Effeithiau Hypoglycemig A Hypolipidemig Cyfanswm Glycosidau Cistanche Tubulosa mewn Llygod Mawr Diabetig a achosir gan Ddiet/streptozotocin

Cyswllt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Kuiniu Zhu, et al

ABSENOLDEB

Perthnasedd ethnopharmacolegol: Cistanche tubulosa(Schrenk) Mae R. Wight (Orobanchaceae) yn elfen a ragnodwyd yn aml mewn llawer o bresgripsiynau llysieuol traddodiadol a ddefnyddir i drin diabetes yn Tsieina. Mewn astudiaethau diweddar, mae gweithgaredd gwrth-diabetig oCistanchetubulosadyfyniadau wedi'u cadarnhau. Fodd bynnag, ni adroddwyd ar unrhyw ymchwiliad systematig i gyfanswm glycosidauCistatnche tubulosa(TGCT). Nod yr astudiaeth: Nod yr astudiaeth bresennol oedd ymchwilio i effeithiau hypoglycemig a hypolipidemig TGCT a'r mecanweithiau posibl mewn llygod mawr diabetig a achosir gan ddeiet/streptozotocin (STZ), ac i nodweddu'n gemegol brif gyfansoddion TGCT (cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa).

Deunyddiau a dulliau:Prif gyfansoddion TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)wedi'u nodweddu gan HPLC/Q-TOF-MS a pherfformiwyd y meintioli dadansoddol gyda HPLC-DAD. Cafodd llygod mawr diabetig math 2 eu hysgogi gan ddeiet swcros uchel mewn braster uchel (HFSD) ac un pigiad o STZ (30 mg/kg). Rhoddwyd TGCT (50 mg / kg, 100 mg / kg a 200 mg / kg) neu metformin (200 mg / kg) ar lafar am 6 wythnos. Cafodd pwysau corff a chymeriant calorïau eu monitro trwy gydol yr arbrawf. Glwcos plasma ymprydio (FPG), prawf goddefgarwch glwcos llafar (OGTT), yr ardal o dan gromlin glwcos (AUC-G), hemoglobin glycosylated (HbA1c), inswlin ymprydio, serwm C-peptid, cynnwys glycogen, a mynegai sensitifrwydd inswlin oedd profi. Assayed lefelau ffosfforyleiddiad protein kinase B a glycogen synthase kinase ffosfforylaidd 3 , gweithgareddau hexokinase a pyruvate kinase. Yn y cyfamser, mesurwyd y newidiadau mewn proffiliau lipid serwm, superoxide dismutase, glutathione peroxidase, malondialdehyde, a ffactorau llidiol. Gwerthuswyd histolegol y pancreas hefyd gan y staen hematoxylin-eosin.

Canlyniadau:Datgelodd ein hymchwiliad bresenoldeb glycosidau ffenylethanoid (PhGs): echinacoside (500.19 ±11.52 mg/g), acteoside (19.13 ± 1.44 mg/g) ac isoacteoside (141.82 ± 5.78 mg/g) yn TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa). Dangosodd profion ffarmacolegol fod TGCT wedi gwrthdroi colled pwysau a achosir gan STZ yn sylweddol (11.1 y cant , 200 mg/kg); gostwng FPG (56.4 y cant , 200 mg/kg) a HbA1c (37.4 y cant , 200 mg/kg); wedi gwella'r OGTT, AUC-G, a sensitifrwydd inswlin; mwy o gynnwys glycogen (40.8 y cant yn yr afu a 52.6 y cant yn y cyhyrau, 200 mg / kg) a gweithgareddau ensymau metaboleiddio carbohydradau; newidiadau wedi'u rheoleiddio i broffil lipid a gweithgareddau ensymau gwrthocsidiol; marcwyr serwm llai o straen ocsideiddiol a llid mewn modd sy'n dibynnu ar ddos ​​(p <>

Casgliadau:Cadarnhaodd yr astudiaeth hon fod TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa) yn gyfrwng maethol effeithiol ar gyfer gwella hyperglycemia a hyperlipidemia mewn llygod mawr diabetig a achosir gan ddeiet/STZ, y gellir eu priodoli i raddau helaeth i weithgareddau TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)ar ataliadau o straen ocsideiddiol a llid.

Geiriau allweddol:Cyfanswm glycosidau oCistanche tubulosaDiabetes mellitus math 2 Hypoglycemic Hypolipidemig Gwrth-ocsidydd Gwrthlidiol

1. Rhagymadrodd

Ystyrir bod diabetes mellitus yn glefyd metabolig, a nodweddir gan hyperglycemia sy'n deillio o ddiffyg cynhyrchu inswlin neu / a gwrthiant inswlin (IR) (Cymdeithas Diabetes America, 2019). Mae hyperglycemia cronig yn gysylltiedig â chymhlethdodau difrifol lluosog fel neffropathi, retinopathi, niwroopathi, a phroblemau cardiaidd (Ekoe, 2019). Amcangyfrifir bod nifer y bobl ddiabetig byd-eang yn 2019 yn 463 miliwn (9.3 y cant), gan godi i 578 miliwn (10.2 y cant) erbyn 2030 a 700 miliwn (10.9 y cant) erbyn 2045 (Saeedi et al., 2019). Mae sawl cyffur fel metformin (Met, sy'n ychwanegu at gynhyrchu glycogen hepatig), inswlin (atal cynhyrchu glwcos a chynyddu'r defnydd o glwcos), a sulfonylureas (ysgogi cell ynysig pancreatig i secretu inswlin) yn effeithiol wrth leihau glycemia. Fodd bynnag, roedd llawer o adweithiau anffafriol annymunol (gan gynnwys magu pwysau, hypoglycemia, IR, ac oedema) wedi cyfyngu ar eu defnydd (Moller, 2001). Felly, mae llawer o ymchwilwyr wedi bod yn chwilio am gyfansoddion sy'n weithredol yn fiolegol o echdynion planhigion traddodiadol ar gyfer trin diabetes dros y blynyddoedd diwethaf (Kasangana et al., 2019; Liu et al., 2020).

Cistanchetubulosa(Schrenk) Mae R. Wight (Orobanchaceae) wedi'i ddefnyddio'n helaeth mewn meddygaeth Tsieineaidd draddodiadol, a ragnodir yn aml mewn fformiwlâu traddodiadol ar gyfer trin diffyg arennau, anffrwythlondeb benywaidd, a diabetes mellitus (Li et al., 2016; Han et al., 2017 ; Su et al., 2017). Mae astudiaethau diweddar wedi nodi bod echdyniad dyfrllyd oCistanchetubulosayn dangos effeithiau hypoglycemig a hypolipidemig mewn llygod db / db gyda diabetes mellitus math 2 (T2DM) (Xiong et al., 2013), a lefelau glwcos gwaed wedi gwella, IR, a pherocsidiad lipid mewn llygod mawr diabetig a achosir gan streptozotocin (STZ) - nicotinamide ( Kong et al., 2018). Glysosidau ffenylethanoid (PhGs) yw prif gyfansoddionCistanchetubulosa(Morikawa et al., 2014), sydd wedi arddangos amrywiol weithgareddau biolegol megis gwrthocsidiad (Xue et al., 2017) a gwrth-ganser (Fu et al., 2019). Ar ben hynny, rhwystrodd PhGs yn sylweddol y cynnydd mewn lefelau glwcos yn y gwaed ôl-frandio mewn llygod wedi'u llwytho â starts (Morikawa et al., 2014), ataliodd y cyd-drosglwyddydd glwcos sodiwm-ddibynnol 1-gyfryngu'r defnydd o glwcos mewn celloedd epithelial berfeddol (Shimada et al., 2017), ac yn atal gweithgaredd aldos reductase mewn lens llygod mawr (Morikawa et al., 2019). Fodd bynnag, nid oes unrhyw ymchwil flaenorol wedi ymchwilio i weithgaredd gwrth-hyperglycemig cyfanswm glycosidauCistanchetubulosa(TGCT).

Yn yr astudiaeth bresennol, priodweddau gwrthddiabetig TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)wedi cael eu gwerthuso mewn diet swcros uchel braster uchel (HFSD) a llygod mawr diabetig a achosir gan STZ. Yn ogystal, ymchwiliwyd i'r gweithgareddau gwrthocsidiol a gwrthlidiol hefyd i ddeall mecanwaith posibl TGCT yn gynhwysfawr.

2 Defnyddiau a dulliau

2.1. Cemegau ac adweithyddion

Prynwyd STZ oddi wrth Sigma-Aldrich Corp. (Saint Louis, UDA). Cafwyd Met gan Sino-Americanaidd Shanghai Squibb Pharma. Cyflenwyd pecynnau ELISA o inswlin, C-peptid gan Elabscience Biotechnology Co., Ltd (Wuhan, Tsieina). Pecynnau ELISA o glwcos, hemoglobin glycosylaidd (HbA1c), cyfanswm colesterol (TC), triacylglycerol (TG), colesterol lipoprotein dwysedd isel (LDL-C), colesterol lipoprotein dwysedd uchel (HDL-C), superoxide dismutase (SOD) , glutathione peroxidase (GSH-Px), malondialdehyde (MDA), ffactor necrosis tiwmor- (TNF ), interleukin 1 (IL- ), interleukin 6 (IL-6) eu prynu gan Sefydliad Biobeirianneg Nanjing Jiancheng . Prynwyd pecynnau ELISA o brotein ffosfforylaidd kinase B (p-PKB) a glycogen synthase kinase ffosfforylaidd 3 (p-GSK3) gan Shanghai Enzyme-linked Biotechnology Co., Ltd. Echinacoside (purdeb Yn fwy na neu'n hafal i 98 y cant) ac acteoside ( purdeb Mwy na neu'n hafal i 97 y cant ) eu prynu oddi wrth Sefydliadau Cenedlaethol ar gyfer Rheoli Bwyd a Chyffuriau . Darparwyd Isoacteoside (purdeb Mwy na neu'n hafal i 98 y cant) gan Chengdu Must Biotechnology Co., Ltd.

2.2. Plannu adnoddau a pharatoi TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)

Mae coesyn suddlon sych oCistanchetubulosaei brynu gan Bozhou Yihongtang Fferyllol Co, Ltd, (Anhui, Tsieina) a nodwyd gan Dr Puyang Gong o Adran Botaneg Fferyllol, De-orllewin Minzu Prifysgol. Cafodd sbesimen taleb (Rhif 20161103) ei falu i mewn i bowdr a'i adneuo yn llysieufa Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd. Yn ôl safon cyffuriau cenedlaethol SFDA "Congrong Zonggan Jiaonang" (YBZ07482005-2011Z), mae'r Echdynnwyd cyffur crai (1 kg) â dŵr am dair gwaith ar ôl socian am 1 h. Ar ôl hidlo, cafodd yr hidlydd ei grynhoi o dan bwysau llai, ychwanegu alcohol i'r hydoddiant crynodedig nes bod y crynodiad ethanol wedi cyrraedd 60 y cant. Crynhowyd uwchnatant hylif i ddim blas alcohol ac yna ei buro gan resin macroporous. Yn gyntaf, casglwyd eluent dŵr a 40 y cant eluent ethanol yn olynol i'w defnyddio'n ddiweddarach. Yn ail, roedd eluent dŵr yn cael ei ail-chwistrellu i'r resin macroporous a'i eludo â dŵr. Taflwyd yr eluent dwfr. Yn drydydd, casglwyd elution gyda 40 y cant ethanol a'r eluent i'w ddefnyddio'n ddiweddarach. Yn olaf, cyfunwyd 40 y cant o eluents ethanol a'u crynhoi gan anweddydd cylchdro, yna cafodd yr ateb ei sychu trwy sychu chwistrellu. Cafwyd tua 60 g pŵer brown (hy TGCT). Canfuwyd purdeb TGCT yn unol â'r safon (YBZ07482005-2011Z), sy'n cyrraedd hyd at 853 mg/g. TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)({{0}}.21 mg) a thri safon gymysg (echinacoside: 131.3 ug, acteoside: 4.2 ug, isoacteoside: 39.4 ug) yn y drefn honno hydoddi mewn 1 mL methanol: dŵr (50/50, v/ v), ac yna ei hidlo trwy bilen 0.45 μm cyn y pigiad.

2.3. Dadansoddiad ansoddol o TGCT gan HPLC/Q-TOF-MS

Roedd y system HPLC wedi'i rhyngwynebu ag Agilent 6538 Q-TOF-MS (Agilent Corp, UDA) wedi'i gyfarparu ag ïoneiddiad electrochwistrellu. Cynhaliwyd y dadansoddiad ar golofn Zorbax SB-C18 (15{{10}} mm × 4.6 mm, 5 μm). Roedd y cyfnod symudol yn cynnwys dŵr methanol (yn cynnwys 0.1 y cant H3PO4). Y gyfradd llif oedd 1.0 mL/munud. Cafodd rhaglenni elution graddiant eu crynhoi fel a ganlyn: 0-20 mun, 18 y cant -28 y cant A; 20–50 mun, 28 y cant –32 y cant A; 50–60 mun, 32 y cant A; 60-70 mun, 32 y cant -50 y cant . Perfformiwyd TOF-MS yn y modd ïon positif a negyddol dros m/z 100-3000 o dan y paramedrau gweithredu canlynol: foltedd capilari 3500 V (ESI-) neu 4000 V (ESI plus ); sychu nwy, 10.0 L/mun; tymheredd nwy, 350 ◦C; pwysedd nebulizer, 35 psi; foltedd sgimiwr, 65 V; darn neu foltedd, 135 V; OCTRFV, 750 V. Rheolwyd yr holl ddata gan Gaffael Data ar gyfer TOF/Q-TOF Ver. B.03.01 a Dadansoddiad Ansoddol Ver. B.03.01 (Agilent Technologies, UDA) yn y drefn honno.

2.4. Dadansoddiad meintiol o TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)gan HPLC-DAD

Perfformiwyd gwahanu ar golofn Zorbax SB-C18 (150 mm × 4.6 mm, 5 μm) o fewn 50 munud (1.0 mL / mun). Roedd amodau cromatograffig ar gyfer HPLC-DAD yr un fath â'r dadansoddiad ansoddol. Gosodwyd cyfaint y pigiad, tymheredd y golofn, a thonfedd UV ar 5 μL, 30 ◦C, a 330 nm, yn y drefn honno.

2.5. Anifeiliaid arbrofol

Prynwyd llygod mawr SD gwrywaidd, sy'n pwyso 180 ± 20 g, o Ganolfan Anifeiliaid Labordy Nanjing Qinglongshan [Tystysgrif Rhif SCXK (SU) 2017-0001] a'u cartrefu yn y Cyfleuster Gofal Anifeiliaid yn Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd. (Jiangsu, Tsieina). Cymeradwywyd y gweithdrefnau gofal anifeiliaid ac arbrofol gan y Pwyllgor Sefydliadol Gofal a Defnydd Anifeiliaid, Sefydliad Huzhou ar gyfer Rheoli Bwyd a Chyffuriau (Cymeradwyaeth Rhif 19018), ac fe'u perfformiwyd yn unol â Rheoliadau Arbrofion Anifeiliaid Tsieina. Llygod mawr yn cael eu cynnal o dan reoli tymheredd (24 ± 2 ◦C) a lleithder (50 ± 10 y cant) gyda 12 h cylch golau a thywyll, cynefino i amodau byw am 7 diwrnod gan chow labordy arferol a dŵr ad libitum.

2.6. Sefydlu diabetes

Roedd llygod mawr yn y grŵp rheoli arferol (NC, n {=10) yn cael eu bwydo â diet arferol, tra bod llygod mawr arbrofol yn cael eu bwydo â HFSD (diet arferol wedi'i ategu â swcros 20 y cant, lard 10 y cant, 2.5) y cant o golesterol, ac 1 y cant o golate, 3.95 kcal/g) am 4 wythnos. Ar ôl ymprydio 12 h, cafodd llygod mawr eu chwistrellu'n fewnperitoneol gydag un dos o STZ (30 mg / kg), a oedd yn hydoddi mewn byffer citrad oer (0.1 M, pH 4.5) yn union cyn ei ddefnyddio. Ar yr 8fed diwrnod o chwistrellu STZ, cymerwyd sampl gwaed o'r pen cynffon gan nodwydd cymryd gwaed tafladwy, a phenderfynwyd ar glwcos plasma ymprydio (FPG) gan y glucometer cludadwy (LifeScan, Inc. UK). Ystyriwyd llygod mawr â symptomau polyuria, polydipsia, a FPG Mwy na neu'n hafal i 11.1 mmol/L yn llygod mawr diabetig a'u rhannu ar hap yn bum grŵp (n =10).

Grŵp I: NC, wedi'i fwydo â 0.5 y cant sodiwm carbocsyl methylcellulose (CMC Na, 10 mL/kg).

Grŵp II: rheolaeth diabetig (DC), wedi'i fwydo â 0.5 y cant CMC-Na (10 mL/kg).

Grŵp III: TGCT-50, wedi'i drin â TGCT (50 mg/kg).

Grŵp Ⅳ: TGCT-100, wedi'i drin â TGCT (100 mg/kg).

Grŵp Ⅴ: TGCT-200, wedi'i drin â TGCT (200 mg/kg).

Grŵp Ⅵ: Wedi bodloni{0}}, wedi'i drin â Met (200 mg/kg).

Dewiswyd y dosau a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth hon yn seiliedig ar Pharmacopeia Tsieineaidd (argraffiad 2015). Roedd pob grŵp yn cael ei roi ar lafar unwaith y dydd ac yn parhau i dderbyn eu diet am 6 wythnos arall.

2.7. Sylwch ar gyflwr cyffredinol llygod mawr

Gwelwyd cyflwr ffwr, allbwn wrin, a goroesiad llygod mawr bob dydd. Cafodd cymeriant pwysau corff (BW) a chalorïau eu monitro trwy gydol yr arbrawf. Gwerthuswyd FPG am 0, 2il, 4ydd a 6ed wythnos ar ôl triniaeth gyda TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa).

2.8. Prawf goddefgarwch glwcos trwy'r geg (OGTT)

Perfformiwyd yr OGTT ar lygod mawr oedd wedi ymprydio dros nos yng ngham terfynol yr astudiaeth gyfan. Dim ond 60 sampl gwaed μL a gasglwyd gyda phibed capilari o'r sinws orbitol (0 h), yna'i roi gyda TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)(50 mg/kg, 100 mg/kg, a 200 mg/kg) neu Met (200 mg/kg) yn y drefn honno. Casglwyd samplau gwaed ar 0.5 h, 1 h, 2 h ar ôl llwyth glwcos (2 g / kg). Anestheteiddiwyd y llygod mawr ag isoflurane am ychydig funudau cyn cymryd gwaed, ac yna pwyswch ar unwaith i atal y gwaedu gan gotwm hemostatig. Gwnaed yr holl arbrofion gyda gofal da i sicrhau lles yr anifeiliaid. Pennwyd crynodiadau glwcos plasma gan becyn glwcos yn seiliedig ar y dull glwcos oxidase peroxidase. Cyfrifwyd yr arwynebedd o dan gromlin glwcos (AUC-G) i gyfeirio at y llenyddiaeth (Shao et al., 2013).

2.9. Pennu inswlin ymprydio (FINS) a mynegai sensitifrwydd inswlin (ISI)

Ysbaid o 1 diwrnod ar ôl OGTT, roedd yr holl lygod mawr mewn amodau da heb unrhyw symptomau fel dallineb a llid. Yna, cawsant eu anestheteiddio â sodiwm pentobarbital (40 mg / kg, ip) ar ôl ymprydio am 12 h a chasglwyd samplau gwaed o'r aorta abdomenol gyda heparin a hebddo ar gyfer amcangyfrifon biocemegol. Casglwyd serwm o samplau gwaed (heb heparin) trwy allgyrchiad. Assayed FINS gan y pecyn ELISA. Penderfynwyd FPG gan ddefnyddio pecyn masnachol yn seiliedig ar y dull glwcos peroxidase. Cyfrifwyd ISI yn unol â'r fformiwla: ISI=1/[FINS (pmol/L) × FPG (mmol/L)] (Wang et al., 2013).

2.10. Amcangyfrif synthesis glycogen yn yr afu a'r cyhyrau

Cafodd cyhyrau'r afu a'r gastrocnemius eu tynnu allan, eu rinsio, eu pwyso a'u storio ar − 70 ◦C. Mesurwyd glycogen yn yr afu a'r cyhyrau gan y dull anthrone fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Ren et al., 2015). Mynegwyd cynnwys glycogen fel mg/g pwysau gwlyb meinwe. Pennwyd gweithgareddau hexokinase (HK) a pyruvate kinase (PK) yn yr afu gan gitiau sydd ar gael yn fasnachol yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.

2.11. Dadansoddiad biocemegol

Mesurwyd HbA1c mewn gwaed cyfan (gyda heparin) gan becyn diagnostig. Serwm C-peptid, p-PKB, p-GSK3, TC, TG, LDL-C, HDL-C, SOD, GSH-Px, MDA, TNF-, IL-6, ac IL-1 eu profi gan ddefnyddio citiau masnachol yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.

2.12. Gwerthusiad histolegol o'r pancreas

Roedd meinweoedd pancreas hefyd yn cael eu halltudio, eu rinsio, a'u gosod mewn fformalin niwtral 10 y cant, yna eu dadhydradu mewn ethanol graddiant (75 y cant, 85 y cant, 95 y cant, a 100 y cant) a xylene (100 y cant). Ar ôl treiddiad, cawsant eu hymgorffori mewn paraffin a'u torri'n adrannau 3 μm o drwch gyda microtome cylchdro. Cafodd adrannau meinwe eu staenio â hematoxylin-eosin (H&E) ar gyfer archwiliadau microsgopig ysgafn (Chen et al., 2014).

2.13. Dadansoddiad ystadegol

Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol gan SPSS fersiwn 16.0 meddalwedd. Cyflwynwyd y data gan y cymedr ± SD. Perfformiwyd cymariaethau ystadegol rhwng y grwpiau gan ddefnyddio ANOVA unffordd ac yna prawf Tukey a chymerwyd gwerth p < {{="" }}.05="" yn="" ystadegol="">

3. Canlyniadau

3.1. Dadansoddiad ffytocemegol o TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)

Cynhaliwyd y dadansoddiad ansoddol a'i gyflwyno yn y deunyddiau atodol. Dangoswyd cyfanswm y cromatogram ïon yn y modd ïon negatif yn Ffig. S1. Neilltuwyd data MS yn betrus trwy gymharu â data mewn adroddiad blaenorol (Li et al., 2015) a'u crynhoi yn Nhabl S1. Mae'r dulliau dadansoddol ar gyfer meintioli'r marcwyr hefyd wedi'u dilysu a'u disgrifio'n fyr yn y deunyddiau atodol. Cyflwynwyd cromatogramau HPLC yn Ffig. 1. Tri phrif gyfansoddyn (echinacoside, acteoside, ac isoacteoside) o TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)eu nodi o gymharu â'r sylweddau cyfeirio. Dangoswyd adnabyddiaeth y cyfansoddion a'u crynodiadau yn y TGCT yn Nhabl 1.

3.2. Effeithiau TGCT ar Dyfrffyrdd Prydain a chymeriant calorïau

Fel y dangosir yn Ffig. 2A, dangosodd llygod mawr a gafodd eu bwydo HFSD fod y pwysau wedi cynyddu 41 g ar gyfartaledd o'i gymharu â grŵp y CC ar ôl 4 wythnos. Fodd bynnag, mae'n amlwg bod STZ wedi lleihau BW llygod mawr o'i gymharu â grŵp y CC. Mewn cyferbyniad, cynyddodd Dyfrffyrdd Prydain mewn grwpiau TGCT (100 a 200 mg/kg) yn raddol ac yn sylweddol (p <0.05) 8.1="" y="" cant="" a="" 11.1="" y="" cant="" yn="" y="" drefn="" honno="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" dc="" erbyn="" diwedd="" cyfnod="" yr="" arbrawf="" ,="" a="" nododd="" fod="">(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)gallai atal colli pwysau gormodol o dan amodau patholegol. Roedd cymeriant calorïau grŵp y CC yn amlwg yn is na'r grwpiau eraill, ac nid oedd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol yn y cymeriant calorïau rhwng y pum grŵp arall (Ffig. 2 B).

3.3. Effeithiau TGCT ar FPG, OGTT, a HbA1c

Dangosodd llygod mawr diabetig a achosir gan STZ gynnydd rhyfeddol mewn FPG o gymharu â grŵp y CC (p < 0.01)="" fel="" y="" dangosir="" yn="" ffig.="" 3a.="" gweinyddu="" tgct="" ar="">(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)dangos effaith hypoglycemig mewn modd sy'n dibynnu ar amser a dos. TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)Gostyngodd (100 a 200 mg/kg) y lefelau FPG yn sylweddol ar 4ydd (22.1 y cant a 24.8 y cant ) a 6ed (23.2 y cant a 56.4 y cant ) wythnos o gymharu â'r grŵp DC. Fel y dangosir yn Ffig. 3B a C, mae TGCT (100 mg/kg a 200 mg/kg) yn amlwg wedi gostwng y glwcos yn y gwaed 16.1 y cant a 22.2 y cant ar 0.5 h a gostyngiad o 17.2 y cant a 26.5 y cant ar 1 h, a'r AUC Gostyngwyd -G o grwpiau TGCT hefyd 8.1 y cant , 18.5 y cant , a 25.4 y cant yn y drefn honno. Fel y dangosir yn Ffig. 3D, bu cynnydd sylweddol mewn HbA1c (93.3 y cant) o'i gymharu â grŵp y CC, tra bod gweinyddiaeth lafar TGCT (100 mg/kg a 200 mg/kg) i lygod mawr diabetig wedi gostwng yn rhyfeddol (p < 0.05)="" hba1c="" (26.7="" y="" cant="" a="" 37.4="" y="" cant,="" yn="" y="" drefn="" honno)="" o="" gymharu="" â="" grŵp="">

3.4. Cynnwys glycogen yn yr afu a'r cyhyrau

Fel y dangoswyd yn Ffig. 4A a B, gostyngwyd lefelau glycogen yn sylweddol mewn llygod mawr diabetig. Pan fydd crynodiadau gwahanol o TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)eu rhoi i lygod mawr diabetig am 6 wythnos, roedd glycogen yr afu mewn grwpiau TGCT (100 mg/kg a 200 mg/kg) yn uwch (25.2 y cant a 40.8 y cant) na'r rhai yn y grŵp DC (p <0.05 ,="" ffig.="" 4a).="" dangoswyd="" effaith="" debyg="" yn="" y="" cyhyr="" â="" glycogen="" yn="">(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)grwpiau (100 mg/kg a 200 mg/kg) yn uwch (40.7 y cant a 52.6 y cant ) na'r rhai yn y grŵp DC (p < 0.05, Ffig. 4B).

3.5. Effeithiau TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)ar inswlin serwm, C-Peptide, ac ISI

Fel y dangosir yn Nhabl 2, roedd inswlin a C-peptid yn amlwg (p < 0.01)="" wedi="" gostwng="" mewn="" llygod="" mawr="" diabetig="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" nc.="" fodd="" bynnag,="">(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)at all doses caused no significant increase in insulin and C-peptide levels (p >{{{0}}.05), hyd yn oed os oedd inswlin a C-peptid mewn grwpiau sy'n cael eu trin gan TGCT ychydig yn uwch na'r hyn yn y grŵp DC. Yn y cyfamser, fe wnaethom gyfrifo'r ISI yn Ffig. 4C. Mewn cyferbyniad â'r secretion inswlin, codwyd ISI yn y drefn honno 32.9 y cant a 37.8 y cant gan TGCT (100 mg / kg a 200 mg / kg) o'i gymharu â grŵp DC (p <>

3.6. Archwiliad histopatholegol o'r pancreas

Er mwyn gwirio effaith TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)ar adfywio ynysoedd pancreatig, cynhaliwyd dadansoddiad histolegol o'r pancreas. Yn Ffig. 5A, arsylwyd strwythur histolegol arferol ac ynysoedd maint yng ngrŵp y CC. Mewn cyferbyniad, STZ-chwistrellu arwain at leihau nifer a diamedr o ynysoedd gyda newidiadau microvesicular amlwg (Ffig. 5 B). Y ddau TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)a Cyflawnwyd cynnydd sylweddol yn nifer a maint yr ynysoedd trwy ddadansoddi sgorio (Ffig. 5 C-F).

3.7. Effeithiau TGCT ar p-PKB, p-GSK3 , HK a PK

Yn Nhabl 2, canfuwyd bod lefelau ffosfforyleiddiad PKB a GSK3 wedi gostwng yn sylweddol (p <{2}}.05) mewn="" llygod="" mawr="" diabetig.="">(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)(100 mg/ kg a 200 mg/kg) wedi cynyddu crynodiadau p-PKB (TGCT-100) yn rhyfeddol: 13.5 y cant , p < 0.05="" a="" tgct-200:="" 16.7="" y="" cant="" ,="" p="">< 0.05)="" a="" p="" gsk3="" (tgct-200:="" 18.3="" y="" cant="" ,="" p="">< 0.01).="" gwelwyd="" hefyd="" effeithiau="" tebyg="" tgct="" ar="" hk="" a="" pk.="" cynyddodd="" grwpiau="" tgct="" weithgareddau="" hk="" (tgct-100:="" 30.2="" y="" cant="" ,="" p="">< 0.05="" a="" tgct-200:="" 59.1="" y="" cant="" ,="" p="">< 0.01)="" a="" pk="" (tgct-200:="" 32.7="" y="" cant="" ,="" t.="">< 0.05)="" na'r="" rhai="" yn="" y="" grŵp="">

3.8. Effeithiau TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)ar dyslipidemia

Fel y dangosir yn Nhabl 3, roedd llygod mawr a gafodd eu trin â TGCT (100 mg/kg a 200 mg/kg) wedi lleddfu’r annormaleddau lipid yn sylweddol. Gostyngwyd TG 19.8 y cant (p < 0.05)="" a="" 25.9="" y="" cant="" (p="">< 0.01);="" gostyngwyd="" tc="" 28.5="" y="" cant="" a="" 31.4="" y="" cant="" (p="">< 0.05);="" gostyngwyd="" ldl-c="" 20.0="" y="" cant="">< 0.01)="" compared="" with="" dc="" group.="" however,="" the="" suppressed="" hdl-c="" level="" in="" dc="" group="" was="" significantly="" elevated="" by="" 26.8%="" (p="" <="" 0.05)="" in="" tgct-200="">

3.9. Effeithiau TGCT ar straen ocsideiddiol a llid

Yng ngoleuni rolau pwysig straen ocsideiddiol a llid yn pathoffisioleg diabetes, gwnaethom werthuso gallu TGCT ar straen ocsideiddiol a llid mewn llygod mawr diabetig. TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)(100 a 200 mg/kg) i bob pwrpas wedi cynyddu (14.7 y cant , p < 0.05 a 20.5 y cant , p< 0.01)="" the="" activity="" of="" sod,="" remarkably="" elevated="" (16.3%,="" p="" <="" 0.01="" and="" 22.3%,="" p="" <="" 0.01)="" the="" gsh-px="" activity="" and="" significantly="" decreased="" (15.0%,="" p="" <="" 0.05="" and="" 19.7%,="" p="" <="" 0.05)="" the="" mda="" formation="" compared="" with="" dc="" group="" in="" table="" 3.="" similarly,="" tgct="" (200="" mg/kg)="" treatment="" also="" blocked="" the="" stz-induced="" overproduction="" of="" pro-inflammatory="" cytokines="" tnf-α="" (21.8%,="" p="" <="" 0.01),="" il-6="" (14.0%,="" p="" <="" 0.05)="" and="" il-1β="" (15.2%,="" p=""><>

4. Trafodaeth

Mae diabetes yn anhwylder metabolig cynyddol a chronig a nodweddir yn bennaf gan hyperglycemia. Ar hyn o bryd, mae FPG yn fesur penodol o grynodiad glwcos yn y gwaed, mae OGTT yn faen prawf canfod sensitif o annormaleddau cynnar wrth waredu glwcos, tra bod HbA1c yn cael ei ddefnyddio'n helaeth fel mynegai safonol aur ar gyfer rheolaeth glycemig yn adlewyrchu lefel glwcos ar gyfartaledd dros 120 diwrnod cyn y prawf. Nagy et al., 2018; Gan et al., 2018). Defnyddir FPG, OGTT, a HbA1c yn glinigol ar gyfer diagnosis a rheoli prediabetes a diabetes (Chai et al., 2017). Yn ein hastudiaeth, mae'n amlwg bod y FPG o lygod mawr diabetig wedi'u trin â TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)(100 mg/kg a 200 mg/kg) wedi gostwng yn sylweddol o gymharu â'r grŵp DC. Fel y data a ddangosir yn OGTT ac AUC-G, cafodd y goddefgarwch glwcos diffygiol a chyfradd cymryd glwcos eu gwrthdroi gan TGCT mewn llygod mawr diabetig. Yn y cyfamser, cefnogwyd y canlyniad hefyd gan fesur cynnwys HbA1c. Roedd y data hyn yn dangos bod TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)gwella mynegeion ffisiolegol llygod mawr diabetig trwy reoleiddio homeostasis glwcos yn y gwaed.

Mae secretion inswlin â nam ac IR yn chwarae rhan hanfodol yn natblygiad hyperglycemia. Mae targedu'r naill neu'r llall ohonynt yn briodol i wella rheolaeth glycemig ac atal T2DM (Szoke a Gerich, 2005; Punthakee et al., 2018). Mae sawl ymchwilydd wedi adrodd bod cyfuniad o ddeiet braster uchel a STZ dos isel yn fodd effeithiol o ysgogi T2DM mewn arbrofion gydag anifeiliaid. Mae STZ dos isel yn achosi amhariad ysgafn ar secretion inswlin sy'n fwy tebyg i gamau diweddarach T2DM (Gheibi et al., 2017). Yn yr astudiaeth hon, nid yw TGCT yn cynyddu'r secretiad inswlin yn sylweddol nac wedi adfer ynys llygod mawr diabetig pancreas, hyd yn oed os oedd inswlin a nifer yr ynysoedd mewn grwpiau a driniwyd gan TGCT yn uwch na'r hyn yn y grŵp DC. Mae'r canfyddiadau hyn yn unol â'r astudiaeth flaenorol mewn llygod db/db (Xiong et al., 2013). Dangosodd ein canlyniadau gynnydd sylweddol mewn pwysau mewn llygod mawr diabetig a gafodd eu trin â TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa), y gellir ei esbonio gan gynnydd bach o inswlin a all atal cataboliaeth protein mewn meinwe cyhyrau (Adams et al., 2019). Ar ben hynny, dangosodd canlyniad ISI fod TGCT yn amlwg wedi lleddfu IR llygod mawr diabetig sy'n gyson ag adroddiad blaenorol (Kong et al., 2018), a ddarparodd dystiolaeth newydd o ran y mecanwaith posibl ar effaith gwrthddiabetig TGCT.

Fel y gwyddom i gyd, llwybr PKB/GSK3 yw un o'r llwybrau signalau inswlin mwyaf hanfodol, awgrymwyd i gyfryngu synthesis glycogen a achosir gan inswlin (Zheng et al., 2015). Mae HK a PK yn gweithredu fel targedau cyffuriau posibl wrth drin diabetes yn ffarmacolegol. Mae gweithgareddau HK a PK is wedi'u cadarnhau yn IR, tra bod actifadu HK a PK yn achosi mwy o gronfeydd glycogen wrth gefn neu glycolysis yn cynhyrchu egni llawnach trwy ddefnyddio glwcos yn y gwaed (Hu et al., 2014). Yn yr astudiaeth bresennol, TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)cynyddodd triniaeth ar yr un pryd y mynegiant proteinau ffosfforylaidd o PKB a GSK3 , gan arwain at wrthdroad sylweddol yng ngweithgareddau HK a PK, ac adferodd y cynnwys glycogen yn yr afu a'r cyhyrau yn sylweddol wrth i'r glwcos yn y gwaed leihau. Roedd y canlyniadau hyn yn dangos bod TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)actifadu ensymau allweddol y llwybr signalau inswlin, a darparu ymhellach y dystiolaeth bod sensitifrwydd inswlin wedi gwella'n wirioneddol mewn llygod mawr diabetig.

Mae diabetes hirdymor hefyd yn cyfrannu at hybu LDL-C a lleihau lefelau HDL-C sy'n achosi dadreoleiddio lipid (Jayashankar et al., 2016), ac mae dyslipidemia yn farciwr sefydledig ar gyfer camweithrediad endothelaidd a risg cardiofasgwlaidd mewn diabetes (Shahwan et al., 2019). Yn ein hastudiaeth, gostyngodd TGCT (200 mg/kg) lefelau TC, TG, a LDL-C yn rhyfeddol, a gwella lefel HDL-C mewn llygod mawr diabetig, sy'n gyson â'r adroddiadau blaenorol.Cistanchetubulosarheoleiddio'n effeithiol y metaboledd lipid mewn llygod (Shimoda et al., 2009; Xiong et al., 2013). Roedd y canfyddiadau hyn yn dangos bod TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)Gall fod yn fwy buddiol i unigolion diabetig ag annormaleddau lipid gwaed.

Mae STZ yn wrthfiotig sbectrwm eang, sy'n cael effaith wenwynig ddetholus uchel ar gelloedd ynysoedd pancreatig sy'n deillio o'r cynnydd mewn radical superoxide, ac ymhellach i reolaeth glycemig wael yn ei dro (Ghosh et al., 2015; Swain et al., 2020 ). Yn y cyfamser, mae straen ocsideiddiol hefyd yn achos pwysig o IR mewn nifer o amgylcheddau (Taniguchi et al., 2006). Mae IR a diabetes yn gysylltiedig â gweithgareddau llai o ensymau gwrthocsidiol, megis SOD a GSH-Px (Styskal et al., 2012). Roedd astudiaethau blaenorol wedi awgrymu bod atal straen ocsideiddiol yn gallu gostwng glwcos yn y gwaed mewn llygod mawr diabetig (Lim et al., 2012; Gao et al., 2016). Yn yr astudiaeth hon, triniaeth gyda TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)adfer yn sylweddol swyddogaethau amddiffynnol cellog SOD a GSH-Px a lleihau lefelau MDA mewn llygod mawr diabetig, a amlygodd fod gan TGCT yr eiddo mewn gwrthocsidiad.

Y prif etholwyr yn TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)yn PhGs ac mae cyfanswm cynnwys echinacoside, acteoside ac isoacteoside yn fwy na 661 mg/g. Yn gyffredinol, profwyd bod planhigion sy'n meddu ar gydrannau gwrthocsidiol uchel, fel PhGs, yn cael effeithiau hypoglycemig (Morikawa et al., 2014; Shimada et al., 2017; Spínola et al., 2019). Felly, fe wnaethom ddyfalu bod effaith gwrth-diabetig TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)gellir ei briodoli'n rhannol i weithgarwch gwrthocsidiol PhGs. Wrth ystyried cynnwys echinacoside yn TGCT, mae angen astudiaethau pellach i ymchwilio i effeithiau echinacoside ar IR a diabetes modelau in vivo ac in vitro.

Cydnabyddir yn eang bod diabetes mellitus yn glefyd llidiol. Gall cytocinau llidiol fel TNF- , IL-6, ac IL-1 ymyrryd â llwybr signalau derbynyddion inswlin, ac arwain ymhellach at IR (Bastard et al., 2006). Ymddengys bod llid yn darged cyffuriau dichonadwy wrth drin IR, a thrwy estyniad diabetes (Chen et al., 2015). Yn yr astudiaeth gyfredol, TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)gostwng lefel TNF- , IL { { }} , ac IL { { }} , a ddangosodd yr effaith gwrthlidiol. Gall hwn fod yn fecanwaith gwrth-diabetig arall o TGCT mewn llygod mawr diabetig.

Mae tystiolaeth gronnus yn dangos bod glwcos gwaed uchel parhaus yn arwain at annormaleddau yn strwythur a swyddogaeth cylchredeg proteinau a lipidau, sy'n arwain at glycocsidiad a perocsidiad, ac yna'n hyrwyddo cynhyrchu cytocinau llidiol. Yn yr un modd, mae mwy o cytocinau llidiol yn arwain at gynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol a mathau adweithiol eraill, sy'n hyrwyddo straen ocsideiddiol a difrod ocsideiddiol. Mae hyn yn arwain at gylch dieflig (Aghadavod et al., 2016; Domingueti et al., 2016). Felly, gellir cyfrannu at leihau glwcos yn y gwaed a lipidau at effeithiau gwrthocsidiol a gwrthlidiol TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa). I ryw raddau, nid yw'r union fecanwaith gwrthddiabetig yn gwbl glir ac mae angen ymchwilio ymhellach iddo.

5. Casgliad

I grynhoi, dangosodd yr astudiaeth hon fod TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)yn gyfrwng effeithiol ar gyfer trin hyperglycemia a hyperlipidemia mewn llygod mawr diabetig a achosir gan ddeiet/STZ. Ar ben hynny, gallai'r effaith gwrthddiabetig fod yn gysylltiedig yn bennaf â phriodweddau gwrthocsidiol a gwrthlidiol TGCT. Byddai'r astudiaeth hon yn cyflwyno'r posibilrwydd o gyflwyno TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)mewn triniaeth diabetes. Fodd bynnag, mae mecanwaith gwrthddiabetig manwl TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa)yn parhau i fod yn ansicr, ac mae angen astudiaethau pellach in vivo ac in vitro.

Cyfraniadau awdur

Cenhedlu a dylunio: ZQM, KNZ, a WX. Paratoi TGCT(cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosa), dadansoddi cyfansoddion cemegol, a dilysu methodoleg: RG, ZKX, a WJL. Anwythiad diabetes a thriniaeth ddyddiol: KNZ a HF. Paratoi samplau ar gyfer dadansoddiad biocemegol: KNZ, HF, a ZQM. Dadansoddi data a drafftio llawysgrifau: KNZ, ZQM, ac YST. Dilysu data ac adolygu llawysgrifau: WZH, GD, ac YST.

Datganiad o ddiddordeb cystadleuol

Nid yw'r awduron wedi datgan unrhyw wrthdaro buddiannau.

Diolchiadau

Cefnogwyd yr astudiaeth hon yn ariannol gan Raglen Creu a Gweithgynhyrchu Cyffuriau Newydd Allweddol y Prosiect Mawr Gwyddoniaeth a Thechnoleg Cenedlaethol, Tsieina (Rhif Grant 2013ZX09402203), a Phrosiect Gwyddoniaeth a Thechnoleg Huzhou, Talaith Zhejiang (Rhif Grant 2018GZ03). Diolchwn i Mrs. Ning Su a Mrs Sha Liu o sefydliad meddygaeth Jiangsu am eu cymorth gydag astudiaethau meinwe. Cafodd Jinfeng Wu a Xuefei Zhang ac ati eu cydnabod yn ddiolchgar yn yr ymchwil hwn.

Atodiad A. Gellir dod o hyd i ddata atodol i'r erthygl hon ar-lein yn https://doi. org/10.1016/j.jep.2021.113991.

O: 'Effeithiau hypoglycemig a hypolipidemig cyfanswm glycosidau oCistanchetubulosamewn llygod mawr diabetig a achosir gan ddeiet/streptosotosin' erbynKuiniu Zhu, et al

---Cylchgrawn Ethnopharmacology 276 (2021) 113991