Mae Diffyg Klotho yn Dwysáu Mynegiant O IFN- / Trwy Ailreoleiddio RIG-I mewn Arennau a Achosir gan Hypocsia
Mar 25, 2022
Haniaethol Mae hypocsia yn llwybr cyffredin at ddilyniant y cam olafclefyd yr arennau.Mae genyn I(RIG-I) sy'n anwythol i asid retinoig yn amgodio hofrennydd RNA sy'n adnabod firysau gan gynnwys SARS-CoV2, sy'n gyfrifol am gynhyrchu interfferon (IFN) -a/ i atal lledaeniad haint firaol. Yn ddiweddar, canfuwyd gweithrediad RIG-l o dan amodau hypocsig, a dangoswyd bod diffyg klotho yn dwysáu actifadu RIG-I mewn ymennydd llygoden. Fodd bynnag, mae rolau'r swyddogaethau hyn mewn llid arennol yn parhau i fod yn anodd dod i'r golwg. Yma, ar gyfer astudiaeth in vitro, archwiliwyd mynegiant RIG-I ac IFN-a/ mewn llygod mawr arferolaren(NRK)-52E gelloedd wedi'u deor o dan amodau hypocsig (1 y cant O2). Nesaf, cafodd siRNA sy'n targedu RIG-I neu siRNA wedi'i sgramblo ei drawsnewid i gelloedd NRK52E i archwilio mynegiant RIG-I ac IFN-a/ß o dan amodau hypocsig. Fe wnaethom hefyd ymchwilio i lefelau mynegiant RIG-I ac IFN-a/ mewn 33humanarensamplau biopsi wedi'u diagnosio â neffropathi lgA. Ar gyfer astudiaeth Vivo, fe wnaethom ysgogi hypocsia arennol trwy glampio'r rhydweli arennol am 10 munud mewn llygod tebyg i wyllt (llygod WT) a llygod klotho-knockout (KIT/llygod). Cynyddodd deori dan amodau hypocsig fynegiant RIG-lI ac IFN-a/ mewn celloedd NRK52E. Roedd eu huwchreoleiddiad yn cael ei atal mewn celloedd NRK52E a drawslifwyd â siRNA yn targedu RIG-I. Mewn cleifion â neffropathi IgA, datgelodd staeniad imiwn-histocemegol o samplau biopsi arennol fod cysylltiad rhwng mynegiant RIG-Iwas a mynegiant IFN-a/ (r=0.57,P<0.001, and="" r=""><0.001, respectively).="" the="" expression="" levels="" of="" rig-i="" and="" ifn-a/β="" were="" upregulated="" in="">arennauo lygod WT hypocsig a upregulation pellach arsylwyd mewn llygod hypocsig. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod hypocsia yn ysgogi mynegiant IFN-a/ trwy ddadreoleiddio RIG-I a bod diffyg klotho yn dwysáu'r mynegiant hwn a achosir gan hypocsia mewnarennau.
Geiriau allweddol:clefyd yr arennau; celloedd yr arennau; amnewid arennol; difrod arennol; aren
BYDD CISTANCHE YN GWELLA SWYDDOGAETH YR AREN/ARRENAU
RhagymadroddCronigclefyd yr arennau(CKD) effeithio ar 697.5 miliwn o bobl yn fyd-eang yn 2017 [1], felly mae'n cael ei gydnabod yn dda fel pryder iechyd mawr. Er mwyn atal dilyniant CKD, defnyddir atalyddion llwybr system renin-angiotensin-aldosterone (RAAS) mewn lleoliad clinigol [2,3]. Fodd bynnag, mae eu heffeithiau buddiol yn gyfyngedig ac yn y pen draw mae angen therapi amnewid arennol ar lawer o gleifion[4]. Yn patholegol, llid cronig a ffibrosis rhyng-ranol yw nodweddion cyffredin CKD, waeth beth fo'r afiechyd sylfaenol [5]. Er bod trawsnewid ffactor twf (TGF)- 1 yn chwarae rhan ganolog yn natblygiad ffibrosis interstitial [6-8], dangosodd astudiaethau blaenorol mai ymdreiddiad celloedd llidiol sy'n gyfrifol am gynhyrchu TGF{{12} } [9]. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu mai llid yw'r digwyddiad i fyny'r afon o ffibrosis interstitaidd, a bod llid yn darged therapiwtig ymgeisydd ar gyfer CKD.
Mae hypocsia yn gyflwr lle mae ocsigen annigonol yn ei wneud yn feinweoedd. Fel ymateb cellog i hypocsia, mae ffactorau sy'n achosi hypocsia (HIF) yn chwarae rhan bwysig wrth atal niwed i feinwe [10-12]. Fodd bynnag, mae hypocsia difrifol yn arwain at glefydau fasgwlaidd acíwt, megis strôc [13], angina pectoris [14], a chlefyd rhydwelïau ymylol [15]. Yn ddiweddar, adroddwyd bod hypocsia cronig, fel apnoea cwsg, hefyd yn cyfrannu at ddatblygiad afiechydon amrywiol [16]. Ynglŷn â'raren, dywedir bod hypocsia yn dwysáu gyda dilyniant cam CKD ac ar hyn o bryd fe'i hystyrir yn pathoffisioleg gyffredin sy'n arwain at y cam olafclefyd yr arennau[17]. Fel y soniwyd uchod, mae llid yn cael ei ystyried yn ddigwyddiad i fyny'r afon, felly dylid egluro'r mecanwaith y mae hypocsia yn achosi llid ar y lefel foleciwlaidd. Mae llid yn cael ei nodweddu gan boen, gwres, cochni, chwyddo, a cholli swyddogaeth [18]. Fodd bynnag, yn y bôn mae'n gweithredu i ddileu achos cychwynnol anaf celloedd ac i glirio celloedd necrotig a meinwe sydd wedi'i niweidio. Mewn unrhyw achos, nid yw llid yn ymateb penodol, ac ystyrir bod imiwnedd cynhenid yn bennaf yn cymryd rhan yn y broses gychwynnol o lid trwy gynhyrchu interferon (IFN)- / [19]. Ymhlith y ffactorau sy'n gysylltiedig ag imiwnedd cynhenid, mae genyn I (RIG-I) sy'n anwytho i asid retinoig yn gyfrifol am ymatebion imiwn i heintiau firaol[20. Yn nodedig, mae astudiaethau diweddar wedi dangos bod hypocsia yn uwchreoleiddio mynegiant RIG-I yn yr ymennydd a'r afu, gan arwain at gynhyrchu IFN- / [21,22]. Fodd bynnag, mae rôl hypocsia yn y mynegiant RIG-I-mediated o IFN- / B yn yarenyn parhau i fod yn aneglur.
Adroddwyd am Klotho gyntaf fel protein gwrth-heneiddio [23]. Yn wir, mae llygod â diffyg clotho yn dangos oes fyrrach ynghyd â ffenoteipiau sy'n debyg i heneiddio dynol. Mewn cyferbyniad, mae llygod trawsgenig klotho yn dangos hyd oes estynedig [24]. O ran effeithiau renoprotective, canfuwyd bod diffyg klotho yn dwysáu difrod arennol mewn modelau arbrofol o glefydau arennol, tra bod gorfynegiant klotho neu weinyddu protein klotho yn ei leddfu [25]. Mae protein Klotho yn bodoli mewn tair ffurf: pilen, secretu, a koto mewngellol. Ymhlith y rhain, adroddir bod klotho mewngellol yn atal mynegiant RIG-I ynghyd â llid [26], gan godi'r posibilrwydd bod diffyg klotho yn gwaethygu dadreoleiddio RIG-I ac IFN- / yn a achosir gan hypocsia.arennau.Arweiniodd y canfyddiadau hyn ni i ddamcaniaethu bod mynegiant RIG-I ac IFN- / wedi cynyddu o dan amodau hypocsig mewn llinell gell o gelloedd tiwbaidd arennol a bod eu huwchreoleiddiad a achosir gan hypocsia wedi'i ddwysáu mewn llygod klotho-knockout (KI-7 llygod). Yn yr astudiaeth hon, rydym yn dangos bod hypocsia yn dadreoleiddio RIG-I yn ogystal ag IFN-a/ mewn llygod mawr arferolarencelloedd (NRK-52E) ac arennau llygoden. Rydym hefyd yn dangos mai RIG-I sy'n gyfrifol am ddadreoleiddio IFN-c/ B a achosir gan hyp-ocsia.arensamplau gan gleifion a gafodd ddiagnosis o neffropathi IgA, canfuwyd bod cydberthynas gadarnhaol rhwng mynegiant RIG-I ac IFN- / . Yn olaf, dwyshawyd y broses o ddadreoleiddio RIG-Iand IFN- / a achosir gan hypocsia mewn llygod KI-/-. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod diffyg klotho yn dwysáu mynegiant IFN- / a achosir gan hypocsia trwy uwchreoleiddio RIG-I mewnarennau.
BYDD CISTANCHE YN GWELLA METHIANT YR AREN/ARENAU
Defnyddiau a dulliau AnifeiliaidCafwyd llygod math gwyllt gwrywaidd C57BL/6J (WT) (8 wythnos oed ac yn pwyso20-25 g) gan Charles River Laboratories Japan (Yokohama, Japan). Prynwyd llygod gwrywaidd (6 wythnos oed ac yn pwyso tua 15 g) gan CLEA Japan, Inc. Cafodd y llygod eu cadw yn Sefydliad Gwyddor Anifeiliaid Labordy Prifysgol Hiroshima (Hiroshima, Japan), fel y disgrifiwyd yn flaenorol [27]. Cymeradwywyd yr holl arbrofion gan Pwyllgor Sefydliadol Gofal a Defnydd Anifeiliaid Prifysgol Hiroshima (rhifau hawl: A19-158 a 2019-156) ac fe'u perfformiwyd yn unol â Chanllawiau'r Sefydliad Cenedlaethol dros Iechyd (NIH) ar Ddefnyddio Anifeiliaid Labordy. Rhannwyd y llygod WT a KI-'yn grŵp rheoli neu grŵp hypocsia (n=5ym mhob grŵp). Achoswyd cyflyrau hypocsig trwy glampio'r rhydweli arennol chwith am 10 munud o dan anesthesia cyffredinol (0.3 mg/kg medetomidine, 4 mg/kg midazolam, a 5 mg/kg butorphanol)[28]. Cafodd llygod yn y grŵp rheoli lawdriniaeth ffug a oedd yr un fath â'r un mewn llygod yn y grŵp hypocsia, ac eithrio diffyg rhwymiad rhydweli. Ar ôl 10 munud o hypocsia, cafodd y llygod eu ewthaneiddio gan dyllu'r galon a'uarennaueu cynaeafu. Hypoxia yarenei gadarnhau gan blotio gorllewinol ar gyfer mynegiant erythropoietin (S1 Ffig).
Diwylliant celloeddY llygoden fawr arferolaren(NRK)-52Prynwyd celloedd E o'r lect American Type Culture Col. (Manassas, VA, USA).NRK-52Cafodd celloedd E eu meithrin mewn cyfrwng RPMI-1640yn cynnwys 10 y cant o ffetws serwm buchol (FBS) (Biowyddoniaeth Nichirei, Tokyo, Japan) a phenisilin/streptomi-cin (Nacalai Tesque, Kyoto, Japan). Cafodd y cls hyn eu hadu i seigiau meithrin 10cm. Ar ôl tyfu i is-gydlifiad, deorwyd y celloedd mewn Siambr Deor O2Modular 1 y cant (MIC 101; Billups-Rothenberg, San Diego, CA, UDA) am 30,60,90, a 120 munud, paratowyd a darostyngwyd lysates cell gyfan i ddadansoddiad blot gorllewinol. Hypocsia NRK-52Cadarnhawyd celloedd E gan blotio gorllewinol ar gyfer mynegiant HIF-1 (Ffig S2).
Trawsnewid siRNA RIG-ITrawsnewidiwyd celloedd NRK52E gyda20 nM siRNA yn targedu RIG-I (RSS311418: Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA) neu siRNA rheolaeth negyddol (4390843; Biosystemau Cymhwysol, Waltham, MA, UDA) gan ddefnyddio Lipofectamine 2000 Transfection Fisher Reagent (The Reagent Reagent Reagent) , yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Ar ôl 43-45 h, cafodd rhai o'r celloedd hyn eu deor o dan amodau hypocsig (1 y cant O,) am 30 munud i werthuso RIG-I. Newidiwyd y celloedd eraill i gyfrwng ffres. Ar ôl 24 h, deorwyd y celloedd hyn o dan can-ditions hypoxic (1 y cant O2) am 60 a 120 munud i gadarnhau ataliad IFN-a/. Paratowyd lysadau celloedd cyfan a bu'n destun dadansoddiad blotiau gorllewinol.
Dadansoddiad o blotiau gorllewinolPerfformiwyd casglu samplau a blotio gorllewinol yn unol â dulliau a ddisgrifiwyd yn flaenorol[29]. Gwrthgorff gwrth-RIG-I monoclonaidd cwningen (#3743S; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, UDA), gwrthgorff polyclonaidd cwningen gwrth-IFN- 11 (bs-7023R; Bioss Anti-bodies, Woburn, MA, UDA), cwningen polyclonal gwrth-IFN- gwrthgorff (GTX37658; GeneTex, Irvine, CA, UDA), cwningen monoclonaidd gwrthgorff gwrth-RIG-I (=700366; Invitrogen, Carlsbad, CA, UDA), cwningen polyclonal gwrthgorff gwrth-IFN- 2 (ab193055; Abcam, Caergrawnt, y DU), gwrthgorff polyclonaidd gwrth-IFN- cwningen(PA5-20390; Invitrogen), gwrthgorff clotho klotho gwrth-ddynol monoclonaidd llygod mawr (KO603; TransGenic, Fukuoka , Japan), defnyddiwyd gwrthgorff gwrthgorff monoclonaidd llygoden (A5316; Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, UDA), a gwrthgorff tiwbin gwrthgorff monoclonaidd llygoden (T9026; Sigma-Aldrich) fel gwrthgyrff cynradd. Defnyddiwyd imiwnoglobwlin gwrth-gwningen gafr cyfun-redish peroxidase G (Dako, Glostrup, Denmarc) ac imiwnoglobwlin gwrth-lygoden gafr G (Dako) fel gwrthgyrff eilaidd. Defnyddiwyd SuperSignal West Dura a'r system Pico (Thermo Fisher Scientific) i ganfod signalau. Mesurwyd dwyster pob band gan feddalwedd ImageJ (fersiwn 1.47y; Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol, Bethesda, MD, UDA) a'i normaleiddio i lefel naill ai -actin neu -tubulin.
BYDD CISTANCHE YN GWELLA CLEFYD YR ARREN/ARENAU
Dadansoddiad imiwnohistocemegol o feinwe arennau llygodenPerfformiwyd staenio imiwnohistocemegol yn unol â dulliau a ddisgrifiwyd yn flaenorol [27]. Fel gwrthgyrff cynradd, defnyddiwyd y cynhyrchion canlynol: gwrthgorff gwrth-RIG-I monoclonaidd cwningen (# 700366; Invitrogen), gwrthgorff gwrth-IFN polyclonaidd cwningen (ab193055; Abcam), gwrthgorff gwrth-IFN polyclonaidd cwningen (ab193055; Abcam). Cafodd PA5-20390; Invitrogen), a gwrthgorff klotho gwrth-ddynol monoclonaidd llygod mawr (KO603; TransGenic).RIG-I-, IFN-a/ -, ac ardaloedd klotho-positif eu meintoli fel y cyfartaledd o 20 maes a ddewiswyd ar hap gyda Meddalwedd ImageJ.
Casglu samplau clinigol a datganiad moesegCafwyd sbesimenau arennau trwy fiopsi arennol yn Ysbyty Athrofaol Hiroshima rhwng Awst 2014 a Thachwedd 2016 gan 33 o gleifion a gafodd ddiagnosis o neffropathi IgA. Glynodd yr astudiaeth hon at yr egwyddorion a ymgorfforwyd yn Natganiad Helsinki ac fe'i cymeradwywyd gan Bwyllgor Moeseg Prifysgol Hiroshima(E-1718), Cafwyd caniatâd gwybodus ar ffurf optio allan ar wefan(httns:/inzounaika). Hiroshima-uaciplresearchl optio allan.html).
Dadansoddiad imiwnohistocemegol o feinwe'r arennau dynolCynhaliwyd imiwneiddio yn unol â dulliau a ddisgrifiwyd yn flaenorol [27]. Defnyddiwyd y gwrthgyrff sylfaenol canlynol: gwrthgorff gwrth-RIG-I monodonaidd cwningen (# 700366; Invitrogen), gwrthgorff gwrth-IFN- monoclonaidd llygoden (sc-373757; Santa Cruz Biotechnology, Dallas,TX, UDA), a chwningen mesurwyd ardaloedd gwrth-IFN- gwrthgorff polyclonaidd (PA5-20390; Invitrogen), RIG-I- ac IFN-a/ -positive fel cyfartaledd o bum maes a ddewiswyd ar hap gyda meddalwedd Image].
Dadansoddiad ystadegolCyflwynir canlyniadau fel gwyriad ±safonol cymedrig (SD). Cyfrifwyd cydberthnasau gan ddefnyddio dadansoddiad atchweliad un-newidyn, Ar gyfer cymariaethau lluosog, defnyddiwyd dadansoddiad unffordd o amrywiant (ANOVA) ac yna prawf-t Myfyriwr gyda chywiriad Bonferroni. Dadansoddwyd y gwahaniaethau rhwng y ddau grŵp yn ôl prawf t Myfyrwyr.P<0.05 was="" considered="" as="" statistically="">
Canlyniadau:Mae hypocsia yn dadreoleiddio RIG-I ac IFN-a/ mewn llinell gell llygod mawr o gell epithelial arennolEr mwyn nodi effaith hypocsia ar fynegiant RIG-Iand IFN- a/ yn Vitro, fe wnaethom gynnal dadansoddiad blot gorllewinol ar gyfer y proteinau hyn mewn celloedd E NRK-52 wedi'u meithrin o dan amodau hypocsig. Cyrhaeddodd lefel protein RIG-I uchafbwynt ar 30 munud ac yna gostyngodd yn raddol mewn celloedd NRK-52E o dan ysgogiad hypocsig (Ffig 1A). -52E gelloedd ag ysgogiad hypocsig (Eig 1Band1C). Mae Knockdown o RIG-I yn lleihau mynegiant celloedd IFN-a/ mewn celloedd NRK52E â hypocsia RIG-I siRNA neu negyddol
rheoli siRNA. Yn gyntaf, gwnaethom gadarnhau effaith dymchwel RIG- siRNA yng nghelloedd NRK-52E. Datgelodd blotio gorllewinol ar gyfer RIG-I fod RIG-I siRNA yn is-reoleiddio mynegiant RIG-I yn NRK-52celloedd E naill ai gyda neu heb ysgogiad hypocsig (Eig 2A). Y tro nesaf fe wnaethom ymchwilio i rôl y dadreoleiddiad a achosir gan hypocsia o RIG -I yn y mynegiant ofIFN- /B yng nghelloedd NRK-52E gan ddefnyddio siRNA RIG-I neu reolaeth negyddol. Ataliodd RIG-siRNA fynegiad IFN- / yn NRK-52Ecells (Eig2Band2C).
Mae RIG-I yn cydberthyn â lefelau mynegiant IFN- / mewn sbesimenau arennau dynol o neffropathi IgAGwnaethom archwilio a oedd lefel mynegiant RIG-Iis sy'n gysylltiedig ag IFN-a/ mewn samplau biopsi arennol a gafwyd gan gleifion â neffropathi IgA (n=33). Dangosir nodweddion clinigol manwl y cleifion hyn yn Nhabl S1. Datgelodd staenio imiwnohistocemegol ar gyfer RIG-I ac IFN- / eu mynegiant mewn glomeruli a thiwbiau arennol (Ffig 3A), a dangosodd fod cydberthynas gadarnhaol rhwng RIG-I ac IFN-o/ (r=0.57,P<0.001, and="" r=""><0.001, respectively)(eig="">
Nid yw hypocsia yn newid lefel mynegiant klotho mewn WT a K1-/ llygodEr mwyn pennu effaith ysgogiad hypocsig ar fynegiant klotho in vivo, fe wnaethom ymchwilio i'w fynegiant yn WT a K-/llygod gyda neu heb 10 munud o ysgogiad hypocsig. Datgelodd blotio gorllewinol a staenio imiwn-histocemegol nad oedd mynegiant klotho yn gwahaniaethu rhwng llygod WT gyda a heb hypocsia ac na welwyd mynegiant klotho mewn KIT / llygod waeth beth fo presenoldeb neu absenoldeb ysgogiad hypocsig (Eig 4Aand4B). Yn y llygod WT, klotho cafodd protein ei staenio yn cytoplasm celloedd tiwbaidd (Ffig 4B).Mae mynegiant RIG-I yn cael ei ddwysáu o dan amodau hypocsig mewn llygod K~.Dywedir bod klotho mewngellol yn rhoi'r gallu i atal llid wedi'i gyfryngu gan RIG-I, felly fe wnaethom archwilio lefel mynegiant a lleoleiddio RIG-I mewn hypocsigarennauo WT a Kl−/− llygod. Datgelodd blotio gorllewinol fod mynegiant RIG-I wedi cynyddu mewn llygod WT gydag ysgogiad hypocsig a'i fod wedi'i ddwysáu mewn llygod Kl - / - (Ffig 5A). Dangosodd imiwnohistocemeg fod yr ardal RIG-I-positif wedi cynyddu mewn llygod Kl -/ -, a oedd yn debyg i'r canlyniadau a gafwyd o blotio gorllewinol (Ffig 5B).
Mae IFN- yn cael ei uwchreoleiddio o dan amodau hypocsig mewn llygod KI--Er mwyn nodi effeithiau hypocsia ar fynegiant-a yn wvo, fe wnaethom archwilio ei lefel mynegiant a'i leoleiddio mewn llygod WT hypocsig a KI-. Datgelodd blotio gorllewinol fod mynegiant IFN wedi cynyddu mewn llygod WT gydag ysgogiad hypocsig a’i fod yn cael ei uwchreoleiddio ymhellach mewn llygod (Ffig 6A). Datgelodd staenio imiwnohistocemegol hefyd fod arwynebedd positif IFN i'w weld yn bennaf mewn celloedd tiwbaidd, a bod lefel mynegiant IFN- yn dangos yr un tueddiad ag yn y blotio gorllewinol (Ffig 6B).
Mae IFN- yn cael ei gynyddu o dan amodau hypocsig mewn K1T-/llygodYn ogystal ag IFN-c, fe wnaethom archwilio lefel mynegiant a lleoleiddio WT hypocsig IFN-Bin a llygod. O ganlyniadau blotio gorllewinol, cynyddodd mynegiant IFN mewn llygod WT gydag ysgogiad hypocsig, tra gwelwyd cynnydd pellach mewn KIT/llygod (Ffig 7A). Ar ôl meintioli arwynebedd positif IFN, cynyddodd lefel mynegiant IFN- mewn llygod KI-/- o gymharu â llygod WT (Ffig 7B).
a arsylwyd mewn Kl−/- llygod beth bynnag fo presenoldeb ysgogiad hypocsig. Fe wnaethom ddangos bod hypocsia arennol yn cynyddu mynegiant RIG-I ac IFN- / a bod eu mynegiant yn cael ei ddwysáu ymhellach mewn llygod Kl - / -. Roedd y canfyddiadau hyn yn awgrymu bod diffyg klotho wedi dwysau'r mynegiant a achosir gan hypocsia o RIG-I, gan arwain at ddadreoleiddio IFN- / . Gwelsom fod hypocsia wedi'i achosi i fynegiant RIG-I ac IFN- / mewn astudiaethau in vitro ac in vivo. Er mwyn addasu i amodau hypocsig, mae HIF yn cael ei sefydlogi ac mae'n gweithredu fel ffactor trawsgrifio [30]. Mewn astudiaeth flaenorol, dywedwyd bod RIG-I yn ymwneud â moleciwlau anwythol HIF. Fodd bynnag, ni allem nodi bod RIG-I yn effeithydd HIF i lawr yr afon. Yn ogystal â haint firws, mae mynegiant RIG-I yn cynyddu o dan amodau hypocsig [31]. Er bod astudiaethau blaenorol wedi nodi bod hypocsia yn effeithio ar gelloedd epithelial tiwbaidd, celloedd endothelaidd, pericytes, ffibroblastau, celloedd llidiol, a chelloedd epithelial yn yr arennau [32,33], rydym yn dangos bod upregulation RIG-I wedi'i arsylwi'n bennaf mewn celloedd epithelial tiwbaidd mewn llygod. gydag ysgogiad hypocsig, yn ogystal ag mewn cleifion â neffropathi IgA. Oherwydd bod tiwbiau arennol yn cael eu hystyried fel safle mynediad pathogenau trawswrethrol [34], efallai y bydd RIG-I yn chwarae rhan ganolog yn ymateb imiwnedd celloedd epithelial tiwbaidd o dan amodau hypocsig. Mae'r ymateb imiwn cynhenid yn cael ei actifadu gan nid yn unig ficro-organebau ond hefyd signalau larwm o gelloedd sydd wedi'u difrodi, eu hanafu neu dan straen [35]. Yn yr astudiaeth hon, rydym yn dangos bod y mynegiant a achosir gan hypocsia o RIG-I yn cymryd rhan mewn cynhyrchu IFN- / mewn llinell celloedd llygod mawr o tiwbiau arennol. Mae'r data a gyflwynwyd yn awgrymu bod mynegiant RIG-I yn gweithredu fel system imiwnedd gynhenid y cytosol mewn ymateb i straen hypocsig yn ogystal â haint firws. Disgrifiodd astudiaethau blaenorol fod hypocsia yn gwella yn ystod datblygiad CKD waeth beth fo'r afiechyd sylfaenol a bod hypocsia yn cyfrannu at ddatblygiad difrod arennol [17]. Mewn astudiaeth glinigol gan ddefnyddio delweddu cyseiniant magnetig lefel ocsigeniad gwaed-ddibynnol, nid yn unig y dwysodd hypocsia arennol yn ystod dilyniant CKD ond hefyd yn rhagweld dilyniant o'r fath [36]. Felly, mae hypocsia yn cael ei ystyried ar hyn o bryd fel y llwybr cyffredin i ddilyniant y cam olafclefyd yr arennau, felly dylai llid a achosir gan hypocsia fod yn darged therapiwtig i atal dilyniant CKD.
Fe wnaethom ddangos bod hypocsia yn ysgogi cynhyrchu IFN- / , sy'n cael eu dosbarthu fel interfferonau math 1. Yn y bôn, mae interfferonau Math 1 yn gweithredu i atal dyblygu firaol [37] ac i wrthsefyll gwrthimiwnedd a achosir gan hypocsia [21,22]. Fodd bynnag, mae astudiaethau a berfformiwyd hyd yn hyn wedi nodi bod interfferonau math 1 yn arwain at actifadu celloedd lladd naturiol, gan chwarae rhan bwysig nid yn unig wrth ddileu celloedd sydd wedi'u heintio â firws ond hefyd difrod meinwe [38]. Mewn gwirionedd, nododd astudiaethau blaenorol fod RIG-I yn cyfrannu at lid mewn amrywiol organau, fel yr ysgyfaint [39],aren[40], a'r system nerfol [21]. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom hefyd ddangos bod dadreoleiddio RIG-I a achosir gan hypocsia yn gyfrifol am gynhyrchu IFN- / . Felly, gall interfferon math 1 weithredu i amddiffyn rhag haint mewn cyflwr o hypocsia, ond byddent yn niweidiol o dan amodau heb eu heintio. Ar ben hynny, nododd astudiaeth flaenorol, yn ogystal ag interferonau math 1, fod RIG-I yn ymwneud â chynhyrchu amrywiol cytocinau, megis IL-1 , IL- 6, a TNF- [41]. Oherwydd bod y cytocinau hyn yn achosi niwed i feinwe, gall dadreoleiddio RIG-I a achosir gan hypocsia gymryd rhan yn natblygiad CKD. Fe wnaethom ddangos bod diffyg klotho yn gwella mynegiant RIG-I a achosir gan hypocsia, sy'n cyd-fynd ag uwch-reoleiddio IFN- / . Dywedir bod mynegiant Klotho yn lleihau wrth heneiddio a dilyniant CKD [42,43]. Felly, efallai y bydd mynegiant RIG-I yn cael ei uwchreoleiddio'n fwy yn yr henoed a chleifion CKD o dan amodau hypocsig, gan arwain at gynhyrchu IFN- / . Fel y soniwyd uchod, mae klotho yn bodoli mewn tair ffurf - bilen, secretu, a klotho mewngellol - gyda'r olaf yn gyfrifol am atal y cynhyrchiad RIG-I-mediated o cytocinau llidiol [26]. O ran lleoleiddio, dangoswyd bod mynegiant klotho yn digwydd yn bennaf yn y celloedd tiwbaidd arennol, gyda thystiolaeth bod mynegiant RIG-I yn cael ei ddwysáu'n bennaf yn y celloedd tiwbaidd arennol o dan amodau hypocsig. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod lefel is o fynegiant klotho yn cyfrannu at well cynhyrchiad RIG-I-mediated o interfferonau math 1 o dan amodau hypocsig.
BYDD CISTANCHE YN GWELLA POEN YN YR AREN/ARENIAD
I grynhoi, gwnaethom ddangos bod RIG-I ac IFN- / a achosir gan ysgogiad hypocsig mewn arennau llygoden a llinell gell llygod mawr o gelloedd tiwbaidd arennol, a bod RIG-I yn ymwneud â upregulation a achosir gan hypocsia o arbrofion IFN- / in vitro. Mewn samplau biopsi arennol gan gleifion â neffropathi IgA, roedd mynegiant RIG-I yn cydberthyn â dadreoleiddio IFN- / . Yn olaf, cafodd mynegiant RIG-I a achosir gan hypocsia ei ddwysáu mewn llygod klotho-knockout, ynghyd â dadreoleiddio IFN- / . Cynyddodd mynegiant cyfryngol RIG-I o interfferon math 1 o dan amodau hypocsig, a gwelwyd uwchreoleiddio pellach mewn cyflwr o klotho downre gulation. Yn ôl astudiaethau clinigol, mae hypocsia yn gwaethygu gyda'r cam CKD uwch [36] ac mae'n rhagfynegi dilyniant hirdymor CKD [36]. Yn ogystal, mae mynegiant klotho yn lleihau gyda dirywiad swyddogaeth arennol, ac mae gostyngiad mewn mynegiant klotho yn gysylltiedig â difrod arennol [44]. Yn yr astudiaeth hon, rydym yn dangos bod diffyg klotho yn dwysáu mynegiant IFN- / a achosir gan hypocsia trwy ddadreoleiddio RIG-I yn yr arennau a bod mynegiant RIG-I yn gysylltiedig â mynegiant IFN- / mewn cleifion gwirioneddol â neffropathi IgA. O ystyried y canfyddiadau hyn gyda'i gilydd, mae hypocsia a gostyngiad mewn clotho yn cael eu hyrwyddo yn ystod dilyniant CKD, ac felly mae gweithrediad imiwnedd cynhenid yn cael ei wella mewn cleifion CKD.
