Mae Echinacoside yn Gwneud Gweithgaredd Gwrth-tiwmor mewn Canser yr Afu
Mar 31, 2022
Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Wen Li*, Jing Zhou, Yajie Zhang, Jing Zhang, Xue Li, Qiao Yan, Jiabing Han, a Fangdi Hu*
Haniaethol
Cefndir:Echinacoside (ECH) yw prif gynhwysyn gweithredol Cistanches Herba, y gwyddys ei fod yn cael effeithiau therapiwtig ar diwmorau metastatig. Fodd bynnag, mae effeithiau ECH ar ganser yr afu yn aneglur o hyd. Diben yr astudiaeth hon oedd ymchwilio i effeithiau ECH ar ymddygiad ymosodol celloedd canser yr afu.
Dulliau:Cafodd dau fath o gelloedd canser yr afu, Huh7 a HepG2, eu trin â dosau gwahanol o ECH ar wahanol adegau a graddiannau. Defnyddiwyd profion MTT a ffurfiant cytrefi i bennu effeithiau ECH ar hyfywedd celloedd Huh7 a HepG2. Defnyddiwyd profion Transwell a phrofion cytometreg llif i ganfod effeithiau triniaeth ECH ar ymlediad, mudo, apoptosis, a chylchred celloedd Huh7 a HepG2. Defnyddiwyd dadansoddiad blotiau gorllewinol i ganfod effeithiau ECH ar lefelau mynegiant proteinau cysylltiedig â TGF- 1, smad3, smad7, apoptosis (Caspase-3, Caspase-8), a Cyto C mewn celloedd canser yr afu. Canfuwyd y berthynas rhwng miR-503-3p a TGF{- 1 gan ddefnyddio dadansoddiad biowybodeg a assay gohebydd Luciferase.
Canlyniadau:Dangosodd y canlyniadau fod ECH yn atal ymlediad, goresgyniad, a mudo celloedd Huh7 a HepG2 mewn modd dos ac amser-ddibynnol. Ar ben hynny, canfuom fod ECH wedi achosi apoptosis celloedd Huh7 a HepG2 trwy rwystro celloedd yn y cyfnod S. Ymhellach, canfuwyd bod mynegiant miR-503-3p yn lleihau ym meinweoedd tiwmor yr iau, ond cynyddodd triniaeth ECH fynegiant miR-503-3p yng nghelloedd Huh7 a HepG2. Yn ogystal, canfuom fod TGF- 1 wedi'i nodi fel targed posibl o miR-503-3p. Hyrwyddodd ECH weithrediad llwybr signalau TGF- 1/Smad a chynyddodd lefelau mynegiant Bax/Bcl-2. Ar ben hynny, gallai ECH sbarduno rhyddhau Cyto C mitocondriaidd, ac achosi gradd Caspases adwaith.
Casgliadau:Mae'r astudiaeth hon yn dangos bod ECH yn gwneud gweithgaredd antitumor trwy'r echel miR-503-3p/TGF- 1/Smad mewn canser yr afu, ac yn darparu cyfrwng gwrth-diwmor diogel ac effeithiol ar gyfer canser yr afu.
Geiriau allweddol: Echinacoside, canser yr afu, Apoptosis, MiR-503-3p, TGF- 1/smad
Mae Cistanche yn asiant gwrth-tiwmor diogel ac effeithiol ar gyfer canser yr afu.
Rhagymadrodd
Mae canser yr afu yn un o'r tiwmorau malaen mwyaf cyffredin gyda chyfradd mynychder uchel, ac mae nifer yr achosion o ganser yr afu wedi bod yn tyfu'n gyflym [1]. Hepatectomi yw'r ffordd orau o drin canser yr afu ar gyfer cleifion yn ei gamau cynnar [2]. Fodd bynnag, mae'r rhan fwyaf o gleifion yn ailadrodd a metastasis ar ôl llawdriniaeth. Dim ond tua 3-5 y cant yw'r 5-gyfradd goroesi blwyddyn [2]. Felly, mae angen dulliau ac asiantau therapiwtig newydd ar frys.
Yn ystod yr ychydig flynyddoedd diwethaf, mae datblygiad cyffuriau canser ac ymchwil ar ffytogemegau wedi dechrau rhoi sylw i ethnopharmacoleg [3, 4]. Mae nifer fawr o astudiaethau clinigol ac arbrofol wedi dangos y gall monomerau meddyginiaeth atal amlhau, metastasis celloedd carcinoma hepatogellog, achosi apoptosis a gwahaniaethu celloedd canser [5]. Planhigyn sy'n perthyn i'r teulu o blanhigion yw Cistanches Herba , sy'n feddyginiaeth draddodiadol yn Tsieina ac sy'n cael ei adnabod fel "ginseng anialwch" [6] . Mae Cistanches Herba yn gyfoethog mewn mathau o gydrannau cemegol, ac mae ymchwilwyr gartref a thramor wedi ynysu mwy na chant o gyfansoddion ohono, gan gynnwys glycosidau ffenylethanol, lignans, terpenau cycloaliphatig, siwgrau, asidau amino, ac ati [7]. Echinacoside (ECH) yw prif gydran Cistanches Herba ac fe'i hystyrir yn gyffredinol fel ei brif gynhwysyn gweithredol [6]. Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae astudiaethau wedi dangos y gallai ECH fod yn opsiwn triniaeth newydd ar gyfer tiwmorau ymosodol neu fetastatig eang [8]. Mae astudiaethau wedi canfod y gall ECH atal canser y pancreas, lewcemia, canser gastrig, canser endometrial, a llawer o diwmorau eraill [9]. Fodd bynnag, nid oes adroddiad am effaith ECH ar ddatblygiad canser yr afu.
Mae MiRNAs yn chwarae rhan ganolog yn y rheoliad ôl-drawsysgrifol o fynegiant genynnau (10). Mae astudiaethau helaeth wedi dangos bod cysylltiad agos rhwng miRNAs a chanser yr afu [11] a Sglerosis Ymledol. Mae MiR{3}}p yn miRNA sydd newydd ei ddarganfod sy'n ymwneud ag amlhau, mudo ac ymlediad celloedd tiwmor [12]. Fodd bynnag, mae ei swyddogaeth mewn canser yr afu yn aneglur. Ar hyn o bryd, mae ymchwil genynnau targed miRNA i lawr yr afon mewn cyfnod cymharol aeddfed, ond mae llawer o loci genynnau targed heb eu darganfod o hyd. Mae llwybr trosglwyddo signal TGF- 1/Smad3 yn arbennig o bwysig ar gyfer tumorigenesis a datblygiad [13]. Canfuwyd bod llwybr TGF- 1/Smad3 wedi’i actifadu yn y model hepatoma, sy’n awgrymu bod llwybr TGF- 1/Smad3 yn chwarae rhan arwyddocaol yn natblygiad canser yr afu [14]. Ystyrir bod mynegiant uchel llwybr TGF- 1/Smad3 yn un o'r rhesymau allweddol dros achosion o ganser yr afu [15]. Er mwyn ymchwilio ymhellach i'r mecanwaith sylfaenol a oedd yn cyfryngu effeithiau ECH ar ganser yr afu, archwiliwyd llwybr miRNA/ TGF- 1/Smad3.
Yn yr astudiaeth hon, gwnaethom werthuso effeithiau ECH ar ddatblygiad celloedd canser yr afu a chanfod bod ECH yn cyflawni gweithgaredd gwrth-tiwmor trwy echelin miR-503-3p/TGF- 1/Smad mewn canser yr afu, ac yn darparu asiant gwrth-tiwmor diogel ac effeithiol ar gyfer canser yr afu.
cistanche tcmyn gwrth-ganser.
Dulliau a deunyddiau
Defnyddiau
Echinacoside (ECH) (purity>Cafwyd 98 y cant, monohydrate) gan Hetian Dichen sashing Pharmaceutical Development Co, Ltd (Xinjiang, Tsieina). Dangoswyd y fformiwla adeileddol yn Ffig. 1.
Diwylliant celloedd a thrawsnewidiad
Prynwyd llinellau celloedd canser yr afu dynol Huh7 a HepG2 gan FENGHUISHENGWU (Hunan, Tsieina). Cafodd celloedd eu meithrin mewn cyfrwng DMEM wedi'i ategu â serwm buchol ffetws 10 y cant (FBS, Gibco, UDA) ar 37 gradd mewn deorydd celloedd CO2 5 y cant. Cafwyd MiR-503-3p mimic a miR-NC gan Shanghai Gene Pharmaceutical Co., Ltd. (Shanghai, Tsieina). Perfformiwyd yr holl drawsnewidiadau gan ddefnyddio adweithydd Lipofectamine 2000 (Invitrogen) gan ddilyn cyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Ar ôl 24-48 h ychwanegol, casglwyd a phroseswyd y celloedd a drawsgludwyd ar gyfer astudiaethau pellach.
Assay gohebydd Luciferase
Tynnwyd cyfanswm yr RNAs o gelloedd, a chwyddwyd TGF- gan ddefnyddio paent preimio WT ac MUT. Mewnosodwyd darn o TGF- 1 yn fector gohebydd pGL3-Bashc luciferase o'r enw TGF- -WT-Luc. Mutageneiddiwyd y rhanbarth rhwymo o 1 a miR-503-3p i ffurfio plasmid mutant a ddynodwyd yn TGF- 1-Mut-Luc. TGF 1-WT-Luc a TGF- 1-Cafodd Mut-Luc eu cyd-drosglwyddo i gelloedd gyda miR-503-3p mimic a pRLTK. Cesglwyd celloedd 6 awr ar ôl eu trawsffurfio. Defnyddiwyd Pecyn Assay Gohebydd Deuol-Luciferase (Promega, Madison, WI, UDA) i bennu gweithgaredd luciferase.
Assay twf celloedd
Gosodwyd celloedd Huh7 a HepG2 (2×105) mewn 96-blatiau ffynnon. Yna cafodd celloedd eu trin ag ECH am 24, 36, a 48 h. Ar ôl hynny, ychwanegwyd hydoddiant MTT 10 ml at bob ffynnon a deorwyd y celloedd am 4 h. Ar ôl hynny, ychwanegwyd 150 μL o DMSO at y ffynhonnau. A mesurwyd yr amsugnedd ar 570 nm gan ddarllenydd ELISA (Aoweiya, Beijing, Tsieina).
Ffurfio trefedigaeth
Paratowyd ataliad un-gell o'r celloedd a drosglwyddwyd a'i feithrin mewn deorydd am 7 diwrnod. Ar ôl taflu'r cyfrwng, cafodd celloedd eu staenio â staen Wright am 5 munud ac yna eu staenio â hydoddiant llifyn Giemsa a hydoddiant byffer ffosffomolybdate Sorensen (1:9) am 10 munud. Ar ôl golchi, cafodd cytrefi eu cyfrif o dan ficrosgop.
Assay Transwell
Cynhaliwyd profion mudo a goresgyniad yn siambrau Transwell (Costar, Badhoevedorp, tiroedd Te Nether) wedi'u gorchuddio â neu heb Maribel (BD Biosciences) ar wyneb uchaf y bilen {{0}}μm (maint mandwll). Ar gyfer assay mudo, ail-ataliwyd celloedd Huh7 a HepG2 trawsgludedig mewn 200 µL o gyfrwng DMEM di-serwm a'u hadu yn y siambrau uchaf. Ar gyfer yr assay goresgyniad, roedd Matrigel (30 ug/wel) wedi'i rag-orchuddio ar bilenni'r siambrau uchaf ac roedd camau eraill yr un fath â'r assay mudo. Ar ôl deoriad o 24 h, gosodwyd celloedd a oedd wedi mudo neu oresgyn trwy'r bilen i'r wyneb isaf ag ethanol a'u staenio â fioled grisial 0.2 y cant. Yn olaf, arsylwyd celloedd a'u cyfrif mewn pum maes ar hap gan ddefnyddio microsgop.
Dadansoddiad cylchred celloedd
Cafodd celloedd Huh7 a HepG2 eu hadu mewn 6-blatiau ffynnon ar ddwysedd o 1 × 105 cell/mL. Cesglwyd celloedd ar ôl cael eu trin ag ECH am 0, 24, 48 h. Yna ychwanegwyd celloedd tese gydag 1 ml o rew wedi'i ragoeri 75 y cant ethanol, sefydlog ar 20 gradd am 2 awr. Ar ôl hynny, ychwanegwyd toddiant staenio PI i gelloedd a'u deor mewn tywyllwch am 15 munud. Yna dadansoddwyd y gylchred gell yn ôl cytometreg llif.
Dadansoddiad celloedd apoptotig
Cafodd celloedd eu platio i 6-blatiau ffynnon ar ddwysedd o 5 × 105 o gelloedd/ffynnon. Ar ôl eu casglu, cafodd celloedd eu ffosio centri ac ychwanegwyd 195 μL o ateb rhwymo Annexin V-FITC i ail-alw'r celloedd. Nesaf, ychwanegwyd 5 μL Annexin V-FITC a 10 μL ateb staenio ïodid propidium. Roedd celloedd yn cael eu deor yn y tywyllwch ac yna eu rhoi mewn baddon iâ.
Mae Cistanche yn amddiffyn yr afu.
Trawsgrifiad meintiol gwrthdro PCR (qRT-PCR)
Echdynnwyd cyfanswm RNAs gan adweithydd TRIzol (Haigene, Haerbin, Tsieina). Defnyddiwyd system PCR amser real Te viiA™ 7 ar gyfer qRT-PCR. Trawsgrifiwyd RNA o chwith i cDNA gan ddefnyddio Pecyn Synthesis cDNA Llinyn Cyntaf BeyoRT™ (Sefydliad Biotechnoleg Beyotime). Defnyddiwyd U6 fel rheolaeth mewndarddol [16]. Roedd y dilyniannau paent preimio fel a ganlyn:
miR{0}}p: ymlaen: 5′-CTGATGGTTAAGGAATGT-3′,
miR{0}}p: cefn: 5′-GTCCTTGGACATCCGGGCCG-3′,
U6: ymlaen: 5′-GACAGATTCGGTCTGGGCAC-3′,
U6: cefn: 5′-GATTACCCCGTCGGCCATCGATC-3′.
Dadansoddiad o blotiau gorllewinol
Casglwyd y celloedd a drosglwyddwyd ac echdynnwyd cyfanswm y proteinau. Pennwyd crynodiadau protein gan ddefnyddio Pecyn Assay Protein BCA. Gwahanwyd samplau protein gan 10 y cant SDS-PAGE a'u trosglwyddo i bilen fflworid polyvinylidene. Yna deorwyd y bilen â gwrth-TGF- 1 (1:1000, Shifeng, Shanghai, Tsieina), SMAD3 (1:1000, Shifeng, Shanghai, Tsieina), SMAD 7 (1:1000, Shifeng, Shanghai, Tsieina), Bcl-2 (1:1000, Shifeng, Shanghai, Tsieina), Bax (1:1000, Shifeng, Shanghai, Tsieina), Cyto C (1:1000, Shifeng, Shanghai, Tsieina), caspase{ {19}} (1:1000, Shifeng, Shanghai, Tsieina), caspase-8 (1:1000, Shifeng, Shanghai, Tsieina) a gwrthgorff gwrth- -actin (1:1000, Shifeng, Shanghai , Tsieina) dros nos. Roedd deg y bilen deor gyda'r gwrthgorff uwchradd gwrth-cwningen (1:1000, Shifeng, Shanghai, Tsieina) [17].
Dulliau ystadegol
Cyflwynwyd y data fel y gwyriad safonol cymedrig (SD). Cynhaliwyd yr holl ddadansoddiadau ystadegol gyda meddalwedd SPSS 13.0. Defnyddiwyd prawf-t y myfyriwr ar gyfer cymariaethau. p-value < 0.05="" yn="" cael="" ei="" ystyried="" yn="">
Canlyniadau
Effaith ECH ar weithgaredd celloedd canser yr iau dynol ac ymlediad
Er mwyn ymchwilio i effaith ECH ar weithrediad celloedd canser yr afu dynol, perfformiwyd assay MTT a dangosodd y canlyniadau fod hyfywedd celloedd HepG2 (Ffig. 2a) a Huh7 (Ffig. 2b) wedi gostwng yn raddol gyda chynnydd dos ac amser o Triniaeth ECH o'i gymharu â'r grŵp rheoli (p < 0.01).="" ar="" ôl="" amlygiad="" 48="" h="" o="" ech,="" hyfywedd="" y="" gell="" oedd="" yr="" isaf,="" felly="" dewiswyd="" amlygiad="" 48="" h="" o="" ech="" ar="" gyfer="" arbrawf="" pellach.="" dangosodd="" canlyniadau="" asesiad="" ffurfiant="" cytrefi="" fod="" nifer="" y="" cytrefi="" o="" gelloedd="" hepg2="" (ffig.="" 2c)="" a="" huh7="" (ffig.="" 2d)="" wedi="" gostwng="" yn="" raddol="" trwy="" drin="" ech="" mewn="" modd="" dibynnol="" ar="" ddos="" o'i="" gymharu="" â'r="" grŵp="" rheoli="" (p="">< 0="" .01,="" p=""><0.001). mae'r="" canlyniadau="" hyn="" yn="" dangos="" bod="" ech="" yn="" chwarae="" rhan="" bwysig="" yng="" ngweithgaredd="" ac="" ymlediad="" celloedd="">
Effeithiau ECH ar ymfudiad a goresgyniad celloedd canser yr iau dynol
Er mwyn ymchwilio ymhellach i effaith ECH ar weithrediad celloedd canser yr afu dynol, canfuwyd mudo celloedd a goresgyniad. Fel y dangosir yn Ffig. 3a, b, o'i gymharu â'r grŵp heb driniaeth o ECH, gostyngwyd yn sylweddol ymfudiad a goresgyniad celloedd Huh7 a HepG2 ar ôl trin ECH mewn modd dibynnol ar ddos (t.<0.01,><0.001), suggesting="" that="" ech="" inhibited="" the="" migration="" and="" invasion="" of="" huh7="" and="" hepg2="">
Dosbarthiad celloedd canser yr afu dynol ac apoptosis a reoleiddir gan ECH
Er mwyn archwilio effaith ECH ar apoptosis celloedd canser yr afu, cynhaliwyd cytometreg llif. Fel y dangosir yn Ffig. 4a, o gymharu â'r grŵp rheoli, gostyngwyd canran y celloedd Huh7 a HepG2 yn y cyfnod G0/G1 yn sylweddol ar ôl triniaeth ECH mewn modd sy'n dibynnu ar ddos (t<0.01), and="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" the="" s="" phase="" was="" gradually="" increased="" after="" ech="" treatment="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01), but="" there="" was="" no="" change="" of="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" g2/m="" phase="" after="" ech="" treatment="" (p="">0.05), yn nodi bod ECH wedi achosi arestiad cyfnod S o gelloedd Huh7 a HepG2. Yn ogystal, gyda chynnydd yn y dos o ECH, cynyddodd cyfradd apoptosis celloedd Huh7 a HepG2 yn raddol o gymharu â'r grŵp rheoli (Ffig. 4b, t.<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" induced="" the="" apoptosis="" of="" huh7="" and="" hepg2="">
Effeithiau ECH ar y llwybr TGF-1/Smad
Mae'n hysbys bod llwybr signalau TGF- 1/Smad yn ymwneud llawer ag apoptosis celloedd. Er mwyn ymchwilio i fecanwaith apoptosis a achosir gan ECH mewn celloedd HepG2. Canfuwyd mynegiant llwybr signalau TGF- 1/Smad. O'i gymharu â'r grŵp rheoli, canfuom fod triniaeth ECH yn lleihau'n sylweddol lefelau mynegiant TGF- 1 a Smad3 ar lefelau mRNA (Ffig. 5a) a phrotein (Ffig. 5b), ac yn uwch-reoleiddio mynegiant y ddau yn sylweddol. Smad7 mewn modd dos-ddibynnol ar lefelau mRNA a phrotein (t<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" inhibited="" the="" activation="" of="" the="" tgf-β1/smad="" signaling="">
Roedd TGF- 1 yn darged uniongyrchol o miR-503-3c
Yn ogystal, mae'r offeryn rhagfynegi ar-lein Starbase v2. dangos bod TGF- 1 yn darged posibl miR-503-3p (Ffig. 6a). Dangosodd canlyniadau asesiad genynnau gohebydd Luciferase fod gweithgaredd luciferase celloedd HepG2 a chelloedd Huh7 wedi'u cyd-drawsgludo â miR-503-3p mimic a TGF- 1-WT wedi'i leihau'n sylweddol, ond nid oedd y celloedd wedi'u cyd-drawsnewid â miR{ {10}}p dynwared a TGF- 1-MUT (Ffig. 6b, t<0.01). similarly,="" the="" luciferase="" activity="" of="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-="" mut="" was="" signifcantly="" increased,="" but="" not="" the="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-wt="" (fig.="" 6c,=""><0.01). furthermore,="" the="" expression="" levels="" of="" tgf-β1="" were="" signifcantly="" reduced="" in="" the="" mir-503-3p="" mimic="" group="" compared="" with="" that="" in="" the="" nc="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.01), but="" signifcantly="" increased="" in="" the="" mir-503-3p="" inhibitor="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.05). these="" results="" suggested="" that="" tgf-β1="" was="" a="" direct="" target="" of="" mir-503-3p.="" to="" further="" investigate="" whether="" mir-503-3p="" mediated="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="" cancer,="" the="" expression="" of="" mir-503-3p="" was="" detected="" in="" liver="" cancer="" tissues="" and="" it="" showed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" were="" decreased="" in="" liver="" cancer="" tissues="" compared="" with="" that="" in="" normal="" liver="" tissues="" (fig.="" 6f,=""><0.01). moreover,="" the="" expression="" levels="" of="" mir503-3p="" were="" further="" decreased="" in="" metastasis="" liver="" cancer="" tissues="" than="" that="" in="" nonmetastatic="" liver="" cancer="" tissues="" (fig.="" 6g,=""><0.01). the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" were="" gradually="" increased="" after="" ech="" exposure="" (fig.="" 6e,=""><0.05,><0.01). taken="" together,="" these="" results="" suggest="" that="" mir-503-3p/tgf-β1="" may="" mediate="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="">
Effaith ECH ar weithgareddau cytochrome C a caspasau
Fel y dangosir yn Ffig. 7a, o gymharu â'r grŵp rheoli, canfuom fod triniaeth ECH wedi achosi gostyngiad sylweddol yn lefelau mynegiant Bcl-2 mewn modd sy'n dibynnu ar ddos (t.<0.01,><0.001), while="" the="" expression="" levels="" of="" bax="" were="" signifcantly="" increased="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01,><0.001). it="" was="" demonstrated="" that="" bcl-2="" and="" bax="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells.="" in="" addition,="" the="" expression="" levels="" of="" cyto="" c,="" caspase-8,="" and="" caspase-3="" were="" signifcantly="" increased="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" (fig.="" 7b,=""><0.01,><0.001), indicating="" that="" the="" release="" of="" cyto="" c="" and="" the="" activation="" of="" caspase-8="" and="" caspase-3="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="">
Trafodaeth
Echdoriad llawfeddygol yw'r prif ddull triniaeth ar gyfer cleifion â chanser yr afu, ac mae'r gyfradd ailadrodd a metastasis ar ôl echdoriad yr afu yn uchel [18, 19]. Yn yr astudiaeth hon, canfuom fod gan ECH effaith ataliol benodol ar diwmorau'r afu, ac mae'n darparu asiant gwrth-diwmor diogel ac effeithiol ar gyfer canser yr afu. Mae ymarfer clinigol wedi dangos y gall meddygaeth Tsieineaidd draddodiadol liniaru symptomau clinigol cleifion canser yr afu yn effeithiol [20]. Ar gyfer ECH, mae astudiaethau wedi dangos bod gan ECH effeithiau gwrthocsidiol, gwrth-iselder, gwrthlidiol, gwrthfeirysol, antitumor, a gwrthfacterol [21, 22]. Mewn canser colorefrol, gall ECH gymell apoptosis celloedd tiwmor trwy uwch-reoleiddio caspase-3 a holltiad ensymau atgyweirio DNA i gymell ocsidiad DNA [23]. Yn yr astudiaeth hon, canfuom am y tro cyntaf bod ECH yn gwneud gweithgarwch gwrth-tiwmor trwy echelin miR 503-3p/TGF- 1/Smad mewn canser yr afu/iau.
Gellir rhannu cyfnod rhynggellog cylchred celloedd celloedd ewcaryotig yn G1, S, a G2. Mae pwyntiau rheoleiddio'r gylchred gell ar wahanol gyfnodau yn cael eu rheoleiddio gan wahanol ffactorau rheoleiddio [24]. Canfu'r astudiaeth hon fod canran y celloedd Huh7 a HepG2 yn y cyfnod G0/G1 a G2/M wedi'i leihau, a chynyddwyd canran y celloedd yn y cyfnod S ar ôl ECH, gan nodi bod ECH wedi achosi arestiad cyfnod S. o gelloedd Huh7 a HepG2. Anghydbwysedd apoptosis yw un o brif fecanweithiau tiwmorau dynol. Dywedwyd bod cyffuriau cemotherapiwtig gwrth-diwmor yn gyffredinol yn ysgogi apoptosis o gelloedd canser ac yn rheoli dilyniant canser. Yn ein hastudiaeth, canfuom hefyd y gallai ECH ysgogi apoptosis celloedd canser yr afu mewn modd sy'n dibynnu ar ddos, gan awgrymu y gallai ysgogi apoptosis celloedd canser fod yn un o fecanweithiau sylfaenol ECH ar ganser yr afu.
Mae MiRNAs yn chwarae rhan allweddol wrth reoleiddio amlhau celloedd HCC, cylchred, apoptosis, mudo trwy ryngweithio â gwahanol lwybrau signalau a moleciwlau [25, 26]. Er enghraifft, canfuwyd bod miR-26a wedi'i fynegi'n fawr mewn celloedd arferol yr afu, ond mae'n cael ei isreoleiddio'n sylweddol mewn celloedd canser yr afu ac mae'n atal amlhau [27]. Mae gorfynegiant miR-503-3p yn achosi apoptosis o gelloedd canser yr ysgyfaint ac yn atal ymlediad celloedd a mudo [28]. Yn ogystal, mae nifer fawr o astudiaethau wedi dangos bod llwybr signalau TGF- 1/Smad yn chwarae rhan ganolog yn natblygiad canser yr afu [7]. Ar ben hynny, pan fydd canser yr afu yn parhau i gynyddu, adroddir bod mynegiant TGF- 1 yn cynyddu'n raddol [29]. Yn yr astudiaeth hon, canfuom fod ECH wedi is-reoleiddio TGF- 1 a Smad3, ac uwch-reoleiddio Smad7, gan ddangos bod ECH yn atal actifadu llwybr signalau TGF- 1/Smad. Yn yr astudiaeth hon, canfuwyd bod mynegiant miR-503-3p yn cael ei leihau ym meinweoedd tiwmor yr afu, ond cynyddodd triniaeth ECH fynegiant miR-503-3p yng nghelloedd Huh7 a HepG2. Yn ogystal, canfuom fod TGF- 1 wedi'i nodi fel targed posibl o miR{-503-3p. Hyrwyddodd ECH weithrediad llwybr signalau TGF- 1/Smad a chynyddodd lefelau mynegiant Bax/Bcl-2. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gallai llwybr signalau miR-503-3p/ TGF- 1/Smad cyfryngu effeithiau ECH ar ganser yr afu. Mae'n hysbys y gallai'r gymhareb uwch Bax/Bcl-2 achosi i Cyto C yn y mitocondria gael ei ryddhau i'r cytoplasm. Mae Cyto C yn rhyngweithio â Caspase-8 ac yn ffurfio corff apoptotig sydd wedyn yn recriwtio ac yn actifadu Caspase-3, sy'n achosi rhaeadru Caspases ac yn hyrwyddo marwolaeth celloedd [30]. Yn yr astudiaeth hon, canfuwyd bod ECH yn lleihau mynegiant Bcl-2 ac yn cynyddu mynegiant Bax, Cyto C, caspase-8, a caspase-3. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gall ECH atgyweirio anaf mitocondriaidd i raddau.
Casgliad Yn yr astudiaeth hon, canfuom fod triniaeth ECH yn atal amlhau, goresgyniad a mudo, ac wedi achosi apoptosis celloedd canser yr afu. Canfuwyd bod mecanwaith sylfaenol triniaeth ECH ar gelloedd canser yr afu yn gysylltiedig â llwybr signalau miR-503-3p/TGF- 1/Smad. Bydd yr astudiaeth hon yn darparu sail arbrofol benodol ar gyfer ymchwil ECH ar wrth-tiwmor. Mae'n werth nodi bod yr astudiaeth bresennol wedi'i chyfyngu gan ddiffyg arbrofion anifeiliaid. Felly, bydd ein hastudiaeth yn y dyfodol yn cynnal arbrofion anifeiliaid i gadarnhau ein canfyddiadau ymhellach.
