Effeithiau Modiwlaidd Deuol Diosmin Ar Brosesau Ffurfio Cerrig Arennau Calsiwm Oxalate: Crisialu, Twf, Cydgrynhoad, Adlyniad Cell Grisial, Mewnoliad i Gelloedd Tiwbaidd Arennol, A Goresgyniad Trwy Fatrics Allgellog
Mar 16, 2022
am ragor o wybodaeth:ali.ma@wecistanche.com
Supaporn Khamchuna,b,c,1, Sunisa Yoodeea,1, Visitth Thongboonkerda,*
aUned Proteomeg Feddygol, Swyddfa Ymchwil a Datblygu, Cyfadran Meddygaeth Ysbyty Siriraj, Prifysgol Mahidol, Bangkok 10700, Gwlad Thai
bAdran Technoleg Feddygol, Ysgol Gwyddorau Perthynol i Iechyd, Prifysgol Phayao, Phayao 56000, Gwlad Thai
cUned Ragoriaeth mewn Biofeddygaeth Moleciwlaidd Integreiddiol, Ysgol Gwyddorau Perthynol i Iechyd, Prifysgol Phayao, Phayao 56000, Gwlad Thai
Geiriau allweddol: cyfansawdd bioactif, Flavonoid, Atalydd, Modulator, Nephrolithiasis, Hyrwyddwr, Urolithiasis
ABSENOLDEB
Diosminyn glycoside flavone naturiol (bioflavonoid) a geir mewn ffrwythau a phlanhigion gyda nifer o weithgareddau ffarmacolegol. Fe'i defnyddiwyd yn helaeth fel atodiad dietegol neu asiant therapiwtig mewn amrywiol glefydau / anhwylderau. Er ei fod yn cael ei argymell, mae tystiolaeth o'i fecanweithiau amddiffynnol yn erbynarenroedd clefyd carreg (nephrolithiasis/ urolithiasis), yn enwedig calsiwm oxalate (CaOx) monohydrate (COM), sef y math mwyaf cyffredin, yn aneglur o hyd. Yn yr astudiaeth hon, gwnaethom werthuso effeithiau'r rhain yn systematigdiosmin(yn 2.5–160 nM) ar wahanol gamau oarenprosesau ffurfio cerrig, gan gynnwys crisialu COM, twf grisial, agregu, adlyniad cell grisial, mewnoli i gelloedd tiwbaidd arennol a goresgyniad trwy fatrics allgellog (ECM). Dangosodd y canlyniadau hynnydiosminwedi cael effeithiau modiwleiddio dibynnol ar ddos ar yr holl brosesau cerrig arennau COM y soniwyd amdanynt.Diosmincynyddodd nifer a màs grisial COM yn sylweddol yn ystod crisialu, ond lleihau maint a thwf y grisial. Tradiosminhyrwyddo agregu grisial, mae'n atal adlyniad grisial-gell a mewnoli i mewn i gelloedd tiwbaidd arennol. Yn olaf, roedd diosmin yn hyrwyddo goresgyniad grisial trwy'r ECM. Mae ein data yn darparu tystiolaeth sy'n dangos effeithiau llesteirio a hyrwyddo diosmin ar COMarenprosesau ffurfio cerrig. Yn seiliedig ar y gweithgareddau modiwleiddio deuol hyn o diosmin, mae ei rôl gwrth-urolithiasis yn amheus a dylid bod yn ofalus i'w ddefnyddio mewnarenclefyd y garreg.
1. Rhagymadrodd
DiosminBioflavonoid naturiol yw (3′,5,7-trihydroxy-4′-methoxyflavone-7-rhamnoglucoside) a geir yn gyffredin mewn gwahanol blanhigion a ffrwythau, Sitrws spp yn bennaf. [1,2]. Gellir ei syntheseiddio neu ei ddeillio o'r flavonoid arall, hesperidin [1,2]. Mae Diosmin yn unig neu mewn cyfuniad â hesperidin yn cael ei ddefnyddio'n helaeth fel cyffur fflebotropig ar gyfer trin anhwylderau gwythiennol a lymffatig megis annigonolrwydd gwythiennol cronig a hemorrhoids [3,4]. Yn ogystal, mae diosmin yn arddangos nifer o weithgareddau biolegol a ffarmacolegol eraill, gan gynnwys gweithgareddau gwrthocsidiol a gwrthlidiol [5,6], eiddo gwrth-fwtagenig a gwrth-neoplastig [7,8], effeithiau gwrthfiotig [9], eiddo gwrth-hyperglycemig. 10], ac effeithiau amddiffynnol yn erbyn difrod aml-organ, h.y.
cardiofasgwlaidd [11], retina [12],aren, anaf i'r afu a'r ymennydd [13].
Arennauclefyd carreg (neu nephrolithiasis/urolithiasis) yn cael ei achosi gan y calcwli solet sy'n cael ei ddatblygu a'i ddyddodi y tu mewn i'r aren ac mae'n effeithio ar bobl ym mhob rhan o'r byd gyda chyfradd ail-ddigwyddiad uchel [14–17]. Ymhlith yr holl grisialau achosol amrywiol, calsiwm oxalate (CaOx), yn enwedig ffurf monohydrate (COM), yw'r elfen grisialog fwyaf pathogenig a mwyaf cyffredin a geir yn y ffurfwyr cerrig (cleifion â cherrig arennau) [18]. Yn fecanyddol, crisialau COM sydd â'r gallu gludiog mwyaf pwerus a'r effeithiau cytotocsig mwyaf ar gelloedd epithelial tiwbaidd arennol [19,20]. Yn ystod y pathogenesis carreg, mae gan fodel plac Randall a rhagdybiaeth mewntiwbaidd nodweddion cyffredin prosesau ffurfio cerrig COM, gan gynnwys crisialu COM, twf, agregu, cadw trwy adlyniad arwyneb ar gelloedd tiwbaidd arennol neu belfis arennol, mewnoli i'r celloedd, a goresgyniad i mewn. interstitium arennol trwy fatrics allgellog (ECM) [21,22].
Yn ddiweddar, mae llawer o astudiaethau wedi canolbwyntio ar ddarganfod cyffuriau gan ddefnyddio planhigion / ffrwythau meddyginiaethol a'u cyfansoddion bioactif gyda'r nod o atal ffurfio cerrig newydd a / neu gylchol. Mae nifer o adroddiadau blaenorol wedi dangos bod rhai cyfansoddion bioactif, yn enwedig cyfansoddion ffenolig (polyphenol, flavonoid, flavone glycosid, ac ati) a dynnwyd o nifer o blanhigion / ffrwythau meddyginiaethol, yn cael effeithiau ataliol yn erbyn mecanweithiau pathogenigarenclefyd carreg in vitro ac in vivo [23-25]. Ymhlith y sylweddau buddiol hyn, mae ychydig o adroddiadau wedi awgrymu y gallai diosmin atal dyddodiad crisialau CaOx y tu mewn i feinwe'r arennau mewn modelau anifeiliaid [26,27]. Fodd bynnag, ni ymchwiliwyd i'w union rôl fodiwlaidd (atal neu ddyrchafiad) a mecanweithiau (camau neu brosesau ffurfio cerrig) wrth ffurfio cerrig arennau COM. Roedd yr astudiaeth bresennol felly'n gwerthuso effeithiaudiosmin(yn 2.5–160 nM) ar wahanol gamau oarenprosesau ffurfio cerrig, gan gynnwys crisialu, twf grisial, agregu, adlyniad crisial-gell, mewnoli i gelloedd tiwbaidd arennol a goresgyniad trwy ECM.
Cliciwch iDos Cistanche tubulosa ar gyfer gweithrediad yr arennau
2. Deunyddiau a dulliau
2.1. Paratoi Diosmin
Diosmin(Diwydiant Cemegol Tokyo; Tokyo, Japan) ei ddiddymu gyda 100 y cant dimethyl sulfoxide (DMSO) (Sigma-Aldrich; St. Louis, MO) a aliquots gweithio eu gwneud yn y crynodiadau terfynol o 2.5, 5, 10, 20, 40, 80 a 160 nM ar gyfer ymchwilio i'w effeithiau ar grisialau COM. Yn ogystal, defnyddiwyd 100 y cant DMSO fel y rheolaeth negyddol ym mhob arbrawf.
2.2. Diwylliant celloedd
Cafodd llinell gell epithelial tiwbaidd arennol MDCK sy'n deillio o segment tiwbaidd distal y neffron (ATCC; Manassas, VA) ei lluosogi yng nghyfrwng hanfodol lleiaf Eagle (MEM) (Gibco; Grand Island, NY) wedi'i ategu â serwm buchol ffetws 10 y cant (FBS), 60 U/ml penisilin G (Sigma-Aldrich) a 60 ug/ml streptomycin (Sigma-Aldrich). Roedd y celloedd yn cael eu cynnal mewn deorydd llaith gyda 5 y cant o CO2 ar 37 ◦C.
2.3. Assay crisialu COM
Perfformiwyd crisialu COM fel y disgrifiwyd yn flaenorol [28,29]. Yn gryno, ychwanegwyd 500 ul o 10 mM CaCl2⋅2H2O mewn byffer crisialu (yn cynnwys 10 mM Tris-HCl a 90 mM NaCl) (pH 7.4) i bob ffynnon o blât ffynnon 24- (Corning Inc.; Corning, NY). Cyfaint cyfartal (4 ul) o glustog grisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol) neudiosmin(2.5, 5, 10, 20, 40, 80 neu 160 nM) yn gymysg â CaCl2. Yn olaf, ychwanegwyd 500 ul o 1.0 mM Na2C2O4 yn y byffer crisialu wedyn i wneud y crynodiadau terfynol o CaCl2 a Na2C2O4 i 5 mM a 0.5 mM, yn y drefn honno. Deorwyd y gymysgedd ar 25 ◦C am 1 awr ac yna ei archwilio. Cafodd delweddau crisial eu dal ar hap o o leiaf 15 maes pŵer uchel (HPFs) o dan ficrosgop golau cyferbyniad cam gwrthdro Nikon Eclipse Ti-S (Nikon; Tokyo, Japan). Mesurwyd maint a nifer grisial o 15 HPF o leiaf ar gyfer pob sampl gan ddefnyddio fersiwn meddalwedd Elfen D NIS 4.11 (Nikon). Cyfrifwyd màs grisial o o leiaf 100 o grisialau mewn 15 HPF gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol: Màs grisial (µm2/HPF)=Maint grisial ar gyfartaledd ym mhob maes (µm2) × Nifer y crisialau ym mhob maes (/HPF) ( 1)
2.4. Assay twf grisial COM
Perfformiwyd assay twf grisial fel y disgrifiwyd yn flaenorol [30,31].
Yn gryno, cymysgwyd cyfaint cyfartal (500 ul) o 10 mM CaCl2⋅2H2O a 1.0 mM Na2C2O4 mewn byffer crisialu (1:1) (v/v) ym mhob ffynnon o'r { {12}}plât ffynnon. Deorwyd y gymysgedd ar 25 ◦C am 1 awr i ganiatáu crisialu cyflawn. Ar y pwynt hwn (T0), cyfaint cyfartal (4 ul) o glustog grisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol) neudiosmin(2.5, 5, 1{{10}}, 20, 40, 80 neu 160 nM) i mewn i bob ffynnon a deorwyd y gymysgedd ymhellach am 60 munud (T60). Yn T0 a T60, cipiwyd delweddau crisial ar hap o o leiaf 15 HPF o dan ficrosgop golau cyferbyniad cam gwrthdro Nikon Eclipse Ti-S. Mesurwyd meintiau crisial yn T0 a T60 gan ddefnyddio meddalwedd NIS Elfen D fersiwn 4.11 (Nikon), tra cyfrifwyd twf grisial (a gynrychiolir gan Δ maint grisial) o o leiaf 100 o grisialau mewn 15 HPF gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol: Δ Maint grisial (µm2)=Maint grisial yn T60 − Maint grisial yn T0 (2)
2.5. Assay agregu grisial COM
Perfformiwyd assay agregu grisial fel y disgrifiwyd yn flaenorol [32,33]. Cynhyrchwyd crisialau COM fel y crybwyllwyd uchod yn yr assay twf grisial ond gyda chyfaint mwy mewn tiwb conigol 50-ml (Corning Inc.) ac yna eu cynaeafu trwy allgyrchiad ar 2000 g am 5 munud. Cafodd y supernatant ei daflu, tra bod crisialau COM yn cael eu golchi deirgwaith gyda methanol. Ar ôl allgyrchiad arall ar 2000 g am 5 munud, cafodd methanol ei daflu a chafodd y crisialau eu sychu yn yr aer dros nos ar 25 ◦C. Cafodd crisialau COM (1000 µg pwysau sych) eu hailddarlledu mewn 1 ml o glustog grisialu ym mhob ffynnon o'r 6-plât ffynnon (Corning Inc.). Cyfaint cyfartal (4 ul) o glustog grisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol) neudiosmin(2.5, 5, 10, 20, 40, 80 neu 160 nM) ei ychwanegu at yr ataliad grisial COM ym mhob ffynnon. Ysgwyd y plât yn barhaus mewn deorydd ysgwyd (Zhicheng; Shanghai, China) ar 150 rpm a 25 ◦C am 1 h. Wedi hynny, archwiliwyd a delweddwyd ffurfio agreg grisial COM (a ddiffinnir fel "cynulliad o dri neu fwy o grisialau COM unigol a oedd yn uno'n dynn" [32]) o dan ficrosgop golau cyferbyniad cam gwrthdro Nikon Eclipse Ti-S. Cyfrifwyd nifer yr agregau crisial COM o o leiaf 15 HPF ar hap fesul ffynnon.
2.6. Assay adlyniad crisial-gell COM
Perfformiwyd assay adlyniad cell grisial fel y disgrifiwyd yn flaenorol [34,35]. Yn gryno, cynhyrchwyd crisialau COM fel y crybwyllwyd uchod mewn tiwb conigol 50-ml ac yna eu cynaeafu trwy allgyrchiad ar 2000 g am 5 munud. Cafodd y supernatant ei daflu, tra bod crisialau COM yn cael eu golchi deirgwaith gyda methanol. Ar ôl allgyrchiad arall ar 2000 g am 5 munud, cafodd methanol ei daflu a chafodd y crisialau eu sychu yn yr aer dros nos ar 25 ◦C. Cafodd y crisialau eu diheintio gan ymbelydredd golau UV am 30 munud cyn ymyrryd â'r celloedd.
Cafodd celloedd MDCK (ar ddwysedd o 2 × 105 o gelloedd/ffynnon) eu hadu a'u tyfu ym mhob ffynnon o'r 6-plât ffynnon (Corning Inc.) am 48 h i gael monolayer cydlifiad. Yna cafodd y cyfrwng diwylliant ei adnewyddu cyn ychwanegu crisialau COM (100 µg o grisialau pwysau sych fesul cyfrwng meithrin ml). Cyfaint cyfartal (4 ul) o glustog grisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol) neudiosmin(2.5, 5, 10, 20, 40, 80 neu 160 nm) i mewn i bob ffynnon. Deorwyd y celloedd ymhellach mewn deorydd llaith gyda 5 y cant o CO2 ar 37 ◦C am 1 awr. Wedi hynny, cafodd y celloedd eu golchi'n egnïol gyda PBS bum gwaith a'u delweddu o dan ficrosgop golau cyferbyniad cam gwrthdro Nikon Eclipse Ti-S. Cafodd nifer y crisialau COM sy'n weddill a lynwyd ar arwyneb celloedd tiwbaidd arennol ei gyfrif o o leiaf 15 cae ar hap fesul ffynnon.
Cistanche ar gyfer gweithrediad yr arennau
2.7. Assay mewnoli grisial COM
Cynhyrchwyd y crisialau COM wedi'u labelu â fflworoleuedd fel y disgrifiwyd yn flaenorol [36,37]. Roedd cyfansoddiadau/crynodiadau cemegau a ddefnyddiwyd ar gyfer crisialu yr un fath â'r rhai a grybwyllwyd uchod ar gyfer y crisialau plaen (heb eu labelu), ond roedd 0.1 µg/ml fluorescein isothiocyanate (FITC) (Thermo Scientific Pierce; Rockford, IL) yn ychwanegu at ateb CaCl2⋅2H2O cyn cymysgu â Na2C2O4. Perfformiwyd y camau dilynol (crisialu a chynaeafu) fel y crybwyllwyd uchod, ond yn y tywyllwch.
Er mwyn gwerthuso mewnoliad grisial i gelloedd epithelial tiwbaidd arennol, cafodd celloedd MDCK (ar ddwysedd o 2 × 105 o gelloedd / ffynnon) eu hadu a'u tyfu ym mhob ffynnon o'r 6-plât ffynnon (Corning Inc.) am 48 h i'w cael monolayer cydlifiad. Deorwyd y monolayer cell gyda chrisialau COM wedi'u labelu gan FITC (1000 µg cyfrwng grisial/ml) mewn deorydd llaith gyda 5 y cant o CO2 ar 37 ◦C am 1 awr. Wedi hynny, golchwyd y celloedd â PBS a'u deor â hydoddiant trypsin-EDTA i ddileu crisialau nad ydynt yn fewnol (yn ymlynol ac nad ydynt yn glynu). Cafodd canran y celloedd â chrisialau mewnol ei fesur o gyfanswm o 10,000 o ddigwyddiadau a gaffaelwyd gan ddefnyddio cytomedr llif (BD Accuri C6) (BD Biosciences; San Jose, CA). Defnyddiwyd y celloedd gyda chrisialau COM plaen (heb eu labelu) ar gyfer rhagosod y sŵn a'r trothwy ar gyfer y signal fflworoleuedd positif. Yna cafodd y celloedd â signalau fflworoleuedd positif eu cyfrif a'u defnyddio ar gyfer cyfrifiad canrannol o'r fath.
2.8. Goresgyniad grisial COM trwy assay ECM
Paratowyd crisialau COM fel y disgrifir uchod ar gyfer agregu grisial a phrofion adlyniad cell grisial. Perfformiwyd assay goresgyniad grisial yn unol â phrotocol a sefydlwyd yn flaenorol [38,39]. Yn gryno, cyfanswm o 20 µg grisialau COM wedi'u gorchuddio â byffer crisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol), albwmin (Sigma-Aldrich) (rheolaeth gadarnhaol) neudiosmin(2.5, 5, 1{{10}}, 20, 40, 80 neu 160 nM) i mewn i 200 ul MEM. Yn dilyn hynny, cymysgwyd 200 ul o 0.3 pM Lys-plasminogen (Diwydiannau Fitzgerald rhyngwladol; Acton, MA) yn PBS a'i ddeor gyda'r cymhleth protein grisial ar 37 ◦C am 1 h. Taflwyd y plasminogen heb ei rwymo trwy allgyrchiad ar 2000 g am 5 munud a golchwyd y belen gyda PBS unwaith. Wedi hynny, cymysgwyd 100 ul o ysgogydd plasminogen urokinase 0.15 pM (uPA) (Fitzgerald Industries International) yn PBS â'r cymhleth crisial-protein-plasminogen/plasmin. Yna ychwanegwyd y cymysgedd ar ben y gel matrics y tu mewn i'r siambr fudo ECM a'i ddeor ar 37 ◦C. Ar ôl 24-h deoriad, tynnwyd yr hydoddiant a oedd yn weddill ar ran uchaf y siambr fudo trwy ddefnyddio rhwyllen neu bapur sidan. Yna delweddwyd y crisialau COM goresgynnol y tu mewn i'r gel matrics gan ddefnyddio microsgop golau gyda modd cyferbyniad ymyrraeth gwahaniaethol (DIC) (Nikon H600L). Cafodd y pellter goresgyniad grisial ei fesur a'i gyfartaleddu o o leiaf 15 maes pŵer isel (LPFs) o fewn yr un siambr gan ddefnyddio fersiwn meddalwedd Elfen D NIS 4.11 (Nikon).
2.9. Dadansoddiad ystadegol
Gwnaed yr holl arbrofion uchod mewn triphlyg (tri arbrawf annibynnol) ac adroddir y data meintiol fel cymedr ± SEM. Perfformiwyd cymariaethau lluosog gan ddefnyddio dadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA) â phrawf ôl-hoc Tukey. Perfformiwyd prawf cydberthynas Pearson i bennu'r berthynas rhwng newidynnau. Gwnaed yr holl ddadansoddiadau ystadegol trwy ddefnyddio meddalwedd SPSS (fersiwn 18) (IBM SPSS; Armonk, NY). Ystyriwyd gwerth P llai na 0.05 yn ystadegol arwyddocaol.
3. Canlyniadau
3.1. Effaith diosmin ar grisialu COM
Mae crisialu yn un o gamau cynnar hanfodolarenprosesau ffurfio cerrig o bob math. Ar ôl crisialu 1-h gyda neu hebdiosminmewn crynodiadau amrywiol (2.5, 5, 10, 20, 40, 80 neu 160 nM), mesurwyd maint a nifer grisial COM a chyfrifwyd màs grisial. Gwasanaethodd byffer crisialu a'r DMSO gwanedig fel y rheolaethau gwag a negyddol, yn y drefn honno. Dangosodd y data fod pob dos (2.5-160 nm) o disomin yn lleihau maint y grisial yn sylweddol ond yn cynyddu nifer y grisial mewn modd sy'n dibynnu ar ddos o'i gymharu â rheolaethau gwag a negyddol ( Ffig. 1 A - 1 C ). Yn unol â'r rhif grisial, cynyddodd màs grisial dos-ddibynnol (Ffig. 1D). Yn gyffredinol, mae'r data hyn yn dangos bod diosmin yn hyrwyddo crisialu COM (neocrystals).
3.2. Effaith diosmin ar dwf grisial COM
Effaith fodiwlaidddiosminar dwf grisial COM gwerthuswyd trwy fesur newid ym maint y grisial (Δ maint grisial) ar ôl 60-munud deori pellach ar ôl cwblhau'r cam crisialu cychwynnol, pan oedd neocrystals yn absennol. Dangosodd y canlyniadau fod pob dos (2.5-160nM) o disomin wedi lleihau'n sylweddol Δ maint Crystal mewn modd dos-ddibynnol o'i gymharu â'r rheolaethau gwag a negyddol (Ffig. 2). Mae'r canfyddiadau hyn yn dangos bod diosmin yn atal twf grisial COM.
3.3. Effaith diosmin ar agregu grisial COM
Yn ogystal â thwf grisial, mae agregu crisialau unigol sy'n glynu'n dynn at ei gilydd yn gam pwysig arall yn ystodarenpathogenesis carreg. Gall y lefel uchel o agregu grisial yn y pen draw arwain at ehangu cerrig a rhwystro lwmen tiwbaidd arennol bach. Cymharu â rheolaethau gwag a negyddol,diosminar 10-160nM dos-ddibynnol cynyddu nifer y agregau grisial COM (Ffig. 3). Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod diosmin yn hyrwyddo cydgasglu grisial COM.
Cistanche ar gyfer gweithrediad yr arennau
3.4. Effaith diosmin ar adlyniad cell grisial COM
Mae cadw'r crisialau achosol yn un o'r camau hanfodol ar gyferarenffurfio cerrig a gellir ei achosi gan adlyniad cell grisial sy'n atal y crisialau rhag diarddel ynghyd â'r all-lif wrin. Felly fe wnaethom werthuso gweithgaredd modiwleiddiodiosminar adlyniad crisial-gell COM. Datgelodd y data fod diosmin yn 5-160nM wedi lleihau'n sylweddol allu gludiog crisialau COM ar gelloedd tiwbaidd arennol mewn modd sy'n dibynnu ar ddos o'i gymharu â rheolaethau gwag a negyddol (Ffig. 4). Mae'r data hyn yn dangos bod diosmin yn atal adlyniad cell grisial COM.
3.5. Effaith diosmin ar fewnoli grisial COM i mewn i gelloedd tiwbaidd arennol
Ar ôl adlyniad, gellir mewnoli rhai crisialau COM i'r celloedd tiwbaidd arennol ac achosi nifer o ymatebion cellog dilynol [37,40]. Gwerthuswyd mewnoli grisial trwy ddefnyddio crisialau COM wedi'u labelu gan FITC a'u mesur yn ôl cytometreg llif. Defnyddiwyd crisialau COM plaen (heb labelu) i dynnu sŵn technegol ac i sicrhau bod dwyster fflworoleuedd yn dod o signal FITC. O gymharu â rheolaethau gwag a negyddol, gostyngwyd canran y celloedd â chrisialau mewnol yn sylweddoldiosminar 10-160nM mewn modd dos-ddibynnol (Ffig. 5). Mae'r canfyddiadau'n dangos bod disomin yn atal mewnoliad grisial COM i gelloedd tiwbaidd arennol.
3.6. Effaith diosmin ar oresgyniad grisial COM trwy ECM
Mae goresgyniad grisial trwy ECM yn broses bathogenaidd / ddinistriol yn ystodarenpathogenesis carreg a all sbarduno amrywiol ymatebion llidiol a rhaeadrau, a thrwy hynny waethygu mecanweithiau'r clefyd. Fe wnaethom archwilio'r ffenomen hon trwy ddefnyddio protocol sefydledig yn seiliedig ar weithgaredd plasminogen-plasmin y cymhleth crisial-protein [38,39]. Dangosodd y canlyniadau fod pob dos o disomin (2.5-160nM) yn gwella ymlediad grisial COM yn sylweddol trwy'r ECM mewn modd sy'n dibynnu ar ddos (Ffig. 6). Yn ddiddorol,diosminar 160nM gallai hyrwyddo goresgyniad grisial COM tebyg i albwmin, sef yr hyrwyddwr cryf hysbys ar gyfer goresgyniad grisial COM [41] (Ffig. 6). Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod diosmin yn hyrwyddo goresgyniad grisial COM yn gryf trwy'r ECM.
Ffig. 1. Effaithdiosminar grisialu COM. Perfformiwyd assay crisialu gyda chyfaint cyfartal (4ul) o glustogfa grisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol) neu ddiosmin (2.5-160nM). (A): Morffoleg grisial ym mhob cyflwr ar ôl crisialu 1-h. Y chwyddhad gwreiddiol oedd 400 × ar gyfer pob panel. (B): maint grisial. (C): Rhif grisial. (D): Dadansoddwyd màs grisial (gweler Fformiwla 1 yn "Deunyddiau a Dulliau") o o leiaf 100 o grisialau mewn 15 HPF. Mae pob bar yn cynrychioli ±SEM cymedrig y data sy'n deillio o 3 arbrawf annibynnol. *=p< 0.05="" vs.="" blank="" control;="" #="">< 0.05="" vs.="" dmso.="">
Ffig. 2. Effaithdiosminar dwf grisial COM. Perfformiwyd assay twf grisial ar ôl i'r crisialu gael ei gwblhau (i atal neocrystallization) gyda chyfaint cyfartal (4ul) o glustogiad crisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol) neu diosmin (2.5-160nM). (A): Morffoleg grisial ym mhob cyflwr yn T0 a T60. Y chwyddhad gwreiddiol oedd 400 × ar gyfer pob panel. (B)-(J): Histogramau o feintiau crisial wedi'u mesur o grisialau unigol ar T0 a T60 ym mhob grŵp. (K): Δ Dadansoddwyd maint grisial (gweler Fformiwla 2 yn "Deunyddiau a Dulliau") o o leiaf 100 o grisialau mewn 15 HPF. Mae pob bar yn cynrychioli cymedr ± SEM y data sy'n deillio o 3 arbrawf annibynnol. *= p < 0.05="" vs.="" rheolaeth="" wag;="" #="p">< 0.05="" vs.="">
Ffig. 3. Effaithdiosminar agregu grisial COM. Perfformiwyd assay agregu grisial gyda chyfaint cyfartal (4ul) o glustog grisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol) neu ddiosmin (2.5-160nM). (A): Micrograffau o'r crisialau COM agregedig (wedi'u labelu â chylchoedd dotiog). Y chwyddhad gwreiddiol oedd 400 × ar gyfer pob panel. (B): Cyfrifwyd nifer yr agregau grisial o o leiaf 15 HPF ar hap ym mhob ffynnon. Mae pob bar yn cynrychioli cymedr ± SEM y data sy'n deillio o 3 arbrawf annibynnol. *=p< 0.05="" vs.="" blank="" control;="" #="p" <="" 0.05="" vs.="" dmso.="">
Ffig. 4. Effaithdiosminar adlyniad crisial-gell COM. Perfformiwyd assay adlyniad cell grisial gyda chyfaint cyfartal (4ul) o glustog grisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol) neu ddiosmin (2.5-160nM). (A): Micrograffau o'r crisialau sy'n weddill a lynodd yn dynn ar y monolayer cell ar ôl tynnu'r crisialau heb eu rhwymo gan olchi egnïol gyda PBS. Y chwyddhad gwreiddiol oedd 200 × ar gyfer pob panel. (B): Cyfrifwyd nifer y crisialau glynu o o leiaf 15 cae ar hap ym mhob ffynnon. Mae pob bar yn cynrychioli ±SEM cymedrig y data sy'n deillio o 3 arbrawf annibynnol. *= p<0.05 vs.="" blank="" control;="" #="p"><0.05 vs.="">
Ffig. 5. Effaithdiosminar fewnoli grisial COM i mewn i gelloedd tiwbaidd arennol. Perfformiwyd assay mewnoliad grisial gan ddefnyddio crisialau COM wedi'u labelu gan FITC (FITC-COM), tra defnyddiwyd y crisialau COM plaen (heb eu labelu) ar gyfer tynnu cefndir / sŵn. Perfformiwyd yr assay gyda chyfaint cyfartal (4ul) o glustogfa grisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol) neu ddiosmin (2.5–16{0nM). (A): Dadansoddiad cytometrig dot-llain llif o faint (echel-y) a dwyster fflworoleuedd FITC (echelin-x) o'r celloedd ar ôl tynnu crisialau nad ydynt yn fewnol gyda 0.1 y cant trypsin / 2.5mM EDTA. (B): Canran y celloedd sydd â chrisialau COM mewnol wedi'u labelu gan FITC. Mae pob bar yn cynrychioli cymedr ± SEM y data sy'n deillio o 3 arbrawf annibynnol. *= p<0.05 vs.="" fitc-com="" +="" blank="" control;="" #="">< 0.05="" vs.="" fitc-com="" +="" dmso.="">
Ffig. 6. Effaithdiosminar oresgyniad grisial COM trwy'r ECM. Perfformiwyd goresgyniad grisial trwy assay ECM gan ddefnyddio crisialau COM wedi'u gorchuddio â byffer crisialu (rheolaeth wag), DMSO (rheolaeth negyddol), albwmin (rheolaeth gadarnhaol) neu ddiosmin (2.5-160nM). (A): Roedd micrograffau o'r crisialau COM yn goresgyn neu'n mudo trwy'r siambr ymfudo ECM. Y chwyddhad gwreiddiol oedd 100 × ar gyfer pob panel. (B): Mesurwyd pellter goresgyniad grisial o o leiaf 15 LPF ar hap ym mhob siambr. Mae pob bar yn cynrychioli ±SEM cymedrig y data sy'n deillio o 3 arbrawf annibynnol. *= p<0.05 vs.="" blank="" control;="" #="p" <="" 0.05="" vs.="">
4. Trafodaeth
Mae clefyd carreg yr arennau yn cael ei achosi gan ffurfio calcwli y tu mewn i'rarena'r system pelvocalyceal. Mae prosesau ffurfio cerrig arennau cyffredin yn cynnwys crisialu COM, twf, agregu, cadw trwy adlyniad crisial-gell, a goresgyniad trwy'r interstitiwm arennol sy'n gyfoethog ag ECM [21,22]. Mae sawl ymgais i atal y clefyd hwn gan ddefnyddio amrywiaeth o feddyginiaeth a / neu atchwanegiadau maeth. Mae llawer o linellau o dystiolaeth ddiweddar wedi nodi y gallai flavonoids, glycosidau flavone a chyfansoddion eraill a dynnwyd o ffrwythau sitrws gael yr effeithiau ataliol ar glefyd cerrig yr arennau ac anhwylderau eraill [23-25]. Ymhlith y rhain,diosmin, mae deilliad glycoside flavone naturiol a hesperidin a geir yn bennaf mewn ffrwythau sitrws [1,2], wedi'i awgrymu i chwarae rhan ataliol yn erbyn anaf a difrodarenmeinwe [13,42]. Ar ben hynny, mae ei rôl gwrth-urolithiasis wedi'i adrodd mewn ychydig o astudiaethau blaenorol gan ddefnyddio modelau anifeiliaid [26,27]. Serch hynny, roedd effeithiau buddiol a mecanweithiau sylfaenol diosmin wrth atal cerrig yn yr arennau yn parhau i fod yn niwlog. Felly archwiliwyd gweithgaredd modiwleiddio diosmin ar grisialau COM. Gwnaed y dadansoddiadau systematig ar wahanol gamau o COMarenffurfio cerrig, gan gynnwys crisialu, twf grisial, agregu, adlyniad crisial-gell, mewnoli i gelloedd tiwbaidd arennol a goresgyniad trwy ECM.
Ar ôl cymeriant llafar odiosmin, mae ei lefel plasma mewn bodau dynol yn amrywio o {{0}}.5 i 200ng/ml (neu 0.8-300nM) [43,44]. Mae'r crynodiad plasma uchaf (Cmax) tua 50ng/ml (neu 85nM) [43,44]. Felly, roedd y dosau diosmin a ddefnyddiwyd yn ein hastudiaeth bresennol (2.5-160nM) yn yr ystod ffarmacolegol berthnasol ar gyfer ei ffarmacocineteg. Oherwydd bod DMSO wedi'i ddefnyddio fel gwanedydd i doddi diosmin yn gyfan gwbl fesul argymhelliad, defnyddiwyd DMSO fel y rheolaeth negyddol yn yr astudiaeth hon yn ogystal â'r rheolaeth wag i sicrhau nad oedd unrhyw effeithiau gan y gwanwr ei hun a allai ymyrryd â'r dehongliad data. Ym mhob asesiad, dangosodd y data nad oedd unrhyw effeithiau arwyddocaol o'r DMSO a arsylwyd ac roedd yr holl ddata meintiol a ddeilliodd o'r rheolaeth negyddol yn gymaradwy â rhai'r rheolaeth wag.
Datgelodd assay crystallization COM bod pob crynodiad odiosmin(2.5, 5, 10, 20, 40, 80 a 160nM) gallai leihau maint grisial COM ond, ar y llaw arall, cynyddodd nifer y crisialau. Gan mai màs grisial yw cynnyrch terfynol maint a rhif grisial ac mae'n fwy perthnasol i adlewyrchu gradd crisialu COM, yna fe wnaethom werthuso a oedd diosmin yn effeithio ar y mynegai grisial hwn. Dangosodd y data fod pob crynodiad o diosmin yn cael yr effaith hyrwyddo ar fàs grisial COM, yn gyson â'r data ar rif grisial. Ar ôl crisialu, gall crisialau COM dyfu ymhellach i'r maint mwy ar gyfer cam nesafarenffurfio cerrig.
Mewn cyferbyniad â chrisialu, dangosodd diosmin ym mhob crynodiad yr effaith ataliol ar dwf grisial COM yn y modd sy'n dibynnu ar ddos. Mae rhai astudiaethau blaenorol wedi nodi y gellir cynyddu hydoddedd crisialau CaOx gan ddeilliadau o hydroxyanthraquinones gyda glycosylation [45]. Yn ogystal, gall presenoldeb siwgrau mewn cyfansoddion bioactif o'r fath rwymo ag ïon calsiwm rhydd o bosibl oherwydd y grwpiau hydrocsyl yn y strwythur moleciwlaidd, a thrwy hynny atal ffurfio crisialau CaOx [45,46]. Gallai Diosmin hefyd effeithio ar drawsnewidiad yr ïonau calsiwm ac oxalate hydawdd i'r gronynnau crisialog COM mewn hylif tiwbaidd arennol yn y broses o grisialu COM yn seiliedig ar y mecanwaith hwn.
Serch hynny, hyrwyddwyd agregiad grisial COM gan 10-160nMdiosmin, gan awgrymu gallu diosmin i weithredu fel cysylltydd neu foleciwl gludiog ar gyfer recriwtio crisialau unigol i glymu at ei gilydd i ffurfio'r agregau grisial. Mae'r rhwymiad hwn hefyd yn arwain at ddilyniant pontydd gludiog ymhlith crisialau unigol a gall gymell ffurfio strwythur mawr o grisialau COM, sy'n cyfrannu'n hawdd at ddyddodiad carreg nidus y tu mewn i'raren[32].
Mae cadw grisial COM trwy adlyniad crisialau ar arwynebau celloedd tiwbaidd arennol wedi'i sefydlu fel cam pwysig arall ar gyfer ffurfio cerrig arennau [47]. Datgelodd ein data y gallai diosmin leihau gallu gludiog crisialau COM i glymu ag arwynebau apical celloedd tiwbaidd arennol MDCK. Mae rhai astudiaethau blaenorol wedi dangos y gall glycosaminoglycans (cyfansoddion polysacarid) wedi'u gorchuddio ar grisialau CaOx neu wedi'u mynegi ar gelloedd tiwbaidd arennol ymyrryd â gallu gludiog crisialau CaOx i gelloedd tiwbaidd arennol [48]. Yn ogystal, mae mynegiant derbynyddion crisial ar gelloedd tiwbaidd arennol yn un o'r mecanweithiau hanfodol sy'n pennu adlyniad cell grisial [21]. Er bod crisialau CaOx yn achosi anaf i bilenni apical, yn enwedig microvilli, gall rhai polyphenolau fel epigallocatechin gallate (EGCG) atal adlyniad crisial-gell ac anaf cellog [49]. Ar ben hynny, adroddwyd yn flaenorol bod sylwedd flavonoid mewn amrywiol ddarnau o blanhigion yn cynyddu lefel pH wrinol, gan arwain at atal adlyniad cell grisial [50,51]. Efallai,diosmingallai hefyd wanhau anaf cellog o'r fath a achosir gan COM, a thrwy hynny leihau adlyniad cell grisial.
Dangoswyd bod mewnoli grisial COM yn ymddangos yn bennaf gan endocytosis trwy lwybr macropinocytosis wedi'i gyfryngu gan actin cytoskeleton [40]. Adroddwyd bod flavonoidau fel quercetin yn effeithio ar cytoskeleton actin sy'n ofynnol ar gyfer macropinocytosis [52,53]. Dangosodd ein canfyddiadau fod diosmin wedi lleihau'n sylweddol allu celloedd MDCK i fewnoli crisialau COM. Gallai effaith ataliol o'r fath o diosmin fod yn gysylltiedig â chydosod neu drefnu actin cytoskeleton y tu mewn i'r celloedd sy'n effeithio'n uniongyrchol ar y llwybr macropinocytosis [54,55].
Ar ôl mewnoli, diraddiwyd y crisialau COM gan endolysosomau gan arwain at gynnydd mewn ïonau calsiwm ac oxalate am ddim yn yr interstitiwm arennol [37]. Gall cynnydd o'r fath mewn ïonau calsiwm ac oxalate arwain at neocrystallization COM yn y interstitium arennol [56,57]. Yn ogystal, gall presenoldeb crisialau COM interstitial ddeillio o ddiffygion cyffordd dynn a rhwystrau adlyniad paracellog, gan arwain at fwy o athreiddedd paracellog a thrawsleoli crisialau [58-60]. Yna gall y crisialau hyn oresgyn yr interstitiwm arennol trwy'r ECM ac yna sbarduno sawl ymateb llidiol a difrod meinwe [58-60]. Yn yr astudiaeth hon, gwelsom fod goresgyniad crisialau COM trwy'r siambr fudo ECM wedi'i achosi gan bob crynodiad o diosmin. Efallai y bydd Diosmin yn rhwymo i arwynebau crisial COM ac yn rhyngweithio â system plasminogen-plasmin a yrrodd y mudo grisial yn siambr ymfudo ECM [38,39].
Cistanche ar gyfer aren
Achosdiosmina achosir gan atal a hyrwyddo effeithiau ar wahanol brosesau amrywiol o ffurfio cerrig COM, fe wnaethom felly bennu eu perthynas gan ddefnyddio prawf cydberthynas Pearson. Datgelodd y dadansoddiad cydberthynas fod cydberthynas gwrthdro rhwng rhif grisial â maint grisial a thwf grisial (Δ maint grisial) (Ffig. 7A a B). Roedd cydberthynas gref rhwng maint grisial a thwf grisial (Ffig. 7C) ond yn wrthdro cydberthynas â màs grisial (Ffig. 7D). Yn olaf, roedd màs grisial yn cydberthyn yn gryf â rhif grisial a chyfuniad grisial (Ffig. 7E ac F). O'r dadansoddiad cydberthynas, mae'r data'n nodi bod rhif grisial a màs grisial yn fwy perthnasol i adlewyrchu crisialu na maint grisial (Ffig. 7A, D ac E). Yn ogystal, mae maint y neocrystals yn ystod crisialu yn gysylltiedig â thwf y crisialau preformed (Ffig. 7C), tra bod gradd o grisialu (fel y'i hadlewyrchir gan rif grisial a màs grisial) yn perthyn yn agos i raddau o agregu grisial (Ffig. 7E a F). Fodd bynnag, mae'r cydberthnasau hyn yn fwyaf tebygol o fod yn benodol i'r effeithiau diosmin, tra gall effeithiau o fodylyddion eraill fod â'r un cydberthnasau neu beidio. Er enghraifft, mae ffibronectin yn lleihau màs grisial ac yn atal twf grisial, ond mae'n hyrwyddo agregu grisial [31]. Yn ogystal, mae Escherichia coli hyfyw cyflawn yn cynyddu maint a màs grisial ond nid yw'n cael unrhyw effeithiau ar rif grisial [33]. Mae'r data hyn yn dangos nad yw'r cydberthynas rhwng gwahanol brofion crisial COM yn gyffredinol ar gyfer pob modulator.
Yn olaf, rydym wedi crynhoi'r canlyniadau a gafwyd o wahanol brofion a'u hintegreiddio â mecanweithiau pathogenigarenclefyd carreg (gweler sgematics yn Ffig. 8). O'r dadansoddiad cydberthynas, mae diosmin yn hyrwyddo crisialu (Ffig. 8A). Rhwng crisialu a thwf grisial,diosminyn cadw cydbwysedd da trwy hyrwyddo crisialu ond, ar y llaw arall, yn atal twf grisial (Ffig. 8B). O ran yr holl effeithiau ar grisialau COM yn unig (heb ystyried celloedd ac ECM sydd hefyd yn ymyrryd), mae gweithgaredd hyrwyddo diosmin yn fwy amlwg na'i weithgaredd atal ar grisialau COM gan ei fod yn hyrwyddo crisialu a chydgasglu grisial, ond yn atal twf grisial yn unig ( Ffig. 8C). Er bod crisialu yn cynyddu, mae maint y grisial yn lleihau ac mae'n gysylltiedig â'r ataliad twf (Ffig. 7C). Mae'r data hwn yn gyson â'r canlyniadau a adroddwyd gan Kavanagh et al. [61-63], gan ddangos bod y cynnydd mewn crisialu yn arwain at ddirywiad gor-dirlawnder ïonau calsiwm ac ocsalad yn yr hydoddiant, a thrwy hynny leihau'r twf. Fodd bynnag, nid twf grisial yw'r unig ffactor sy'n pennu'rarenpathogenesis carreg [64], yn enwedig pan fo'r màs grisial yn gorlethu ac yn gysylltiedig â'r cynnydd o agregu grisial (Ffig. 7F) a all gynyddu'r siawns o ddeunyddiau crisial i fynd yn sownd mewn segmentau tiwbaidd bach (yn y rhagdybiaeth mewntiwbwl), a thrwy hynny gynyddu y siawns o ffurfio cerrig. Ar ben hynny, mae astudiaeth flaenorol wedi dangos y data sy'n gyson â'n canfyddiadau, gan nodi bod y cynnydd yn y nifer grisial yn gysylltiedig â'r cynnydd mewn agregu grisial a'r ehangiad cerrig [63].
Ffig. 7. Dadansoddiad cydberthynas. (A) - (F): Dadansoddwyd cydberthnasau ymhlith rhif grisial COM, maint grisial, Δ maint grisial, màs grisial, a nifer o agregau grisial gan brawf cydberthynas Pearson.
Ffig. 8. Sgemateg yn crynhoi effeithiau modiwleiddiodiosminar COMarenprosesau ffurfio cerrig. (A): Effeithiau diosmin ar grisialu COM. (B): Effeithiau diosmin ar grisialu COM a thwf grisial. (C): Effeithiau diosmin ar grisialu, twf a chydgrynhoi COM. (D): Effeithiau diosmin ar y prosesau ffurfio cerrig arennau COM cyfan.
Pan ystyrir rhyngweithiadau â chelloedd tiwbaidd arennol ac ECM, mae'r darlun byd-eang o effeithiau deuoldiosminar COM ffurfio cerrig arennau yn dod yn llawer cliriach (Ffig. 8D). Mae Diosmin yn atal adlyniad cell grisial, a thrwy hynny leihau mewnoliad grisial i'r celloedd. Gellir esbonio hyn bod gan faint llai crisialau COM lai o allu gludiog i rwymo'r celloedd tiwbaidd arennol o'i gymharu â'r rhai mwy fel yr adroddwyd yn ein hastudiaeth ddiweddar [34] ac astudiaeth flaenorol gan grŵp arall [65]. Mae gallu llai gludiog y crisialau COM llai oherwydd eu grym llai gludiog i wyneb y gell a llai o niferoedd y derbynyddion grisial COM yn rhwym iddynt fel y'u pennir gan ficrosgopeg grym atomig a dadansoddiad proteome, yn y drefn honno [34]. Mae Diosmin hefyd yn atal mewnoli grisial. Sylwch fod y broses fewnoli yn gleddyf ag ymyl dwbl y mae angen ei ddehongli'n ofalus. Y mewnoli neu endocytosis yn un o'r mecanweithiau amddiffyn y mae celloedd yn eu defnyddio i ddileu crisialau gan endolysosomau. Fodd bynnag, mae diraddio'r crisialau cyfan yn cynhyrchu ïonau calsiwm ac oxalate am ddim a all symud o adran fewngellol i'r interstitiwm arennol, lle gallant gynhyrchu neocrystals [56,57]. Ar y llaw arall, mae diosmin yn hyrwyddo goresgyniad grisial trwy'r ECM, sef un o'r mecanweithiau sy'n bwysig ar gyfer pathogenesis carreg yr arennau (yn enwedig ym model plac Randall) [58-60]. Yn gyffredinol, mae Ffig. 8D yn crynhoi holl effeithiau modiwleiddio deuol diosmin ar COMarenprosesau ffurfio cerrig. Dylid nodi na ellir cyfrifo cydbwysedd yr effeithiau hyrwyddo ac atal hyn yn fanwl gywir (yn wahanol i hafaliad mathemategol). Ar ben hynny, mae yna nifer o ffactorau mewndarddol ac alldarddol eraill a all hefyd ymyrryd â'r prosesau ffurfio cerrig. Yn olaf, mae diosmin hefyd yn arddangos nifer o effeithiau anuniongyrchol ar ffurfio cerrig arennau, gan gynnwys ei briodweddau gwrthocsidiol a gwrthlidiol [5,6] y dylid eu hystyried. Felly, mae canlyniad terfynol yr effeithiau modiwleiddio deuol hyn odiosminar COMarenmae angen ymchwiliad in vivo pellach i ffurfio cerrig a darpar astudiaeth garfan fawr.
5. Casgliadau
I grynhoi, rydym yn adrodd yma ar effeithiau deuol diosmin ar fodiwleiddio grisial COM mewn modd sy'n dibynnu ar ddos. Er ei fod yn atal twf grisial COM, adlyniad cell grisial, a mewnoli i gelloedd tiwbaidd arennol,diosminyn hyrwyddo crisialu COM, agregu, a goresgyniad trwy'r ECM. Felly, mae ei rôl gwrth-urolithiasis yn amheus a dylid cymryd rhybudd i'w ddefnyddio mewn clefyd cerrig yr arennau.
Datganiad cyfraniad awduraeth CRediT
Supaporn Khamchun: Cysyniadoli, Methodoleg, Meddalwedd, Dilysu, Dadansoddi Ffurfiol, Ymchwilio, Curadu Data, Ysgrifennu - drafft gwreiddiol, Delweddu, Sunisa Yoodee: Cysyniadoli, Methodoleg, Meddalwedd, Dilysu, Dadansoddi Ffurfiol, Ymchwilio, Curadu data, Ysgrifennu - drafft gwreiddiol, Delweddu, Ymweld â Thongboonkerd: Cysyniadoli, Methodoleg, Meddalwedd, Dilysu, Adnoddau, Ysgrifennu - adolygu a golygu, Goruchwylio, Gweinyddu prosiectau, Caffael cyllid.
Datganiad gwrthdaro buddiannau
Mae'r awduron yn datgan DIM gwrthdaro buddiannau.
Diolchiadau
Rydym yn ddiolchgar am gymorth technegol Kittiya Suwanakud. Cefnogwyd y gwaith hwn gan Gyngor Polisi Cenedlaethol Ymchwil ac Arloesi Gwyddoniaeth Addysg Uwch (NXPO) trwy PMU-B a Chronfa Ymchwil Gwlad Thai (IRN60W0004). Mae VT hefyd yn cael ei gefnogi gan Grant "Chalermphrakiat", Cyfadran Meddygaeth Ysbyty Siriraj.
Cyfeiriadau
[1] A. Bogucka-Kocka, M. Wozniak, M. Feldo, J. Kockic, K. Szewczyk,Diosmin– technegau ynysu, penderfyniad mewn deunydd planhigion a fformwleiddiadau fferyllol, a defnydd clinigol, Nat. Prod. Cymmun. 8 (2013) 545–550.
[2] Y. Zheng, R. Zhang, W. Shi, L. Li, H. Liu, Z. Chen, L. Wu, Metabolaeth a gweithgareddau ffarmacolegol y diosmin cyfansawdd naturiol sy'n fuddiol i iechyd, Bwyd Funct. 11 (2020) 8472–8492.
[3] MR Cesarone, G. Belcaro, L. Pellegrini, A. Ledda, G. Vinciguerra, A. Ricci, A. Di Renzo, I. Ruffini, G. Gizzi, E. Ippolito, F. Fano, M. Dugall , G. Acerbi, U. Cornelli, M. Hosoi, M. Cacchio, Venoruton vs Daflon: gwerthusiad o effeithiau ar ansawdd bywyd mewn annigonolrwydd gwythiennol cronig, Angiology 57 (2006) 131–138.
[4] KA Lyseng-Williamson, CM Perry, Ffracsiwn flavonoid puredig wedi'i ficroneiddio: adolygiad o'i ddefnydd mewn annigonolrwydd gwythiennol cronig, wlserau gwythiennol a hemorrhoids, Cyffuriau 63 (2003) 71–100.
[5] AS Shalkami, M. Hassan, AG Bakr, Gwrthlidiol, y gweithgaredd gwrthocsidiol a gwrth-apoptotig o diosmin mewn colitis briwiol a achosir gan asid asetig, Hum. Exp. Gwenwynig. 37 (2018) 78–86.
[6] Mae M. Berkoz, Diosmin yn atal y cyfryngwyr proinflammatory mewn macroffagau RAW264.7 a achosir gan lipopolysaccharid trwy lwybrau signal NF-kappaB a MAPKs, Gen. Physiol. Bioffys. 38 (2019) 315–324.
[7] Mae M. Rajasekar, K. Suresh, K. Sivakumar, Diosmin yn cymell apoptosis trwy fodiwleiddio signalau STAT-3 mewn 7,12 dimethylbenz(a)carcinogenesis cwdyn buccal a achosir gan anthracene, Biomed. Pharm. 83 (2016) 1064–1070.
[8] A. Lewinska, J. Adamczyk-Grochala, E. Kwasniewicz, A. Deregowska, M. Wnuk, heneiddedd a achosir gan Diosmin, apoptosis ac awtophagy mewn celloedd canser y fron o wahanol statws p53 a gweithgaredd ERK, Toxicol. Lett. 265 (2017) 117–130.
[9] AC Pushkaran, V. Vinod, M. Vanuopadath, SS Nair, SV Nair, AK Vasudevan, R. Biswas, CG Mohan, Cyfuniad o diosmin cyffuriau repurposed ag amoxicillin- asid clavulanic yn achosi ataliad synergaidd o dwf mycobacterial, Sci. Sylw 9 (2019) 6800.
[10] Mae CC Hsu, MH Lin, JT Cheng, MC Wu, gweithred antihyperglycaemig diosmin, sef flavonoid sitrws, yn cael ei ysgogi trwy beta-endorffin mewndarddol mewn llygod mawr diabetig math I, Clin. Exp. Pharm. Physiol. 44 (2017) 549–555.
[11] O. Senthamizhselvan, J. Manivannan, T. Silambarasan, B. Raja,Diosminmae rhag-driniaeth yn gwella gweithrediad cardiaidd ac yn atal straen ocsideiddiol mewn calon llygod mawr ar ôl isgemia/atlifiad, Eur. J. Pharm. 736 (2014) 131–137.
[12] N. Tong, Z. Zhang, Y. Gong, L. Yin, X. Wu, Diosmin yn amddiffyn retina llygod mawr rhag anaf isgemia/atlifiad, J. Ocul. Pharm. Ther. 28 (2012) 459–466.
[13] AE Elhelaly, G. AlBasher, S. Alfarraj, R. Almeer, EI Bahbah, MMA Fouda, SG Bungau, L. Alya, MM Abdel-Daim, Effeithiau amddiffynnol hesperidin a diosmin yn erbyn yr afu a achosir gan acrylamid, yr arennau, a niwed ocsideiddiol i'r ymennydd mewn llygod mawr, Environ. Sci. Llygredd. Res. Int. 26 (2019) 35151–35162.
[14] C. Thongrayoon, AE Krambeck, Rheol OC, Pennu gwir faicharenclefyd y maen, Nat. Nephrol y Parch. 16 (2020) 736–746.
[15] K. Bishop, T. Momah, J. Ricks, Nephrolithiasis, Prim. Gofal 47 (2020) 661–671.
[16] A. Viljoen, R. Chaudhry, J. Bycroft, Cerrig arennol, Ann. Clin. Biocemeg 56 (2019) 15–27.
[17] PM Ferraro, R. Marano, A. Primiano, J. Gervasoni, M. Bargagli, G. Rovere, PF Bassi, G. Gambaro, Cyfansoddiad cerrig a calcifications fasgwlaidd mewn cleifion â nephrolithiasis, J. Nephrol. 32 (2019) 589–594.
[18] G. Schubert, Dadansoddiad carreg, Urol. Res. 34 (2006) 146–150.
[19] A. Vinaiphat, S. Aluksanasuwan, J. Manissorn, S. Sutthimethakorn, V. Thongboonkerd, Ymateb celloedd tiwbaidd arennol i fathau gwahaniaethol a dosau o grisialau calsiwm oxalate: dadansoddiad rhwydwaith proteome integredig ac ymchwiliadau swyddogaethol, Proteomeg 17 (2017) ), 1700192.
[20] P. Peerapen, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Dadansoddiad rhwydwaith Protein ac astudiaethau swyddogaethol o sytowenwyndra calsiwm oxalate a achosir gan grisial mewn celloedd epithelial tiwbaidd arennol, Proteomics 18 (2018), 1800008.
[21] KP Aggarwal, S. Narula, M. Kakkar, C. Tandon, Nephrolithiasis: mecanwaith moleciwlaidd ffurfio cerrig arennol a'r rôl hanfodol a chwaraeir gan fodylwyr, Biomed. Res. Int. 2013 (2013), 292953.
[22] VN Ratkalkar, JG Kleinman, Mecanweithiau ffurfio cerrig, Clin. Glöwr Esgyrn y Parch. Metab. 9 (2011) 187–197.
[23] X. Zeng, Y. Xi, W. Jiang, Rolau amddiffynnol flavonoids a darnau planhigion llawn flavonoid yn erbyn urolithiasis: adolygiad, Crit. Gwydd Bwyd y Parch. Nutr. 59 (2019) 2125–2135.
[24] MC Nirumand, M. Hajialyani, R. Rahimi, MH Farzaei, S. Zingue, SM Nabavi, A. Bishayee, Planhigion dietegol ar gyfer atal a rheoliarencerrig: tystiolaeth rag-glinigol a chlinigol a mecanweithiau moleciwlaidd, Int. J. Mol. Sci. 19 (2018) 765.
[25] S. Ahmed, MM Hasan, H. Khan, ZA Mahmood, S. Patel, Mewnwelediad mecanistig polyffenolau mewn lliniaru urolithiasis calsiwm oxalate, Biomed. Pharm. 106 (2018) 1292–1299.
[26] VV Prabhu, D. Sathyamurthy, A. Ramasamy, S. Das, M. Anuradha, S. Pachiappan, Gwerthusiad o effeithiau amddiffynnol diosmin (flavonoid sitrws) mewn urolithiasis a achosir gan gemegol mewn llygod mawr arbrofol, Pharm. Biol. 54 (2016) 1513–1521.
[27] A. Noorafshan, S. Karbalay-Doust, F. Karimi,Diosminyn lleihau dyddodiad calsiwm oxalate a dirywiad meinwe mewn nephrolithiasis mewn llygod mawr: astudiaeth stereolegol, Corea J. Urol. 54 (2013) 252–257.
[28] V. Thongboonkerd, T. Semangoen, S. Chutipongtanate, Ffactorau sy'n pennu mathau a morffolegau o grisialau calsiwm oxalate: crynodiadau molar, byffro, pH, troi a thymheredd, Clin. Chim. Acta 367 (2006) 120–131.
[29] V. Thongboonkerd, T. Semangoen, S. Sinchaikul, ST Chen, Dadansoddiad Proteomig o galsiwm oxalate monohydrate sytowenwyndra a achosir gan grisial mewn celloedd tiwbaidd arennol distal, J. Proteome Res. 7 (2008) 4689–4700.
[30] P. Amimanan, R. Tavichakorntrakool, K. Fong-ngern, P. Sribenjalux, A. Lulitanond, V. Prasongwatana, C. Wongkham, P. Boonsiri, WJ Umka, V. Thongboonkerd, ffactor elongation Tu ar Escherichia coli ynysig o wrin o gleifion cerrig arennau yn hyrwyddo twf calsiwm oxalate grisial a agregu, Sci. Sylw 7 (2017) 2953.
[31] S. Khamchun, K. Sueksakit, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Effeithiau modiwleiddio ffibronectin ar grisialu calsiwm oxalate, twf, agregu, adlyniad ar gelloedd tiwbaidd arennol, a goresgyniad trwy fatrics allgellog, J. Biol. Inorg. Cemeg. 24 (2019) 235–246.
[32] S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Diffinio a dadansoddiadau systematig o fynegeion agregu i werthuso gradd agregiad grisial calsiwm oxalate, Blaen. Cemeg. 5(2017)113.
[33] Mae R. Kanlaya, O. Naruepantawart, V. Thongboonkerd, Flagellum yn gyfrifol am hyrwyddo effeithiau Escherichia coli hyfyw ar grisialu calsiwm oxalate, twf grisial, a chydgasglu grisial, Blaen. Microbiol 10 (2019) 2507.
[34] P. Peerapen, V. Thongboonkerd, proteinau rhwymo gwahaniaethol a galluoedd gludiog o grisialau calsiwm oxalate monohydrate gyda meintiau amrywiol, Int. J. Biol. Macromol. 163 (2020) 2210–2223.
[35] K. Fong-ngern, K. Sueksakit, V. Thongboonkerd, Mae protein sioc gwres wyneb 90 yn gwasanaethu fel derbynnydd posibl ar gyfer grisial calsiwm oxalate ar bilen apical o gelloedd epithelial tiwbaidd arennol, J. Biol. Inorg. Cemeg. 21 (2016) 463–474.
[36] S. Chaiyarit, S. Mungdee, V. Thongboonkerd, Labelu anymbelydrol o grisialau calsiwm oxalate ar gyfer ymchwiliadau i ryngweithio a mewnoli crisial-gell, rhefrol. Dulliau 2 (2010) 1536–1541.
[37] S. Chaiyarit, N. Singhto, V. Thongboonkerd, Calsiwm oxalate monohydrate crisialau mewnol i mewn i gelloedd tiwbaidd arennol yn cael eu diraddio a hydoddi gan endolysosomau, Chem. Biol. Rhyngweithio. 246 (2016) 30–35.
[38] W. Chiangjong, V. Thongboonkerd, Assay newydd i werthuso hyrwyddo effeithiau proteinau ar ymlediad grisial calsiwm oxalate trwy fatrics allgellog yn seiliedig ar weithgaredd plasminogen/plasmin, Talanta 101 (2012) 240-245.
[39] Cynyddodd W. Chiangjong, V. Thongboonkerd, crisialau calsiwm oxalate secretion enolase-1 o gelloedd tiwbaidd arennol a oedd wedi hynny yn gwella ymlediad crisial a monocyte trwy interstitium arennol, Sci. Sylw 6 (2016) 24064.
[40] R. Kanlaya, K. Sintiprungrat, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Macropinocytosis yw'r prif fecanwaith ar gyfer endocytosis o grisialau calsiwm oxalate i mewn i gelloedd tiwbaidd arennol, Cell Biochem. Bioffys. 67 (2013) 1171–1179.
[41] S. Sassanarakkit, P. Peerapen, V. Thongboonkerd, StoneMod: cronfa ddata ar gyferarenproteinau modiwleiddio carreg gyda thystiolaeth arbrofol, Sci. Sylw 10 (2020) 15109.
[42] G. Eraslan, ZS Sarica, LC Bayram, MY Tekeli, M. Kanbur, M. Karabacak, Effeithiau diosmin ar niwed i'r afu a'r arennau a achosir gan afflatocsin, Environ. Sci. Llygredd. Res. Int. 24 (2017) 27931–27941.
[43] R. Russo, D. Chandradhara, N. De Tommasi, Bio-argaeledd cymharol daudiosminfformwleiddiadau ar ôl gweinyddiaeth lafar i wirfoddolwyr iach, Moleciwlau 23 (2018) 2174.
[44] JQ Silveira, TB Cesar, JA Manthey, EA Baldwin, J. Bai, S. Raithore, Ffarmacokinetics o glycosidau flavanone ar ôl amlyncu dosau sengl o sudd oren wedi'i wasgu'n ffres yn erbyn sudd oren wedi'i brosesu'n fasnachol mewn pobl iach, J. Agric . Cemegydd Bwyd. 62 (2014) 12576–12584.
[45] A. Frackowiak, P. Skibinski, W. Gawel, E. Zaczynska, A. Czarny, R. Gancarz, Synthesis o ddeilliadau glycoside o hydroxyanthraquinone gyda'r gallu i hydoddi ac atal ffurfio crisialau o galsiwm oxalate. Cyfansoddion posibl mewn therapi cerrig arennau, Eur. J. Med. Cemeg. 45 (2010) 1001–1007.
[46] F. Grases, J. Perello, B. Isern, RM Prieto, Astudiaeth o hufen myo-inositol seiliedig ar hecsaffosffad i atal dystroffig calcinosis cutis, Br. J. Dermatol. 152 (2005) 1022–1025.
[47] V. Thongboonkerd, Proteomeg rhyngweithiadau crisial-gell: model ar gyfer ymchwil cerrig yn yr arennau, Celloedd 8 (2019) 1076.
[48] CF Verkoelen, cadw grisial mewn clefyd cerrig arennol: rôl hanfodol ar gyfer hyaluronan glycosaminoglycan? J. Am. Soc. Nephrol. 17 (2006) 1673–1687.
[49] K. Fong-ngern, A. Vinaiphat, V. Thongboonkerd, Anafiad Microvillar mewn celloedd epithelial tiwbaidd arennol a achosir gan grisial calsiwm oxalate a rôl amddiffynnol epigallocatechin galate, FASEB J. 31 (2017) 120 -131.
[50] J. Zhou, J. Jin, X. Li, Z. Zhao, L. Zhang, Q. Wang, J. Li, Q. Zhang, S. Xiang, Cyfanswm flavonoids o Desmodium styracifolium attenuates ffurfio hydroxy- Wolithiasis calsiwm oxalate a achosir gan L- mewn llygod mawr, Urolithiasis 46 (2018) 231–241.
[51] J. Manissorn, K. Fong-ngern, P. Peerapen, V. Thongboonkerd, Gwerthusiad systematig ar gyfer effeithiau pH wrin ar grisialu calsiwm oxalate, adlyniad crisial-gell a mewnoli i gelloedd tiwbaidd arennol, Sci. Sylw 7 (2017) 1798.
[52] S. Cui, J. Qian, P. Bo, Effaith rhwystrol ar ffagocytosis Candida albicans a achosir gan pretreatment â quercetin trwy ymyrraeth cytoskeleton actin, J. Tradit. Gên. Med. 33 (2013) 804–809.
[53] Mae S. Cui, Q. Wu, J. Wang, M. Li, J. Qian, S. Li, Quercetin yn atal mudo macrophage a achosir gan LPS trwy atal y llwybr iNOS / FAK / paxillin a modiwleiddio'r cytoskeleton, Cell Adhes . Migr. 13 (2019) 1–12.
[54] Y. Li, WG Gonzalez, A. Andreev, W. Tang, S. Gandhi, A. Cunha, D. Prober, C. Lois, ME Bronner, ailgylchu pilen cyfryngol Macropinocytosis yn gyrru mudo crib niwral trwy gyflwyno F- actin i'r lamellipodium, Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 117 (2020) 27400–27411.
[55] H. Inaba, K. Yoda, H. Adachi, Mae angen y GflB RapGEF-rhwymo F-actin ar gyfer macropinocytosis effeithlon yn Dictyostelium, J. Cell Sci. 130 (2017) 3158–3172.
[56] A. Khan, Nifer yr achosion, mecanweithiau pathoffisiolegol a ffactorau sy'n effeithio ar urolithiasis, Int. Urol. Nephrol. 50 (2018) 799–806.
[57] AP Evan, EM Caerwrangon, FL Coe, J. Williams Jr., JE Lingeman, Mecanweithiau ffurfio cerrig yn yr arennau dynol, Urolithiasis 43 (Suppl 1) (2015) 19–32.
[58] S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, camweithrediad Mitochondrial aarenclefyd y maen, Blaen. Physiol. 11 (2020), 566506.
[59] SR Khan, Agweddau histolegol ar y model "gronyn sefydlog" o ffurfio cerrig: astudiaethau anifeiliaid, Urolithiasis 45 (2017) 75–87.
[60] VY Bird, SR Khan, Sut mae cerrig yn ffurfio? A yw uno damcaniaethau ar ffurfiant cerrig yn bosibl? Arch. Esp. Urol. 70 (2017) 12–27.
[61] JP Kavanagh, Dulliau ar gyfer astudio crisialu calsiwm oxalate a'u cymhwysiad i ymchwil urolithiasis, Scanning Microsc. 6 (1992) 685–704, trafodaeth 704-5.
[62] JP Kavanagh, L. Jones, PN Rao, cineteg grisialu Calsiwm oxalate ar wahanol grynodiadau o wrin dynol ac artiffisial, gyda chymhareb cyson o galsiwm i oxalate, Urol. Res. 27 (1999) 231–237.
[63] NK Saw, PN Rao, JP Kavanagh, A. nidus, crystalluria a agregu: cynhwysion allweddol ar gyfer ehangu cerrig, Urol. Res. 36 (2008) 11–15.
[64] A. Borissova, GE Goltz, JP Kavanagh, TA Wilkins, Reverse peirianneg yr aren: modelu calsiwm oxalate monohydrate crystallization yn y neffron, Med. Biol. Eng. Cyfrifiadur. 48 (2010) 649–659.
[65] LA Thurgood, ES Sorensen, RL Ryall, Effaith osteopontin mewngrisialog ac arwyneb wedi'i rwymo ar atodi crisialau dihydrad calsiwm oxalate i gelloedd aren cwn Madin-Darby (MDCK) mewn wrin dynol uwch-hidlo, BJU Int. 109 (2012) 1100–1109.