Ymateb Mynegiant Genynnau O'r Gastropod Physella Acuta Heb ei Darged I Fenoxycarb, Plaladdwr Analog Hormon Ifanc

Mae plaladdwyr yn broblem amgylcheddol. Mae'r chwilio am ddulliau rheoli plâu newydd wedi canolbwyntio ar gyfansoddion sydd ag effeithiau gwenwynig isel neu ddim o gwbl mewn organebau nad ydynt yn darged. Mae analogau o'r hormon ifanc (JH) yn ymyrryd â system endocrin arthropodau. Fodd bynnag, mae angen cadarnhau'r diffyg effaith ar rywogaethau nad ydynt yn darged. Mae'r erthygl hon yn dadansoddi effaith Fenoxycarb, analog o JH, ar Physella acuta, gastropod dyfrol. Am 1 wythnos, roedd anifeiliaid yn agored i 0.01, 1, a 100 ug/L, a chafodd yr RNA ei ynysu i ddadansoddi mynegiant y genyn trwy ôl-adysgrifio a PCR Amser Real. Dadansoddwyd deugain o enynnau yn ymwneud â'r system endocrin, y mecanweithiau atgyweirio DNA, y mecanweithiau dadwenwyno, straen ocsideiddiol, yr ymateb straen, y system nerfol, hypocsia, metaboledd ynni, y system imiwnedd, ac apoptosis. Dangosodd tri o'r genynnau, AchE, HSP17.9, ac ApA, ymatebion i bresenoldeb Fenoxycarb ar 1 ug/L, heb unrhyw ymatebion ystadegol arwyddocaol yng ngweddill y genynnau ac yn y crynodiadau sy'n weddill. O'r canlyniadau, gellir dod i'r casgliad bod Fenoxycarb yn dangos ymateb gwan ar y lefel moleciwlaidd yn P. acuta yn yr amser a'r crynodiadau a brofwyd. Fodd bynnag, cafodd Aplysianin-A, genyn sy'n gysylltiedig ag imiwnedd, ei newid fel y gallai'r effaith hirdymor fod yn berthnasol. Felly, mae angen ymchwil ychwanegol i gadarnhau diogelwch Fenoxycarb mewn rhywogaethau nad ydynt yn arthropod yn y tymor hir.

cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd

Mae'r plaladdwr Fenoxycarb (IUPAC: ethyl [{{{0}}(4-phenoxy-phenoxy)ethyl] carbamate, CAS No. 72490-01-8) yn carbamad a ddefnyddir i reoli plâu pryfed amrywiol yn cnydau a diwylliannau addurniadol1. Mae'n rheoleiddio twf pryfed trwy ddynwared yr hormon ifanc, gan atal y pryfyn rhag cyrraedd aeddfedrwydd2. Fodd bynnag, fe'i gwelwyd hefyd mewn arthropodau eraill 3-5. Ar y lefel foleciwlaidd, sylwyd ei fod yn cyfryngu ataliad amlhau celloedd ac apoptosis mewn pryfed6 ac yn dadreoleiddio'r genynnau sy'n ymwneud â synthesis hormonau ifanc mewn pryfed cop5. Ystyrir nad yw'n niweidiol i fertebratau a rhywogaethau nad ydynt yn darged, gan effeithio ar bryfed ac arthropodau eraill5,7-9. Adroddwyd ei fod yn is na'r lefel canfod (0.0004 mg/L) 24 i 48 h ar ôl ei osod o'r awyr i byllau arbrofol10. Yn ogystal, ystyriwyd bod crynodiadau nominal o fracedi 0.20, 0.80, 3.2, 13, a 50 ug/L yn rhagweld lefelau amgylcheddol11. At hynny, ystyrir Fenoxycarb yn amgylcheddol ddiogel oherwydd ei ddiraddiad cyflym10, gydag amser afradu 50 (DT50) o 4.13 diwrnod yn y golofn ddŵr a 15 diwrnod mewn gwaddod (cronfa ddata PPDB: http://sitem.herts.ac.uk/aeru /ppdb/en/Reports/304.htm) 1. Mae ganddo gyriad isel i diroedd cyfagos o gaeau lle mae'n cael ei wasgaru12, er y gallai fod mewn dyfroedd wyneb oherwydd drifft chwistrell, dŵr ffo neu ddraeniad13. Mae wedi'i wahardd yn yr UE ond mae'n cael ei ddefnyddio yn y DU, UDA ac Awstralia. Roedd Awdurdod Diogelwch Bwyd Ewrop o'r farn nad oedd unrhyw feysydd o bryder ym meysydd gwenwyneg mamalaidd ac asesu risg defnyddwyr ar gyfer defnyddio fenoxycarb mewn afalau a gellyg14. Fodd bynnag, er bod risg isel wedi’i hasesu ar gyfer adar a mamaliaid, macro-organebau a micro-organebau pridd nad ydynt yn darged, a phlanhigion daearol nad ydynt yn darged, nodwyd risg uchel ar gyfer organebau dyfrol gyda bwlch data yn y risg i infertebratau dyfrol o ystyried y dull gweithredu a'r camau twf mwyaf sensitif14. Er ei fod yn cael ei ystyried yn wenwynig isel ar amlygiad y geg, dermol, neu anadliad, cynigiwyd ei ddosbarthu fel cemegyn gyda thystiolaeth gyfyngedig o effaith carcinogenig oherwydd gall gynhyrchu tiwmorau ysgyfaint ac afu mewn llygod trwy achosi amlhau perocsisome, mecanwaith. llai sensitif mewn bodau dynol14. Oherwydd hyn, mae fenoxycarb wedi'i labelu'n wenwynig iawn i fywyd dyfrol ac yn cael ei amau ​​o achosi canser. Mewn fertebratau, ni welwyd unrhyw effaith ar atgenhedlu mewn defaid15, ond disgrifiwyd bod Fenoxycarb mewn niwronau cortigol llygod mawr a ddatgelwyd am wythnos wedi gostwng yn sylweddol lefelau ATP, potensial pilen mitocondriaidd, a defnydd o glwcos16. Ar ben hynny, mae'n atal acetylcholinesterase ymennydd llygod mawr a derbynyddion acetylcholine nicotinig a fynegir mewn oocytes Xenopus laevis17. Ar y llaw arall, mae rhai adroddiadau'n dangos y gall effeithio'n negyddol ar gynhyrchu wyau a'r gyfradd deor yn y collembola Yuukianura szeptyckii18, er na ddangosodd astudiaethau blaenorol ar Folsomia candida effaith o'r fath. Yn yr un modd, sylwyd ar effeithiau andwyol megis atal toddi a thwf hyd y corff pan ddatgelwyd y berdysyn Neocaridina davidi am bythefnos i grynodiad mor isel â 10 ug/L3, tra bod y cranc Rhithropanopeus harrisii wedi profi oedi o ran metamorffosis ar 48 ug/L o Fenoxycarb20. O ystyried y canlyniadau hyn, mae angen astudiaethau ychwanegol i wybod effaith y plaladdwr hwn ar ecosystemau. Mae diffyg gwybodaeth am effeithiau Fenoxycarb ar infertebratau dŵr croyw nad ydynt yn arthropod, ond disgwylir iddo fod yn ddiniwed iddynt. Fodd bynnag, mae prinder gwybodaeth am ffisioleg infertebratau, yn enwedig o ran y system endocrin, yn gofyn am gadarnhad o'r eithaf hwn. Nod y gwaith hwn yw profi gwenwyndra Fenoxycarb ar y lefel trawsgrifio, yn y gastropod dŵr croyw Physella acuta (Draparnaud, 1805) trwy ddatgelu'r anifeiliaid am 1 wythnos a dadansoddi'r proffil trawsgrifio i gyfres sy'n cwmpasu gwahanol lwybrau cellog perthnasol. Mae'r falwen ddŵr croyw Physella acuta, a elwir hefyd yn Physa acuta, yn rhywogaeth hermaphroditig a chosmopolitan. Mae'n byw mewn llynnoedd a phyllau ac yn dodwy ei wyau mewn màs wyau sy'n gofyn am tua phythefnos i ddatblygu. Mae pobl ifanc sydd wedi deor yn tyfu am ddau fis nes iddynt gyrraedd y cam oedolyn, paru, a dodwy wyau. Mae'n hawdd meithrin y rhywogaeth yn y labordy, felly fe'i defnyddir mewn astudiaethau gwenwyndra i gynrychioli'r gastropodau21,22. Yn ddiweddar, fe wnaethom gynllunio arae i astudio’r ymateb i wenwynyddion ar lefel mynegiant genynnau’r rhywogaeth hon23. Roedd yn cynnwys 34 o enynnau a 4 genyn cyfeirio. Yn ogystal, fe wnaethom ei ymestyn i 40 o enynnau targed, gan gynnwys rhai ohonynt i ddadansoddi'r newidiadau ar y lefel gweithgaredd trawsgrifio mewn sawl proses gellog. Disgrifir y dilyniant o naw genyn am y tro cyntaf ar gyfer y rhywogaeth hon ac mae'n ymestyn nifer y genynnau y gellir eu defnyddio fel biofarcwyr. Mae'r cod dilyniannau ar gyfer proteinau sy'n gysylltiedig â'r system endocrin (derbynnydd galanin math 2 [GalR2], derbynnydd cysylltiedig ag estrogen [ERR], derbynnydd progestin bilen-beta [MPR], estradiol 17-beta-dehydrogenase 8 [Hsd17b8], a derbynnydd asid retinoig [RXR]), atgyweirio DNA (poly-ADP-ribose polymerase I [PARP1], protein atgyweirio DNA XRCC3 [XRCC3], ffactor niwclear kappa enhancer genyn polypeptide ysgafn mewn atalydd celloedd B, alffa [IkBa]) , ac ymateb i straen (protein sioc gwres 70 B2-fel [HSP70 B2]). Yn gyffredinol, mae'r amrywiaeth yn caniatáu dadansoddiad o newidiadau yn y system endocrin, mecanweithiau dadwenwyno, atgyweirio DNA, y system nerfol, apoptosis, straen ocsideiddiol, straen, epigeneteg, y system imiwnedd, metaboledd ynni, a chludiant lipid. Yn y modd hwn, mae'r arae yn dangos newidiadau yn y prif fecanweithiau sy'n gysylltiedig â'r ymateb i straen a dadwenwyno ond hefyd ymateb prosesau sy'n ymwneud ag effeithiau hirdymor, megis mecanweithiau addasu epigenetig ac atgyweirio DNA, a fyddai'n cael eu gweithredu rhag ofn y bydd unrhyw effeithiau hirdymor. effaith genotocsig y cyfansawdd. Mae diogelwch ar y lefel amgylcheddol yn bryder i'r holl gynhyrchion a ddefnyddir fel plaladdwyr. Mae chwilio am blaladdwyr newydd sy'n cael llai o effaith ar rywogaethau nad ydynt yn darged yn gofyn am brofion ar y rhywogaethau hyn oherwydd gall rhai ohonynt gael effaith isel. Fodd bynnag, mae'r diffyg gwybodaeth am ffisioleg infertebratau yn gofyn am waith arbrofol i'w gadarnhau. Bydd hefyd yn darparu gwybodaeth ychwanegol am ffisioleg yr infertebratau, gan leihau'r bwlch gyda'r fertebratau a ffafrio'r defnydd o infertebratau fel dulliau amgen sy'n lleihau'r defnydd o fertebratau yn y prawf gwenwyndra.

budd-daliadau atodiad cistanche-cynyddu imiwnedd

Canlyniadau

Adnabod dilyniannau.

Nodwyd naw dilyniant a oedd yn codio ar gyfer gwahanol broteinau yn ymwneud â'r system endocrin (Hsd17b8, ERR, GalR2, MPR, a RXR), yr ymateb straen (HSP70B2), a mecanweithiau atgyweirio DNA (XRCC3, IkBa, a PARP1). Dangosir maint y dilyniant a maint ORF yn Nhabl 1. Ar ben hynny, dangosir hunaniaeth a thebygrwydd ar lefel asid amino gyda'r protein a nodir. Dangosodd cymhariaeth y gronfa ddata homoleg â phroteinau o folysgiaid eraill, gastropodau yn bennaf, ac eithrio MPR, a oedd yn homologaidd i brotein o darddiad dwygragennog. Roedd lefel y homoleg yn uchel ac eithrio yn achos y GalR2 a'r MPR, tra bod ERR a HSP70 B2 yn dangos mwy na 90% o hunaniaeth. Mae Ffigur 1 yn dangos cynllun y proteinau gyda'r gwahanol fotiffau sy'n eu nodweddu. Dangosodd pob un ohonynt y parthau nodweddiadol sy'n gysylltiedig â'r proteinau hynny, felly gellir dod i'r casgliad bod y dilyniannau ynysig yn cyfateb i'r genynnau sy'n codio'r proteinau hynny.

Proffil mynegiant genynnau mewn ymateb i amlygiad Fenoxycarb.

Amlygwyd malwod llawndwf i 0.01, 1, a 100 µg/L o Fenoxycarb am saith diwrnod i asesu ymateb canol tymor y genynnau a ddadansoddwyd (Ffig. 2, 3, 4, 5 6 , S1 a S2). Mae Fenoxycarb yn analog o hormon ifanc na ddisgwylir iddo effeithio ar arthropodau nad ydynt yn arthropodau. Nid oedd Tere unrhyw ymateb ystadegol arwyddocaol yn y genynnau hynny sy'n ymwneud â'r system endocrin (Ffig. 2), mecanweithiau atgyweirio DNA (Ffig. 3), straen ocsideiddiol (Ffig. 4), apoptosis (Ffig. 4), cam I (Ffig. S1 ), cam II (Ffig. S2), a cham III (Ffig. S2) o ddadwenwyno, y rhan fwyaf o broteinau straen (Ffig. 5), hypocsia (Ffig. 5), rheoliad epigenetig (Ffig. 6), a metaboledd ynni (Ffig. 5). . 6). Dim ond tri genyn a gafodd eu haddasu ar 1 µg/L: acetylcholinesterase (AChE) (chi sgwâr=− 16.144, p=0.029; Ffig. 4), protein sioc gwres 17.9 (HSP 17.9) (chi sgwâr=− 15.553, p=0.039; Ffig. 5), ac aplysianin A (ApA) (sgwâr chi=− 20.333, p=0.002; Ffig. . 6). Terefore, dangosodd y ddau enyn a ddadansoddwyd mewn perthynas â'r system nerfol (AChE) ac imiwnedd (ApA) rywfaint o newid, gan awgrymu y gallai rhai effeithiau canol tymor ar ffisioleg P. acuta ddigwydd megis ymddygiad chwilio am borthiant neu dueddiad i heintiau bacteriol.

Tabl 1. Gwybodaeth am y dilyniannau a ddisgrifiwyd ar gyfer y tro cyntaf. Nodir maint DNA a phrotein, homoleg, hunaniaeth, a thebygrwydd. Nodir rhif te contig neu rif derbyn.

Ffigur 1. HYPERLINK "sps:id::fg1||locator::gr1||MediaObject::0"Adeiledd a pharthau cadw cod proteinau Physella acuta gan y dilyniannau a nodwyd. Dangosir motiffau nodweddiadol pob protein. Mae te parthau wedi'u diffinio yn unol â dosbarthiad swyddogaethol proteinau'r Gronfa Ddata Parthau Cadw (CCD). Mae maint te yn cael ei nodi gan y niferoedd.

Ffigur 2. Lefelau trawsgrifiad o ddilyniannau sy'n gysylltiedig ag endocrin (derbynnydd estrogen [ER], derbynnydd sy'n gysylltiedig ag estrogen [EER], beta derbynnydd progestin bilen [MPR], estradiol 17-beta-dehydrogenase 8 [Hsd17b8], derbynnydd galanin 2 [GalR2], a derbynnydd asid retinoig [RXR]) mewn oedolion acíwt Physella ar ôl dod i gysylltiad mewn vivo â Fenoxycarb am saith diwrnod ar 19 gradd. Cafodd gweithgarwch trawsgrifio ei feintioli gan RT-PCR gan ddefnyddio protein ribosomaidd L10 (rpL10), actin (Act), 6-phosphofructo-2-kinase/ffrwctos-2,{17}}biphosphatase 2 (PFKFB2). ), a glyseraldehyde-3-ffosffad dehydrogenase (GAPDH) fel genynnau cyfeirio. Perfformiwyd y gymhariaeth â'r rheolyddion sy'n agored i doddydd. Dangosir blychau whisger. Mae pob blwch yn cyfateb i 12 unigolyn. Mae'r llinell lorweddol yn y blwch yn nodi'r canolrif ac mae'r 25ain a'r 75ain canradd wedi'u nodi gan ffiniau'r blwch. Cynrychiolir y canlyniadau uchaf ac isaf gan y wisgers. Mae'r triongl bach y tu mewn i'r blwch yn dynodi'r cymedr, a dangosir yr allgleifion (cylchoedd). Ni welwyd unrhyw wahaniaethau arwyddocaol o ran rheolaeth yn y genynnau hynny (t<0.05).

Trafodaeth

Mae datblygiadau mewn astudiaethau gwenwynegol yn galw am ymestyn profion gwenwyndra i lefelau ychwanegol y tu hwnt i bwyntiau terfyn traddodiadol megis goroesiad, atgenhedlu neu ddatblygiad. Y dyddiau hyn, mae dull moleciwlaidd o werthuso gwenwyndra yn cael ei ddefnyddio'n aml, ac mae angen biomarcwyr tybiedig ychwanegol sy'n asesu modiwleiddio gwahanol brosesau cellog a mecanweithiau ffisiolegol24-26. Yn yr ystyr hwn, mae ychwanegu genynnau newydd at batri biofarcwyr yn ymestyn nifer y prosesau a astudir a'r lefelau ymateb, yn dibynnu ar y llwybr a ddadansoddwyd. Felly, mae'r disgrifiad o enynnau newydd yn gam tuag at ymestyn gwerth P. acuta mewn astudiaethau gwenwynegol. Yma rydym wedi disgrifio naw dilyniant newydd sy'n codio ar gyfer gwahanol dderbynyddion hormonau, ensym sy'n ymwneud â rheoleiddio crynodiad estrogens ac androgenau gweithredol (Hsd17b8), un protein straen, a thri phrotein sy'n ymwneud â thrwsio DNA. Gall y genynnau hyn wella'r dadansoddiad o wahanol brosesau sy'n ymwneud ag aflonyddwch endocrin, genowenwyndra, a datblygiad. At hynny, gall pob un ohonynt ein helpu i ddeall yr ymateb ar wahanol lefelau o'r sefydliad, o foleciwlaidd i ecolegol, gan ddarparu mewnwelediad i fecanweithiau'r gwenwynig ac ymatebion yr organebau i gynnal homeostasis yn wyneb amgylchedd sy'n newid. Ar y llaw arall, mae'r biomarcwyr tybiedig hyn yn agor ffyrdd newydd o asesu gwenwyndra cyn ei arsylwi ar lefel unigol, gan atal difrod anwrthdroadwy sy'n effeithio ar y boblogaeth. Felly, fel mewn ymarfer clinigol, mae angen offer newydd i nodi digwyddiadau moleciwlaidd yn well a chael diagnosis cynharach a fydd yn helpu i ganfod llygredd cyn iddo achosi effeithiau niweidiol anwrthdroadwy ar ecosystemau.

Ffigur 3. Gweithgaredd trawsgrifio genynnau sy'n gysylltiedig ag atgyweirio DNA. Lefelau mRNA poly(ADP-Ribose) polymerase I (PARP1), atalydd NFKB Iκ (IkBa), atgyweirio pelydr-X yn croes-ategu 3 (XRCC3), RAD21 Cydran Cymhleth Cohesin (RAD21), a RAD50 Protein Trwsio Toriad Llinyn Dwbl (RAD50) mewn oedolion acíwt Physella ar ôl dod i gysylltiad mewn vivo â Fenoxycarb am saith diwrnod ar 19 gradd. Defnyddiwyd RT-PCR i feintioli'r lefelau mRNA a phrotein ribosomaidd L10 (rpL10), actin (Act), 6-ffosffoffrwcto-2-kinase/ffrwctos- 2,6-biphosphatase 2 (PFKFB2), a glyseraldehyde-3-ffosffad dehydrogenase (GAPDH) yn cael eu defnyddio fel genynnau cyfeirio. Perfformiwyd y gymhariaeth â'r rheolyddion sy'n agored i doddydd. Dangosir blychau whisger. Mae pob blwch yn cyfateb i 12 unigolyn. Mae'r canolrif wedi'i nodi gan y llinell lorweddol o fewn y blwch, ac mae'r 25ain a'r 75ain canradd wedi'u nodi gan ffiniau'r blwch. Cynrychiolir y canlyniadau uchaf ac isaf gan y wisgers. Mae'r triongl bach y tu mewn i'r blwch yn dynodi'r cymedr, a dangosir yr allgleifion (cylchoedd). Ni welwyd unrhyw wahaniaethau arwyddocaol mewn perthynas â’r rheolaeth (t<0.05).

Am gyfnod hir, mae chwilio am blaladdwyr sydd ag effaith isel neu ddim effaith o gwbl ar rywogaethau nad ydynt yn darged wedi bod yn nod amaethyddol allweddol. Mae analogau o'r hormon ifanc wedi bod yn un plaladdwr o'r fath gan eu bod yn dynwared un hormon penodol o arthropodau, gan leihau'r risg i rywogaethau eraill yn sylweddol. Mae'n hysbys bod Fenoxycarb yn effeithio ar ddatblygiad a phrosesau celloedd gwahanol mewn pryfed, arachnidau, a chramenogion8,13,18. Fodd bynnag, mae'r wybodaeth wael bresennol am ffisioleg infertebratau yn golygu bod angen eu profi mewn rhywogaethau nad ydynt yn darged i sicrhau eu heffaith isel. Yr elfen gyntaf i'w hystyried yw'r ffaith bod yr ymateb yn cael ei arsylwi ar 1 ug/L o Fenoxycarb, sef y crynodiad canolradd a ddefnyddir. Mae’n isel iawn o’i gymharu â’r rhai sy’n cael effaith ar bryfed a chramenogion3,20,28. Gallai'r diffyg ymateb mewn crynodiadau uwch fod oherwydd ymateb cynharach, gan adfer y cyflwr arferol hyd at amser y dadansoddiad trwy weithredu mecanweithiau dadwenwyno. Yn y crynodiad is, gallai'r diffyg ymateb a arsylwyd fod oherwydd bod maint y gwenwynig yn is na'r crynodiad trothwy sydd ei angen i ysgogi effaith. Posibilrwydd arall posibl yw bod angen mwy o amser i gyrraedd y crynodiad trothwy. Yn olaf, ni ellir ei ddileu ychwaith ymateb siâp U tybiedig. Byddai ymchwil ychwanegol sy'n defnyddio amseroedd ymateb gwahanol yn caniatáu eglurhad o'r prosesau cellog yr effeithir arnynt a'r canlyniadau sy'n dibynnu ar ganolbwyntio.

Ffigur 4. Gweithgaredd trawsgrifio genynnau sy'n gysylltiedig â'r system nerfol (acetylcholinesterase [AChE]), straen ocsideiddiol (catalase [Cat], superoxide dismutase copr-sinc [SOD CuZn], a manganîs superoxide dismutase [SOD Mn]), ac apoptosis ( caspase 3 [Casp3] a ffactor sy'n achosi apoptosis 3 [AIF3]). Amlygwyd malwod i Fenoxycarb am saith diwrnod ar 19 gradd. Perfformiwyd meintioli gan RT-PCR gan ddefnyddio protein ribosomaidd L10 (rpL10), actin (Act), 6-phosphofructo-2-kinase/ffrwctos-2,6-biphosphatase 2 (PFKFB2) , a glyseraldehyde-3- ffosffad dehydrogenase (GAPDH) fel genynnau cyfeirio. Perfformiwyd y gymhariaeth â'r rheolyddion sy'n agored i doddydd. Dangosir blychau whisger. Mae pob blwch yn cyfateb i 12 unigolyn. Mae'r canolrif wedi'i nodi gan y llinell lorweddol o fewn y blwch, ac mae'r 25ain a'r 75ain canradd wedi'u nodi gan ffiniau'r blwch. Cynrychiolir y canlyniadau uchaf ac isaf gan y wisgers. Mae'r triongl bach y tu mewn i'r blwch yn dynodi'r cymedr, a dangosir yr allgleifion (cylchoedd). Nodir gwahaniaeth sylweddol mewn perthynas â'r rheolydd (seren) (t<0.05).

Yn y gwaith hwn, rydym wedi profi'r ymateb ar lefel mynegiant genynnau'r analog o hormon ifanc, Fenoxycarb, ac wedi arsylwi ymateb sydd, er ei fod yn wan, yn gofyn am astudiaethau ychwanegol i sicrhau diffyg gwenwyndra mewn rhai nad ydynt yn arthropodau. Yn ôl y disgwyl, ni welwyd unrhyw effaith mewn genynnau yn ymwneud â mecanweithiau atgyweirio DNA na'r ymateb straen. Nid oes unrhyw ddata yn y llenyddiaeth ar astudiaethau o'r genynnau hyn, hyd yn oed mewn pryfed. Mae sefyllfa debyg yn digwydd gyda metaboledd ynni, er bod rhai adroddiadau am effaith fenoxycarb mewn lipidau a charbohydradau cramenogion3,4,29. Hyd y gwyddom, nid oes adroddiad blaenorol yn dadansoddi ymateb mecanweithiau dadwenwyno ym mhresenoldeb Fenoxycarb. Yn P. acuta nid oes unrhyw newid yn y genynnau a ddadansoddwyd sy'n ymwneud â cham I, cam II, a cham III dadwenwyno, sy'n awgrymu bod proteinau eraill sy'n wahanol i'r rhai a ddadansoddwyd yma yn gyfrifol am fiodrawsnewid y cemegyn hwn. Mewn cyferbyniad â'n canlyniadau, heb unrhyw newidiadau mewn genynnau sy'n gysylltiedig â rheoleiddio epigenetig, disgrifiwyd y gall amlygiad am dri diwrnod ar 50 µg/L o Fenoxycarb ddadreoleiddio deacetylase histone yn y fea dŵr Moina macrocopa4. Gallai hyn adlewyrchu sensitifrwydd gwahaniaethol i'r cyfansoddyn ond hefyd y ffaith bod y newidiadau epigenetig yn y ffi dŵr yn gysylltiedig â dynwared effeithiau hormonau ifanc.

Ffigur 5. Gweithgaredd trawsgrifio straen (protein sioc gwres bach 16.6 [sHSP16.6], protein sioc gwres bach 17.9 [sHSP17.9], protein sioc gwres 60 [HSP60], sioc gwres cytras 70 4 [HSC70 (4) )], protein sioc gwres 70 B2-fel [HSP70B2], protein a reoleiddir gan glwcos 78/protein imiwnoglobwlin rhwymol [Grp78/BiP], a phrotein sioc gwres 83 [HSP83]) a ffactor hypocsia-anwythol{{23} } alffa [HIF1 ]) genynnau mewn malwod llawndwf. Am wythnos bu'r anifeiliaid yn agored i Fenoxycarb ar 19 gradd. Cafodd gweithgarwch trawsgrifio ei feintioli gan RT-PCR gan ddefnyddio protein ribosomaidd L10 (rpL10), actin (Act), 6-phosphofructo-2-kinase/ffrwctos-2,6-biphosphatase 2 (PFKFB2). ), a glyseraldehyde-3-ffosffad dehydrogenase (GAPDH) fel genynnau cyfeirio. Perfformiwyd cymhariaeth â'r rheolyddion sy'n agored i doddydd. Dangosir blychau whisger. Mae pob blwch yn cyfateb i 12 unigolyn. Dangosir canolrif te gan y llinell lorweddol o fewn y blwch, a nodir y 25ain a'r 75ain canradd gan ffiniau'r blwch. Cynrychiolir y canlyniadau uchaf ac isaf gan y wisgers. Mae'r triongl bach y tu mewn i'r blwch yn dynodi'r cymedr, a dangosir yr allgleifion (cylchoedd). Nodir gwahaniaeth sylweddol mewn perthynas â'r rheolydd (seren) (t<0.05).

Ffigur 6. Gweithgaredd trawsgrifio genynnau sy'n gysylltiedig â modiwleiddio epigenetig (DNA methylase I [DNMT1], Lysine Acetyltransferase 6B [KAT6B], a histone deacetylase 1 [Hda1]), imiwnedd (aplysia nin-A [ApA]), a metaboledd ynni ( glycogen phosphorylase L [PYGL] a phrotein rhwymo oxysterol tebyg i 8 [OSBPL8]) mewn oedolion acíwt Physella ar ôl dod i gysylltiad mewn vivo â Fenoxycarb am saith diwrnod ar 19 gradd. Cafodd gweithgarwch trawsgrifio ei feintioli gan RT-PCR gan ddefnyddio protein ribosomaidd L10 (rpL10), actin (Act), 6-phosphofructo-2-kinase/ffrwctos-2,{17}}biphosphatase 2 (PFKFB2). ), a glyseraldehyde-3-ffosffad dehydrogenase (GAPDH) fel genynnau cyfeirio. Perfformiwyd y gymhariaeth â'r rheolyddion sy'n agored i doddydd. Dangosir blychau whisger. Mae pob blwch yn cyfateb i 12 unigolyn. Mae'r canolrif wedi'i nodi gan y llinell lorweddol o fewn y blwch, ac mae'r 25ain a'r 75ain canradd wedi'u nodi gan ffiniau'r blwch. Cynrychiolir y canlyniadau uchaf ac isaf gan y wisgers. Mae'r triongl bach y tu mewn i'r blwch yn dynodi'r cymedr, a dangosir yr allgleifion (cylchoedd). Nodir gwahaniaeth sylweddol mewn perthynas â'r rheolyddion (seren) (t<0.05).

cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd

Cliciwch yma i weld cynhyrchion Gwella Imiwnedd Cistanche

【Gofyn am fwy】 E-bost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Mae'r effaith ar yr AChE yn awgrymu rhywfaint o effaith ar y system nerfol. Fel y nodwyd yn y cyflwyniad, sylwyd ar atal gweithgaredd acetylcholinesterase ymennydd llygod mawr a derbynyddion nicotinig17, sy'n awgrymu y gall Fenoxycarb gael effeithiau nerfol ar organebau nad ydynt yn darged. Dangosodd astudiaethau mewn derbynyddion nicotinig nad oedd mecanwaith Fenoxycarb yn gystadleuol30. Er bod Fenoxycarb wedi'i ddefnyddio fel analog o hormon ifanc, mae'n ymddangos ei fod hefyd yn cael rhywfaint o effaith fel gweddill y carbamadau trwy effeithio ar y system nerfol. Mae'r ymateb a welwyd yn P. acuta yn cefnogi effaith nerfol ac yn awgrymu y gallai effeithio ar allu'r falwen i oroesi trwy newid y system nerfol ganolog. Gallai'r cynnydd a welwyd yn y trawsgrifiad fod yn adlewyrchu ymgais i wneud iawn am ataliad gweithgaredd ensymau. Byddai astudiaethau ychwanegol yn helpu i egluro'r effaith dybiannol ar ymddygiad y falwen neu ei gallu i ymateb i sefyllfaoedd sy'n ymwneud â'r system nerfol. Beth bynnag, mae'n ffaith ystyried yr effaith y gall Fenoxycarb ei chael ar rywogaethau nad ydynt yn darged yn y tymor canolig a'r hirdymor. Ar y llaw arall, mae modiwleiddio sHSP17.9 yn awgrymu rhai effeithiau, ond mae pennu'r effaith wirioneddol ar y gell yn fater cymhleth. Mae proteinau sioc gwres bach yn broteinau amrywiol sy'n ymwneud â'r ymateb straen ac sy'n gysylltiedig â phrosesau cellog lluosog, gan gynnwys swyddogaethau niwral. Yn yr ystyr hwn, mae'n demtasiwn dyfalu y gallai sHSP17.9 amgodio rhywfaint o sHSP sy'n ymwneud â ffisioleg niwral ond mae'r anawsterau i sefydlu'r homoleg yn galw am ofal. Bydd ymchwil ychwanegol yn rhoi mwy o wybodaeth a gallai helpu i ddiffinio rôl y protein hwn yn y gell. Fel biofarcwyr, mae'r ffaith bod sHSPs yn rhannu'r parth alffa-grisialog yn ei gwneud hi'n hawdd eu hadnabod. Fodd bynnag, mae eu hamrywiaeth uchel yn y rhanbarthau terfynell N- a C yn cymhlethu'r broses o adnabod homologau rhwng rhywogaethau.

Manteision cistanche tubulosa- cryfhau'r system imiwnedd

O ganlyniad, mae angen astudiaeth ddyfnach o'r teulu protein hwn i bennu eu rolau ym metabolaeth celloedd ac i sefydlu homologau swyddogaethol rhyngddynt. Mewn unrhyw achos, mae'r newid a welwyd yn awgrymu bod Fenoxycarb yn cael rhywfaint o effaith yn y tymor canolig yn P. acuta, gan godi'r posibilrwydd ei fod yn achosi rhywfaint o ostyngiad yn lles y falwen. Mae aplysianin-A yn brotein sy'n ymwneud â'r ymateb imiwn trwy weithredu fel gwrthfacterol. Mae'r glycoprotein gwrthfacterol hwn yn atal bacteria gram-bositif a gram-negyddol yn Alysia kurodai32. Gall y newid mewn gweithgaredd trawsgrifio gynhyrchu modiwleiddiad o'r ymateb i heintiau bacteriol, gan wneud P. acuta yn fwy sensitif iddynt. Gallai gormodedd yn yr ymateb neu mewn eiliad annigonol effeithio ar allu'r organeb i ymateb, gan ddewis y bacteria hynny nad ydynt yn sensitif i ApA, gan wneud yr anifail yn fwy sensitif i haint. Mae'r effaith a welwyd yn P. acuta yn awgrymu newid tybiedig mewn imiwnedd, sef y tro cyntaf i'r posibilrwydd hwn gael ei awgrymu ar gyfer Fenoxycarb. Mae angen astudiaethau ychwanegol sy'n cynnwys mwy o enynnau sy'n gysylltiedig ag imiwn i'w gadarnhau a phennu'r effaith ar oroesiad hirdymor y boblogaeth. Mae'r dystiolaeth bresennol yn awgrymu effaith isel ar yr amgylchedd o Fenoxycarb. Fodd bynnag, mae angen dadansoddiad estynedig o'r canlyniadau a welwyd yn y rhywogaeth nad yw'n darged P. acuta oherwydd gall y datguddiad adlewyrchu effaith hirdymor. Er bod y data ar y lefel foleciwlaidd yn awgrymu effaith wan yn y tymor byr, bydd dadansoddiadau ychwanegol sy'n profi paramedrau eraill yn darparu tystiolaeth ychwanegol. Er mwyn sicrhau bod y Fenoxycarb yn ddiniwed, dylid ei ddadansoddi mewn sawl rhywogaeth nad yw'n darged sy'n cwmpasu gwahanol grwpiau o infertebratau a phrofi effeithiau tymor byr a hirdymor ar lefelau moleciwlaidd, cellog ac organeb.

cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd

Cyfeiriadau

1. Sullivan, JJ Cemeg a thynged amgylcheddol fenoxycarb. Amgylchfyd y Parch. Contam. Gwenwynig. 202, 155–184 (2010).

2. Dhadialla, TS, Carlson, GR & Le, DP Pryfleiddiaid newydd gyda gweithgaredd hormonau ecdysteroidal ac ieuenctid. Annu. Entomol y Parch. 43, 545–569 (1998).

3. Hu, XL et al. Effeithiau dau bryfleiddiad analog hormon ifanc, fenoxycarb a methoprene, ar Neocaridina davidi. Amgylch. Llygredd. 253, 89–99 (2019).

4. Hu, XL, Tang, YY, Kwok, ML, Chan, KM & Chu, KH Effaith pryfleiddiaid analog hormon ifanc ar y ffe dŵr Moina macrocopa: Twf, atgenhedlu ac effaith traws-genhedlaeth. Acwat. Gwenwynig. 220, 105402 (2020).

5. Yang, Z. et al. Rheoleiddio analogau hormon ifanc ac ecdysteroid ar ddatblygiad y pry cop rheibus, Pardosa pseudoannulata, a'i fecanweithiau rheoleiddio. Ecotocsol. Amgylch. Saf. 242, 113847 (2022).

6. Ayisha Banu, C. & Manogem, EM Effeithiau gwrth-amlhau ac apoptosis o analog hormonau ifanc, fenoxycarb yn y llinell Sf21cell. Pla. Biocemeg. Physiol. 187, 105182 (2022).

7. Arambourou, H. et al. Defnyddio embryo Gammarus fossarum (Amphipoda) ar gyfer profi gwenwyndra: Astudiaeth achos gyda chadmiwm. Amgylch. Gwenwynig. Cemeg. https://doi.org/10.1002/etc.3779 (2017).

8. Navis, S., Waterkeyn, A., De Meester, L. & Brendonck, L. Effeithiau acíwt a chronig dod i gysylltiad â'r fenoxycarb analog hormon ifanc yn ystod atgenhedlu rhywiol yn Daphnia magna. Ecotocsicoleg 27, 627–634 (2018).

9. Jindra, M. & Bittova, L. Te derbynnydd hormon ifanc fel targed o juvenoid 'rheoleiddwyr twf pryfed'. Arch. Biocemeg Pryfed. Physiol. 103, e21615 (2020).

10. Schaefer, CH, Wilder, WH, Mulligan, FS & Dupras, EF Effeithiolrwydd fenoxycarb yn erbyn mosgitos (Diptera: Culicidae) a'i ddyfalbarhad yn y labordy a'r maes. J. Econ. Entomol. 80, 126–130 (1987).

11. Hosmer, AJ, Warren, LW & Ward, TJ Gwenwyndra cronig ffenoxycarb dos curiad i Daphnia magna yn agored i grynodiadau amgylcheddol realistig. Amgylch. Gwenwynig. Cemeg. 17, 1860–1866 (1998).

12. Tomas, K. et al. Dull syml o asesu datguddiad daearol gofodol o’r ffenoxycarb pryfleiddiad, yn seiliedig ar ddadansoddiad tirwedd cydraniad uchel. Pla. Manag. Sci. 72, 2099–2109 (2016).

13. Jungmann, D. et al. Gwenwyndra cronig fenoxycarb i'r gwybedyn Chironomus riparius ar ôl dod i gysylltiad â gwaddodion o wahanol gyfansoddiadau. J. Gwaddodion Pridd 9, 94–102 (2009).

14. Awdurdod, EFS Casgliad ar yr adolygiad cymheiriaid o'r asesiad risg o blaladdwyr o'r sylwedd gweithredol fenoxycarb. EFSA J. 8, 1779 (2010).

15. Barr, AC et al. Effeithiau atgenhedlu fenoxycarb ar ddefaid. J. milfeddyg. Diagn. Buddsoddi. 9, 401–406 (1997).

16. Schmuck, G. & Mihail, F. Effeithiau'r carbamadau fenoxycarb, propamocarb a propoxur ar gyflenwad egni, defnydd glwcos a grwpiau SH mewn niwronau. Arch. Gwenwynig. 78, 330–337 (2004).

17. Smulders, CJGM, Bueters, TJH, Van Kleef, RGDM a Vijverberg, HPM Effeithiau dethol plaladdwyr carbamad ar dderbynyddion acetylcholin nicotinig niwronaidd llygod mawr ac acetylcholinesterase ymennydd llygod mawr. Gwenwynig. Appl. Ffarmacol. 193, 139–146 (2003).

18. Lee, Y.-S. et al. Ailystyried diogelwch fenoxycarb (IGR) yn amgylchedd y pridd: Gwenwyndra fenoxycarb i Yuukianura szeptyckii(Collembola). J. Asia-Pac. Entomol. 23, 214–218 (2020).

19. Campiche, S., Becker-van Slooten, K., Ridreau, C. & Tarradellas, J. Effeithiau rheolyddion twf pryfed ar yr arthropod pridd nontarget Folsomia candida (Collembola). Ecotocsol. Amgylch. Saf. 63, 216–225 (2006).

20. Cripe, GM, McKenney, CL, Hoglund, MD & Harris, PS Effeithiau datguddiad fenoxycarb ar ddatblygiad larfa cyflawn y cranc xanthid, Rhithropanopeus harrisii. Amgylch. Llygredd. 125, 295–299 (2003).

21. Sánchez-Argüello, P., Fernández, C. & Tarazona, JV Asesu effeithiau ffycosetin ar Physa acuta (Gastropoda, Pulmonata) a Chironomus riparius (Insecta, Diptera) gan ddefnyddio prawf gwaddod dŵr dau rywogaeth. Sci. Cyfanswm yr Amgylchedd. 407, 1937–1946 (2009).

22. Sánchez-Argüello, P., Aparicio, N. & Fernández, C. Cysylltu gwenwyndra embryo ag ymatebion genotocsig yn y falwen ddŵr croyw Physa acuta: Un amlygiad i benso(a)pyren, fflwcsetin, bisffenol A, vinclozolin ac amlygiad i ddeuaidd cymysgeddau gyda benso(a) pyren. Ecotocsol. Amgylch. Saf. 80, 152–160 (2012).

23. Prieto-Amador, M.A., Caballero, P. & Martínez-Guitarte, J.-L. Dadansoddiad o effaith tri ffthalat ar y gastropod dŵr croyw Physella acuta ar y lefel drawsgrifiadol. Sci. Sylw 11, 11411 (2021).

24. Lee, JW, Won, E.-J., Raisuddin, S. & Lee, J.-S. Arwyddocâd llwybrau canlyniadau andwyol mewn asesiad risg amgylcheddol ar sail biofarcwr mewn organebau dyfrol. J. Amgylch. Sci. 35, 115–127 (2015).

25. Martins, C., Dreij, K. & Costa, PM Te o'r radd flaenaf ym maes tocsigenomeg amgylcheddol: Heriau a safbwyntiau dulliau 'omics' wedi'u cyfeirio at gymysgeddau gwenwynig. Int. J. Amgylch. Res. Iechyd y Cyhoedd 16, E4718 (2019).

26. Steiblen, G., van Benthem, J. & Johnson, G. Strategaethau mewn genotocsicoleg: Derbyn dulliau gwyddonol arloesol mewn cyd-destun rheoleiddiol ac o safbwynt diwydiannol. Mutat. Res. Genet. Gwenwynig. Amgylch. Mutagen 853, 503171 (2020).

27. Wilson, TG Te safle gweithredu moleciwlaidd hormon ifanc a phryfleiddiaid hormonau ifanc yn ystod metamorffosis: Sut mae'r cyfansoddion hyn yn lladd pryfed. J. Pryfed. Physiol. 50, 111–121 (2004).

28. Mahmoudvand, M. & Moharramipour, S. Effeithiau sublethal ffenigrig ar y Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae). J. Pryfed. Sci. 15, 82 (2015).

29. Arambourou, H. et al. Fe wnaeth amlygiad fenoxycarb amharu ar lwyddiant atgenhedlu'r deupod Gammarus fossarum gydag effeithiau cyfyngedig ar y proffil lipid. PLoS ONE 13, e0196461 (2018).

30. Smulders, CJGM, Van Kleef, RGDM, de Groot, A., Gotti, C. & Vijverberg, HPM Mecanwaith anghystadleuol, dilyniannol ar gyfer atal llygod mawr alpha4beta2 derbynyddion nicotinig niwronaidd acetylcholine gan blaladdwyr carbamate. Gwenwynig. Sci. 82, 219–227 (2004).

31. de Los Reyes, T. & Casas-Tintó, S. Swyddogaethau nerfol proteinau sioc gwres bach. Regen Niwral. Res. 17, 512–515 (2022).

32. Kamiya, H., Muramoto, K. & Yamazaki, M. Aplysianin-A, glycoprotein gwrthfacterol ac antineoplastig yn chwarren albwmen ysgyfarnog, Aplysia Kuroda. Experientia 42, 1065–1067 (1986).

33. Aquilino, M., Sánchez-Argüello, P., Novo, M. & Martínez-Guitarte, J.-L. Effeithiau ar fynegiant genynnau malwen penbwl ar ôl dod i gysylltiad â vinclozolin. Ecotocsol. Amgylch. Saf. 170, 568–577 (2019).

34. Romiguier, J. et al. Mae genomeg poblogaeth gymharol mewn anifeiliaid yn datgelu penderfynyddion amrywiaeth genetig. Natur 515, 261–263 (2014).

35. Chwi, J. et al. Primer-BLAST: Offeryn i ddylunio paent preimio targed-benodol ar gyfer adwaith cadwyn polymeras. BMC Biowybodeg 13, 134 https://doi.org/10.1186/1471-2105-13-134 (2012).

36. Pfaf, MW Model mathemategol newydd ar gyfer meintioli cymharol mewn RT-PCR amser real. Asidau Niwcleig Res. 29, e45 (2001).