Gwahaniaethau o ran Cyfansoddiad Ac Effeithiolrwydd Meddyginiaethol Cynhyrchion Crai A Chynhyrchion Gwin wedi'u Prosesu ag Stêm O Cistanches Herba

Crynodeb:

AmcanCymharu'r newidiadau mewn cyfansoddiad cemegol ac effeithiolrwydd meddyginiaethol Roucongrong (Cistanches Herba) cyn ac ar ôl prosesu, er mwyn egluro'r egwyddor o stiwio â gwin.

Dulliau Cymhwyswyd LC-MS i nodi'r mathau o gyfansoddiad cemegol cyn ac ar ôl cymysgedd o Cistanches Herba, ynghyd â dadansoddiad ystadegol aml-amrywedd i ddod o hyd i'r cydrannau anghyfartaledd cyn ac ar ôl stiwio â gwin. Profwyd y gwahaniaeth effeithiolrwydd gan y model llygod mawr o ddiffyg cortisonekidney yang hydrogenaidd.

CanlyniadauCanfuwyd cyfanswm o 45 o gydrannau cemegol oCistanches samplau Herba; Roedd y cyfansoddion yn cyfrannu at y gwahaniaethau rhwngCistanches Herba a Cistanches Herba wedi'i stiwio â gwinynEchinacoside, verbascoside, isoacteosideand tubuloside B; Mae cyfanswm dyfyniad glycosidau ffenylethanoid o Cistanches Herba yn cael effaith well ar wella model llygod mawr gyda diffyg aren yang na Cistanches Herba wedi'i stiwio â gwin. Casgliad Mae cyfansoddiad Cistanche yn cael ei newid ar ôl cael ei stiwio â gwin, ac mae'r effaith ar ddiffyg yr aren yang wedi'i wella. Efallai y bydd cynhwysion trawsnewid o Cistanches Herbato wedi'u stiwio â gwin Cistanches Herba yn gynhwysion gweithredol sy'n atgyfnerthu'r aren ac yn cynnal yang.

Geiriau allweddol: Cistanches Herba; Cistanches Herba wedi'i stiwio â gwin;diffyg yang arennau;echinacoside;verbscoside; isoacteoside; tubuloside B

PERYGLON CISTANCHE O ANSAWDD UCHEL AR WERTH

Gwasanaeth Cefnogol o Wecistanche

E-bost:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Ffôn:+86 15292862950

Fe'i gelwir yn "ginseng" ac fe'i dosberthir yn bennaf ym Mongolia Fewnol, Ningxia (Azuqi), Gansu (Changma), Xinjiang a rhanbarthau eraill [1]. Mae cistanche yn gynnes ei natur, yn flas melys a hallt, ac yn mynd i mewn i meridians yr arennau a'r coluddyn mawr. Mae'n cael effeithiau maethu'r afu a'r aren, yn llesol i'r hanfod a'r gwaed, ac yn gwlychu'r coluddion ac yn lleddfu rhwymedd. Gellir ei ddefnyddio ar gyfer diffyg yang arennau, analluedd ac anffrwythlondeb, dolur yn y canol a'r pengliniau, gwendid y cyhyrau a'r esgyrn, coluddion sych a rhwymedd [2]. Mae ymchwil fodern yn dangos bod y coesau cigog gyda dail graddfa Cistanche yn bennaf yn cynnwys amrywiaeth o gydrannau cemegol megis glycosidau ffenylethanol, terpenau ether cyclopentane a'u glycosidau, lignans, siwgrau, ac ati [3], ac mae ganddynt effeithiau ffarmacolegol lluosog megisgwrth-heneiddio,gwrthocsidiol,gwrth-ddementia,gwrth-blinder, a lleithio'r coluddion a lleddfu rhwymedd [4].

Ar ôl cael ei stiwio â gwin, mae effaith Cistanche yn tynhau'r arennau ac yn gwella yang yn cael ei wella. Nid yw'r egwyddor prosesu wedi'i hesbonio'n glir. Roedd Fan Yanan et al. Astudiodd [5-7] effeithiau Cistanche ar ymgarthu llygod mawr, gweithrediad imiwn, niwrodrosglwyddyddion enterig ac ymadroddion genynnau cysylltiedig cyn ac ar ôl prosesu. Mae Da et al. defnyddio dylanwad glycosidau ffenylethanol cyn ac ar ôl prosesu i egluro ei egwyddor prosesu; Dywedodd Zhang Chao et al. [8] defnyddio'r newidiadau yng nghynnwys glycosidau ffenylethanol cyn ac ar ôl prosesu i egluro'r egwyddor prosesu; Dywedodd Zhang Shuyun et al. [9] defnyddio'r newidiadau yn y cynnwys betaine cyn ac ar ôl prosesu i egluro effaith prosesu ar Cistanche. Mae'r llenyddiaeth bresennol ar brosesu Cistanche yn canolbwyntio'n bennaf ar ffarmacoleg, ac mae'r ymchwil ar gydrannau hefyd yn canolbwyntio ar y newidiadau yng nghynnwys cydrannau penodol, heb astudiaeth systematig o wahaniaethau cydrannau. Defnyddiodd yr arbrawf hwn dechnoleg cromatograffaeth hylifol-sbectrometreg màs (LC-MS) ynghyd â dadansoddiad ystadegol aml-amrywedd i nodi'r cydrannau cemegol yn Cistanche, i ddarganfod y gwahaniaeth marcwyr rhwng Cistanche amrwd a chynhyrchion wedi'u stiwio â gwin, ac i astudio'r gwahaniaeth yn effeithiolrwydd Cistanche amrwd a chynhyrchion wedi'u stiwio â gwin trwy fodel llygod mawr o ddiffyg aren yang a achosir gan hydrocortisone, er mwyn egluro'r sail berthnasolCistanche yn tonifying yr aren a hyrwyddo yangac egwyddor prosesu Cistanche wedi'i stiwio â gwin.

PERYGLON CISTANCHE O ANSAWDD UCHEL AR WERTH

1 Defnyddiau

1.1 Offerynau

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL maes electrostatig ïon tandem trap sbectromedr màs cydraniad uchel (Thermo Fisher Scientific, UDA), gweithfan Theraio Xcalibre; Cydbwysedd electronig BT125D 1/100000 (System Offeryn Sartorius, yr Almaen); KQ500DE CNC ultrasonic glanach (Kunshan Ultrasonic Offeryn Co, Ltd); XHF-D gwasgarwr cyflymder uchel (Guangzhou Hu Ruiming Offeryn Co, Ltd); Darllenydd microplate Multiskan FC (Thermo Scientific); HC-3518 allgyrchydd cyflym (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B recordydd gweithgaredd gwirfoddol llygod mawr amlswyddogaethol (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Cyffuriau

Methanol gradd sbectrometreg màs (Fisher); asid fformig gradd sbectrometreg màs (ffracsiwn màs 99%, Sigma Aldrich); dŵr (dŵr distyll Watson); Jinkui Shenqi Pills (Beijing Tongrentang Technology Development Co, Ltd Ffatri Fferyllol, rhif swp 1701653); halen sodiwm hydrocortisone succinate (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co, Ltd., rhif swp 011705067); prynwyd pecyn superoxide dismutase (SOD) (rhif swp 20170115) a phecyn malondialdehyde (MDA) (rhif swp 20170117) gan Nanjing Jiancheng Biotechnology Co, Ltd; penderfynwyd testosteron (T) ac estradiol (E2) yng Nghanolfan Arolygu Ansawdd Qingdao Kechuang, a phenderfynwyd creatinin (CREA) a nitrogen urea gwaed (BUN) yng Nghanolfan Dadansoddi a Phrofi Prifysgol Feddygol Inner Mongolia.

1.3 Anifeiliaid

Prynwyd 100 o lygod mawr SD gwrywaidd, yn pwyso 180-200 g, o Fferm Anifeiliaid Arbrofol Xinglong yn Ardal Haidian, Beijing, rhif trwydded: SCXK (Beijing) 2016-0003. Mae'r arbrawf anifeiliaid hwn wedi'i gymeradwyo gan Bwyllgor Moeseg Prifysgol Meddygaeth Tsieineaidd Beijing, rhif moeseg: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Samplau

Nodwyd chwe swp o Cistanche deserticola fel rhai dilys gan yr Athro Li Xiangri o Ysgol Meddygaeth Tsieineaidd, Prifysgol Meddygaeth Tsieineaidd Beijing, ac roeddent yn deillio o'r coesau cigog sych gyda dail graddfa Cistanche deserticola YC Ma, planhigyn o'r teulu Orobanchaceae. Mae gwybodaeth fanwl am y samplau i’w gweld yn Nhabl 1.

Tabl 1 Taflen wybodaeth o samplau Cistanches Herba

2 Dull

2.1 Paratoi sampl

2.1.1 Paratoi cynhyrchion crai Cymerwch Cistanche deserticola glân, ei feddalu, ei dorri'n dafelli trwchus, a'i sychu.

2.1.2 Paratoi cynhyrchion wedi'u stiwio â gwin

Cymerwch 100 g o dafelli Cistanche deserticola, ychwanegwch 30 ml o win reis, cymysgwch yn dda, a'i stiwio nes bod y gwin wedi'i amsugno. Stiwiwch ef mewn dŵr am 12 h, tynnwch ef allan a gadewch iddo oeri ychydig, a'i sychu. Gweler Ffigur 1 am samplau Cistanche deserticola amrwd a Cistanche deserticola wedi'u stiwio â gwin.

2.2 Astudiaeth ar y gwahaniaeth rhwng cydrannau Cistanche deserticola cyn ac ar ôl stiwio mewn gwin

2.2.1 Paratoi datrysiad

Cymerwch tua 65-.2 g o bowdr sampl sych (wedi'i basio trwy ridyll rhwyll 65-), pwyso'n gywir, ei roi mewn fflasg gyfeintiol frown 50 mL, ychwanegu 25 mL o 50% methanol toddiant dyfrllyd, selio'n dynn, pwyso'r màs, socian am 30 munud, trin yn ultrasonically am 40 munud (pŵer 250 W, amlder 35 kHz), oeri, pwyso eto, ychwanegu hydoddiant dyfrllyd 50% methanol i wneud iawn am y màs coll, ysgwyd wel, gadewch i chi sefyll, hidlwch y supernatant trwy bilen hidlo microfandyllog 0.22 μm, a gosodwch yr hidlydd mewn potel cyfnod hylif brown i gael yr ateb.

PERYGLON CISTANCHE O ANSAWDD UCHEL AR WERTH

2.2.2 Cyflyrau cromatograffig

Dyfroedd ACQUITY UPLCTM BEH C18 colofn gromatograffig (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm), tymheredd colofn o 35 gradd ; tymheredd siambr sampl o 10 gradd, cyfaint pigiad sampl o 3 μL, methanol (A) -0.1% hydoddiant dyfrllyd asid fformig (B) fel cyfnod symudol, elution graddiant: 0-4 min, 10%{ {13}} % methanol; 4-18 mun, 26%-40% methanol; 18-24 mun, 40%-100% methanol; 24-28 mun, 100% methanol. Y gyfradd llif cyfaint oedd 0.3 mL/munud, a'r donfedd canfod oedd 330 nm.

2.2.3 Amodau sbectrometreg màs

Defnyddiwyd ffynhonnell ionization electrospray (ESI), sganio modd ïon negyddol, tymheredd capilari oedd 350 gradd, cyfradd llif cyfaint nwy gwain oedd 30 arb, cyfradd llif cyfaint nwy ategol oedd 10 arb, foltedd chwistrellu oedd 3

KV, foltedd capilari oedd −35 V, foltedd lens tiwb oedd −110 V, ystod sganio oedd m/z 100-1 000, system casglu data oedd Xcalibur 2.1.

2.2.4 Dadansoddiad o'r prif gydrannau (PCA)

Ar ôl cael y matrics dau ddimensiwn o barau data amser cadw màs cywir, bydd y panel offeryn yn arddangos yr holl wybodaeth amser cadw gywir a fewnforiwyd yn awtomatig, a bydd dull PCA y modiwl ystadegau estynedig yn cael ei ddefnyddio i'w ddadansoddi.

2.2.5 Dadansoddiad gwahaniaethol sgwariau lleiaf orthogonol (OPLS-DA) Mae LCMS yn cyfuno gwahaniad uchel cromatograffaeth hylif gyda sensitifrwydd uchel sbectrometreg màs. Mae'r data a gasglwyd yn eithaf mawr, ac mae angen dadansoddiad ystadegol aml-amrywedd i brosesu'r data. Mae OPLS-DA yn rhannu'r data yn ddau grŵp ac yn defnyddio model ystadegol dan oruchwyliaeth i gael nifer fawr o sbectra orthogonalized, sy'n dangos yn glir y gwahaniaethau rhwng y ddau grŵp o samplau. Yn y fformat ffigwr S-Plot ychwanegol, mae pob pwynt yn cynrychioli pâr data amser cadw màs cywir, mae'r echel X yn cynrychioli'r newidyn, po bellaf yw'r pwynt data o'r pwynt sero, y mwyaf yw cyfraniad y pwynt at y gwahaniaeth sampl ; mae'r echel Y yn cynrychioli'r gydberthynas rhwng samplau yn yr un grŵp sampl, po bellaf yw'r pâr data màs ac amser cadw cywir o'r pwynt sero, y cryfaf yw'r gydberthynas. Felly, mae'r parau data amser cadw cywir màs ar ddau ben y gromlin siâp S yn cynrychioli'r ïonau nodweddiadol mwyaf dibynadwy o bob grŵp sampl.

PERYGLON CISTANCHE O ANSAWDD UCHEL AR WERTH

2.2.6 Dadansoddi adeiledd sbectrometreg màs

Ar ôl cael yr ïonau nodweddiadol, perfformiwyd y cyfansoddiad elfen a'r paru cyfansawdd trwy gyfrifo'r union fàs moleciwlaidd cymharol a chyfuno'r gronfa ddata bresennol a llenyddiaeth berthnasol i nodi'r cydrannau gwahaniaethol.

2.3 Astudiaeth ar y gwahaniaeth mewn effeithiolrwydd cyn ac ar ôl stiwio gyda gwin

2.3.1 Paratoi dyfyniad Cistanche deserticola

Echdynnwyd Cistanche deserticola (rhif swp 160901) a'r powdr Cistanche deserticola cyfatebol wedi'i stiwio â gwin yn unol â'r amodau o dan "2.2.1", wedi'i hidlo ar ôl triniaeth ultrasonic, a ailadroddwyd ddwywaith, cyfunwyd y hidlif, wedi'i grynhoi gan ddistylliad gwactod, a rhewi- sych.

2.3.2 Grwpio arbrofion anifeiliaid a rhoi cyffuriau

Ffig. 1 Cistanches Herba A a Cistanches wedi'u stiwio â gwin Herba B

(1) Grwpio: Roedd llygod mawr yn cael mynediad am ddim i ddŵr a diet. Ar ôl 1 wythnos o fwydo addasol, fe'u rhannwyd ar hap yn 5 grŵp (Tabl 2), gyda 10 llygod mawr ym mhob grŵp, sef grŵp arferol, grŵp model, grŵp Cistanche deserticola amrwd (PR), grŵp deserticola Cistanche wedi'i stiwio â gwin (PW) , a rheolaeth gadarnhaol grŵp Pill Jinkui Shenqi (JK). (2) Modelu: Ac eithrio'r grŵp arferol, chwistrellwyd y pedwar grŵp arall i gyd â chwistrelliad hydrocortisone sodium succinate im, gyda dos o 20 mg / kg, am 14 diwrnod yn olynol. Chwistrellwyd y grŵp arferol â'r un dos o halwynog arferol. Gwelwyd cyflwr cyffredinol y llygod mawr ym mhob grŵp i benderfynu a oeddent yn dangos symptomau fel ofn oerfel, hoffter o gynhesrwydd, breichiau a choesau oer, wrin clir a hir, cyrlio i fyny a bwa yn ôl, gwallt diflas a blêr, ac iselder meddwl. Ar yr un pryd, mesurwyd pwysau'r corff, nifer y gweithgareddau digymell, cymeriant bwyd, cymeriant dŵr, allbwn wrin a dangosyddion eraill y llygod mawr ym mhob grŵp.

(3) Gweinyddu: Cyfrifwyd dos llygod mawr yn seiliedig ar y dos clinigol o Jinkui Shenqi Pills a Cistanche deserticola. Y dos ar gyfer pob grŵp Cistanche deserticola oedd 1.80 g/kg o ran swm y cyffur amrwd. Dangosir y dos penodol yn Nhabl 2. Paratowyd pob darn o Cistanche deserticola a Jinkui Shenqi Pills yn hydoddiannau o grynodiad penodol gyda dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio. Gweinyddwyd yr hydoddiant yn fewngastrig bob dydd gyda chyfaint intragastrically o 10 ml / kg am 30 diwrnod yn olynol. Roedd y grŵp arferol a'r grŵp model yn cael eu gweinyddu'n fewngastrig gyda chyfaint cyfartal o ddŵr wedi'i ddadïoneiddio bob dydd. Roedd pwysau'r corff yn cael ei fesur yn wythnosol, ac addaswyd y cyfaint intragastrically yn ôl pwysau corff y llygod mawr. Ar ôl y weinyddiaeth, cafodd y llygod mawr eu cyflymu am 12 h. Ar ôl anesthesia pentobarbital, casglwyd gwaed o'r aorta abdomenol ar gyfer canfod mynegai serwm. Tynnwyd yr arennau, y ceilliau, yr epididymis, y fesiglau arloesol a'r prostad er mwyn canfod mynegai perthnasol.