Sut Mae Apelin-13 yn Lliniaru Neffropathi Diabetig yn Effeithiol?

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Mae Apelin-13 yn lleddfu neffropathi diabetig trwy wella cynhyrchiant nitrig ocsid ac atal ffibrosis meinwe'r arennau

ZHUO GAO, XIN ZHONG, YING-XIA TAN & DONG LIU

Haniaethol

Mae diabetes yn glefyd metabolaidd difrifol, ac mae'r niwed i'r arennau a achosir gan ddiabetes hefyd yn effeithio'n ddifrifol ar oroesiad cleifion. Mae Apelin yn foleciwl sy'n chwarae rhan hanfodol mewn metaboledd lipid, ac mae astudiaethau diweddar wedi datgelu hynnyapelin-13, is-fath o apelin, yn chwarae rhan bwysig wrth reoleiddio lefelau glwcos yn y gwaed. Fodd bynnag, mae rôlapelin-13mewnneffropathi diabetigyn parhau i fod yn aneglur. Yn yr astudiaeth bresennol, model llygod mawr odiabetigneffropathiei adeiladu trwy chwistrelliad o streptozocin (STZ). Yn ystod y broses hon, chwistrellwyd y llygod mawr hynapelin-13. Pennwyd lefelau glwcos yn y gwaed, protein wrin, ac inswlin yn wythnosol. Nesaf, penderfynwyd mynegiant protein sy'n gysylltiedig â derbynnydd math 1 parth angiotensin (APJ), synthase nitrig ocsid endothelaidd (eNOS), E-cadherin, ac actin cyhyrau llyfn (a-SMA) ym meinweoedd yr arennau gyda blotio gorllewinol. Yna, cafodd celloedd endothelaidd pibellau glomerwlaidd eu meithrin â chyfrwng glwcos uchel. Cafodd y celloedd hyn eu trin âapelin-13am 24 h. Yn olaf, penderfynwyd hyfywedd celloedd y celloedd hyn a mynegiant APJ, eNOS.E-cadherin, a -SMA yn y celloedd hyn gyda blotio gorllewinol. O ganlyniad, triniaeth oapelin-13achosi lefelau is o glwcos yn y gwaed a phrotein wrin. Yn ogystal, mae cymhwysoapelin-13hyrwyddo cynhyrchu inswlin a lleddfu ymwrthedd i inswlin. Triniaeth gydaapelin-13hyrwyddo mynegiant APJ, eNOS, ac E-cadherin tra ei fod yn atal mynegiant -SMA ym meinweoedd arennau llygod mawr a chelloedd endothelaidd pibellau glomerwlaidd. Ymhellach, mae cymhwysoapelin-13hefyd yn hyrwyddo hyfywedd celloedd y celloedd hyn. I gloi,apelin-13rhyddhaddiabetigneffropathitrwy hybu cynhyrchu ocsid nitrig (NO) a lleddfu ffibrosis meinweoedd yr arennau.

Rhagymadrodd

Mae diabetes yn glefyd metabolig ac anhwylder metaboledd glwcos yw'r prif amlygiad clinigol(1). Mae astudiaethau blaenorol wedi nodi, oherwydd poblogrwydd dietau siwgr uchel a braster uchel a ffordd o fyw eisteddog unigolion, y rhagwelir y bydd nifer yr achosion o ddiabetes yn parhau i gynyddu yn yr ychydig flynyddoedd nesaf (2.,3). Mae dechrau diabetes yn aml yn cyd-fynd â niwed i sawl organ ac mae cleifion â diabetes hirdymor yn aml yn cael diagnosis o fethiant arennol difrifol (4,5). Nododd astudiaeth flaenorol fod 30 y cant o gleifion â diabetes math 1 a 25 y cant o gleifion â diabetes math 2 wedi datblygudiabetigneffropathi(6). Ar ben hynny, mae digwyddiad a datblygiaddiabetigneffropathiarwain at gynnydd mewn marwolaethau cleifion â diabetes.Diabetigneffropathi- podocyt arennol a achosir a niwed capilari yw'r prif ffactor sy'n effeithio ar oroesiad cleifion(7). Felly, datblygu triniaeth ar gyferdiabetigneffropathiyn hanfodol ar gyfer gwella cyfradd goroesi cleifion â diabetes.

Mae Apelin wedi'i leoli yn y rhanbarth cromosomaidd Xq25-26.1 ac wedi'i amgodio gan y genyn APLN (8) a dyma'r ligand mewndarddol o brotein sy'n gysylltiedig â derbynnydd angiotensin math 1 parth derbynnydd sy'n gysylltiedig â phrotein G (APJ), sef fel arfer yn cael ei secretu a'i gynhyrchu gan feinwe adipose gwyn (9). Mynegir Apelin a'i dderbynnydd APJ yn eang mewn meinweoedd amrywiol, gan gynnwys celloedd endothelaidd cerebellar, calon, a phibellau gwaed, yn enwedig yn y system gardiofasgwlaidd (10). Nodwyd Apelin fel adipokine sy'n gysylltiedig â metaboledd lipid mewn astudiaeth ddiweddar (11). Fodd bynnag, mae astudiaeth flaenorol wedi nodi bod apelin yn chwarae rhan hanfodol wrth reoleiddio homeostasis ynni'r corff, metaboledd glwcos a dŵr yn ogystal â swyddogaethau biolegol eraill(12). Datgelwyd mynegiant apelin yn flaenorol i wella ymwrthedd inswlin, atherosglerosis, a niwed fasgwlaidd a achosir gan ddiabetes(13). Fodd bynnag, datgelodd astudiaeth wahanol fod mynegiant apelin wedi arwain at ddigwyddiad a datblygiad retinopathi diabetig (14). Felly, mae rôl apelin yn achos a datblygiad cymhlethdodau sy'n gysylltiedig â diabetes yn parhau i fod yn aneglur.

Ar ben hynny, mae apelin yn bresennol fel gwahanol isdeipiau (apelin-36, apelin-17, aapelin-13)yn y corff trwy gneifio'r reticwlwm endoplasmig. Datgelwyd po fyrraf yw cadwyn peptid apelin, y cryfaf yw ei weithgaredd biolegol(15). Nododd astudiaeth flaenorol fod apelin yn gwella sensitifrwydd inswlin ac yn achosi lefelau siwgr gwaed is trwy leihau llid cronig mewn cleifion â diabetes math 2, a thrwy hynny wella metaboledd glwcos a lipid (16). Fodd bynnag, mae effaith apelin ardiabetigneffropathiyn ddadleuol ar hyn o bryd. Mae astudiaeth flaenorol wedi nodi bod lefelau apelin/APJ yn serwm cleifion âdiabetigneffropathiyn cael eu dyrchafu, gan hyrwyddo digwyddiad a datblygiaddiabetigneffropathi(17). Ar y llaw arall, datgelodd astudiaeth wahanol hynnyapelin-13gallai atal newidiadau morffolegol celloedd epithelial tiwbaidd arennol yn yr amgylchedd glwcos uchel, a thrwy hynny atal datblygiad a datblygiad y broses pontio epithelial-mesenchymal (EMT) mewn celloedd glomerwlaidd, ac yn y pen draw oedi rhag digwydddiabetigneffropathi(18). Felly, mae effaith apelin ar gymhlethdodau arennol a achosir gan ddiabetes yn parhau i fod yn aneglur.

Yn yr astudiaeth bresennol, mae rôlapelin-13yn y broses odiabetigneffropathiymchwiliwyd ymhellach trwy adeiladu model llygod mawr odiabetigneffropathi.

Cistanchetubulosayn atalarenclefyd, cliciwch yma i gael y sampl

Defnyddiau a dulliau

Profion anifeiliaid. Cafwyd cyfanswm o 30 o lygod mawr gwrywaidd Sprague Dawley (6-8wythnos oed;200-230g)gan y Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co.Ltd. ac wedi'i leoli mewn ystafell a reolir gan dymheredd (25 gradd ) ac ystafell benodol heb bathogen gyda lleithder cyson (40-50 y cant ) mewn cylch 12-h golau/tywyll a derbyniwyd bwyd a dŵr ad libitum am l wythnos . Yna rhannwyd y llygod mawr hyn yn gyfartal yn chwe grŵp (Rheoli, Model, Ap-E40, Ap-E400, Ap-L40, ac Ap-L400). Cafodd y llygod mawr yn y grŵp rheoli eu trin heb ddim. Cafodd llygod mawr y grwpiau eraill eu bwydo â diet uchel mewn siwgr a braster uchel (Thermo Fisher Scientific, Inc.) a derbyn chwistrelliad mewnwythiennol o streptosocin (STZ; 40 mg/kg; rhif cynnyrch S0130; Merck KGaA) bob wythnos. Ar ôl 3 wythnos, cafodd llygod mawr Ap-E40 ac Ap-E400 eu trinapelin-13(40 a 400 pmol/kg, yn y drefn honno; rhif cynnyrch A6469; Merck KGaA). Cyfanswm o 6 wythnos ar ôl y pigiad STZin, cafodd llygod mawr y grwpiau Ap-L40 ac Ap-L400 eu trin âapelin-13(40 a 400 pmol/kg, yn y drefn honno). Ar ôl wyth pigiad STZ, cafodd y llygod mawr eu ewthaneiddio â sodiwm pentobarbital (160 mg / kg, ip). Yn dilyn ewthanasia, casglwyd y serwm a'r organau. Canfuwyd pwysau'r llygod mawr gan ddefnyddio clorian electronig bob wythnos, o 1 wythnos cyn y pigiad STZ a hyd at ewthanasia. Canfuwyd lefelau glwcos yn y gwaed bob wythnos gan ddefnyddio mesurydd glwcos yn y gwaed (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Canfuwyd lefelau protein wrin hefyd gan ddefnyddio pecyn assay BCA (cat.no. P0012S; Beyotime Institute of Biotechnology) bob wythnos. Roedd yr inswlin serwm ymprydio hefyd yn cael ei ganfod bob wythnos gan ddefnyddio pecyn masnachol (cat.no.RAB0904; Merck KGaA) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Cyfrifwyd y mynegai ymwrthedd inswlin gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol: (Lefelau inswlin yn y gwaed x lefelau glwcos yn y gwaed)/22.5. Perfformiwyd yr holl arbrofion yn unol â'r Canllaw ar gyfer Gofalu a Defnyddio Anifeiliaid Labordy 8fed argraffiad(19) a chymeradwywyd (rhif cymeradwyaeth.2020-79-PJO1) gan Bwyllgor Moeseg Canolfan Feddygol yr Awyrlu (Beijing, Tsieina) .

Canfod nitrogen wrea gwaed (BUN) a creatinin serwm (Ser). Pennwyd lefelau BUN (cat.no.ml076479) a Scr (cat. no.ml059158) yn y gwaed gan ddefnyddio citiau masnachol (Shanghai Enzyme-linked Biotechnology Co., Ltd.) ar ôl 3 ac 8 wythnos o chwistrelliad STZ, yn y drefn honno . Perfformiwyd pob cam o'r assay hwn yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.

Canfod ocsid nitrig(NO), angiotensin II (Ang Il), ac endothelin-1(ET-1). Canfuwyd lefelau NO, Ang II, ac ET-1 yn y serwm a meinweoedd neffridial gan ddefnyddio NO kit (cat.no. S0021; Beyotime Institute of Biotechnology), Ang II kit (cynnyrch rhif. RAB0010; Merck KGaA ), a ET-1 kit (cat.no.E-EL-R1458c; Elabscience Biotechnology, Inc.). Perfformiwyd pob cam o'r profion yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.

Staenio hematocsilin ac eosin (H&E). Yn dilyn ewthanasia, casglwyd meinweoedd yr arennau a'u golchi â halwynog byffer ffosffad wedi'i oeri ymlaen llaw (PBS). Yna cafodd yr aren ei gwahanu a'i gosod gyda 4 y cant o baraformaldehyd dros nos ar dymheredd ystafell. Cafodd y meinweoedd arennau wedi'u mewnblannu â pharaffin eu torri'n adrannau 5-um. Nesaf, cafodd yr adrannau hyn eu dadhydradu mewn hydoddiant ethanol 70 a 90 y cant am 10 munud yr un. Yn olaf, perfformiwyd staenio H&E ar dymheredd ystafell am 3 munud i ganfod newidiadau patholegol. Perfformiwyd pob cam o'r assay hwn yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr o'r pecyn staenio H&E (cat.no.C0105S; Beyotime Institute of Biotechnology).

Imiwnohistocemeg. Cynhaliwyd imiwnohistocemeg gan ddefnyddio'r dull peroxidase / DAB safonol a gwrth-staenio hematocsilin yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Ar ôl cael ei rwystro ag albwmin serwm buchol 5 y cant (BSA; Sefydliad Biotechnoleg Beyotime) am 20 munud ar dymheredd yr ystafell, cafodd adrannau eu deor â gwrthgorff cynradd gwrth-APJ (cat.no.PA5-114830; Thermo Fisher Scientific, Inc. . dros nos ar 4 gradd . Ar ôl golchi PBS, deorwyd y darnau â gafr gwrth-cwningen marchruddygl peroxidase-cyfunedig gwrthgorff eilaidd (cod cynnyrch ab6721; 1:1,000; Abcam) ar 4C am 50 munud, wedi'i ddilyn gan y Golchi PBS Yna, cafodd yr adrannau eu trin â hydoddiant DAB a'u gwrth-staenio â hematocsilin ar dymheredd ystafell am 5 munud.Yn olaf, cafwyd y delweddau gan ddefnyddio microsgop golau (Olympus Corporation).

Meithriniad celloedd a thriniaeth. Cafwyd llinell celloedd endothelaidd microfasgwlaidd glomerwlaidd arennol dynol (hRGEC) gan y BioVector NTCC, Inc. a'i meithrin mewn cyfrwng RPMI-1640 (Thermo Fisher Scientific, Inc., wedi'i ategu â serwm buchol ffetws (FBS) o 10 y cant mewn llaith). aer ar 37 gradd C gyda 5 y cant CO Rhannwyd y celloedd hyn yn grwpiau rheoli, model, Ap-L (Apelin-isel), ac Ap-H (Apelin-uchel) Model, Ap-L, ac Ap-H grŵp cafodd celloedd eu meithrin mewn cyfrwng glwcos uchel (25 mmol/l: Cytiva) RPMI-1640, a chafodd celloedd grŵp rheoli eu meithrin mewn RPMI-1640canolig gyda chynnwys glwcos arferol (5.5 mmol/l). Cafodd celloedd Ap-Lgroup eu trin â lefelau isel oapelin-13（0.1 μmol/） a chelloedd Ap-Hgroup eu trin â lefelau uchel oapelin-13(1 μmol/).

Arbrawf ffurfio tiwbiau. Penderfynwyd ar ffurfiant tiwbiau mewn celloedd hRGEC gan ddefnyddio cit masnachol (rhif cynnyrch K905-50; AmyJet Scientific, Inc). Cafwyd yr holl ddelweddau gan ddefnyddio microsgop golau (chwyddiad, x4; Olympus Corporation). Perfformiwyd pob cam o'r assay hwn yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.

Assay.hRGECcells o wahanol grwpiau wedi'u platio i dri phlât ffynnon (2.5x104/wel). Ar ôl 24,48 a 72 h o ddeor ar 37 gradd .10 ul CCK-8 adweithydd (Dojindo Molecular Technologies, Inc.) ei wanhau â'r cyfrwng diwylliant a'i ychwanegu at y 96-blatiau ffynnon. Nesaf, gosodwyd y celloedd hyn mewn deorydd am 1 h. Yn olaf. canfuwyd amsugnedd y celloedd hyn gan ddefnyddio sbectroffotomedr (Thermo Fisher Scientific, Inc.) ar donfedd o 450nm.

Blotio gorllewinol. Casglwyd cyfanswm y proteinau o feinwe neffridial a chelloedd hRGEC gan ddefnyddio byffer lysis RIPA (Santa Cruz Biotechnology, Inc.). Pennwyd crynodiad protein gan ddefnyddio pecyn assay BCA. Nesaf, gwahanwyd symiau cyfartal o brotein (40 ugs) trwy electrofforesis gel dodecyl sylffad-polyacrylamid 10 y cant (SDS-PAGE) (Sefydliad Biotechnoleg Beyotime) a'i drosglwyddo i bilen fflworid polyvinylidene (PVDF) (EMD). Millipore). a gafodd ei rwystro ag albwmin serwm buchol 5 y cant (BSA) (Sefydliad Biotechnoleg Beyotime) ar 37 gradd am 1.5 h. Yna deorwyd y pilenni gyda'r gwrthgyrff cynradd canlynol ar 4 gradd dros nos: derbynnydd math 1 Ang II (AT1R: 1: 1, 000; cod cynnyrch ab124734; Abcam), endothelaidd NO synthase (eNOS; 1: 1, 000; cod cynnyrch ab5589; Abcam), APJ(1:1,000; cat.no.PA5-114830; Thermo Fisher Scientific, Inc), trawsnewid derbynnydd ffactor twf (TGBR: 1:1.000; cod cynnyrch ab97459; Abcam), E-cadherin (1:1, 000: cod cynnyrch ab212059; Abcam), -actin cyhyrau llyfn ( -SMA; 1:1. 000: rhif cynnyrch 19245; Cell Signaling Technology, Inc.) a GAPDH(1:2,500; cod cynnyrch ab9485; Abcam). Yn dilyn y deoriad gwrthgyrff cynradd, golchwyd y pilenni â PBS-Tween-20(0.1 y cant ) a'u deor â gwrthgorff cyfun HRP(1:2,{{{000; cod cynnyrch ab6721; Abcam) am 2 awr) ar dymheredd ystafell(7) Yn olaf, aseswyd y signalau imiwn-adweithiol gan ddefnyddio pecyn Pierce ECL Western Blotting Substrate (Thermo Fisher Scientific, Inc.) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Mesurwyd dwyster cymharol yr imiwnoblotiau gyda delweddwr moleciwlaidd Versa Doc MP 5000 a meddalwedd Meintiau Un (fersiwn 4.6) (y ddau gan Bio-Rad Laboratories, Inc.).

Dadansoddiad ystadegol. Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol gan ddefnyddio Graph Pad Prism 7.0(GraphPad Software, Inc.). Defnyddiwyd profion t Myfyrwyr heb eu paru i gymharu dau grŵp. Aseswyd cymariaethau rhwng gwahanol grwpiau gan ddefnyddio ANOVA un ffordd ac yna prawf posthoc Tukey. Cyflwynir yr holl ddata fel y gwyriad safonol cymedrig ± (SD) a chafodd yr holl arbrofion eu hailadrodd dair gwaith. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Canlyniadau

Apelin-13lleihau pwysau a lefelau glwcos yn y gwaed a chynyddu lefelau inswlindiabetigneffropathillygod mawr am 8 wythnos. Canfuwyd pwysau a lefelau glwcos gwaed llygod mawr yn wythnosol yn ystod y broses o'u codi. Datgelodd y canlyniadau (Ffig.1A a B) na chafodd pwysau a lefelau glwcos gwaed y llygod mawr yn y grwpiau Ap-E40 ac Ap-E400 eu newid yn sylweddol ar ôl y pigiad oapelin-13am 3 wythnos. Gostyngwyd yr un paramedrau yn llygod mawr y grwpiau Ap-L40 ac Ap-L400 ar ôl yapelin-13pigiad yn 8 wythnos o'i gymharu â hynny ar 3 wythnos. Gostyngodd lefelau inswlin yn y gwaed hefyd ar ôl yapelin-13pigiad ar ôl 8 wythnos o gymharu â chwistrelliad 3 wythnos (Ffig.1C).

Apelin-13therapi yn gwella swyddogaeth arennoldiabetigneffropathillygod mawr. Roedd y lefelau BUN a Scr uwch yn dangos bod anafiadau arennol yn digwydd ac yn datblygu (20). Datgelwyd bod lefelau BUN a Scr yn uwch ar ôl yapelin-13pigiad yn 8 wythnos o'i gymharu â hwnnw ar 3 wythnos (Ffig. 2A). Yn yr un modd, datgelodd cynnwys protein wrinol a graddau anaf patholegol meinweoedd arennol yr un tueddiadau (Ffig.2B a C).

Apelin-13yn lleddfudiabetigneffropathitrwy fodiwleiddio cynhyrchiad NO, Angel ac ET-1. Canfuwyd mynegiant APJ a datgelodd y canlyniadau (Ffig.3A) fod mynegiant APJ ym meinweoedd arennol llygod mawr wedi lleihau ar ôl yapelin-13pigiad yn 8 wythnos o'i gymharu â hynny ar 3 wythnos. NA allai cynhyrchu leddfu'rdiabetigneffropathi- difrod fasgwlaidd a achosir yn y meinwe arennol (21). Felly, canfuwyd cynhyrchu NO, Ang II, ac ET-1 yn y meinweoedd arennol. Datgelodd y canlyniadau bod lefelau NO wedi gostwng ar ôl y pigiad oapelin-13ar 8 wythnos o gymharu â 3 wythnos. Fodd bynnag, mae lefelau Ang II ac ET-1 wedi cynyddu ar ôl y pigiad oapelin-13ar 8 wythnos o gymharu â 3 wythnos (Ffig.3B ac C). Nesaf, canfuwyd mynegiant eNOS ac AT1R gan blotio gorllewinol. Fel y datgelwyd yn Ffig.4A, cafodd mynegiant AT1R ei atal ar ôl y pigiad oapelin-13yn 3 ac 8 wythnos o gymharu â'r grŵp model, yn y drefn honno. Cynyddwyd lefelau eNOS ar ôl y pigiad oapelin-13yn 3 ac 8 wythnos o gymharu â'r grŵp model.

Apelin-13yn lleddfudiabetigneffropathitrwy fodiwleiddio mynegiant ATIR, eNOS nitrig endothelaidd, a phroteinau sy'n gysylltiedig â ffibrosis arennol yn llwybr APJ. Cynyddwyd mynegiant APJ a lleihawyd mynegiant TGBR ar ôl y pigiad oapelin-13yn 3 ac 8 wythnos o gymharu â'r grŵp model. Canfuwyd lefelau mynegiant y proteinau sy'n gysylltiedig â ffibrosis, E-cadherin a -SMA, a datgelodd y canlyniadau fod mynegiant E-cadherin wedi'i wella a bod lefelau a-SMA wedi gostwng ar ôl y pigiad oapelin-13yn 3 ac 8 wythnos o gymharu â'r grŵp model (Ffig. 4B).

Apelin-13yn hyrwyddo amlhau a ffurfio tiwbiau ac yn modiwleiddio mynegiant proteinau sy'n gysylltiedig â ffibrosis arennol yn y llwybr APJ mewn celloedd endothelaidd fasgwlaidd arennol uchel a achosir gan glwcos yn y tymor byr. Cafodd celloedd hRGEC eu meithrin yn y cyfrwng glwcos uchel am 24,48 a 72 h. Nesaf, cynhaliwyd asesiad CCK i ganfod hyfywedd celloedd. Datgelodd y canlyniadau (Ffig.5A) y driniaeth honno gydaapelin-13hyrwyddo hyfywedd celloedd. Mae cais oapelin-13hefyd yn hyrwyddo ffurfio lumen (Ffig.5B). Ar 24 awr oapelin-13triniaeth, datgelwyd bod lefelau mynegiant APJ, eNOS, ac E-cadherin wedi cynyddu a bod lefelau TGBR, ATIR, a -SMA wedi gostwng o gymharu â'r grŵp model (Ffig. 5C).

Apelin-13yn atal amlhau a ffurfio tiwbiau ac yn modiwleiddio mynegiant proteinau sy'n gysylltiedig â ffibrosis arennol yn y llwybr APJ mewn celloedd endothelaidd fasgwlaidd arennol uchel a achosir gan glwcos hirdymor. Cafodd celloedd eu trin â chyfrwng glwcos uchel am 72 a 96 h, ac ymyrraeth âapelin-13cychwyn o 72 h. Ar ôl 24 h, datgelodd canlyniadau assay CCK-8 bod cymhwysoapelin-13atal hyfywedd celloedd o'i gymharu â'r grŵp model (Ffig.6A). Cafodd ffurfiant lumen ei atal yn dilyn triniaeth gydaapelin-13(Ffig.6B).Yn ogystal. triniaeth gydaapelin-13hefyd yn hyrwyddo mynegiant APJ, eNOS, ac E-cadherin o gymharu â'r grŵp model. Mae cais oapelin-13hefyd yn atal mynegiant TGBR, AT1R, ac a-SMA (Ffig.6C) o gymharu â'r grŵp model mewn modd sy'n dibynnu ar ddos.

Ffigur 1. Mae Apelin-13 yn lleddfu ymwrthedd i inswlin llygod mawr.(A) Canfuwyd pwysau llygod yn wythnosol. (B) Canfuwyd lefelau glwcos yn y gwaed yn wythnosol. "P-<0.001 vs.the="" control="" group.=""><><0.01 and=""><0.001 vs.the="" model="" group.(c)levels="" of="" insulin="" were=""><0.05,"p-0.01><0.001 vs.the="" after="" intervention="" 3w="">

Ffigur 2. Mae trin apelin-13 yn lleddfu niwed i arennau llygod mawr a achosir gan ddiabetes.(A) Canfuwyd lefelau nitrogen wrea gwaed a creatinin serwm. (B) Canfuwyd y cynnwys protein wrinol yn wythnosol. (C) Canfuwyd anaf i feinweoedd yr arennau gyda'r staen hematocsilin ac eosin (chwyddiad.x200), P<0.01, and="" p-0.001="" ys.the="" after="" intervention="" 3w="" group.bun.blood="" urea="" nitrogen:="" scr,="" serum="">

Ffigur 3. Mae Apelin-13 yn actifadu mynegiant APJ.(A) Canfuwyd mynegiant APJ ym meinweoedd yr arennau gyda'r profion imiwn-histocemegol (chwyddiad, x200). (B) Canfuwyd cynhyrchu NO gyda'r citiau masnachol. (C) Roedd lefelau Ang Il ac ET-I yn benderfynol gyda chitiau masnachol. ”P<0.01><0.001 vs.="" the="" after="" intervention="" 3w="" group.apj,="" angiotensin="" domain="" type="" 1="" receptor-associated="" proteins;="" no,="" nitric="" oxide;="" ang="" i,="" angiotensin="" ii;="">

Ffigur 4. Mae cymhwyso apelin-13 yn hybu mynegiant eNOS.(A) Canfuwyd mynegiant ATIR andeNOS gyda'r blotio gorllewinol. (B) Canfuwyd lefelau APJ, TGBR, E-cadherin, ac a-SMA ym meinweoedd arennau llygod mawr gyda blotio gorllewinol.'P<><0.01><0.001.enos, endothelial="" nitric="" oxide="" synthase;="" at1r,="" ang="" ii="" type="" i="" receptor;="" apj,="" angiotensin="" domain="" type="" 1="" receptor-associated="" proteins;="" tgbr,="" transforming="" growth="" factorβreceptor;="" α-sma,="" α-smooth="" muscle="">

Mae Ffigur 5.Apelin-13 yn lleddfu'r anaf uwch a achosir gan glwcos i gelloedd endothelaidd pibellau glomerwlaidd.(A)Canfuwyd hyfywedd celloedd gyda'r assay Kit Counting Kit-8. (B) hRGECs eu canfod gyda'r arbrofion ffurfio lumen (chwyddiad, x4). (C) Penderfynwyd ar fynegiant AT1R.eNOS, APJ, TGBR, E-cadherin, ac a-SMA yn y celloedd hyn gyda'r blotio gorllewinol,' P-0.05."P<0.01><0.001. atir.="" ang,="" i="" type="" 1="" receptor:="" enos,="" endothelial="" nitric="" oxide="" synthase;="" apj,="" angiotensin="" domain="" type="" i="" receptor-associated="" proteins;="" tgbr,="" transforming="" growth="" factor="" βreceptor;a-sma,α-smooth="" muscle="">

Ffigur 6. Mae Apelin-13 yn lleddfu anafiadau i gelloedd endothelaidd pibellau glomerwlaidd trwy atal ffibrosis.(A) Pennwyd hyfywedd celloedd celloedd endothelaidd o lestri glomerwlaidd gyda -8assay KitCounting Kit. (B) darganfuwyd hRGECs gyda'r arbrofion ffurfio lwmen (chwyddiad, x4). (C) Pennwyd lefelau AT1R, eNOS, APJ, TGBR.E.-cadherin, ac a-SMAin y celloedd hyn gyda blotio gorllewinol."P-<><0.01><0.001.stir. ang="" iitype="" 1receptor;enos,="" endothelial="" nitric="" oxide="" synthase;="" apjangiotensin="" domain="" type="" 1="" receptor-associated="" proteins;="" tgbr,="" transforming="" growth="" factorβreceptor;α-sma,a-smooth="" muscle="">

Trafodaeth

Mae diabetes yn glefyd metabolig ac anhwylder metaboledd glwcos yw ei brif amlygiad clinigol. Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae nifer yr achosion o'r clefyd hwn wedi bod yn cynyddu'n gyson (22). Mae diabetes yn arwain at ddifrod a chamweithrediad nifer o organau. Niwed i'r arennau a achosir gan ddiabetes yw un o'r achosion mwyaf amlwg o farwolaethau mewn cleifion â diabetes (23). Y prif amlygiadau clinigol odiabetigneffropathiwedi cael eu datgelu i fod yn broteinwria a dirywiad parhaus mewn swyddogaeth arennol (24). Yn ogystal, mae digwyddiad a datblygiaddiabetigneffropathiwedi'u datgelu i hyrwyddo datblygiad clefyd cardiofasgwlaidd (25). Felly, yr angen i ddatblygu therapi newydd i atal y difrod a achosir gandiabetigneffropathimewn cleifion yn frys.

Mae apelin yn ffactor braster mewn meinweoedd adipose. Nododd astudiaeth ddiweddar y gallai apelin leddfu amlygiadau clinigol cleifion â diabetes trwy reoleiddio lefelau glwcos yn y gwaed (26). Nododd astudiaeth ddiweddar arall y gallai apelin-36 atal secretiad inswlin a achosir gan glwcos crynodiad uchel (16.7 mmol/), ond nad oedd yn cael unrhyw effaith ar secretion inswlin a achosir gan glwcos crynodiad isel (2.8 mmol/)(27). Yng nghyrff llygod gordew ac sy'n gwrthsefyll inswlin, gallai apelin leddfu ymwrthedd inswlin ac adfer y defnydd o glwcos yn y corff (28). Fodd bynnag, ym maesdiabetigneffropathi, nododd astudiaeth ddiweddar fod lefelau apelin a'i dderbynnydd APJ yn serwm cleifion âdiabetigneffropathiwedi cynyddu, ac roedd lefelau uwch o apelin ac APJ yn hybu ffurfio pibellau gwaed ac yn achosi cynnydd mewn capilarïau glomerwlaidd, a thrwy hynny hyrwyddo datblygiad a digwyddiaddiabetigneffropathi(29). Fodd bynnag, nododd astudiaeth wahanol hynny hefydapelin-13gallai atal trawsnewid celloedd epithelial tiwbaidd arennol mewn amgylchedd glwcos uchel, a thrwy hynny atal datblygiad a datblygiad y broses EMT mewn celloedd glomerwlaidd, gan oedi yn y pen draw rhag digwydddiabetigneffropathi(30).Yn yr astudiaeth bresennol, dangoswyd bod y defnydd oapelin-13gostwng lefelau glwcos yn y gwaed a lleddfu ymwrthedd inswlin yn y llygod mawr hyn. yn ogystal â lleihau'r cynnwys protein wrinol.Apelin-13roedd triniaeth hefyd yn lleddfu'r difrod sylweddol a achosir gan glwcos yng nghelloedd endothelaidd pibellau glomerwlaidd. Gyda'i gilydd, roedd y canlyniadau hyn yn dangos bod y defnydd oapelin-13lleddfu yr amlygiadau odiabetigneffropathi.

Datgelodd astudiaeth flaenorol y gallai apelin leihau cynnwys glwcos yn y gwaed trwy reoleiddio mynegiant eNOS ac actifadu llwybr Akt (31). Gallai mynegiant apelin hefyd gynhyrchu NA trwy actifadu APJ, gan leddfu'r amlygiadau clinigol odiabetigneffropathi(32).APJ yw derbynnyddapelin-13, aapelin-13gallai gael ei effeithiau biolegol trwy rwymo i'r APJ (33). Yn yr astudiaeth bresennol, canfuwyd cynhyrchu NO a mynegiant eNOS ac APJ hefyd. Datgelwyd bod lefelau mynegiant eNOS ac APJ wedi'u gwella ym meinweoedd arennol a chelloedd endothelaidd pibellau glomerwlaidd yn dilyn triniaeth âapelin-13. DIM gynhyrchiad hefyd ei wella ym meinweoedd arennol llygod mawr yn dilyn triniaeth gydaapelin-13. Roedd y canlyniadau hyn yn dangos hynnyapelin-13hyrwyddo mynegiant eNOS trwy actifadu APJ. Felly, roedd lefelau uwch o eNOS yn gwella cynhyrchiant NO, gan hyrwyddo athreiddedd fasgwlaidd a hidlo arennol yn y pen draw.

Mae astudiaethau diweddar wedi nodi bod ffibrosis arennol yn nodweddiadol odiabetigneffropathi(34,35). Datgelodd canlyniadau'r astudiaeth bresennol fod mynegiant E-cadherin wedi'i wella mewn celloedd a meinweoedd arennol yn dilyn triniaeth gydaapelin-13, tra gostyngwyd swm a-SMA.Apelin-13datgelwyd triniaeth hefyd i liniarudiabetigneffropathitrwy atal ffibrosis meinweoedd arennol a chelloedd endothelaidd pibellau glomerwlaidd.

I gloi, adroddodd yr astudiaeth bresennol effeithiauapelin-13ar ddatblygiaddiabetigneffropathi. Datgelodd canlyniadau'r astudiaeth bresennol hynnyapelin-13lleddfudiabetigneffropathitrwy hybu cynhyrchu NO a lleddfu ffibrosis mewn meinweoedd arennol. Fodd bynnag, mae gan yr astudiaeth bresennol gyfyngiad hefyd. Mae straen ocsideiddiol a llid yn chwarae rhan bwysig yn natblygiaddiabetigneffropathi(36-40). P'un aiapelin-13gwellaneffropathi diabetigdrwy leihau llid a straen ocsideiddiol yn haeddu ymchwiliad yn ein hastudiaeth yn y dyfodol.

Cyfeiriadau

1. Mae Yu SY, Dong B, Fang ZF, Hu XQ, Tang L, a Zhou SH: Knockdown o lncRNA AK139328 yn lleddfu isgemia myocardaidd/anaf atdlifiad mewn llygod diabetig trwy fodiwleiddio miR-204-3p ac atal awtophag. J Cell Mol Med 22:4886-4898."2018.

2. Rowley WR a Bezold C: Creu ymwybyddiaeth y cyhoedd: Nodwch 2025 rhagolygon diabetes.Popul Health Manag 15: 194-200.2012,

3. Rowley WR. Bezold C.Arikan Y, Byrne E a Krohe S: Diabetes 2030: Mewnwelediadau o ddoe, heddiw, a thueddiadau'r dyfodol. Manag Iechyd y Bobl 20; 6-12.2017.

4. Cymdeithas Diabetes America: Safonau gofal meddygol mewn diabetes-2014.Gofal Diabetes 37(Suppl 1): S5-S13.2014.

5. Ahlqvist E, van Zuydam NR, Groop LC a McCarthy MI: Geneteg cymhlethdodau diabetig. Nat Parch Nephrol 11:277-287. 2015.

6. Navarro-Gonzalez JF, Jarque A, Muros M, Mora C, a Garcia J: Tiwmor necrosis ffactor-alffa fel targed therapiwtig ar gyferdiabetigneffropathi.Ffactor Twf Cytokine Parch 20; 165-173.2009.

7. Alvarez ML a Distefano JK: Rôl RNAs nad ydynt yn codio yndiabetigneffropathi: Cymwysiadau posibl fel biofarcwyr ar gyfer datblygu a dilyniant clefydau. Diabetes Res Clin Pract 99:1-11,2013.

8.Del Ry S,Cabiati M, Raucci S, Simioniuc A, Caselli C, Prescimone T a Giannessi D: Dilyniant a mynegiant cardiaidd o Apelin yn Sus Scrofa. Pharmacol Res 60: 314-319,2009.

9, Fasshauer M a Bluher M: Adipokines mewn iechyd ac afiechyd. Tueddiadau Pharmacol Sci 36: 461-470.2015.

10. Lv D, LiH a Chen L: Apelin ac APJ, ffactor critigol newydd a tharged therapiwtig ar gyfer atherosglerosis. Pechod Bioffys Acta Biochim(Shanghai) 45 527-533.2013.

11. Wysocka MB. Pietraszek-Gremplewicz K a Nowak D: Rôl apelin mewn clefydau cardiofasgwlaidd, gordewdra, a chanser. Ffisiol Blaen 9: 557.2018.

12.Sentinelli F, Capoccia D., Bertoccini L, Barchetta I, Incani M, Coccia F, Manconi E, Lenzi A, Cossu E.Leonetti F, et al: Chwilio am amrywiad genetig yn y genyn apelin trwy ddilyniannu a chysylltiad astudiaeth mewn pynciau Ewropeaidd, Genet Test Mol Biomarkers 20;98 102,2016.

13. Onalan E, Yakar B, Barim AO, a Gursu MF: Serwm apelin a lefelau resistin mewn cleifion â nam ar y glwcos ymprydio, goddefgarwch glwcos â nam, diabetes math 2, a syndrom metabolig. Endokrynol Pol 71:319-324,2020.

14. Adki KM a Kulkarni YA: Biomarcwyr posibl mewn retinopathi diabetig. Curr Diabetes Rev 16: 971-983.2020.

15. Wu R, Zhu Zand Zhou D: VEGF, apelin, a HO-1 mewn cleifion diabetig â retinopathi: Dadansoddiad cydberthynas.BMC Ophthalmol 20: 326.2020.

Nodyn:nid yw'r uchod yn rhestr gyfeirio lawn