Gwerthusiad o Gludiant Coluddol Detholiad Glycoside-Gyfoethog o Phenylethanoid O'r Cistanche Deserticola Ar Draws y Model Monolayer Cell Caco-2

Rhagymadrodd

Mae llinell gell Caco-2, a ddeilliodd o adenocarcinomas y colon dynol, yn arddangos nodweddion tebyg i enterocyte. O dan amodau arferol, mae celloedd Caco-2 yn gwahaniaethu'n ddigymell oddi wrth gelloedd aeddfed ac yn ffurfio monohaenau cyfan [1]. Mae'r celloedd cyfagos yn glynu trwy gyffyrdd tynn a ffurfiwyd ar ochr apical y monolayer, a all wahaniaethu ar y cyffuriau a gludir yn oddefol ac yn weithredol ar draws yr haen epithelial [2]. Oherwydd y tebygrwydd morffolegol a biocemegol i enterocytes arferol, mae monolayers celloedd Caco yn fodel in vitro a dderbynnir yn dda ar gyfer astudio potensial amsugno coluddol a nodweddion trafnidiaeth cyffuriau [3, 4].

Mewn cyferbyniad â chemegau, mae darnau planhigion (PE) yn gymysgeddau nad yw eu gweithgaredd biolegol a'u cyfansoddion gweithredol yn aml wedi'u nodi'n dda [5]. Ar ben hynny, mae priodweddau trafnidiaeth berfeddol AG, yn hytrach na phriodweddau ei gyfansoddion, yn perthyn yn agos i ddefnydd clinigol. Mae mesuriadau fflwcs ar gyfer sampl prawf ar draws monolayer cell Caco-2 yn aml yn cynnwys dulliau cemegol, megis HPLC, LC/MS, ac ati. Er bod y dulliau hyn yn offer pwerus, maent yn gymhleth, yn cymryd llawer o amser, yn ddrud, ac yn achlysurol angen offer soffistigedig. Yn bwysicach, ni all un gydran neu gydran leiafrifol adlewyrchu AG yn ei chyfanrwydd. Felly, mae angen sefydlu dull newydd sy'n annibynnol ar benderfynu ar yr etholwyr er mwyn nodi a gwerthuso nodweddion trafnidiaeth AG.

Mae Cistanche deserticola YC Ma (CD), planhigyn holoparasitig, yn feddyginiaeth Tsieineaidd draddodiadol gyffredin a ddefnyddir yn bennaf i drin diffyg arennau, gwendid y corff, a rhwymedd, ac mae'r defnyddiau hyn wedi'u cofnodi'n swyddogol yn y Pharmacopoeia Tsieineaidd [6]. Glycosidau ffenylethanoid (PhGs), gan gynnwysechinacoside (EC), acteoside (AC) ac isoacteoside(IS), ac ati, yn ddosbarth o gyfansoddion polyphenolic [7]. Maent yn cael eu hystyried yn un o'r prifcyfansoddion bioactif rhywogaethau Cistanche[8]. Mae astudiaethau ffarmacolegol wedi dangos bod bioactifeddiaeth PhGs yn amrywiol ac yn cynnwys gwrth-ocsidiol [9], gwrth-blinder [10], hepatoprotective [11], immunomodulatory [12], gwrthlidiol [7, 13], ac effeithiau niwro-amddiffynnol [ 14]. Fodd bynnag, nid yw nodweddion trafnidiaeth berfeddol PhGs wedi cael eu hymchwilio. Yn yr astudiaeth hon, gwnaethom archwilio'rathreiddedd berfeddol detholiad sy'n gyfoethog mewn PhG (PRE) o CDfel system integredig a athreiddedd tri phrif PhG (AC, IS, ac EC) mewn celloedd Caco-2 gwahaniaethol. Dangosodd ein canlyniadau fod PRE yn cael ei gludo'n bennaf trwy drylediad goddefol sydd wedi'i amsugno'n wael i lawr graddiant crynodiad heb alllif, sy'n darparu'r sail ffarmacocinetig ar gyfer cymhwyso PhGs yn glinigol mewn CD.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA CISTANCHE PERLYSIAU PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Defnyddiau a Dulliau

Defnyddiau

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS, and EC (>Prynwyd 98%) gan Must Biotechnology Co. (Chengdu, Tsieina). Cynhyrchwyd cyfrwng addasedig Dulbecco Eagle's (DMEM), serwm buchol ffetws (FBS), ac asidau amino nad ydynt yn hanfodol (NEAA) gan Gibco BRL (Grand Island, NY, UDA). 6-wel Cafwyd platiau TranswellTM (mewnosoder arwynebedd twf pilen 4.67 cm2 ) gan Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, UDA). Cafwyd colagen Rat-tail o Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, UDA). Roedd yr holl adweithyddion a chemegau ar gyfer y dadansoddiad HPLC o radd ddadansoddol.

Paratoi PRE oddi ar CD

Cafodd y deunydd CD wedi'i sychu yn yr aer ei bowdro a'i dynnu trwy drylifiad â 70% ethanol. Paratowyd y ffracsiwn cyfoethog PhG fel y disgrifiwyd yn flaenorol [10] a'i dynnu ag alcohol n-butyl dirlawn â dŵr. Crynhowyd y hylif echdynnu a'i sychu dan bwysau llai. Mesurodd sbectrophotometreg resin macroporous-UV [15] gynnwys PhG o 78.4%. Roedd y sampl terfynol yn cynrychioli cynnyrch o 1.75% o ddeunydd crai yn ôl pwysau sych. Roedd y sampl a gafwyd yn cael ei storio ar −20 gradd nes ei ddefnyddio ymhellach.

Penderfynu AC, IS, a EC gan HPLC

Defnyddiwyd system Shimadzu HPLC gyda meddalwedd datrysiad LC i asesu cynnwys AC, IS, ac EC yn PRE. Defnyddiwyd colofn Intersil C18 cam cefn (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) a'i gynnal ar dymheredd ystafell. Y cyfnodau symudol oedd asetonitrile a dŵr yn cynnwys 0.1% asid ffosfforig (v/v) gydag elution graddiant (Tabl 1) ar gyfradd llif o 1.0 ml/munud. Gosodwyd y synhwyrydd sbectrophotometer UV i 334 nm. Er mwyn pennu fflwcs AC ac IS yn gywir, rydym wedi datblygu dull canfod fflworoleuedd HPLC (HPLC-FLD) newydd. Ar ôl dadansoddiad strwythurol a sganio tonfedd fflworoleuedd (data heb ei ddangos), cawsom yr amodau canfod fflworoleuedd gorau posibl ar gyfer AC (Ex: 338 nm, Em: 448 nm) ac IS (Ex: 320 nm, Em: 434 nm).

Dilyswyd dull dadansoddol HPLC gan ddefnyddio'r nodweddion perfformiad canlynol: sefydlogrwydd, llinoledd, sensitifrwydd, manwl gywirdeb (amrywioldeb o fewn a rhwng diwrnodau), a chywirdeb. Storiwyd y analytes yn y byffer trafnidiaeth ar 25 gradd yn y tywyllwch am 24 h, a mesurwyd eu sefydlogrwydd. Roedd y analytes yn sefydlog iawn ym mhresenoldeb fitamin C (0.4%) oherwydd bod gwerthoedd gwyriad safonol cymharol (RSD) yn yr ardaloedd brig yn < 3.5%. Mae'r hafaliad atchweliad llinol, cyfernod cydberthynas, ystod llinoledd, LOD, a LOQ ar gyfer AC, IS, ac EC i'w gweld yn Nhabl 2. Y LODs (18–30 nM) a LOQs (60–100nM) mae gwerthoedd yn dangos bod dulliau HPLC-FLD a HPLC-UV yn sensitif iawn. Roedd y gwerthoedd RSD sy'n mynegi cywirdeb y dull i gyd yn < 2% ar gyfer amrywioldeb o fewn a rhwng diwrnodau, sy'n dangos cywirdeb da. Ar gyfer gwerthuso adferiad, ychwanegwyd AC, IS, ac EC at y byffer trafnidiaeth i gynhyrchu tair lefel crynodiad (uchel, canolig ac isel). Crynhoir gwerthoedd adennill y dull ar gyfer y dadansoddiadau yn Nhabl 3. Roedd yr adferiadau cyfartalog yn amrywio o 90.0% i 96.4%, sy'n dangos cywirdeb da. I gloi, mae'r dulliau HPLC sefydledig yn foddhaol o ran llinoledd, sensitifrwydd, manwl gywirdeb a chywirdeb ar gyfer meintioli AC, IS, ac EC mewn byffer trafnidiaeth.

DYFYNIAD TUBULOSA CISTANCHE NATURIOL PHGS75% ECH 30% DEDDF 12%

Pennu PRE trwy system bio-assay

Roedd y bio-assay (cyfanswm gallu gwrth-ocsidiol) yn seiliedig ar yr assay FRAP (lleihau fferrig / pŵer gwrthocsidiol) a ddisgrifiwyd gennym yn flaenorol [16] a'i ddilysu o ran llinoledd a manwl gywirdeb (amrywioldeb o fewn a rhwng diwrnodau). Pennwyd llinoledd y dull bio-assay yn seiliedig ar y cromliniau graddnodi. Amrediad crynodiad llinoledd oedd 0.0625 − 40 ug/ml (y=0.0258x+0.0968, R2=0.996). Penderfynwyd ar drachywiredd y dull bio-assay sefydledig yn nhermau'r amrywioldeb o fewn a rhwng diwrnodau ar gyfer dadansoddiad o PRE (10.0 ug/ml). Penderfynwyd ar ailadroddadwyedd y dull o fewn diwrnod ar sail pum penderfyniad yn olynol ar yr un diwrnod. Mesurwyd y gallu i ailadrodd rhwng diwrnodau yn seiliedig ar bum penderfyniad yn olynol ar dri diwrnod gwahanol. Y gwerthoedd RSD ar gyfer trachywiredd y dull oedd 1.014% a 4.72% ar gyfer amrywioldeb o fewn diwrnod a rhwng diwrnodau, yn y drefn honno, sy'n dangos cywirdeb da. Felly, mae'r dull bio-assay sefydledig yn foddhaol o ran llinoledd, manwl gywirdeb, a chywirdeb ar gyfer meintioli PRE mewn byffer trafnidiaeth.

Diwylliant celloedd

Cafodd celloedd caco{{0}} eu meithrin ar 37 gradd a 95% o leithder cymharol mewn atmosffer yn cynnwys 5% CO2 a chyfrwng yn cynnwys DMEM, 10% FBS, 1% NEAA, 1% L-glutamin, penisilin (100 U/ml), a streptomycin (100 ug/ml). Newidiwyd y cyfrwng bob yn ail ddiwrnod yn ystod twf celloedd a gwahaniaethu. Tyfwyd y celloedd mewn 75-cm2 fflasgiau plastig a'u cynaeafu bob 3-5 diwrnod gyda 0.05% EDTA-trypsin. Ar gyfer yr arbrofion trafnidiaeth, cafodd y celloedd eu hadu ar ddwysedd o 1 × 105 celloedd / cm2 ar fewnosodiadau Transwell wedi'u gorchuddio â cholagen. Tua 21 diwrnod ar ôl hadu, defnyddiwyd y monolayers ar gyfer yr arbrofion trafnidiaeth. Pennwyd eu cywirdeb trwy fesur yr ymwrthedd trydanol traws-epithelial (TEER) ar draws y monolayers gydag EVOM offer gyda ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., UDA). Roedd angen i werthoedd TEER y monolayer cell Caco{-2 fod yn fwy na 500 O∙cm2.

Arbrofion trafnidiaeth

Golchwyd y monolayer gyda byffer trafnidiaeth (P-byffer yn cynnwys 10 mM HEPES, 1 mM sodiwm pyruvate, 10 mM glwcos, 3 mM CaCl2, a 145 mM NaCl, pH 7.4) ac yna cyn-deor am 20 munud ar 37 gradd. Ar ôl tynnu'r byffer cludo, ychwanegwyd byffer trafnidiaeth ffres sy'n cynnwys samplau prawf i'r siambr apical (AP) (1.5 ml) yn AP i astudiaethau cyfeiriadol basolateral (BL) neu'r siambr BL (2.5 ml) yn BL i astudiaethau cyfeiriadol AP. Ar gyfer profion AC, IS, ac EC gan ddefnyddio HPLC, tynnwyd aliquot (300 ul) o bob siambr dderbyn ar wahanol gyfnodau amser (30, 60, 90, a 120 mun). Ailgyflenwyd y siambr dderbyn gyda'r un faint o glustogfa cludo ffres wedi'i gynhesu ymlaen llaw (37 gradd) ar ôl pob samplu. Cafodd y samplau a gasglwyd eu storio ar −20 gradd i'w defnyddio ymhellach. Ar gyfer penderfyniad PRE gan ddefnyddio bio-assay, dim ond y samplau 120 munud a gymerwyd. Oherwydd ansefydlogrwydd PRE, AC, IS, ac EC, roedd 0.4% (w/v) fitamin C yn

ychwanegwyd i sefydlogi'r samplau i bennu'r cynnwys AC, IS, ac EC gan HPLC, a phroseswyd y samplau ar gyfer y bioassay PRE yn syth ar ôl cael eu samplu. Cyfrifwyd cyfernod athreiddedd ymddangosiadol (Papp neu werth 'Papp) pob sampl.

Dadansoddi data

Cyfrifwyd y gwerthoedd Papp yng nghyfarwyddiadau AP BL neu BLAP AC, IS, ac EC yn seiliedig ar yr hafaliad canlynol: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), lle Papp yw'r cyfernod athreiddedd ymddangosiadol (cm/s) a bennir gan HPLC. (4Q/4t) yw cyfradd ymddangosiad y cyfansoddyn prawf (AC, IS neu EC) ar ochr y derbynnydd (μmol/s); A yw arwynebedd arwyneb y mewnosodiad (cm2 ); C0 yw'r crynodiad cyfansawdd prawf cychwynnol ar ochr y rhoddwr (μmol/ml). Yn benodol, defnyddiwyd yr uned màs "ug" yn lle "μmol" pan gyfrifwyd y gwerthoedd 'Papp'. Mynegir y data fel y modd ± SD.

Canlyniadau

Cyfansoddiad AC, IS, ac EC yn PRE o CD

Oherwydd bod AC, IS, ac EC yn cael eu hystyried fel y prif fioactifPhGs o rywogaethau Cistanche[8], dadansoddwyd eu cynnwys yn PRE trwy HPLC-UV. Dangosir y cromatogram cynrychioliadol yn Ffig. 1. Seiliwyd adnabod yr cyfansoddion hyn ar gymharu'r amseroedd cadw a'r sbectrwm UV gyda rhai o safonau dilys ar donfedd o 334 nm. Roedd cynnwys AC, IS, ac EC yn PRE yn 26.60%, 1.84%, a 32.83%, yn y drefn honno. Felly, mae'r tri chyfansoddyn hyn yn cyfrif am 61.27% o PRE; ar ben hynny, mae'r canlyniadau uchod yn dangos bod cynnwys PhG yn PRE yn 78.4%. Felly, mae AC, IS, a EC yn cyfrif am tua 80% o PhGs yn PRE.

TUBULOSA CISTANCHE NATURIOL AR GYFER GWELLA SWYDDOGAETH YR AREN PHGS75% ECH 30% DEDDF 12%

Cyfanswm gallu gwrthocsidiol PRE, AC, IS, ac EC

Mae astudiaethau o weithgaredd gwrth-ocsidiol PhGs o CD wedi'u hadrodd [9], ac mae AC, IS, ac EC yn cyfrif am oddeutu 80% o PhGs yn PRE. Felly, assayed a mynegwyd cyfanswm galluoedd gwrthocsidiol PRE, AC, IS, ac EC gan ddefnyddio gwerthoedd FRAP (× 10–6 mmol). Fel y dangosir yn Ffig. 2, pan oedd y gwerth FRAP yn 8 × 10–6 mmol, y crynodiadau terfynol o PRE, AC, IS, ac EC oedd 6.20 ug/ml, 3.14 ug/ml, 22.92 ug/ml, a 4.89 ug /ml, yn y drefn honno, sy'n nodi bod cyfanswm cynhwysedd gwrthocsidiol y pedwar sampl hyn wedi'u rhestru fel a ganlyn: AC > EC > PRE > IS. Mae bioactifeddiaeth PRE yn cael ei briodoli i'w grwpiau cynhwysion actif (AIG). Ar gyfer tua 60% o PRE, dangosodd AC ac EC gyfanswm gweithgaredd gwrthocsidiol cryfach na PRE ac IS. Oherwydd bod IS (1.84%) yn ffracsiwn bach iawn o PRE, mae cydrannau eraill, fel yr IS gwan gwrthocsidiol, hefyd yn amlwg yn weithredol yn PRE. Yn syndod, roedd cyfanswm y gweithgaredd gwrthocsidiol bron yn wahanol i 7-plygiad rhwng AC a'i isomer IS, gan ddangos nid yn unig nifer y grwpiau hydrocsyl ffenolig [9] ond hefyd sefyllfa grwpiau hydrocsyl ffenolig yn y moleciwl yr effeithiwyd arnynt. effaith gwrth-ocsidiol.

Dilysu'r haenau mono-2 Caco

I ddilysu system monolayer celloedd Caco{0}}, gwerthoedd Papp propranolol (marciwr wedi'i gludo'n dda) a Lucifer melyn (marciwr wedi'i gludo'n wael) o'r AP i'r BL ar draws y monolayers Caco-2 oedd wedi’i bennu fel 1.51 × 10–5 cm/s a 2.8 × 10–7 cm/s, yn y drefn honno, ac roedd y gwerthoedd hyn yn cytuno â’r rhai a gyhoeddwyd mewn adroddiadau blaenorol [17, 18]. Cadarnhaodd y assay gweithgaredd ffosffatase alcalïaidd hefyd fod monolayers celloedd Caco-2 yn gymharol ansoddol â'r epitheliwm berfeddol bach [19].

Athreiddedd AC, IS, ac EC

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 cm/s), tra bod cyffuriau a amsugnwyd yn wael yn isel (< 1.0 × 10–6 cm/s) [3]. As shown in Table 4, the Papp values of AC, IS, and EC were nearly on the order of 10–7 cm/s, indicating that these compounds were poorly permeable. Furthermore, efflux or active transport was not observed because the ratios of Papp BL to AP / Papp AP to BL for AC, IS, and EC were between 0.90 ~ 1.55, and the criterion of net efflux proposed by the FDA Guidance is a ratio less than 2 [20]. Based on the kinetic curves presented in Fig. 3, the bidirectional transport percentages of AC, IS, and EC at 200 μM increased linearly with time. The transport rate (TR) values of the three compounds increased linearly in both directions between approximately 100 and 300 μM (Fig. 4). These results indicate that the main transport mechanism of AC, IS, and EC is also passive diffusion. 

Athreiddedd PRE

Mae'r canlyniadau uchod yn nodi bod cyfanswm gallu gwrth-ocsidiol PRE o leiaf oherwydd 61.27% o AIG o PRE. Felly, gwnaethom werthuso TR PRE yn seiliedig ar ei gromlin effaith grynodiad o gyfanswm y gallu gwrthocsidiol a chyfrifo'r 'gwerthoedd Papp i adlewyrchu nodweddion trafnidiaeth PRE. Gwerthoedd Papp PRE ar gyfer AP!BL a BL!AP oedd (2.16 ± 0.26) × 10–7 cm/s a (3.13 ± 0.29) × 10–7 cm/ s, yn y drefn honno, yn nodi bod y cyfansawdd hwn yn athraidd yn wael. At hynny, nid oedd efflux neu gludiant gweithredol yn amlwg oherwydd bod y gymhareb o 'Papp BL i AP / 'Papp AP i BL ar gyfer PRE yn 1.45 [20]. Ar ben hynny, cynyddodd TR deugyfeiriadol PRE yn llinol rhwng tua 300 a 900 ug/ml (Ffig. 5). Mae diffyg ffafriaeth gyfeiriadol y canlyniadau yn awgrymu mai trylediad goddefol yw prif fecanwaith trafnidiaeth PRE.

Trafodaeth

O'i gymharu â chynhyrchion cyffuriau puro iawn, mae AG yn gyffredinol yn gymysgeddau sy'n cynnwys cannoedd o gyfansoddion sydd â phriodweddau ffisiocemegol gwahanol iawn. Felly, mae AG yn gweithredu'n systematig, yn aml-darged ac yn aml-sianel synergyddol oherwydd eu Grant Gwella Blynyddol cymhleth [21], sy'n rhwystro dadansoddiad o nodweddion trafnidiaeth AG. Er mwyn gwerthuso priodweddau trafnidiaeth AG yn fwy gwyddonol, mae rhai ymchwilwyr wedi nodi cydrannau lluosog, yn hytrach nag un gydran, yn AG [22-24]. Serch hynny, ni all nifer cyfyngedig o etholwyr adlewyrchu'r AG yn ei chyfanrwydd. Fodd bynnag, mae pennu'r holl gydrannau mewn AG yn amhosibl. Ar ben hynny, os yw cydrannau amrywiol mewn AG yn arddangos nodweddion trafnidiaeth hollol wahanol, bydd yn anodd nodi nodweddion trafnidiaeth cyfannol AG.

Yn y 1990au, defnyddiwyd systemau bio-assay i werthuso TR asiantau gwrthficrobaidd [25]. Erbyn 2005, roedd Eguchi a'i gydweithwyr [26] wedi gwerthuso gweithgaredd gwrth-ocsidiol echdynnu moron trwy ddefnyddio cyfryngau BL o gelloedd Caco-2 gwahaniaethol; mae'r ymagwedd hon yn fwy priodol i adlewyrchu sefyllfaoedd in vivo.

Yn seiliedig ar adroddiad blaenorol ar weithgaredd PhGs [9] a'n canlyniadau (Ffig. 2), gellir gwerthuso'r TR o AIG yn PRE trwy bennu cyfanswm gallu gwrth-ocsidiol y cyfrwng yn y siambr derbynnydd. Ar ôl yr arbrofion trafnidiaeth, canfuom fod TR PRE yn debyg i'r ddau gyfeiriad, ac roedd y cludiant hwn yn annirlawn ac wedi'i amsugno'n wael ('Papp < ​​1.0 × 10–6 cm/s) [3], a nid oedd yn dynodi efflux, sy'n awgrymu mai trylediad goddefol i lawr graddiant crynodiad yw prif fecanwaith trafnidiaeth PRE (Ffig. 5). Ymhellach, mae nodweddion trafnidiaeth PRE yn gyson â rhai AC, IS, ac EC, y cydrannau effeithiol sy'n arddangos gweithgaredd gwrth-ocsidiol yn PRE (Ffig. 4 a Thabl 4). Disgwyliwyd y canlyniad hwn a dangosodd fod y system bio-assay bresennol yn briodol ac yn ddibynadwy ar gyfer gwerthuso nodweddion trafnidiaeth AIG yn PRE mewn celloedd Caco{2 gwahaniaethol.

Mewn cyferbyniad â'r gwerth Papp canonaidd, a ddefnyddir yn gyffredin i adlewyrchu cludo cyfansoddyn sengl, efallai y bydd y 'gwerth Papp a geir o'r TR yn seiliedig ar y gromlin effaith crynodiad nid yn unig yn adlewyrchu'r cydrannau sy'n treiddio i haenau mono gyda strwythur cyfan ond hefyd hefyd yn cynnwys ffactorau eraill sy'n gysylltiedig â'r gweithgaredd targed, megis metabolion y cydrannau, cynhyrchion sydd wedi'u diraddio'n gemegol, a hyd yn oed rhai cytocinau sy'n cael eu secretu o gelloedd Caco mewn ymateb i ysgogiad a all effeithio ar y bioactifedd targed. Felly, mae'r amlffactor a grybwyllir uchod, yn hytrach na dim ond y cydrannau cyfan a gludir, yn pennu'r 'gwerth Papp. Felly, 'Efallai y bydd Papp yn cydberthyn yn gryfach â sefyllfaoedd in vivo na'r gwerth canonaidd Papp [26]. Yn yr astudiaeth hon, gwnaethom egluro natur oddefol gwasgaredig ac amsugnol PRE yn seiliedig ar ei 'werth Papp, a gall y natur hon fod yn gysylltiedig â dos uchel a chyfnod triniaeth glinigol hir CD [27]. Serch hynny, bydd y canfyddiadau hyn yn rhoi arweiniad mwy systematig i glinigwyr wrth gymhwyso CD pan mai dim ond nodweddion trafnidiaeth y rhan fwyaf o GCC mewn CD, nid PhGs yn unig, sydd wedi'u nodi.

DYFYNIAD NATURIOL CISTANCHE TUBULOSA CISTANCHE PHGS75% ECH 30% DEDDF 12%

Fodd bynnag, rhaid i'r eitem bioactifedd a ddewiswyd fod yn ddigon sensitif i'w ganfod yng nghyfrwng y siambr dderbyn, sy'n cyflwyno her i sefydlu system bioassay i werthuso nodweddion trafnidiaeth AG. Ar ben hynny, dylai'r bioactifedd hefyd ddibynnu ar gynifer o gydrannau â phosibl. Yn ein hastudiaeth, roedd cyfanswm yr assay capasiti gwrthocsidiol yn fwy priodol na sawl dull arall (S1 Ffig.). Ond serch hynny, dim ond ar 120 munud y gall ein hassay ganfod y TR o PRE.

Gyda'i gilydd, sefydlodd yr astudiaeth bresennol system bio-assay newydd i werthuso athreiddedd perfeddol PRE mewn celloedd Caco-2 gwahaniaethol. Dangosodd y canlyniadau a gafwyd mai trylediad goddefol wedi'i amsugno'n wael i lawr graddiant crynodiad heb alllif yw prif fecanwaith trafnidiaeth PRE (Ffig. 5), sy'n darparu'r sail ffarmacocinetig ar gyfer cymhwyso PhGs yn glinigol mewn CD. Defnyddio system bio-assay newydd i werthuso'r TR a thrwy hynny gyfrifo'r gwerthoedd Papp i asesu'reiddo trafnidiaeth berfeddolo Grant Buddsoddi'r Cynulliad mewn AG yn ymarferol. Gall y dull hwn hefyd fod yn addas ar gyfer AG arall o ystyried bioactifedd priodol.