Mae Cymeriant Halen Uchel yn Lleihau Lefelau Cytocinau Llidiol Meinwe Arennol mewn Llygod

edmund.chen@wecistanche.com

Haniaethol

Mae cymeriant halen uchel (HS) fel arfer yn cael ei ystyried yn ffactor gwaethygu i achosi llidanaf arennol. Fodd bynnag, mae'r newidiadau yn yarennolnid yw lefelau cytocinau llidiol yn ystod cymeriant HS wedi'u diffinio'n glir eto. Rydym yn damcaniaethu bod HS yn cynydduarennollefelau tiwmor necrosis ffactor-alffa (TNF- ) a interleukin-6 (IL-6) ond yn gostwng interleukin-10 (IL-10; cytocin gwrthlidiol) a mae'r ymatebion hyn yn gwaethygu mewn DIM amodau diffygiol. Rhoddwyd halen normal (NS; 0.3 y cant NaCl) a HS i lygod gwyllt-math (WT) ac endothelaidd NO synthase (eNOSKO) llygod (~8 wythnos oed, n {{10}} ym mhob grŵp). (4 y cant NaCl) yn cynnwys dietau am 2 wythnos. Pennwyd pwysedd gwaed systolig (SBP) gan blethysmograffi cyffion cynffon a gwnaed casgliadau wrin gan ddefnyddio cewyll metabolig. Roedd SBP gwaelodol yn uwch yn eNOSKO na llygod WT (131 ± 7 vs 117 ± 3 mmHg; p < .05).="" cynyddodd="" cymeriant="" hs="" am="" 2="" wythnos="" sbp="" yn="" enosko="" (161="" ±="" 5="" mmhg)="" ond="" nid="" mewn="" llygod="" wt.="" mewn="" grwpiau="" ns,="" mae'r="" lefelau="" cytocin="">arennolroedd meinweoedd (a fesurwyd gan ddefnyddio citiau ELISA a'u mynegi mewn protein pg/mg) yn sylweddol uwch mewn eNOSKO na llygod WT (TNF- , 624 ± 67 vs. 325 ± 73; IL-6, 619 ± 106 vs. 166 ± 61 ;IL-10, 6,087±567 vs. 3,929±378). Yn ddiddorol, roedd y lefelau cytocinau hyn mewn grwpiau HS yn sylweddol is yn WT (TNF- , 114 ± 17; IL-6, 81 ± 14; IL-10, 865 ± 130) ac eNOSKO (TNF- , 115 ± 18; IL-6, 56 ± 7; IL-10, 882 ± 141) llygod. Mae'r canfyddiadau hyn yn dangos bod HS yn achosi is-reoleiddio cytocinau yn yaren.Byddai gostyngiad o'r fath mewn cytocinau a achosir gan HS, yn enwedig TNF- (asiant natriwretig), yn hwyluso mwy o gadw halen, ac felly, yn arwain at orbwysedd sy'n sensitif i halen mewn DIM amodau diffygiol.

Geiriau allweddol:synthase nitrig ocsid endothelaidd, cymeriant halen uchel, IL-10, IL-6, ocsid nitrig, TNF- , Arennau, Arennol

BYDD CISTANCHE YN GWELLA METHIANT YR AREN/ARENAU

RHAGARWEINIAD

Yn gyffredinol, canfyddir bod diet â llawer o halen (HS) yn gysylltiedig â llawer o anhwylderau cardiofasgwlaidd a metabolaidd megis pwysedd gwaed uchel a gwaethygu llid. Nid yw tystiolaeth yn llai i awgrymu bod diet HS yn gysylltiedig â biomarcwyr llid uwch. Mae llawer o astudiaethau diweddar hefyd wedi cyfrannu at y ffaith bod gorbwysedd yn gyflwr clefyd llidiol cronig gydag anghydbwysedd rhwng cytocinau pro-llidiol a gwrthlidiol. Mae anghydbwysedd o'r fath yn cael ei achosi gan ddadreoleiddio'r system renin-angiotensin (RAS) a straen ocsideiddiol, sy'n gysylltiedig â mwy o halen dietegol a heneiddio (Das, 2006; Guzik et al., 2007; Mattson, 2014; Rodriguez-Iturbe et al. , 2004). Nid yn unig fel ysgogydd straen ocsideiddiol, ond gwyddys hefyd fod angiotensin II (AngII) yn achosi mwy o gynhyrchu cytocinau llidiol fel ffactor-alffa necrosis tiwmor (TNF-) ac interleukin (IL-6) (Funakoshi et al ., 1999; Han et al., 1999; Ruiz-Ortega et al., 2002; Sanz-Rosa et al., 2005). Mewn rhagbrofion gyda modelau cnofilod, nid yw cymeriant cronig y diet HS yn newid pwysedd gwaed systemig (BP) (Kopkanet al., 2010; Lara et al., 2012). Fodd bynnag, roedd diet HS yn cael ei fwydo i lygod a gafodd ei drin yn gronig ag AngII neu atalydd NOS synthase, nitro-L-arginine-methyl ester (L-NAME) neu mewn llygod endothelaidd NOS knockout (eNOSKO) yn gorliwio'r ymateb gorbwysedd, aarennolanaf meinwe llidiol (Francois et al., 2008; Kopkan et al., 2010; Kopkan & Majid, 2005; Nakamura et al., 2011; Singh et al., 2013, 2017). Dangoswyd bod cymeriant HS mewn llygod eNOSKO yn ychwanegu at orbwysedd aanaf arennolsy'n gysylltiedig â mwy o straen ocsideiddiol a chynhyrchu AngII (Nakamura et al., 2011). Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod diet HS yn dylanwadu ar gynhyrchu cytocinau llidiol yng nghyflwr straen ocsideiddiol cynyddol neu mewn gweithgaredd RAS uwch. Rydym wedi adrodd yn flaenorol bod ataliad llym ar NOS trwy drwythiad systemig o L-NAME mewn llygod wedi cynyddu'r plasma aarennollefel TNF- (Shahid et al., 2010; Singh et al., 2014), gyda mwy o ymdreiddiad macroffagau yn yaren(Islam et al., 2011). Ataliad NOS systemig o'r fath gan drwythiad L-NAME acíwt mewn llygod lefel y cytocin gwrthlidiol, interleukin-10 (IL-10) yn y plasma aarennolmeinwe (Singh et al., 2014). Fodd bynnag, nid yw'r newidiadau yn y lefelau cytocin llidiol mewn ymateb i gymeriant HS cronig mewn amodau arferol a chyflwr diffyg NO cronig wedi'u pennu'n glir eto.

Rydym yn damcaniaethu bod cymeriant HS yn cynydduarennollefelau pro-llidiol ac yn lleihau cytocinau gwrthlidiol, ac mae'r ymatebion hyn yn gwaethygu yn y cyflwr DIM diffyg. I archwilio'r ddamcaniaeth hon, ein nod oedd asesu'r newidiadau yn statws cytocinau llidiol, yn enwedig yn yarenyn ystod cymeriant diet HS, ac i benderfynu sut mae'r cytocinau hyn yn cael eu heffeithio gan ddiffyg NO cronig. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom fesur yarennolyn ogystal â lefelau plasma o cytocinau llidiol pro(IL{{{{{}}}} a TNF- ) a gwrth-(IL-10) mewn llygod math gwyllt (WT) ac eNOSKO a gafodd eu bwydo'n normal- halen (NS; 0.3 y cant NaCl) a HS (4 y cant ) yn cynnwys dietau am 2 wythnos.

BYDD CISTANCHE YN GWELLA HEINTIAD YR AREN/ARENAU

2. DEUNYDDIAU A DULLIAU

Perfformiwyd yr arbrofion yn unol â'r canllawiau a'r arferion a sefydlwyd gan Bwyllgor Gofal a Defnydd Anifeiliaid Prifysgol Tulane. Llygod eNOSKO gwrywaidd (B6.129P2-Nos3tm1Unc/J; rhif stoc: 002684) llygod a'u straen cefndir genetig o WT (C57BL/6J; rhif stoc: 002684) llygod (Jackson Laboratory, Bar Defnyddiwyd Harbwr, ME) a ​​ystyriwyd fel rheolaeth yn yr astudiaeth hon. Roedd y llygod hyn yn cael eu cadw mewn ystafell a reolir gan dymheredd a golau ac yn caniatáu mynediad am ddim i ddiet safonol (Ralston-Purina, St. Louis, MO) a dŵr tap. Y llygod 8-9 wythnos oed; ∼20-22 g pwysau corff) wedi'u rhannu ar hap yn wahanol grwpiau yn dibynnu ar faint o ddeiet NS (diet safonol sy'n cynnwys 0.3 y cant NaCl) a diet HS (HS, 4 y cant NaCl; Harlan-Teklad, Madison, WI), yn y drefn honno , yn cynnwys chwe anifail ym mhob grŵp. Mae'r grwpiau fel a ganlyn: 1. WT-NS: Roedd llygod math gwyllt yn bwydo'r diet NS, 2. WT-HS: Roedd llygod math gwyllt yn bwydo'r diet HS 3. eNOSKO-NS: roedd llygod eNOSKO yn bwydo'r diet NS, 4. eNOSKO-HS: Roedd llygod eNOSKO yn bwydo'r diet HS

2.1 Monitro pwysedd gwaed mewn llygod ymwybodol

Mesurwyd y BP systolig (SBP) yn y llygod arbrofol gan ddefnyddio'r dechneg plethysmograffeg cyffion anfewnwthiol (Visitech Systems, Apex, NC). Cafodd y llygod eu monitro am 7-10 diwrnod ar ddeiet labordy safonol, a chofnodwyd BP gwaelodol cyn cael ei newid i ddeiet â llawer o halen (dim ond ar gyfer llygod WT-HS ac eNOSKO-HS) am weddill y yr astudiaeth. Yn y grwpiau hyn o lygod, mesurwyd BP ar yr un adeg o'r dydd (11 am i 1 pm) er mwyn osgoi dylanwad y cylch circadian, a chafwyd gwerth SBP trwy amcangyfrif darlleniad cyfartalog 10 mesuriad ar gyfer un. treial. Hyfforddwyd y llygod ar gyfer mesuriadau BP cyffion cynffon 7-10 diwrnod cyn dechrau'r arbrofion. Ar ôl 2-3 diwrnod o ymgynefino â'r ddyfais cynffon, mesurwyd y SBP gwaelodol yn yr holl lygod ar ddiet labordy safonol cyn dechrau diet HS a'i ystyried fel gwerth Diwrnod 0. Yna, newidiwyd anifeiliaid grŵp HS i ddeiet HS am weddill yr astudiaeth (yn dilyn hynny mesurwyd SBP ar ddiwrnodau 3, 6, 9, a 12 o ddeietau NS/HS) ar gylchred golau-tywyll 12:12 awr a'i dderbyn. bwyd a dŵr ad libitum drwy gydol yr astudiaeth.

2.2 Trin anifeiliaid

Ar ôl cofnodi SBP gorffwys, cafodd llygod eu bwydo â diet NS ({{0}}.3 y cant NaCl) neu HS (4 y cant NaCl) am 2 wythnos i werthuso'r ymatebion i HS yn unig yn WT a eNOSKO llygod. Roedd y ddau ddeiet hyn yn cynnwys crynodiadau tebyg o faetholion eraill (19 y cant o brotein, 5 y cant o fraster, 3 y cant o ffibr crai, 0.{8}} y cant Ca, 0.64 y cant P, { {13}}.72 y cant K, a 0.15 y cant Mg). Yn ystod y cyfnod arbrofol, caniatawyd i'r llygod yfed yn rhydd o'r poteli dŵr oedd ynghlwm wrth y cewyll. Mesurwyd cymeriant bwyd a dŵr, ynghyd â phwysau corff pob llygoden, yn ystod y cyfnod arbrofol.

2.3 Casglu a dadansoddi samplau wrin a gwaed

Casglwyd samplau wrin pedair awr ar hugain o lygod ymwybodol gan ddefnyddio cewyll metabolaidd ar ddiwrnod gwaelodol (Diwrnod 0) ac ar y diwrnod olaf (Diwrnod 13) i werthuso'r paramedrau ysgarthol gyda neu heb gymeriant HS yn y llygod hyn. Rhoddwyd yr holl grwpiau o lygod mewn cewyll metabolig ac wrin, a chasglwyd y paramedrau angenrheidiol ar yr un pryd. Câi anifeiliaid eu cadw'n unigol mewn cewyll metabolig, a chasglwyd wrin am 24 awr i mewn i diwbiau di-haint. Penderfynwyd ar gyfeintiau wrin o bob casgliad wrin, a chafodd samplau eu centrifugio (3,000 rpm/5 munud; 4 gradd) a'u cadw ar gyfer pennu ysgarthiad wrinol sodiwm a photasiwm. Aseswyd ysgarthiad wrinol o sodiwm a photasiwm gan ffotometreg fflam (Singh et al., 2013, 2017).

Ar ddiwedd y cyfnod arbrofol, cafodd yr holl anifeiliaid eu ewthaneiddio, a chasglwyd gwaed. Cafodd plasma ei wahanu oddi wrth y gwaed ar unwaith a'i storio ar −80ºC ar gyfer amcangyfrif cytocinau llidiol pro- (IL-6 & TNF- ) a gwrth- (IL-10) fel y cynhaliwyd yn gynharach (Singh et al., 2014,2017). Mae'rarennaueu dileu hefyd. Unarenyn sefydlog mewn 10 y cant o hydoddiant formalin a paraffin-gwreiddio ar gyfer gwerthuso'ranaf arennol. Y llallarenei brosesu i fesur lefelau cytocinau llidiol. A 100 mgarensy'n cynnwys rhanbarthau cortigol a medullary ei homogeneiddio mewn halwynog di-haint ffosffad-byffer yn cynnwys atalydd proteas ar 4 gradd . Mae'rarencafodd homogenadau eu centrifugio ar 9,000 g am 10 munud ar 4 gradd . Trosglwyddwyd y supernatants i diwbiau micro-centrifuge glân a'u storio ar −80 gradd nes eu dadansoddi.

2.4 Assay immunosorbent-gysylltiedig ag ensymau ar gyfer lefel IL-10, IL-6, a TNF

Lefelau IL-10, IL-6, a TNF- mewn plasma a supernatants oarenmesurwyd homogenadau meinwe gan ddefnyddio pecynnau Ready-SET-go ELISA (eBioscience, Inc., San Diego, CA). Mae lefelau canfod y citiau (ystod cromlin safonol) fel a ganlyn: IL-10 cit (Catalog rhif. 88-7105-88), 32–4000 pg/ml; IL-6 Kit (Catalog rhif. 88-7064-22), 4–500 pg/ml; TNF- Kit (Catalog rhif. 88-7324-86), 8–1000 pg/ml. Mae lefelau cytocinau mewnarennolcafodd meinwe eu normaleiddio gan grynodiad protein (wedi'i fesur trwy ddull assay protein sy'n gydnaws â glanedydd Bio-Rad) (Rhif Cat. # 500-0112; Bio-Rad, Hercules, CA)

2.5 Gwerthusiad o anaf i'r arennau

Mae'r formalin-sefydlog paraffin-gwreiddioarendefnyddiwyd adrannau ar gyfer dadansoddi glomerulosclerosis gan ddefnyddio staenio asid-Schiff cyfnodol (Lara et al., 2012; Luna, 1992; Singh et al., 2013, 2017) a ffibrosis tubulointerstitial gan ddefnyddio staenio trichrome Gomori (Gomoral et al., 1992; Gomoral, Singh 1; 2013, 2017).

BYDD CISTANCHE YN GWELLA POEN YN YR AREN/ARENIAD

2.6 Amcangyfrif glomerwlosclerosis

Gwerthuswyd graddau glomerwlosclerosis yn feintiol trwy ddadansoddi delweddau awtomatig o bob glomerwlws gan ddefnyddio staen cyfnodol-asid-Schiffarennoladrannau (Gwasanaeth Histoleg Torfol, Caerwrangon, MA) (Lara et al., 2012; Luna, 1992; Singh et al., 2013, 2017). Ugain llun o bob unarentynnwyd llun sleid gydag o leiaf un glomerwlws fesul cae gan ddefnyddio microsgop Nikon Eclipse 50i gyda Phen Camera Nikon DS (DS Fi1) ac uned rheoli camera DS (DSU2). Cydnabuwyd lliw porffor tywyll yn y glomerwlws fel sglerosis. Dadansoddwyd canran yr arwynebedd a gwmpesir gan sglerosis mewn glomerwli ym mhob maes gan ddefnyddio meddalwedd Nikon NIS-Elements (fersiwn 2.34). Cyfartaleddwyd canran y data a gafwyd ar gyfer pob un o'r 20 delwedd i gael canran arwynebedd sglerosis ar gyfer y sleid gyfan.

2.7 Amcangyfrif o ffibrosis tubulointerstitial

Gwerthuswyd maint yr ardal colagen-positif interstitial (ffibrosis) yn feintiol trwy ddadansoddiad awtomatig o ddelweddau'rarennoladran a feddiannir gan feinwe interstitial yn staenio'n bositif ar gyfer colagen yn adrannau lliw trichrome Gomori (Gomori, 1950; Singh et al., 2013, 2017). Paraffin-sefydlog wedi'i fewnosod â fformalinarennolcafodd rhannau eu staenio â staen plasmin (cromotrope 2R) a staen ffibr meinwe gyswllt (glas anilin) ​​wedi'u cyfuno mewn hydoddiant o asid ffosffotungstic yr oedd asid asetig rhewlifol wedi'i ychwanegu ato. Roedd hyn yn staenio'r colagen yn las, sy'n dynodi ffibrosis. Tynnwyd llun sleidiau fel y disgrifiwyd uchod. Dadansoddwyd canran yr arwynebedd a gwmpesir gan golagen ym mhob maes gan ddefnyddio meddalwedd Nikon NIS-Elements (fersiwn 2.34). Cyfartaleddwyd canran y data a gafwyd ar gyfer pob un o'r 20 delwedd i gael canran arwynebedd ffibrosis ar gyfer y sleid gyfan.

2.8 Dadansoddiad ystadegol

Mynegir yr holl ganlyniadau fel modd ± SE. Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol gan ddefnyddio meddalwedd stat Sigma (Meddalwedd Systat, diwrnodau o fewn cyfnod astudio 2 wythnos heb gasglu'r mater fecal a mesuriadau eraill o golli halen a dŵr ansensitif. Felly, asesiad cynhwysfawr mewn cydbwysedd sodiwm a dŵr yn ystod y cyfnod arbrofol cyfan nid yw'n bosibl o'r paramedrau hyn a gasglwyd o'r cewyll metabolig.

3.3 Lefelau cytocin llidiol

3.31 TNF-Mae Ffigur 2 yn dangos y plasma aarennollefelau meinwe o TNF- (Ffigur 2a a b) ar ddiwedd y cyfnod arbrofol. Roedd y crynodiad TNF yn y plasma heb ei ganfod mewn grwpiau cymeriant NS, llygod WT ac eNOSKO. Fodd bynnag, yn y grwpiau cymeriant HS o lygod, canfuwyd lefel TNF plasma gydag amrywiaeth uchel mewn llygod WT, 202 ± 146 pg/ml ac eNOSKO, 175 ± 68 pg/ml). Yn y grwpiau cymeriant NS, roedd lefel TNF mewn meinwe arennol yn uwch yn yr eNOSKO na llygod WT (624 ± 67 vs. 325 ± 73, pg/mg protein; p < .05).="" fodd="" bynnag,="" yn="" y="" grwpiau="" derbyn="">arennolmeinwe Roedd lefelau TNF- yn sylweddol is mewn llygod WT (114 ± 17 pg/mg) ac eNOSKO (115 ± 18 pg/mg protein) o gymharu â grwpiau cymeriant NS.

3.32 IL-6

Mae Ffigur 3 yn dangos y plasma aarennollefelau meinwe o IL-6 (Ffigur 3a a b). Yn y grwpiau cymeriant NS, crynodiad IL-6 yn y plasma (180 ± 44 vs. 13 ± 11 pg/ml; p < .05)="" ac="" yn="">aren(619 ± 106 vs. 166 ± 61 pg/mg protein; p < .05)="" yn="" enosko="" yn="" uwch="" na="" llygod="" wt.="" fodd="" bynnag,="" ni="" chanfuwyd="" lefel="" plasma="" il-6="" mewn="" grwpiau="" cymeriant="" hs="" mewn="" llygod="" wt="" ac="">Arennolroedd lefel meinwe IL-6 hefyd yn sylweddol is mewn grwpiau cymeriant HS mewn llygod eNOSKO (56 ± 7 pg/ mg protein) a WT (81 ± 14 pg/mg protein) o gymharu â'r grwpiau cymeriant NS.

3.33 IL-10

Mae Ffigur 4 yn dangos y plasma aarennollefelau meinwe o IL-10 (Ffigur 4a a b). Mewn grwpiau cymeriant NS, roedd lefel plasma IL-10 yn eNOSKO yn is na llygod WT (510 ± 125 vs. 701 ± 54 pg/ml; p < .05).="" fodd="" bynnag,="">arennolroedd lefel meinwe IL-10 yn uwch yn yr eNOSKO na llygod WT (6,087 ± 567 vs. 3,929 ± 378, pg/mg protein; p < .05).="" mewn="" grŵp="" cymeriant="" hs,="" plasma="">arennolroedd lefelau meinwe o IL{0}} yn sylweddol is yn eNOSKO (327 ± 67 pg/ml; 882 ± 141 pg/mg protein) a WT (344 ± 52 pg/ml; 865 ± 130 pg/ mg protein) llygod.

3.4 Paramedrau anafiadau arennol

3.4.1|Glomerulosclerosis

Mae delweddau cynrychioliadol y cyfnodol-asid-Schiff staenioarenrhoddir adrannau sy'n darparu graddau sglerosis glomerwlaidd yn Ffigur 5a a dangosir y ganran o'r ardaloedd sglerotig yn Ffigur 5b. Er i ni arsylwi glomeruli dan gontract a thrombosed yn yr eNOSKO a borthir gan NS ond nid llygod WT, nid oedd gwahaniaeth sylweddol yn yr ardal sclerotic canrannol rhwng llygod WT-NS ac eNOSKO-NS (11.4 ± 1 y cant a 11.2 ± 1 y cant). Fodd bynnag, roedd ardal sglerotic y cant yn is yn WT-HS o'i gymharu â llygod WT-NS (7.7 ± 1 y cant yn erbyn 11.4 ± 1 y cant; p < .05).="" i'r="" gwrthwyneb,="">

3.4.2 Ffibrosis tubulointerstitial

Mae'r delweddau cynrychioliadol o adrannau lliw trichrome Gomori yn darparu maint yarennolRhoddir ffibrosis interstitial yn Ffigur 6a, a dangosir canran yr ardaloedd ffibrotig yn Ffigur 6b. Yn gyffredinol, mae'r gwerthoedd ffibrotig yn yr interstitium arennol yn feintiol is yn y modelau llygod hyn. Mewn llygod WT, mae'r ardal ffibrotig yn yarennolroedd interstitium yn debyg mewn grwpiau derbyn NS ac HS. Serch hynny, yn ôl y disgwyl, roedd yr ardal ffibrotig yn sylweddol uwch yn eNOSKO-NS o'i gymharu â llygod WT-NS (2.2 ± 0.2 y cant yn erbyn 1.5 ± 0.2 y cant; p < .05)="" .="" fodd="" bynnag,="" mae'r="" ardal="" ffibrotig="" yn="">arennolroedd interstitium yn is mewn eNOSKO- HS na llygod eNOSKO-NS (1.8 ± 0.1 y cant yn erbyn 2.2 ± 0.2 y cant ;p < .05).

4 TRAFODAETH

Er bod diffyg NO cronig yn arwain at welliant mewn cytocinau llidiol, mae canlyniadau'r astudiaeth bresennol yn dangos bod cymeriant HS mewn llygod, o leiaf am bythefnos, yn gyffredinol yn atal lefelau cytocinau pro- a gwrthlidiol, yn enwedig yn yaren. Roedd lefel plasma gwaelodol TNF- yn bennaf heb ei ganfod mewn llygod WT ac eNOSKO a oedd yn cael eu bwydo â dietau NS. Fodd bynnag, nodwyd lefel sylweddol o'r cytocin hwn yn y ddau straen yn bwydo diet HS am gyfnod o 2 wythnos. Felly, mae'n dangos bod cymeriant HS yn ysgogi cynhyrchu systemig TNF-, fel y nodir mewn astudiaethau eraill (Costa et al., 2012; Liu et al., 2012; Yilmaz et al., 2012; Zhu et al., 2014). Fodd bynnag, mae'n ddiddorol nodi bod yarennolmae lefelau TNF- yn sylweddol is yn y grwpiau mewn-gymeriad HS o lygod WT ac eNOSKO o gymharu â'r rhai yn y grwpiau derbyn NS. Nodwyd gostyngiad o'r fath a achosir gan HS hefyd mewn cytocinau eraill megis IL-6 ac IL-10 yn yaren.Er bod yarennolroedd lefelau IL-6 ac IL-10 yn uwch mewn llygod eNOSKO-NS na'r rheini mewn llygod WT-NS, roedd eu lefelau plasma yn amrywio. O'i gymharu â llygod WT-NS, roedd lefelau plasma o IL-6 yn uwch, roedd IL-10 yn is, ond nid oedd lefel TNF- yn wahanol mewn llygod eNOSKO-NS. Beth bynnag, yr uchafarennoldisgwylir rhywfaint o lefelau cytocinau pro-llidiol mewn llygod eNOSKO-NS. Mae NO yn foleciwl signalau sydd fel arfer yn chwarae swyddogaeth gwrthlidiol o dan amodau ffisiolegol arferol (Harrison, 1997;

Moncada et al., 1991). Ni wyddys yn gyffredinol bod DIM diffyg yn chwarae rhan allweddol wrth ysgogi’r broses ymfflamychol (Liu & Huang, 2008). Fodd bynnag, mae lefel cytocin gwrthlidiol hysbys, IL-10, hefyd yn uwch yn yarennolmeinwe llygod eNOSKO-NS o'i gymharu â meinwe llygod WT-NS. Gallai hyn fod oherwydd y ffaith nad yw IL-10 bob amser yn gweithredu fel asiant gwrthlidiol ond gall hefyd weithredu fel cytocin pro-llidiol mewn rhai amodau sy'n gysylltiedig â RAS uchel, fel y dangoswyd yn gynharach o'n labordy (Singh et al., 2017).

Er y canfyddir yn gyffredinol bod diet HS fel arfer yn gysylltiedig ag ysgogi biomarcwyr llid uwch, mae'r rhan fwyaf o'r canfyddiadau hyn i'w gweld mewn astudiaethau poblogaeth lle mae dietau HS yn aml yn cael eu codio ar gyfer bwyd goddrychol sy'n gysylltiedig â dietau mwy braster a llawn protein, a allai fod yn gwyro rhai o’r canlyniadau hyn (Zhu et al., 2014). Awgrymodd astudiaeth ddiweddar ddiddorol hefyd fod bwyta halen wedi'i ail-finio, ond nid halen môr naturiol, yn achosi gorbwysedd ac yn achosi annormaledd.arenpatholeg mewn llygod mawr Dahl sy'n sensitif i halen (Lee et al., 2017). Felly, mae perthynas gymhleth yn bodoli rhwng cymeriant halen a datblygu imiwnedd yn y corff dynol. Yr astudiaeth bresennol yw'r gyntaf ymhlith yr astudiaethau sy'n defnyddio modelau anifeiliaid i ddangos yr ymatebion i gymeriant mwy rheoledig o ddeietau HS ar lefelau rhai cytocinau llidiol mewn plasma ac yn yaren.Mae'r gostyngiad a welwyd yn yarennolgallai cynhyrchu cytocinau yn ystod cymeriant HS fod yn gysylltiedig ag atal RAS oherwydd cymeriant HS (Drenjančević-Perić et al., 2011).

Nodir bod lefel sylweddol uchel o IL{0}} plasma wedi'i ganfod mewn llygod WT a borthwyd gan NS, ond dim ond ychydig yn is oedd ei lefel mewn llygod eNOSKO a gafodd eu bwydo gan NS. I'r gwrthwyneb, gwelwyd gostyngiad amlwg o IL-10 mewn ymateb i ataliad systemig acíwt o NOS mewn llygod, fel yr adroddwyd yn ein hastudiaeth gynharach (Singh et al., 2014). Fodd bynnag, arhosodd lefelau IL-10 mewn plasma yn is mewn llygod WT ac eNOSKO yn ystod cymeriant HS yn yr astudiaeth bresennol. Mae'r data hyn yn dangos bod cymeriant HS cronig yn gyffredinol yn atal lefelau cytocinau gwrthlidiol a pro-llidiol, yn enwedig yn yaren. Mewn llygod eNOSKO,arennolmae lefel nitrotyrosin meinwe yn is o'i gymharu â'r hyn a geir mewn llygod WT (Kopkan et al., 2010) sy'n nodi bod cynhyrchu perocsynitrit yn llai yn y llygod diffygiol eNOS hyn a gallai hyn helpu i wella lefel IL-10 yn y straen hwn o lygod (Cook et al., 2003; Numanami et al., 2003). Gallai'r lefel plasma IL-10 uwch gynhyrchu effaith ataliol ar lefel plasma TNF- mewn llygod eNOSKO, gan y dangoswyd bod trwyth acíwt o IL-10 mewn llygod yn lleihau lefel TNF- yn yaren(Singh et al., 2014). Mewn rhai amodau, fodd bynnag, dangosir bod IL-10 yn gweithredu fel asiant pro-llidiol i gymellanaf arennol,yn enwedig yn ystod angiotensin II uchel mewn llygod (Singh et al., 2017). Felly, mae'n bosibl bod IL-10 yn gweithredu fel cytocin pro-llidiol yn y straen cnocio genyn eNOS hwn.

Yn ôl yr arfer, ni newidiodd cymeriant HS BP yn WT ond achosodd gynnydd sylweddol mewn BP mewn llygod eNOSKO (Kopkan et al., 2010) lle roedd BP gwaelodlin yn uwch o'i gymharu â llygod WT. Gan fod cymeriant HS yn achosi gostyngiadau mewn lefelau cytocin yn y ddau straen o lygod, efallai na fydd ymateb o'r fath mewn llygod eNOSKO yn awgrymu unrhyw berthynas uniongyrchol rhwng newidiadau BP â'r newidiadau yn y cytocinau llidiol. Nid oes tystiolaeth ychwaith ar gael hyd yn hyn, bod newid mewn pwysedd rhydwelïol yn dylanwadu'n uniongyrchol ar gynhyrchu TNF- ond i'r gwrthwyneb, rydym ni ac eraill wedi adrodd bod trwythiad mewnwythiennol o TNF ailgyfunol dynol- yn lleihau BP mewn llygod (Kramer et al., 1988 ; Shahid et al., 2008). Yn yr astudiaeth bresennol, mae newidiadau tebyg mewn plasma aarennolmae lefelau TNF- a chytocinau eraill mewn llygod WT ac eNOSKO wedi'u harsylwi trwy BP wedi cynyddu yn y llygod eNOSKO yn unig ac nid mewn llygod WT. Ni fyddai’r arsylwad hwn yn gwbl syndod gan fod llawer o astudiaethau ymyriadol eraill mewn bodau dynol (Luo et al., 2016) hefyd wedi awgrymu perthynas aflinol o’r fath â cytocinau llidiol a gorbwysedd yn ystod cymeriant HS. Mewn astudiaeth groesi ar hap a reolir gan blasebo mewn pynciau gorbwysedd (cyn) heb eu trin, nodwyd hefyd nad oedd cyfnod o 4-wythnos o gymeriant halen yn effeithio ar farcwyr llidiol megis lefelau plasma o TNF-, IL{{6} } , IL-6, IL-8, neu MCP-1) (Gijsbers et al., 2015). Nodwyd hefyd nad oedd BP mewn pobl wedi newid yn ystod cymeriant halen isel a arweiniodd at gynhyrchu mwy o cytocinau pro-llidiol fel TNF-, IL-6, neu pro-calcitonin (Mallamaci et al., 2013). Felly, nid yw cydberthynas uniongyrchol rhwng y newidiadau mewn cytocinau llidiol a'r newidiadau BP wedi'i brofi'n arbrofol eto.

Mae ein hastudiaethau blaenorol mewn cnofilod (Kopkan et al., 2010; Kopkan & Majid, 2005; Singh et al., 2017) wedi dangos bod cynhyrchu NO mewndarddol gan eNOS yn lleihau sensitifrwydd halen mewn ymateb i gymeriant diet HS. Mae astudiaethau mewn anifeiliaid o dan amodau arferol yn awgrymu nad yw cymeriant HS cronig yn unig yn achosi unrhyw newid neu fawr ddim newid mewn BP. Fodd bynnag, mae cymeriant HS yn achosi sensitifrwydd halen a gorbwysedd pan fydd DIM cynhyrchiant yn cael ei beryglu mewn llygod eNOSKO (Kopkan et al., 2010) neu lygod mawr (Kopkan & Majid, 2005) sy'n cael eu trin yn gronig ag atalydd NOS, L-NAME. Mae ein harsylwadau yn yr astudiaeth bresennol yn awgrymu bod cymeriant HS yn achosi gorbwysedd halen-sensitif mewn llygod eNOSKO yn unig ond nid llygod WT (Ffigur 1). Mae hyn yn fwyaf tebygol o ganlyniad i welliant mewn adamsugniad sodiwm tiwbaidd yn yarensy'n deillio o gynnydd yn lefel uwchocsid meinwe pan fydd DIM cynhyrchiant gan weithgaredd eNOS yn cael ei beryglu (Kopkan et al., 2010). Mae cymeriant HS cronig fel arfer yn achosi DIM cynhyrchiant trwy uwchreoleiddio gweithgaredd eNOS (Mattson & Higgins, 1996). Mae cynnydd o'r fath yn lefel NO yn lleihau'r gweithgaredd superoxide meinwe i gynnal cyflwr "cydbwysedd ocsideiddiol" sy'n hwyluso homeostasis sodiwm arferol, ac felly, yn lleihau'r cynnydd mewn BP. Rydym hefyd wedi dangos bod ymateb gorbwysedd i gymeriant HS cronig mewn llygod taro Il-10 yn cael ei leihau oherwydd gwelliant ym mynegiant eNOS yn y llygod hyn (Singh et al., 2017). Mae cynnydd yn lefel TNF plasma yn ystod cymeriant HS cronig hefyd yn cyfrannu at leihau gwelliant o'r fath mewn adamsugniad sodiwm tiwbaidd, oherwydd cynnydd mewn llwyth sodiwm mewn llygod WT er gwaethaf gostyngiad mewnarennollefel meinwe TNF- . Fodd bynnag, yng nghyflwr anghydbwysedd ocsideiddiol oherwydd diffyg DIM, mae effaith amddiffynnol o'r fath o lefel TNF plasma yn cael ei beryglu, gan arwain at well cadw sodiwm, ac felly, achosi sensitifrwydd halen a gorbwysedd mewn llygod eNOSKO. Rydym wedi dangos o'r blaen bod cynnydd yn lefel TNF plasma yn achosi ymateb natriwretig trwy actifadu derbynnydd TNF tiwbaidd math 1 (TNFR1) (Castillo et al., 2012). Mae ein data rhagarweiniol diweddar hefyd yn dangos bod mynegiant protein TNFR1 yn cael ei wella yn ystod cymeriant HS cronig mewn llygod WT ond wedi'i leihau mewn DIM cyflwr diffygiol naill ai mewn llygod eNOSKO (Majid et al., 2018) neu mewn llygod sy'n cael eu trin yn gronig â L-NAME (Majid et al., 2017). Mae gostyngiad o'r fath mewn gweithgaredd TNFR1 hefyd yn cyfrannu at sensitifrwydd halen a gorbwysedd yn ystod cymeriant HS mewn llygod eNOSKO. Felly, mae'n bosibl bod gan eNOS rôl arwyddocaol wrth leihau effaith cymeriant HS cronig mewn llygod WT.

Mae cymeriant HS cronig, trwy "swyddogaeth osmoreceptor," yn achosi mecanwaith imiwn sy'n actifadu celloedd y system ffagosyt mononiwclear (MPS) yn y meinweoedd myeloid yn y mêr esgyrn, y ddueg, a meinwe'r croen sydd wedyn yn cylchredeg ac yn ymdreiddio i lawer o organau gan gynnwys yaren(Machnik et al., 2009). Mae'r celloedd MPS actifedig hyn yn rhyddhau TNF- sy'n ymddangos yn y cylchrediad fel ei ffurf hydawdd (sTNF-). Mae sTNF- yn cael ei ffurfio gan holltiad proteolytig o ffurf bilen-tennyn (mTNF- ) gan ensym trosi TNF (TACE), sheddase sydd hefyd yn cael ei adnabod fel disintegrin a metalloprotease 17 (ADAM17) (Black et al. , 1997; Kriegler et al., 1988; Moss et al., 1997). Ynghyd â chynhyrchu TNF-, mae celloedd MPS actifedig hefyd yn rhyddhau digonedd o NO yn bennaf o actifadu eNOS (Connelly et al., 2003). Mae arsylwi beirniadol yr ymatebion TNF- gwahaniaethol yn yr astudiaeth bresennol yn dangos bod cymeriant HS cronig, ar y naill law, yn cynyddu sTNF- yn y plasma, ond yn lleihau mTNF- yn y plasma.arennolmeinwe, ar y llaw arall, yn fwyaf tebygol trwy gynyddu gweithgaredd TACE (Black et al., 1997; Kriegler et al., 1988; Moss et al., 1997). Er y dangoswyd bod gorbwysedd DOCAsalt wedi'i atal gan TACE yn taro'r ymennydd (Xia et al., 2013), ei union reoliad yn yarenyn ystod cymeriant HS cronig heb ei ddiffinio'n glir. Byddai angen ymchwilio ymhellach i fynd i'r afael â'r meinwe hon. Fodd bynnag, gellir ychwanegu yma bod TNF- yn cyflawni ei ymatebion bioleg trwy ryngweithio â dau dderbynnydd arwyneb celloedd, TNF- derbynnydd math 1 (TNFR1) a math 2 (TNFR2), sy'n cael eu mynegi a'u rheoleiddio'n wahaniaethol yn yaren(Al- Lamki & Mayadas, 2015). Er bod gan mTNF- affinedd cyfartal i'r ddau dderbynnydd, mae gan y stNF sy'n cylchredeg yr affinedd uchel mwyaf i ryngweithio â TNFR1 heb unrhyw affinedd neu ychydig iawn o affinedd ar gyfer TNFR2 (Grell et al., 1998). Yn yaren, lle mae TNFR2 yn chwarae rhan mewn llid arennol (Singh et al., 2013), mae actifadu TNFR1 yn achosi effaith natriwretig trwy atal cludiant tiwbaidd Na plus a gweithgaredd ENaC (Castillo et al., 2012) gan nodi rôl amddiffynnol ar gyfer TNF{{4) }} Echel TNFR1 yn ystod cymeriant HS cronig. Mewn sefyllfa o'r fath, byddai'r cynnydd mewn plasma TNF- (sTNF- ) mewn ymateb i gymeriant HS cronig a welwyd yn yr astudiaeth bresennol yn chwarae rhan fwy arwyddocaol wrth gynnal homeostasis sodiwm na'r newidiadau meinwe arennol mewn lefelau TNF- (mTNF-). Mae'n ddiddorol nodi bod y cymeriant HS cronig yn lleihau lefel plasma IL-6 yn yr astudiaeth bresennol (Ffigur 3a), gan ddangos rôl wahaniaethol y cytocinau pro-llidiol hyn wrth reoli homeostasis sodiwm. Felly, mae'n ymddangos, er bod TNF- yn cael ei ryddhau i'r cylchrediad gan y system ffagosyt mononiwclear wedi'i actifadu (MPS) trwy fecanwaith osmoregulatory yn ystod cymeriant HS, mae'n ymddangos bod rhyddhau IL-6 yn dibynnu'n bennaf ar ffactorau eraill megis renin-renin uchel. system angiotensin (Chamarthi et al., 2011). Yn ystod cymeriant HS yn unig, mae'r system renin-angiotensin yn cael ei isreoleiddio, ac felly, mae ei effaith ar ffurfiant IL-6 yn cael ei adlewyrchu yng nghrynodiad plasma ac arennol y cytocin hwn. Byddai angen arbrofion pellach i ddeall mwy am rôl reoleiddiol IL-6 mewn swyddogaeth ysgarthol arennol.

Yn yr astudiaeth bresennol, nodir bod llygod eNOSKO o ystyried y diet NS â gradd uwch o ffibrosis tubulointerstitial arennol, ond nid sglerosis glomerwlaidd, o'i gymharu â llygod WT. Mae'n ymddangos bod y newidiadau hyn yn cael eu lleihau mewn llygod eNOSKO o ystyried y diet HS, gan adlewyrchu effeithiau lefel is o cytocinau pro-lid (TNF- ac IL-6) mewn meinwe arennol. Mae'n ymddangos bod canfyddiadau llai o anafiadau arennol o'r fath mewn llygod eNOSKO sy'n cael eu bwydo gan HS yn gwrth-ddweud y canfyddiadau mewn astudiaeth arall mewn llygod eNOSKO a adroddwyd yn gynharach (Daumerie et al., 2010) nad oedd yn mesur y lefelau cytocin arennol. Fodd bynnag, gallai'r gwahaniaeth hwn yn yr effeithiau anaf arennol yn yr astudiaeth honno (Daumerie et al., 2010) o'i gymharu â'r astudiaeth bresennol fod yn gysylltiedig ag oedran llygod (mae arbrofion yn dechrau yn 6 mis o'i gymharu â 2 fis oed) yn ogystal â'r oedran uchel cynnwys halen (8 y cant yn erbyn 4 y cant NaCl) yn y diet a roddir am gyfnod hirach (8 wythnos vs 2 wythnos). Mae canlyniadau'r astudiaeth bresennol yn dangos bod cymeriant HS, yn y tymor byr o leiaf, wedi atal y lefelau cytocin arennol sy'n helpu i leihau anafiadau arennol yn y cyfnod cynnar.

Efallai y bydd yn bwysig archwilio ymhellach arwyddocâd ffisiolegol neu bathoffisiolegol y canfyddiadau hyn bod cymeriant HS am o leiaf 2 wythnos yn achosi gostyngiad yn lefelau arennol cytocinau pro-llidiol. Er bod cytocin pro-llidiol, yn enwedig TNF- wedi'i gysylltu â datblygiad sensitifrwydd halen a gorbwysedd (Majid et al., 2015; Rodríguez-Iturbe et al., 2014; Schiffrin, 2013), ymchwiliadau cynharach yn ein labordy (Shahid et al. al., 2008) yn dangos bod gweinyddu TNF yn ysgogi'r ymatebion diuretig a natriwretig sy'n nodi bod TNF- yn chwarae rhan wrth-reoleiddio wrth gyfryngu gorbwysedd sy'n sensitif i halen. Felly, gall gostyngiad yn lefelau arennol cytocinau pro-llidiol fel TNF- mewn ymateb i gymeriant HS am 2 wythnos wella'r swyddogaeth adamsugnol tiwbaidd a allai hwyluso cadw sodiwm yn y corff. Gall cadw sodiwm o'r fath gael ei wella manifold yng nghyflwr straen ocsideiddiol a achosir gan DIM diffyg. Gallai sensitifrwydd halen a welwyd mewn llygod eNOSKO arwain at gadw sodiwm gwell o'r fath yng nghyflwr straen ocsideiddiol fel yr ydym wedi'i ddangos yn gynharach (Kopkan et al., 2010). Mae'n bosibl y bydd angen astudiaethau pellach i ddeall y berthynas fecanistig gynhwysfawr rhwng y gostyngiadau yn lefelau arennol cytocinau pro-llidiol ac ysgogi pwysedd gwaed uchel mewn ymateb i gymeriant HS cronig. Fodd bynnag, mae'n rhesymol rhagdybio bod gostyngiadau o'r fath yn lefelau arennol TNF- a chytocinau pro-lidiol eraill yn hwyluso cadw sodiwm sy'n arwain at sefydlu gorbwysedd mewn ymateb i gymeriant diet HS.

CASGLIAD

Mae canfyddiadau'r astudiaeth bresennol yn dangos bod cymeriant HS, a roddir o leiaf am yr 2-gyfnod o wythnos, yn gyffredinol yn atal lefelau arennol cytocinau llidiol yn gyfan yn ogystal ag mewn amodau eNOS diffygiol. Yn gyffredinol, mae'r data hyn yn awgrymu bod cymeriant HS fel arfer wedi arwain at is-reoleiddio cytocinau pro a gwrthlidiol yn yaren.Gall is-reoleiddio cynhyrchu cytocin o'r fath, yn enwedig TNF- yn ystod cymeriant HS, fod yn hollbwysig yng nghyflwr diffyg eNOS a allai wella'r adamsugno sodiwm tiwbaidd arennol sy'n arwain at gadw halen, ac felly, yn hwyluso datblygiad gorbwysedd sy'n sensitif i halen o ganlyniad.