Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Gwella cynhyrchiad glycosidau ffenylethanoid gan ysgogydd ffwngaidd yn niwylliant ataliad celloedd Cistanche deserticola

Cui-tao Lu¹,∗ & Xing-guo Mei²

Geiriau allweddol Cistanche deserticola, elicitor ffwngaidd,glycoside ffenylethanoid, diwylliant celloedd planhigion

Haniaethol
Pan, ar y 15fed dydd o dyfiant, elicitor oFusarium solaniychwanegwyd ar 40 mg l^-1 iCistanche deserticoladiwylliannau ataliad celloedd, cynnwys echinacoside, acteoside, a chyfanswmglycosidau ffenylethanoid(PeGs) mewn celloedd diwylliedig i gyd wedi cynyddu dros y 27 d nesaf dros 100 y cant i 15 mg g^-1sych wt, 9 mg g-1 sych wt a 57 mg g^-1 sych wt, yn y drefn honno. Mae'r biomas terfynol (1.3 mg sych wt ml^-1) heb ei effeithio.

Cistanche deserticola

Rhagymadrodd

Cistanche deserticolaMa. (Orobanchaceae), perlysieuyn brodorol o Tsieina yn cael ei ddefnyddio'n eang mewn meddygaeth draddodiadol ar gyfer triniaethau amrywiol gan gynnwys defnydd fel tawelydd neu dwysydd ymateb imiwn (Hsu et al. 1995, Chang et al. 1995).Glycosidau ffenylethanoid(PeGs) yw'r prif fetabolion bioactif ynCistanche deserticola(Xiong et al. 2000) ac maent yn cynnwys llawer o gydrannau megis echinacoside, acteoside, cisacteoside, isoacteoside, 2-acetylacteoside, cistanoside A, ac osmanthuside B (Wang et al. 2000). Gyda'r galw cynyddol am y cynhyrchion hyn a'r dirywiad cyflym ynCistanche deserticolaplanhigion, byddai diwylliant celloedd yn ddull amgen deniadol o gynhyrchu. Gall llawer o elicitors (yn enwedig elicitors ffwngaidd) wella cynhyrchiant metabolion mewn meithriniad celloedd planhigion (Wang et al. 2001). Mae Li et al. (1998) fod elicitor ffwngaidd o Fusarium solani wedi'i ynysu o systemau gwreiddiau'r ddauCistanche deserticolaa gallai ei gwesteiwr, Halaxylon ammodendron, wella'r cynnwys asid amino yn calli ofCistanche deserticolaOnd ni chrybwyllwyd y newidiadau i gynnwys PeGs yn y llinell callus hon yn eu hastudiaeth. Yn y papur hwn, astudiwyd effeithiau eliitor o F. solani ar fiosynthesis cyfanswm PeGs a dau brif PeG bioactif (echinacoside ac acteoside), ac ar y newidiadau mewn twf celloedd yn niwylliant atal dros dro.Cistanche deserticola.

Defnyddiau a dulliau

Diwylliannau celloedd planhigion
Cymellwyd Callus o glorian oCistanche deserticolaa'i gynnal ar gyfrwng B5 Gamborg (1968) wedi'i ategu â 0.5 mg indole-3-asid asetig l^-1, 2 mg cinetin l^-1,ac 1 g casein hydrolysate l^-1. Addaswyd y pH i 6 cyn sterileiddio. Perfformiwyd yr holl arbrofion mewn fflasgiau ysgwyd 250 ml, pob un yn cynnwys cyfrwng 100 ml ar ysgydwr cylchdro (120 rpm a 25 gradd) o dan dywyllwch. Roedd yr inoculum tua 100 g ffres wt l^-1.

cynnwys effeithiol cistanche deserticola--glycoside ffenylethanoid

Paratoi elicitor ffwngaidd

Perfformiwyd gwahanu straen ffwng, Fusarium solani, a pharatoi elicitor ffwngaidd fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Li et al. 1998, Yu et al. 2001). Ychwanegwyd symiau amrywiol (cyfwerth â charbohydradau) o elicitor ffwngaidd at y diwylliannau fflasg ysgwyd ar y 15fed d (cyfanswm y cyfnod meithrin oedd 42 d).

Cronni biomas a phroses hyfywedd
Roedd celloedd o fflasg ysgwyd yn cael eu golchi â dŵr distyll a'u rhewi-sychu i bwysau cyson. Penderfynwyd felly ar y sych wt. Pennwyd hyfywedd celloedd (canran y celloedd hyfyw mewn poblogaeth celloedd) gan ostyngiad o 2,3,5-triphenyl tetrazolium clorid (Towill & Mazur 1975).

glycoside ffenylethanoidocistanche deserticola

Penderfynu ar gynnwys echinacoside, acteoside, a chyfanswmglycosidau ffenylethanoid(PeGs)
Perfformiwyd echdynnu PeGs yn unol â dull Du & Liu (1993). Rhewi-sychuCistanche deserticolaechdynnwyd celloedd gyda 70 y cant (v/v) ethanol. Crynhowyd y ffracsiwn ethanol, ei ddiseimio ag asetad ethyl dirlawn mewn dŵr, ac yna ei drwytholchi â n-butanol dirlawn â dŵr. Crynhowyd y ffracsiwn n-butanol, ei hydoddi mewn dŵr, ei lwytho i mewn i golofn resin macropore (AB-8, cynnyrch cemegol Prifysgol Nankai, Tianjin, Tsieina), a'i ddiystyru â dŵr a methanol, yn olynol. Casglwyd ffracsiwn methanol a phennwyd cyfanswm y cynnwys PeGs trwy ddefnyddio echinacoside fel safon ar 334 nm. Pennwyd echinacoside ac acteoside trwy ddefnyddio colofn Nova Pak C18 (250 × 4.6 mm) mewn system HPLC (dyfroedd) gyda synhwyrydd UV (334 nm).

Canlyniadau

Effaith elicitor ffwngaidd ar grynhoi biomas a chyfanswm biosynthesis PeGs Roedd effeithiau elicitor ffwngaidd ar fiomas celloedd a chyfanswm croniad PeGs yn dibynnu ar y dos a ychwanegwyd (cyfwerth â charbohydradau). Fel y dangosir yn Ffigur 1, roedd dosau is o elicitor yn ffafriol i'r sych wt oCistanche deserticolacelloedd. Roedd y brig gyda'r elicitor ar 20 mg l^-1(gan roi 1.76 mg sych wt ml^-1).
Roedd cyfanswm croniad PeGs wedi'i wella'n sylweddol gan yr elicitor ffwngaidd rhwng 20 mg l^-1a 80 mg l^-1. Ysgwyddwr ar 40 mg l-1 a gafodd y cynnyrch uchaf (57 mg g^-1), a oedd dros ddwywaith yr hyn a gafwyd yn y diwylliant rheoli nad yw'n elyniaethwr. Defnyddiodd yr arbrawf pellach yr elicitor ffwngaidd ar 40 mg1^-1.

Ffig. 1. Pwysau celloedd sych a chyfanswm croniad PeGs yn niwylliant celloedd crog oCistanche deserticolamewn ymateb i ddosau amrywiol o elicitor ffwngaidd. Ychwanegwyd elicitor ffwngaidd at y cyfrwng ar y 15fed d. Cymerwyd samplau ar ôl 27 d. ▲, Pwysau celloedd sych terfynol; ◆, cyfanswm cynnwys PeG. Mae gwerthoedd yn fodd o ganlyniadau triphlyg ac mae bariau gwall yn cynrychioli gwyriadau safonol.

Cwrs amser twf celloedd a biosynthesis PeGs
Mae Ffigur 2 yn dangos cwrs amser hyfywedd celloedd a biosynthesis PeGs (echinacoside ac acteoside) o gelloedd crog ar ôl i ddiwylliannau ddod o dan 40 mg l.^-1elicitor ffwngaidd ar y 15fed d. Yn y 27 d diwylliant dilynol, echinacoside ac acteoside, mae'r ddau brif PeG bioactif ynCistanche deserticola, cynyddodd y ddau yn sylweddol. Ar y 39ain d cyflawnwyd y croniadau uchaf, gan gyrraedd 14.7 mg g^-1wt sych a 8.9 mg g^-1 sych wt, yn y drefn honno. Ni welwyd gwahaniaeth sylweddol mewn hyfywedd celloedd rhwng y diwylliannau a driniwyd gan elitor a'r rheolaeth.

Ffig. 2. Hyfywedd celloedd a biosynthesis echinacoside ac acteosid mewn meithriniad celloedd crog oCistanche deserticolaar ôl triniaeth 40 mg l^-1elicitor ffwngaidd. Ychwanegwyd elicitor ffwngaidd at y cyfrwng ar y 15fed d.◆, Echinacoside-treated with elicitor; ◇, echinacoside-reolaeth; ●, wedi'i drin ag acteoside ag elititor;○,

rheoli acteosid; ▲, hyfywedd cell wedi'i drin ag elicitor;△ , rheoli hyfywedd celloedd. Mae gwerthoedd yn fodd o ganlyniadau triphlyg ac mae bariau gwall yn cynrychioli gwyriadau safonol.

Trafodaeth

Mae llawer o gydrannau sy'n deillio o ffyngau (darnau wal gell, polysacaridau, oligosaccharides, glycoproteinau, ac ati) wedi'u defnyddio fel amrywiol elicitors ffwngaidd mewn cynhyrchu metabolion eilaidd gyda llawer o rywogaethau celloedd planhigion. Yn y papur hwn, mae'r homogenad (sy'n cynnwys polysacaridau yn bennaf) o straen ffwng Fusarium solani wedi'i ynysu o systemau gwreiddiau oCistanche deserticolaa dangoswyd bod ammodendron Halaxylon yn ysgogydd effeithiol ar gyfer biosynthesis PeGs yn niwylliant celloeddCistanche deserticola. Roedd y defnydd o'r elicitor hwn i ysgogi synthesis PeGs mewn celloedd nid yn unig yn arwyddocaol ond fe'i harddangoswyd yn fuan ar ôl cael ei ennyn. Roedd y casgliad hwn yn cytuno â rhai astudiaethau blaenorol ar feithriniad celloedd planhigion (Wang et al. 2001).

Yn yr astudiaeth flaenorol o Li et al. (1998), pan ychwanegwyd elicitor ffwngaidd o F. solani at y cyfrwng diwylliant, callus a achosir o hadauCistanche deserticolagallai aros yn fyw yn yr isddiwylliant hirdymor dilynol, a gellid gwella'r cynhyrchiad iridoidau. Nododd y gallai celloedd diwylliedig syntheseiddio metabolion eilaidd ymwrthedd i glefydau pan fydd micro-organebau'n ymosod arnynt. Er na chafodd iridoidau eu pennu yn ein harbrawf, rydym wedi dangos y gellid defnyddio polysacaridau o F. solani fel elicitors ffwngaidd effeithiol wrth gynhyrchu PeGs gydaCistanche deserticolacelloedd.

cynnwys effeithiol cistanche deserticola--glycoside ffenylethanoid

Oddi wrth: ' Gwellhad oglycosidau ffenylethanoidcynhyrchiad gan elicitor ffwngaidd mewn diwylliant ataliad celloedd oCistanche deserticola' gan Cui-tao Lu¹,∗ & Xing-Guo Mei²

----Llythyrau Biotechnoleg 25: 1437–1439, 2003. © 2003 Cyhoeddwyr Academaidd Kluwer. Argraffwyd yn yr Iseldiroedd.

Cyfeiriadau

Chang Y, Wu H, Wang SN, Cheng HC (1995) Astudiaeth o effeithiau cryfCistanche deserticolaMa., Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. a Cistanche tubulosa (Schenk) R Wight. Tsieina J. Chin. Mater. Med. 26:143–146.
Du NS, Liu JL (1993) Determination ofglycosidau ffenylethanoidmewnCistanche deserticolagan sbectrophotometreg resin macrovesicular. Nat. Prod. Res. Datblygu. 5:30–33.

Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Gofynion maethol diwylliannau ataliad celloedd gwreiddiau ffa soia. Exp. Cell Res. 50:151–158.

Hsu WH, Chu SH, Sheng LC, Yuan KW, Mao CN (1995) Astudiaeth o gyfansoddion cemegol ac effeithiau ffarmacolegolCistanche deserticolaMa. a Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. Gên. Traddodiad. Perlysieuyn. Cyffuriau 26:143–146.

Li S, Wu X, Dong XC, Zheng X, Zheng JH, Lou ZC (1998) Effaith eliitor Fusarium solani ar gynnwys asid aminoCistanche deserticolacallus. Tsieina J. Northwest Pharm. 13:247–248.
Towill LE, Mazur P (1975) Astudiaethau o ostyngiad o 2,3,5-triphenyltrazolium clorid fel assay hyfywedd ar gyfer diwylliannau meinwe planhigion. Gall. J. Bot. 53: 1097–1102.
Wang CG, Wu JY, Mei XG (2001) Gwella cynhyrchu Taxol ac ysgarthiad mewn diwylliant celloedd Taxus Chinensis trwy ennyn ffwngaidd ac adnewyddu canolig. Appl. Microbiol. Biotechnol. 55:404–410.
Wang YM, Zhang SJ, Luo GA, Hu YN, Hu JP, Liu L, Zhu Y, Wang HJ (2000) Dadansoddiad oglycoside ffenylethanoidyn y detholiad o berlysiau Cistanchis gan LC/ESI-MS/MS. Acta Pharm. Pechod. 35: 839–842.
Xiong QB, Yasuhiro Tezukay, Takuji Kaneko, Li HY, Le Quan Tran, Koji Hase, Tsuneo Namba, Shigetoshi Kadota (2000) Gwahardd ocsid nitrig gan ffenylethanoids mewn macroffagau actifedig. Eur. J. Pharm. 400: 137–144.
Yu LJ, Lan WZ, Qin WM, Xu HB (2001) Effeithiau asid salicylic ar berocsidiad pilen-lipid a achosir gan ffwngaidd a chynhyrchiad Taxol mewn diwylliannau ataliad celloedd o Taxus Chinensis. Proc. Biocemeg. 37 : 477–482.