Sut mae Artemether yn Lleddfu Anaf i'r Arennau-Rhan I
Mar 20, 2022
am fwy o information:ali.ma@wecistanche.com
Artemether ameliorates kidney anaf drwy adfer anghydbwysedd ailddox a gwella gwiddon swyddogaeth mewn neffropathi adriamycin yn llygod
Peng xun Han, et al
Yarenyn organ galw am ynni uchel sy'n gyfoethog mewn gwiddondria yn enwedigArennolcelloedd tiwbaidd. Mae tystiolaeth sy'n dod i'r amlwg yn awgrymu bod camweithrediad gwiddon, anghydbwysedd ailddox ac anaf i'r arennau yn Gydgysylltiedig. Mae gan Artemether efectau biolegol drwy dargedu mitochondria ac mae'n arddangos potensial gwerth therapiwtig ar gyferarenclefyd. Fodd bynnag, nid yw'r mecanweithiau moleciwlaidd sylfaenol wedi'u wedi'u egluro'n llawn. Cynhaliwyd yr astudiaeth hon i bennu efectau artemether ar neffropathi Adriamycininduced ac ymchwiliwyd i'r mecanweithiau posibl hefyd. Yn vivo, Adriamycin sefydlwyd model llygoden neffropathi, a chafodd llygod eu trin â neu heb artemether am bythefnos. Yn vitro, ysgogwyd celloedd NRK-52E gyda TGF-β1 a'u trin â neu heb artemether am 24 h. WedynArennoldifrod a gwerthuswyd newidiadau i'r celloedd. Dangosodd y canlyniadau bod artemether wedi lleihau esgusodi protein wrinol, addasiadau podocyte wedi'u hadennill, wedi'u gwanhau newidiadau patholegol a'u lleddfuArennolanaf tiwbaidd. Hefyd, mae Artemether wedi'i israddio lefelau mynegiant TGF-β1 mRNA, yn llesteirio'r llu o diwbiau, ffenoteipiau celloedd tiwbaidd wedi'u hadfer a llwybrau signalau sy'n gysylltiedig â'u gallu i atal. Yn ogystal, adferwyd artemetherArennolailddox anghydbwysedd, mwy o rif copi mtDNA a gwell swyddogaeth gwiddon. I grynhoi, rydym yn darparu tystiolaeth gychwynnol bod artemether yn lleddfu anaf i'r arennau drwy adfer anghydbwysedd ailddox a gwella swyddogaeth gwiddon yn Neffrial Adriamycin nephropatheg yn llygod. Gall Artemether fod yn addawol asiant ar gyfer trin clefyd yr arennau.
Cronigarenclefyd(CKD) yn dod yn faich iechyd byd-eang ac fe'i nodweddir gan annormaleddau wrin, newidiadau strwythur morffolegol a namArennolswyddogaeth1. Mae'n fater brys i archwilio pathogenesis CKD a datblygu cyffuriau effeithiol sy'n gwrthbrofi ei ddilyniant.
Fel organ sydd â galw mawr am ynni, mae'rarenyn gyfoethog mewn gwiddondria, yn enwedig ynArennolcelloedd tiwbaidd. Ystyrir Mitochondria yn bwerdy'r gell ac yn cymryd rhan mewn llawer o brosesau cellog. Mae tystiolaeth sy'n dod i'r amlwg yn awgrymu bod camweithrediad gwiddon yn chwarae rhan ganolog ynaren ynrheithgor2. Mewn poblogaeth yn y gymuned, gwelwyd cysylltiad negyddol rhwng rhif copi DNA gwiddon (mtDNA) mewn gwaed ymylol a nifer yr achosion o ficrofusnesau 3. Astudiaeth metabolomeg esgusodi wrinol aArennoldangosodd dadansoddiad mynegiant genynnau fod gweithgarwch cylch asid citrig yn cael ei amharu mewn cleifion CKD 4. Mitochondria yw prif safle ocsid asid brasterog. Mewn modelau dynol a llygoden gyda ffibrosis tiwtor, canfuwyd ocsid asid brasterog diffygiol. Roedd adfer metabolaeth asid brasterog gan ddefnyddio dulliau genetig neu ffarmacolegol yn atal cynnydd fbrosis5 yr arennau yn sylweddol.
Diffinnir straen ocsid fel anghydbwysedd yn y genhedlaeth o rywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) sy'n fwy na chapasiti celloedd/meinweoedd i'w dadwenwyno neu eu dychryn. Mae nifer o astudiaethau wedi dangos bod dysregu'rarencyflwr redox yn hyrwyddo llwybrau ffibrogenig ac yn y pen draw yn arwain atArennolmethiant 6. Mae Mitochondria yn ffynhonnell bwysig o ROS cellog ac yn rheoleiddio cydbwysedd ailddox mewn cydweithrediad ag organelles7 eraill. Redox anghydbwysedd, camweithrediad gwiddon aarenAnafwedi'u cydgysylltu. Fodd bynnag, mae'r mecanweithiau moleciwlaidd sy'n sail i'r ffactorau hyn yn parhau i fod yn anodd.
Mae Artemether yn ddeilliad o artemisinin gyda gwell bioargaeledd ac mae'n cael ei ddefnyddio'n helaeth mewn triniaethau gwrth-gamarial 8,9. Dangosodd astudiaethau blaenorol fod deilliadau artemisinin yn cael gweithgareddau gwrthfeirysol, gwrth-ffwngaidd, gwrth-ganser, a gwrth-diabetig 10–15. Mae sawl astudiaeth wedi dangos bod effeithiau biolegol artemether yn gysylltiedig â rheoleiddio mitochondria16–18. Fodd bynnag, nid yw'r union fecanweithiau'n cael eu deall yn llwyr.
Yn yr astudiaeth hon, buom yn archwilio rôl artemether yn Adriamycin neffropathi (AY) ac yn ymchwilio i'r mecanweithiau sylfaenol.
Cistancheyn dda iarenAnaf
Cliciwch i Cistanche powdr echdynnu ar gyfer anaf i'r arennau
Canlyniadau
Gostyngodd Artemether esgusodi protein wrinol a newidiadau podocyte wedi'u hadennill.
Mae Proteinuria yn farciwr oArennolAnafa ffactor risg annibynnol ar gyfer dilyniant CKD. Fel y dangosir yn Ffig. 1a, o'i gymharu â'r grŵp rheoli, cynyddodd esgusodi protein wrinol yn y grŵp AY yn sylweddol ac fe'i gostyngwyd yn sylweddol gan driniaeth artemether. Mae podocytau yn chwarae rhan bwysig mewn ffurfio proteinuria. Felly, cyfrifwyd nifer y celloedd cadarnhaol WT-1 (gan nodi rhif podocyte) a lled y broses droed fesuredig (FPW) yn y menmerulus. Datgelodd y canlyniadau fod nifer y podocyte wedi gostwng a bod FPW wedi cynyddu'n sylweddol mewn grŵp AY llygod (Ffig. 1b–e). Roedd triniaeth Artemether yn amlwg yn adfer y newidiadau podocyte hyn (Ffig. 1b–e).
Ffigur 1. Gostyngodd Artemether esgusodi protein wrinol a newidiadau podocyte wedi'u hadennill. (a) Meintioli a dadansoddiad ystadegol o esgusodi protein wrinol mewn gwahanol grwpiau. n=6 y grŵp. (b) Cyfrif WT-1 celloedd cadarnhaol fesul menmerulus ym mhob grŵp. n=6 y grŵp. (c) Mesur FPW mewn gwahanol grwpiau. n=3 y grŵp. (d) Delweddau cynrychioliadol o imiwnedd WT-1 ym mhob grŵp. Bar graddfa, 20 μm. (e) Delweddau TEM cynrychioliadol sy'n dangos newidiadau morffolegol i brosesau traed. Bar graddfa, 500 nm. **P<0.01 and=""><0.001 versus="" control;=""><0.05,><0.01 and=""><0.001 versus="">
Cistancheyn dda iarenAnaf
Newidiadau patholegol wedi'u gwanhau gan Artemether ac anaf tiwtor arennol.
Ar ddiwedd yr astudiaeth hon, roedd sgleiniog segmentaidd ffocal (Ffig. 2a,j), anaf tiwtor (Ffig. 2b,k), a ffibrosis tiwtor (Ffig. 2c,l) yn amlwg mewn grŵp AY llygod. Roedd triniaeth Artemether yn lleddfu'r anafiadau patholegol hyn yn sylweddol (Ffig. 2a–c,j–l). Yn gyson â'r newidiadau patholegol tiwtor, cynyddodd lefelau wriol Kim-1 a NGAL, sy'n ddau fiofarcwyr anafiadau tiwtor, yn sylweddol yn y grŵp AY ac fe'u gostyngwyd yn sylweddol gan artemether (Ffig. 2d,e). Yn ogystal, mae'r mRNA sy'n gysylltiedig â ffibrosis (ffibrin: FN, actin cyhyrau α llyfn: α-SMA, collagen: COL I, a COL III) hefyd wedi cynyddu'n sylweddol mewn grŵp AY llygod ac fe'u hisreolwyd gan driniaeth artemether (Ffig. 2f–i). Yn gyson â'r newidiadau moleciwlaidd a patholegol hyn, lleihawyd y cynnydd mewn serum creatinine a BUN yn y grŵp AY yn sylweddol gan artemether (Ffig. 9a,b).
Ffigur 2. Newidiadau patholegol wedi'u gwanhau gan Artemether aArennolanaf tiwbaidd. Gwerthuso (a)sgleiniog, (b) anaf tiwtor, ac (c) ffibrosis rhyng-sefydliadol ym mhob grŵp. Meintioli wrinol (d)NGAL ac (e) Esgusodi Kim-1 mewn gwahanol grwpiau. Penderfynu arArennolmRNA lefelau mynegiant o (f) FN, (g)α-SMA, (h) COL I, ac (i) COL III mewn gwahanol grwpiau gan qPCR a normaleiddio yn erbyn y geneβ-actin cadw tŷ. (j, k) Delweddau cynrychioliadol o staenio PAS ar gyfer menmeruli (bar graddfa, 20 μm) a thiwbiau (bar graddfa, 50 μm). (l) Delweddau cynrychioliadol o staeniau trichrome Masson ar gyferArennoltubulointerstitium. Bar graddfa, 50 μm. n=6 y grŵp. *P<0.05,><0.01 and=""><0.001 versus="" control;=""><0.05,><0.01 and=""><0.001 versus="">
Roedd Artemether yn atal celloedd tiwbaidd rhag ymledu.
Er mwyn pennu cyflwr twf celloedd yn yaren, gwnaethom berfformio imiwnedd ar gyfer y marcwyr amledd celloedd sy'n ymestyn antigen niwclear celloedd (PCNA) a Ki-67. Datgelodd y canlyniadau fod celloedd tiwtor cadarnhaol PCNA a Ki-67 wedi cynyddu'n sylweddol mewn grŵp AY llygod a'u bod wedi gostwng yn sylweddol gan artemether (Ffig. 3b–e). Mae TGF-β1 yn rheoleiddiwr hanfodol o amledd celloedd. O'i gymharu â'r grŵp rheoli llygod, mae'n amlwg bod TGF-β1 mRNA wedi'i uwchraddio ynArennolgwelwyd meinwe mewn grŵp AY llygod, ac fe'i hisreolwyd yn sylweddol gan driniaeth artemether (Ffig. 3a).
Ffigur 3. Artemether wedi'i israddio TGF-β1 mRNA lefelau mynegiant ac yn llesteirio'r llu o diwbiau. (a) Penderfynu ar lefelau mynegiant arennol TGF-β1 mRNA ym mhob grŵp. (b, c) Cyfrif PCNA a Ki-67 celloedd tiwtor cadarnhaol fesul mm2 mewn gwahanol grwpiau. (d, e) Delweddau cynrychioliadol o PCNA a Ki-67 imiwnedd ym mhob grŵp. Bar graddfa, 20 μm. n=6 y grŵp. **P<0.01 and=""><0.001 versus="" control;=""><0.01 and=""><0.001 versus="">
Adferodd Artemether y ffenoteip celloedd tiwbaidd a'r llwybrau signalau sy'n gysylltiedig â'r llu o achosion.
Fel marciwr ffenoteip epiotheliol cynrychioliadol, gostyngwyd E-cadherin (ffosffo S838+S840) yn sylweddol yn y grŵp AY ac fe'i magwyd gan artemether (Ffig. 4a,b,f,j). Roedd signalau sy'n gysylltiedig â'u gilydd erk1/2, t38, a S6RP wedi'u actifadu mewn grŵp AY llygod ac fe'u rhwystrwyd gan artemether (Ffig. 4a,c–e,g– i,k). Er mwyn penderfynu a oedd effeithiau artemether ar gelloedd tiwtor yn cael eu cyfryngu gan TGF-β1, gwnaethom gynnal astudiaeth in vitro. Roedd celloedd NRK-52E wedi'u deori gyda 10 ng/ml TGF-β1 ar y cyd â neu heb artemether am 24 h. O'i gymharu â'r grŵp heb ei drin, cynyddodd TGF-β1 hyfywedd celloedd yn sylweddol (Ffig. 5a) ac ysgogi Erk1/2 a S6RP (Ffig. 5b,e,h,c,f,i). Gostyngodd te o'r dos artemether yn ddibynnol ar hyfywedd celloedd (Ffig. 5a) ac atal ysgogi Erk1/2 a S6RP ar grynodiad o 200 μM (Ffig. 5b,e,h,c,f,f, i). Cafodd y signal p38 ei actifadu ychydig gan symbyliad TGF-β1 ond nid i radd arwyddion. Nid oedd ymyrraeth Artemether ychwaith yn cael unrhyw effaith ar signalau p38 (Ffig. 5d,g,j).
Ffigur 4. Effeithiau artemether ar ffenoteip celloedd tiwbaidd a llwybrau signalau sy'n gysylltiedig â'r llu o achosion. (a–i) Bandiau blot y Gorllewin a dadansoddiad meintiol o p-E-cadherin (S838+S840), E-cadherin, p-Erk1/2 (Tr202/Tyr204), Erk1/2, p-p38 MAPK (Tr180/Tyr182), t38 MAPK, p-S6RP (Ser235/236), ac S6RP yn yarenym mhob grŵp. (j, k) Delweddau staenio imiwnhistocemegol cynrychioliadol o p-E-cadherin (S838+S840) a p-S6RP(Ser235/236) yn yaren. Dangosodd delweddau fod y proteinau hyn yn cael eu mynegi'n bennaf mewn tiwbiau arennol. Bar graddfa, 20 μm. n=6 y grŵp. *P<0.05 and=""><0.01 versus="" control;=""><0.05,><0.01 and=""><0.001versus>
Ffigur 5. Efects o artemether ar hyfywedd celloedd a llwybrau signalau sy'n gysylltiedig â'r llu o achosion yn vitro. (a) Cell dadansoddwyd hyfywedd gan ymosodiad MTT ar ôl triniaeth gyda TGF-β1 a chrynodiadau gwahanol o artemether ar gyfer 24 h. n=6 y grŵp. *P< 0.05="" vs.="" tgf-β1:0="" +="" art:="" 0="" group;=""><0.001 vs.="" tgf-β1:(10+dmso)="" +="" art:="" 0="" group.="" (b–d)="" representative="" western="" blot="" bands="" of="" p-erk1/2="" (tr202/tyr204),="" erk1/2,="" p-s6rp="" (ser235/236),="" s6rp,="" p-p38="" mapk="" (tr180/tyr182),="" and="" p38="" mapk="" after="" treatment="" with="" the="" indicated="" amount="" of="" artemether="" and="" tgf-β1.="" (e–j)="" bar="" graphs="" present="" the="" fold="" change="" of="" these="" proteins="" after="" normalization="" to="" β-actin.="" n="3" per="" group.=""><0.05 versus="" tgf-β1:0+art:="" 0="" group;=""><0.05 versus="" tgf-β1:10+art:="" 0="">
Cistancheyn dda iarenAnaf
Effeithiau artemether ar gydbwysedd ailddox yr arennau.
O'i gymharu â'r grŵp rheoli, yr ensau sy'n gysylltiedig â'r ailddox gan gynnwys catalase, anghymhelliad uwchocsid 2 (SOD2), a'r perocsid glwtathione 1 (GPX1), i gyd wedi'u lleihau'n sylweddol yn y grŵp AY ac fe'u cynyddwyd yn sylweddol gan driniaeth artemether (Ffig. 6a–d). Datgelodd staenio imiwnhistocemegol fod yr ensau hyn yn cael eu mynegi'n bennaf mewn tiwbiau arennol ac anaml y'u mynegir mewn menmeruli. Roedd eu dosbarthiad mewn tiwbiau hefyd yn dangos patrwm penodol. Mynegwyd Catalase yn bennaf yn y gyffordd cortico-medullary, mynegwyd SOD2 yn bennaf yn y medulla, a mynegwyd GPX1 yn bennaf yn y cortex (Ffig. 6f–h). Yn unol â'r anghydbwysedd ailddox yn yaren,WrinolCynyddodd yr esgusodion H2O2 yn sylweddol yn y grŵp AY ac fe'i gostyngwyd gan artemether (Ffig. 6e). Cynyddodd Artemether fàs mitochondrial a gwell swyddogaeth gwiddon. Mewn grŵp AY llygod, colli sianel anion sy'n ddibynnol ar foltedd (VDAC), trawsleoli'r membran gwiddon allanol 20 (TOM20), cytochrome c ocsid IV (COX IV), a gwelwyd ffactor trawsysgrifio gwiddon A (Tfam) a chynyddwyd yr effeithiau hyn gan driniaeth artemether (Ffig. 7a–e). Gan fod protein Tfam yn chwarae rhan bwysig yn y gwaith o gynnal rhifau copi mtDNA, mesurwyd rhifau copi mtDNA ym mhob grŵp. Yn gyson â'r gostyngiad yn Tfam, gostyngwyd rhif copi mtDNA hefyd yn y grŵp AY ac fe'i cynyddwyd gan artemether (Ffig. 7g–l). Yn ogystal, gwelwyd cyfradd rhyddhau mitochondrial H2O2 arennol is yn y grŵp AY, a gynyddwyd gan driniaeth artemether (Ffig. 7f).
Ffigur 6. Efects o artemether ararencydbwysedd redox a chyfnewid H2O2 wrinol. (a) Delweddau blot gorllewinol arddangos lefelau protein arennol catalase, SOD2, a GPX1 ym mhob grŵp. (b–d) Mae graffiau bar yn dangos y plyg newid y proteinau hyn ar ôl normaleiddio i β-actin. n=4 y grŵp. (e) Esgusodi Wrinol H2O2 mewn amrywiol grwpiau. n=6 y grŵp. (f–h) Imiwnedd cynrychioliadol delweddau o gataractau arennol, SOD2, a GPX1 yn pob grŵp. Bar graddfa, 200 μm. *P<0.05 and=""><0.001 versus="" control;=""><0.05 and=""><0.001 versus="">
Mae artemether yn rheoleiddio gollyngiad proton a signalau AMPK.
Er mwyn archwilio effaith uniongyrchol artemether ar mitochondria, gwnaethom gynnal prawf straen gwiddon gan ddefnyddio dadansoddwr Seahorse XF. O'i gymharu â'r grŵp heb ei drin, nid oedd symbyliad TGF-β1 yn effeithio ar ollyngiad proton na chynhyrchu ATP (Ffig. 8a–c). I'r gwrthwyneb, cynyddodd triniaeth artemether yn sylweddol ollyngiad proton a gostyngodd cynhyrchiant ATP (Ffig. 8a–c). Fel y dangosir yn Ffig. 8d,e, cafodd y signal AMPK ei actifadu gan artemether. At hynny, dangosodd yr astudiaeth yn vivo fod lefelau mRNA protein heb eu datgysylltu (UCP2) yn yarenwedi'u rheoleiddio'n sylweddol gan artemether (Ffig. 8f).
Ffigur 8. Efects o artemether ar ollyngiad proton a signalau AMPK. (a) Resbiradaeth mitochondrial cellog ei fesur gan ddadansoddwr hylif alloffer Seahorse XF24 ar ôl i gelloedd gael eu trin â'r swm a nodwyd o artemether a TGF-β1 am 24 h. (b, c) Mae graffiau bar yn cyflwyno'r cyfrifiad o ollyngiad proton ac ATP cynhyrchu mewn gwahanol grwpiau yn unol â phrotocol y gwneuthurwr. n=5 y grŵp. (d, e) Cynrychiolydd delweddau blot gorllewinol a dadansoddiad meintiol o newid plygu p-AMPK (Tr172) ar ôl TGF-β1 ac artemether driniaeth ar gyfer 24 h. n=3 y grŵp. (f) Lefel mynegiant arennol mRNA o UCP2 ym mhob grŵp llygod wedi'i normaleiddio yn erbyn y genyn cadw tŷ β-actin. n=6 y grŵp. #P<0.05 and=""><0.001 versus="" tgf-β1:10+art:="" 0="" group;=""><0.05 versus="">
Oddi wrth: 'Artemether amelioratesarenAnafdrwy adfer anghydbwysedd ailddox a gwella gwiddon swyddogaeth mewn neffropathi adriamycin yn llygod' ganPeng xun Han, et al
---Adroddiadau Gwyddonol | (2021) 11:1266
