Gwella Biosynthesis Glycosidau Phenylethanoid yn Niwylliannau Celloedd Deserticola Cistanche Trwy Straen Osmotig

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Chun-Zhao Liu. Xi-Yu Cheng

HaniaetholYmchwiliwyd i effaith straen osmotig ar dwf celloedd a biosynthesis glycosidau ffenylethanoid (PeGs) mewn diwylliannau ataliad celloedd oCistanche deserticolaYC Ma, planhigyn meddyginiaethol anialwch a dyfir yn rhanbarth gorllewinol Tsieina. Effeithiodd crynodiadau swcros cychwynnol amrywiol yn sylweddol ar dwf celloedd a biosynthesis PeGs yn y diwylliannau ataliad, a chyrhaeddodd y pwysau sych uchaf a chroniad PeGs 15.9 gl–1-DW a 20.7 mg g–1-DW yn y drefn honno yn yr osmotig cychwynnol straen o 300 mOsm kg–1 lle roedd y crynodiad swcros yn 175.3 mM. Datgelodd dadansoddiad stoichiometrig gyda gwahanol gyfuniadau o swcros a siwgr anmetabolaidd (mannitol) neu gyfryngau osmotig nad ydynt yn siwgr (PEG a NaCl) fod straen osmotig ei hun yn ffactor pwysig ar gyfer gwella biosynthesis PeGs mewn diwylliannau ataliad celloedd oCistanche deserticola. Cafwyd uchafswm cynnwys PeGs o 26.9 a 23.8 mg g–1-DW ar ôl 21 diwrnod ar y cyfuniadau o swcros 87.6 mM gyda manitol 164.7 mM (303 mOsm kg–1) neu 20 mM PEG yn y drefn honno, a oedd yn uwch na sef meithriniadau celloedd C. deserticola a dyfwyd o dan grynodiad swcros cychwynnol o 175.3 mM ar ôl 30 diwrnod. Roedd cydberthynas rhwng y cronni PeGs ysgogol yn y diwylliannau ataliad celloedd â'r cynnydd mewn gweithgaredd ffenylalanine amoniwm lyase (PAL) a achosir gan straen osmotig.

Geiriau allweddol Cistanche deserticola, Planhigyn meddyginiaethol anialwch, glycosidau Phenylethanoid, straen osmotig, amonia-lyase Phenylalanine

Cistanchetubulosayn cael llawer o effeithiau, cliciwch yma i wybod mwy

Rhagymadrodd

Cistanche deserticolaMae YC Ma, perlysiau Tsieineaidd gwerthfawr, yn parasiteiddio gwreiddiau Haloxylon ammodendrun ac yn tyfu mewn ardaloedd anialwch gorllewin Tsieina. Mae glycosidau ffenylethanoid (PeGs), y prif gydrannau bioactif sydd wedi'u hynysu o C. deserticola, wedi nodi gweithgareddau amlwg wrth chwilio am radicalau rhydd, gwella imiwnedd, gwella swyddogaeth rywiol, ac ati (Zong et al. 1996; Lu 1998; Wang et al. 2001). Oherwydd ecsbloetio a defnyddio afreolus oCistanche deserticola, adnodd naturiolCistanche deserticola oedd ar ymyl blinder. Yn wyneb y problemau hyn, mae cynhyrchu PeGs gan ddiwylliannau crog celloedd o C. deserticola wedi cael ei ystyried fel dewis arall addawol i ddatrys y prinderCistanche deserticoladeunyddiau planhigion (Lu a Mei 2003; Ouyang et al. 2003; Cheng et al. 2005a).

Mae straen osmotig yn ffactor pwysig sy'n effeithio ar dwf planhigion, datblygiad, morffogenesis, a ffurfio metabolion eilaidd. Adroddwyd bod ychydig o rywogaethau planhigion meddyginiaethol yn cynhyrchu gwell metabolion eilaidd o ddiwylliannau meinwe in vitro o dan straen osmotig optimaidd (Kim et al. 2001; Wang et al. 1999; Wu et al. 2005). Mae swcros yn asiant straen osmotig arferol a ddefnyddir yn yr achosion hyn, ac mae hefyd yn ffynhonnell carbon ac ynni hanfodol. Felly, mae'n anodd iawn gwahanu effaith straen osmotig a rôl faethol siwgrau fel ffynonellau carbon. Roedd cynnydd o straen osmotig cychwynnol gyda mannitol nonmetabolic, sorbitol, a PEG hefyd yn gwella croniad paclitaxel mewn diwylliannau celloedd Taxus Chinensis, saponin a polysacarid yn cronni mewn diwylliannau celloedd Panax notoginseng, a chroniad eleutherosides mewn diwylliannau embryogenic Eleutherococcus sessiliflorus (Z1999; et al. 2001; Shohael et al. 2006). Dangosodd eu canlyniadau fod effeithiau crynodiad carbohydrad a straen osmotig yn wahanol yn ôl rhywogaethau planhigion a metabolion eilaidd.

Mae amcan yr astudiaeth gyfredol yn canolbwyntio ar effeithiau osmotig swcros, mannitol, PEG, a NaCl ar dwf celloedd a biosynthesis PeGs mewnCistanche deserticoladiwylliannau ataliad celloedd. Ymchwiliwyd i weithgaredd PAL yn y diwylliannau atal o dan wahanol gyfuniadau o gyfryngau osmotig cychwynnol, a thrafodir y mecanwaith posibl ar well cronni PeGs trwy gynyddu straen osmotig.

Defnyddiau a dulliau

Deunyddiau planhigion ac anwythiad callws

Hadau oCistanche deserticolaCasglwyd YC Ma o ardaloedd anialwch yn nhalaith Xinjiang yn Tsieina a'u storio yn 4C cyn eu defnyddio. Cadarnhawyd hunaniaeth botanegol trwy gymharu â safonau cyfeirio yn y Sefydliad Botaneg, Academi Gwyddorau Tsieineaidd, PR Tsieina. Cafodd hadau eu sterileiddio ar yr wyneb trwy drochi mewn 70 y cant ethanol am 30 s, yna eu trochi mewn hydoddiant dyfrllyd 20 y cant o 5.4 y cant sodiwm hypoclorit mewn dŵr am 20 munud, ac yna tri rinsiad â dŵr distyllog di-haint. Anwythwyd Calli o hadau wedi'u sterileiddio ar yr wynebCistanche deserticolaar gyfrwng MS (Murashige a Skoog 1962) wedi'i ategu ag 1.0 mg l–1 asid naffthaleneacetig (NAA), 2.0 mg l–1 6-bensyl adenine ({{7}) }BA), 0.25 mg l–1 2, 4-asid dichlorophenoxyacetig (2, 4-D), 6 gl–1 agar (PhytoTechnology LaboratoriesTM, ID Cynnyrch: A181) a swcros 30 gl–1 am 60 diwrnod mewn cabinet twf yn y tywyllwch ar 25C. Yna cafodd y diwylliannau callws a ysgogwyd o'r ecsbloetiaid hadau eu his-feithrin i'r cyfrwng solet uchod bob 30 diwrnod (Cheng et al. 2005a).

Sefydlu a chynnal diwylliannau ataliad celloedd

Mae'r diwylliannau callws ataliad (3.0g pwysau ffres) a gafodd eu hidlo drwy sgrin rhwyll 1,000 lm a'u cadw ar sgrin rhwyll 200 lm wedi'u his-feithrin i 500-ml Erlenmeyer fflasg sy'n cynnwys 100 ml o'r cyfrwng hylifol uchod ar siglwr cylchdro ar 110 rpm ar 25C mewn tywyllwch ar gyfnod isddiwylliant o 18 diwrnod. Addaswyd y pH canolig i 5.8 gyda 1 M NaOH neu 1 M HCl cyn awtoclafio. Defnyddiwyd y diwylliannau calws crog a isddiwylliwyd ar ôl deg gwaith fel inocwlwm ar gyfer y diwylliant fflasg arbrofol canlynol. Cynhaliwyd yr holl arbrofion fflasg mewn fflasgiau 250 ml Erlenmeyer a oedd yn cynnwys cyfrwng hylif 50 ml gyda 30 gl–1 swcros a'u brechu â 1.5 g o bwysau ffres o 18-ddiwylliannau daliant celloedd diwrnod oed. Cafodd y fflasgiau Erlenmeyer hyn eu deor ar siglwr cylchdro (110 rpm) ar 25C mewn tywyllwch.

Arbrawf straen osmotig

Ymchwilio i effaith crynodiad swcros cychwynnol artwf celloedd a chroniad PeGs,Cistanche deserticolacafodd diwylliannau atal eu meithrin mewn cyfrwng MS gyda 87.6,175.3, a swcros 262.9 mM. Ar gyfer cyflyrau straen osmotig,Cistanche deserticoladeorwyd diwylliannau atal yn MScyfrwng sy'n cynnwys swcros 87.6 mM wedi'i gyfuno â164.7 mM manitol. Asiantau osmotig eraill (PEG 4,000 aNaCl) yn cyfateb i osmolarity oswcros 87.6 mM. Y crynodiadau cyfatebol osmotigo asiantau osmotig eu pennu'n arbrofol fel PEG4,000 o 20 mM a NaCl o 50 mM, yn y drefn honno. Defnyddiwyd fflasgiau triphlyg ym mhob arbrawf a phob gwerthoedd y cyfrwng fflasgiau triphlyg ±SD.

Dadansoddi

Cistanche deserticolaarsylwyd celloedd diwylliedig o dan straen osmotig amrywiol gan ficrosgop golau Nikon AFX-DX (Nikon, Japan) o dan chwyddhadau 400·. Mesurwyd osmolaredd y cyfrwng diwylliant gydag osmomedr pwysedd anwedd (Fiske One-Ten Osmometer, MA, UDA). Ar gyfer penderfyniad pwysau ffres (FW), yCistanche deserticolaroedd celloedd yn cael eu pwyso'n ysgafn ar bapur hidlo i gael gwared ar ddŵr dros ben a'u pwyso. Yn dilyn hynny, sychwyd y celloedd mewn popty ar 60C am 24 awr a chofnodwyd y pwysau sych (DW). Pennwyd y crynodiad siwgr gweddilliol trwy ddefnyddio ffenol ac asid sylffwrig crynodedig, gan ddefnyddio glwcos fel safon (Dubois et al. 1956).

Echdynnwyd PeGs o'r celloedd sych gyda methanol am 15 munud ar 60C mewn baddon dŵr ultrasonic (KQ2200, Shanghai Cany Precision Instrument Co., Ltd, Tsieina) gydag amlder o 40 kHz a phŵer o 100 W. Crynhowyd y hidlydd a'r gweddillion yn hydoddi mewn dŵr distyll ac yna'n pasio trwy golofn resin macro reticular (AB-8, cynnyrch cemegol Prifysgol Nankai, Tianjin, Tsieina). Casglwyd yr eluate methanol a mesurwyd cyfanswm cynnwys PeGs ar 333 nm trwy ddefnyddio echinacoside fel safon (Du a Liu 1993a; Du et al. 1993b).

Amcangyfrifwyd hyfywedd celloedd gan ostyngiad o 2, 3, 5-triphenyl tetrazolium clorid (TTC) (Steponkus a Lanphear 1967). Diffinnir y mynegai hyfywedd fel yr amsugnedd a fesurir fesul gram o feinwe ffres. Seiliwyd y penderfyniad ar weithgaredd PAL ar ddull Koukol a Conn (1961). Diffinnir un uned o'r gweithgaredd PAL (U) fel swm yr amrywiad amsugnedd o 0.01.

Canlyniadau a thrafodaeth

Effaith crynodiad cychwynnol swcros ar dwf celloedd a biosynthesis PeGs mewn diwylliannau ataliad celloedd oCistanche deserticola.Mae ymatebCistanche deserticolaprofwyd diwylliannau ataliad celloedd i grynodiad swcros cychwynnol rhwng 87.6 a 262.9 mM. Fel y dangosir yn Ffig. 1, tyfodd y celloedd a chronnodd PeGs yn gyflym ar grynodiad swcros cychwynnol isel o 87.6 mm, a chafodd twf celloedd a chroniad PeGs eu hatal yn amlwg ar grynodiad swcros cychwynnol uchel o 262.9 mM. Gostyngodd y gymhareb pwysau ffres i bwysau sych pan gynyddodd y crynodiad swcros cychwynnol o 87.6 o 262.9 mM (data heb ei ddangos). Cafwyd y pwysau sych uchaf o 15.9 gl–1 a chynnwys PeGs o 20.7 mg g–1-DW ar ddiwrnod 30 ar grynodiad swcros cychwynnol o 175.3 mM ac roedd osmolarity tua 300 mOsm kg–1 ohono. O dan arsylwi microsgopig, gwahanwyd cellfuriau oddi wrth eu cytoplasm ar y straen osmotig uchaf o 388 mOsm kg-1 lle roedd crynodiad swcros cychwynnol yn 262.9 mM (Ffig. 2), a gallai'r straen osmotig uchaf darfu ar fetaboledd celloedd ac arwain at atal twf difrifol a dirywiad biosynthesis PeGs. Gwelwyd ffenomen debyg hefyd mewn diwylliannau ataliad o ddiwylliannau celloedd atal T. Chinensis, a'r crynodiad swcros gorau posibl ar gyfer cynhyrchu paclitaxel oedd 175.3 mM (Kim et al. 2001). Fodd bynnag, roedd crynodiad swcros cychwynnol o 204.5 mM yn fuddiol i dwf diwylliannau celloedd E. sessiliflorus. Gwellodd crynodiad swcros uwch o 262.9 mM biosynthesis o eleutherosides, ffenol, a flavonoidau yn niwylliannau Eleutherococcus (Sohael et al. 2006). Mae'n amlwg bod y crynodiad swcros cychwynnol yn bwysig i dwf a chroniad metabolion eilaidd diwylliannau celloedd planhigion ac mae ei effaith yn gysylltiedig â llinell gell benodol.

Effaith gwahanol gyfryngau osmotig ar dwf celloedd a biosynthesis PeGs mewn diwylliannau crogiant celloedd o C. deserticola

Deall rôl osmotig swcros metabolig a swbstradau cemegol anmetabolaidd eraill ar fiosynthesis PeGs mewn diwylliannau daliant celloedd oCistanche deserticola, Perfformiwyd cyfres o arbrofion gan ddefnyddio swcros ynghyd â'r asiantau osmotig nonmetabolig (mannitol, PEG, a NaCl). Yn yr arbrofion hyn, ychwanegwyd manitol 164.7 mM, 20 mM PEG, a 50 mM NaCl at y cyfrwng sy'n cynnwys swcros 87.6 mM a gwnaeth yr osmolarity cychwynnol o gwmpas 300 mOsm kg–1, a oedd yn gyflwr osmotig cyfatebol y gellir ei gymharu â'r cyfrwng gyda 175.3 mM swcros.

Fel y dangosir yn Ffig. 3a, b, roedd ychwanegu manitol (asiant osmotig siwgr anmetabolig) a PEG (asiant osmotig anathraidd) ychydig yn atal cyfradd twf celloedd ond yn gwella biosynthesis PeGs yn sylweddol mewnCistanche deserticoladiwylliannau ataliad celloedd. Cafwyd uchafswm cynnwys PeGs o 26.9 a 23.8 mg g–1-DW, yn y drefn honno, ar ddiwrnod 21 pan dyfwyd y celloedd mewn cyfuniadau o swcros 87.6 mM gyda naill ai mannitol 164.7 mM (303 mOsm kg–1) neu 20 mM PEG (299 mOsm kg–1). Roedd y symiau PeGs yn uwch na hynnyCistanche deserticolameithriniadau celloedd a dyfwyd mewn cyfrwng hylifol MS gyda chrynodiad swcros cychwynnol o 175.3 mM ar ddiwrnod 30. Roedd siwgr yn cael ei fwyta'n raddol yn ystod y cwrs amser oCistanche deserticoladiwylliant celloedd, ac yna gostyngodd y straen osmotig a achosir gan siwgr yn unol â hynny (Ffig. 3c, d). Gostyngodd straen osmotig y cyfrwng hylifol gyda chrynodiad swcros cychwynnol o 175.3 mM o 280 i 110 mOsm kg–1 pan ddechreuodd PeGs yn y diwylliannau celloedd gronni ar ddiwrnod 9 a chyrraedd eu huchafswm ar ddiwrnod 30 (data heb ei ddangos). Ni chafodd asiantau osmotig anmetabolig (manitol a PEG) eu bwyta yn ystod y diwylliant celloedd, gan ganiatáu i straen osmotig cyfrwng hylif gael ei gynnal rhwng 200 a 280 mOsm kg-1, pwysedd osmotig sy'n ffafriol ar gyfer biosynthesis PeGs. Dangosodd y canlyniadau hyn fod straen osmotig ei hun yn chwarae rhan bwysig wrth wella biosynthesis PeGs yn yCistanche deserticoladiwylliannau celloedd.

Adroddwyd bod ychwanegu NaCl yn gwella alcaloidau indole a biosynthesis saponin yn y drefn honno mewn diwylliannau celloedd Catharanthus roseus a Panax ginseng (Smith et al. 1987; Wu et al. 2005), ond roedd triniaeth NaCl yn atal twf celloedd T. Chinensis tra'n dangos dim gwahaniaeth mewn biosynthesis palitaxel (Kim et al. 2001). Felly, mae angen ymchwiliad manwl ar gyfer pob achos. Roedd ychwanegu cywerth osmotig o 50 mM NaCl yn atal twf celloedd a biosynthesis PeGs. Gallai'r canlyniad hwn fod oherwydd natur athraidd NaCl nad yw'n fuddiol i ddiwylliannau celloedd y rhywogaeth planhigyn anialwch hwn a all oddef straen sychder yn dda iawn.

Ffig. 3 Effaith y cyfuniadau o swcros a chyfryngau osmotig anmetabolaidd eraill ar dyfiant celloedd (a), croniad PeGs (b), cymeriant siwgr (c), a newid straen osmotig (d) yn ystod cell C. deserticola diwylliant. Mae gwerthoedd yn fodd o fflasgiau triphlyg ± SD

Effaith gwahanol gyfryngau osmotig ar hyfywedd celloedd a gweithgaredd PAL mewn diwylliannau crog celloedd Cistanche deserticola

Yn ein hastudiaethau blaenorol (Cheng et al. 2005b, 2006), ysgogodd adio elicitor biosynthesis PeGs yn ddramatig mewnCistanche deserticoladiwylliannau celloedd, ac roedd cydberthynas rhwng yr ysgogiad a gweithgarwch cynyddol PAL, yr ensym allweddol cyntaf mewn biosynthesis PeGs (Hahlbrock a Grisebach 1979). Fel y dangosir yn Ffig. 4, roedd ychwanegu manitol 164.7 mM anmetabolig neu 20 mM PEG i gyfrwng hylifol MS sy'n cynnwys swcros 87.6 mM ychydig yn lleihau hyfywedd celloedd, ond yn gwella gweithgaredd PAL yn sylweddol a oedd yn uwch na'r hyn a achoswyd gan grynodiad swcros cychwynnol o 175.3 mM. Mae'r cronni PeGs gwell ynCistanche deserticolaroedd diwylliannau ataliad celloedd yn gysylltiedig â'r cynnydd mewn gweithgaredd PAL a ysgogwyd gan straen osmotig ei hun. Achosodd crynodiad swcros cychwynnol o 175.3 mM mewn cyfrwng hylif MS ostyngiad yn hyfywedd celloedd mewn 15 diwrnod ac atal gweithgaredd PAL mewn 21 diwrnod. Ar ôl cyfnod o fwyta siwgr gan y tyfuCistanche deserticolacynyddodd diwylliannau celloedd, hyfywedd celloedd a gweithgaredd PAL y celloedd diwylliedig a chyrhaeddodd eu huchafswm ar ddiwrnod 24 a diwrnod 30, yn y drefn honno. Gwelwyd bod gweithgaredd PAL gwell gan straen osmotig hefyd yn gwella biosynthesis saponin mewn diwylliannau celloedd P. ginseng a chroniad alcaloid mewn celloedd diwylliedig C. roseus (Godoy-Hernandez et al. 2000; Wu et al. 2005). Fodd bynnag, roedd ychwanegu NaCl athraidd i gyfrwng hylif MS sy'n cynnwys swcros 87.6 mM yn lleihau hyfywedd celloedd ac yn atal gweithgaredd PAL yn ystod y cyfnod meithrin cyfan. O ganlyniad, roedd twf celloedd a biosynthesis PeGs yn amlwg wedi'u hatal.

Ffig. 4 Amrywiad yn hyfywedd celloedd (a) a gweithgaredd PAL (b) mewn diwylliannau celloedd C. deserticola o dan straen osmotig gwahanol yn ystodCistanche deserticoladiwylliant celloedd. Mae gwerthoedd yn fodd o fflasgiau triphlyg ± SD

Cistanche deserticolayn rhywogaeth anialwch a chyflwynodd ymchwiliad i rywogaeth anialwch diwylliannau cell vitro heriau a chyfleoedd newydd ar gyfer deall ffisioleg planhigion ac addasiadau ecolegol. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ddatblygu system gyda'r potensial i astudio llwybr biosynthesis trawsgludiad signal osmotig wedi'i gyfryngu gan straen, a darparodd y system sail ar gyfer cynhyrchu PeGs ar raddfa fawr gan ddefnyddio'rCistanche deserticoladiwylliannau celloedd trwy strategaeth osmotig newydd a reoleiddir gan straen.

Diolchiadau

Mae'r awduron yn cydnabod y gefnogaeth ariannol gan Raglen Ymchwil Arloesedd Academi Gwyddorau Tsieineaidd.

O: 'Gwella biosynthesis glycosidau ffenylethanoid yn niwylliannau celloedd Cistanche deserticola trwy straen osmotig' gan Chun-Zhao Liu. Xi-Yu Cheng

---Cynrychiolydd Celloedd Planhigion (2008) 27:357–362 DOI 10.1007/s00299-007-0443-3

Cyfeiriadau

Cheng XY, Wei T, Guo B, Ni W, Liu CZ (2005a)Cistanche deserticoladiwylliannau ataliad celloedd: biosynthesis glycosidau phenylethanoid a gweithgaredd gwrthocsidiol. Proses Biocemeg 40:3119–3124
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005b) Mae ennyn dro ar ôl tro yn gwella croniad glycosidau ffenylethanoid mewn diwylliannau ataliad celloedd oCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Gwella biosynthesis glycosidau phenylethanoid mewn diwylliannau ataliad celloedd Cistanche deserticola gan chitosan elicitor. J Biotech 121:253-260
Du NS, Liu JL (1993a) Penderfynu glycosidau ffenylethanoid ynCistanche deserticolagan macro sbectrophotometreg resin reticular. Nat Prod Res Dev 5:30–33
Du NS, Wang H, Yi YH (1993b) Ynysu ac adnabod glycosidau ffenylethanoid oCistanche deserticola. Nat Prod Res Dev 5:5-8
Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK (1956) Dulliau lliwimetrig ar gyfer pennu siwgr a sylweddau cysylltiedig. Cemeg Rhefrol 28:350–357

Godoy-Hernandez GC, Vazquez-Flota FA, Loyola-Vargas VM (2000) Mae amlygiad i asid traws-sinamig o gelloedd Catharanthus roseus dan straen osmotig a feithrinwyd mewn bioadweithydd 14-l yn cynyddu croniad alcaloid. Biotechnol Lett 22:921–925
Hahlbrock K, Grisebach H (1979) Rheolaethau ensymau ym biosynthesis ligin a flavonoidau. Ann Rev Plant Physiol 30:105–130
Kim SI, Choi HK, Kim JH (2001) Effaith pwysau osmotig ar gynhyrchu paclitaxel yn niwylliannau celloedd crog Taxus Chinensis. Techneg Microb Ensym 28:202–209
Koukol J, Conn EE (1961) Metabolaeth aromatig a phriodweddau deaminase ffenylalanîn Hordeum vulgare. J Biol Chem 236:2692–2698
Lu MC (1998) Astudiaethau ar effaith tawelyddolCistanche deserticola.J Ethnopharmacol 59:161-165

Lu CT, Mei XG (2003) Gwella cynhyrchiad glycosidau ffenylethanoid gan ysgogydd ffwngaidd yn niwylliant ataliad celloeddCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437–1439
Murashige T, Skoog F (1962) Cyfrwng diwygiedig ar gyfer twf cyflym a bioasesiadau gyda diwylliannau meinwe tybaco. Planhigion Ffisiol 15:473–497
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003) Effaith elfennau daear prin ar dwfCistanche deserticolacelloedd a chynhyrchu glycosidau ffenylethanoid. J Biotechnol 102:129–134
Shohael AC, Hakrabarty D, Ali MB, Yu KW, Hahn EJ, Lee HL, Paek KY (2006) Gwella cynhyrchu eleutherosides mewn diwylliannau embryogenig o Eleutherococcus sessiliflorus mewn ymateb i straen osmotig a achosir gan swcros. Proses Biocemeg 41:512-518
Smith JL, Smart NJ, Cwrd WGW, Misawa M (1987) Y defnydd o gyfansoddion organig ac anorganig i gynyddu'r casgliad o alcaloidau indole yn Catharanthus roseus (L.) Diwylliannau ataliad celloedd Don. J Exp Bot 38:1507–1511
Steponkus PL, Lanphear FO (1967) Mireinio'r dull triphenyl tetrazolium clorid o bennu anaf oer. Planhigyn Physiol 42:1423–1426Wang Pencadlys, Wu JT, Zhong JJ (1999) Gwelliant sylweddol mewn cynhyrchu taxane yn niwylliannau ataliad Taxus Chinensis trwy strategaeth bwydo swcros. Proses Biocemeg 35:479–483
Wang XW, Jiang XY, Wu LY, Wang XF (2001) Effaith sborionu glycosidau oCistanche deserticolaar radicalau rhydd a'i amddiffyniad rhag difrod DNA a achosir gan OH in vitro. Gên Pharm J 36:29-31
Wu JY, Wong K, Ho KP, Zhou LG (2005) Gwella cynhyrchu saponin mewn diwylliant celloedd ginseng Panax gan straen osmotig a bwydo maetholion. Technol Microb Ensym 36:133–138
Zhang YH, Zhong JJ, Yu JT (1995) Effaith pwysau osmotig ar dwf celloedd a chynhyrchu saponin Ginseng a polysacarid mewn diwylliannau atal dros dro o Panax Notoginseng. Biotechnol Lett 17:1347–1350
Zong GZ, He W, Wu GL, Chen LH (1996) Cymariaethau rhwngCistanche deserticolaYC Ma a Cistanche tubulosa (Scheak) Cael rhai gweithgareddau ffarmacolegol. Traddodiad Chin Med J 21:436–438