Adnabod Sitogluside fel Asiant Posibl i Leihau Pigmentu'r Croen Trwy Ffarmacoleg Rhwydwaith

Cyswllt: ali.ma@wecistanche.com

Haoran Guo, 1 Hongliang Zeng, 2 Chuhan Fu, 1 Jinhua Huang, 1 Jianyun Lu, 1 Yibo Hu, 1Ying Zhou, 1 Liping Luo, 1 Yushan Zhang, 1 Lan Zhang, 1 Jing Chen, 1 a Qinghai Zeng 1

Mae llawer o feddyginiaethau Tseiniaidd traddodiadol (TCMs) gydacroen-gwynomae eiddo wedi'u cofnodi yn y presgripsiynau Ben-Cao-Gang-Mu a infolk, ac mae rhywfaint o lenyddiaeth yn cadarnhau bod gan eu detholiadau'r potensial i atalpigmentiad. Fodd bynnag, mae astudiaethau nosystematig wedi nodi mecanweithiau rheoleiddio penodol y cynhwysion actif posibl. Nod yr astudiaeth hon oedd sgrinio'r cynhwysion mewn TCMs sy'n atal croenpigmentiaddrwy system ffarmacoleg rhwydwaith ac i archwilio mecanweithiau sylfaenol. Fe wnaethom nodi 148 o gynhwysion gweithredol posibl o 14 TCM, ac yn seiliedig ar “radd” gyfartalog y paramedrau topolegol, y pum TCM uchaf (Fructus Ligustri Lucidi, Hedysarum multijugum Maxim., Ampelopsis japonica, Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones, a Paeoniae Radix Alba) hynny oedd fwyaf tebygol o achosicroen-gwynotrwy brosesau gwrthlidiol eu dewis. Mae Sitogluside, y cynhwysyn mwyaf cyffredin yn y pum TCM uchaf, yn atal melanogenesis mewn celloedd melanoma dynol (MNT1) a chelloedd melanoma murine (B16F0) ac yn lleihau croenpigmentiadyn zebrafish. Ymhellach, datgelodd ymchwil fecanistig fod sitogluside yn gallu dadreoleiddiotyrosinase(TYR) trwy atal y llwybrau ERK a p38 ac atal gweithgaredd TYR. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod ffarmacoleg rhwydwaith yn arf effeithiol ar gyfer darganfod cyfansoddion naturiol gyda nodweddion gwynnu croen a phenderfynu ar eu mecanweithiau posibl. Mae Sitogluside yn gynhwysyn gweithredol newydd sy'n gwynnu'r croen gydag effeithiau rheoleiddio deuol sy'n atalTYRmynegiant a gweithgaredd.

Cliciwch iDyfyniad Cistanche DHT ar gyfer gwynnu croen

Rhagymadrodd

Mae Melanin nid yn unig yn pennu lliw croen dynol, llygaid, a gwallt ond mae hefyd yn chwarae rhan allweddol mewn cuddliw, dynwared, cyfathrebu cymdeithasol, ac amddiffyn rhag pelydrau uwchfioled. Fodd bynnag, pan fydd melanin yn cael ei orgynhyrchu a'i ddosbarthu'n annormal yn yr epidermis, mae'n achosi amrywiaeth cyflyrau, megis brychni haul a melasma, a all effeithio'n negyddol ar harddwch canfyddedig a hyder cymdeithasol yr unigolyn [1]. Melanin yw cynnyrch terfynol L-tyrosine yn dilyn camau lluosog o adweithiau ensymatig ac mae'n cael ei syntheseiddio mewn melanosomau melanocyte [2]. Yn y croen, mae melanocytes wedi'u lleoli yn haen waelodol yr epidermis a gallant gynhyrchu a throsglwyddo aeddfedmelanosomau i keratinocytes, gan achosi croen.pigmentiad [3]. TYRyw'r prif ensym sy'n cyfyngu ar gyfraddau mewn cynhyrchu melanin [4], a ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia (MITF) yw'r prif ffactor trawsgrifio sy'n rheoleiddio mynegiant trawsgrifio TYR [5].

Yn ddiweddar, mae astudiaethau wedi canfod bod ymatebion llidiol yn chwarae rhan bwysig wrth reoleiddio melanogenesis [6]. Er enghraifft, gall IL-18, a gynhyrchir gan gelloedd Langerhans, dendriticcells, a keratinocytes yn yr epidermis, ddadreoleiddio mynegiadau TRP{{2} }} (protein sy'n gysylltiedig â thyrosinase 1) aTRP-2 (protein sy'n gysylltiedig â tyrosinase 2) trwy actifadu llwybrau thep38/MAPK (protein kinase a weithredir gan mitogen) a PKA (protein kinase A), gan hyrwyddo melanogenesis[7, 8] ]. Mae TNF- yn is-reoleiddio cynhyrchiad melanin B16 yn bennaf trwy actifadu NF-κB [9]. Dangoswyd bod PGe2 (prostaglandin e2), sy'n cael ei gyfrinachu gan ffibroblastau a keratinocytes, yn ysgogi gwahaniaethu celloedd dendritig a chychwyn gweithgareddTYR mewn melanocytes trwy'r llwybrau signalau cAMP (monoffosin adenosine cylchol) a Plc (ffosffolipase c) [10]. Mae PIH (hyperbigmentation postinflammatory) yn fath o felaneiddiad croen adweithiol [11]. Mae afiechydon croen amrywiol, trawma, neu lawdriniaeth gosmetig yn aml yn arwain atpigmentiado'r ardal yr effeithir arni, yn enwedig mewn pobl o liw [12]. Mae cleifion â PIH fel arfer yn dioddef straen seicolegol aruthrol, sy'n effeithio'n negyddol ar ansawdd eu bywyd mewn achosion difrifol. Felly, mae rhai meddyginiaethau sy'n rheoleiddio llid yn cael eu defnyddio i drin PIH a chlefydau eraill sy'n achosi hyperpigmentation.Er enghraifft, canfuwyd bod resveratrol, a leihaodd y difrod llidiol mewn celloedd HaCaT [13], yn atal melaninsynthesis trwy reoleiddio signal allgellog o kinase1/2 a signalau o ffosffoinositide 3-kinase/Akt [14].

gwynnumae asiantau, megis hydroquinone (Pencadlys) a fitamin C, yn cael eu defnyddio'n draddodiadol i drin pigmentiad [15]. Mae pencadlys yn hydroxyphenol gydag effaith ataliol bwerus onmelanogenesis. Fodd bynnag, oherwydd sgîl-effeithiau amrywiol megis dermatitis cyswllt llidiog neu alergaidd, afliwiad ewinedd, a nam ar wella clwyfau, mae'r defnydd o Bencadlys wedi'i gyfyngu[16, 17]. Mae fitamin C yn atalTYRtrwy ryngweithio â choprion ar safleoedd gweithredol TYR, a thrwy hynny leihau melanogenesis.Fodd bynnag, mae fitamin C yn ansefydlog mewn cynhyrchion gorffenedig. Yn ogystal, os yw crynodiad fitamin C yn uwch na 20 y cant, gall achosi llid y croen [18]. Felly, mae galw mawr am gynhwysion naturiol o ystod eang o ffynonellau sy'n ddiogel, yn effeithiol, yn sefydlog iawn ac yn hawdd eu storio.

Yn ddiweddar, canfuwyd bod mwy o gynhwysion TCM yn effeithiol wrth atal croenpigmentiad, megis apigeninand paeoniflorin [19–21]. Mae'r TCMs â gweithgaredd gwynnu a ddisgrifir yn y Ben-Cao-Gang-Mu yn cael eu defnyddio'n helaeth fel ryseitiau cyfrinachol yn Tsieina, a'r dyddiau hyn, cadarnheir eu bod yn cael yr effaith o atal pigmentiad. Er enghraifft, mae echdyniad Hedysarum multijugum Maxim (rhisom Astragalus membranaceus (Fisch.) bynj) yn achosi gwynnu croen trwy atal y llwybr ERK [22]. Gall echdyniad sych Typhonii Rhizoma (rhisom Sauromatum gigan-teum (Engl.) Cusimano a Hett.) atal ytyrosinasegweithgaredd in vitro [23]. Ac mae meddygaeth sy'n seiliedig ar dystiolaeth hefyd wedi cadarnhau bod gan echdyniad SapindiMukorossi Semen (ffrwyth Sapindus mukorossi Gaertn.), Sy'n atal gweithgaredd tyrosinase, y potensial i gael ei ddefnyddio fel ychwanegyn cyffuriau a chosmetig [24]. Mae rhai presgripsiynau gwerin traddodiadol, er nad ydynt wedi'u crynhoi'n grynodeb, yn cael eu defnyddio'n helaeth hefyd. Mae San-Bai-Tang (SBT) yn alexample nodweddiadol. Ye et al. dangos y gallai SBT leihau cynhyrchiad melanin trwy atal y llwybr signalau p38 / MAPK a gweithgaredd TYR [25]. Dangoswyd hefyd bod TCMs eraill a ddisgrifiwyd mewn rhai presgripsiynaugwynnu croeneffeithiau. Mae detholiad Coicis Semen (had Coix AquaticaRoxb.) yn atal cynhyrchu melanin trwy is-reoleiddio MITF, TYR, TRP-1, a TRP-2 [26]. Ar ben hynny, mae cellassay oTYRyn dangos bod Ampelopsis japonica (y rhizomeof Ampelopsis japonica (Thunb.) Makino) yn atal gweithgaredd madarch TYR gan fwy na 50 y cant [27]. Profwyd bod y TCMs gwyn a gofnodwyd yn y presgripsiynau hynafol hyn yn effeithiol gan dechnegau arbrofol modern, ond mae'r rhan fwyaf ohonynt yn cael eu gwirio ar ffurf darnau, ac nid yw'r cynhwysion actif sy'n gweithio yn glir. Cododd hyn ein diddordeb yng nghynhwysion gweithredol TCMs ag effeithiau gwynnu wedi'u cofnodi mewn presgripsiynau hynafol.

Ar ben hynny, mae gan TCMs neu bresgripsiynau gynhwysion cymhleth, dulliau gweithredu amrywiol, a chynhwysion gweithredol anhysbys. Yn ogystal, mae anghysondeb ffactorau megis ansawdd deunyddiau crai, dulliau prosesu, technegau paratoi, cydweddoldeb cynhwysion a ddefnyddir yn y cyfansoddiad, a ffurflenni dos yn cael mwy o effaith ar effeithiolrwydd TCMs [19, 28]. Felly, mae'r defnydd o TCMs penodol gydacroen-gwynoeffeithiau yn gyfyngedig. Felly mae'n frys nodi cynhwysion actif ag effeithiau gwynnu posibl ar y croen, trwy sgrinio systematig i sicrhau diogelwch, effeithiolrwydd a sefydlogrwydd y cynhwysion hyn.

Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae cymhwyso bioleg system ym maes TCM wedi gwneud cynnydd mawr. Mae ffarmacoleg rhwydwaith TCM yn drawsddisgyblaeth newydd sy'n cyfuno ffarmacoleg TCMs â gwyddoniaeth rhwydwaith, bioleg system, gwyddoniaeth gyfrifiadol, a biowybodeg [29]. Mae'n deall yn llawn y cymhlethdod rhwng cyffuriau, afiechydon, a systemau biolegol o safbwynt y rhwydwaith "proteinau cymhleth / genyn-clefyd" [30]. Mae ffarmacoleg rhwydwaith yn offeryn effeithiol a systematig i astudio gweithrediad ffarmacolegol, mecanwaith, diogelwch ac agweddau eraill ar feddyginiaeth lysieuol, yn enwedig TCMs, ac mae'n darparu mewnwelediadau gwerthfawr ar gyfer darganfod cyffuriau cyfredol [31, 32].

cynhwysion gwynnu croen

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1. Proses Ffarmacolegol Rhwydwaith

2.1.1. Adeiladu Cronfa Ddata ar gyfer Cynhwysion Cemegol

Darlunnir siart llif o'r rhaglen arbrofol a astudiwyd yn Ffigur 1. Defnyddiwyd y TCMs ag effeithiau gwrth-bigmentu, a ddisgrifir yn y Ben-Cao-Gang-Mu ac mewn presgripsiynau gwerin, ar gyfer dadansoddiad ffarmacolegol rhwydwaith. Mae Typhonii Rhizoma, Ricini Semen, Hedysarum multijugum Maxim., Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones, a Sapindi MukorossiSemen, a ddisgrifir yn y Ben-Cao-Gang-Mu, wedigwynnuac eiddo gostwng melyn a gall gael gwared â smotiau wyneb a mannau geni. Poria cocos (Schw.) Mae'n hysbys bod blaidd (sclerotium Smilax china L.), Paeoniae Radix Alba, ac Atractylodes macrocephala Koidz (rhisom Atractylodes macrocephalaKoidz.) sy'n gyfansoddion o'r SBT yn gwella gwead y croen a lleihau cloasma apigmentiad. Perlysiau eraill a gofnodwyd yn draddodiadol, megis Bletilla striata (Thunb. Murray) Rchb.F. (rhisom Bletilla striata (Thunb.) Rchb.F.), Ampelopsis japonica, A. dahurica (Fisch.) Benth. Et Hook (rhisom Angelica dahurica (Hoffm.) Benth. a Hook.f. ex Franch. and Sav.), Atractylodes lancea (Thunb.) dc. (rhisom Atractylodes lancea (Thunb.)DC.), Fructus Ligustri Lucidi, a Coicis Semen, hefyd wedi'u cynnwys yn yr astudiaeth hon. Oherwydd y nifer fawr o TCM sydd wedi'u cynnwys yn yr astudiaeth hon, bydd sgriniadau cronfa ddata meddygaeth Tsieineaidd lluosog yn achosi dryswch wrth brosesu data. Dim ond cronfa ddata Ffarmacoleg Systemau Meddygaeth Traddodiadol Tsieineaidd (TCMSP), cronfa ddata a ddefnyddir yn fwy cyffredin, ar gyfer sgrinio dilynol yr ydym yn ei defnyddio. Chwiliwyd cynhwysion cemegol yTCMs hyn yn TCMSP (diweddarwyd ar Ebrill 24,2020) [33]. Mae tebygrwydd cyffuriau (DL) a bio-argaeledd llafar (OB) yn baramedrau sgrinio a ddefnyddir yn gyffredin. Mae meddyginiaethau orsystemig argroenol yn driniaethau cyffredin ar gyfer clefydau pigmentiad croen; felly, dim ond DL a ddefnyddiwyd gennym fel y maen prawf sgrinio. Dewiswyd cyfadeiladau rhagorol gyda DL > 0:18 i gynyddu cyfradd taro ymgeiswyr cyffuriau.

2.1.2. Croestoriad rhwng Genynnau Targed TCMs a Genynnau sy'n Gysylltiedig â Phigmentu.

Y set genynnau sy'n gysylltiedig âpigmentiadei ddewis yn seiliedig ar gronfa ddata GeneCards (a ddiweddarwyd ar Ebrill 24, 2020), y dewiswyd targedau â sgôr clefyd agene> 1 ohoni. Yn y pen draw, nodwyd 6180 o dargedau yn ymwneud â pigmentiad. Dangoswyd y croestoriad rhwng genynnau targed TCMs a genynnau sy'n gysylltiedig â pigmentiad gan ddefnyddio diagram Venn [34].

2.1.3. Adeiladu Rhwydwaith Cyfansawdd-Targed-Llwybr Gweithredol.

Cafodd cynhwysion actif a genynnau targed rheoledig eu sgrinio yn unol â chanlyniadau'r diagram Venn. Adeiladwyd y rhwydwaith gan ddefnyddio meddalwedd Cytoscape [35] ac fe'i defnyddiwyd i nodi'r berthynas rhwng cyfansoddion gweithredol TCMs a genynnau targedpigmentiad.Roedd pob genyn targed a reoleiddir gan gynhwysyn gweithredol mewn aTCM yn cael ei ystyried yn un "gradd." Defnyddiwyd paramedrau topolegol "gradd" cyfartalog pob TCM i werthuso pwysigrwydd y TCMs a ddewiswyd. Cafodd y cyfansoddion eu graddio, a dewiswyd y pum TCM uchaf ar gyfer dadansoddiadau allweddol. At hynny, dadansoddwyd gwybodaeth fanwl am y cynhwysion actif posibl a adroddwyd i reoleiddio pigmentiad.

2.1.4. Gwyddoniadur Genynnau a Genomau Kyoto (KEGG)Dadansoddiad Cyfoethogi o Genynnau Targed a Reolwyd gan TCMau a allai fod yn effeithiol.

Dewiswyd genynnau targed a reoleiddir gan y pum TCM uchaf i bennu llwybrau targed KEGG ac archwilio mecanweithiau posibl cynhwysion a allai fod yn effeithiol yn y TCMs hyn yn erbynpigmentiadDefnyddiwyd adnoddau biowybodeg DAVID 6.8 i ddadansoddi cyfoethogi llwybrau targed KEGG. Llwythwyd i fyny symbolau genynnau targedau posibl y cynhwysion actif effeithiol. Yna, lawrlwythwyd y dynodwyr genynnau a gafwyd a'u rhoi i mewn i KOBAS3. Dewiswyd y genyn sy'n addasu gwerthoedd llai na 0.05.

2.1.5. Efelychu Tocio Moleciwlaidd.

Cafwyd strwythurau 2D ositogluside, arbutin, nicotinamid, pencadlys, asid kojic, ac asid asgorbig o gronfa ddata PubChem. Cafodd strwythurau themacanyddol y moleciwlau bach eu hoptimeiddio gan ddefnyddio ChemBio3D Ultra 14.0. Strwythur grisial 3D madarchTYR(PDB ID: 2Y9X, cyfesurynnau docio: cafwyd X=−8:87, Y=−30:74, a Z=−41:52) o'r Banc DataProtein ( PDB) cronfa ddata [36]. Strwythurau crisial 3D chwe derbynnydd pilen (derbynnydd opioid, ID PDB: 4DKI; derbynnydd melanocortin 1, ID PDB: 2L1J; derbynnydd endothelin B, ID PDB: 5GLI; derbynnydd adrenergig, PDB ID: 4GBR; derbynnydd prostaglandin, PDB ID: 6D26 ID: ;; derbynnydd ffactor stemcell, PDB ID: 2EC8) o gronfa ddata thePDB. Paratowyd y strwythurau protein gan ddefnyddioAutoDock Tools trwy dynnu moleciwlau dŵr, ychwanegu hydrogen, a chreu bondiau archeb sero i fondiau metelau a disulfide. Yn olaf, perfformiwyd efelychiadau tocio moleciwlaidd gan ddefnyddio AutoDock Vina 1.1.2 [37], a dadansoddwyd y canlyniadau gan ddefnyddio PyMoL 1.7.2.1.

2.2. Dilysiad Arbrofol

2.2.1. Cemegau a Gwrthgyrff.

Prynwyd Sitogluside (purdeb Yn fwy na neu'n hafal i 98 y cant) oddi wrth ChemFaces (#CFN98, 713, Chem Faces). Prynwyd Dimethylsulfoxide (DMSO) gan Sigma-Aldrich. Paraformaldehyde niwtral (4 y cant) ei brynu o Biosharp (Hefei, Tsieina). Prynwyd asid Kojic, theFontana-Masson Stain Kit, sodiwm deoxycholate, a L DOPA gan Solarbio (Beijing, Tsieina). Prynwyd cyfrwng addasedig Dulbecco Eagle's (DMEM) oddi wrth Gibco (#C11995500BT, Gibco). Prynwyd serwm buchol ffetws (FBS) a Phecyn Cyfrif Cell-8 (CCK8) oddi wrth BI (Kibbutz Beit-Haemek, Israel). Prynwyd PMA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-asetad, yr actifydd ERK/MAPK) oddi wrth APExBIO (#N2060, APExBIO). Prynwyd Anisomycin (yr actifydd p38/MAPK) oddi wrth MedChem Express (HY-18982, MedChemExpress). Gwrthgyrff cynradd yn erbyn protein sy'n gysylltiedig â ras Rab-27A (RAB27A) (#69295,CST), kinase allgellog a reoleiddir gan signal (ERK) (#4695,CST), p-ERK (#4370, CST), c- Mehefin N-terminal kinase JNK(#9252, CST), p-JNK (#4668, CST), t38 (#8690, CST), t38 (#4511, CST), elfen ymateb cAMP sy'n rhwymo proteinCREB ( Prynwyd #9107, CST), a p-CREB (#9198, CST) gan Cell Signaling Technology. Gwrthgyrff cynradd yn erbyn TRP1 (ab235447, Abcam), TRP2 (NBP1-56058, Novusbio), MITF (STJ94134, Labordy St. John's),TYR(BS1484, Bioworld), a GAPDH (#AP0066, Bioworld) eu prynu oddi wrth Abcam, Novusbio, Labordy St. John's, a Bioworld, yn y drefn honno.

2.2.2. Diwylliant a Thriniaeth Celloedd.

Mae MNT1 a B16F0, sy'n gyfoethog mewn melanosomau, yn cael eu defnyddio'n helaeth i astudio melanogenesis [38]. O ganlyniad, dewiswyd y ddwy linell gell hyn ar gyfer arbrofion dilynol. Cafodd celloedd MNT1 a B16F0 eu meithrin mewn serwm buchol ffetws 20 y cant neu 10 y cant (Diwydiannau Biolegol, Israel) ac 1 y cant penisilin-streptomycin (Gibco) yn DMEM. Cafodd yr holl gelloedd eu meithrin mewn deorydd gwlyb ar 37 gradd a 5 y cant o CO2. Diddymwyd Sitogluside yn DMSO, a'r crynodiad terfynol o DMSO oedd<0.1%. pma="" and="" anisomycin="" were="" separately="" dissolved="" in="" dmso,="" and="" the="" final="" concentration="" of="" dmso="" was=""><>

2.2.3. Trin a Diwyllio Pysgod Sebra.

Prynwyd cyfrwng diwylliant embryonau Zebrafish a chyfrwng diwylliant gan EzeRinka Biotech (Nanjing, Tsieina). Cymeradwywyd y protocol arbrofol gan Bwyllgor Moeseg Trydydd Ysbyty Xiangya ym Mhrifysgol Canol De (Rhif 2021-S137). Ar y diwrnod cyntaf ar ôl deor, cafodd y pysgod sebra eu magu mewn 12-plât ffynnon (10 perwell), wedi'u hamddiffyn rhag golau, a'u meithrin ar 37 gradd. Cafodd y pysgod sebra eu trin â chrynodiadau gwahanol o sitogluside, a chymerwyd ffotograffau gan ddefnyddio microsgop gwrthdro bob 24 awr i gofnodi'r newidiadau mewn melanin yng nghynffonau'r pysgodyn sebra. Ar ôl i'r lluniau gael eu tynnu, cafodd hydoddiannau sitogluside o wahanol grynodiadau eu darllen a'u cofnodi'n barhaus am wythnos.

2.2.4. Hyfywedd Cell.

Aseswyd hyfywedd celloedd gan ddefnyddio CCK8.MNT1 a B16F0 celloedd wedi'u platio mewn 96-blatiau ffynnon ar ddwysedd 2000 o gelloedd/ffynnon neu 500 o gelloedd/ffynnon. Cafodd y celloedd eu trin â chrynodiadau gwahanol o sitogluside (25, 50,100, 200, 400, 600, a 800 μM). Ar ôl 24 h neu 48 h, ychwanegwyd adweithydd 10 μLof CCK8 at bob ffynnon, a chafodd y celloedd eu deori ar 37 gradd am 1 h. Pan fydd lliw yr oren wedi'i droi'n ganolig, terfynwyd y diwylliant, a defnyddiwyd darllenydd microplate (PerkinElmer EnVision Xcite, UK) i fesur yr amsugnedd ar 490 nm.

2.2.5. Fontana-Masson Melanin Staenio.

Cafodd celloedd eu meithrin mewn 6-plât ffynnon a'u trin â chrynodiadau gwahanol o sitogluside am 2 ddiwrnod, ac ychwanegwyd asid kojic fel rheolydd positif ar 200 μM. Yna gosodwyd y celloedd mewn paraformaldehyd 4 y cant am 15 munud. Ar ôl rinsio â dŵr, deorwyd y celloedd â hydoddiant amonia-arian Fontana am 24 awr mewn siambr dywyll, ei rinsio â dŵr, ac yna ei roi mewn hyposylffit am 5 munud ychwanegol. Defnyddiwyd microsgop gwrthdro i arsylwi ar y melanin.

2.2.6. Arbrawf Adfer Swyddogaeth.

Profwyd PMA, fel actifydd cydnabyddedig o ERK/MAPK [39, 4{{{{40], am sytowenwyndra trwy arbrawf CCK8 ar grynodiadau gwahanol (6.25,12.5, 25, 50, 100, 200, 400, a 800 ng/mL) am 24 awr. Ac ar ôl i gelloedd MNT1 a B16F0 gael eu trin â chrynodiadau gwahanol (25, 50, a 100 ng/mL) o PMA am 2 awr, canfuwyd lefel ffosfforyleiddiad ERK gan arbrawf westernblotting. Yn y crynodiad a ddewiswyd, cafodd y celloedd eu trin â 0, 1, 2, 4, 6, ac 8 awr i ganfod amser actifadu effeithiol. Ar ôl i'r celloedd gael eu trin âsitogluside (200 μM) a PMA (25 ng/mL) am 48 awr (encilio bob 8 awr), lefelau proteinTYRandp-ERK eu canfod. Canfu Fontana-Masson staen melanin y cynnwys melanin. Anisomycin [41] yw ysgogydd p38 / MAPK, y mae ei grynodiad archwilio yn4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, a 512 nM, ac mae'r dulliau arbrofol eraill yr un fath â PMA.

2.2.7. Mesuriadau Gweithgaredd TYR.

Cafodd celloedd eu trin â chrynodiadau gwahanol o sitogluside am 2 ddiwrnod. Ar ôl treulio a centrifugio, cafodd y celloedd eu cyfrif a'u hailddarparu ddwywaith mewn halwynog wedi'i glustogi â ffosffad (PBS). Nesaf, ychwanegwyd 500 μL o hydoddiant sodiwm deocsicolate 0.5 y cant at bob sampl. Deorwyd y samplau ar 4 gradd am 10 munud ac yna ar 37 gradd am 15 munud. Ychwanegwyd 1 ml o 1 y cant o doddiant L-DOPA, ac ar ôl hynny cafodd 200 μL ei bibed ar unwaith i mewn i blât ffynnon 96-. Yn dilyn hynny, defnyddiwyd darllenydd plât amlfodd i fesur y gwerthoedd amsugnedd (A0) ar 475 nm, ac ailadroddwyd y mesuriad ar ôl 30 munud (A30).TYRcyfrifwyd gweithgarwch fel (A{{{0}}A0)/rhif cell.

2.2.8. Archwiliwr Gweithgaredd TYR.

Profwr fflworoleuedd bron yn isgoch ar gyferTYRdefnyddiwyd gweithgaredd yn seiliedig ar resorufin i ddelweddu gweithgaredd mewn celloedd byw, fel y disgrifiwyd yn flaenorol [42]. Yn gryno, cafodd celloedd MNT1 a B16F0 eu meithrin mewn plât ffynnon a'u trin â chrynodiadau gwahanol o sitogluside am 2 ddiwrnod . Ychwanegwyd stiliwr fflworoleuedd 10 μM, ac ar ôl 4 h, disodlwyd y celloedd gan PBS. Ar ôl i'r golau coch fod yn gyffrous, defnyddiwyd microsgop gwrthdro fflwroleuol ar unwaith i dynnu lluniau.

2.2.9. Echdynnu Protein a Blotio Gorllewinol.

Ar ôl i'r celloedd gael eu trin â chrynodiadau gwahanol o sitogluside am 2 ddiwrnod, echdynnwyd cyfanswm y protein cellog gan ddefnyddio'r RIPA Lysis Buffer (Thermo Fisher) a'r coctels Protease Inhibitor a Phosphatase Inhibitor (Roche). Penderfynwyd ar grynodiad protein gan ddefnyddio pecyn profi protein BCA (KeyGEN Biotec). Ar ôl blocio gyda 1 y cant BSA, y gwrthgyrff cynradd yn erbynTYR, MITF, TRP1, TRP2, RAB27A, CREB, p-CREB, ERK, p-ERK, JUK, p-JUK, t38, a p-p38 eu deor gyda'r pilenni dros nos ar 4 gradd yn 1: 1000 a GAPDH yn 1: 3000 Cafodd y pilenni eu golchi â TBS-T a'u deor â gwrthgorff eilaidd gwrth-gwningen gafr ar 1: 3000 am 1 h. Canfuwyd y gwrthgorff rhwymol gan electrochemiluminescence (ECL).

2.2.10. Dadansoddiad Ystadegol.

SPSS22.0 defnyddiwyd meddalwedd ar gyfer dadansoddiad ystadegol, a defnyddiwyd prawf-t myfyriwr neu ddadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA) ar gyfer cymariaethau grŵp lluosog. Defnyddiwyd prawf Mann-Whitney U ar gyfer data nad yw'n barametrig. p < 0:05="" ym="" mhob="" achos="" yn="" cael="" ei="" ystyried="" yn="" ystadegol="" arwyddocaol.="" ∗∗∗p="">< 0:001,="" ∗∗p="">< 0:01,="" a="" ∗p=""><>

3. Canlyniadau

3.1. Cynhwysion Cyfansawdd TCMs.

Astudiwyd pedwar TCM ar ddeg, a gofnodwyd yn y Ben-Cao-Gang-Mu ac mewn presgripsiynau gwerin, gydag effeithiau gwrth-bigmentu. Cafodd cyfanswm o 372 o gynhwysion meddyginiaeth Tsieineaidd o'r 14 TCM eu hadalw o gronfa ddata TCMSP (Tabl S1 atodol).

3.2. Genynnau Targed Rheoleiddir gan TCMs a Genynnau Pigmentation Cysylltiedig.

Yn ôl y system rhagfynegi targed yng nghronfa ddata TCMSP, cafwyd cyfanswm o 834 o enynnau targed o'r 14 TCM. Roedd cyfanswm o 9431 o enynnau yn ymwneud âpigmentiadadalwyd o gronfa ddata GeneCards, a dewiswyd 6180 ohonynt ac roedd ganddynt sgôr perthnasedd > 1.

3.3. Safle o 14 TCM a'r Rhwydwaith Targed Cyfansoddion Clefydau.

Gan ddefnyddio meddalwedd Cytoscape, cymerwyd croestoriad genynnau rheoleiddiol pob TCM a genynnau cysylltiedig â pigmentiad a chawsom y cynhwysion actif posibl a'r genynnau targed cyffredin. Nesaf, mae'r rhwydwaith targed cyfansawdd afiechyd rhwng TCM apigmentiadei adeiladu. Yn seiliedig ar hyn, cawsom "radd" gyfartalog pob cynhwysyn gweithredol a graddio'r TCMs yn ôl eu sgoriau. Yn ôl y sgoriau safle, y 5 perlysiau gorau oedd Fructus Ligustri Lucidi, Hedysarum multijugum Maxim., Ampelopsis japonica, Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones, a Paeoniae Radix Alba (Ffigur 2(a)). Trwy ddadansoddiad KEGG o 220 o enynnau targed o'r 5 TCM uchaf, roedd 19.3 y cant o'r genynnau yn gyfoethog yn y llwybr signalau PI3K-Akt, roedd 13.6 y cant o'r genynnau yn gysylltiedig â'r llwybr signalau TNF, ac roedd tua 12.3 y cant o'r genynnau yn gysylltiedig ag IL{{{{{{}). 12}}. Yn ogystal, roedd 37 o enynnau yn rhan o'r llwybr MAPK ac roedd 28 o enynnau yn rhan o'r llwybr HIF-1. Mae cysylltiad agos rhwng y llwybrau hyn a rheoleiddio metaboledd melanin a thynnu lluniau croen. Ymhlith yr 20 llwybr signalau cyfoethogi uchaf, roedd llwybrau cysylltiedig â llid yn cyfrif am chwarter y rhain (Ffigur 2(c)). Mae Ffigurau 2(d)–2(h) yn dangos y rhwydwaith targed cyfansawdd clefydau rhwng Fructus Ligustri Lucidi, Hedysarum multijugum Maxim., Ampelopsis japonica, Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones, Paeoniae Radix Alba, a pigmentation, yn y drefn honno. Yn ôl diagram Venn o'r cynhwysion yn y pum TCM uchaf, canfuom fod pedwarTCM yn cynnwys sitogluside a beta-sitosterol (Ffigur 2(b), Tabl S2 atodol).

3.4. Cynhwysion Gweithredol Posibl i Atal Pigmentu.

Yn ôl y rhwydwaith targed clefyd-cyfansawdd, roedd 148 o gynhwysion yn ymwneud âpigmentiadeu cael o 14TCM. Trwy chwiliad llenyddiaeth, adroddwyd bod 25 o'r 148 o gynhwysion yn atal melanogenesis. Adroddwyd bod pedwar cynhwysyn gweithredol yn echdynion planhigion sy'n atal melanogenesis. Astudiwyd pedwar ar ddeg o gynhwysion gweithredol, a dywedwyd bod eu deilliadau yn rheoleiddio pigmentiad. Yn ddiddorol, dangoswyd pedwar cynhwysyn i hyrwyddo melanogenesis, tra bod mecanwaith chwe chynhwysyn wrth reoleiddiomelanogenesis yn dal yn aneglur. Nid yw'r 95 o gynhwysion meddyginiaethol Tsieineaidd posibl sy'n weddill wedi'u harchwilio eto ar gyfer rheoleiddio pigmentiad. Darperir gwybodaeth fanwl am y cynhwysion hyn yn Nhabl atodol S3.

3.5. In Vitro ac In Vivo Effeithiau Sitogluside ar Melanogenesis.

Ar ôl y broses sgrinio uchod, canfuom fod pedwar TCM yn y TCMs uchaf yn cynnwys sitogluside a -sitosterol. -Sitosterol wedi cael ei adrodd i inhibitalpha-melanocyte-ysgogol hormon (-MSH), ysgogol melanogenesis drwy'r llwybr signalau p38 mewn celloedd melanoma B16F1{0 [43]. Fodd bynnag, ni adroddwyd ar effeithiau gwrth-bigmentiad sitogluside a'i fecanwaith penodol. Felly, dewisom sitogluside fel ymgeisydd cyffuriau ar gyfer yr astudiaethau hyn. Perfformiwyd assay CCK8 i archwilio crynodiadau gwenwynig posibl o gelloedd sitogluside mewn MNT1 a B16F{0. Dangosodd y canlyniadau nad oedd gan sitogluside unrhyw effaith amlwg ar amlhau'r celloedd (Ffigurau 3(a) a 3(b)) mewn crynodiadau o dan 400 μM. Dangosodd staenio melanin a gynhaliwyd gan ddefnyddio 25, 50, 100, a 200 μMsitogluside y gall sitogluside leihau cynnwys melanin mewn celloedd MNT1 a B16F0 mewn modd sy'n dibynnu ar ddos ​​(Ffigur 3(c)). Ar ben hynny, roedd triniaeth sitogluside yn atal y croen yn sylweddolpigmentiadmewn pysgod sebra mewn modd sy'n dibynnu ar amser a dos (Ffigur 3(d)). Roedd y canlyniadau hyn yn awgrymu bod sitogluside yn atal melanogenesis in vitro ac in vivo.

3.6. Effeithiau Sitogluside ar Fynegiad TYR.

O'r canlyniadau blaenorol, gall sitogluside leihau cynnwys melanin yn effeithiol, ond mae sut mae'n rheoleiddio'r broses hon yn anhysbys o hyd ac felly o ddiddordeb. Perfformiwyd blotio gorllewinol i ganfod mynegiant genynnau cysylltiedig â melanogenesis (TYR,MITF, TRP1, TRP2, a RAB27A) ar y lefel protein. Dangosodd canlyniadau'r dadansoddiadau fod mynegiant TYR wedi'i isreoleiddio'n sylweddol a bod mynegiadau MITF a TRP1 wedi'u hisreoleiddio'n gymedrol ar ôl triniaeth sitogluside (Ffigur 4(a)). Gan mai MAPK a PKA yw'r llwybrau signalau bysell i fyny'r afon sy'n rheoleiddio TYR, fe wnaethom ymchwilio ymhellach i'r newidiadau mewn proteinau allweddol yn y ddau lwybr hyn. Ar ôl i gelloedd MNT1 a B16F0 gael eu trin â sitogluside am 2 ddiwrnod, roedd lefelau ffosfforyleiddiad ERK a P38 wedi'u hisreoleiddio'n sylweddol. , tra nad oedd unrhyw newidiadau arwyddocaol yng nghyfanswm lefelau proteinau CREB, ERK, JNK, ap38 na lefelau ffosfforyleiddiad JNK a CREB (Ffigur 4(b), Ffigur S1A). Yn ôl canlyniadau'r arbrawf CCK8, canfuom nad yw PMA o dan 10 0 ng/mL yn wenwynig i'r ddwy gell (Ffigur S1B), a gall PMA 25 ng/mL gynyddu lefel ffosfforyleiddiad ERK yn amlwg. Gostyngodd lefel y ffosfforyleiddiad ERK yn raddol ar ôl 4 awr (Ffigur S1C-D). Trwy melanintaining Fontana-Masson, canfuom y gall PMA gynyddu cynnwys themalanin celloedd MNT1 a B16F0 yn sylweddol. Mae'r canlyniadau westernblotting hefyd yn awgrymu y gall PMA uwchreoleiddio lefel ffosfforyleiddiad ERK, a gall sitogluside leihau lefel ffosfforyleiddiad ERK a uwchreoleiddir gan PMA. Trwy atal lefel ffosfforyleiddiad ERK a lleihau lefel proteinTYR, mae sitogluside yn lleihau'r cynnwys melaninfedd a gynyddir gan PMA (Ffigurau 4(c) a 4(e), Ffigur S2A). Ar yr un pryd, canfuom fod canlyniadau tebyg i anisomycin. Nid yw anisomycin o dan 8 nM yn wenwynig i'r ddau gell, a gall anisomycin 2 nM gynyddu lefel ffosfforyleiddiad p38 yn sylweddol. Ar 8 awr, mae lefel y ffosfforyleiddiad o p38 yn dal yn uchel (Ffigur S1B, Ffigur S1E-F). Mae canlyniadau melanintaining Fontana-Masson a blotio gorllewinol hefyd yn awgrymu bod sitoglusidecan yn atal lefel ffosfforyleiddiad p38 upregulated gan anisomycin, gan leihau cynnwys protein TYR, ac atalpigmentiad(Ffigurau 4(d) a 4(f), Ffigur S2B). Fe wnaethom olrhain derbynyddion pilen i fyny'r afon o'r llwybrau signalau hyn a defnyddio tocio moleciwlaidd i archwilio'r mecanwaith o reoleiddio llwybrau i lawr yr afon. Yr egni rhwymol rhwng sitogluside a'r chwe derbynnydd pilen, sef y derbynyddion opioid u, melanocortin 1, ffactor bôn-gelloedd, endothelinB, adrenergig , a derbynyddion prostaglandin oedd -7.8,-5.8, {{9} }}.5, -5.4, -3.4, a 0 kal/mol, yn y drefn honno. Tocio trwy foleciwlaidd, canfuom ymhlith y derbynyddion chwebilen, fod gan sitogluside gysylltiadau uchel iawn â'r opioid u, melanocortin 1, a derbynyddion ffactor twf bôn-gelloedd (Ffigur 4(g)). Rydym yn dyfalu y gall sitogluside atal y llwybrau ERK / MAPK a p38 / MAPK trwy rwymo i'r derbynyddion pilen y soniwyd amdanynt o'r blaen, a thrwy hynny yn is-reoleiddio mynegiant TYR.

3.7. Effaith Sitogluside ar Weithgaredd TYR.

ErsTYRyw'r ensym thekey mewn synthesis melanin, dyma'r targed mwyaf amlwg ar gyfer atal melanogenesis. Mae'r rhan fwyaf o gosmetigau neu gyfryngau ysgafnhau croen sydd ar gael yn fasnachol, fel y pencadlys, arbutin, ac asid kojic, yn atalyddion TYR. Fe ddefnyddion ni sitogluside a rhai yn cael eu defnyddio'n glinigolcroen-gwynoasiantau (arbutin, nicotinamid, asid kojic, pencadlys, ac asid asgorbig) i ddargludo tocio moleciwlaidd gyda TYR. Y rhyngweithiadau manwl rhwng sitogluside a'r asiantau uchodTYRyn cael eu dangos yn Ffigur 5(a). Egnïon rhwymo'r chwe chyfansoddyn hyn oedd -6.2, -6.4, -5.6, -5.7, -5.4, a{{ 11}}.4 kcal/mol, yn y drefn honno. Credir yn gyffredinol, pan fo'r egni affinedd yn -4, ei fod yn dynodi grym rhwymo, a phan mae'n Fwy na neu'n hafal i -7.0, mae'n dynodi grym rhwymo cryf. Roedd ochr Sitoglu yn ail o ran affinedd, ychydig yn wannach nag arbutin, gan arddangos gallu cyfuno cymharol eithriadol.

Ar yr un pryd, defnyddiwyd arbrawf trosi L-DOPA i ganfod gweithgaredd TYR, gan ddefnyddio asid kojic fel rheolaeth gadarnhaol. Dangosodd y canlyniadau fod sitogluside yn atal gweithgareddTYR mewn celloedd MNT1 a B16F0 mewn modd sy'n dibynnu ar grynodiad, a dangosodd y grŵp crynodiad uchel (2{10 μM) effaith ataliol gyfatebol i'r hyn a ddangosir gan 200 μM kojic asid (Ffigurau 5(b) a 5(c)). Yn ogystal, dangosodd canlyniadau arbrawf stiliwr TYR, wrth i grynodiad sitogluside gynyddu, bod dwyster fflworoleuedd wedi gostwng yn raddol mewn celloedd, a bod dwyster fflworoleuedd y grŵp crynodiad uchel yn agos at 200 μM o asid kojic mewn celloedd MNT1 a B16F0 (Ffigur 5 (d), Ffigur S2C). Mae'r canlyniadau hyn yn dangos y gallsitogluside atal yn effeithiolTYRgweithgarwch mewn celloedd MNT1 a B16F0. Ar ben hynny, rydym yn dyfalu y gallai sitogluside, fel cyfansoddyn sterol naturiol, dreiddio'n uniongyrchol i'r bilen cell a rhwymo i TYR ac atal ei weithgaredd, a thrwy hynny atal melanogenesis.

4. Trafodaeth

Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ddefnyddio ffarmacoleg rhwydwaith i archwilio themâu potensialcroen-gwynocynhwysion a ddarganfuwyd mewn 14 TCM, a ddogfennwyd yn y presgripsiynau Ben-Cao-Gang-Mu a infolk, yn atalpigmentiad. Cynigiodd yr astudiaeth hefyd ddull arloesol sy'n defnyddio paramedr topolegol "gradd" cyfartalog pob cynhwysyn gweithredol i werthuso effeithiolrwydd posibl y perlysiau. Yn ôl y "gradd" gyfartalog dewiswyd Fructus Ligustri Lucidi, Hedysarummultijugum Maxim., Ampelopsis japonica, PseudobulbusCremastrae Seu Pleiones, a Paeoniae Radix Alba, a thrwy ddadansoddiad cyfoethogi KEGG o'r genynnau a reoleiddir gan y pum TCM hyn, roedd yn annisgwyl i gyfoethogi 25 y cant o'r genynnau hyn. roedd llwybrau signalau yn gysylltiedig â llid, gan gynnwys llwybrau signalau IL-17, TNF, HIF-1, PI3K-Akt, a MAPK.

Yn ddiweddar, dangoswyd bod amrywiaeth o gyfryngwyr llidiol yn actifadu neu'n atal llwybrau signalau sy'n gysylltiedig â melanogenesis sy'n hyrwyddo neu'n atal croen.pigmentiad[6]. Celloedd melanoma B16F10 anfeithredig, TNF- llai o fynegiant oTYRa gweithgaredd TRP1 a TYR mewn modd dos-ddibynnol [44]. Gall IL-17 a TNF- leihau mynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â melanogenesis mewn melanocytes, a gall IL-17 wella effaith ataliol TNF- ar melanogenesis yn sylweddol. Ar ôl triniaeth ag etanercept (gwrth-TNF), cafodd genynnau cysylltiedig â melanogenesis eu huwchreoleiddio'n sylweddol yn namau croen cleifion â soriasis [45]. Adroddwyd bod HIF-1, ffactor trawsgrifio pwerus sy'n rheoleiddio'r ymateb llidiol, yn ymwneud â rheoleiddio ffactorau fel IL-17 a TNF- [46-48]. Felly, mae HIF-1 yn debygol o gymryd rhan yn y gwaith o reoleiddio melanogenesis drwy ddylanwadu ar lid. Cytocinau eraill megis IL-18, IL-33, GM-CSF, ac IL-1 yn gallu hyrwyddo melanogenesis trwy actifadu'r PKA, MAPK, neu lwybrau signalau eraill, tra bod IFN-, IL-1 , IL-4, ac IL-6 yn lleihau melanogenesis trwy atal STAT1, NF-κB, a llwybrau signalau JAK2-STAT6 [6]. Mae ein canfyddiadau yn awgrymu y gall y pum TCM uchaf (Fructus Ligustri Lucidi, Hedysarum multijugum Maxim., Ampelopsis japonica, Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones, a Paeoniae Radix Alba) gael effaith gwrth-bigmentu yn bennaf trwy lwybrau gwrthlidiol. Soniodd llenyddiaeth flaenorol hefyd fod gan y pum TCM gorau hyn effeithiau gwrthlidiol a gwrth-heneiddio pwerus [49, 50]. Mae hyn hefyd yn cefnogi ein tybiaeth y gallai TCMs chwarae rhan nad yw'n ddibwys mewn pigmentiad postlidiol.

Wrth bori trwy lenyddiaeth 148 o gynhwysion a ddarganfuwyd mewn 14 TCM, canfuom hefyd ymhlith 35 o'r cynhwysion a adroddwyd, y cadarnhawyd bod bron i 70 y cant ohonynt naill ai'n lleihau cynnwys melanin neu'n atal gweithgaredd TYR. Mae hyn nid yn unig yn cadarnhau bod cofnodion presgripsiynau gwynnu croen mewn llyfrau hynafol yn ddibynadwy ar y cyfan ond mae hefyd yn dangos bod cyfeirio at lenyddiaeth hynafol yn ddull dibynadwy o gael gwybodaeth am TCMs. Mae 95 o gyfansoddion yn dal heb eu harchwilio, sydd â'r potensial i wrthsefyllpigmentiad. Trwy ddadansoddi diagramau Venn o'r pum TCM uchaf, cafwyd 13 o gynhwysion cyffredin. Yn eu plith, cadarnhaodd arbrofion in vitro y gall daidzein, rutin, a ( plws ) - catechin leihau cynnwys melanin [51–53]. Mae swcros yn tarfu ar aeddfedu melanoswm iawn trwy achosi straen osmotig ac atal y llwybr kinase PI3, a thrwy hynny ymyrryd â melanogenesis [54]. Mae Quercetin yn lleihau melanogenesis ocsideiddiol a achosir gan straen [55]. Cadarnhaodd dulliau ychwanegol, cemegol a ffisegol megis dadansoddiadau sbectrosgopig a gweithgaredd adeiledd y gall lupeoland kaempferol atalTYRa lleihau melanogenesis[56, 57]. Mae hyn yn dangos efallai bod ffarmacoleg rhwydwaith yn ddull ymarferol o gloddiogwynnucynhwysion. Roedd pedwarTCM yn y pum TCM uchaf yn cynnwys sitogluside, ac nid oes unrhyw adroddiadau ynghylch a yw sitogluside yn rheoleiddio pigmentiad na'i fecanwaith cysylltiedig. Felly, dewiswyd sitogluside ar gyfer yr astudiaethau hyn.

Adroddwyd bod Sitogluside, glycosid sterol sy'n bresennol yn eang mewn planhigion, yn cael effeithiau antitumor, gwrthocsidiol a niwro-amddiffynnol [58-60]. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ddarganfod bod sitogluside i bob pwrpas yn lleihau cynnwys melanin mewn vitro ac in vivo. Profodd arbrofion dilynol y gallai leihau mynegiant TYR yn sylweddol. Defnyddiwyd asid Kojic fel rheolaeth gadarnhaol, a gall hefyd atal lefelau protein genynnau sy'n gysylltiedig â melanogenesis fel TYR, MITF, a TYRP1 o dan ysgogiad -MSH, a adroddwyd gan Jeon et al. [61]. O ystyried absenoldeb ysgogiad alldarddol, dim ond effeithiau ataliol cymedrol ar fynegiant genynnau a gafodd 200 μM o asid kojic yn ein hastudiaeth, ond oherwydd bod gan kojicacid weithgaredd ataliol tyrosinase gwych, rydym yn dal i ddefnyddio itas fel rheolaeth gadarnhaol yn yr astudiaeth hon. Adroddwyd bod mynegiant TYR yn cael ei reoleiddio'n uniongyrchol neu'n anuniongyrchol gan y llwybrau MAPKor PKA, yn y drefn honno. Mae nifer cynyddol o gynhwysion wedi'u cadarnhau i gael effaith gwynnu ar y croen trwy atal llwybr signalau MAPK. Er enghraifft, mae fargesin yn lleihau mynegiant y croen.TYRdrwy atal y llwybr P38/MAPK [62]. Gall polysacaridau Ganoderma lucidum wrthsefyll melanogenesis a achosir gan UVB trwy is-reoleiddio llwybr MAPK [63]. Canfu ein hastudiaeth fod gan sitogluside, mewn crynodiad o 200 μM, y potensial i leihau mynegiant TYR trwy atal llwybrau signalau ERK/-MAPK a P38/MAPK. Mae hyn wedi'i adrodd trwy'r tocio moleciwlaidd rhwng derbynyddion pilen i fyny'r afon o lwybrau MAPK [64] a sitogluside. Canfuom fod sitogluside yn clymu'n gryf i'r opioid u, melanocortin 1, a derbynyddion twf bôn-gelloedd. Felly, rydym yn dyfalu y gallai sitogluside ryngweithio â'r derbynyddion pilen hyn, atal y llwybrau signalau ERK / MAPKand P38 / MAPK, a lleihau mynegiant TYR.

Gan mai TYR yw'r ensym allweddol yn y synthesis o ronynnau melanin mewn melanocytes, mae atal gweithgaredd safle catalytig TYR yn hanfodol i leihau croenpigmentiad[65]. Mae llawer o gyfryngau ysgafnhau croen yn y farchnad yn atalyddion TYRactivity, megis pencadlys, arbutin, ac asid kojic. Yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd tocio moleciwlaidd i archwilio effeithiau rhwymol sitogluside a phump cyffredincroen-gwynocynhwysion actif (arbutin, nicotinamid, asid kojic, pencadlys, asid andascorbig) [66] gydaTYR. Dangosodd y canlyniadau fod gan sitogluside affinedd rhwymol cryf â TYR, naarbutin gwannach, ond yn gryfach nag asid kojic, nicotinamid, pencadlys, ac asid ascorbig. Mae arbutin yn gynnyrch o Bencadlys ac yn gynnyrch naturiol a all leihau neu atal synthesis melaninby sy'n atal TYR. Fodd bynnag, mae ffurf naturiol arbutin yn ansefydlog yn gemegol a gall drosi i bencadlys, sy'n cael ei gataleiddio a'i fetaboli i fetabolion bensen gyda gwenwyndra posibl i fêr esgyrn [67]. Mae'r defnydd o incosmetics asid kojic wedi'i gyfyngu oherwydd ei garsinogenigrwydd a'i ansefydlogrwydd yn ystod storio [68]. Felly, mae disgwyl i sitogluside, cyfansoddyn sterol naturiol sy'n deillio o amrywiaeth o blanhigion, weithredu fel asiant cryf i ysgafnhau'r croen. Fodd bynnag, mae hydoddedd sitogluside mewn DMSO yn isel, sydd hefyd yn ddiffyg yn y cynhwysyn naturiol hwn. Datgelodd gwiriad arbrofol dilynol fod sitogluside yn ddiogel mewn llinellau celloedd MNT1 a B16F0, a chafodd y grŵp crynodiad isel effaith ataliol agood ar weithgaredd TYR, tra bod y grŵp crynodiad uchel yn cael yr un effaith â'r un crynodiad o asid kojic. Felly, gellir defnyddio sitogluside yn therapiwtig fel rheolydd gwynnu croen, sydd nid yn unig yn lleihau mynegiant TYR ond hefyd yn atal ei weithgaredd (Ffigur 6).

5. Casgliadau

Efallai bod ffarmacoleg y rhwydwaith yn arf effeithiol ar gyfer darganfod cynhwysion actif naturiol sy'n lleihau pigmentiad croen a'u mecanweithiau posibl. Mae gan Fructus LigustriLucidi, Hedysarum multijugum maxim., Ampelopsis japonica, Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones, a PaeoniaeRadix Alba botensialcroen-gwynoeiddo a gall atalpigmentiadtrwy reoleiddio llid. Nofel yw Sitoglusidecroen-gwynocynhwysyn gweithredol ag effeithiau rheoliadol deuol, sef. llesteirioTYRmynegiant a gweithgaredd.

tabledi cistanche