Mae MicroRNA sy'n Deillio o Ecsosomau Llaeth-2478 yn Atal Melanogenesis Trwy'r Llwybr Akt-GSK3

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Yn-Seon Bae a Sang Hoon Kim

Crynodeb:Mae ecsosomau yn cymryd rhan mewn cyfathrebu rhynggellog trwy drosglwyddo moleciwlau o gelloedd derbynnydd rhoddwyr. Mae ecsosomau i'w cael mewn hylifau corff amrywiol, gan gynnwys gwaed, wrin, hylif serebro-sbinol, a llaeth. Mae exosomau llaeth yn cynnwys llawer o foleciwlau microRNA mewndarddol. Mae microRNAs yn RNAs bach nad ydynt yn codio ac mae ganddynt rolau pwysig mewn prosesau biolegol. Nid yw swyddogaethau biolegol penodol exosomau llaeth yn cael eu deall yn dda. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio i effeithiaullaethecsosomauar gynhyrchu melanin mewn celloedd melanoma a melanocytes. Daethom o hyd i hynnygostyngodd ecsosomau llaethcynnwys melanin, gweithgaredd tyrosinase, a mynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â melanogenesis celloedd inmelanoma a melanocytes. Roedd miR-2478 buchol-benodol mewn ecsosomau yn atal cynhyrchu melanin. Canfuom fod Rap1a yn genyn targed uniongyrchol o miR-2478 mewn celloedd melanoma a melanocytes. MiR{5}}gostyngodd gorfynegiant mynegiant Rap1a, a arweiniodd at gynhyrchu melanin wedi'i isreoleiddio a mynegi genynnau sy'n gysylltiedig â melanogenesis. Gostyngodd ataliad mynegiant Rap1amelanogenesistrwy lwybr signal Akt-GSK3. Mae'r canlyniadau hyn yn cefnogi rôl miR-2478 sy'n deillio o ecsosomau llaeth fel rheolyddmelanogenesisdrwy dargedu Rap1a yn uniongyrchol. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos y gallai ecsosomau llaeth fod yn gynhwysion cosmeeutical defnyddiol i'w gwellagwynnu.

Geiriau allweddol: melanogenesis;llaeth exosome; miR-2478; Rap 1a

cistanches llysieuolyn gynhwysyn sy'n atal melanin

1. Rhagymadrodd

Mae Cosmeceutical yn air cyfansawdd sy'n cyfuno andrefers cosmetig a fferyllol i gosmetigau â chynhwysion swyddogaethol sydd ag effeithiau meddygol [1]. Yn y gorffennol, mae'r croen wedi gwella trwy weithdrefnau dermatolegol, ond yn ddiweddar, mae diddordeb mewn cosmeceuticals wedi cynyddu oherwydd awydd defnyddwyr i gael yr effeithiau hyn trwy gosmetigau. Mae'r diwydiant cosmetig hefyd wedi dangos diddordeb cynyddol yn y blynyddoedd diwethaf yn y defnydd o gynhwysion cosmeceutical newydd [ 2]. Mae colur swyddogaethol yn cynnwys cynhyrchion sy'n helpu gwynnu croen trwy atal dyddodiad melanin ar y croen.

Mae melanin, elfen bwysig sy'n pennu lliw croen a gwallt, yn amddiffyn y croen rhag pelydrau uwchfioled [3]. Fodd bynnag, mae ffurfio melanin yn ormodol yn achosi tôn croen anwastad, ee smotiau a brychni haul [4]. Mae ffactor trawsgrifio microffthalmia (MITF) yn brif reolydd datblygiad melanocyte. Tyrosinase (TYR) yw'r synthesis ensym pwysicaf o melanin. Mae'r broses synthesis melanin yn cael ei ysgogi gan actifadu TYR trwy MITF, sy'n ensym pwysig sy'n ymwneud â cham cychwynnol y broses synthesis melanin ac yn defnyddio ffurf L-tyrosine neu DOPA fel swbstrad i ffurfio melanin [5].

Mae microRNAs (miRs) yn RNAs byr nad ydynt yn codio sy'n cymryd rhan mewn llawer o brosesau biolegol trwy reoli mynegiant genynnau ôl-drawsysgrifol [6]. Mae astudiaethau hefyd wedi datgelu rheolaeth biosynthesis melanin gan microRNAs. Er enghraifft, adroddwyd bodmiR-143-5p yn targedu'r genyn Tak1 ac yn lleihau mynegiant MITF, gan felly atal melaninsynthesis [7]. MiR-125b, rheolydd negyddol omelanogenesis, wedi'i ddangos i reoleiddio'r genyn pigmentiad SH3BP4 [8], ac mae miR-675 mewn ecsosomau sy'n cael eu secretu okeratinocytes yn atalmelanogenesisdrwy dargedu MITF [9].

Fesiglau maint 30-200 nm wedi'u ffinio â philen yw ecsosomau ac maent yn cynnwys DNA, RNA, a pheptidau [10]. Gall cydrannau mewnol exosomau drosglwyddo gwybodaeth yn ddiogel i gelloedd cyfagos neu bell heb gael eu diraddio gan ensymau mewn hylifau biolegol, gan effeithio ar y micro-amgylchedd o amgylch celloedd amrywiol [11].Ecsosomau llaethyn fesiglau llaeth-derivedextracellular sy'n sefydlog mewn prosesau treulio dynol [12]. Mae'r ecsosomau a dynnwyd o laeth buchol yn cynnwys nid yn unig nifer o broteinau fel casein a lactoglobwlin ond hefyd microRNAs, sy'n gweithredu fel cargo [13-15]. Mae llaeth buchol yn cynnwys microRNAs sy'n gysylltiedig ag imiwn megis miR-15b, miR-27b, miR-34a, a miR-10). Mae'r microRNAs hyn yn arbennig o niferus yn y colostrwm [16].

Mae rhai astudiaethau wedi dangos bod cydrannau llaeth yn atalmelanogenesismewn melanocytes; er enghraifft, mae proteinau fel -lactoglobwlin ac κ-casein mewn llaeth yn rheoleiddio melanogenesis [17,18]. Canfuwyd bod uwchnatur llaeth wedi'i eplesu Lactobacillus helveticus NS yn atal niwed UV a hyperbigmentation yn y croen [19]. Fodd bynnag, nid oes adroddiad eto ynghylch a yw microRNAs mewn llaeth buchol yn gysylltiedig â chroengwynnu, er bod 79 microRNAs yn bodoli ynexosomau llaeth[13]. Felly, yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio a yw ecsosomau llaeth sy'n cynnwys microRNAs yn atal synthesis melanin mewn celloedd melanoma llygoden a dynol a melanocytes.

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1. Diwylliant Cell

Cafodd celloedd melanoma B16F10 y llygoden eu meithrin yng nghyfrwng Eryr addasedig Dulbecco (DMEM, Hyclone, Logan, UT, UDA). Cafodd celloedd melanoma dynol MNT-1 eu tyfu mewn Isafswm Canolig Hanfodol (MEM, Hyclone). Ategwyd yr holl gyfryngau gan serwm ffetalbovine 10 y cant (FBS, Hyclone, UDA) ac 1 y cant o doddiant penisilin-streptomycin. Roedd melanocytes epidermaidd normal dynol (NHEM, PromoCell, Heidelberg, yr Almaen) yn rhif 5 neu 6 yn cael eu cynnal mewn cyfrwng twf melanocyte (PromoCell). Deorwyd y celloedd hyn ar 37 ◦C mewn awyrgylch llaith yn cynnwys 5 y cant o CO2.

2.2. Puro Ecsosomau

Cafodd llaeth masnachol (1 mL) ei fewngyrchu ar 2000× g am 10 munud, yna cafodd yr uwchnatant ei allgyrchu ar 10,000× g am 10 munud. Roedd y supernatant llaeth yn cael ei basio trwy hidlydd a0.45 µm ac yna hidlydd 0.2 µm. Cymysgwyd yr hydoddiant canlyniadol (300 µL) â halwynog wedi'i glustogi â ffosffad (PBS) a 300 µL o'r toddiant dyddodiad ecsosomaidd Exoquick (Systems Biosciences, Palo Alto, CA, UDA) a'i ddeor am 30 munud. Cafodd y cymysgedd ei ganoli ar 10,000 × g am 30 munud i gael pelen ecsosomaidd, a gafodd ei hailgynhyrfu nesaf yn PBS. Pennwyd dosbarthiad maint yr ecsosomau ar Zetasizer Nano ZS 90 (Malvern Instruments, Almelo, Ffrainc). Cafodd yr ecsosomau eu storio ar −80 ◦C i'w defnyddio ymhellach.

2.3. Microsgopeg Cryo-Electron

Cafodd aliquot 3 µL o ataliad ecsosomau ffres ei arsugniad i grid carbon tyllog wedi'i ollwng yn glow (2/2-3 C-flat; Protochips, Morrisville, NC, UDA), a gafodd ei ddileu wedyn am 3 s yn 4 ◦C a'i blymio wedi'i rewi gan ddefnyddio Marc Vitrobot IV (Thermo FisherScientific, Lafayette, CO, UDA). Roedd y gridiau'n cael eu storio mewn nitrogen hylifol, yna'u trosglwyddo i ddeiliad sbesimen cryo Gatan 626 (Gatan, Pleasanton, CA, UDA). Delweddwyd y samplau gyda chwyddhad enwol o 29,000 × mewn microsgop cryo-electron (FEI Tecnai F20 TEM, FEI, Hillsboro, OR, UDA), gyda gwn allyriadau maes safonol (s-FEG) a camera K2Summit (Gatan) ar foltedd cyflymu o 200 kV.

2.4. Assay Hyfywedd Cell (WST Assay)

Cafodd celloedd melanoma (B16F10, MNT-1) a melanocytes dynol (NHEM) eu hadu ar 4 × 103cells/ffynnon mewn 96-blatiau ffynnon a'u trin âexosomau llaeth(20 a 50 µg/mL)neu ddynwarediad microRNA (oligoniwcleotidau llinyn dwbl RNA) ar gyfer pob arbrawf. Ar y pwyntiau amser a nodwyd, mesurwyd hyfywedd celloedd gan ddefnyddio'r assaykit hyfywedd celloedd gwell EZ-CyTox (Daeil Lab Service, Seoul, Korea) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Mesurwyd yr amsugnedd ar 450 nm ar sbectrophotometer microplate Vmax (Dyfeisiau Moleciwlaidd, San Jose, CA, UDA).

2.5. Mesur Cynnwys Melanin

Roedd celloedd melanoma a melanocytes yn cael eu trinexosomau llaeth(20 a 50 µg/mL) am 48 h. Ar ôl golchi ddwywaith gyda PBS oer iâ, cafodd y celloedd eu centrifugio ar 2500 × g am 10 munud. Cafodd y pelenni celloedd eu hailddarlledu ar 90 ◦C am 30 munud mewn 1 N NaOH yn cynnwys 10 y cant o dimethyl sulfoxide. Mesurwyd cyfanswm y cynnwys melanin ar y microplatespectroffotometer Vmax (Dyfeisiau Moleciwlaidd) ar 405 nm.

2.6. Assay Gweithgaredd Tyrosinase

Deorwyd celloedd melanoma a melanocytesexosomau llaetham 48 h. Cafodd y celloedd eu golchi ddwywaith gyda PBS a'u gorchuddio â PBS yn cynnwys 1 y cant o fflworid Triton X-100 a 0.1 mMphenylmethanesulfonyl. Ar ôl centrifugio, cafodd yr uwchnatant ei gasglu a'i drosglwyddo i blât ffynnon 96-. Ar ôl ychwanegu 0.1 ML-3,4-dihydroxyphenylalanine, deorwyd samplau ar 37 ◦C am 1 h. Mesurwyd y gweithgaredd tyrosinase ar sail yr amsugnedd ar 475 nm gan ddefnyddio'r sbectrophotometer microplate (Dyfeisiau Moleciwlaidd).

cistanches llysieuol

2.7. Meinweoedd Croen Dynol

Cafwyd cyfwerthoedd epidermaidd sy'n cynnwys melanocytes (MelanoDerm, MEL-300B) gan MatTek (Ashland, MA, UDA) a chawsant eu cynnal yn yr EPI-100-NMM-113-medium.Ecsosomau llaetheu cymhwyso i feinweoedd MelanoDerm ar Ddiwrnodau 1, 3, 7, 9, a defnyddiwyd 12.PBS fel y rheolaeth negyddol. Tynnwyd llun meinweoedd ar Ddiwrnodau 3, 7, 9, 12, a 14.Pigmentation yn cael ei fesur trwy gymharu'r newidiadau yn y gwerth L (Adobe PhotoshopCC 2015). Mesurwyd cynnwys melanin mewn meinwe croen dynol ar Ddiwrnod 14 gan assay Solvablemelanin. Yn gryno, cafodd y meinweoedd MelanoDerm eu hydoddi gan ddefnyddio Solvable (PerkinElmer, Waltham, MA, UDA) a'u deor dros nos ar 60 ◦C. Cafodd samplau eu vortecs ac yna eu centrifugio ar 16,500 × g am 5 munud. Trosglwyddwyd y supernatant i mewn i blât ffynnon 96-a'i ddarllen ar 490 nm gan sbectroffotomedr.

3. Canlyniadau

3.1. Nodweddu'r Ecsosomau Wedi'u Ynysu o Laeth

Er mwyn ymchwilio i nodweddion yr ecsosomau a dynnwyd o laeth buwch, fe wnaethom fesur maint yr ecsosomau yn gyntaf trwy wasgaru golau deinamig. O ganlyniad, canfuwyd bod gan yr ecsosomau a dynnwyd o laeth ddiamedr o 80–190 nm (Ffigur 1A). Canysllaethecsosompuro, cafodd y cymysgedd supernatant Exoquick-llaeth ei allgyrchu i gael pelen ecsosom llaeth. Canfuwyd mynegiant CD9, TSG101, a HSP70 fel marcwyr ecsosomaidd mewn pelenni, ond nid oedd y proteinau hyn yn bresennol yn y supernatant (Ffigur 1A). Yn ogystal, cadarnhawyd morffoleg sfferig a maint yr ecsosomau gan ficrosgopeg cryo-electron (Ffigur 1B). Canfuwyd bod gan ecsosomau siâp crwn o hyd at 200 nm mewn diamedr. Nesaf, gwnaethom ymchwilio i weld a oedd celloedd yn cymryd yr ecsosomau a dynnwyd o laeth. Deorwyd celloedd llygoden B16F10exosomau llaethwedi'i labelu â lliw fflwroleuol thelipoffilig PKH26. O ganlyniad, gwelsom fod yr ecsosomau wedi'u labelu yn bresennol y tu mewn i'r celloedd (Ffigur S1).

3.2. Gweithgaredd Tyrosinase a Chynhyrchu Melanin Wedi'i Atal gan Ecsosomau Llaeth mewn Celloedd B16F10

Nesaf, archwiliwyd effaith yr ecsosomau a echdynnwyd ar hyfywedd celloedd. Fel y dangosir yn Ffigur 2A, fe wnaethom ddatgelu nad oedd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol yn hyfywedd celloedd, waeth beth fo'r crynodiad ecsosomaidd.

Ymchwilio i'r celloedd croen posibl -gwynnueffaith oexosomau llaeth, cafodd celloedd eu trin ag ecsosomau llaeth. Gwelsom fod gweithgaredd tyrosinase mewn celloedd sy'n agored i ecsosomau llaeth mewn crynodiadau o 20 neu 50 µg/ml wedi gostwng 43 y cant a 59 y cant, yn y drefn honno (Ffigur 2B). Oherwydd y gall lleihau gweithgaredd ensymau tyrosinase atal biosynthesis melanin, mesurwyd cynnwys melanin ar ôl triniaeth ag ecsosomau llaeth. Gwnaethom nodi atal synthesis melanin mewn celloedd sy'n agored iexosomau llaeth(20 neu 50 µg/mL) gan 45 y cant a 55 y cant , yn y drefn honno (Ffigur 2C). Ymhellach, mae mynegiant MITF mRNA yn lleihau wrth i grynodiad esosomau llaeth gynyddu. Gostyngodd lefel mRNA MITF 59 y cant yn y celloedd a gafodd eu trin ag ecsosomau 20 µg/mL ac 84 y cant yn y celloedd a gafodd eu trin ag ecsosomau 50 µg/mL, yn y drefn honno (Ffigur 2D). Lleihaodd mynegiant mRNA Tyrosinase (TYR) hefyd 49 y cant a 76 y cant yn y celloedd sy'n agored i'r crynodiadau hyn o ecsosomau (Ffigur 2D). Gostyngodd lefelau protein MITF a thyrosinase hefyd fel crynodiad llaethecsosomauwedi cynyddu (Ffigur 2E). Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu bod ecsosomau llaeth yn atal melanogenesis mewn celloedd llygoden B16F10.

3.3. MiR-2478 Buchol-Benodol o Milk Exosomes Yn Atal Melanogenesis

Er mwyn penderfynu a oedd miR{0}} yn deillio oexosomau llaetheffeithio'n uniongyrchol ar melanogenesis, trosglwyddwyd yr atalydd miR-2478 i'r celloedd a oedd yn agored i laethecsosomau (50 µg/mL). Ym mhresenoldeb ecsosomau llaeth, dangosodd celloedd B16F10 a drawsnewidiwyd ag atalydd themiR-2478 weithgarwch tyrosinase sylweddol uwch o gymharu â'r hyn a oedd yn y rheolaeth (Ffigur 4A). Roedd cynnwys melanin hefyd yn uwch mewn celloedd atalydd-drin miR-2478 nag mewn celloedd rheoli (Ffigur 4B). Mynegiad mRNA MITF oedd –2.5-plyg yn uwch mewn celloedd atalydd-drin miR 2478 nag mewn celloedd rheoli, ac roedd mynegiant TYR mRNA -2-plyg uwch pan ataliwyd miR-2478 (Ffigur 4C ). Mae lefelau'r proteinau MITF a TYR hefyd wedi'u hadennill yn y celloedd sy'n agored iddyntexosomau llaethar ôl i'r celloedd hyn gael eu trawslifo gyda'r atalydd miR-2478 (Ffigur 4D). Roedd y canlyniadau hyn yn awgrymu bod miR-2478 sy'n deillio o ecsosomau llaeth yn atal melanogenesis yn uniongyrchol mewn celloedd melanoma llygoden.

3.4. Mae Exosomes Llaeth yn Atal Melanogenesis trwy'r Llwybr Akt-GSK3

Nesaf, rydym yn archwilio sut iexosomau llaethrheoleiddiomelanogenesisi nodi'r llwybr perthnasol yr effeithir arno mewn celloedd melanoma. Er nad yw'n hysbys a yw Rap1a yn rheoli melanogenesis yn uniongyrchol, adroddwyd bod Rap1a yn atal celloedd canser Akt ffosfforyleiddiad [20]. Ar sail y wybodaeth hon, gwnaethom ymchwilio i weld a yw Rap1a yn modiwleiddio'r llwybr Akt i hyrwyddo.

Yn yr Akt-gysylltiedigmelanogenesisllwybr, mae Akt actifedig yn cymell ffosfforyleiddiad Gsk3 yn Ser9 ac felly'n ei anactifadu; mae'r newid hwn yn atal gweithgaredd trawsgrifio MITF ac yn dadreoleiddio tyrosinase [21,22]. Yn yr astudiaeth bresennol, fe wnaethom werthuso mynegiant Akt a GSK3 mewn celloedd a gafodd eu trin âRap1a siRNA. Yn y celloedd hyn, cynyddodd actifadu ffosfforyleiddiad Akt a chynyddodd maint pGSK3 hefyd (Ffigur 7A). Cafodd GSK3 ei anactifadu trwy actifadu Akt mewn modd sy'n dibynnu ar grynodiad yn y celloedd a gafodd eu trin â 20 neu 50 µg/mL oexosomau llaeth(Ffigur 7B). Roedd lefelau'r proteinau Akt a GSK3 yn y celloedd a gafodd eu trin â'r dynwared miR yn gyson â'r canlyniadau uchod (Ffigur 7C). Nesaf, gwnaethom brofi a yw miR-2478o ecsosomau llaeth yn effeithio ar y llwybr Akt-GSK3. Ym mhresenoldeb exosomau llaeth, roedd ffosfforyleiddiad y proteinau Akt a GSK3 yn is yn y celloedd a gafodd eu trin ag atalydd theiR-2478 (Ffigur 7D). Yn ogystal, cynyddodd triniaeth gyda'r atalydd AKT GSK690693 fynegiant genynnau sy'n gysylltiedig âmelanogenesismewn celloedd llaeth wedi'u trin ag ecsosom. (Ffigur 7E). Roedd y canfyddiadau hyn yn golygu bod miR-2478 i mewnexosomau llaethyn gostwng Rap1a ac yn atal melanogenesis trwy'r llwybr Akt-GSK3.

cistanche herbaeffaith gwynnu ar y croen i gwrth-ocsidiad

3.8. Mae Exosomau Llaeth yn Atal Melanogenesis mewn Celloedd Melanoma Dynol, Melanocytes, a Meinwe MelanoDerm

O ystyried hynnyexosomau llaethrhwystredigmelanogenesismewn celloedd llygoden, fe wnaethom benderfynu nesaf a oedd ecsosomau llaeth yr un mor effeithiol mewn celloedd dynol. Yn gyntaf, archwiliwyd hyfywedd celloedd melanoma dynol MNT-1 a melanocytes dynol NHEM ar ôl deori ag 20 neu 50 ug/mL o ecsosomau llaeth. Fel y cyflwynir yn Ffigur 8A, nid oedd unrhyw wahaniaeth o ran hyfywedd. Ataliwyd gweithgaredd Tyrosinase gan 43 y cant a 85 y cant, yn y drefn honno, mewn celloedd MNT a oedd yn agored i 20 ug/mL neu 50 ug/mL o ecsosomau llaeth (Ffigur 8B). Gostyngwyd NHEM hefyd 34 y cant a 66 y cant , yn y drefn honno, trwy driniaeth â 20 ug / ml neu 50 ug / ml o ecsosomau llaeth (Ffigur 8B). Ymhellach, mesurwyd cynnwys melanin mewn celloedd MNT-1 a NHEM a oedd yn agored i ecsosomau llaeth. O ganlyniad, mae synthesis melanin mewn celloedd MNT-1 yn agored i 20 ug/mL neu 50 ug/mL oexosomau llaethei atal gan 37 y cant a 58 y cant , yn y drefn honno , ac mewn celloedd NHEM , y driniaeth exosome llaeth rhwystro synthesis melanin gan 36 y cant a 62 y cant , yn y drefn honno ( Ffigur 8C ). Yn ogystal, mae effaith ysgafnhau'r croen oexosomau llaethei gadarnhau ymhellach gan ddefnyddio meinweoedd croen dynol. Ar ôl triniaeth ag exosomau llaeth mewn meinweoedd dynol, cymharolgwynnu arsylwyd effeithiau ar Ddiwrnodau 3, 9, 12, a 14. O ganlyniad, canfuwyd bod lliw croen mewn llaeth meinweoedd exosome-agored yn ymddangos i fod yn fwy disglair na'r hyn yn y meinweoedd rheoli (Ffigur 8D). Cyfrifwyd gradd y pigmentiad fel y gwerth L, sef gwerth sy'n cynrychioli disgleirdeb. Datblygodd pigmentiad yn arafach mewn meinweoedd croen a gafodd eu trin ag ecsosomau llaeth nag ym meinweoedd croen rheoli (Ffigur 8D). Y grŵp arbrofol a gafodd ei drin âexosomau llaethyn dangos maint gronynnau melanin llai a swm isel o pigment melanin o'i gymharu â'r grŵp rheoli (Ffigur 8E). O ganlyniad i fesur y cynnwys melanin ar ôl 14 diwrnod o laeth esosomau rhwystrodd synthesis melanin mewn meinweoedd dynol (Ffigur 8F). Felly, daethom i'r casgliad bod milkexosomes yn atalmelanogenesismewn celloedd dynol a meinweoedd.

4. Trafodaeth

Astudiaethau ar reoleiddio ecsosomaumelanogenesiswedi adrodd bod ecsosomau sy'n deillio o keratinocytes yn cael effaith gwynnu. Mae melanocytes a'r keratinocytes cyfagos wedi'u cysylltu'n swyddogaethol i ffurfio unedau melanin yn epidermis y croen [23,24]. Mae ffactorau hydawdd sy'n deillio o Keratinocyte yn rheoleiddio melanogenesis melanocytes cyfagos. Mae exosomessecreted o keratinocytes arferol yn hyrwyddo melanogenesis trwy uwchreoleiddio mynegiantmelanogenesisproteinau cysylltiedig [23-25]. Yn ogystal, mewn agwynnuastudiaeth gan ddefnyddio exosomau a dynnwyd o gelloedd, adroddwyd yn ddiweddar bod ecsosomau a echdynnwyd o fôn-gelloedd / stromal sy'n deillio o feinwe dynol yn dangos effeithiolrwydd disgleirdeb croen mewn celloedd mousemelanoma [26]. Cafwyd adroddiad hefyd bod ecsosomau a dynnwyd o blanhigion yn cael effaith gwynnu. Roedd y fesiglau allgellog a dynnwyd o ddail planhigion D. morbifera a choesynnau yn arddangos effeithiau gwrth-melanogenig ar gelloedd melanoma llygoden a chroen dynol iach [27]. Yn ein hastudiaeth, ymchwiliwyd i effaith gwynnu exosomau sy'n deillio o laeth.

O'i gymharu ag ecsosomau a echdynnwyd o blasma gwaed neu hylif meithrin, mae gan ecsosomau sy'n deillio o laeth y manteision nid yn unig o gael llawer iawn o ecsosomau y gellir eu tynnu fesul uned o gyfaint ond hefyd am bris isel [26,27]. Achosexosomau llaethmae ganddynt gyfansoddiad acemegol tebyg i gellbilenni, maent yn arddangos imiwnogenigrwydd is a sytowenwyndra ac mae ganddynt fiogydnawsedd uchel [28,29]. Yn ddiweddar, pan gafodd ecsosomau llaeth ei fwydo i lygod model colitis a achosir gan DSS (halen sodiwm dextran sylffad), gostyngodd mynegiant y cytocinau proinflammatory IL-6 a TNF o'i gymharu â'r grŵp rheoli, a thrwy hynny leihau llid a gwella enteritis necrotizing [30, 31]. Yn ogystal, fe wnaeth amlyncu ecsosomau llaeth mewn model llygoden o glefyd osteoporosis wella arthritis trwy gynyddu dwysedd esgyrn a lleihau cytocinau pro-llidiol [32,33]. Hyd yn hyn, mae effeithiau ecsosomau llaeth wedi canolbwyntio ar ffenomenau imiwnolegol sy'n lleihau cytocinau prolidiol, ac ar ddatblygiad esgyrn, megis lleddfu enteritis a gwella osteoporosis. Yn yr astudiaeth hon, ar wahân i'r dull o gymrydexosomau llaeth, cadarnhawyd, pan gaiff ei gymhwyso i'r croen, ei fod yn effeithiol mewn croengwynnu. Mae hyn yn dangos y gellir ei gymhwyso ar gyfer trin afiechydon amrywiol trwy wella gweithgaredd ffisiolegol gan ddefnyddio exosomau llaeth yn y dyfodol.

Er bod yr astudiaeth hon yn awgrymu hynnyexosomau llaethllesteiriomelanogenesis, mae'n hysbys eisoes bod proteinau maidd fel casein, -lactoglobulin, a -lactalbumin yn cael effaith gwynnu. -lactoglobwlin yn lleihau gweithgaredd tyrosinase mewn melanocytes dynol [18], ac mae k-casein yn atal melanogenesis mewn celloedd melanoma llygoden B16 [17]. Yn ddiddorol, mae llawer o'r cydrannau hyn hefyd yn bresennol mewn exosomau llaeth. Yn ôl canlyniadau proteomerau ecsosomau llaeth, dosberthir casein, -lactoglobulin, a -lactalbumin yn theexosomes [15,34,35]. Mae exosomau llaeth yn cynnwys microRNAs yn ogystal â phroteinau. O ganlyniad i arae micro miRNA yn defnyddio exosomau llaeth gan Izumi a chydweithwyr, miR-2478, miR-1777b, miR-1777a, gadewch-7b, a miR-1224 Roedd }} wedi'u dosbarthu'n fawr yn yr ecsosomau llaeth [13]. Yn yr astudiaeth hon, ac eithrio miR-2478, ymhlith y microRNAs hyn, dangosodd miR-1777b, miR-1777a,let-7b, a miR-1224 dim gwahaniaeth mewn gweithgaredd tyrosinase o'r grŵp rheoli (Ffigur S2). miR-2478 yn fwyaf toreithiog ynexosomau llaetha llai o weithgaredd tyrosinaseacti. Fodd bynnag, gostyngodd mynegiant genynnau MITF a TYR sy'n gysylltiedig â gwynnu yn y celloedd a gafodd eu trin â nhwexosomau llaethnag yn y celloedd sy'n cael eu trin â'r dynwared miR yn unig. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod sawl cydran, gan gynnwys microRNAs mewn ecsosomau llaeth, yn ymwneud â'rgwynnugweithred.

Mae'r rhan fwyaf o'r microRNAs mewn exosomau llaeth yn cyflawni swyddogaethau biolegol trwy atal mynegiant genynnau targed yn y celloedd derbyn. Yn yr astudiaeth hon, roedd miR{0}} hefyd yn atal synthesis melanin trwy dargedu Rap1a fel genyn targed. Er nad oeddent yn ficroRNAs yn deillio o laeth, mae microRNAs sy'n rheoli mynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â gwynnu eisoes wedi'u hadrodd. Pan gymhwyswyd y dynwared miR{4}}a-3p dynol i mousemelanocytes, roedd yn atal mynegiant Wnt3a a thrwy hynny yn atal synthesis melanin [36], ac roedd miR ectopig-218 yn atal gweithgaredd TYR trwy leihau mynegiant MITF mewn melanoma melanocytes murine [37]. miR-203 yn hyrwyddomelanogenesisdrwy'r llwybr CREB1/MITF/Rab27a drwy dargedu Kif5b mewn melanoma [38]. Mae 79 microRNAs mewn exosomau llaeth

microRNAs ynexosomau llaethyn deillio o wartheg [13]. Felly, mae angen ymchwil pellach ar weithgaredd ffisiolegol exosomau llaeth.

5. Casgliadau

Mae ein canfyddiadau yn awgrymu hynnyexosomau llaethyn ymgeiswyr ar gyfer cyfryngau gwrth-melanogenig sy'n lleihau pigmentiad trwy atal mynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â melanin (Ffigur 10). Mewn celloedd melanoma a melanocytes, dangosodd ecsosomau llaeth ataliad TYR a gostyngiad yn y cynnwys melanin o gymharu â'r rheolaeth negyddol. Yn ogystal, cafodd yr effeithiau hyn eu cyfryngu gan miR-2478 oexosomau llaeth. Felly, gall exosomau llaeth fod yn ddefnyddiol ar gyfer datblygu swyddogaetholgwynnucolur gyda sytowenwyndra isel.

cistancheeffaith gwynnu ar groen i gwrth-ocsidiad