Sut mae Cistanche yn Atal Clefyd yr Afu

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Haniaethol

Ymchwilio i nodweddion rhagarweiniol, gweithgaredd gwrthocsidiol a hepatoprotective polysacaridau oCistanche deserticola (CDPs), cafwyd tri ffracsiynau polysacarid, CDP-A, CDP-B, a CDP-C, trwy hidlo pilen yn olynol (micr-hidlo, ultrafiltration, a nanofiltradiad). Dadansoddwyd pwysau moleciwlaidd, cyfansoddiadau monosacarid, purdeb, a sbectra IR o'r tri ffracsiwn. Dangosodd y canlyniadau fod CDP-C yn cynnwys cyfran uwch o asid galacturonig (GalUA) na CDP-B a CDP-A. Dadansoddwyd gweithgareddau gwrthocsidiol hefyd a datgelodd y canlyniadau mai CDP-C oedd â'r gweithgaredd uchaf. Felly, astudiwyd gweithgaredd hepatoprotective CDP-C ymhellach. Roedd ymchwil in vitro, CDP-C yn hyrwyddo hyfywedd celloedd HepG2. Mewn ymchwil in vivo, fe wnaeth CDP-C liniaru'r newidiadau a achosir gan alcohol, gan gynnwys mynegeion serolegol (alanine transaminase, asid phosphatase, -glutamyl transpeptidase, a triglyserid) a dangosyddion hepatig (superoxide dismutase, malondialdehyde, glutathione S-transferase, a triglyserid) mewn model anifeiliaid. Cafodd y steatosis micro-fesicwlaidd amlwg a necrosis ysgafn mewn histopatholeg hepatig anifeiliaid model eu gwanhau hefyd gan weinyddiaeth CDP-C. Nododd y canfyddiadau hyn fod gan CDP-C weithgaredd hepatoprotective yn erbyn anaf hepatig cronig a achosir gan alcohol. Efallai mai'r mecanwaith sylfaenol yw y gall CDP-C leihau cynnwys MDA a TG, a modiwleiddio gweithgareddau'r ensym cymharol. Efallai y bydd yr eiddo hwn yn gysylltiedig â GalUA yn CDP-C.

Gair allweddol: Cistanche deserticola; Polysacaridau; Nodweddiadau rhagarweiniol; Gwrthocsidydd; Gweithgaredd hepatoprotective.

cistanchebienfaitsanialwch

1. Rhagymadrodd

Holoparasit lluosflwydd yw Cistanche ac fe'i dosberthir yn bennaf yn rhanbarth anialwch gogledd-orllewin Tsieina [1, 2]. Cofnodwyd coesyn rhywogaeth Cistanche (Orobanchaceae) gyntaf yn Materia Medica Tsieineaidd Shen Nong. Mae Cistanche wedi cael ei ddefnyddio ers tro fel meddyginiaeth lysieuol draddodiadol ar gyfer trin diffyg arennau, analluedd, rhwymedd henaint, dolur a gwendid yn y canol a'r pengliniau, a diffyg gwaed [3, 4]. Datgelodd ymchwil ffarmacolegol fod gan Cistanche weithgaredd gwrthlidiol [5, 6], gweithgaredd gwrth-osteoporosis [7, 8], effaith tawelyddol [9], gweithgaredd gwrthfatig [10], effaith niwro-amddiffynnol [11]. Yn ogystal, mae gan polysacaridau o Cistanche deserticola (CDPs) effeithiau gwrth-hyperglycemig a hypolipidemig [12], gweithgaredd imiwnolegol [13], ac effaith amlhau ar lymffocytau [14].

Achosodd alcohol, diod a yfwyd ledled y byd, ac ychwanegyn bwyd bron i 2.5 miliwn o farwolaethau bob blwyddyn yn y byd [15, 16]. Mae'r marwolaethau hyn yn ymwneud yn bennaf â chlefyd yr afu a achosir gan gamddefnyddio alcohol [17, 18]. Mae clefyd hepatig a achosir gan alcohol yn ddilyniant cronig aml-gam cymhleth, fel arfer yn datblygu o steatosis alcoholig i hepatitis alcoholig ac yn olaf i sirosis alcoholig [19]. Felly, mae nodi cynhyrchion naturiol gweithredol ar gyfer y defnyddwyr alcohol hynny i atal neu arafu datblygiad anaf alcoholig i'r afu yn y cyfnod cynnar yn strategaeth reoli fuddiol.

Mae Cistanche deserticola YC Ma a Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight yn ddwy rywogaeth feddyginiaethol a gofnodwyd yn Pharmacopoeia Tsieineaidd [3]. Mae llawer o bapurau wedi egluro gweithgareddau hepatoprotective C. tubulosa [20-24] a C. deserticola [25, 26]. Ond roedd yr ymchwiliadau hepatoprotective hyn bob amser wedi'u hanelu at anaf acíwt i'r afu a achosir gan garbon tetraclorid (CCl4) neu D-galactosamine a lipopolysaccharide, ond heb fod yn poeni am yr anaf cronig i'r afu sy'n gysylltiedig â chamddefnyddio alcohol. Yn ogystal, roedd yr adroddiadau hyn yn canolbwyntio'n bennaf ar fecanwaith glycosidau ffenylethanoid (PhGs) yn hytrach na'r CDPs. Felly, yn yr astudiaeth bresennol, ymchwiliwyd i nodweddion rhagarweiniol CDPs a'u gweithgareddau gwrthocsidiol (in vitro). At hynny, sefydlwyd model anaf i'r afu o lygod ICR a achosir gan win gwirod gwyn i archwilio gweithgaredd hepatoprotective CDPau yn erbyn anaf cronig i'r afu a achosir gan alcohol.

dyfyniad cistanche a tongkat ali herba

2. Deunyddiau a dulliau

2.1. Defnyddiau

Casglwyd coesynnau C. deserticola o Gynghrair Alashan, Mongolia Fewnol Tsieina,ac a nodwyd gan yr Athro Xiaodong Wang (Is-adran Peirianneg Bioburo, Sefydliad Peirianneg Prosesau, Academi Gwyddorau Tsieineaidd, Beijing, PR Tsieina).

Dimethyl sylfocsid (DMSO), 2, 2-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6-asid sylffonig) (ABTS), 3-(4, 5-dimethylthiazol{ {8}}yl)-2, 5-bromid diphenyltetrazolium (MTT), ac 1, 1-diffenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) gan Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, UDA). Prynwyd Eryr Addasedig Canolig Dulbecco (DMEM) a serwm buchol ffetws (FBS) gan Invitrogen, Inc. Prynwyd ysbryd gwyn Er Guo-tou gan Beijing Red Star Co, LTD. Prynwyd bicyclol o Beijing Union Pharmaceutical Factory. Paratowyd hydoddiannau dyfrllyd gyda dŵr pur iawn o system puro dŵr Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, UDA). Roedd pob adweithydd arall o radd ddadansoddol.

2.2. echdynnu CDPs a hidlo ffracsiynol

Paratowyd y CDPau crai yn unol â dull ein grŵp a adroddwyd yn flaenorol [27] gydag ychydig o addasiadau. Yn fyr, cafodd y powdwr (40 rhwyll) o C. deserticola (50 kg) ei dynnu'n ultrasonically (40 kHz a 6 kW) gyda 1000 L o hydoddiant ethanol dyfrllyd (50 y cant, v / v) ar 60 ◦C am 120 munud. Gwahanwyd polysacaridau o'r darn gyda resin macroporous (HPD 300). Roedd hydoddiant polysacarid wedi'i grynhoi o dan bwysau llai, wedi'i ddadproteinio gan ddefnyddio dull Sevag [28], a rhewi-sychu'r cynnyrch yn cael ei alw'n CDPs crai.

Yna diddymwyd 50 g o'r CDPau crai mewn dŵr ultrapure 2.5 L a'u gwahanu'n olynol â'r microhidlo, uwch-hidlo, a nanofiltrau (toriadau pwysau moleciwlaidd enwol oedd 300 kDa, 10 kDa, a 200 Da. Pilen effeithiol arwynebedd oedd 0.625 m2). Roedd hydoddiant cadw o ficrohidlo yn lyophilized a'i alw'n CDP-A. Cafodd hydoddiant treiddio o ficro-hidlo ei hidlo ag uwch-hidlo, tra bod yr hydoddiant a gadwyd yn cael ei lyoffileiddio a'i enwi'n CDP-B. Cafodd hydoddiant treiddio o uwch-hidlo ei hidlo â nanofileiddiad, cafodd yr hydoddiant a gadwyd ei lyoffileiddio a'i enwi fel CDP-C.

2.3. Nodweddiadau rhagarweiniol o CDPs

Gwerthuswyd meintiau moleciwlaidd CDPs yn unol â'r dull a adroddwyd yn flaenorol oein gr[29]. Dadansoddwyd cyfansoddiadau monosacarid gan ddefnyddio'r dull a ddisgrifiwyd gan P. Zhang et al [30]. Pennwyd purdebau yn ôl y dull asid ffenol-sylffwrig [31]. Penderfynwyd ar y cynnwys protein gan ddefnyddio'r dull a grybwyllwyd gan Bradford a Maja Kozarski [32, 33]. Cafodd sbectra FT-IR o CDPs eu dal gyda Sbectromedr Trawsnewid-Isgoch Fourier (FT/IR-660 Plus, JASCO) yn yr ystod o 400~4000 cm-1.

2.4. Gweithgareddau gwrthocsidiol

Gwerthuswyd effeithiau chwilota'r CDPs ar hydroxyl, superoxide anion, DPPH, a radicalau ABTS yn ôl y dulliau a ddisgrifiwyd gan Sun [34], Wang [35], Yap [36], a Fatiha [37], yn y drefn honno.

camweithrediad erectile cistanchecanysaren

2.5. Gweithgaredd hepatoprotective o CDP-C in vitro

Ar sail canlyniadau'r assay gwrthocsidiol, dewiswyd CDP-C i astudio gweithgaredd hepatoprotective. Cafodd celloedd HepG2 (a brynwyd o China Centre for Type Culture Collection, Beijing, China) eu meithrin mewn DMEM sy'n cynnwys FBS wedi'i anactifadu gan wres (10 y cant), streptomycin (0.1 ug/mL), penisilin (100 IU/mL), ac asid amino nad yw'n hanfodol. Cafodd y celloedd eu deor mewn awyrgylch llaith o 5 y cant CO2 ar 37 gradd, eu cynaeafu ar y cyfnod twf esbonyddol, eu hadu i mewn i 96-blatiau ffynnon (4 × 104 celloedd y ffynnon, 100 μL), a deor am 24 h. Cafodd celloedd y grŵp negyddol eu trin ag alcohol (crynodiad terfynol oedd 3.5 y cant , v / v) tra bod y grŵp naïf yn cael ei drin â dŵr. Cafodd celloedd y grŵp positif eu trin ag alcohol a bicyclol (y crynodiad terfynol oedd 2{00ug/mL). Cafodd celloedd y pedwar grŵp prawf eu trin ag alcohol a CDP-C (crynodiad terfynol CDP-C oedd 0.11, 0.3333, 1.00, a 3.00 mg/mL). Diwylliwyd pob cell am 48 awr arall.

Pennwyd hyfywedd celloedd HepG2 gan y dull assay MTT a grybwyllwyd gan J. Tong et al [38] gydag addasiad bach. Yn gryno, ychwanegwyd MTT (5 mg/mL, 20 μL y ffynnon) i'r platiau ffynnon wedi'u hadu gan gell 96-, a deorwyd y celloedd am 4 h. Tynnwyd y datrysiadau ac ychwanegwyd DMSO (150 μL/well). Mesurwyd amsugnedd pob ffynnon ar 492 nm gan ddefnyddio 96-darllenydd plât ffynnon (Thermo Scientific, America). Cyfrifwyd hyfywedd celloedd gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol:

Hyfywedd cell ( y cant )=(Sampl- Aban) × 100/ ( Naïf - Ablan )

Lle sampl oedd amsugnedd y grŵp arbrofol; Naïf oedd amsugnedd y grŵp rheoli heb sampl; A gwag oedd amsugnedd cyfrwng meithrin heb unrhyw sampl a cell hadu.

2.6. Gweithgaredd hepatoprotective o CDP-C in vivo

2.6.1. Anifeiliaid

Defnyddiwyd llygod ICR benywaidd mewn oed (22-25 g, a brynwyd o Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. Rhif trwydded anifeiliaid oedd 11400700128). Câi anifeiliaid eu cartrefu mewn ystafell a reolir yn amgylcheddol gyda phorthiant a dŵr ad libitum (lleithder cymharol oedd 40-60 y cant , 22-26 gradd ), roedd awyru aer 12-18 gwaith yr awr, a chyflwr arbelydru ysgafn roedd yn gylchred golau/tywyll 12 h o 150-300 lux. Roedd y llygod wedi ymgynefino ag amodau'r ystafell anifeiliaid am 7 diwrnod cyn yr arbrofion. Cynhaliwyd yr holl weithdrefnau yn ymwneud ag anifeiliaid trwy gydol yr arbrofion yn unol â'r rheolau ar gyfer Defnyddio Anifeiliaid Labordy fel y'u mabwysiadwyd ac a gyhoeddwyd gan Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol yr Unol Daleithiau.

2.6.2. Dyluniad arbrofol

Rhannwyd llygod ICR ar hap yn chwe grŵp (grŵp naïf, grŵp rheoli negyddol, grŵp rheoli cadarnhaol, a thri grŵp prawf) gyda 10 anifail ym mhob grŵp. Roedd y grŵp naïf yn cael ei roi ar lafar â dŵr distyll. Rhoddwyd alcohol ar lafar i'r grŵp rheoli negyddol (gwirod gwyn Er Guo-tou, 56 y cant, 6 mL/kg). Rhoddwyd bicyclol (300 mg/kg) i'r grŵp rheoli positif a 5 awr yn ddiweddarach gydag alcohol. Gweinyddwyd tri grŵp prawf ar lafar gyda CDP-C ar ddogn o 200, 600, 1800 mg / kg, a 5 awr yn ddiweddarach gydag alcohol. Rhoddwyd pob llygod am 31 diwrnod yn olynol.

2.6.3. Pennu mynegeion serolegol

Tua 4 awr ar ôl y driniaeth alcoholig ddiwethaf, casglwyd gwaed o soced y llygad a'i allgyrchu ar 3000 g am 15 munud. Ar ôl i'r serwm gael ei wahanu, pennwyd gweithgareddau ensymau alanine transaminase (ALT), asid phosphatase (ACP), -glutamyl transpeptidase (-GTP), a triglyserid (TG) gan ddefnyddio citiau diagnostig.
2.6.4. Pennu dangosyddion hepatig

Ar ôl casglu gwaed, dienyddiwyd pob llygod. Roedd iau pob llygoden yn cael ei dorri'n syth, wedi'i olchi â saline ffisiolegol. Gwahanwyd darn o feinwe hepatig oddi wrth y llabed chwith. Yna briwgigiwyd y meinwe a'i homogeneiddio â hydoddiant potasiwm clorid dyfrllyd (1.15 y cant , w / v) mewn homogenizer gwydr (Potter Elvehjem Teflon) am 60 eiliad i wneud homogenad afu (10 y cant w / v). Mesurwyd gweithgareddau ensymau cynnwys superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), glutathione S-transferase (GST) yn ogystal â triglyserid (TG) gan ddefnyddio'r citiau diagnostig.

2.6.5. Astudiaethau histopatholegol

Gosodwyd rhan weddilliol yr afu yn sefydlogydd Bouin am 24 h, ar ôl dadhydradu gan ddefnyddio hydoddiant ethanol dyfrllyd (50-100 y cant , v/v), cliriwyd meinwe'r afu mewn sylene a'i fewnosod mewn paraffin. Cafodd adrannau hepatig (5 mm) eu staenio â hematoxylin alum ac eosin (AU). Cafodd delweddau o doriadau iau a newidiadau histopatholegol eu dal gan ficrosgop golau (Nikon-DS-L1-5M).

2.7. Dadansoddiad ystadegol

Mynegwyd data fel modd ± gwall safonol y cymedr (SEM) o dri (dadansoddiad cyfansoddiad cemegol a assay gwrthocsidiol), pump (hyfywedd cell), neu ddeg (ymchwil in vivo) arbrofion annibynnol. Dadansoddwyd arwyddocâd ystadegol gwahaniaethau rhwng grwpiau gan ddadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA) wedi'i ddilyn gan brawf amrediad lluosog Student-Newman-Keuls gan ddefnyddio meddalwedd SPSS 19.0. Ym mhob dadansoddiad, t<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. Canlyniadau a thrafodaeth

3.1. Nodweddion CDPs

Fel y dangosir yn Ffig. 1A, mae'r CDP-A yn cynnwys dau grŵp, y pwysau moleciwlaidd yw 4000 kDa a 3946 kDa. Pwysau moleciwlaidd CDP-B a CDP-C yw 2400 kDa a 1300 kDa, Dangosir y cyfansoddiadau monosacarid yn Ffig. 1B. Mae CDP-A, CDP-B, a CDP-C yn cynnwys chwe monosacarid hanfodol gyda chyfrannau gwahanol, gan gynnwys mannose (Man), rhamnose (Rha), asid galacturonig (GalUA), glwcos (Glc), galactose (Gal), ac arabinose ( Ara). Heblaw am chwe monosacarid a grybwyllir uchod, mae xylose (Xyl) hefyd yn ymddangos yn CDP-C. Yn ogystal, mae CDP-C yn cynnwys cyfran fwy o GalUA na'r ddau ffracsiwn arall.

Mae purdeb a chynnwys protein CDPs yn cael eu harddangos yn Nhabl 1. Mae Tabl 1 yn dangos mai CDP-A sydd â'r purdeb uchaf, sef 75.57 y cant, tra bod purdeb CDP-B a CDP-C yn 74.72 y cant a 68.92 y cant, yn y drefn honno. Mae cynnwys protein CDP-A, CDP-B, a CDP-C yn 1.27 y cant, 1.24 y cant, a 1.05 y cant, yn y drefn honno.

Tabl 1 .Pureddau a chynnwys protein CDPs. Data yw'r modd ± SEM o dri atgynhyrchiad.

Defnyddir y sbectra FT-IR o garbohydradau i bennu eu nodweddion strwythurol ac fe'u defnyddir yn nodweddiadol ar gyfer dadansoddiad ansoddol o grwpiau gweithredol organig, yn enwedig ar gyfer OH, CO, a C=O [39]. Dangosir sbectra FT-IR CDPs yn Ffig. 1C. Mae pob sbectrwm yn dangos brig ymestyn cryf ac eang o gwmpas 3293 cm−1 ar gyfer dirgryniad ymestyn OH yn ogystal ag uchafbwynt amsugno gwan ar 2939 cm−1 ar gyfer dirgryniad ymestyn CH. Mae'r band amsugno ar 1650 cm−1 yn cael ei achosi gan ddirgryniad ymestyn anghymesur C=O. Mae'r band amsugno eang ar 1418cm−1 yn priodoli i anffurfio dirgryniad y bond CH. Mae gan bob polysacarid penodol fand penodol yn y rhanbarth 1000-1200 cm−1, sy'n cael ei ddominyddu gan ddirgryniad cylch wedi'i orgyffwrdd â dirgryniad ymestynnol o grwpiau ochr (C-OH) a dirgryniad band glycosidig (COC). Mae'r amsugniad ar 1036 cm−1 yn dynodi ffurf pyranose o siwgr. Mae amsugnedd o bron i 829 cm-1 yn awgrymu cysylltiad -glycosidau yn adeiledd moleciwlaidd CDPs. Fel y dangosir yn Ffig. 1 C, mae band amsugno CDP-C ar 1650 cm−1 yn gryfach na CDP-A a CDP-B, sy'n golygu bod cynnwys C{=O yn CDP-C yn fwy na y rhai yn CDP-A a CDP-B. Mae'r canlyniad hwn yn gyson â chanlyniadau Ffig. 1 A, sy'n dangos bod cyfran y GalUA yn CDP-C yn fwy na'r rhai yn CDP-A a CDP-B.

3.2. Gweithgareddau gwrthocsidiol CDPs

3.2.1. Assay radical hydroxyl

Ymhlith y rhywogaethau ocsigen adweithiol, y radical hydroxyl yw'r un mwyaf adweithiol ac mae'n achosi difrod difrifol i'r biomoleciwlau cyfagos [40]. Ar gyfer radical hydroxyl, mae dau fath o fecanweithiau gwrthocsidiol: mae un yn chwilota'r radical hydrocsyl a gynhyrchir eisoes, ac mae un arall yn atal y genhedlaeth o radical hydrocsyl. Ar gyfer yr olaf, mae radical hydroxyl yn cael ei gynhyrchu gan adwaith y cymhleth Fe (II) â hydrogen perocsid. Gall gweithgareddau gwrthocsidiol CDPs glymu i'r ïonau metel, nad ydynt yn adweithio â H2O2 ac yn cynhyrchu radical hydrocsyl ond yn celate â CDPs ac yn ffurfio'r cymhleth metel. Ni all y cymhlyg metel adweithio ymhellach â H2O2 i roi radical hydrocsyl [41-43]. Felly, mae'r CDPs yn dangos yr effeithiau chwilota radical hydroxyl.

Mae Ffig. 2 A yn dangos gallu sborion CDPs ar radical hydrocsyl mewn modd sy'n dibynnu ar grynodiad. Cyfradd chwilota CDP-A, CDP-B, a CDP-C yw 29.56 y cant, 33.44 y cant, a 38.22 y cant, yn y drefn honno. Mae CDP-C yn arddangos gweithgaredd sborion radical hydroxyl uwch. O ystyried bod CDP-C yn cynnwys cyfran uwch o GalUA na CDP-A a CDP-B, gall gwrthocsidyddion CDPs ymwneud nid yn unig ag eiddo clymu ïonau metel, ond hefyd â chynnwys GalUA, Ara, a Gal [{{15) }}].

3.2.2. Assay radical anion superoxide

Mae'r radical anion superoxide yn rhywogaeth wenwynig sy'n cael ei gynhyrchu gan nifer o adweithiau biolegol a ffotocemegol a thrwy hynny achosi niwed i feinwe [47]. Er bod anion superoxide yn ocsidydd cymharol wan, mae'n chwarae rhan bwysig wrth ffurfio rhywogaethau ocsideiddiol adweithiol cryfach eraill, megis ocsigen singlet a hydroxyl radical [48]. Mae Ffig. 2 B yn dangos y berthynas rhwng y crynodiadau a chynhwysedd sborion CDP ar radicalau anion uwchocsid. Wrth i'r crynodiad gynyddu, mae CDP-C yn dangos gallu sborionio uwch na CDP-B a CDP-A.

3.2.3. Assay radical DPPH

Mae DPPH, un o'r cyfansoddion sefydlog sy'n canolbwyntio ar nitrogen sy'n meddu ar radical di-proton ag amsugno nodweddiadol o 517nm, yn gostwng yn sylweddol ar amlygiad i sborionwyr radical proton, felly, fe'i defnyddir yn helaeth i amcangyfrif gweithgareddau chwilota radical rhad ac am ddim gwrthocsidyddion. Derbynnir yn dda mai'r rheswm am y radical rhydd DPPH sy'n cael ei ysbeilio gan wrthocsidyddion yw eu gallu i roi hydrogen. Mae gwrthocsidyddion yn trosglwyddo naill ai electronau neu atomau hydrogen i'r radical DPPH a ffurfio DPPH-H, sy'n ffurfiad nad yw'n radical [49].

Profwyd cyfanswm effeithiau sborion DPPH yr holl samplau a dangosir y canlyniadau yn Ffig. 2 C. Mae galluoedd chwilota CDPs ar radical DPPH yn dangos dull canolbwyntio-ddibynnol. Wrth i'r crynodiad gynyddu o 1.0 i 5.0 mg/mL, mae galluoedd sborionio CDP-C yn cynyddu o 52.5 y cant i 58.7 y cant , yn uwch na CDP-B (o 34.2 y cant i 56.8 y cant ). y cant ) a CDP-A (o 12.5 y cant i 52.8 y cant ). Gall effaith sborion DPPH CDP-C fod yn gysylltiedig â'r grwpiau carbonyl yn GalUA.

3.2.4. Assay radical ABTS

Defnyddir assay radical ABTS yn aml ar gyfer mesur cyfanswm pŵer gwrthocsidiol gwrthocsidydd cryf o'r samplau prawf [50]. Dangosir effeithiau sborion ABTS pob sampl yn Ffig. 2 D. Mae galluoedd sborion CDP ar radicalau ABTS yn dangos dull sy'n dibynnu ar ddos. Mae'r IC50 o CDP-A, CDP-B a CDP-C tua 4.0 mg / mL, 2.5 mg / mL ac 1.2 mg / mL, yn y drefn honno. Mae'r canlyniadau'n dangos bod gan CDPau weithgaredd sborion ABTS.

I grynhoi, roedd gweithgaredd gwrthocsidiol CDP-C yn uwch na CDP-A a CDP-B. Adroddodd fod rhai gweithgareddau ffarmacolegol polysacaridau yn gysylltiedig â'i GalUA[51]. Yn yr arbrawf hwn, roedd cyfran y GalUA yn CDP-C yn fwy na'r rhai yn CDP-A a CDP-B, dewiswyd y CDP-C i ymchwilio i'r effaith hepatoprotective yn erbyn clefyd cronig yr afu a achosir gan alcohol.

3.3. Effeithiau CDP-C ar hyfywedd celloedd HepG2

Mae mesur hyfywedd celloedd yn ffordd gyffredin o asesu effeithiolrwydd cyffuriau naturiol [52]. Yn seiliedig ar y canlyniadau bod CDP-C yn meddu ar y gweithgaredd gwrthocsidiol uchaf, gwerthuswyd effeithiau CDP-C ar hyfywedd celloedd HepG2. Dangosir y canlyniadau yn Ffig. 3. Gostyngiad sylweddol yn hyfywedd celloedd HepG2 a achosir gan driniaeth alcohol. Ond gall CDP-C wella'r cyfraddau goroesi yn sylweddol o'u cymharu â'r grŵp negyddol. Fel y dangosir yn Ffig. 3, nid yw hyfywedd y gell yn arddangos dull canolbwyntio-ddibynnol cywir gyda CDP-C. Mewn cyferbyniad, pan fydd crynodiad CDP-C yn cyrraedd 3.00 mg/mL, mae hyfywedd celloedd HepG2 yn gostwng yn ddramatig. Efallai mai'r rheswm dros y gostyngiad mewn hyfywedd celloedd yw bod crynodiad isel o CDP-C yn ddefnyddiol i oroesiad celloedd HepG2. Fodd bynnag, pan oedd crynodiad polysacaridau yn y cyfrwng diwylliant yn ddigon uchel i newid micro-amgylchedd y celloedd, cafodd hyfywedd celloedd HepG2 ei atal.

3.4. Effeithiau ffarmacolegol CDP-C

3.4.1. Effeithiau CDP-C ar fynegeion serolegol

Mae cam-drin alcohol yn priodoli i bron i 4 y cant o'r holl gyfraddau marwolaeth, sydd wedi dod yn broblem gymdeithasol ddifrifol yn y byd. Yn y corff dynol, mae alcohol yn cael ei fetaboli yn yr afu ar ôl iddo gael ei amsugno trwy fwcosa gastrig a berfeddol bach [53-55]. Mae clefydau alcoholig yr afu fel arfer yn digwydd ar ôl blynyddoedd o gamddefnyddio alcohol [56]. Yn gyffredin, gwelir cyflyrau patholegol fel afu brasterog, hepatitis, ffibrosis, a sirosis [57], neu hyd yn oed afiechydon canseraidd fel carcinoma hepatocellular a chanser y colon [58], mewn anhwylderau'r afu sy'n gysylltiedig ag alcohol. Felly, mae alcohol yn hepatoxic nodweddiadol ac fe'i defnyddir yn eang fel anaf i'r afu mewn ymchwil wyddonol [59]. O ystyried bod afiechydon yr afu a achosir gan alcohol yn aml yn cael eu hachosi gan ddiodydd alcoholig ac ychwanegion bwyd yn hytrach nag ethanol diwydiannol, felly defnyddiwyd gwirod gwyn Er Guo-tou i sefydlu model anaf i'r afu mewn llygod ICR yn yr astudiaeth hon. Mae bicyclol yn asiant cyffredin a ddefnyddir i drin anaf cronig i'r afu, felly fe'i defnyddiwyd i osod model rheoli cadarnhaol.

Mae celloedd hepatig yn cynnwys crynodiadau uwch o ALT yn y cytoplasm a mitocondria. Oherwydd amrywiol iawndal celloedd hepatig, bydd gollyngiad cytosol yn achosi cynyddiad o ALT yn y serwm. Felly hyrwyddo ALT yw'r dangosydd o ollyngiad cellog ac anhwylderau swyddogaethol yr afu [60]. Felly mae lefel ALT serwm fel arfer yn cael ei osod fel y dangosydd i asesu iechyd yr afu [61]. Am resymau tebyg, defnyddir -GTP, ACP, a TG hefyd fel dangosyddion i asesu cyflwr iechyd yr afu [62].

Yn yr astudiaeth bresennol, aseswyd gweithgaredd hepatoprotective CDP-C trwy bennu lefelau ALT, ACP, -GTP, a TG. Dangosir y canlyniadau yn Ffig. 4 A, B, C, a D. Pedwar dangosydd serwm a hyrwyddir yn sylweddol gan driniaeth alcoholaidd yn y grŵp negyddol. Ond gall CDP-C wanhau'r newidiadau hyn a achosir gan roi alcohol. Fodd bynnag, nid yw pob mynegai serolegol yn dangos dull dos-ddibynnol gyda CDP-C. Yn Ffig. 4 A a B, mae CDP-C ar grynodiad isel yn cael effaith sylweddol ar adfer ALT ac ACP, ond nid oedd effaith CDP-C ar y crynodiad uchaf yn arwyddocaol. Mewn gwirionedd, mae llawer o gynhyrchion naturiol yn fuddiol i iechyd ar ddognau isel, ond yn niweidiol i iechyd ar ddognau uchel [60]. Efallai mai'r rheswm yw y bydd amlyncu gormodol o polysacaridau yn effeithio ar fetaboledd arferol organebau, er mwyn gwneud hynnyi gael effaith andwyol ar iechyd y corff. Fodd bynnag, mae angen ymchwilio ymhellach i'r mecanwaith manwl.

3.4.2. Effeithiau CDP-C ar ddangosyddion hepatig

Fel arfer, datblygodd organebau sy'n destun straen ocsideiddiol fecanwaith amddiffyn gwrthocsidiol, ac mae SOD yn system gwrthocsidiol nodweddiadol sy'n seiliedig ar ensymau [63]. Mae SOD yn cataleiddio dismutation anion superoxide i O2 a H2O2 [64]. Mae GST, protein hydawdd sydd wedi'i leoli yn y cytosol, hefyd yn chwarae rhan bwysig wrth ddadwenwyno'r afu. Am y rhesymau a grybwyllwyd uchod, mae SOD a GST yn dod yn ddangosyddion hepatowenwyndra a achosir gan alcohol. Mae MDA a TG yn yr afu hefyd yn cael eu defnyddio fel dangosyddion hepatotoxicity [65].

Yn yr astudiaeth bresennol, dangosir effeithiau CDP-C ar swyddogaeth yr afu yn Ffig. 5. Mae Llun A, B, C, a D yn arddangos effeithiau CDP-C ar SOD, MDA, GST, a TG, yn y drefn honno. Mae'r pedwar llun hyn yn dangos bod llygod sy'n cael eu trin ag alcohol yn gostwng lefelau SOD a GST yn sylweddol, ac yn cynyddu lefelau MDA a TG, ond mae'n amlwg y gall CDP-C wanhau'r newid hwn. Yn debyg i'r ffenomenau a ddangosir yn adran 3.4.1, nid oedd dangosyddion hepatig ychwaith mewn modd dibynnol ar ddos ​​gyda'r CDP-C. Gall y rheswm am hyn fod yn debyg i'r mecanwaith a ddangosir yn adran 3.4.1. Nododd astudiaethau blaenorol y gallai effeithiau polysacaridau ar SOD a catalase fod yn gysylltiedig ag ymsefydlu mynegiant genynnau o SOD a catalas [66]. Fodd bynnag, mae angen astudiaethau pellach o hyd i egluro mecanwaith hepatoprotective CDP-C a'r berthynas rhwng ei strwythur a'i swyddogaeth.

3.5. Effeithiau histopatholegol CDP-C ar lygod a achosir gan alcohol

Ar sail yr arsylwadau histopatholegol ar adrannau'r afu, dangosodd y grŵp naïf bensaernïaeth gellog arferol gyda chelloedd hepatig gwahanol a dim annormaleddau histologig (Ffig. 6 A). Mewn cymhariaeth, achosodd y weinyddiaeth alcohol niwed difrifol i'r afu yn llygod y grŵp negyddol. Roedd adrannau'r afu yn dangos dyddodiad braster hepatocyte, necrosis hepatocyte a chwyddo, ffurfio gwactod yn y celloedd, a diflannodd y ffiniau cellog hefyd (Ffig. 6 B). Mae'r rhannau afu o'r llygod a weinyddir gyda bicyclol (Ffig. 6 C), gyda dosau amrywiol o CDP-C (Ffig. 6 DF) arddangos yn amlwg adfer y ystumiadau hynny a ymddangosodd yn y grŵp rheoli negyddol. Dilysodd y canlyniadau hyn fod yr alcohol a achosir gan alcohol i raddau o afluniad mewn hepatocytes yn y grŵp rheoli negyddol. Fodd bynnag, adferodd CDP-C y newidiadau hyn.

Derbynnir yn dda bod effaith hepatoprotective polysacaridau yn gysylltiedig â'u gweithgaredd gwrthocsidiol [67, 68]. Profwyd bod y cynnwys asid wronig uchel yn fuddiol ar gyfer effeithiau gwrthocsidiol polysacaridau [44, 45]. Roedd polysacaridau sy'n gyfoethog mewn Gal ac Ara hefyd wedi'u gwirio i feddu ar effeithiau gwrthocsidiol uwch [46]. Fodd bynnag, mae'n anodd i polysacaridau moleciwlaidd mawr fynd i mewn i'r celloedd epithelial berfeddol yn uniongyrchol. Ar gyfer y CDP-C (gyda phwysau moleciwlaidd o 1300kDa), nid yw'n hawdd mynd i mewn i'r corff yn uniongyrchol a chwarae'r rôl hepatoprotective. Datgelodd adroddiadau cyhoeddedig fod pwysau moleciwlaidd y polysacaridau wedi gostwng ar ôl treuliad gastrig a berfeddol [69]. Felly, rhagdybiwyd y gallai CDP-C gael ei ddiraddio yn polysacaridau â phwysau moleciwlaidd isel a'i amsugno gan gelloedd epithelial berfeddol. Gellir cynyddu pennau lleihau polysacaridau oherwydd bod bondiau glycosidig yn chwalu [69, 70]. Yn ôl cyfansoddiad monosacarid CDP-C, dylai'r polysacaridau diraddiedig hynny â phwysau moleciwlaidd isel gynnwys GalUA, Ara, a Gal. Felly gall y polysacaridau pwysau moleciwlaidd isel hyn, sy'n meddu ar bennau rhydwytho ac sy'n cynnwys GalUA, Ara, a Gal, chwarae rôl amddiffyn yr afu yn y corff. Fodd bynnag, mae angen ymchwilio ymhellach i'r mecanwaith manwl.

4. Casgliadau

Yn ôl y dadansoddiadau cyfansoddiad monosacarid a sbectra FT-IR, roedd pob un o'r tri ffracsiwn o CDPs yn cynnwys Man, Rha, GalUA, Glc, Gal, ac Ara. Roedd CDP-C yn cynnwys cyfran fawr o GalUA. Roedd gan CDP-C y gweithgaredd gwrthocsidiol uchaf. Dangosodd canlyniadau ymchwil in vitro a Vivo fod gan CDP-C weithgaredd hepatoprotective yn erbyn anaf hepatig cronig a achosir gan alcohol. Roedd y mecanwaith sylfaenol yn ymwneud â modiwleiddio gweithgareddau ensymau cymharol, gan leihau MDA a TG yn yr afu. Efallai y bydd gweithgaredd ffisiolegol CDP-C yn gysylltiedig â GalUA. Mae'r canfyddiadau hyn yn rhoi mewnwelediad newydd i dargedau ffarmacolegol C. deserticola wrth atal clefyd yr afu alcoholig.

Llysieuyn Cistancheyn amddiffyn yIauayn gwella imiwnedd.

Am fwy o wybodaeth, cliciwch yma.