Epigallocatechin-3-Liposomau wedi'u Lwytho â Gallate O blaid Gwrth-lid Celloedd Microglia A Hyrwyddo Niwroamddiffyniad

joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Haniaethol

cydnabyddir bod niwro-fflamiad trwy gyfrwng microglia yn cyfrannu'n bennaf at ddatblygiad clefydau niwroddirywiol. Gall epigallocatechin-3-gallate (EGCG), a elwir yn wrthocsidydd naturiol mewn te gwyrdd, atal llid trwy gyfrwng microglia a diogelu niwronau ond mae ganddo anfanteision megis ansefydlogrwydd uchel a bio-argaeledd isel. Fe wnaethom ddatblygu fformiwleiddiad liposomal EGCG i wella ei fio-argaeledd a gwerthuso'r gweithgaredd niwro-amddiffynnol mewn modelau niwro-llid in vitro ac in vivo. Mae liposomau llawn EGCG wedi'u paratoi o phosphatidylcholine (PC) neu phosphatidylserine (PS) wedi'u gorchuddio â neu heb fitamin E (VE) trwy ddull hydradu ac allwthio pilen. Mae'rgwrthlidiolmae'r effaith wedi'i gwerthuso yn erbyn actifadu celloedd microglial BV a achosir gan lipopolysaccharide (LPS) a llid llygod mawr Sprague Dawley yn substantia nigra. Yn y model llid cellog, newidiodd celloedd microglial murine BV-2 eu morffoleg o sfferoid arferol i siâp gwerthyd wedi'i actifadu ar ôl 24 h o sefydlu LPS. Yn y assay radical rhydd in vitro 2,2-diffenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), fe wnaeth EGCG chwilio am 80 y cant o DPPH o fewn 3 munud. Gallai liposomau wedi'u llwytho ag EGCG gael eu ffagocyteiddio gan gelloedd BV ar ôl 1 awr o feithriniad celloedd o arbrofion mewnlifiad celloedd. Fe wnaeth liposomau wedi'u llwytho ag EGCG wella'r broses o gynhyrchu BV-2 o ocsid nitrig sy'n deillio o ficroglia a LPS sy'n dilyn TNF. Yn y model llygod mawr syndrom Parkinsonian in vivo, roedd chwistrelliad mewn-nigral ar yr un pryd o liposomau wedi'u llwytho ag EGCG yn gwanhau cytocinau pro-llidiol a achosir gan LPS a nam ar y modur wedi'i adfer. Gwnaethom ddangos bod liposomau wedi'u llwytho ag EGCG yn cael effaith niwro-amddiffynnol trwy fodiwleiddio actifadu microglia. Gallai EGCG wedi'i dynnu o de gwyrdd a liposomau wedi'u llwytho fod yn ymgeisydd gwerthfawr ar gyfer therapi addasu clefydau ar gyferclefyd Parkinson (PD).

Geiriau allweddol:niwroamddiffyn; niwro-llid; clefyd Parkinson; catechin; L- -phosphatidylcholine;phosphatidylserine

atalParkinson'sclefydeffeithiau Cistanche gydacistanche

Chun-Yuan Cheng 1,2, Lassina Barro 2, Shang-Ting Tsai 2,3, Tai-Wei Feng 2,3, Xiao-Yu Wu 2, Che-Wei Chao 4, Ruei-Siang Yu 2, Ting-Yu Chin 4,* a Ming Fa Hsieh 2,3,*

1 Is-adran Niwrolawdriniaeth, Adran Llawfeddygaeth, Ysbyty Cristnogol Changhua, 135 Nanxiao St., Changhua City, Changhua County 500, Taiwan; 83998@cch.org.tw

2 Adran Peirianneg Biofeddygol, Prifysgol Gristnogol Chung Yuan, Rhif 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan;

3 Canolfan ar gyfer Dyfeisiau a Thechnolegau Meddygol Lleiaf-ymledol, Prifysgol Gristnogol Chung Yuan, Rhif 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan

4 Adran Technoleg Biowyddoniaeth, Prifysgol Gristnogol Chung Yuan, Rhif 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan.

1 Rhagymadrodd

Pan fydd y system nerfol yn cael ei niweidio neu ei heintio, mae celloedd microglia yn cael eu hactifadu a'u trawsnewid i fod yn ganghennog, gan arwain at fynegiant gormodol o lawer iawn o cytocinau pro-llidiol fel ffactor necrosis tiwmor- (TNF- ), interleukin-1 ( IL-1 ), interleukin 6 (IL-6), a chyfryngwyr llidiol megis ocsid nitrig (NO) a rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS). Yn olaf, mae celloedd nerfol yn cael eu difrodi, yn dirywio, neu'n marw o'r cyfryngwyr llidiol hyn. Canfuwyd yn ddiweddar bod yn ymennydd cleifion â chlefydau niwroddirywiol megis clefyd Parkinson (PD), clefyd Alzheimer, clefyd Huntington, a chlefyd Creutzfeldt-Jakob , mae llawer iawn o gelloedd microglial yn cael eu hactifadu a'u gor-fynegi [1-3]. Yn epidemiolegol, mae achos PD yn gysylltiedig yn bennaf â'r adwaith niwrolidiol. Mae'r cyfryngwyr llidiol sy'n deillio o hyn, megis TNF- , IL-1 , IL-6, NO, a ROS, i'w cael yn striatwm yr ymennydd [1,4-7]. Gall diraddio niwronau dopaminergig gael ei reoleiddio gan gelloedd microglia [8].

Mae'r broses niwro-llid sy'n achosi PD yn cael ei ragflaenu gan ddifrod sylfaenol niwronau a achosir gan tocsinau amgylcheddol, gan gynnwys rotenone [9], lipopolysaccharide (LPS) [5,7], ac effeithiau cronni protein annormal [10]. Bydd y difrod yn achosi briwiau a hyd yn oed apoptosis o niwronau dopaminergig. Yna mae celloedd microglia yn cael eu actifadu i ryddhau cytocinau, gan arwain at lid a marwolaeth y niwronau ac yn olaf yn arwain at PD.

Pan fydd y celloedd microglial yn cael eu hysgogi gan LPS, mae LPS yn rhwymo i safle rhwymo derbynnydd wyneb CD14 celloedd microglia. Mae'r cyfadeilad LPS-CD14 wedi'i gysylltu â chysylltydd MD2 trwy broteinau traws-bilen derbynnydd tebyg i doll-4 (TLR4) ac yna'n ymwneud â llwybrau trosglwyddo negeseuon lluosog a gynhyrchir gan ginasau protein a weithredir gan mitogen (MAPK) ac ysgogi ffactorau trawsgrifio (ffactor niwclear -kappa B, NF-κB). Ar ôl trawsgrifio genynnau [5,11,12], mae celloedd microglial yn rhyddhau cytocinau megis TNF- ac IL-1 , neu'n mynegi genynnau o synthase ocsid nitrig anwythadwy (iNOS) a cyclo-oxygenase-2 (COX{ {17}}), gan arwain at ryddhau prostaglandinau neu NO. Yn ogystal, cynhyrchir radicalau rhydd ONOO dinistriol trwy gyfuno anionau superoxide a gynhyrchir o ffosffad dinucleotide nicotinamide adenine (NADPH) oxidase gyda NO wedi'i gynhyrchu o iNOS, gan arwain at farwolaeth niwronau dopaminergig [13]. Felly, yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd LPS i gymell niwro-lid celloedd microglia fel model PD in vitro.

Mae catechins yn gwrthocsidyddion naturiol a all atal difrod celloedd a darparu llawer o fuddion ffarmacolegol megis gwrth-tiwmor, gwrth-ganser, gwrth-heneiddio, ymbelydredd gwrth-ffarmacolegol, a sborion radical rhydd [14]. Mae te gwyrdd yn cynnwys tua 10 y cant o polyphenolau yn ôl pwysau, gan gynnwys llawer iawn o catechin o'r enw epigallocatechin gallate (EGCG). Mae gan EGCG y gweithgaredd gwrthocsidiol uchaf a'r gallu i chwilota radical rhad ac am ddim ym mhob catechin te gwyrdd a gall ddal ROS i amddiffyn celloedd rhag difrod straen ocsideiddiol [15]. Mae gan EGCG hefyd effeithiolrwydd gwrthlidiol uchel, a all atal secretion cytocinau (TNF-, IL-2, ac IL-8) yn effeithiol gan macroffagau [16], ffosfforyleiddiad proteinau signalau Akt a phroteinau IκB mewn llwybrau llidiol i leihau mynegiant NF-κB, neu drawsgrifiad AP-1 trwy atal ffosfforyleiddiad proteinau MAPK i fyny'r afon i gydbwyso mynegiant COX-2 a lleihau cynhyrchiad cytocinau pro-llidiol [17].

Yn ddiweddar, adroddwyd bod EGCG o bosibl yn therapiwtig neu'n broffylactig ar gyfer PD oherwydd atal oligomers gweithredol -synuclein (S) [18]. Mae EGCG hefyd yn atal agregu S in vitro [19-21], ac mae agregu S cytoplasmig mewn niwronau dopaminergig yn un pathogenesis posibl o PD sy'n arwain at ddifrod i niwronau dopaminergig yn substantia nigra [22]. Ymhellach, gall EGCG adennill 1-methyl-4-ffenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) niwrocemegol neu ddifrod swyddogaethol a achosir a rheoleiddio ferroportin yn substantia nigra a lleihau straen ocsideiddiol [23]. Mae gan EGCG hefyd effeithiau amddiffynnol niwro-amddiffynnol ac imiwn mewn llygod sy'n cael eu trin gan MPTP a gall fodiwleiddio niwro-llid ac amddiffyn colled niwronau dopaminergig mewn PD a achosir gan MPTP [24].

Ymchwiliwyd i effeithiau gwrth-fflamiad EGCG. Ataliodd EGCG DIM cynhyrchu a mynegiant iNOS mewn celloedd microglial BV-2 a achosir gan EGCG. Gall EGCG atal mynegiant cytocinau pro-llidiol fel TNF- ac IL-1 mewn celloedd BV-2 yn effeithiol [25]. Roedd rhag-driniaeth EGCG o macroffagau dynol yn sylweddol yn llesteirio mynegiant a achosir gan LPS o cytocinau pro-llidiol fel TNF- , IL-1 , ac IL-6 [26]. Yn ogystal, roedd ôl-driniaeth EGCG ar lygod a anafwyd gan LPS wedi lleihau cynhyrchu cytocin pro-llidiol trwy fodiwleiddio'r llwybr TLR4-NF-κB [27]. Ar ben hynny, gallai microsfferau poly (lactid-cydglycolid) (PLGA) wedi'u llwytho ag EGCG a'u optimeiddio trwy ychwanegu -cyclodextrin (-CD) atal cynhyrchu NO o gelloedd BV{-2 yn effeithiol yn y model in vitro o BV murine -2 celloedd microglial wedi'u hysgogi gan LPS, sy'n dangos y gall y microsfferau atal llid celloedd microglial actifedig [28].

Er bod te gwyrdd yn ddiod dyddiol, mae effeithiolrwydd catechins yn aneffeithiol oherwydd bio-argaeledd llafar isel; felly, mae angen ffurflenni dosau fferyllol effeithiol. Mae gan gludwr cyffuriau nano fanteision osgoi metaboledd cynamserol, ymestyn amser gweithredu cyffuriau, a thargedu cyflenwi cyffuriau. Felly, mae'r astudiaeth hon yn bwriadu datblygu liposomau sy'n cynnwys phosphatidylcholine (PC) a phosphatidylserine (PS), cydrannau tebyg i'r gellbilen, fel ffurflenni dosage gwrthlidiol. Llwythwyd EGCG a dynnwyd o ddail te gwyrdd mewn liposomau i arafu adweithiau llidiol mewn celloedd microglia a achosir gan LPS. Gwerthuswyd hefyd effaith therapiwtig liposomau wedi'u llwytho ag EGCG ar y model PD in vivo ar gyfer niwro-amddiffyniad.

2. Canlyniadau

2.1. Echdynnu EGCG

2.1.1. Detholiad EGCG

Mae'r data nodweddu galad epigallocatechin i'w gael yn y Ffeil Atodol (Ffigurau S1 a S2). 2.1.2. Fformwleiddiadau amrywiol o EGCG Yn Nhabl 1, roedd diamedrau gronynnau cyfartalog liposomau plasebo PS-, PS-EGCE-, a PS-EGCG-VE yn llai na phlasebo PC-, PC-EGCE-, a PC-EGCG-VE- liposomau, yn y drefn honno. Oherwydd bod PC yn niwtral a bod PS yn cael ei gyhuddo'n negyddol [29], mae hyn yn dangos bod potensial arwyneb ychwanegyn yn effeithio ar faint y gronynnau. Roedd mynegai polydispersity (PDI) yr holl liposomau yn llai na 0.22, sy'n dangos bod strwythur liposomau mewn hydoddiant yn sefydlog. Arweiniodd taliadau negyddol PS at rym gwrthyrrol ar y potensial arwyneb rhwng PS-liposomau, gan osgoi agregu a lleihau maint PS-liposomau.

Roedd effeithlonrwydd/maint amgáu liposomau sy'n cynnwys PS a ddisgrifir yn Nhabl 1 yn fwy/llai na liposomau cyfatebol sy'n cynnwys PC [30]. Roedd effeithlonrwydd amgáu liposomau PC-EGCG-VE-liposomau a PS-EGCG-VE-liposomau yn fwy helaeth nag effeithlonrwydd PC-EGCG-liposomau a PS-EGCG-liposomau, yn y drefn honno. Mae hyn oherwydd bod fitamin E yn hydawdd mewn braster, wedi'i fewnosod mewn pilen haen ddeuffosffolipid, ac yn darparu amddiffyniad gwrthocsidiol ar gyfer EGCG.

2.2. Dadansoddiad Cell In Vitro

2.2.1. Hyfywedd Cell

Roedd hyfywedd celloedd celloedd a gafodd eu trin ag EGCG o 50 i 400 µM wedi gostwng yn sylweddol o gymharu â'r grŵp rheoli (Ffigur 1A). Mewn cyferbyniad, mae hyfywedd celloedd sy'n derbyn 5 i 25 µM yn debyg i ddichonoldeb celloedd y grŵp rheoli. Penderfynwyd bod crynodiad yr EGCG a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth hon yn 25 µM. Yn yr un modd, penderfynwyd bod y crynodiad o LPS a ddefnyddiwyd ar gyfer ysgogi llid celloedd yn 50 ng/mL yn ôl Ffigur 1B. Yn Ffigur 1C, nid oedd hyfywedd celloedd celloedd wedi'u cyd-ddiwyllio â liposomau plasebo o bob crynodiad yn ystadegol arwyddocaol o'i gymharu â'r grŵp rheoli. Felly, nid yw liposomau plasebo yn sytotocsig i gelloedd microglia.

2.2.2. Morffoleg Cell

Roedd morffoleg celloedd y grŵp rheoli (Ffigur 2A) a morffoleg celloedd a gafodd eu trin â 25 μM EGCG （Ffigur 2B） yn sfferig, tra bod morffoleg celloedd a gafodd eu trin â LPS 50 ng/mL (Ffigur 2C) ar ffurf gwerthyd. Fodd bynnag, roedd morffoleg celloedd a gafodd eu trin â 25 uM EGCG ac a weithredwyd gan LPS (Ffigur 2D) yn sfferig. Roedd hyn yn dynodi y gall EGCG atal yr actifadu a achosir gan LPS. Felly, mae rhag-drin EGCG yn cael effaith ataliol ar niwro-fflamiad, gan amddiffyn y celloedd microglial rhag actifadu.

2.2.3. DIM Rhyddhau

Yn Ffigur 3A, roedd y datganiad NO o gelloedd BV a ysgogwyd gyda 5-1000 ng/mL LPS yn ystod deori 24 h yn ystadegol arwyddocaol o'i gymharu â'r datganiad NO o'r grŵp rheoli. Penderfynwyd bod y crynodiad o LPS a ddefnyddiwyd i ysgogi llid celloedd i weithio yn 50 ng/mL.

Nid oedd DIM rhyddhau o gelloedd BV-2 a gafodd eu trin â 25 µM EGCG yn ystadegol arwyddocaol o gymharu â'r grŵp rheoli, fel y dangosir yn Ffigur 3B. Fodd bynnag, dangosodd y llid celloedd a achoswyd gyda LPS am 24 h gynnydd sylweddol o'i gymharu â'r grŵp rheoli. Dangosodd y celloedd hynny a gafodd eu trin â 25-200 µM EGCG am 1 h ac a weithredwyd wedyn gyda LPS ostyngiad ystadegol arwyddocaol o gymharu â'r grŵp o gelloedd a weithredwyd ag LPS yn unig. Ni ostyngodd DIM rhyddhau pan gynyddodd EGCG o 50-200 µM ers i hyfywedd celloedd ostwng pan oedd EGCG wedi codi o 50-200 µM, yn ôl Ffigur 1A.

Nid oedd cynhyrchiad DIM y celloedd a gafodd eu trin â 25 µM EGCG ac yna'r llid a achoswyd gyda 50 ng/mL LPS yn ystadegol arwyddocaol o'i gymharu â'r grŵp rheoli (Ffigur 3C). Fodd bynnag, dangosodd yr NO a ryddhawyd yn y grŵp o gelloedd a gafodd eu trin â PC-EGCG-liposomau neu PC-EGCG-VE-liposomau ac yna actifadu LPS â 50 ng / mL ostyngiad sylweddol o'i gymharu â'r grŵp o gelloedd a gafodd eu trin â LPS yn unig. Roedd y rhyddhad NO o gelloedd a rag-driniwyd â PC-EGCG-liposomau neu PC-EGCG-VE-liposomau yn uwch na'r datganiad NO o'r grŵp o gelloedd a rag-driniwyd gan EGCG, a ddylai gael ei esbonio gan ryddhad araf EGCG o'r liposomau.

2.2.4. Dadansoddiad Cytokin

Yn Ffigur 4A, dangosodd y crynodiad o TNF- o gelloedd a gafodd eu trin â LPS ar ôl 24 h gynnydd ystadegol arwyddocaol o'i gymharu â'r grŵp rheoli neu'r cyfrwng meithrin celloedd (DMEM). Roedd plasebo PC-liposomau yn agos at gelloedd a gafodd eu trin â LPS. Fodd bynnag, dangosodd y crynodiad TNF- yn y grŵp o gelloedd a gafodd eu trin ymlaen llaw â liposomau PS-EGCG-VE neu PS-EGCG-VE-liposomau ac yna actifadu LPS ostyngiad ystadegol arwyddocaol o'i gymharu â'r celloedd a gafodd eu trin â LPS. Mae'r crynodiad gostyngol hwn o TNF- yn dangos y gall liposomau wedi'u llwytho ag EGCG leihau actifadu celloedd microglial a achosir gan LPS. Roedd effaith ataliol PS-EGCG-VE-liposomau yn well nag effaith PS-EGCG-liposomau.

Gall ffosffolipidau ar y gellbilen gael eu hydrolysu gan ffosffolipas cytosolig A2 (cPLA2) i gynhyrchu asid arachidonic. Mae cyclo-oxygenase (COX) yn ensym allweddol sy'n trosi asid arachidonic i brostaglandin. Mae COX-2 a cPLA2 yn aml yn cael eu cynhyrchu o lid neu afiechyd malaen [31-34]. Yn Ffigur 4B, ysgogwyd y llid gan LPS o 5-50 ng / mL am 24 h, a chynyddodd mynegiant cPLA2 pan gynyddodd y crynodiad LPS. Dangosodd Ffigur 4C y cynnydd yng ngweithgareddau COX-2, a ysgogwyd gan LPS (5-50 ng/mL) am 24 h. Cynyddodd mynegiant COX-2 o 5-25 ng/mL LPS, tra gostyngodd ar 50 ng/mL. Yn Ffigur 4D, gostyngwyd y mynegiant cPLA2 pan gafodd celloedd BV-2 eu rhag-drin ag EGCG a'u hysgogi gan LPS. Cynyddwyd mynegiant COX-2 pan oedd celloedd BV wedi'u hysgogi gan LPS-2 o gymharu â'r grŵp rheoli (Ffigur 4E). Roedd gostyngiad sylweddol o COX-2 yn y grŵp o gelloedd a gafodd eu trin ymlaen llaw ag EGCG, plasebo PS-liposomau, PS-EGCG-liposomau, a PS-EGCG-VE-liposomau, ac yna anwythiad llidiol LPS. Yn arbennig, roedd gan fynegiant COX-2 o gelloedd a gafodd eu trin ymlaen llaw â phlasebo-liposomau PS wahaniaeth arwyddocaol yn ystadegol o gymharu â chelloedd a achosir gan LPS.

2.3. Mewn Prawf Anifeiliaid Vivo

2.3.1. Ymddygiad Anifeiliaid

Prawf Cynyddodd nifer y cylchoedd a gwblhawyd gan y llygod mawr Parkinsonian ar ôl gweinyddu amffetamin (a ddangosir yn Ffigur 5A) yn sylweddol o'i gymharu â nifer y cylchoedd a gwblhawyd gan y grŵp rheoli llygod mawr. Roedd ymddygiad llygod mawr Parkinsonian a gafodd eu trin â'r gwahanol fformiwleiddiadau o EGCG yn debyg i lygod mawr y grŵp rheoli. Roedd y data hyn yn dangos bod EGCG wedi gwanhau briwiau unochrog o'r system nigrostriatal a achoswyd gan LPS. 2.3.2. Dadansoddiad Marcwyr Llidiol Roedd y gymhareb TNF- /GAPDH yn y grŵp a gafodd driniaeth yn sylweddol is o gymharu â'r gymhareb a geir mewn llygod mawr syndromig. Roedd y duedd IL-1 yn debyg i duedd TNF. Mae'r canlyniadau in vivo yn gyson â chanlyniadau astudiaethau in vitro. Roedd mynegiant ffactor niwrotroffig sy'n deillio o'r ymennydd (BDNF) yn y grŵp a gafodd ei drin yn debyg i'r grŵp a ysgogwyd gan LPS (Ffigur 5D). Fodd bynnag, gallai'r canlyniad hwn ddangos bod gwella cydsymudiad coesau mewn llygod mawr syndrom Parkinsonian gan liposomau llawn PC-EGCG yn cael ei achosi gan leihau ymateb niwro-llid, ond nid trwy fynegiant cynyddol o BDNF.

Mae hefyd yn cyd-fynd ag adroddiadau blaenorol bod gostyngiad mewn cynhyrchiant TNF- a NO trwy drin llygod mawr ag EGCG ymlaen llaw (10 mg/kg) am 24 h ac ymsefydlu gyda LPS ar ôl 7 diwrnod wedi gostwng o'i gymharu â llygod mawr a driniwyd gan LPS, a daeth i'r casgliad bod EGCG wedi effaith therapiwtig bosibl ar gyfer niwrowenwyndra a achosir gan LPS oherwydd gostyngiad mewn rhyddhau TNF- a NO.

3. Trafodaeth

Yn yr astudiaeth hon, canfuwyd bod purdeb EGCG a dynnwyd o de gwyrdd yn 90.5 y cant, ac roedd gweithgaredd sborion radical rhydd EGCG yn fwy helaeth nag 80 y cant o fewn 3 munud. Roedd yn cynyddu gyda chrynodiad uwch o EGCG neu amser adweithio hirach. Maint gronynnau PC-EGCG-VE- a PS-EGCG-VE-liposomau oedd 161.5 a 142.9 nm, a oedd yn llai na maint EGCG wedi'i lwytho mewn microsfferau PLGA [28] gyda -cyclodextrin ychwanegol (yn amrywio o 1-14 µm) . Effeithlonrwydd amgáu PC-EGCG-VE-a PS-EGCG-VE-liposomau oedd 60.2 y cant a 76.8 y cant, yn y drefn honno. Dangosodd y canlyniadau hyn fod liposomau sy'n cynnwys PS yn llai, yn fwy sefydlog, a bod ganddynt effeithlonrwydd amgáu uwch oherwydd y tâl ar PS ac yn arwain at rym gwrthyrru rhwng liposomau i osgoi agregu.

Roedd gan fynegiant TNF- mewn celloedd a rag-driniwyd â liposomau PS-EGCG- a PS-EGCG-VE-ac a ysgogwyd wedyn gan LPS wahaniaethau ystadegol arwyddocaol o'u cymharu â rhai celloedd a ysgogwyd gan LPS, a gwelwyd canlyniadau tebyg wrth rag-drin EGCG ar LPS -induced TNF- mynegiant mewn celloedd BV-2 [25] a macroffagau dynol [26]. I grynhoi, dangosodd morffoleg y gell, a mynegiant TNF- o'r grŵp a gafodd ei drin ag EGCG, effaith atal y llid a achosir gan LPS.

Yn yr astudiaeth bresennol, gall pretreatment EGCG leihau rhyddhau NO. Ymchwiliwyd hefyd yn ein hastudiaeth flaenorol i atal cynhyrchu DIM o gelloedd BV-2 a achosir gan LPS trwy rag-drin microsfferau PLGA wedi'u llwytho ag EGCG [28].

Yn yr astudiaeth bresennol, mae syndrom Parkinsonian mewn llygod mawr yn cael ei greu gan y difrod i'r rhanbarth substantia nigra unochrog a achosir gan LPS. Canfyddiad pwysig arall yw, trwy ddadansoddiad meintiol ystadegol, y gall liposomau wedi'u llwytho gan EGCG liniaru'r syndrom oherwydd difrod i ranbarth unochrog midbrain nigrosine ymennydd llygod mawr a achosir gan LPS yn y prawf cylchdro, a chynhyrchu ffactorau niwrolidiol TNF- yn y substantia gall ardal nigra o ymennydd llygod mawr hefyd gael ei leihau gan liposomau llawn EGCG. Mae'r astudiaeth hon yn dangos bod gwella cydsymudiad breichiau a choesau a lleihau llid niwronau mewn syndrom Parkinsonian a achosir gan LPS yn cael ei achosi gan weinyddu liposomau wedi'u llwytho EGCG yn lleol ond nid trwy fynegiant cynyddol o BDNF. Fodd bynnag, mae'r canlyniadau gwrth-niwroinflammation yn angenrheidiol ar gyfer effaith niwro-amddiffynnol [35]. Mae actifadu BV-2 yn rhyddhau ffactorau pro-llidiol, sy'n niwrowenwynig ac yn arwain at ddifrod celloedd. Trwy atal gweithrediad BV-2, mae EGCG yn darparu effaith niwro-amddiffynnol. Mae rhywfaint o ôl-driniaeth EGCG ar gyfer gwella amlhau, cyfradd goroesi, a gwahaniaethu niwronaidd o fôn-gelloedd niwral oedolion mewn gyrws dentate a achosir gan LPS yn nodi y gallai EGCG fod yn asiant therapiwtig posibl ar gyfer clefydau niwrolidiol [27].

Dangosodd astudiaethau ffarmacocinetig blaenorol y gall PS alldarddol groesi'r rhwystr gwaed-ymennydd (BBB), lle mae'n ymddangos bod ganddo affinedd i'r hypothalamws [6], ac mae gweinyddiaeth lafar yn arwain at lefelau brig mewn 1-4 awr. Yn ogystal, canfuwyd bod liposomau sy'n cynnwys PS yn dynwared celloedd apoptotig i hyrwyddo secretion cyfryngwyr gwrthlidiol, megis trawsnewid ffactor twf- 1 (TGF- 1) (i is-reoleiddio NO a gynhyrchir o macroffagau) [36] a prostaglandin E2 (PGE2) gan macrophages a chelloedd microglia in vitro [6,37], a hefyd yn hyrwyddo lliniaru llid in vivo [38]. Yn unol â hynny, mae gan liposomau wedi'u llwytho ag EGCG sy'n cynnwys PS a ddangosir yn yr astudiaeth hon y fantais o faint gronynnau llai, effeithlonrwydd amgáu uwch, ac atal gweithrediad syndrom Parkinsonian mewn celloedd microglia ac ym model llygod mawr Vivo, gan ddangos swyddogaeth gwrthlidiol sy'n gwella a niwroamddiffyn.

Y cyfyngiad yw bod ein hastudiaeth wedi'i chynnal gyda rhai dadansoddiadau coll, megis yn achos yr effaith niwro-amddiffynnol, ac ni ymchwiliwyd i staenio NeuN. Fe wnaethom hefyd ddadansoddi BDNF yn unig fel ffactor niwrotroffig. Mae FGF2 ac IGF2 hefyd yn ffactorau niwrotroffig y dylid eu hystyried [39].

5. Casgliadau

Er mwyn gwella bio-argaeledd llafar isel catechins, llwythwyd EGCG mewn liposomau yn yr astudiaeth hon. Canfyddir bod liposomau sy'n cynnwys PS yn llai ac yn fwy sefydlog. Mae ganddo effeithlonrwydd amgáu uwch, a gall ychwanegu fitamin E amddiffyn EGCG rhag ocsideiddio a gwella effeithlonrwydd amgáu. Yn yr astudiaeth in vitro, gostyngwyd mynegiant cynhyrchu TNF- a NO o gelloedd BV-2 ar ôl rhag-drin liposomau wedi'u llwytho ag EGCG ar gelloedd BV a ysgogwyd gan LPS-2. Felly, mae'r liposomau llawn EGCG wedi chwarae rhan hanfodol yn yr ymateb niwrolidiol fel atalydd. Yr effeithiau buddiol fu atal celloedd rhag apoptosis yn yr adweithiau niwrolidiol.

Mewn astudiaeth in vivo, mae syndrom Parkinsonian mewn llygod mawr a achosir gan LPS i ranbarth unochrog substantia nigra midbrain wedi'i wella. Mae'r mecanwaith niwro-llid, gan gynnwys y secretion TNF-, wedi'i atal gan ôl-driniaeth o liposomau wedi'u llwytho ag EGCG. Gwnaethom ddangos y byddai EGCG yn ymgeisydd mwy gwerthfawr ar gyfer trin clefydau niwroddirywiol trwy liniaru llid yn yr ymennydd. Dylai'r ymchwiliad dilynol ganolbwyntio ar y llwybrau llidiol trwy ddefnyddio traciwr lysosom i olrhain y fynedfa liposome i'r gell a rhyddhau EGCG o'r liposome.

Cyfeiriadau

1 Lull, ME; Bloc, actifadu Microglial ML a niwroddirywiad cronig. Niwrotherapiwteg 2010, 7, 354–365. [CrossRef]

2. Ekdahl, C. ; Kokaia, Z. ; Lindvall, O. Llid yr ymennydd a niwrogenesis oedolion: Rôl ddeuol microglia. Niwrowyddoniaeth 2009, 158, 1021–1029. [CrossRef] [PubMed]

3. Weissleder, R.; Nahrendorf, M.A.; Pittet, MJ Delweddu macroffagau gyda nanoronynnau. Nat. Mater. 2014, 13, 125–138. [CrossRef]

4. Papageorgiou, IE; Fetani, AF; Lewen, A. ; Heinemann, U.S.; Kann, O. Mae gweithrediad eang celloedd microglial yn hippocampws llygod mawr epileptig cronig yn cyfateb yn rhannol yn unig â niwroddirywiad. Strwythur yr Ymennydd. Funct. 2015, 220, 2423–2439. [CrossRef] [PubMed]

5. Dutta, G. ; Zhang, P.; Liu, B. Y model anifail clefyd Parkinson lipopolysaccharide: Astudiaethau mecanyddol a darganfod cyffuriau. Fundam. Clin. Ffarmacol. 2008, 22, 453–464. [CrossRef] [PubMed]

6. Otsuka, M.; Tsuchiya, S.; Aramaki, Y. Cynnwys ERK, kinase MAP, wrth gynhyrchu TGF- gan macroffagau wedi'u trin â liposomau sy'n cynnwys phosphatidylserine. Biocemeg. Bioffys. Res. Cymmun. 2004, 324, 1400–1405. [CrossRef]

7. Li, R. ; Huang, Y.-G.; Ffang, D.; Le, W.-D. (-) - Mae epigallocatechin gallate yn atal actifadu microglial a achosir gan lipopolysaccharid ac yn amddiffyn rhag anaf niwronau dopaminergig a achosir gan lid. J. Neurosci. Res. 2004, 78, 723–731. [CrossRef]

8. Liu, J. ; Hong, Z.; Ding, J. ; Liu, J.; Zhang, J.; Chen, S. Rhyddhau ensymau lysosomaidd yn bennaf gan ficroglia llygod mawr newydd-anedig ar ôl triniaeth LPS a ddatgelwyd gan astudiaethau proteomig. J. Proteome Res. 2008, 7, 2033–2049. [CrossRef]

9. Cho, H.-S.; Kim, S.; Lee, S.-Y.; Parc, JA; Kim, S.-J.; Chun, HS Effaith amddiffynnol y gydran te gwyrdd, L-theanine ar farwolaeth celloedd niwronaidd a achosir gan tocsinau amgylcheddol. Niwrotocsicoleg 2008, 29, 656–662. [CrossRef]

10. Mariani, MM; Kielian, T. Microglia mewn clefydau heintus y system nerfol ganolog. J. Neuroimmune Pharmacol. 2009, 4, 448–461. [CrossRef]

11. Santiago, RM; Barbieiro, J.; Lima, MM; Dombrowski, PA; Andreatini, R.; Mae newidiadau hanfodol i ymddygiadau tebyg i iselder MA a achosir gan fodelau MPTP mewnnerfol, 6- OHDA, LPS, a rotenone o glefyd Parkinson yn gysylltiedig yn bennaf â serotonin a dopamin. Prog. Neuro-Seicopharmacol. Biol. Seiciatreg 2010, 34, 1104–1114. [CrossRef] [PubMed]

12. Liu, M. ; Bing, G. Modelau anifeiliaid lipopolysaccharid ar gyfer clefyd Parkinson. Parkinson's Dis. 2011, 2011, 327089. [CrossRef] [PubMed]

13. Wu, D.-C.; Teismann, P. ; Tieu, K. ; Vila, M.; Jackson-Lewis, V.; Ischiropoulos, H.; Mae Przedborski, S. NADPH oxidase yn cyfryngu straen ocsideiddiol yn y 1-methyl{4}}ffenyl-1, 2, 3, 6-model tetrahydropyridine o glefyd Parkinson. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 2003, 100, 6145–6150. [CrossRef]

14. Rahman, I. ; Biswas, SK; Kirkham, PA Rheoleiddio llid a signalau rhydocs gan polyffenolau dietegol. Biocemeg. Ffarmacol. 2006, 72, 1439–1452. [CrossRef] [PubMed]

15. Valko, M.; Rhodes, C. ; Moncol, J.; Izakovic, M.A.; Mazur, M. Radicalau rhydd, metelau a gwrthocsidyddion mewn canser ocsideiddiol a achosir gan straen. Cemeg. Biol. Rhyngweithio. 2006, 160, 1–40. [CrossRef]

16. Cadarn, Y.-J. ; Chun, K.-S.; Cha, H.-H.; Han, SS; Keum, Y.-S.; Park, K.-K.; Lee, SS Mecanweithiau moleciwlaidd sy'n sail i weithgareddau cemo-ataliol ffytogemegau gwrthlidiol: Lleihau rheoleiddio COX-2 ac iNOS trwy atal actifadu NF-κB. Mutat. Res. Fundam. Mol. Mech. Mutagenesis 2001, 480, 243–268. [CrossRef]

17. Renaud, J. ; Nabavi, SF; Daglia, M.; Nabavi, SM; Martinoli, M.-G. Gallate epigallocatechin, moleciwl addawol ar gyfer clefyd Parkinson? Adnewyddiad Res. 2015, 18, 257–269. [CrossRef]

18. Yang, JE; Rho, KY; Lee, S.; Lee, JT; Parc, JH; Bhak, G. ; Paik, SR Diogelu'r Amhariad Pilenni a Sytowenwyndra a Achosir gan yr 'Oligomer Actif'of -Synuclein wedi'i Gyfryngu gan EGCG. Sci. Cynrychiolydd 2017, 7, 1–10. [CrossRef]

19. Bieschke, J. ; Russ, J. ; Friedrich, RP; Ehrnhoefer, DE; Wobst, H. ; Neugebauer, K.; Mae Wanker, EE EGCG yn ailfodelu -synuclein ac amyloid-ffibrilau aeddfed ac yn lleihau gwenwyndra cellog. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 2010, 107, 7710–7715. [CrossRef]

20. Yoshida, W.; Kobayashi, N.; Sasaki, Y.; Ikebukuro, K.; Sode, K. Mae peptid rhannol o -synuclein wedi'i addasu ag atalyddion moleciwlaidd bach yn atal ffibriliad amyloid o -synuclein yn benodol. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 2590–2600. [CrossRef] [PubMed]

21. Xu, Y. ; Zhang, Y.; Quan, Z. ; Wong, W. ; Guo, J. ; Zhang, R.; Yang, Q.; Dai, R. ; McGeer, PL; Qing, H. Epigallocatechin gallate (EGCG) yn atal agregu alffa-synuclein: Asiant posibl ar gyfer clefyd Parkinson. Neurochem. Res. 2016, 41, 2788–2796. [CrossRef] [PubMed]

22. Li, Y. ; Chen, Z.; Lu, Z. ; Yang, Q.; Liu, L. ; Jiang, Z.; Zhang, L.; Zhang, X. ; Qing, H. Nanodrug targed deuol "caethiwus i gelloedd" ar gyfer trin clefyd Parkinson trwy lwybr ffltillinau. Theranostics 2018, 8, 5469. [CrossRef]

23. Xu, Q. ; Langley, M.A.; Kanthasamy, AG; Reddy, MB Mae epigallocatechin gallate yn cael effaith niwro-rescue mewn model llygoden o glefyd Parkinson. J. Nutr. 2017, 147, 1926–1931. [CrossRef] [PubMed]

24. Zhou, T. ; Zhu, M.; Liang, Z. (-)-Mae epigallocatechin-3-gallate yn modylu imiwnedd ymylol yn y model llygoden a achosir gan MPTP o glefyd Parkinson. Mol. Med. Cynrychiolydd 2018, 17, 4883–4888. [CrossRef]

25. Parcb, E. ; Chun, HS Green te polyphenol Epigallocatechin gallate (EGCG) atal BV a achosir gan LPS-2 actifadu celloedd microglial. J. Bywyd Sci. 2016, 26, 640–645. [CrossRef]

26. Liu, J.-B.; Zhou, L.; Wang, Y.-Z.; Wang, X. ; Zhou, Y.; Ho, W.-Z.; Li, J.-L. Gweithgaredd Neuroprotective o ()-Epigallocatechin Gallate yn erbyn Lipopolysaccharide-Cytotoxicity Cyfryngol. J. Immunol. Res. 2016, 2016, 4962351. [CrossRef] [PubMed]

27. Seong, K.-J.; Lee, H.-G.; Kook, MS; Ko, H.-M.; Jung, J.-Y.; Kim, W.-J. Mae epigallocatechin-3-gallate yn achub niwrogenesis hippocampal oedolion â nam ar LPS trwy atal llwybr signalau TLR NF-κB mewn llygod. Corëeg J. Physiol. Ffarmacol. 2016, 20, 41. [CrossRef] [PubMed]

28. Cheng, C.-Y.; Pho, Q.-H.; Wu, X.-Y.; Chin, T.-Y.; Chen, C.-M.; Ffang, P.-H.; Lin, Y.-C.; Hsieh, M.-F. Microsfferau PLGA wedi'u llwytho â chymhlethdodau -cyclodextrin o epigallocatechin-3-gallate ar gyfer y priodweddau gwrthlidiol mewn celloedd microglial actifedig. Polymerau 2018, 10, 519. [CrossRef]

29. Buszello, K.; Harnisch, A.S.; Müller, R.; Müller, B. Dylanwad asidau brasterog alcali ar briodweddau a sefydlogrwydd emylsiynau O/W parenterol wedi'u haddasu â Solutol HS 15®. Eur. J. Pharm. Biofferm. 2000, 49, 143–149. [CrossRef]

30. Shashi, K. ; Satinder, K. ; Bharat, P. Adolygiad cyflawn ar: Liposomau. Int. Res. J. Pharm. 2012, 3, 10–16.

31. Wang, W.-Y.; Tan, M.-S.; Yu, J.-T.; Tan, L. Rôl cytocinau pro-llidiol a ryddhawyd o ficroglia mewn clefyd Alzheimer. Ann. Cyfieithiad. Med. 2015, 3. [CrossRef]

32. Smith, JA; Das, A. ; Ray, SK; Banik, NL Rôl cytocinau pro-llidiol a ryddhawyd o ficroglia mewn clefydau niwroddirywiol. Ymennydd Res. Tarw. 2012, 87, 10–20. [CrossRef] [PubMed]

33. Hu, H. ; Li, Z. ; Zhu, X. ; Lin, R. ; Mae Chen, L. Salidroside yn lleihau symudedd celloedd trwy signalau NF-κB a MAPK mewn celloedd microglial BV2 a achosir gan LPS. Evid. Altern Gyflenwol Seiliedig. Med. 2014, 2014, 383821. [CrossRef]

34. Tambuyzer, BR; Ponsaerts, P.; Nouwen, EJ Microglia: Ceidwaid imiwnoleg y system nerfol ganolog. J. Leukoc. Biol. 2009, 85, 352–370. [CrossRef] [PubMed]

35. Lee, D.-S.; Jeong, G.-S. Mae Butein yn darparu effeithiau niwro-amddiffynnol a gwrth-niwrolidiol trwy fynegiant haem oxygenase 1 sy'n ddibynnol ar Nrf2 / ARE trwy actifadu'r llwybr PI3K / Akt. Br. J. Ffarmacol. 2016, 173, 2894–2909. [CrossRef]

36. Matsuno, R.; Aramaki, Y.; Tsuchiya, S. Cynnwys TGF- mewn effeithiau ataliol liposomau â gwefr negyddol ar gynhyrchu ocsid nitrig gan macroffagau wedi'u hysgogi â LPS. Biocemeg. Bioffys. Res. Cymmun. 2001, 281, 614–620. [CrossRef] [PubMed]

37. Zhang, J. ; Fujii, S.; Wu, Z. ; Hashioka, S.; Tanaka, Y.; Shiratsuchi, A.; Nakanishi, Y.; Nakanishi, H. Ymwneud COX-1 a synthases prostaglandin E uwch-reoledig mewn cynhyrchu prostaglandin E2 a achosir gan ffosffatidylserine a achosir gan liposome gan microglia. J. Neuroimmunol. 2006, 172, 112–120. [CrossRef]

38. Ramos, GC; Fernandes, D.; Charro, CT; Souza, DG; Teixeira, MM; Assreuy, J. Dynwared apoptotig: Mae liposomau Phosphatidylserine yn lleihau llid trwy actifadu derbynyddion sy'n cael eu hysgogi gan ymlediad peroxisome (PPARs) in vivo. Br. J. Ffarmacol. 2007, 151, 844–850. [CrossRef]

39. Abe, N. ; Nishihara, T.; Yorozuya, T.; Tanaka, J. Microglia a Macrophages yn y Systemau Canolog Patholegol ac Ymylol Nerfol. Celloedd 2020, 9, 2132. [CrossRef] [PubMed]

40. Chen, C.-H.; Hsieh, M.-F.; Ho, Y.-N.; Huang, C.-M.; Lee, J.-S.; Yang, C.-Y.; Chang, Y. Gwella treiddiad croen catechin trwy gyfrwng pilen cellwlos hydroxy MPEG-PCL sydd newydd ei gwneud. J. Aelod. Sci. 2011, 371, 134–140. [CrossRef]

41. Parthasarathy, S.; Bin Azizi, J.; Ramanathan, A.S.; Ismail, S.; Sasidharan, S.; Meddai, MIM; Mansor, SM Gwerthusiad o weithgareddau gwrthocsidiol a gwrthfacterol o ddarnau dyfrllyd, methanolig ac alcaloid o ddail Mitragyna speciosa (teulu Rubiaceae). Moleciwlau 2009, 14, 3964–3974. [CrossRef] [PubMed]

42. Herrera, D.; Molina, A.; Buhlin, K.; Klinge, B. Clefydau cyfnodontal a chysylltiad â chlefyd atherosglerotig. Periodontoleg 2000 2020, 83, 66–89. [CrossRef] [PubMed]

43. Batista, CRA; Gomes, GF; Candelario-Jalil, E.; Fiebich, BL; de Oliveira, ACP Niwroinfflamiad a achosir gan Lipopolysaccharid fel Pont i Ddeall Niwroddirywiad. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 2293. [CrossRef]

44. Creese, I. ; Burt, DR; Snyder, SH Mae gwelliant rhwymol derbynnydd dopamin yn cyd-fynd â supersensitifrwydd ymddygiadol a achosir gan friw. Gwyddoniaeth 1977, 197, 596–598. [CrossRef] [PubMed]