Mae dendrimer-tesaglitazar Conjugate yn Cymell Newid Ffenoteip Mewn Microglia Ac Yn Gwella - Amyloid Phagocytosis† Rhan 1

Mae newid microglia o gyflwr 'pro-llidiol' sy'n gwaethygu'r clefyd yn ffenoteip 'gwrthlidiol' niwro-amddiffynnol yn strategaeth addawol ar gyfer mynd i'r afael â chlefydau niwroddirywiol lluosog.

Mae microglia yn fath o gell yn y system nerfol ganolog sy'n bennaf gyfrifol am gynnal iechyd a swyddogaeth niwronau. Gallant secretu amrywiaeth o ffactorau twf a ffactorau niwrotroffig a gallant gynnal gweithgaredd metabolaidd arferol niwronau trwy glirio deunyddiau gwastraff o amgylch niwronau. Mae astudiaethau yn y blynyddoedd diwethaf wedi dangos bod microglia yn perthyn yn agos i'r cof. Gadewch i ni edrych arno gyda'n gilydd.

Yn gyntaf, gall microglia ysgogi niwronau a hyrwyddo actifadu niwronau, a thrwy hynny wella'r cof. Trwy ryddhau cyfres o niwrodrosglwyddyddion, fel glwtamad ac alanin, gall microglia hyrwyddo trosglwyddiad signal rhwng niwronau a gall wella cyseiniant signal niwronau glial rhwng pilenni presynaptig, gan hyrwyddo cyffroedd niwronau a ffurfio cof ymhellach.

Yn ail, gall microglia hefyd glirio gwastraff o amgylch niwronau, cynnal gweithgaredd metabolaidd arferol niwronau, a lleihau marwolaethau niwronau, a thrwy hynny hyrwyddo gwella cof. Pan fydd gormod o garbage yn cronni o amgylch niwronau, bydd yn effeithio ar weithgaredd metabolaidd arferol niwronau, gan arwain at farwolaeth niwronaidd a swyddogaeth wan, a thrwy hynny leihau perfformiad cof. Gall microglia gynnal amgylchedd metabolig arferol niwronau a lleihau marwolaethau niwronaidd trwy amlyncu a dadelfennu gwastraff amgylchynol, a thrwy hynny wella cof.

I grynhoi, mae microglia yn perthyn yn agos i'r cof. Trwy hyrwyddo cyffro niwronau a chlirio gwastraff amgylchynol, gall microglia wella cof ymhellach a chadw ein hymennydd yn iach ac yn egnïol. Dylem dalu sylw i ddiogelu iechyd microglia i gyflawni cof gwell. Gellir gweld bod angen i ni wella cof, a gall Cistanche wella cof yn sylweddol oherwydd bod Cistanche yn ddeunydd meddyginiaethol Tsieineaidd traddodiadol gyda llawer o effeithiau unigryw, ac un ohonynt yw gwella cof. Daw effeithiolrwydd Cistanche o'r gwahanol gynhwysion gweithredol y mae'n eu cynnwys, gan gynnwys asid tannig, polysacaridau, glycosidau flavonoid, ac ati. Gall y cynhwysion hyn hybu iechyd yr ymennydd mewn amrywiaeth o ffyrdd.

Cliciwch gwybod 10 ffordd i wella cof

Mae microglia proinflammatory yn cyfrannu at ddatblygiad afiechyd trwy ryddhau sylweddau niwrowenwynig a chyflymu croniad protein pathogenig. Dangoswyd bod gweithyddion PPAR a PPAR yn symud microglia o ffenoteip pro-inflammatory ('M1-like') i ffenoteip sydd wedi'i actifadu fel arall ('M{2-like'). Mae strategaethau o'r fath wedi'u harchwilio mewn treialon clinigol ar gyfer clefydau niwrolegol, megis clefyd Alzheimer a chlefyd Parkinson, ond maent yn debygol o fethu oherwydd eu treiddiad rhwystr gwaed-ymennydd gwael (BBB).

Dangoswyd bod dendrimers polyamidoamine â therfyniad hydrocsyl (heb atodi unrhyw ligandau targedu) yn croesi BBB â nam ar y safle lle mae niwro-lid ac yn cronni mewn microglia actifedig.

Felly, gall cydgysylltiad dendrimer o weithydd PPAR / deuol alluogi newid ffenoteip wedi'i dargedu ar ficroglia wedi'i actifadu. Yma rydym yn cyflwyno synthesis a nodweddu cyfuniad dendrimer-PPAR / deuol agonist (D-tesaglitazar).

In vitro, mae D-tesaglitazar yn achosi symudiad ffenoteip 'M1 i M2', yn lleihau secretion rhywogaethau ocsigen adweithiol, yn cynyddu mynegiant genynnau ar gyfer ffagocytosis a diraddiad ensymatig o broteinau pathogenig (ee -amyloid, -synuclein), ac yn cynyddu ffagocytosis -amyloid.

Mae'r canlyniadau hyn yn cefnogi datblygiad pellach o D-tesaglitazar tuag at gyfieithu ar gyfer clefydau niwroddirywiol lluosog, yn enwedig clefyd Alzheimer a Parkinson.

Rhagymadrodd

Yn yr Unol Daleithiau yn unig, ar hyn o bryd mae dros 5.3 miliwn o bobl â chlefyd Alzheimer (AD) ac 1 miliwn o bobl â chlefyd Parkinson (PD).1 Gan mai heneiddio yw'r ffactor risg mwyaf ar gyfer llawer o glefydau niwroddirywiol, mynychder a chost triniaeth ar gyfer y clefydau hyn yn parhau i gynyddu wrth i’r boblogaeth barhau i fynd yn hŷn.

At hynny, mae diffyg llwyddiant diweddar wrth ddatblygu cyffuriau newydd i drin y clefydau hyn wedi amlygu'r angen i ddatblygu therapïau arloesol.2,3 Mae'r methiannau clinigol hyn yn amlygu'r anawsterau wrth ddatblygu cyffur, gan gynnwys darparu crynodiad uchel o'r cyffur i'r ymennydd er mwyn bod yn effeithiol hebddo. achosi sgîl-effeithiau andwyol.

Mae clefydau niwroddirywiol fel AD a PD yn rhannu tair prif gydrannau niwropatholegol: niwro-llid, cronni protein pathogenig, a marwolaeth niwronaidd.4-7 Pobl afiach, cell imiwnedd gynhenid ​​​​yr ymennydd (themicroglia) yn gyson ffagocytose y proteinau wedi'u cam-blygu (ee -amyloid, -synuclein ) sy'n achosi marwolaeth niwronaidd wrth iddynt gael eu cynhyrchu, sy'n atal y agregau nodweddiadol rhag ffurfio.

Fodd bynnag, mewn pobl sy'n datblygu clefydau niwroddirywiol yn y pen draw, nid yw'r microglia bellach yn tynnu'r proteinau hyn yn effeithiol ac yn symud i ffenoteip proinflammatory sy'n gwaethygu'r afiechyd (a ddynodwyd yn nodweddiadol fel M1).

Er bod y dosbarthiad pro-llidiol / gwrthlidiol (M1 / M2) o actifadu microglial yn bennaf yn orsymleiddio sbectrwm polareiddio macrophage, mae'n dal i gael ei ddefnyddio fel enwad eang i ddisgrifio ffenoteip amlycaf microglia mewn niwro-llid ac ymateb i therapi.

M1-fel microglia yn rhyddhau rhywogaethau ocsigen adweithiol a chyfryngwyr ymfflamychol eraill sy'n cymell niwroal-marwolaeth ac yn gwaethygu patholeg afiechyd trwy gynyddu cynhyrchiad proteinau pathogenig (ee -amyloid, -synuclein).

At hynny, mynegir y prif ffactorau risg genetig ar gyfer datblygu AD (TREM2 ac APOE) ar lefelau uchel mewn microglia, a dangoswyd bod y llwybr TREM2 / APOE yn achosi newid ffenoteip amicogglial mewn AD, sglerosis ochrol amyotroffig (ALS), a sglerosis ymledol. modelau anifeiliaid.8

Mae'r canfyddiadau hyn ymhellach yn dangos rôl microglia yn y patholeg o glefydau niwroddirywiol dynol lluosog. Byddai dull o drin ffenoteip microglia yn galluogi ymchwilwyr i ddeall eu rôl mewn clefydau niwroddirywiol, yn ogystal â bod yn therapiwtig effeithiol o bosibl.

Mae newid microglia o M1 i ffenoteip gwrthlidiol a niwro-amddiffynnol (M2) wedi'i gynnig fel strategaeth therapiwtig i drin clefydau niwroddirywiol lluosog.5,6 Dangoswyd bod dau weithydd PPAR sydd wedi'u cymeradwyo gan FDA ar hyn o bryd, cyffuriau diabetes math II rosiglitazone a pioglitazone, yn achosi Newid ffenoteip M1 i M2 mewn macroffagau a microglia in vitro ac in vivo.

Dangoswyd bod 9,10 o weithyddion PPAR yn lleihau'r secretion o ocsigen adweithiol a achosir gan LPS trwy leihau gweithgaredd NF-κB trwy achosi diraddiad NF-κB ac allforio o'r cnewyllyn, yn ogystal â thraws-fesuriad ligand-ddibynnol.11

At hynny, mae astudiaethau epidemiolegol wedi dangos bod cleifion diabetes sy'n cymryd rosiglitazone neu pioglitazone mewn llai o risg o ddatblygu AD a PD.12 Yn dilyn hynny, ymchwiliwyd i rosiglitazone a pioglitazone trwy dreialon clinigol cam III ar gyfer AD, ond fethodd.13

Un esboniad tebygol am fethiant y treialon clinigol a grybwyllwyd uchod yw trafnidiaeth wael y cyffuriau hyn ar draws y rhwystr gwaed-ymennydd (BBB), gan gyfyngu ar nifer y cyffuriau a gyrhaeddodd ymennydd cleifion a gofrestrwyd yn y treialon clinigol hyn.14

Yn wir, amcangyfrifir bod y BBB yn atal tua 98% o'r holl gyffuriau moleciwl bach rhag cyrraedd yr ymennydd, a dim ond ffracsiwn o'r cyffur sy'n mynd i mewn i'r ymennydd sy'n cyrraedd themicroglia.15

Yn ogystal, mae PPAR yn dderbynnydd niwclear arall yn nheulu PPAR.16 Mae'n arddangos rôl mewn homeostasis lipid a rheoleiddio llid, a dangoswyd bod agonyddion PPAR hefyd yn arddangos effeithiau gwrthlidiol mewn microglia.

Mae astudiaethau clinigol sy'n defnyddio niwroddelweddu, dadansoddiad meinwe post-mortem, a biomarcwyr CSF wedi darparu tystiolaeth bod nam ar yBBB mewn AD a PD, yn ogystal â chlefydau niwroddirywiol eraill.

17 Dangoswyd bod dendrimers cynhyrchu polyamidoamine â therfyniad hydrocsyl (G4-PAMAM-OH) yn osgoi'r BBB â nam yn eu hanfod ac yn cronni mewn microglia actifedig heb fod angen targedu ligandau, ar ôl gweinyddu systemig mewn sawl model clefyd niwro-llid gwahanol , gan gynnwys mewn cnofilod, cwningod, cŵn, ac archesgobion annynol.18–28 Yn arwyddocaol, gellir gweinyddu G4-PAMAM-OH yn systemig a chroesi'r BBB mewn modelau clefyd sy'n tarfu'n ysgafn ar y BBB megis Syndrom Rett.29

Yn ogystal, mae maint y nifer sy'n derbyn G4-PAMAM-OH i'r ymennydd mewn cyfrannedd union â difrifoldeb y clefyd mewn model cwningen o barlys yr ymennydd.30 Mae gan dendrimers â therfyniad hydrocsyl y fantais o gael ei gyflenwi'n anfewnwthiol o'i gymharu â'r cyflenwad lleol ymledol iawn drwy y benglog sy'n ofynnol mewn astudiaethau blaenorol gyda nanoronynnau eraill megis poly-εcaprolactone a PEG, dendrimers PAMAM â gwefr negyddol, dotiau cwantwm, a nanofformiwleiddiadau sy'n cynnwys polyethyleneimin (PEI) a sylffad dextran.31-35

Yn ogystal, mae'r dendrimers hydrocsyl PAMAM hyn mewn sefyllfa ddelfrydol i'w cyfieithu oherwydd eu gallu i dyfu ac yn cael eu goddef yn dda proffil diogelwch in vivo.36–38 Oherwydd data effeithiolrwydd cyn-glinigol cadarnhaol, a (G{4-PAMAM-OH)-N- ar hyn o bryd mae acetyl-cysteine ​​conjugate yn cael ei werthuso mewn treialon clinigol cynnar ar gyfer adrenoleukodystroffi'r ymennydd plentyndod (NCT03500627) a chlefyd coronafeirws difrifol 2019 (COVID-19) llid cysylltiedig (NCT04458298).

Fe wnaethon ni astudio cyfuniad dendrimer-cyffur o tesaglitazar(Tesa) sy'n gysylltiedig â chynhyrchu -4 PAMAMdendrimer â therfyniad hydrocsyl. Mae Tesaglitazar yn weithydd PPAR / deuol grymus sy'n cyfuno effeithiau buddiol gweithyddion PPAR a PPAR. Mae'n cynnwys grŵp gweithredol asid carbocsilig ar gyfer cydlyniad cofalent i'r dendrimer ac i'w ryddhau wedyn.

Mae gitarau ychwanegol wedi'u datblygu a'u profi'n glinigol, ond dewiswyd Tesa oherwydd ei gymhareb gweithgaredd PPAR i PPAR fwy, strwythur cemegol cymharol syml, a phroffil diogelwch.39-43

Mae Tesa wedi cyrraedd treialon clinigol cam III o'r blaen ar gyfer diabetes math 2 yn Unol Daleithiau America ond methodd oherwydd gwenwyndra dos-ddibynnol, a allai gael ei atal trwy leihau'r dos angenrheidiol o weinyddiaeth gan y cyflenwad dendrimer rheoledig.39,40,44Gan fod Tesa yn a PPAR / gweithydd deuol, gallai ei ddanfoniad wedi'i dargedu i ficroglia actifedig ar safle niwro-llid fod yn fuddiol iawn.

Yma, rydym yn dangos synthesis a nodweddu cyfuniad dendrimer-tesaglitazar (D-Tesa) ac yn dangos gallu'r cyfansoddyn hwn i gymell symudiad ffenoteip 'M1 iM2' mewn microglia a gwella ffagocytosis o fflworoleuol -amyloid wedi'i labelu.

Defnyddiau a dulliau

Defnyddiau

1-[3-(Dimethylamino)propyl]-3-methyl carbodiimide methiodide(EDC), 4(dimethylamino)pyridine (DMAP), CuSO4·5H2O,sodiwm ascorbate, asid hecsynoic ac albwmin serwm buchol (BSA) eu prynu gan Sigma Aldrich US a'u defnyddio yn ôl y derbyn (St Louis, MO).

Cafwyd Tesaglitazar gan AstaTech Inc. (Bryste, PA). Derbyniwyd dendrimer PAMAM craidd ethylenediamine (cenhedlaeth 4 gyda 64 o grwpiau diwedd hydroxyl) gan Dendritech Inc. (Canolbarth, MI) fel datrysiad inmethanol.

Roedd y dendrimer yn cael ei storio mewn methanol ar 4 gradd a chafodd methanol ei anweddu cyn ei ddefnyddio. Prynwyd pilen dialysis gyda thoriad pwysau moleciwlaidd (MWCO) o 1 kDa oddi wrth Spectrum Laboratories Inc. (New Brunswick, NJ).

Defnyddiwyd yr holl doddyddion eraill fel y'u derbyniwyd yn eu ffurfiau anhydrus. Cynhaliwyd yr holl adweithiau, ac eithrio'r adweithiau clicio cycloaddition alkyne-azide catalyzed (CuAAC) o dan amodau anhydrus mewn cyfrwng organig gyda llestri gwydr wedi'u sychu yn y popty o dan nitrogen anadweithiol. awyrgylch.

Ar gyfer meithriniad celloedd: cafwyd Adweithydd Eryr Addasedig Dulbecco (DMEM), serwm buchol y ffetws (FBS), penisilin-streptomycin (P/S), 0.05% trypsin-EDTA, ac adweithydd MTT gan Invitrogen(Carlsbad, CA). , UDA).

Cafwyd adweithydd Griess gan Promega (Madison, WI) a chafwyd TNF-ELISA gan R&D Systems (Minneapolis, MN). Prynwyd methanol gradd ddadansoddol gan Sigma-Aldrich. Cafwyd Trypan glas gan Corning (Manassas, VA, UDA).

Gweithdrefnau synthesis ar gyfer cyfuniadau D-Tesa
Cafodd mono azide tetraethylen glycol (2) ei syntheseiddio gan ddefnyddio protocol a gyhoeddwyd yn flaenorol.45

Synthesis a phuro Tesa-TEG-azide (3).
Cafodd Tesa (950 mg, 2.32 mmol) ei hydoddi mewn 10 ml dimethylformamide (DMF). I'r toddiant wedi'i droi hwn, ychwanegwyd mono-asid tetramethylene glycol (2, 662.1 mg, 3.02 mmol) mewn DMF (1 ml) yn dropwise. Yna ychwanegwyd DMAP (255.4 mg, 2.09 mmol) ac EDC (577.5 mg, 3.02 mmol) at y cymysgedd adwaith, a chynhyrchwyd yr adwaith o dan purge nitrogen ar dymheredd ystafell am 24 awr.

Cafodd yr adwaith ei fonitro gan ddefnyddio cromatograffaeth haen denau a chromatograffaeth hylif perfformiad uchel (HPLC). Gwanhawyd cymysgedd yr adwaith â 100 ml dichloromethane (DCM) a symudwyd cymysgedd yr adwaith crai i mewn i dwndi gwahanu, ac yna golchwyd yr haen organig deirgwaith gyda hydoddiant sodiwm bicarbonad dirlawn, ac yna hydoddiant amoniwm clorid dirlawn ac yn olaf gyda heli.

Yna cafodd yr haen organig ei sychu ag anhydrussodium sylffad. Yna tynnwyd y toddydd yn yr haen organig gan ddefnyddio anweddydd cylchdro, a chafodd yr hydoddiant ei ail-hydoddi mewn 3 ml DCM a'i amsugno ar gel silica i'w buro â system cromatograffaeth CombiFlash® gan ddefnyddio dull graddiant gydag asetad / hecsan ethyl fel y toddyddion i gynhyrchu 3 mor glir - olew melyn.

Mae'r cynnyrch pur a ddymunir wedi'i anweddu ar tua 30–40% asetad ethyl. (Cynnyrch: 70%) 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.27 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.15(d, J=1.9 Hz, 2H), 7.08 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.73 (d, J=8.6 Hz,2H), 4.25–4.14 (m, 2H), 4.07 (t, J {{ 33}}.8 Hz, 2H), 3.94 (dd, J =7.8, 5.2 Hz, 1H), 3.67–3.47 (m, 14H), 3.30 (dd, J=8.7 , 3.8 Hz,2H), 3.06 (s, 3H), 3.02 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.91–2.84 (m, 2H),1.08 (t, J=7 .0 Hz, 3H).ESI-MS: damcaniaethol C28H39N3O10S: 609.24, a gafwyd (M + 1): 610.13.

Synthesis a phuro D-YNE (5).

(480 mg, 4.22 mmol) ei ychwanegu at hydoddiant wedi'i droi o G4-PAMAM-OH (2.5 g, 0.176 mmol) mewn DMF anhydrus 20 ml. Ychwanegwyd cymysgedd tothis, DMAP (430 mg, 3.52 mmol) ac EDC (1 g, 5.28 mmol).

Mae'r cymysgedd adwaith yn cael ei droi o dan purge nitrogen am 24 awr ar dymheredd ystafell. Ar ôl cwblhau'r adwaith, trosglwyddwyd cymysgedd yr adwaith i tiwb dialysis 1000 MWCO Perfformiwyd dialysis DMF am 24 awr, a newidiwyd y DMF tua bob chwe awr.

Yna perfformiwyd dialysis gyda dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio (DI) am 24 awr, gyda'r dŵr yn cael ei newid bob chwe awr. Yn olaf, cafodd cynnwys y tiwb dialysis canlyniadol ei lyoffileiddio am 48 awr, gan gynhyrchu powdr gwyn, blewog. (Cynnyrch: 61%). arwyneb dendrimer OH), 4.01 (t,ester –CH2), 3.32 (m, dendrimer –CH2), 3.06 (m, cysylltydd dendrimerand –CH2), 2.85–2.58 (m, dendrimer –CH2), 2.56–1.89(m, dendrimer a chysylltydd –CH2), 1.78–1.61 (m, cysylltydd –CH2).Synthesis a phuro D-Tesa (6).

Ychwanegwyd Tesa-TEG-azide (3,177.8 mg, 0.3{{10}} 3 mmol) at gymysgedd wedi'i droi o D-YNE(5, 35{{2{{27}) }}} mg, 0.023 mmol) mewn 5 ml o gymysgedd 1: 1 o tetrahydrofuran (THF) a dŵr gyda 0.5 ml o DMF mewn ffiol micro-adweithydd diogel 20 ml. Ar gyfer adwaith clicio CuAAC, ychwanegwyd coprsulfate pentahydrate (11.6 mg, 0.0467 mmol) a (+) - sodiwm-Lascorbate (9.3 mg, 0.0467 mmol) at y cymysgedd adwaith.

Seliwyd y ffiol, ac yna gosodwyd y llestr adwaith mewn adweithydd microdon Biotage® Initiator a'i adweithio o dan ymbelydredd microdon 20 W gan ei droi am 8 awr ar 50 gradd . Trosglwyddwyd y cymysgedd adwaith i diwb dialysis 1000 MWCO, a pherfformiwyd dialysis DMF am 24 awr, gyda DMF yn cael ei ddisodli gan doddydd ffres tua bob 4 awr.

Yna, trosglwyddwyd cynnwys y tiwb dialysis i tiwb afalcon, ac ychwanegwyd swm cyfatebol o ddŵr DI.Yn ogystal, ychwanegwyd 200 µl o hydoddiant halen disodiwm asid ethylenediaminetetraacetic at gynnwys y tiwb hebog.

Yna gosodwyd y cymysgedd hwn mewn tiwb dialysis 1000 MWCO newydd, a pherfformiwyd dialysis am 12 awr mewn 1000 ml DIwater gyda hydoddiant EDTA wedi'i ychwanegu ac yna'r dialysis dŵr am 12 awr.

Yna cafodd y cymysgedd ei lyoffileiddio am 48 awr gan arwain at bowdr gwyn, blewog. (Cynnyrch: 64%) 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.2–7.6 (m, dendrimer internalamide H), 7.36 (d, Tesa ArH), 7.21 (d, Tesa ArH), 7.03 (d, TesaArH), 6.76 (d, Tesa ArH), 4.37 (s, Tesa H), 4.18–4.04 (m, cysylltyddH), 3.96 (dd, Tesa a chysylltydd H), 3.70 (m, Tesa a chysylltydd H) ,3.58–3.14 (m, dendrimer –CH2), 3.14–2.86 (m, dendrimer–CH2), 2.87–2.49 (m, dendrimer a chysylltydd –CH2), 2.25 (m, dendrimer –CH2) , 1.82–1.67 (m, cysylltydd –CH2), 0.97 (t, Tesa –CH3).

Technegau nodweddu

Cyseiniant magnetig niwclear (NMR). Cafodd sbectra NMR eu recordio ar sbectromedr Bruker 500 MHz ar dymheredd ystafell. Adroddir sifftiau cemegol proton (δ) mewn ppm.

Defnyddiwyd 1H NMR i bennu nifer y moleciwlau Tesa sydd ynghlwm wrth bob moleciwl o D-Tesa trwy ddull integreiddio proton, trwy gymharu brigau protonau amid mewnol dendrimer ar δ 7.6–8.2 ppm â phrotonau aromatig Tesa ar δ 7.36–6.76 ppma phrotonau methyl o Tesa yn y rhanbarth aliffatig.High-perfformiad cromatograffaeth hylif (HPLC).

Defnyddiwyd HPLC (Waters Corporation, Milford, Massachusetts) gyda phwmp deuaidd a1525, degasser AF In-Line, samplwr awtomatig 717 a mwy, synhwyrydd arae ffotodiod 2998, a synhwyrydd fflworoleuedd aml-λ 2475 wedi'i ryngwynebu â meddalwedd Waters Empower.

Defnyddiwyd colofn cam cefn Cymesuredd C18 (Tosoh, Japan) gyda maint gronynnau 5 μm, hyd 25 cm, a diamedr mewnol 4.6 mm. Cafodd cyfansoddion eu monitro ar 210 nm a 254 nm gan ddefnyddio'r synwyryddion PDA.

Hydoddydd A oedd dŵr graddHPLC gyda 0.1% asid trifluoroacetig (TFA), a toddydd B oedd asetonitrile (ACN) gyda 5% dŵr a 0.1% TFA. Dechreuodd y dull a ddefnyddiwyd ar 1{ {7}}0 : 0 (ACN: dŵr), wedi gostwng i 10: 90 (dŵr: ACN) mewn 5 munud, wedi aros ar y polaredd hwnnw am 15 munud, a dychwelyd i 100 : 0 (ACN: dŵr) mewn 5 munud munudau.Cafodd y gyfradd llif ei chynnal ar 1 ml min−1.Sbectrosgopeg torfol.

Perfformiwyd ESI-MS ar sbectromedr màs BrukermicroTOF-II gan ddefnyddio acetonitrile/dŵr (9: 1) fel system hydoddydd. Defnyddiwyd yr ïonau moleciwlaidd fel brigau protonedig[M + nH]n+ neu adducts [M + nX]n+ (X=Na, K, neu NH4) i gadarnhau'r fformiwla empirig.

Gwasgariad golau deinamig a photensial ζ. Defnyddiwyd Zetasizer NanoZS (Malvern Instrument Ltd, Swydd Gaerwrangon, y DU) â laser He–Ne a50 mW (633 nm) i bennu maint gronynnau a dosbarthiad ζ-posibl. Cafodd D-Tesa ei hydoddi mewn dŵr inDI i grynodiad o 0.2 mg ml−1 ar gyfer DLS ac mewn 10 mM sodiwm clorid i grynodiad o 0.1 mg ml−1 forζ-potensial.

Gwnaed y mesuriadau ar 25 gradd, gan ddefnyddio ongl gwasgariad o 173 gradd fel y disgrifiwyd yn flaenorol.27,46Astudiaeth rhyddhau cyffuriau. Diddymwyd D-Tesa mewn crynodiad o 1 mg ml -1 naill ai mewn hydoddiant byffer ffosffad (pH 7.4) amodau plasma tomimig neu hydoddiant sodiwm sitrad (pH 5.5) i ddynwared cyflyrau lysosomaidd.

Ychwanegwyd esterasau o afu mochyn (o Sigma Aldrich) at yr hydoddiant sodiwm sitrad ar ddechrau'r astudiaeth rhyddhau a chawsant eu hailgyflenwi tua bob 3 diwrnod yn ystod yr astudiaeth.

Roedd pob ffiol yn cynnwys sampl 15 ml ac fe'u hysgwyd yn barhaus ar 37 gradd trwy gydol yr arbrawf. Ar wahanol adegau, casglwyd 200 µl sampl dyblyg o bob pH ac yna diffoddwyd y gweithgaredd esteras trwy ychwanegu 200 µl ofmethanol. Samplau pwynt amser sero oedd y rheolaeth.

Cafodd y samplau eu storio ar −80 gradd er mwyn osgoi unrhyw hydrolysis ymhellach. Dadansoddwyd y samplau ymhellach gan HPLC a chyfrifwyd yr ardal o dan y gromlin (sef 210 nm) ar gyfer yr uchafbwynt cyffuriau rhydd. Roedd cydberthynas rhwng yr ardal o dan y gromlin a faint o gyffur a ryddhawyd trwy ddefnyddio cromlin raddnodi lle roedd crynodiadau hysbys o Tesa am ddim yn cael eu rhedeg ar yr HPLC ar 210 nm.

For more information:1950477648nn@gmail.com