at glefydau mwy difrifol mewn llygod DIO nag mewn llygod heb lawer o fraster
Er mwyn deall pathogenedd SARS-CoV-2 yng nghyd-destun gordewdra, cafodd DIO a llygod heb lawer o fraster eu brechu â 103 PFU o Omicron BA.1 (B.1.1.529.1) neu Alpha (B .1.1.7) drwy'r llwybr mewn trwynol. Mae Omicron BA.1 ac Alpha yn cario'r amnewidiad N501Y mewn pigyn sy'n caniatáu iddynt heintio llygod tebyg i wyllt.40,41 Mewn 14-cwrs clefyd dydd, gwelsom ddirywiad araf ond cyson o bwysau'r corff mewn llygod heb lawer o fraster sydd wedi'u heintio â Alpha gyda cholli pwysau corff cymedrig o 5% ar 14 dpi (Ffig. 1a). Mewn cyferbyniad, gwelsom gynnydd pwysau corff cymedrig o 1.5% yn Omicron BA.1-llygod heb lawer o fraster heintiedig, sy'n dangos bod pathogenedd Omicron BA.1 mewn llygod heb lawer o fraster wedi'i wanhau'n sylweddol (Ffig. 1a), sydd yn gan gadw ag astudiaethau diweddar gennym ni ac eraill.14,42 Fodd bynnag, arweiniodd haint Alpha ac Omicron BA.1 at golli pwysau corff yn fwy difrifol mewn llygod gordew a achosir gan ddeiet (DIO), sef tua 12% ar 9 dpi o gymharu gyda'u pwysau corff gwreiddiol (100%) ar 0 dpi (Ffig. 1a). Yn ddiddorol, er bod gwahaniaeth clir yn y newid pwysau corff cymedrig rhwng Alpha- ac Omicron BA.1-llygod coch heintiedig (14 dpi: −5.0% yn erbyn +1.5%), pwysau’r corff colled Alffa- ac Omicron BA.1-roedd llygod DIO heintiedig yr un peth i raddau helaeth (14 dpi: −11.1% o'i gymharu â −11.4%) (Ffig. 1a). Yn gyson â mesuriadau pwysau'r corff, arweiniodd haint Alpha ac Omicron BA.1 at symptomau clinigol tebyg mewn llygod DIO, gan gynnwys ffwr crychlyd, pen ôl, ac anadlu llafurus a gyrhaeddodd uchafbwynt o 4 dpi (Ffig. 1b), er na welsom unrhyw rai. arwydd o afiechyd mewn llygod heb lawer o fraster ar haint Alpha neu Omicron BA.1. Nesaf, fe wnaethom asesu'r newidiadau histolegol mewn meinweoedd anadlol uchaf ac isaf. Dangoswyd tyrbinad trwynol ffug llygoden heintiedig (NT) a meinweoedd yr ysgyfaint fel rheolaeth (Ffig Atodol S1). Gwelsom ddinistrio epitheliwm ysgafn a achosir gan firws ac ymdreiddiad llidiol yn NT o Alpha ac Omicron BA.1-heintio llygod heb lawer o fraster ar 2 dpi. Roedd y dihangfa epithelial a'r ymdreiddiad imiwn yn fwy dramatig yn adrannau NT llygod DIO sydd wedi'u heintio ag Alpha neu Omicron BA.1 ar 2 dpi o'u cymharu â llygod heb lawer o fraster (Ffig. 1c). Ar 4 dpi, canfuwyd dinistr epitheliwm NT ysgafn gydag ychydig o falurion celloedd luminal mewn llygod heb lawer o fraster a heintiwyd gan Alpha, tra bod NT o Omicron BA.1- llygod coch heintiedig yn ymddangos yn gymharol gyfan. Fodd bynnag, fe wnaethom barhau i ganfod dinistr epithelial difrifol, malurion luminal, ac ymdreiddiad celloedd imiwnedd submucosal yn adrannau NT llygod DIO ar ddiwrnod 4 ar ôl haint Alpha neu Omicron BA.1 (Ffig. 1c). Ym meinweoedd ysgyfaint llygod heb lawer o fraster, arweiniodd haint Alpha at lid interstitial lleol a thagfeydd capilari alfeolaidd ysgafn ar 2 a 4 dpi, tra bod haint Omicron BA.1 wedi arwain at lid interstitial yr ysgyfaint ar 2 dpi ond cafodd ei ddatrys i raddau helaeth ar 4 dpi (Ffig. 1d). Mewn cyferbyniad llwyr, gwelwyd iawndal histolegol mwy difrifol o alfeoli ym meinweoedd ysgyfaint llygod DIO ar ôl haint Alpha neu Omicron BA.1, a amlygodd fel tagfeydd pibellau gwaed pwlmonaidd difrifol ar 2 dpi. Gwelwyd mwy o ymdreiddiad celloedd imiwnedd peribronchiolar a peri-fasgwlaidd, yn ogystal â chelloedd imiwn ac ecsiwtadau hylif, mewn sachau alfeolaidd ar 4 dpi (Ffig. 1d). Roedd crynodiad albwmin yn yr hylif lavage broncoalfeolar yn sylweddol uwch mewn llygod DIO nag mewn llygod heb lawer o fraster ar ddiwrnod 4 ar ôl haint Alpha, gan awgrymu mwy o athreiddedd capilari alfeolaidd mewn llygod DIO heintiedig SARS CoV (Ffigur Atodol S2). Yn gyson â'r canfyddiadau hyn, dangosodd asesiad histoleg lled-feintiol o feinweoedd yr ysgyfaint fod haint Omicron BA.1 ac Alpha wedi arwain at histopatholeg ysgyfaint mwy difrifol mewn llygod DIO nag mewn llygod heb lawer o fraster (Ffig. 1e). Yn gyffredinol, mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod haint SARS-CoV-2 yn arwain at amlygiadau mwy difrifol o glefyd mewn llygod DIO nag mewn llygod heb lawer o fraster. Yn bwysig, er bod Omicron BA.1 yn llai pathogenig nag Alpha mewn llygod heb lawer o fraster, mae'r ddau amrywiad SARS CoV-2 yn fwy pathogenig ac yn achosi clefydau tebyg mewn llygod DIO.
Ffig. 2: Mae SARS-CoV-2 yn atgynhyrchu'n fwy effeithlon mewn llygod DIO nag mewn llygod main.
Mae SARS-CoV-2 yn atgynhyrchu'n fwy effeithlon mewn llygod DIO nag mewn llygod main
Gofynnom nesaf a yw Omicron BA.1 ac Alpha yn dyblygu'n fwy effeithiol ym meinweoedd anadlol llygod DIO o gymharu â llygod heb lawer o fraster. Canfuom fod Alpha ac Omicron BA.1 yn ailadrodd i lefelau uwch ym meinweoedd ysgyfaint llygod DIO nag mewn llygod heb lawer o fraster ar 2 a 4 dpi (Ffig. 2a a b). Yn unol ag adroddiadau blaenorol, ailadroddodd Omicron BA.1 i lefelau is nag Alffa ym meinweoedd ysgyfaint llygod heb lawer o fraster. Yn benodol, roedd titer heintus Omicron BA.1 yn 26.1- a 3.8-plyg yn is nag Alpha ar 2 a 4 dpi, yn y drefn honno. Mewn cyferbyniad, ailadroddodd Omicron BA.1 ac Alpha i lefelau tebyg ym meinweoedd ysgyfaint llygod DIO trwy fesur copïau genynnau RdRp a theitrau heintus (Ffig. 2a a b). Yn ogystal, fe wnaethom hefyd ganfod patrwm tebyg o enyn RdRp firaol a titer heintus yn y meinweoedd NT, lle'r oedd Omicron BA.1 ac Alpha yn ailadrodd i lefelau tebyg mewn llygod DIO ond nid mewn llygod heb lawer o fraster (Ffig. 2c a d). Trwy staenio immunofluorescence, canfuwyd mynegiant niwcleocapsid firaol (N) amlycach yn yr ysgyfaint a meinweoedd NT llygod DIO wedi'u heintio ag Omicron BA.1 neu Alpha o'u cymharu â llygod heb lawer o fraster ar 2 a 4 dpi (Ffig. 2e ac f ac Atodol Ffig. S3). Ar yr un pryd, fe wnaethom feintioli mynegiant interfferonau allweddol (IFNs) a chytocinau pro-lidiol ym meinweoedd yr ysgyfaint. Dangosodd ein canlyniadau fod Omicron BA.1 ac Alpha wedi sbarduno lefelau sylweddol is o IFN- mewn llygod DIO o'u cymharu â'u cymheiriaid heb lawer o fraster (Ffig. 2g a Ffig Atodol S4). Mewn cyferbyniad, cafodd cytocinau prolidiol gan gynnwys IL-6, ac IP-10 eu sbarduno ar lefelau uwch mewn llygod DIO gan haint Omicron BA.1 ac Alpha o gymharu â llygod heb lawer o fraster (Ffig. 2h). Yn ogystal, gwnaethom werthuso mynegiant gwaelodlin ACE2 a TMPRSS2 mewn llygod heb lawer o fraster a DIO heb eu heintio a chanfod bod ACE2 a TMPRSS2 mewn llygod heb lawer o fraster a DIO wedi'u mynegi ar lefelau tebyg. Fodd bynnag, canfu staenio immunohistochemistry a berfformiwyd ar fynegiant antigen ACE2 dwyster uwch o ACE2 yn yr epitheliwm bronciolaidd ac alfeolaidd o lygod DIO heb eu heintio o'u cymharu â llygod heb lawer o fraster (Ffig Atodol S5). Gyda'i gilydd, mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu y gallai'r mynegiant IFN diffygiol a mynegiant ACE2 uwch mewn llygod DIO gyfrannu at y dyblygu firws uwch a mwy o ymateb pro-llidiol, gan arwain at ddifrod meinwe mwy difrifol yn y llygod DIO.
Ffig. 3: Mae imiwnedd addasol a gafwyd o haint SARS-CoV-2 blaenorol yn amddiffyn llygod DIO yn aneffeithlon. a
Mae imiwnedd addasol a gafwyd o haint SARS-CoV-2 blaenorol yn amddiffyn llygod DIO yn aneffeithlon
Nesaf, i ddeall effeithlonrwydd amddiffynnol imiwnedd addasol yn erbyn ail-heintio yn y cyflwr gordew, ail-heriwyd llygod DIO ymadfer a llygod heb lawer o fraster gyda 103 PFU o Alpha ar ddiwrnod 28 ar ôl haint sylfaenol a chynaeafwyd samplau 2 ddiwrnod ar ôl ail-heintio ( dpr) (Ffig. 3a). Gwnaethom ddadansoddi'r gwrthgorff IgG yn erbyn antigen SARS-CoV-2 yn y samplau serwm a gymerwyd ar ddiwrnod 14 ar ôl haint Alpha sylfaenol a chanfod bod y titr o IgG yn erbyn SARS CoV-2 N a pharth rhwymo derbynyddion pigyn ( RBD) yn sylweddol is mewn llygod DIO na llygod main o 1.9- (p=0.0128) a 3.4-plygiadau (p=0.0362) , yn y drefn honno (Ffig. 3b). Yn ogystal, roedd y titr o rwymo firaol cyfanswm IgG ac isdeip IgG1, IgG2a, ac IgG2b i gyd yn sylweddol is mewn llygod DIO o gymharu â llygod heb lawer o fraster (Ffig. 3b). Canfuwyd titr niwtraleiddio serwm o 1:10-1:20 o 5 allan o 6 llygod main ond ni chafodd ei ganfod o unrhyw un o'r 6 llygod DIO (Ffig. 3b), a awgrymodd ymateb imiwn addasol amhariad mewn llygod DIO ar SARS- Haint CoV-2. Ar 2dpr, canfuwyd copi genyn RdRp firaol yn rhwydd o bob meinwe NT a 3/6 (50%) o feinweoedd yr ysgyfaint o lygod DIO a ail-heriwyd (Ffig. 3c), ond ni chafodd copi genyn RdRp firaol ei adfer o'r YG a'r ysgyfaint meinweoedd llygod coch wedi'u hail-herio. Yn gyson, rydym yn aml yn canfod protein N firaol yn yr epitheliwm o NT a meinweoedd ysgyfaint mewn llygod DIO ond nid llygod heb lawer o fraster (Ffig. 3d). Datgelodd archwiliadau histolegol ddinistrio epithelial mewn meinweoedd NT yn ogystal â thagfeydd wal alfeolaidd, ymdreiddiad peribronchiolar, a hemorrhage alfeolaidd lleol ym meinweoedd ysgyfaint llygod DIO ond nid llygod heb lawer o fraster (Ffig. 3e). Nesaf, gwnaethom werthuso adalw ymatebion cof imiwn ar ail-heintio mewn llygod heb lawer o fraster a DIO, canfuom fod celloedd cynhyrchu IFN- ac IgG firws-benodol ym meinweoedd ysgyfaint a dueg llygod DIO yn sylweddol is na llygod heb lawer o fraster yn 2dpr (Ffig. 3f a g). Yn bwysig, nid oeddem yn gallu canfod unrhyw titer gwrthgorff niwtraleiddio yn erbyn Alpha yn serwm llygod DIO ar ddiwrnod 2 ar ail-heintio Alpha, tra bod gan 4/6 (66.7%) o lygod main wedi'u hail-heintio titr niwtraleiddio o 1 :10 (Ffig. 3h). Felly, mae ein canfyddiadau'n awgrymu bod llygod DIO yn fwy agored i ail-heintiau oherwydd yr ymatebion imiwn addasol B cell a T cell ar haint SARS-CoV-2 heb eu gosod yn ddigonol.
Ffig. 4: Mae brechiad mRNA COVID-19 yn cynnig llai o amddiffyniad rhag haint Alpha mewn llygod DIO oherwydd ymateb imiwn addasol gwanedig. a
Mae brechlyn mRNA COVID{0}} yn cynnig llai o amddiffyniad rhag haint Alpha mewn llygod DIO oherwydd ymateb imiwn addasol gwanedig
Er mwyn archwilio effeithlonrwydd amddiffyniad ar gyfer llygod DIO ar ôl imiwneiddio â brechlynnau mRNA, fe wnaethom chwistrellu DIO a llygod heb lawer o fraster yn fewngyhyrol gyda regimen brechu mRNA COVID dau ddos -19 ac yna her Alpha 14 diwrnod ar ôl hwb fel y dangosir yn Ffig. 4a. Ar gyfer meinweoedd NT, gwnaethom ganfod genyn RdRp firaol mewn 3/6 (50%) a thiter heintus mewn 2/6 (33.3%) o lygod heb lawer o fraster a frechwyd, tra gwnaethom ganfod genyn RdRp firaol a titer heintus ym mhob un a gafodd ei frechu. Llygod DIO (Ffig. 4b), sy'n awgrymu bod haint arloesol ar ôl y brechiad wedi digwydd yn llawer haws mewn llygod DIO o gymharu â llygod heb lawer o fraster. Yn unol ag adroddiadau blaenorol a oedd yn awgrymu bod brechiadau yn cynnig gwell amddiffyniad i'r llwybr anadlol isaf o'i gymharu â'r llwybr anadlol uwch mewn modelau dynol ac anifeiliaid,43,44 ni wnaethom ganfod copi genynnol firaol na firws heintus o unrhyw un o feinweoedd yr ysgyfaint a gafodd eu brechu. llygod heb lawer o fraster (Ffig. 4c). Mewn cyferbyniad, fe wnaethom ganfod genyn RdRp firaol mewn 3/6 (50%) a titer heintus mewn 4/6 (66.7%) o feinweoedd ysgyfaint llygod DIO. Yn histolegol, gwelsom ddinistrio epitheliwm helaeth mewn meinweoedd NT o lygod DIO wedi'u brechu ar ôl her gan firws Alpha, tra bod llai o ddifrod i feinweoedd YG wedi'i arsylwi mewn llygod heb lawer o fraster wedi'u brechu (Ffig. 4d). Ym meinweoedd ysgyfaint llygod DIO wedi'u brechu, canfuom dagfeydd a ymdreiddiad yn y gofod alfeolaidd ynghyd â ffocws gwaedlif alfeolaidd ar haint Alpha, tra bod yr iawndal histopatholegol hyn yn absennol i raddau helaeth ym meinweoedd ysgyfaint llygod coch wedi'u brechu (Ffig. 4e). Yn unol â'r canfyddiadau hyn, fe wnaeth brechiad mRNA COVID-19 leihau mynegiant SARS-CoV- 2 N mewn llygod main a DIO yn y meinweoedd YG (Ffig. 4f). Mewn meinweoedd ysgyfaint, dim ond mewn llygod DIO wedi'u brechu y canfuwyd signalau N firaol ond nid llygod heb lawer o fraster wedi'u brechu (Ffig. 4g). Nesaf, canfuom fod y celloedd sy'n cynhyrchu firws IFN- ac IgG penodol ym meinweoedd dueg llygod DIO wedi'u brechu yn sylweddol is o'u cymharu â'r rhai mewn llygod heb lawer o fraster a frechwyd ar ddiwrnod 2 ar ôl haint Alpha (Ffig. 4h). Yn bwysig, dim ond gwrthgorff niwtraleiddio yn erbyn Alpha a ganfu assas microniwtraleiddio yn serwm llygod DIO ar 14 diwrnod ar ôl ail ddos o frechu a 2 ddiwrnod ar ôl herio firws, ond roedd y lefel yn 2.8-plygiadau (p < 0.0001) a 21 .8- plygiadau (p=0.0053) yn is na'r llygod main, yn y drefn honno (Ffig. 4i). Gyda'i gilydd, mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod nam ar ymatebion gwrthgyrff addasol i frechiad mRNA COVID-19 mewn llygod DIO.
Mae brechlyn mRNA COVID{0}} yn lleddfu difrod i'r ysgyfaint a achosir gan her Omicron BA.1 mewn llygod DIO yn absenoldeb gwrthgorff niwtraleiddio canfyddadwy
Nesaf, gwnaethom ofyn i ba raddau y mae'r brechlyn mRNA COVID{{{{{{{0}} yn amddiffyn llygod DIO rhag SARS-CoV-2 Omicron BA.1. I'r perwyl hwn, fe wnaethom brofi titr gwrthgorff niwtraleiddio serwm gyntaf yn erbyn Omicron BA.1, a chanfod titr isel mewn llygod main 14 diwrnod ar ôl hwb, tra na chanfuwyd unrhyw titr gwrthgorff niwtraleiddio mewn llygod DIO hyd yn oed ar ôl y ddau ddos o frechu COVID{{ 6}} hwb mRNA neu 2 ddiwrnod ar ôl haint Omicron BA.1 (Ffig. 5a a b), gan awgrymu brechu mewn llygod DIO ysgogwyd ychydig o wrthgorff croes yn erbyn Omicron BA.1. Nesaf, heriwyd DIO a llygod heb lawer o fraster gyda 103 PFU o Omicron BA.1 trwy'r llwybr intranasal ar 14 diwrnod ar ôl y brechiad hwb (Ffig. 5a). Yn y meinweoedd NT, gostyngodd brechiad mRNA COVID-19 yn gymedrol ddyblygiad Omicron BA.1 a thitr heintus mewn llygod heb lawer o fraster ond ni chafodd fawr o effaith mewn llygod DIO o gymharu â rheolyddion heb eu brechu (Ffig. 5c). Yn ddiddorol, fe wnaeth brechiad mRNA COVID-19 leihau'n sylweddol ddyblygiad Omicron BA.1 ym meinweoedd ysgyfaint llygod DIO o'i gymharu â'u rheolaethau heb eu brechu, er nad oedd mor effeithiol â'r ataliad cyflawn o Omicron BA.1 ym meinweoedd yr ysgyfaint o heb fraster wedi'i frechu llygod (Ffig. 5d). Yn benodol, lleihawyd copi genyn Omicron BA.1 RdRp gan 867-plygiadau (p=0.0087) a thitr heintus 7979.9-plygiadau (p < 0.0001) mewn llygod DIO wedi'u brechu . Yn gyson â'r canfyddiadau firolegol uchod, roedd brechiad mRNA COVID-19 yn llai effeithiol wrth leihau mynegiant antigen Omicron BA.1 mewn meinweoedd NT o lygod heb lawer o fraster a DIO ond wedi lleihau mynegiant antigen Omicron BA.1 ym meinweoedd ysgyfaint llygod heb lawer o fraster a DIO (Ffig. 5e). Ar 2 dpi, arweiniodd haint Omicron BA.1 at rywfaint o dagfeydd a ymdreiddiad yn y gofod alfeolaidd ynghyd â hemorrhage ysgyfeiniol a difrod epitheliwm mewn llygod DIO heb eu brechu, a leihawyd gan frechiad mRNA COVID-19 (Ffig. 5f). Yn bwysig, canfuom fod y crynodiad o IFN- ac IFN- ym meinweoedd ysgyfaint llygod DIO wedi'u brechu wedi'i ychwanegu'n sylweddol o'i gymharu â'r llygod heb eu brechu ar 2 dpi ar ôl her Omicron BA.1, tra bod gwrthgorff niwtraleiddio serwm yn parhau i fod yn anganfyddadwy o'r brechiad. llygod DIO (Ffig. 5g). Dangosodd difrifoldeb cyffredinol y clefyd yn ôl newidiadau pwysau’r corff fod brechiad mRNA COVID-19 wedi lleihau’r golled pwysau corff uchaf mewn llygod DIO i 9% o’i gymharu â 13% mewn llygod DIO heb eu brechu (Ffig Atodol S6). Gyda'i gilydd, mae'r canlyniadau hyn yn dangos, er gwaethaf sbarduno lefel anghanfyddadwy o ymateb gwrthgyrff, y gallai brechiad mRNA COVID-19 wella'r ymatebion gwrthfeirysol cynhenid i leddfuyddion Omicron BA.{49}}niwed a achosir i feinweoedd yr ysgyfaint mewn llygod DIO.
Ffig. 5: Mae brechlyn mRNA COVID-19 yn lleddfu niwed i'r ysgyfaint yn absenoldeb niwtraleiddio ymateb gwrthgyrff yn Omicron BA.1-llygod DIO heintiedig. a
Mae brechiad mRNA COVID{0}} yn uwchreoleiddio ymatebion gwrthfeirysol yn ysgyfaint llygod DIO
Er mwyn deall yn well yr ymatebion imiwn ym meinweoedd ysgyfaint llygod DIO gyda brechiad mRNA COVID-19, fe wnaethom gynaeafu samplau ysgyfaint llygod ac archwilio eu proffiliau trawsgrifio ar ddiwrnod 2 ar haint Omicron BA.1 (Ffig. 6a a Ffig Atodol. S7). Yn ddiddorol, gwelsom gyfoethogiad nodedig o enynnau sy'n ymwneud â llwybrau sy'n ymwneud ag ymatebion gwrthfeirysol cynhenid, gan gynnwys "ymateb cellog i IFN- ac IFN-" a "rheoleiddio cadarnhaol o IFN- ac IFN- cynhyrchu" ym meinweoedd ysgyfaint llygod DIO brechu ( Ffig. 6b). Datgelodd dadansoddiad o setiau genynnau imiwnedd ymhellach fod gan y llygod DIO a frechwyd y doreth uchaf o macroffagau M1 ymhlith yr holl grwpiau a werthuswyd (Ffig. 6c). Er mwyn gwerthuso a oedd brechlyn mRNA COVID-19 wedi rhoi hwb i ymatebion interfferon gwrthfeirysol mewn macroffagau alfeolaidd, gwnaethom ynysu macroffagau alfeolaidd o lygod heb lawer o fraster a llygod DIO a'u hysgogi â brechlyn mRNA (Ffig. 7a). Canfuom fod brechlyn mRNA, ysgogiad in vitro ar gyfer macroffagau alfeolaidd y llygoden, wedi achosi dadreoleiddio sylweddol o RIG-I, MDA5, STAT1, STAT2, ISG15, IFIT3, ac OAS3, tra mai dim ond y macroffagau alfeolaidd o lygod DIO a ddangosodd welliant sylweddol o gynhyrchiad IFN ar mRNA a lefelau protein (Ffig. 7b ac c). Roedd y canfyddiadau hyn yn awgrymu proffil ymateb gwahaniaethol o macrophage alfeolaidd o lygod DIO a llygod heb lawer o fraster. Nesaf, gwnaethom ynysu macroffagau alfeolaidd llygoden rhag llygod coch a DIO wedi'u brechu neu heb eu brechu, ac yna ysgogi'r celloedd â phrotein pigyn poly (I: C) neu SARS-CoV-2 (Ffig. 7d). Cynyddodd ysgogiad in vitro gyda poly (I: C) ymhellach fynegiant genynnau cynhenid yn ymwneud ag ymateb imiwn mewn macroffagau alfeolaidd o lygod heb lawer o fraster a DIO wedi'u brechu. Yn ddiddorol, roedd y genynnau a ysgogwyd gan interfferon gan gynnwys ISG15, IFIT3, ac OAS3 wedi'u huwchreoleiddio'n fwy mewn macroffagau alfeolaidd wedi'u cychwyn gan frechlyn o lygod DIO o'u cymharu â'r rhai o lygod heb lawer o fraster (Ffig. 7e). Yn gyfochrog, cynyddodd ysgogiad protein pigyn SARS-CoV ailgyfunol -2 fynegiant RIG-I, TLR3, IL-6, TNF- , IFN- , IFN- , IRF7, a mynegiant mRNA STAT2 mewn brechlyn- macroffagau alfeolaidd preimio o lygod DIO ond nid llygod heb lawer o fraster (Ffig. 7g). Yn bwysig, cynyddwyd cynhyrchiad IFN yn ddramatig mewn macroffagau alfeolaidd o lygod DIO wedi'u brechu mewn ymateb i ysgogiad protein poly (I: C) neu S (Ffig. 7f ac h). Gyda'i gilydd, mae'r canlyniadau hyn yn dangos y gallai brechiad mRNA COVID-19 adfer yr ymateb gwrthfeirysol cynhenid yn ysgyfaint llygod DIO trwy fodiwleiddio mynegiant genynnau math-I sy'n gysylltiedig â interfferon mewn macroffagau alfeolaidd.
Ffig. 6: Mae brechiad mRNA COVID-19 yn dadreoleiddio ymatebion gwrthfeirysol yn ysgyfaint llygod DIO. a
Trafodaeth
Mae gordewdra yn gysylltiedig ag ymatebion llid dwysach ac amhariad ar y system imiwnedd sydd o ganlyniad yn arwain at risg uchel o ddifrifoldeb a derbyniadau i'r ysbyty i gleifion COVID-19.45 Mae'n parhau i fod yn aneglur sut mae'r llid gradd isel cronig hyn a chamweithrediad ymatebion imiwn modiwleiddio cwrs haint SARS-CoV-2. Er mwyn archwilio pathogenesis SARS-CoV-2 ac asesu effeithlonrwydd brechu mRNA COVID-19 mewn unigolion gordew, mae angen modelau anifeiliaid bach priodol ar frys i ddynwared nodweddion clinigol cleifion COVID . Fodd bynnag, nid yw SARS-CoV-2 hynafiadol yn heintio llygod labordy tebyg i wyllt gan nad yw RBD o bigyn hynafiadol yn rhwymo'n effeithiol i'r llygoden ACE2.21,40,41 Yn ddiddorol, amrywiadau SARS-CoV a ddaeth i'r amlwg yn ddiweddar , gan gynnwys Alpha (B.1.1.7), Beta (B.1.351), Gama (P.1), ac Omicron BA.1 (B.1.1.529.1), wedi caffael y treiglad N501Y yn pigyn, sy'n galluogi traws- trosglwyddo rhywogaethau SARS-CoV-2 i murine math gwyllt.41,46–50 Yn yr astudiaeth hon, rydym yn defnyddio model llygoden ordew math gwyllt a achosir gan ddeiet i ymchwilio i SARS-CoV-2 Alpha a Omicron BA.1 pathogenesis, ail-heintio, a brechu.
cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd
Dangosodd ein canlyniadau fod haint Omicron BA.1 yn llai difrifol na haint Alpha mewn llygod heb lawer o fraster yn ôl y newid pwysau corff, llwyth firaol, titer firws, marcwyr proinflammatory ysgyfaint, a chanfyddiadau histopatholeg. Mae'r canlyniadau hyn yn unol ag adroddiadau diweddar a welodd lefel is o heintiad gan Omicron BA.1 o gymharu ag amrywiadau blaenorol SARS-CoV-2 mewn modelau anifeiliaid.14,42 Difrifoldeb cynyddol SARS-CoV{{7} } haint mewn llygod DIO nag mewn llygod heb lawer o fraster yn unol â chanlyniadau o astudiaethau diweddar a gynhaliwyd mewn llygod gordew a achosir gan ddeiet a bochdewion.51-53 Yn ddiddorol, fe wnaethom ddatgelu bod Omicron BA.1 yn ailadrodd i lefel debyg o'i gymharu ag Alpha mewn llygod DIO, gan arwain at bathogenedd cymharol Omicron BA.1 ac Alpha mewn llygod DIO. Yn benodol, cafodd cytocinau prolidiol cynrychioliadol gan gynnwys IP-10 ac IL{-6 eu hysgogi'n gadarn gan haint Omicron BA.1 mewn llygod DIO, gan ddangos mwy o niwed llidiol a morbidrwydd.54 Yn y cyfamser, cynhyrchwyd IFN gwrthfeirysol ym meinweoedd yr ysgyfaint o lygod DIO yn sylweddol is na llygod heb lawer o fraster ar haint Alpha ac Omicron BA.1. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gall haint Omicron BA.1 yn y llygod DIO achosi clefyd difrifol tebyg i un Alpha. Ar hyn o bryd ni ddeellir yn llwyr sut mae gordewdra yn cyfrannu at glefydau difrifol yn COVID-19. Mae'r lefel leptin uwch yn nodwedd o ordewdra sy'n rheoleiddio metabolaeth, llwybrau signalau Jak/STAT, ac Akt, ac yn modiwleiddio swyddogaethau celloedd T, a allai gyfrannu at y canlyniad difrifol.55,56 Mae imiwnedd digrif wedi'i gyfryngu gan wrthgyrff yn hanfodol ar gyfer amddiffynfeydd gwesteiwr, 57–59 tra bod y cliriad firws gorau posibl mewn llygod heintiedig SARS-CoV hefyd angen ymatebion celloedd T CD4+ a CD8+.60 Yn yr astudiaeth hon, canfuom lefelau sylweddol is o gell B ac ymatebion celloedd T gan lygod DIO o'u cymharu â llygod heb lawer o fraster, a allai gyfrannu at y tueddiad cynyddol o ail-heintio mewn llygod DIO. Mae mecanwaith gwaelodol yr ymateb celloedd B llai a chell T mewn llygod DIO yn parhau i fod yn anghyflawn ond gall fod yn gysylltiedig â nam ar ymarferoldeb celloedd dendritig fel y datgelwyd mewn astudiaethau firws ffliw blaenorol.61–63
Er gwaethaf llwyddiant brechiad mRNA COVID{0}} gydag effeithiolrwydd uchel i amddiffyn yn erbyn afiechydon difrifol SARS-CoV, gall ymddangosiad osgoi imiwnedd mewn amrywiadau SARS-CoV-2 beryglu effeithiolrwydd brechlyn.43 Yn ein model llygoden DIO gyda regimen imiwneiddio dau ddos, roedd y gwrthgorff niwtraleiddio mewn llygod heb lawer o fraster yn cael ei ganfod yn hawdd a'i hybu'n gadarn gan yr ail ddos o frechu yn erbyn Alpha ac Omicron BA.1. Mewn cyferbyniad, arweiniodd y regimen imiwneiddio dau ddos o frechiad mRNA COVID-19 at serwm anghanfyddadwy yn niwtraleiddio gwrthgorff yn erbyn Alpha ac Omicron BA.1 mewn llygod DIO ac ni chanfuwyd gwrthgorff niwtraleiddio yn erbyn Omicron BA.1 hyd yn oed ar ddiwrnod 2 ar her Omicron BA.1. Mae'r canfyddiadau hyn yn dangos bod yr ymatebion cell B addasol i'r brechlyn mRNA yn cael eu gwanhau'n ddifrifol mewn llygod DIO, a allai fod oherwydd namau yn natblygiad celloedd B, actifadu, a swyddogaethau.64-66 Yn ddiddorol, roedd brechiad yn cynnig rhywfaint o amddiffyniad i Omicron BA .1-llygod DIO herio yn yr anadlol isaf ond nid yn nhrbinadau trwynol anifeiliaid heintiedig. Gall yr amddiffyniad annigonol yn y meinweoedd tyrbinad trwynol fod oherwydd ymatebion imiwnedd mwcosaidd annigonol i frechu mewngyhyrol a fethodd ag ennyn imiwnedd amddiffynnol digonol yn y safleoedd mwcosol.67,68
Ffig. 7: Mae macroffagau alfeolaidd (AMs) llygod DIO yn cyfrannu at yr ymatebion gwrthfeirysol sydd wedi'u dadreoleiddio. a
Trwy ddadansoddiad trawsgrifiad, fe wnaethom ddatgelu bod y brechiad mRNA COVID-19 wedi uwchreoleiddio ymatebion gwrthfeirysol yn ysgyfaint llygod DIO. Datgelodd arbrofion dilynol fod cynhyrchiad IFN- mewn ymatebion i ysgogiad protein pigyn poly (I: C) neu SARS-CoV-2 wedi'i ychwanegu at macroffagau alfeolaidd llygod DIO wedi'u brechu. Ynghyd â'r gostyngiad mewn llwyth firaol a newidiadau histopatholegol, a chrynodiad cynyddol o IFN- / yn ysgyfaint Omicron BA.1- herio llygod DIO sydd wedi'u brechu, mae ein canfyddiadau'n awgrymu bod brechiad mRNA yn rhoi hwb i imiwnedd cynhenid y gwesteiwr yn yr anifeiliaid gordew sy'n yn cyfrannu at yr amddiffyniad a arsylwyd. Yn gyffredinol, mae ein hastudiaeth yn datgelu gwybodaeth bwysig am haint SARS-CoV-2 Alpha ac Omicron BA.1, ail-heintio, a brechu mewn llygod gordew a achosir gan ddeiet, sy'n rhoi mewnwelediad i'r strategaethau rheoli, triniaeth a brechu ar gyfer y poblogaethau gordew. Mae gan ein hastudiaeth nifer o gyfyngiadau. Yn gyntaf, gwnaethom ail-herio 28 diwrnod ar ôl yr haint ar ôl cynradd. Mewn senarios bywyd go iawn, dylid monitro hirhoedledd cof a diogelu ail-heintio mewn cleifion dros gyfnod hwy o amser. Yn ail, defnyddiwyd llygod benywaidd yn yr astudiaeth hon gan ei bod yn hysbys bod menywod yn cynyddu ymatebion imiwn cynhenid ac addasol cryfach na gwrywod.69 Yr ymatebion imiwn gwahaniaethol yn erbyn SARS-CoV-2 rhwng rhywiau a'u rolau yn natblygiad afiechyd COVID{{ Dylid archwilio 19}} ymhellach. Yn drydydd, dim ond y model llygod math gwyllt a ddefnyddiwyd gennym ar gyfer yr astudiaeth hon, dylid cynnal gwerthusiad ychwanegol mewn bodau dynol mewn astudiaethau clinigol yn y dyfodol i gadarnhau ac archwilio ymhellach ein canfyddiadau ynghylch a yw'r brechiad mRNA COVID-19 yn gwella'r ymatebion imiwn cynhenid Haint SARS-CoV-2 mewn cleifion dynol gordew sydd wedi'u brechu. Serch hynny, mae ein hastudiaeth yn darparu mewnwelediadau pwysig sy'n awgrymu y gall cleifion gordew ddatblygu clefydau clinigol mwy difrifol ar haint SARS-CoV-2 a'u bod yn fwy agored i ail-heintio neu heintiau sy'n torri tir newydd gyda brechlyn. Yn bwysig, mae ein data yn awgrymu y gallai brechlynnau mRNA COVID-19 barhau i fod yn effeithiol mewn unigolion gordew er gwaethaf yr ymateb isel neu absenoldeb gwrthgyrff, gan bwysleisio ymhellach bwysigrwydd brechu yn y poblogaethau hyn.
Cyfeiriadau
1 Zhou P, Yang XL, Wang XG, et al. Achos niwmonia sy'n gysylltiedig â coronafirws newydd o darddiad ystlumod tebygol. Natur. 2020; 579(7798): 270–273.
2 Chu H, Chan JF, Yuen TT, et al. Tropiaeth gymharol, cineteg atgynhyrchu, a phroffilio difrod celloedd o SARS-CoV-2 a SARS-CoV gyda goblygiadau ar gyfer amlygiadau clinigol, trosglwyddedd, ac astudiaethau labordy o COVID-19: astudiaeth arsylwadol. Microb Lancet. 2020; 1(1): e14–e23.
3 Chan JF, Kok KH, Zhu Z, et al. Nodweddiad genomig o coronafirws dynol-pathogenig newydd 2019 wedi'i ynysu oddi wrth glaf â niwmonia annodweddiadol ar ôl ymweld â Wuhan. Mae Microbau Newydd yn Heintio. 2020; 9(1): 221-236.
4 Williamson EJ, Walker AJ, Bhaskaran K, et al. Ffactorau sy'n gysylltiedig â-19-marwolaeth sy'n gysylltiedig â COVID gan ddefnyddio OpenSAFELY. Natur. 2020; 584(7821): 430-436.
5 Guh DP, Zhang W, Bansback N, Amarsi Z, Birmingham CL, Anis AH. Amlder cyd-forbidrwydd sy'n gysylltiedig â gordewdra a thros bwysau: adolygiad systematig a meta-ddadansoddiad. BMC Iechyd Cyhoeddus. 2009; 9:88.
6 Zhang AJX, Zhu H, Chen Y, et al. Gallai parasetamol adfer nam cyfryngol Prostaglandin E mewn ymateb imiwn cynhenid i haint A(H1N1)pdm09 mewn llygod gordew a achosir gan ddeiet. J Heintio Dis. 2019; 219(5):795–807.
7 Smith AG, Sheridan PA, Telyn JB, Beck MA. Mae llygod gordew a achosir gan ddeiet wedi cynyddu marwolaethau ac wedi newid ymatebion imiwn pan fyddant wedi'u heintio â firws y ffliw. J Nutr. 2007; 137(5): 1236– 1243.
8 Hulme KD, Noye EC, Short KR, Labzin LI. Llid wedi'i ddadreoleiddio yn ystod gordewdra: sy'n gyrru difrifoldeb afiechyd mewn firws ffliw a heintiau SARS-CoV-2. Immunol blaen. 2021; 12: 770066.
9 Sanchis-Gomar F, Lavie CJ, Mehra MR, Henry BM, Lippi G. Gordewdra a chanlyniadau yn COVID-19: pan fydd epidemig a phandemig yn gwrthdaro. Mayo Clin Proc. 2020; 95(7): 1445-1453.
10 Kruglikov IL, Shah M, Scherer PE. Gordewdra a diabetes fel cyd-forbidrwydd ar gyfer COVID-19: mecanweithiau sylfaenol a rôl rhyngweithiadau firaol-bacteriol. Elife. 2020;9:e61330.
11 Chen X, Hu W, Ling J, et al. Mae gorbwysedd a diabetes yn gohirio clirio firaol mewn-19 cleifion COVID. medRxiv. 2020. https://doi. org/10.1101/2020.03.22.20040774.
12 Nasr MC, Geerling E, Pinto AK. Effaith gordewdra ar frechu i SARS-CoV-2. Endocrinol blaen (Lausanne). 2022; 13: 898810.
13 Viana R, Moyo S, Amoako DG, et al. Ehangiad epidemig cyflym o'r amrywiad SARS-CoV-2 Omicron yn Ne Affrica. Natur. 2022; 603(7902):679–686.
14 Shuai H, Chan JF, Hu B, et al. Atgynhyrchu gwanedig a phathogenedd SARS-CoV-2 B.1.1.529 Omicron. Natur. 2022; 603(7902): 693–699.
15 Hu B, Chan JF, Liu H, et al. Treigladau pigyn sy'n cyfrannu at ddewis mynediad diwygiedig SARS-CoV-2 Omicron BA.1 a BA.2. Mae Microbau Newydd yn Heintio. 2022; 11:1-31.
16 Chan JF, Hu B, Chai Y, et al. Nodweddion firolegol a phathogenedd SARS-CoV-2 Omicron BA.2. Cell Rep Med. 2022; 3(9): 100743.
17 Yuan S, Ye ZW, Liang R, et al. Pathogenedd, trosglwyddedd, a ffitrwydd SARS-CoV-2 Omicron mewn bochdewion Syria. Gwyddoniaeth. 2022; 377(6604): 428–433.
18 Lu L, Mok BW, Chen LL, et al. Niwtraleiddio SARS-CoV-2 Amrywiad Omicron yn ôl sera gan dderbynwyr brechlyn BNT162b2 neu Coronavac. Clin Infect Dis. 2022; 75(1): e822-e826. https://doi.org/10. 1093/cid/ciab1041.
19 Liu L, Iketani S, Guo Y, et al. Osgoi gwrthgyrff trawiadol a amlygir gan yr amrywiad Omicron o SARS-CoV-2. Natur. 2022; 602(7898): 676–681.
20 Iketani S, Liu L, Guo Y, et al. Priodweddau osgoi gwrthgyrff SARS CoV-2 islinellau Omicron. Natur. 2022; 604(7906):553–556.
21 Chen Y, Li C, Liu F, et al. Haint arloesol SARS-CoV-2 sy'n gysylltiedig ag oedran a newidiadau mewn ymateb imiwn mewn model llygoden. Mae Microbau Newydd yn Heintio. 2022; 11(1):368–383.
22 Zhang X, Goncalves R, Mosser DM. Ynysu a nodweddu macroffagau murine. Curr Protoc Immunol. 2008;83(1): 14:14.1.1-14.1.14.
23 Li C, Chen Y, Zhao Y, et al. Gall pigiad mewnwythiennol o'r brechlyn mRNA clefyd coronafeirws 2019 (COVID-19) gymell myopericarditis acíwt mewn model llygoden. Clin Infect Dis. 2022; 74(11): 1933–1950.
24 Li C, Chen YX, Liu FF, et al. Absenoldeb clefyd wedi'i wella gan frechlyn gydag amddiffyniad cadarnhaol annisgwyl yn erbyn coronafirws syndrom anadlol acíwt difrifol 2 (SARS-CoV-2) trwy frechlyn anweithredol a roddir o fewn 3 diwrnod i her firws ym model bochdew Syria. Clin Infect Dis. 2021; 73(3): e719–e734.
25 Vogel AB, Kanevsky I, Che Y, et al. Mae brechlynnau BNT162b yn amddiffyn macacau rhesws rhag SARS-CoV-2. Natur. 2021; 592(7853): 283-289.
26 Lee AC, Zhang AJ, Chan JF, et al. Mae brechiad SARS-CoV-2 geneuol yn sefydlu haint anadlol isglinigol gyda feirws yn cael ei ollwng mewn bochdewion euraid Syria. Cell Rep Med. 2020; 1(7): 100121.
27 Meyerholz DK, Beck AP. Egwyddorion a dulliau ar gyfer sgorio staeniau meinwe atgynhyrchu mewn ymchwil. Buddsoddiad Lab. 2018;98(7): 844–855.
28 Chu H, Shuai H, Hou Y, et al. Mae targedu apoptosis pathogenig iawn a achosir gan coronafirws yn lleihau pathogenesis firaol a difrifoldeb afiechyd. Sci Adv. 2021; 7(25):eabf8577.
29 Chu H, Hou Y, Yang D, et al. Mae coronafirysau yn ecsbloetio proteas aspartig cystein lletyol ar gyfer atgynhyrchu. Natur. 2022; 609(7928):785–792.
30 Zhang AJ, Li C, I KK, et al. Mae imiquimod agonist derbynnydd 7 tebyg i doll mewn cyfuniad â brechlyn y ffliw yn hwyluso ac yn ychwanegu at ymatebion imiwnedd digrif yn erbyn haint firws ffliw A(H1N1)pdm09 mewn llygod BALB/c. Imiwnol Brechlyn Clin. 2014; 21(4):570–579.
31 Li C, I KKW, Zhang AJX, et al. Mae cyd-ysgogiad ag imquimod agonist TLR7 a gronynnau firws ffliw anweithredol yn hyrwyddo actifadu celloedd B y llygoden, gwahaniaethu, a chyflymu cynhyrchiad gwrthgyrff antigen-benodol. Immunol blaen. 2018; 9: 2370.
32 Zhou R, I KK, Wong YC, et al. Mae haint SARS-CoV acíwt-2 yn amharu ar ymatebion celloedd dendritig a chell T. Imiwnedd. 2020; 53(4): 864–877.e5.
33 Chen S, Zhou Y, Chen Y, Gu J. fastp: rhagbrosesydd cyflym iawn popeth-mewn-un FASTQ. Biowybodeg. 2018; 34(17): i884-i890.
34 Edgar R. URMAP, mapiwr darllen hynod gyflym. CyfoedJ. 2020; 8: e9338.
35 Kim D, Paggi JM, Parc C, Bennett C, Salzberg SL. Aliniad genom ar sail graff a genoteipio gyda genoteip HISAT2 a HISAT. Nat Biotechnol. 2019; 37(8):907–915.
36 Pertea M, Pertea GM, Antonescu CM, Chang TC, Mendell JT, Salzberg SL. Mae StringTie yn galluogi ail-greu trawsgrifiad o ddarlleniadau RNA-seq yn well. Nat Biotechnol. 2015; 33(3): 290–295.
37 Love MI, Huber W, Anders S. Amcangyfrif cymedrol o newid plyg a gwasgariad ar gyfer data RNA-seq gyda DESeq2. Genom Biol. 2014; 15(12):550.
38 Yu G, Wang LG, Han Y, He QY. clusterProfiler: pecyn R ar gyfer cymharu themâu biolegol ymhlith clystyrau genynnau. OMICS. 2012; 16(5): 284–287.
39 Miao YR, Xia M, Luo M, Luo T, Yang M, Guo AY. Llygoden ImmuCellAI: offeryn ar gyfer rhagfynegiad cynhwysfawr o helaethrwydd celloedd imiwnedd llygoden a darlunio micro-amgylchedd imiwnedd. Biowybodeg. 2021; 38:785.
40 Shuai H, Chan JF, Yuen TT, et al. Mae amrywiadau SARS-CoV-2 sy'n dod i'r amlwg yn ehangu tropiaeth rhywogaethau i murine. biofeddygaeth. 2021; 73: 103643.
41 Gu H, Chen Q, Yang G, et al. Addasu SARS-CoV-2 mewn llygod BALB/c ar gyfer profi effeithiolrwydd brechlyn. Gwyddoniaeth. 2020; 369(6511): 1603-1607.
42 Halfmann PJ, Iida S, Iwatsuki-Horimoto K, et al. SARS-CoV-2 Mae firws Omicron yn achosi afiechyd gwanedig mewn llygod a bochdewion. Natur. 2022; 603(7902):687–692.
43 Krause PR, Fleming TR, Longini IM, et al. Amrywiadau a brechlynnau SARS-CoV-2. N Engl J Med. 2021; 385(2): 179–186.
44 Corbett KS, Nason MC, Flach B, et al. Mae imiwnedd yn cyfateb i amddiffyniad gan frechlyn mRNA yn erbyn SARS-CoV-2 mewn primatiaid annynol. Gwyddoniaeth. 2021; 373(6561):eabj0299.
45 Hamer M, Gale CR, Kivimäki M, Batty GD. Gorbwysedd, gordewdra, a risg o fynd i'r ysbyty ar gyfer COVID{1}}: astudiaeth carfan gymunedol o oedolion yn y Deyrnas Unedig. Proc Natl Acad Sci UDA. 2020; 117(35): 21011-21013.
46 Mannar D, Saville JW, Zhu X, et al. SARS-CoV-2 Amrywiad Omicron: osgoi gwrthgyrff a strwythur cryo-EM o gymhleth protein-ACE2 pigyn. Gwyddoniaeth. 2022; 375(6582):760–764.
47 Zhang Y, Huang K, Wang T, et al. Mae SARS-CoV-2 yn addasu'n gyflym mewn llygod BALB/c oed ac yn achosi niwmonia nodweddiadol. J Firol. 2021; 95(11): e02477.
48 Huang H, Zhu Y, Niu Z, Zhou L, Sun Q. SARS-CoV-2 N501Y amrywiadau sy'n peri pryder a'u trosglwyddo posibl gan lygoden. Marwolaeth Cell yn Wahanol. 2021; 28(10): 2840-2842.
49 Niu Z, Zhang Z, Gao X, et al. Mae treiglad N501Y yn trosglwyddo traws-rywogaeth o SARS-CoV-2 i lygod trwy wella rhwymiad derbynyddion. Targed Trawsgludiad Signal Ther. 2021; 6(1):284.
50 Chu H, Chan JF, Yuen KY. Modelau anifeiliaid mewn ymchwil SARS-CoV-2. Dulliau Nat. 2022; 19(4): 392-394.
51 Briand F, Sencio V, Robil C, et al. Mae gordewdra a achosir gan ddeiet a NASH yn amharu ar adferiad afiechyd mewn bochdewion euraidd heintiedig SARS-CoV. Firysau. 2022; 14(9): 2067.
52 Port JR, Adney DR, Schwarz B, et al. Mae newidiadau braster uchel-siwgr uchel a achosir gan ddeiet ym metabolaeth lipidau yn gysylltiedig â difrifoldeb COVID-19 ychydig yn fwy ac oedi wrth wella ym bochdew Syria. Firysau. 2021; 13(12): 2506.
53 Zhang YN, Zhang ZR, Zhang Pencadlys, et al. Mwy o afiachusrwydd llygod gordew sydd wedi'u heintio â SARS-CoV-2 a addaswyd gan y llygoden. Cell Discof. 2021; 7(1):74.
54 Akbar AN, Gilroy DW. Gall imiwnedd heneiddio waethygu COVID-19. Gwyddoniaeth. 2020; 369(6501): 256-257.
55 Rebello CJ, Kirwan YH, Greenway FL. Gordewdra, y comorbidrwydd mwyaf cyffredin yn SARS-CoV-2: ai leptin yw'r ddolen? Int J Obes. 2020; 44(9): 1810-1817.
56 Mullen M, Gonzalez-Perez RR. Twf signalau JAK/STAT a achosir gan Leptin a chanser. Brechlynnau (Basel). 2016; 4(3):26.
57 Zhu A, Chen Z, Wang Y, et al. Ymatebion imiwnedd i haint SARS-CoV-2 mewn pobl a llygod dynol ACE2. Fundam Res. 2021; 1(2): 124-130.
58 Achkar JM, Casadevall A. Imiwnedd wedi'i gyfryngu gan wrthgyrff yn erbyn twbercwlosis: goblygiadau ar gyfer datblygu brechlynnau. Microb Host Cell. 2013; 13(3):250–262.
59 Casadevall A, Pirofski ALl. Synthesis newydd ar gyfer imiwnedd trwy gyfrwng gwrthgyrff. Nat Immunol. 2011; 13(1):21–28.
60 Israelow B, Mao T, Klein J, et al. Penderfynyddion imiwn addasol clirio ac amddiffyn firaol mewn modelau llygoden o SARS-CoV-2. Sci Immunol. 2021; 6(64): eabl4509.
61 Smith AG, Sheridan PA, Tseng RJ, Sheridan JF, Beck MA. Nam detholus yng ngweithrediad celloedd dendritig ac ymatebion cell-T CD-benodol wedi'u newid i antigen mewn llygod gordew a achosir gan ddeiet sydd wedi'u heintio â firws y ffliw. Imiwnoleg. 2009; 126(2): 268–279.
62 Macia L, Delacre M, Abboud G, et al. Amhariad ar ymarferoldeb celloedd dendritig a nifer y cyflwr cyson mewn llygod gordew. J Immunol. 2006; 177(9): 5997-6006.
63 Honce R, Schultz-Cherry S. Effaith gordewdra ar bathogenesis firws ffliw A, ymateb imiwn, ac esblygiad. Immunol blaen. 2019; 10: 1071.
64 Frasca D, Blomberg BB. Mae gordewdra yn cyflymu diffygion oedran mewn celloedd B y llygoden a dynol. Immunol blaen. 2020; 11: 2060.
65 Kennedy DE, Marchog KL. Atal Lymffopoiesis B gan adipocytes ac IL-1-cynhyrchu celloedd atal sy'n deillio o myeloid. J Immunol. 2015; 195(6): 2666-2674.
66 Pham TD, Chng MHY, Roskin KM, et al. Mae diet braster uchel yn achosi newidiadau systemig celloedd B sy'n gysylltiedig ag ymwrthedd i inswlin. Immunol Mwcosol. 2017; 10(6):1468–1479.
67 Alu A, Chen L, Lei H, Wei Y, Tian X, Wei X. Brechlynnau Intranasal COVID-19: o'r fainc i'r gwely. EBioFeddygaeth. 2022; 76: 103841.
68 Tiboni M, Casettari L, Illum L. Brechiad trwynol yn erbyn SARS CoV-2: brechlynnau synergaidd neu ddewis arall yn lle mewngyhyrol? Int J Pharm. 2021; 603: 120686.
69 Klein SL, Flanagan KL. Gwahaniaethau rhyw mewn ymatebion imiwn. Nat Parch Immunol. 2016; 16(10):626–638.