Mae Amsugniad Sytocin yn Ystod Darlifiad Arennau Dynol yn Lleihau Oedi mewn Gweithrediad Graft - Llofnod Genynnau Llidiol sy'n Gysylltiedig

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

John R. Ferdinand1,2|Sarah A. Hosgood2,3|Tom Moore2,3|Ashley Ferro1|Christopher J. Ward1|Tomas Castro-Dopico1|Michael L. Nicholson2,3|Menna R. Clatworthy1,2

1 Uned Imiwnedd Moleciwlaidd, Adran Feddygaeth Prifysgol Caergrawnt, Labordy Bioleg Foleciwlaidd, Caergrawnt, DU

2 Sefydliad Cenedlaethol dros Ymchwil Iechyd Uned Ymchwil Gwaed a Thrawsblaniadau mewn Rhoi Organau, Caergrawnt, DU

3 Adran Llawfeddygaeth Prifysgol Caergrawnt, Caergrawnt, DU

Trawsblannu yw'r driniaeth optimaidd ar gyfer y rhan fwyaf o gleifion â chyfnod olafarenclefydond mae prinder organau yn her fawr. Mae darlifiad peiriant normothermig (NMP) wedi'i ddefnyddio i atgyweirio organau ymylol; fodd bynnag, nid oes dealltwriaeth dda o'r mecanweithiau y gallai NMP eu defnyddio i fod o fudd i organau. Gan ddefnyddio parau o arennau dynol a gafwyd gan yr un rhoddwr, gwnaethom gymharu effaith NMP ag effaith storio oer ar y byd-eangarentrawsgrifiad. Canfuom fod storio oer wedi arwain at ostyngiad byd-eang mewn mynegiant genynnau, gan gynnwys genynnau llwybr llidiol a'r rhai sy'n ofynnol ar gyfer prosesau cynhyrchu ynni, megis ffosfforyleiddiad ocsideiddiol (OXPHOS). Mewn cyferbyniad, yn ystod yr NMP, bu dadreoleiddio amlwg o enynnau OXPHOS, ond hefyd nifer o enynnau llwybr imiwnedd ac ymfflamychol. Gan ddefnyddio biopsïau o arennau sy'n cael NMP a gafodd eu trawsblannu wedyn, canfuom fod mynegiant genynnau llidiol uwch yn digwydd mewn organau â swyddogaeth impiad oedi hir (DGF). Felly, defnyddiwyd hem-adsorber (HA) i gael gwared ar cytocinau pro-llidiol. Cynyddodd y mynegiant genynnau llidiol gwanedig hwn enynnau llwybr OXPHOS a chafodd effeithiau a allai fod yn glinigol bwysig wrth leihau mynegiant llofnod genyn sy'n gysylltiedig â DGF. Gyda'i gilydd, mae ein data'n awgrymu bod arsugniad cyfryngwyr pro-llidiol o'r darlifiad yn ymyriad posibl a allai wella hyfywedd organau.

GEIRIAU ALLWEDDOL:ymchwil / ymarfer clinigol, gweithrediad impiad gohiriedig (DGF), rhoddwyr a rhoddwyr: ymadawedig,aren(alograft) swyddogaeth / camweithrediad,arenclefyd: imiwn / ymfflamychol, aren

Perlysiau Cistanche yn gwella gweithrediad yr arennau

1. RHAGARWEINIAD

Arennautrawsblannu yw'r driniaeth optimaidd ar gyfer y rhan fwyaf o gleifion âdiwedd cyfnodarenclefyd, gyda manteision o ran ansawdd a maint bywyd.1 Mae prinder organau yn her fawr, a defnyddiwyd sawl strategaeth i gynyddu nifer yr arennau sydd ar gael, gan gynnwys y defnydd o roddwyr marw cylchrediad gwaed marw (DCD) a rhoddwyr meini prawf estynedig (ECD). ), y mae'r ddau ohonynt yn gysylltiedig â chyfraddau uwch o oedi wrth weithrediad impiad (DGF) o'i gymharu â rhoddwr marw coesyn yr ymennydd (DBD) ymadawedig.2,3 Mewn arennau DCD, mae amlygiad i isgemia cynnes yn ystod y broses o roi'r gorau i gylchrediad y gwaed yn cyfrannu'n sylweddol at DGF . Mae DGF yn digwydd oherwydd difrod celloedd tiwbaidd isgemig neu farwolaeth, a all ysgogi actifadu imiwnedd cynhenid ​​trwy gynulliad llidus NLRP3 gan arwain at gynhyrchu interleukin (IL)1 ac IL18.4-6 Yn wir, mae presenoldeb cytocinau llidiol mewn wrin wedi bod. ei ddefnyddio fel biomarcwr oacíwtarenanafa DGF.7-9

Mae darlifiad peiriant normothermig (NMP) yn caniatáu i organau sydd wedi'u trawsblannu gael eu darlifo â chelloedd gwaed coch cynnes, ocsigenedig, yn absenoldeb cydrannau imiwn sy'n cylchredeg, gan gynnwys cyflenwad a niwtroffiliau.10-14 Mae'r broses hon wedi'i defnyddio i asesu organau ymylol15 ac i " "atgyweirio" organau i hwyluso trawsblannu arennau a wrthodwyd i ddechrau yn dilyn cynnig drwy wasanaeth dyrannu organau cenedlaethol.16 Darparodd ein profiad blaenorol o ddefnyddio NMP y rhesymeg ar gyfer hap-dreial rheoledig i asesu ei effeithiolrwydd o ran atal DGF mewn arennau DCD,17 ond ni ddeellir yn llawn y mecanweithiau y gallai NMP eu defnyddio i fod o fudd i arennau trawsblannu. Ymhellach, mae'r cwestiwn a yw triniaeth ychwanegol o'rarenyn ystod NMP, er enghraifft trwy dynnu cytocinau pro-llidiol a chemocinau o'r darlifiad, efallai y byddai buddion ychwanegol o ran optimeiddio'r organ cyn trawsblannu heb gael sylw yn yr arennau dynol, ond dangosodd ein hastudiaeth o NMP mochyn ganlyniadau addawol.18

Yma fe wnaethom fabwysiadu ymagwedd ddiduedd i fynd i'r afael â'r ddau gwestiwn hyn gan ddefnyddio dadansoddiad trawsgrifomig o ddynolarenbiopsïau a gymerir ar ddechrau a diwedd yr NMP i asesu newidiadau byd-eang mewn mynegiant genynnau. Defnyddiwyd parau o arennau dynol gan un rhoddwr i alluogi cymhariaeth o effaith ymyriadau gwahanol mewn organau â chefndir genetig union yr un fath ac roeddem yn gallu asesu effaith y newidiadau hynny ar ragfynegiad o ganlyniad impiad.

Budd echdynnu Cistanche: atal acíwtarenanaf

2. CANLYNIADAU

2.1. Mae arennau pâr yn debyg yn enetig ac yn fodel defnyddiol ar gyfer asesu ymyriadau

Fe wnaethom ymchwilio i'r newidiadau trawsgrifio sy'n gysylltiedig â chadwraeth organau ac NMP mewn dwy astudiaeth annibynnol, pob un â phum pâr o arennau, gan wneud cyfanswm o 10 pâr/20 arennau dynol. O'r rhain, roedd dau gan DBD ac wyth gan roddwyr DCD (Tabl S1, S2, a Ffigur S1). Yn yr astudiaethau hyn, fe wnaethom gymryd biopsïau cortigol cyn ac ar ôl ymyrraeth (storio oer neu NMP) ac ymchwilio i'r dirwedd drawsgrifiadol gan ddefnyddio dilyniannu RNA (RNA-Seq). Y defnydd o arennau pâr a biopsïau pâr o'r un petharenein galluogi i reoli amrywiad biolegol ac i dynnu'r dryslyd hwn yn ôl o'r dadansoddiad (Ffigur S2A). Gwnaethom gadarnhau hynnyarenmae parau yn dechrau gyda thirwedd drawsgrifiadol gyffredin (Ffig. S2B) a thrwy gymhwyso ymyriadau gwahanol i bob unarenmewn pâr, rydym yn gallu astudio effaith ymyriad sy'n annibynnol ar amrywiad biolegol.

FFIGUR 1 Mae arennau sy'n agored i storfa oer yn dangos newidiadau cyfyngedig mewn mynegiant genynnau o gymharu â'r rhai sy'n cael NMP. A Cafwyd Pâr o arennau a wrthodwyd i'w defnyddio wrth drawsblannu. Unarenyn cael ei gynnal mewn storfa oer statig ac roedd y llall yn destun darlifiad peiriant normothermig (NMP). Cymerwyd biopsïau o'r cortecs allanol ar y dechrau ac ar ôl 2 awr. B, plot llosgfynydd yn nodi newid mewn mynegiant genynnau ar 2 awr ar gyfer y grŵp a nodir o'i gymharu â'r cychwyn. Mae dotiau coch yn dynodi genynnau wedi'u mynegi'n wahaniaethol gyda gwerth P wedi'i addasu<0.05 and="" the="" experimental="" group="" is="" indicated="" above="" the="" plot.="" c,="" gene="" set="" enrichment="" analyses="" of="" the="" differential="" expressions="" from="" b="" against="" the="" hallmarks="" pathways.="" only="" significant="" pathways="" (fdr="" q="" value=""><0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="" (nes).="" d,="" heatmap="" of="" the="" top="" 20="" significantly="" upregulated="" genes="" during="" nmp,="" genes="" are="" ranked="" by="" log2="" fold="" change.="" e,="" string="" analysis="" of="" the="" top="" 50="" genes="" upregulated="" during="" nmp.="" the="" color="" of="" each="" node="" indicates="" membership="" of="" each="">

FFIGUR 2 Cydberthynas y trawsgrifiad yn dilyn yr NMP â hyd gweithrediad impiad gohiriedig. Roedd cysylltiad rhwng mynegiant Genynnau a hyd DGF mewn biopsïau a gymerwyd yn dilyn yr NMP fel rhan o hap-dreial clinigol. Mae lefelau mynegiant y 1000 o enynnau sydd â'r gydberthynas fwyaf â'r canlyniad wedi'u plotio. Perfformiwyd B, GSEA ar gyfer y gydberthynas o A yn erbyn y set ddata nodweddion. Dim ond llwybrau arwyddocaol (gwerth FDR q<0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="">

2.2. Mae NMP yn arwain at gynnydd mewn genynnau OXPHOS a llwybr llidiol o gymharu â storio oer

Er mwyn ymchwilio i'r mecanweithiau posibl y gallai NMP eu defnyddio i effeithio ar yr arennau, fe wnaethom gymryd pump i ddechrauarenparau (n {{0}} rhoddwyr DCD ac n=1 rhoddwr marw asgwrn cefn yr ymennydd [DBD], Ffigur S1, Tabl S1) ac wedi perfformio biopsi cortigol amser 0 (0 awr) . Ar y pwynt hwn, cafodd yr arennau eu rhoi ar hap i storfa oer statig neu NMP, fel y disgrifiwyd yn flaenorol yn 10 (Ffigur 1A). Ar ôl 2 awr, cymerwyd ail fiopsi o'r ddwy aren a pherfformiwyd RNA-Seq. Wrth gymharu mynegiant genynnau rhwng y biopsïau amser 0- a 2-awr, canfuom nad oedd gan arennau a roddwyd mewn storfa oer statig unrhyw newid ystadegol arwyddocaol ym mynegiant unrhyw enyn unigol pan gafodd ei gywiro ar gyfer profion lluosog (Ffigur 1B , panel chwith). Mewn cyferbyniad, yn ystod 2 awr o NMP, cafodd 956 o enynnau eu huwchreoleiddio a chafodd 353 o enynnau eu dadreoleiddio (Ffigur 1B, panel ar y dde). Yna fe wnaethom asesu newidiadau yn y mynegiant o grwpiau o enynnau o fewn llwybr cyffredin, gan gymharu degau neu gannoedd o enynnau yn hytrach nag unrhyw enyn unigol, a thrwy hynny leihau ymhellach effaith amrywiad rhyng-unigol biolegol ar y dadansoddiad. Datgelodd hyn newidiadau mewn llwybrau swyddogaethol bwysig, lle na chafodd mynegiant pob genyn unigol o fewn y llwybr hwnnw ei newid yn ddigon mawr i gyrraedd arwyddocâd ystadegol. Dangosodd y dadansoddiad cyfoethogi set genynnau hwn (GSEA) fod storio oer yn cael effaith sylweddol ar nifer o lwybrau metabolaidd (Ffigur 1C, panel chwith). Yn benodol, bu gostyngiad amlwg yn y genynnau sy'n ymwneud â ffosfforyleiddiad ocsideiddiol (OXPHOS), llwybr allweddol sydd ei angen i gynhyrchu ATP.19 Mewn cyferbyniad, roedd OXPHOS ymhlith y llwybrau a gafodd eu huwchreoleiddio'n sylweddol yn ystod yr NMP (Ffigur 1C, y panel ar y dde), gyda buddion posibl ar gyfer hyfywedd celloedd ac adfer homeostasis cellog. Yn ogystal, ysgogwyd nifer o lwybrau sy'n ymwneud â phrosesau imiwn neu ymfflamychol yn ystod NMP, gyda "signal TNF trwy NFkB" yn dangos y cynnydd mwyaf. Yn unol â hyn, roedd TNF, yn ogystal ag IL1B a'r chemocines recriwtio neutrophil CXCL8 (IL8) a CXCL2, ymhlith y genynnau a oedd wedi'u huwchreoleiddio fwyaf mewn 2-biopsïau NMP awr (Ffigur 1D). Datgelodd dadansoddiad llinynnol o'r 50 o enynnau uchaf wedi'u huwchreoleiddio fod y genynnau sy'n gysylltiedig â biocemegol wedi'u dadreoleiddio a gafodd eu clystyru'n bedwar prif nod; IL8 a chemocinau recriwtio neutrophil, genynnau sy'n gysylltiedig ag Inflammasome, signalau NFkB, a rheoleiddio trawsgrifiadol (Ffigur 1E). O bwys, roedd yr arennau DBD a DCD yn drawsgrifiadol debyg ar y llinell sylfaen (Ffigur S2C), ac roedd y llwybrau genynnau a newidiodd yn ystod NMP yn debyg mewn arennau DBD a DCD (Ffigur S2D). Gyda'n gilydd, mae ein dadansoddiad yn dangos, yn ystod NMP, bod mynegiant cynyddol o enynnau sy'n hyrwyddo cynhyrchu ynni, gydag effeithiau a allai fod o fudd i'r organ, ond anwythiad ar yr un pryd o enynnau pro-llidiol, a all fod yn niweidiol.

Dyfyniad Cistanche tubulosa: gwella swyddogaeth arennol

2.3. Genynnau llwybr llidiol mewn arennau NMP sy'n gysylltiedig â gweithrediad impiad hirfaith hir

Er mwyn cysylltu'r newidiadau trawsgrifio sy'n digwydd yn ystod storio oer ac NMP â chanlyniadau clinigol, gwnaethom berfformio RNA-Seq ar fiopsïau a gymerwyd o 33 o arennau DCD a oedd wedi cael NMP fel rhan o hap-dreial clinigol sy'n asesu ei effeithiolrwydd ar hyn o bryd.17 Roedd samplau ar gael ar is-set o arennau ar hap i fraich NMP yr astudiaeth a drawsblannwyd wedyn (Tabl S3, Ffigur S1). Mae DGF yn fwy cyffredin mewn arennau DCD ac fe'i diffinnir yn glasurol fel gofyniad ar gyfer dialysis yn yr wythnos gyntaf ar ôl trawsblannu. Fodd bynnag, yn y cyfnod uniongyrchol ar ôl trawsblannu, mae rhai cleifion yn derbyn un pwl o ddialysis ar gyfer hyperkalemia, nad yw o reidrwydd yn adlewyrchu presenoldeb necrosis tiwbaidd acíwt sylweddol. Felly, fe wnaethom ddefnyddio model sy'n cyfateb mynegiant genynnau ag amser rhwng llawdriniaeth drawsblannu a'r sesiwn dialysis olaf (hy, hyd DGF). Roedd hyn yn dangos newidiadau trawsgrifio mwy amlwg mewn trawsblaniadau sydd angen dialysis y tu hwnt i'r 24 awr gyntaf o ôl-drawsblaniad (Ffigur 2A), yn ogystal â chydberthynas gadarnhaol sylweddol rhwng mynegiant genynnau llwybr llidiol gan gynnwys "signalau TNFA trwy NFkB" a llwybrau "ymateb llidiol" a hyd DGF, gyda mwy o gyfoethogi'r llwybrau hyn mewn arennau a brofodd ôl-drawsblaniad DGF am gyfnod hwy (Ffigur 2B). I'r gwrthwyneb, roedd hyd DGF yn cydberthyn yn negyddol â maint mynegiant genynnau llwybr "OXPHOS" (Ffigur 2B). Gyda'i gilydd, mae'r data hyn yn dangos, yn dilyn NMP, bod arennau sydd â mynegiant is o enynnau llwybr llidiol a mynegiant uwch o enynnau llwybr "OXPHOS" yn llai agored i ôl-drawsblaniad DGF hir. Byddai hyn yn cefnogi’r casgliad y gallai’r newidiadau moleciwlaidd sy’n digwydd yn ystod NMP gael effeithiau buddiol (anwytho genynnau llwybr OXPHOS) a niweidiol (anwytho genynnau llwybrau llidiol).

2.4. Mae allbwn wrin a llif gwaed arennol yn ystod NMP yn dangos cysylltiadau gwahanol ag OXPHOS a genynnau llwybr llidiol

Mae maint yr wrin a gynhyrchir yn ystod yr NMP yn un o nifer o baramedrau sydd wedi’u cynnwys mewn sgorau asesu ansawdd llawfeddygol a ddefnyddir i arwain penderfyniadau ynghylch defnyddio organau,15 ond a yw allbwn wrin uchel yn ystod NMP yn wir yn awgrymu prognosis da ar gyfer yr aren a’r llwybrau moleciwlaidd sylfaenol a weithredir yn arennau ag allbwn wrin uchel yn aneglur. Mewn cyfanswm o 10 o arennau sy'n cael NMP (arennau NMP yn unig, Tabl S1 a S2, Ffigur S1), gwelsom ystod o allbynnau wrin o 0 i 340 ml dros y 2-cyfnod o ddarlifiad awr. (Panel chwith Ffigur 3A). Mae'n werth nodi, pan wnaethom gymharu'r llwybrau a newidiodd yn ystod NMP mewn pum aren mewn dau arbrawf annibynnol, canfuom fod llwybrau tebyg wedi'u hysgogi (Ffigur S3A) yn cadarnhau atgynhyrchedd ein cynllun arbrofol a defnyddioldeb cymharu llwybrau yn hytrach na genynnau unigol. Yn y 2-biopsïau postperfusion awr, roedd mynegiant 11 genyn yn cydberthyn yn sylweddol â chyfaint wrin a gynhyrchwyd yn ystod y cyfnod hwn. Roedd y rhain yn cynnwys proteinau sioc gwres (HSPs), HSPA1A, HSPA1B, a HSPH1, a oedd yn cydberthyn yn gadarnhaol â mwy o allbwn wrin (panel dde Ffigur 3A). Dangosodd dadansoddiad cyfoethogi set genynnau fod cydberthynas gadarnhaol rhwng allbwn wrin hefyd â genynnau llwybr "TNF signaling trwy NFkB", ac yn cydberthyn yn negyddol â genynnau OXPHOS mewn biopsïau postperfusion (Ffigur 3B, S3C). Yn yr un modd, mewn biopsïau cyn-darlifiad, roedd cydberthynas negyddol rhwng OXPHOS ag allbwn wrin yn yr arennau hyn tra bod llwybrau sy'n gysylltiedig ag actifadu imiwn gan gynnwys "signalu TNF trwy NFkB" a "gwrthod alograft" yn cydberthyn yn gadarnhaol ag allbwn wrin, gan awgrymu nad oedd gan NMP fawr o effaith ar y prosesau hyn. , neu ar lwybrau eraill a ddadansoddwyd, mewn arennau allbwn wrin uchel (Ffigur 3B, S3C-D). Ers y gwelwyd sefydlu genynnau llwybr llidiol yn ein samplau clinigol gyda DGF hirfaith (Ffigur 2B), mae'r data hyn yn herio'r dogma bod allbwn wrin uchel yn digwydd mewn arennau mwy hyfyw, "iach" ac yn awgrymu, mewn gwirionedd, y gallai fod gan yr arennau hyn fwy potensial ymfflamychol, yn llai abl i gynhyrchu ynni ac nad yw hyn yn cael ei newid yn sylweddol yn ystod yr NMP.

Mae llif gwaed arennol yn ystod darlifiad hefyd wedi'i asesu fel paramedr a all adlewyrchu gweithrediad trawsblaniad dilynol.15 Yn y 10 aren a astudiwyd, roedd llif gwaed arennol ar 2 awr o ddarlifiad yn amrywio o 14.1 i 168.8 ml/munud (panel chwith Ffigur 3C). Yn y 2-biopsïau postperfusion awr, roedd cydberthynas arwyddocaol rhwng wyth genyn a llif gwaed arennol cynyddol (panel dde Ffigur 3C), gan gynnwys HSPA1L, ond nid oedd gorgyffwrdd uniongyrchol rhwng y rhestr genynnau hon a'r rhai sy'n cydberthyn ag allbwn wrin (Ffigur 3A ). Dangosodd dadansoddiad cyfoethogi set genynnau fod cydberthynas gadarnhaol rhwng llif gwaed arennol uchel a genynnau OXPHOS mewn 0-biopsïau awr, ond yn wahanol i'r rhai â'r allbwn wrin uchaf, cafodd darlifiad effaith sylweddol, gan arwain at gydberthynas negyddol â "OXPHOS". genynnau llwybr erbyn 2 awr (Ffigur 3D, Ffigur S4A-B). Mae llif gwaed arennol wedi'i gydberthyn yn negyddol â nifer o lwybrau genynnau imiwnedd a llidiol mewn biopsïau awr 0- a 2- (Ffigur 3D, Ffigur S4B), yn wahanol i allbwn wrin (Ffigur 3B, Ffigur S3C). Gyda'i gilydd mae'r data hyn yn awgrymu nad yw llif gwaed arennol ac allbwn wrin o bosibl yn ddangosyddion cyfatebol ar gyfer aren fwy hyfyw, ond y gallai'r cyntaf nodi'n fwy ffyddlonarenllai tebygol o fod wedi DGF hirfaith.

budd a sgîl-effeithiau cistanche: gwrthlidiol

2.5. Nid yw ychwanegu hem-adsorber i'r gylched darlifiad yn cael unrhyw effaith ar baramedrau darlifiad ond mae'n lleihau mynegiant genynnau llidiol yn sylweddol, gan gynnwys NLRP3 ac IL1B

Dadansoddiadau oarenmae perfusate wedi dangos cynnydd sylweddol yn y crynodiad o cytocinau pro-lidiol a chemocinau yn ystod cwrs hypothermig a NMP.20,21 Mae'r moleciwlau bioactif hyn yn ail-gylchredeg i'r aren, gyda'r potensial i achosi llid pellach. O ystyried bod ein dadansoddiad o drawsblannuarendangosodd samplau fod sefydlu genynnau sy'n ddibynnol ar TNF mewn arennau NMP yn gysylltiedig â DGF (Ffigur 2B), gwnaethom ragdybio y gallai tynnu cytocinau a chemocinau o'r gylched darlifiad wanhau ymsefydlu genynnau llidiol, gydag effeithiau buddiol posibl i'r aren. Mae dull gweithredu o'r fath wedi dangos rhywfaint o effeithiolrwydd mewn cleifion â syndrom ymateb llidiol systemig,22,23, ac roedd yn gysylltiedig â llif gwaed arennol uwch mewn arennau mochyn sy'n cael NMP.18 Er mwyn profi hyn mewn arennau dynol, gwnaethom gymryd pum pâr o arennau ychwanegol a pherfformio NMP am 4 awr gyda biopsïau yn 0, 2, a 4 awr (Ffigur S1). Ym mhob achos, ychwanegwyd hem-adsorber cytosol (HA) sy'n tynnu moleciwlau â phwysau moleciwlaidd o 10-50 kDa at gylched darlifiad un aren o fewn pob pâr (NMP plws HA) (Ffigur 4A). Fel y rhagwelwyd, arweiniodd ychwanegu'r HA at grynodiadau is o amrywiaeth o cytocinau yn y perfusate (Ffigur 4B) ond ni chafodd unrhyw effaith ar lif gwaed arennol, allbwn neu gyfansoddiad wrin, defnydd ocsigen, a homeostasis sylfaen asid (Ffigur 4C, Tabl S4, S5). Felly, dros 4 awr o NMP, ni chafodd yr HA unrhyw effaith ar y paramedrau darlifiad a ddefnyddir yn glinigol ar hyn o bryd i gynhyrchu sgorau asesu ansawdd ond cafodd effaith sylweddol ar fynegiant genynnau; Yn dilyn NMP, cafodd genynnau 1794 a 4026 eu huwchreoleiddio am 2 a 4 awr, yn y drefn honno, gan gynnwys TNF ac IL6 (Ffigur 4D, E). ond dim ond hanner y nifer hwn (n=898 ac n=2606) a gynyddwyd pan oedd yr HA yn bresennol (Ffigur 4D, Ffigur S5A a B). Lleihawyd nifer y genynnau a isreoleiddiwyd hefyd trwy ychwanegu HA (Ffigur 4D). Ar ôl 4 awr o NMP, cafodd 46 o enynnau eu huwchreoleiddio'n sylweddol a 181 eu dadreoleiddio gan ychwanegu'r HA (Ffigur 4F). Roedd yr ymateb trawsgrifio gwanedig hwn yn cynnwys genynnau sy'n gysylltiedig ag actifadu inflammasome NLRP3, megis IL1B, NLRP3, a CASP1 (Ffigur 4G, Ffigur S4B) a rhai cemocinau recriwtio neutrophil (Ffigur S5C), a oedd yn gysylltiedig yn flaenorol ag anaf i'r arennau mewn modelau anifeiliaid.24,25 Mae hyn yn dangos bod cyfryngwyr hydawdd a ryddhawyd o'rarenail-gylchredeg a gyrru mynegiant de novo o enynnau ymfflamychol o fewn yr organ, ond y gellir lliniaru hyn trwy eu tynnu o'r gylched darlifiad.

FFIGUR 4 Mae ychwanegu hem-adsorber i'r gylched darlifiad peiriant normothermig yn cael effaith sylweddol ar lefel cytocin mewn darlifiad a'r trawsgrifiad ond nid ar baramedrau ffisegol a gofnodwyd ar y rig. Cymerwyd pâr o arennau dynol oddi wrth yr un rhoddwr, cafodd un o'r ddau brotocol safonol darlifiad peiriant normothermig (NMP) am 4 awr a'r llallarencael NMP gan ychwanegu hem-adsorber i'r gylched. Cymerwyd samplau ar gyfer RNA-Seq cyn darlifiad (0 awr), ar ôl 2 awr, ac ar y diwedd (4 awr). B, Crynodiad cytocinau allweddol yn y darlifiad ar ôl 4 awr o NMP. Mae'r llinell yn dynodi parau o arennau. Cafodd mesuriadau cytocin eu normaleiddio i gyfanswm cynnwys protein darlifiad. Daw'r gwerth-P a nodir o brawf prawf-t ar gyfer lleihau cytocinau gan ychwanegu HA. C, Cynhyrchu wrin a llif gwaed arennol (RBF) ar draws cwrs amser darlifiad. Mae Greenline yn dynodi NMP yn unig ac oren gydag ychwanegu hem-adsorber. D, diagram Venn yn dangos niferoedd y genynnau wedi'u mynegi'n sylweddol wahaniaethol wrth gymharu'r samplau 2-awr neu 4-awr â'r samplau cyn(0-awr). Mae diagramau coch yn enynnau wedi'u huwchreoleiddio a glas wedi'u dadreoleiddio. Y croestoriad yw'r genynnau sy'n cael eu mynegi'n ffafriol ar y ddau bwynt amser i'r un cyfeiriad. E, log2 gwerthoedd mynegiant normaleiddio ar gyfer y genynnau a nodir ar draws darlifiad o'r trawsgrifiad meinwe, nodir bariau gwall safonol. F, plot llosgfynydd ar gyfer cymhariaeth pâr o NMP yn unig â NMP ynghyd â HA am 4 awr. Mae coch yn dynodi genynnau wedi'u mynegi'n wahaniaethol gyda gwerth P wedi'i addasu<0.05. g,="" as="" for="">

trin clefyd yr arennau dyfyniad cistanche

2.6. HA sy'n gysylltiedig â gostyngiad mewn llofnod genyn sy'n gysylltiedig â swyddogaeth impiad gohiriedig

Dangosodd dadansoddiad cyfoethogi set genynnau ostyngiad sylweddol yn y llwybr "signalu TNF trwy NFkB" yn NMP ynghyd ag arennau HA o'i gymharu â NMP yn unig (Ffigur 5A-B). Yn nodedig, roedd presenoldeb yr HA nid yn unig yn lleihau mynegiant genynnau llidiol o fewn yarenond hefyd wedi cynyddu OXPHOS a llwybrau metaboledd asid brasterog, y ddau ohonynt yn cyfrannu at gynhyrchu ynni (Ffigur 5A-B). Felly, byddai'r newidiadau mewn llwybrau mynegiant genynnau sy'n digwydd gyda'r HA yn cefnogi'r casgliad bod ei effeithiau'n fuddiol yn glinigol, gan ei fod yn lleihau genynnau llwybr "TNFA signalau trwy NFkB" a chynyddu genynnau llwybr "OXPHOS", yr oedd y ddau ohonynt yn gysylltiedig â genynnau llwybr byrrach. hyd DGF (Ffigur 2B).

Er mwyn archwilio ymhellach y berthynas rhwng newidiadau trawsgrifiadol mewn NMP a chanlyniadau clinigol, ceisiasom guradu llofnod genyn a oedd yn bresennol mewn arennau â DGF. Fe wnaethom nodi'r 100 uchaf o enynnau a reoleiddir yn gadarnhaol (UP) ac yn negyddol (DOWN) (wedi'u rhestru yn ôl newid plygiad log) a oedd yn cydberthyn â hyd DGF yn y 33 sampl treialon clinigol (Ffigur 5C, Data S1). Canfuom gyfoethogiad sylweddol o'r llofnod genyn sy'n gysylltiedig â hyd cynyddol DGF mewn samplau ag allbwn wrin uwch (Ffigur 5D), gan awgrymu bod allbwn wrin uchel yn ystod NMP yn nodi arennau sydd mewn perygl o gael DGF am gyfnod hwy. Nid oedd unrhyw gydberthynas ystadegol arwyddocaol rhwng y llofnod DGF a'r genynnau sy'n gysylltiedig â llif gwaed arennol uwch (Ffigur 5E). Fe wnaethom asesu nesaf a oedd a sut roedd ychwanegu'r HA i gylched yr NMP yn effeithio ar fynegiant llofnodion genynnau DGF "UP" a "DOWN". Yn rhyfeddol, dangosodd hyn fod mynegiant y llofnod genyn sy'n gysylltiedig â hyd uwch DGF wedi'i leihau'n sylweddol trwy ychwanegu'r HA, a chynyddwyd y llofnod sy'n gysylltiedig â gostyngiad hyd DGF yn sylweddol trwy ychwanegu'r HA (Ffigur 5F).

Ar y cyfan, mae'r newidiadau trawsgrifio a nodwyd gennym yn awgrymu bod gan NMP fanteision posibl dros storio oer o ran ei effeithiau ar gynhyrchu ynni yn yr aren. Fodd bynnag, yn ystod darlifiad, mae rhai moleciwlau bioactif yn cael eu rhyddhau o'r aren i'r gylched darlifiad, gan gynhyrchu dolen ymhelaethu sy'n gyrru llid pan fyddant yn dychwelyd i'r aren. Mae cael gwared ar y moleciwlau hyn yn torri ar draws y ddolen hon a gall fod yn ddefnyddiol i leihau llid a chynyddu cynhyrchiant ynni, gan wella ymhellach effeithiau buddiol NMP a lleihau tueddiad i DGF (Ffigur 6).

FFIGUR 5 Mae ychwanegu'r ham-adsorber yn lleihau llofnod genyn sy'n gysylltiedig â DGF. Dadansoddiad GSEA o effaith ychwanegu HA at y trawsgrifiad ar ôl 4 awr o NMP yn erbyn llwybr dilysnod setiau genynnau. Dim ond llwybrau arwyddocaol sy'n cael eu plotio. Mae dotiau coch yn dynodi cyfoethogi positif a negatif glas, mae maint y dot yn cydberthyn yn wrthdro â gwerth FDR q ac mae'r safle'n dynodi'r sgôr cyfoethogi wedi'i normaleiddio (NES). B, Lleiniau cyfoethogi o GSEA ar gyfer llwybrau allweddol o'r gronfa ddata Dilysnod ar gyfer y gymhariaeth o A. Mae'r llinell yn nodi'r sgôr cyfoethogi rhedeg ac mae plot y ffidil yn nodi dosbarthiad genynnau aelod y set genynnau trwy gydol y rhestr genynnau wedi'i rhestru a ddefnyddir ym mhob dadansoddiad. C, Map gwres o'r pedwar cydberthynas cadarnhaol mwyaf (UP) a negyddol (I LAWR) â hyd DGF ac a ddefnyddir fel rhan o'r llofnod mynegiant genynnau ar gyfer DGF. Llofnod DGF llawn wedi'i roi mewn data atodol. Defnyddiwyd llofnod genyn cysylltiedig DF, DGF gyda GSEA i ymchwilio i fynegiant y llofnod yn y gydberthynas o 2-allbwn wrin gyda 2-awr trawsgrifiad (D), cydberthynas o 2-awr RBF gyda 2-awr trawsgrifiad (E), ac effaith ychwanegu HA ar y trawsgrifiad ar 4 awr (F). Lleiniau fel ar gyfer A

FFIGUR 6 Crynodeb graffigol. A, Yn ystod storio oer, mae gostyngiad byd-eang mewn trawsgrifio. Yn ystod NMP mae mynegiant genynnau mewn nifer o lwybrau yn cael ei uwchreoleiddio gan gynnwys ffosfforyleiddiad ocsideiddiol (OXPHOS) a genynnau llwybr llidiol fel TNF, IL8, ac NFkB. B panel chwith, Yn ystod NMP, cyfryngwyr llidiol (cylchoedd melyn) yn cael eu rhyddhau o'rareni mewn i'r toddiant darlifiad. Maent yn ail-gylchredeg ac yn ysgogi trawsgrifio genynnau pro-llidiol yn yr aren, ac maent yn gysylltiedig â gostyngiad mewn genynnau cynhyrchu llwybr ynni, gan leihau ATP. Panel ar y dde, Mae presenoldeb yr hem-adsorber (HA) yn torri'r ddolen chwyddo ymfflamychol hon

Perlysiau Cistanche yn gwella gweithrediad yr arennau

3. TRAFODAETH

Mae ein data yn dangos bod storio oer yn effeithiol o ran cyfyngu ar newidiadau sylweddol mewn mynegiant genynnau. Mae hyn yn cyd-fynd â modelau cnofilod, lle dangosodd arennau a storiwyd am hyd at 18 awr mewn storfa oer fawr ddim newid yn y mynegiant o cytocinau pro-llidiol, gan gynnwys IL1 , TNF, ac IL6.26 Ein defnydd o broffilio trawsgrifiadol byd-eang, diduedd yn hytrach na roedd mesur nifer fach o enynnau ymgeisydd yn ein galluogi i ddadansoddi mynegiant grwpiau o enynnau a geir o fewn llwybrau penodol. Datgelodd hyn ostyngiad sylweddol yn y mynegiant o OXPHOS a genynnau llwybr glycolysis mewn arennau sydd wedi'u storio'n oer, gan leihau gallu'r arennau hyn o bosibl i gynhyrchu ATP, yn unol ag astudiaeth flaenorol sy'n dangos llai o ATP mewn arennau dynol sy'n cael eu storio'n oer.27 Nifer roedd llwybrau pro-llidiol hefyd wedi'u hisreoleiddio yn ystod storio oer, gan gynnwys actifadu TNF trwy NFkB a llwybrau rhywogaethau ocsigen adweithiol a allai fod yn fuddiol. Fodd bynnag, efallai mai dim ond dal y llwybrau hyn dros dro y mae storio oer yn ei wneud, ac yn dilyn atlifiad yn y derbynnydd, byddai newidiadau tebyg mewn mynegiant genynnau ymfflamychol fel y gwelwyd yn NMP yn digwydd.

Cafodd NMP yr effaith groes i storio oer ar OXPHOS a genynnau llwybr glycolysis, gan gynyddu eu mynegiant, gyda'r potensial i gynyddu'r gallu cellog i gynhyrchu ATP ac adfer homeostasis. O bwys, dangoswyd hefyd bod darlifiad ocsigenedig hypothermig o arennau dynol yn cynyddu lefelau ATP o gymharu â storfa oer 27, felly efallai mai adfer ocsigeniad yw'r prif ysgogiad ar gyfer y prosesau hyn yn hytrach na normothermia. Serch hynny, mae'r newidiadau hyn yn debygol o fod yn fuddiol i'r organ o ystyried ein harsylwadau o gydberthynas negyddol rhwng mynegiant cynyddol genynnau llwybr OXPHOS a DGF hirfaith.

Gwnaeth papur diweddar gan Hameed et al28 hefyd ddadansoddiad trawsgrifomig o NMP mewn tair aren sy'n cael NMP. Yn anffodus, ni wnaeth yr awduron sicrhau bod eu data ar gael i'r cyhoedd, felly nid yw'n bosibl cymharu'n fanwl â'n set ddata. Fodd bynnag, roedd eu llawysgrif yn nodi ymsefydlu genynnau sy'n gysylltiedig ag ymateb imiwn yn ystod NMP, gan gynnwys IL1B, CXCL2, a TNF, sy'n cyd-fynd â'n canfyddiadau.

Yn ein dadansoddiad o arennau sy'n cael NMP yng nghyd-destun treial clinigol, gwnaethom gydberthnasu llofnodion mynegiant genynnau â hyd o DGF yn hytrach na mynychder DGF (a ddiffinnir fel angen am ddialysis yn ystod ôl-drawsblaniad yr wythnos gyntaf). Yn nodedig, roedd arennau gyda hyd DGF o 1 diwrnod neu lai yn debyg iawn yn drawsgrifiadol i'r rhai heb DGF, gan adlewyrchu'r gofyniad dialysis yn ôl pob tebyg oherwydd hyperkalemia am-llawdriniaeth-gysylltiedig yn hytrach na DGF bona fide. Canfuom fod DGF hirach yn gysylltiedig â mynegiant uwch o signalau TNFA trwy genynnau llwybr NFkB a mynegiant is o genynnau sy'n gysylltiedig ag OXPHOS. Mae'r data hyn yn awgrymu y gallai arennau sydd â mwy o OXPHOS a llai o signalau imiwnedd gyflwyno gwell potensial fel arennau rhoddwyr, ond mae angen dilysu'r casgliad hwn mewn darpar astudiaeth fwy.

Fe wnaethom hefyd asesu'r prosesau moleciwlaidd sy'n cyd-fynd ag allbwn wrin a gwaed arennol yn ystod NMP. Mae'r paramedrau hyn wedi'u defnyddio o'r blaen, ynghyd â nifer o fesurau eraill, i gynhyrchu sgôr asesu ansawdd arennau wedi'u darlifo. Ystyriwyd bod gwerthoedd uchel allbwn wrin a llif gwaed arennol yn adlewyrchu impiad mwy hyfyw.15 Mae ein data yn datgelu bod llwybrau sy'n cydberthyn ag allbwn wrin uchel a llif gwaed arennol uchel yn wahanol, ac mewn gwirionedd, mae'r paramedrau hyn yn dangos cysylltiadau cyferbyniol pegynol â llwybrau llidiol. . Roedd allbwn wrin uchel yn gysylltiedig â mynegiant uwch o enynnau llwybr imiwnedd tra bod llif gwaed arennol uchel yn cydberthyn yn negyddol â'r llwybrau hyn. Gwelsom hefyd fod y llofnod genyn DGF a gynhyrchwyd gennym wedi'i gyfoethogi mewn arennau ag allbwn wrin uchel yn ystod NMP, gan awgrymu y gallai'r paramedr hwn nodi arennau sydd mewn perygl o gael DGF hirach, yn wahanol i'r dogma presennol. Un esboniad posibl yw bod allbwn wrin uchel iawn yn adlewyrchu arennau â mwy o niwed tiwbaidd nad oes ganddynt y gallu i ganolbwyntio wrin. Felly, efallai y bydd "effaith Elen Benfelen" o ran allbwn wrin, lle mae arennau ag allbwn wrin isel/ychydig yn rhai ag annormaleddau sylweddol wrth gynhyrchu hidlif, mae gan y rhai ag allbwn wrin uchel iawn ddifrod tiwbaidd sylweddol sy'n atal crynodiad wrin. Byddai angen profi'r ddamcaniaeth hon mewn nifer fwy o arennau a gafodd eu trawsblannu wedyn.

Yn ystod 4 awr o NMP, cafwyd anwythiad o enynnau llidiol yn yr aren. Fodd bynnag, mae'n werth nodi bod arfer clinigol presennol yn cynnwys 1 awr o NMP yn unig, ac efallai na fydd yr effaith hon yn amlwg dros amser darlifiad byrrach. Fodd bynnag, gall darlifiad hirach fod â buddion o ran adfer ocsigeniad a chynhyrchu ynni, ac yn ein harbrawf, gallai effeithiau negyddol sefydlu genynnau imiwnedd gael eu negyddu'n sylweddol trwy gyflwyno HA cytosol i'r gylched darlifiad. Mae'r data hyn yn dangos bod cyfryngwyr llidiol a gynhyrchir gan yr aren yn ystod cwrs NMP yn mynd i mewn i'r gylched darlifiad a'u bod yn gallu gwaethygu llid di-haint a bod eu tynnu yn lleddfu'r broses o sefydlu genynnau llwybr llid a welwyd yn ystod NMP. Yn bwysig, dangoswyd bod ychwanegu'r HA yn effeithio ar fynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â chanlyniadau gwaeth yn glinigol. Roedd ein llofnod genyn DGF yn deillio o samplau sy'n cael eu NMP fel rhan o dreial clinigol i asesu ei effeithiolrwydd, gan ganiatáu i ni gysylltu'n gadarn y newidiadau a welsom yn ein hastudiaethau arennau pâr â phwyntiau terfyn clinigol mewn arennau sy'n cael trawsblaniadau. Fodd bynnag, bydd angen ei gymhwyso yng nghyd-destun treial clinigol i brofi'n bendant pa mor ddefnyddiol yw ei gymhwyso i rag-drawsblaniad arennau. Mae'r HA yn amhenodol a gall ddileu moleciwlau sy'n ddefnyddiol, yn ogystal â'r rhai sy'n niweidiol i'r organ. Canfuom fod effaith net yr HA ar drawsgrifiad yr aren yn ymddangos yn fuddiol, ond efallai y bydd mireinio i ddileu cyfryngwyr niweidiol, profedig yn benodol hyd yn oed yn fwy effeithiol.

Roedd y parau arennau a ddefnyddiwyd gennym yn dod o'r un unigolyn ac felly'n union yr un fath yn enetig ac wedi profi amgylchedd tebyg trwy gydol oes y rhoddwr. Gwnaethom gadarnhau bod eu hamser 0 trawsgrifiad yn hynod o debyg (Ffigur S2 A, B). Fodd bynnag, mae'r biopsïau hyn yn samplu rhan fach o'r aren, a gallai patholeg effeithio'n anghymesur ar barau arennau, er enghraifft, codennau, neu glefyd llestr bach. Cafeat ychwanegol yw bod yr holl arennau a ddefnyddiwyd yn yr arbrofion ymyrryd a gyflwynir yma wedi'u gwrthod i'w trawsblannu ac mae rhai yn cynrychioli organau wedi'u trawsblannu ar ben isaf y sbectrwm ansawdd. Serch hynny, gwelsom ganlyniadau atgynhyrchadwy iawn wrth gymharu llwybrau genynnau mewn grwpiau o bum aren. Roeddem hefyd yn gallu dangos bod arennau o DCD a DBD wedi cael ymateb tebyg i ddarlifiad. Trwy gyfuno hyn â'n llofnod DGF ôl-NMP wedi'i guradu, roeddem yn gallu rhagweld buddion clinigol posibl. Gellid defnyddio'r dull arbrofol hwn fel arf rhag-glinigol i sgrinio ymyriadau yn y dyfodol ar gyfer effeithiolrwydd therapiwtig posibl i alluogi dewis rhesymegol o ymyriadau ymgeiswyr ar gyfer treialon clinigol.

I grynhoi, mae ein hastudiaeth yn darparu'r proffil trawsgrifio byd-eang cyntaf o arennau dynol sy'n cael NMP, gan ddatrys y gwahanol lwybrau moleciwlaidd sy'n cael eu gweithredu yn NMP o'u cymharu â storio oer, a dangos y gall effeithiau niweidiol moleciwlau bioactif a gynhyrchir neu a ryddheir o'r aren yn ystod NMP. cael ei wrthdroi trwy ychwanegu HA. At hynny, gostyngodd yr ymyriad hwn fynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â DGF hir gan ddarparu rhesymeg fecanistig gref dros gymhwyso ymyriad o'r fath i dreial clinigol yn y dyfodol. Mae gan ein data hefyd oblygiadau ar gyfer strategaethau darlifiad y tu hwnt i'r aren, gan gynnwys trawsblannu afu a'r ysgyfaint, sy'n awgrymu y dylid ymchwilio i dynnu moleciwlau bioactif o ddarlifiadau yn y cyd-destunau hyn lle mae NMP yn cael ei ddefnyddio fwyfwy. Yn olaf, mae ein hastudiaeth yn amlygu defnyddioldeb proffilio trawsgrifio byd-eang mewn parauarennauar gyfer asesu ymyriadau newydd i organau drylliedig; mae newidiadau trawsgrifiadol yn rhagflaenu newidiadau mewn helaethrwydd protein (a ddefnyddir yn draddodiadol fel biofarcwyr oarenanaf) a gellir mesur degau o filoedd o drawsgrifiadau genynnau yn rhwydd. Felly, mae gan fesur RNA y potensial i ddarparu darlleniad cynnar, sensitif o weithrediad cellog organau dynol a adferwyd i'w trawsblannu y gellir eu cymhwyso i astudiaethau yn y dyfodol.

DIOLCHIADAU

Mae'r awduron yn diolch i'r holl roddwyr organau a'u teuluoedd. Mae Labordy Clatworthy yn ddiolchgar am y cyfleusterau craidd a ddarperir gan Labordy Bioleg Foleciwlaidd yr MRC. Cyflawnwyd y gwaith hwn gan ddefnyddio adnoddau a ddarparwyd gan y Cambridge Service for Data-Driver Discovery (CSD3) a weithredir gan Wasanaeth Cyfrifiadura Ymchwil Prifysgol Caergrawnt, a ddarperir gan Dell EMC ac Intel gan ddefnyddio cyllid Haen gan Ymchwil Peirianneg a'r Gwyddorau Ffisegol. Cyngor (grant cyfalaf EP/P020259/1), a chyllid DiRAC gan y Cyngor Cyfleusterau Gwyddoniaeth a Thechnoleg (www. Dirac. ac. the UK).

DATGUDDIAD

Nid oes gan yr awduron unrhyw wrthdaro buddiannau i'w ddatgelu fel y disgrifiwyd gan yr American Journal of Transplantation.

CYFRANIADAU AWDUR

Cynlluniodd JRF, SH, MLN, a MRC yr astudiaeth a dehongli'r data. Perfformiodd JRF, SH, TM, CJW, AF, a TCD yr arbrofion. Creodd JRF, SH, a MRC ffigurau a thablau. Ysgrifennodd MRC y brif lawysgrif. Creodd JRF a SH y dulliau a'r chwedlau ffigur, JRF, SH, a golygodd MLN y llawysgrif.

Budd Cistanche: gwella swyddogaeth yr arennau

Cyfeiriadau:
1. Methven S, Steenkamp R, Fraser S. Cofrestrfa Arennol y DU 19eg Adroddiad Blynyddol: Pennod 5 Goroesiad ac Achosion Marwolaeth mewn Cleifion sy'n Oedolion yn y DU ar Therapi Amnewid Arennol yn 2015: Dadansoddiadau Cenedlaethol a Phenodol i'r Ganolfan. Nephron. 2017; 137(1): 117–150.
2. Summers DM, Johnson RJ, Allen J, et al. Dadansoddiad o ffactorau sy'n effeithio ar ganlyniad ar ôl trawsblannu arennau a roddwyd ar ôl marwolaeth gardiaidd yn y DU: astudiaeth garfan. Lancet. 2010; 376(9749): 1303-1311.
3. Summers DM, Johnson RJ, Hudson A, Collett D, Watson CJ, Bradley JA. Effaith oedran rhoddwr ac amser storio oer ar ganlyniad derbynwyr arennau a roddwyd ar ôl marwolaeth gylchredol yn y DU: astudiaeth garfan. Lancet. 2013; 381(9868):727–734.
4. Friedewald JJ, Rabb H. Celloedd llidiol mewn methiant arennol acíwt isgemig.ArennauInt. 2004; 66(2): 486–491.
5. Kono H, Rock KL. Sut mae celloedd marw yn rhybuddio'r system imiwnedd i berygl. Nat Parch Immunol. 2008; 8(4):279–289.
6. Berry M, Clatworthy MR. Imiwnotherapi ar gyfer acíwtarenanaf. Imiwnotherapi. 2012; 4(3):1–12.
7. Parikh CR, Coca SG, Thiessen-Philbrook H, et al. Mae biofarcwyr ar ôl llawdriniaeth yn rhagweld acíwtarenanaf a chanlyniadau gwael ar ôl llawdriniaeth ar y galon i oedolion. J Am Soc Nephrol. 2011; 22(9): 1748–1757.
8. Hall IE, Yarlagadda SG, Coca SG, et al. Mae IL-18, a NGAL wrinol yn rhagweld dialysis ac adferiad impiad ar ôlarentrawsblaniad. J Am Soc Nephrol. 2010; 21(1): 189–197.
9. Malyszko J, Lukaszyk E, Glowinska I, Durlik M. Biomarcwyr o oedi swyddogaeth impiad fel math o aciwtarenanaf ynarentrawsblaniad. Cynrychiolydd Gwyddonol 2015; 5: 11684.
10. Hosgood SA, Nicholson ML. Yn gyntaf mewn trawsblaniad arennol dyn ar ôl darlifiad normothermig ex vivo. Trawsblannu. 2011;92(7):735–738.
11. Yong C, Hosgood SA, Nicholson ML. Darlifiad normothermig ex-vivo wrth drawsblannu arennau: y gorffennol, y presennol a'r dyfodol. Trawsblannu Organ Curr Opin. 2016; 21(3):301–307.
12. Fisher A, Andreasson A, Chrysos A, et al. Astudiaeth arsylwadol o Darlifiad Ysgyfaint Rhoddwr Ex Vivo mewn trawsblannu ysgyfaint yn y DU: DEVELOP-UK. Asesiad Technoleg Iechyd. 2016; 20(85):1–276.
13. Slama A, Schillab L, Barta M, et al. Caffael ysgyfaint rhoddwr safonol gyda darlifiad ysgyfaint ex vivo normothermig: hap-dreial clinigol. J Trawsblaniad Ysgyfaint y Galon. 2017; 36(7):744–753.
14. Nasralla D, Coussios CC, Mergental H, et al. Treial ar hap o gadw normothermig wrth drawsblannu afu. Natur. 2018; 557(7703):50–56.
15. Barlow AD, Hamed MO, Mallon DH, et al. Defnyddio Darlifiad Normothermig Ex Vivo ar gyfer Asesu Ansawdd Pancreasau Rhoddwyr Dynol a Gadwyd. Am J Trawsblaniad. 2015; 15(9): 2475-2482.

16. Hosgood SA, Saeb-Party K, Hamed MO, Nicholson ML. Trawsblannu Arennau Dynol yn Llwyddiannus y Tybir Na ellir ei Drawsblannu ond Wedi'i Ddadebru gan Darlifiad Peiriant Normothermig Ex Vivo. Am J Trawsblaniad. 2016; 16(11):3282–3285.
17. Hosgood SA, Saeb-Party K, Wilson C, Callaghan C, Collett D, Nicholson ML. Protocol hap-dreial rheoledig, label agored o ddarlifiad normothermig ex vivo yn erbyn storfa oer statig mewn rhoddion ar ôl marwolaeth cylchrediad gwaed trawsblannu arennau. BMJ Agored. 2017; 7(1): e012237.
18. Hosgood SA, Moore T, Kleverlaan T, Adams T, Nicholson ML. Mae haemoadsorption yn lleihau'r ymateb llidiol ac yn gwella llif y gwaed yn ystod darlifiad arennol ex vivo mewn model arbrofol. J Cyfieithu Med. 2017; 15(1):216.
19. Krebs HA. Hanes y cylch asid tricarboxylic. Perspect Biol Med. 1970; 14(1): 154–170.
20. Hoogland ER, de Vries EE, Christiaans MH, Winkens B, Snoeijs MG, van Heurn LW. Gwerth crynodiad biomarcwr darlifiad peiriant yn DCDarentrawsblaniadau. Trawsblannu. 2013; 95(4):603–610.
21. van Balkom BWM, Gremmels H, Ooms LSS, et al. Proteinau mewn Hylif Cadw fel Rhagfynegwyr o Weithrediad Graft Oedi mewn Arennau oddi wrth Roddwyr ar ôl Marwolaeth Cylchrediadaethol. Clin J Am Soc Nephrol. 2017; 12(5):817–824.
22. Kogelmann K, Jurczak D, Scheller M, Druner M. Hemoadsorption gan CytoSorb mewn cleifion septig: cyfres achos. Gofal Crit. 2017;21(1):74.
23. David S, Thamm K, Schmidt BMW, Falk CS, Kielstein JT. Effaith tynnu cytocin allgorfforol ar swyddogaeth rhwystr fasgwlaidd mewn claf sioc septig. J Gofal Dwys. 2017; 5:12.
24. Li L, Huang L, Vergis AL, et al. Mae IL-17 a gynhyrchir gan niwtroffiliau yn rheoleiddio mudo niwtroffil wedi'i gyfryngu gan IFN-gamma yn y llygodenarenanaf isgemia-atlif. J Clin Buddsoddi. 2010; 120(1):331–342.
25. Hayama T, Matsuyama M, Funao K, et al. Effaith fuddiol atalydd neutrophil elastase ar anaf isgemia-atlifiad cynnes arennol yn y llygoden fawr. Trawsblannu Proc. 2006; 38(7): 2201-2202.
26. Saat TC, Susa D, Roest HP, et al. Cymhariaeth o broffiliau mynegiant genynnau llidiol, cytoprotective ac anaf mewn arennau o roddwyr marwolaeth yr ymennydd a marwolaeth cardiaidd. Trawsblannu. 2014; 98(1):15–21.
27. Ravaioli M, Baldassare M, Vasari F, et al. Strategaethau i Adfer Lefel Adenosine Triffosffad (ATP) Ar ôl Mwy nag 20 Awr o Amser Isgemia Oer yn yr Ymylol DynolArennauGraftiau. Trawsblaniad Ann. 2018; 23:34-44.
28. Hameed AC, Lu DB, Patrick E, et al. Peiriannau Normothermig Byr Darlifiad Yn Adfywio Arennau Dynol Wedi'u Taflu. Trawsblannu Uniongyrchol. 2019; 5(11): e502.