System Cyfryngwr Lacas Yn Defnyddio Cyfryngwr Naturiol Fel Asiant Gwyno Ar Gyfer Diliwio Melanin Rhan 1

Crynodeb: Yn yr astudiaeth hon, datblygwyd system cyfryngwr laccas (LMS) gan ddefnyddio cyfryngwr naturiol fel asiant gwynnu ar gyfer dadliwio melanin. Defnyddiwyd saith cyfryngwr naturiol i ddisodli cyfryngwyr synthetig a goresgyn yn llwyddiannus botensial rhydocs isel laccas a mynediad cyfyngedig melanin i safle gweithredol laccas. Cafodd gweithgaredd dad-liwio melanin lacasau o Trametes versicolor (lacT) a Myceliophthora thermophila (lacM) ei wella'n sylweddol gan ddefnyddio cyfryngwyr naturiol gan gynnwys acetosyringone, syringaldehyde, ac acetovanillone, a ddangosodd sytowenwyndra isel. Mae'r grwpiau methoxy a ceton o gyfryngwyr naturiol yn chwarae rhan bwysig mewn dadliwio melanin. Cafodd cysonion penodoldeb lacT a lacM ar gyfer dadliwio melanin eu gwella gan 247 a 334, yn y drefn honno, pan ddefnyddiwyd acetosyringone fel cyfryngwr. Gallai LMS gan ddefnyddio les ac asetosyringone hefyd ddadliwio'r melanin sy'n bresennol yn y ffilm hydrogel cellwlos, sy'n dynwared cyflwr y croen. Ar ben hynny, gallai LMS ddad-liwio nid yn unig analogau eumelanin synthetig a baratowyd gan ocsidiad tyrosin ond hefyd melanin naturiol a gynhyrchir gan gelloedd melanoma.

Yn ôl astudiaethau perthnasol,cistancheyn llysieuyn cyffredin sy'n cael ei adnabod fel "y llysieuyn gwyrthiol sy'n ymestyn bywyd". Ei brif gydran ywcistanoside, sydd ag effeithiau amrywiol megisgwrthocsidiol, gwrthlidiol, ahyrwyddo swyddogaeth imiwnedd. Y mecanwaith rhwng cistanche agwynnu croenyn gorwedd yn effaith gwrthocsidiol cistancheglycosidau. Melaninmewn croen dynol yn cael ei gynhyrchu gan y ocsidiad tyrosine catalyzed gantyrosinase, ac mae'r adwaith ocsideiddio yn gofyn am gyfranogiad ocsigen, felly mae'r radicalau di-ocsigen yn y corff yn dod yn ffactor pwysig sy'n effeithio ar gynhyrchu melanin. Cistanche yn cynnwyscistanoside, sy'n gwrthocsidiol a gall leihau'r genhedlaeth o radicalau rhydd yn y corff, fellyatal cynhyrchu melanin.

Cliciwch Ar Rou Cong Rong Benefits For Whitening

Am fwy o wybodaeth:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. Rhagymadrodd

Mae Laccases (EC 1.10.3.2, benzenediol: dioxygen oxidoreductases) yn broteinau aml-gopr sy'n cataleiddio ocsidiad cyfansoddion ffenolig ac an-ffenolig amrywiol trwy fecanwaith adwaith radical-catalyzed trwy leihau ocsigen moleciwlaidd [1,2]. Mae lacasau wedi'u defnyddio fel biogatalyddion ar gyfer prosesau bioddiraddio, megis bioadfer llifynnau [3,4], fferyllol [5,6], chwynladdwyr [7], a dadhalogi [8-10]. Mae lacasau hefyd wedi'u defnyddio i gataleiddio polymerization rhagflaenwyr llifyn a chyfansoddion organig [11]. Yn benodol, mae eu priodweddau deniadol, megis penodoldeb swbstrad isel, y defnydd o ocsigen fel y derbynnydd electron terfynol, cynhyrchu dŵr fel sgil-gynnyrch, a dim galw (neu ddim cynhyrchu) perocsidau, yn eu gwneud yn ddiddorol mewn biotechnolegol a meysydd amgylcheddol [1,11,12].

Mae pedwar ïon copr yn y safle actif yn ymwneud â gweithgaredd catalytig lacas. Mae copr "glas" (safle T1) yn ocsideiddio'r swbstrad, ac mae'r clwstwr copr triniwclear (T2 / T3) yn derbyn yr electronau o'r safle T1 i leihau'r ocsigen moleciwlaidd [1,12,13]. Yn benodol, ystyrir bod potensial rhydocs safle T1 Cu yn ffactor mawr wrth bennu gallu catalytig laccasau [14]. Mae gan lacasau botensial rhydocs cymharol isel (0.4–0.8 V) o gymharu â perocsidasau ligninolytig (dros 1 V) fel perocsidas manganîs a lignin peroxidase. Ni all lacasau ocsideiddio swbstradau an-ffenolig yn uniongyrchol â photensial rhydocs uwchlaw 1.3 V [13,14]. Felly, i oresgyn cyfyngiadau laccas, systemau cyfryngwr laccas (LMS) gan ddefnyddio cyfansoddion moleciwlaidd bach, megis 2,20 -azinobis(3- ethylbenzthiazoline{-6-sylffonad) (ABTS), { {24}}Mae hydroxy benzotriazole (HOBt), asid fiolwrig (VLA), N-hydroxy ffthalimid (HPI), N-hydroxy acetanilide (NHA), a TEMPO, sy'n gweithredu fel cyfryngwyr rhydocs, wedi'u hawgrymu [15-17].

Mae'r cyfryngwyr hyn yn caniatáu ocsidiad cyfansoddion swmpus trwy wahanol lwybrau ocsideiddio. Mae'r system laccase-ABTS yn ocsideiddio swbstradau trwy gynhyrchu radical ABTS cationig trwy fecanwaith trosglwyddo electronau (ET). Mae LMSs gyda HOBt, VLA, HPI, neu NHA yn cynhyrchu radicalau nitroxyl trwy'r mecanwaith trosglwyddo atom hydrogen (HAT) [1,12,17]. At hynny, mae cyfryngwyr fel TEMPO a'i analogau yn adweithio trwy lwybrau ïonig i gynhyrchu ïonau ocsoammoniwm [1,12,18]. Gall defnyddio'r cyfryngwyr hyn ocsideiddio ystod eang o gyfansoddion mewn amrywiol gymwysiadau, megis diraddio llifynnau [3,4], diraddio cyffuriau [5,6], a diraddio lignin [8-10]. Serch hynny, mae cymwysiadau cyfryngwyr synthetig mewn meysydd diwydiannol wedi'u cyfyngu oherwydd eu gwenwyndra posibl, cost uchel, ac effaith anactifadu ensymau. Yn ddiweddar, astudiwyd moleciwlau ffenolig sy'n deillio o lignin fel cyfryngwyr naturiol (ee, syringaldehyde, acetosyringone, vanillin, acetovanillone, methyl vanillate, asid ferulic, asid sinapig, asid p-coumarig, ac ati) i ddisodli cyfryngwyr synthetig [1,12] . Manteision cyfryngwyr naturiol yw cost isel a gwenwyndra isel oherwydd eu bod yn dod o ffynonellau naturiol ac adnewyddadwy [19].

Mae melanin yn grŵp o pigmentau naturiol a gynhyrchir gan melanogenesis trwy bolymeru tyrosin ocsideiddiol gan melanocytes. Gellir dosbarthu melanin naturiol yn bum categori o ewmelanin, pheomelanin, pob melanin, pheomelanin, a niwromelanin [20]. Yn ddiweddar, astudiwyd cymwysiadau meddygol ac electrocemegol amrywiol gan ddefnyddio rhagflaenwyr melanin neu melanin [20,21]. Mae lliw croen dynol yn cael ei bennu'n bennaf gan bresenoldeb melanin. Yn y diwydiant cosmetig, mae dadbigiad uniongyrchol o melanin gan ddefnyddio ensymau wedi'i gynnig ar gyfer datblygu cyfryngau croen-gwyno. Astudiwyd sawl perocsidas i ddadliwio melanin. Mae Woo et al. yn dangos y gellir decolorized melanin synthetig yn uniongyrchol gan peroxidase lignin o P. chrysosporium [22]. Adroddodd y grwpiau Keneko a Mohorˇciˇc hefyd am ddadliwio melanin yn ensymatig gan fanganîs peroxidase wedi'i ynysu o ffyngau (Sporotrichum pruinose a Phlebia radiata) [23,24]. Mae Kim et al. adroddodd bod cymysgeddau ensymau crai sy'n cynnwys manganîs peroxidase, lignin peroxidase, a laccase yn dangos gweithgaredd depigmentation melanin [25]. Pan fydd perocsidasau yn dad-liwio melanin, mae angen hydrogen perocsid (H2O2) arnynt fel cofactor a all lidio'r croen. Felly, er mwyn lleihau'r defnydd o H2O2, cyflwynwyd glwcos ocsidas neu laccas i'r system cyfuniad ensymau [26,27]. Gall lacasau ddad-liwio melanin heb ddefnyddio hydrogen perocsid. Adroddodd Khammuang a Sarnthima fod laccas o Lentinus polycarpous Lév yn dangos gweithgaredd decolorization melanin gan ddefnyddio ABTS, vanillin, ac asid fanillic fel cyfryngwyr [28].

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1. Defnyddiau

2.2. Datliwio Melanin gan LMS

Paratowyd yr hydoddiant melanin dirlawn (1.4 mg / mL) trwy ddiddymu melanin synthetig 3 mg mewn 1.3 mL o 10 mM NaOH. Cafodd yr hydoddiant ei allgyrchu ar 8500 rpm am 5 munud i gael gwared ar y melanin heb ei hydoddi, a gwanhawyd yr uwchnatant â 0.1 M byffer ffosffad asid citrig (pH 3, 4, 5, 5.5, 6, neu 7) ac yn cael ei ddefnyddio fel datrysiad swbstrad ar gyfer LMS. Crynodiad y melanin yn yr hydoddiant swbstrad oedd 63 µg/mL a chadarnhawyd yn sbectroffotometrig ar 475 nm. Cymysgwyd y 0.8 ml o hydoddiant swbstrad melanin â 0.1 mL ateb cyfryngwr (0–1 mM) mewn tiwb Eppendorf 1.5 ml. Cychwynnwyd yr adwaith dad-liwio melanin trwy ychwanegu 0.1 mL o hydoddiant lacas (15.8 µg (0.6 U) lacT neu 19.2 µg (1.8 U) lacM) i gymysgedd o melanin a'r cyfryngwr ar 25 ◦C mewn baddon dŵr ysgwyd ar 120 rpm . Ar ôl yr adwaith, cafodd cymysgedd yr adwaith ei allgyrchu, a mesurwyd amsugnedd y supernatant ar 475 nm. Cyfrifwyd y cynnyrch dadliwio ( y cant ) gan ddefnyddio'r hafaliad canlynol:

Dadliwio ( cant ) { { { { }}}} ( A { { }} − Ar )/A0 × 100, (1)

2.3. Astudiaeth Ginetig o Ddadliwio Melanin gan LMS

2.4. Sytowenwyndra Cyfryngwyr Naturiol

Defnyddiwyd llinell gell melanoma B16F10 (Korea Cell Line Bank, Seoul, Korea) i bennu sytowenwyndra cyfryngwyr naturiol ar gyfer LMS. Perfformiwyd assay coch niwtral (NR) i fesur cytotoxicity y cyfryngwyr [29]. Mae NR yn mesur hyfywedd lysosomau celloedd byw. Cafodd celloedd melanoma â chrynodiad o 3 × 104 o gelloedd eu dosbarthu i bob ffynnon o 96-blat ffynnon. Ar ôl 24 h o amaethu, cafodd y celloedd eu trin â chyfryngwyr naturiol (1, 2, 5, 10, 22, a 46 mM). Ar ôl amaethu ychwanegol am 2 ddiwrnod, cafodd y celloedd eu trin â hydoddiant NR 50 µg/ml wedi'i hydoddi mewn DMEM a'i ddeor am 3 h. Ar ôl tynnu'r supernatant trwy sugno, defnyddiwyd hydoddiant desorb NR (1 y cant o asid asetig rhewlifol, 49 y cant ethanol, a 50 y cant o ddŵr distyll) ar gyfer echdynnu lliw. Ar ôl y broses echdynnu, mesurwyd y newid yn yr amsugnedd ar 540 nm.

2.5. Paratoi a dadliwio'r Ffilm Hydrogel Melanin/Sellwlos

I fesur gweithgaredd dad-liwio LMS ar gyfer y ffilm melanin / cellwlos, torrwyd y ffilm hydrogel a baratowyd yn ddalen 1 × 2 cm. Cafodd y ffilm hydrogel ei drochi mewn 4 mL o 0.1 M byffer ffosffad asid citrig (pH 5.5); yn dilyn hynny, ychwanegwyd 0.5 mL o 1 mM acetosyringone a 0.5 mL o hydoddiant les (2.5 U) at y byffer. Cynhaliwyd yr adwaith dad-liwio mewn baddon dŵr gan ysgwyd am 120 pm a 25 ◦C am 3 h. Ar ôl yr adwaith, golchwyd y ffilm â dŵr distyll a'i gysylltu ag ochr fewnol y cuvette i fesur y newid yn y sbectra yn yr ystod o 400–800 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer UV/Vis. Cynhaliwyd adweithiau rheoli heb lacM na chyfryngwyr hefyd o dan yr un amodau. Ni chanfuwyd rhyddhau'r melanin o'r ffilm neu newid lliw y ffilm melanin / cellwlos o dan yr amodau adwaith. At hynny, cofnodwyd y newid mewn paramedrau lliw (gwerthoedd L*, a*, a b*) y ffilm melanin/cellwlos ar ôl yr adwaith dadliwio gan LMS hefyd gan ddefnyddio lliwimedr (KONICA MI NOLTA, Tokyo, Japan). Cafwyd y gwerthoedd ∆L (gwahaniaeth ysgafnder metrig), ∆E (cyfanswm y gwahaniaeth lliw), YI (mynegai melynrwydd), a WI (mynegai gwynder) gan ddefnyddio'r hafaliadau canlynol [30–32]:

2.6. Paratoi Melanin Naturiol

Cafwyd melanin naturiol o gelloedd melanoma B16F10. Cafodd y celloedd eu trin â hormon ysgogol alffa-melanocyte i gynhyrchu melanin. Ar ôl 4 diwrnod o ddeori, cafodd y celloedd eu dal gan ddefnyddio trypsin-EDTA a'u sonicated am 10 munud. Cafwyd y supernatant trwy centrifugation ar 8000 rpm am 10 munud ac yna ei addasu i pH 1.5 gan ddefnyddio 6 M HCl. Cafodd yr hydoddiant ei ferwi ar 100 ◦C am 4 h i hydrolysu'r ffracsiynau protein gweddilliol. Cafodd yr hydoddiant sy'n cynnwys melanin naturiol ei olchi gydag aseton, ac yna clorofform ac ethanol, ac yna ei olchi â dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio i ddileu gweddillion, megis celloedd, cydrannau cyfryngau, a ffracsiynau protein [33,34]. Perfformiwyd yr holl brosesau golchi fwy na dwywaith. Yn olaf, cafwyd melanin naturiol trwy rewi-sychu a'i ddefnyddio fel swbstrad ar gyfer LMS.

3. Canlyniadau a Thrafodaeth

3.1. Effaith Cyfryngwyr ar Ddadliwio Melanin gan LMS

Ymchwiliwyd i effaith cyfryngwyr amrywiol ar yr adwaith dadliwio melanin gan LMS gan ddefnyddio dau lacas o T. versicolor (lacT) ac M. thermophila (lacM) (Ffigur 1).Pan ddefnyddiwyd lacT heb gyfryngwr ar gyfer dad-liwio melanin, dim ond 1 y cant oedd y cynnyrch dad-liwio ar ôl 5 awr o adwaith. Pan ddefnyddiwyd HOBt fel cyfryngwr ar gyfer lacT, cynyddwyd y cynnyrch dadliwio ychydig i 2 y cant ar ôl 5 awr o adwaith. Roedd y defnydd o gyfryngwyr synthetig amrywiol, megis HOBt, ABTS, VLA, a TEMPO, yn ocsidiad laccase-catalyzed o gyfansoddion ffenolig neu an-ffenolig yn gwella'r cyfraddau adwaith yn sylweddol [10,15]. Pan fydd mynediad cyfansoddion targed i safle gweithredol laccas wedi'i gyfyngu gan eu rhwystr sterig, gall radicalau cyfryngwr a ffurfiwyd gan laccas ocsideiddio'r cyfansoddion targed yn effeithlon trwy'r trosglwyddiad electron neu fecanwaith trosglwyddo atom hydrogen [12]. HOBt yw un o'r cyfryngwyr synthetig a ddefnyddir amlaf yn LMS oherwydd ei botensial rhydocs uchel (1.1 V) [6]. Fodd bynnag, nid yw HOBt yn gynhwysyn cosmetig da oherwydd ei wenwyndra celloedd posibl a'i allu i anactifadu lacas. Felly, dewiswyd saith cyfryngwr naturiol, acetosyringone, syringaldehyde, asid p-coumaric, vanillin, asid vanillic, alcohol fanilyl, ac asetovanillone, ar gyfer yr adwaith decolorization melanin gan LMS. Yn ddiddorol, mae pob un o'r cyfryngwyr naturiol yn gweithredu fel cyfryngwyr mwy effeithlon na HOBt ar gyfer dad-liwio melanin trwy ddiffyg. Pan ddefnyddiwyd acetosyringone, syringaldehyde, ac asid p-coumaric, roedd y cynnyrch dad-liwio yn 28 y cant, 22 y cant, a 18 y cant, yn y drefn honno, ar ôl 5 awr o adwaith. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos defnyddioldeb cyfryngwyr naturiol ar gyfer yr adwaith dadliwio melanin gan LMS. Mae'r cyfryngwyr yn yr LMS yn cael eu ocsideiddio i radicalau cyfryngu trwy lacas, ac mae'r radicalau cyfryngol yn achosi ocsidiad a dadliwio melanin. Pan ddefnyddiwyd diffyg heb gyfryngwr ar gyfer dad-liwio melanin yn ystod amser adwaith digonol, a allai gyrraedd y cyflwr ecwilibriwm, roedd y cynnyrch dad-liwio yn 7 y cant ar ôl 24 h o adwaith. Mae'r cyfryngwyr naturiol, ac eithrio asid fanillig, yn gweithredu fel cyfryngwyr mwy effeithlon na HOBt ar gyfer dad-liwio melanin trwy lacT ar ôl 24 awr o adwaith. Roedd y cynnyrch dadliwio ar ôl adwaith 24 h gan ddefnyddio asid fanillig fel cyfryngwr yn is na'r hyn a gafwyd ar ôl 5 awr o adwaith. Gall hyn gael ei achosi gan sefydlogrwydd isel ffurf radical ocsidiedig asid fanillig. Pan ddefnyddiwyd acetosyringone, syringaldehyde, ac acetovanillone, roedd y cynnyrch dad-liwio yn 34 y cant, 30 y cant, a 31 y cant, yn y drefn honno, ar ôl adwaith 24 h. Roedd asid p-Coumaric yn fwy effeithlon wrth wella'r gyfradd adwaith gychwynnol nag asetovanillone, tra bod acetovanillone wedi achosi cynnyrch dad-liwio uwch yn y cyflwr ecwilibriwm nag asid p-coumarig.

Roedd effaith y cyfryngwr ar yr adwaith dadliwio gan LMS gan ddefnyddio lacM hefyd yn debyg iawn i'r hyn a gafwyd gan LMS gan ddefnyddio lacT. Pan ddefnyddiwyd les heb gyfryngwr ar gyfer dad-liwio melanin, dim ond 2 y cant oedd y cynnyrch dad-liwio ar ôl 5 awr o adwaith. Ni wnaeth HOBt fel cyfryngwr ar gyfer lacM wella'r cynnyrch dadliwio yn ystod yr adwaith 5 h. Roedd pob un o'r cyfryngwyr naturiol, ac eithrio asid p-coumarig a fanillin, yn gweithredu fel cyfryngwyr effeithlon o ddadliwio melanin gan lacM. Pan ddefnyddiwyd acetosyringone a syringaldehyde, roedd y cynnyrch dad-liwio yn 25 y cant a 22 y cant, yn y drefn honno, ar ôl 5 awr o adwaith. Defnyddiwyd asid p-Coumaric a vanillin fel cyfryngwyr effeithlon ar gyfer pob un, ond ni allent wella'r gyfradd dad-liwio yn LMS yn effeithlon gan ddefnyddio les. Gall hyn gael ei achosi gan y swbstrad is penodol o lacM ar gyfer asid p-coumaric a fanilin. Roedd y cynnyrch dadliwio ar ôl 24 awr o adwaith lacM ag asid p-coumarig a fanillin yn debyg i'r rhai a gafwyd trwy lacT. Mae hyn yn dangos y gall y ffurfiau ocsidiedig o asid p-coumarig a fanillin ddad-liwio melanin yn effeithlon, er bod eu cyfradd ocsideiddio gan lacM yn llawer is na chyfradd lacT. Pan ddefnyddiwyd lacM heb gyfryngwr ar gyfer dad-liwio melanin yn ystod amser adwaith digonol, roedd y cynnyrch dad-liwio yn 5 y cant ar ôl 24 awr o adwaith. Mae'r cyfryngwyr naturiol, ac eithrio asid fanillig, hefyd yn gweithredu fel cyfryngwyr mwy effeithlon na HOBt ar gyfer dad-liwio melanin gan lacM ar ôl 24 awr o adwaith. Pan ddefnyddiwyd acetosyringone, syringaldehyde, ac acetovanillone fel cyfryngwyr ar gyfer lacM, roedd y cynnyrch dad-liwio yn 34 y cant, 28 y cant, a 31 y cant, yn y drefn honno, ar ôl 24 awr o adwaith. Pan ddefnyddiwyd asid fanilig fel cyfryngwr ar gyfer lacT a lacM, dangosodd y cynnyrch dadliwio isaf. Gall hyn gael ei achosi gan sefydlogrwydd isel ffurf radical ocsidiedig asid fanillig. Adroddodd Khammuang a Sarnthima y gellid defnyddio vanillin ac asid vanillic fel cyfryngwyr ar gyfer dad-liwio melanin gan ddefnyddio laccas o Lentinus polycarpous [28]. Fodd bynnag, roeddent yn dangos gweithgaredd dadliwio llawer is ar gyfer melanin nag acetosyringone pan gawsant eu defnyddio fel cyfryngwyr ar gyfer lacT a les.

Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod cyfryngwyr naturiol yn fwy effeithlon ar gyfer dadliwio melanin gan LMS na HOBt. Mae HOBt wedi'i ystyried yn gyfryngwr synthetig effeithlon ar gyfer laccas oherwydd ei botensial rhydocs uchel a rôl catalytig y grŵp N OH o HOBt [5]. Mae effeithlonrwydd cyfryngwyr i ocsideiddio swbstradau targed yn dibynnu'n fawr ar y gallu i ffurfio radicalau sefydlog yn ogystal â'r rhwystr sterig a achosir gan ddirprwyon alcyl swmpus yn hytrach na photensial rhydocs y cyfryngwyr [19,35]. Mae sefydlogrwydd isel y canolradd ocsidiedig o HOBt wedi'i bennu trwy foltammetreg cylchol [6]. Felly, gall y cynnyrch dadliwio isel gan LMS sy'n defnyddio HOBt gael ei achosi gan sefydlogrwydd isel HOBt o dan amodau adwaith laccas. Er bod potensial rhydocs syringaldehyde yn is na HOBt, dangosodd syringaldehyde sefydlogrwydd cymharol uwch na HOBt [6].

Fel y dangosir yn Ffigur 2, mae gan y cyfryngwyr naturiol a ddefnyddir yn y gwaith hwn amrywiol ddirprwyon (ee, hydroxyl, methoxy, carboxyl, ceton, neu aldehyde) mewn gwahanol safleoedd ar y cylch bensen [12,19]. Dangosodd cyfryngwyr â dau grŵp methoxy (acetosyringone a syringaldehyde) gyfraddau dad-liwio uwch na'r rhai ag un grŵp methoxy. Roedd y gyfradd dad-liwio a gafwyd gan asid p-coumarig heb unrhyw grŵp methoxy yn dibynnu ar y math o lacas. Dangosodd yr asid p-coumarig â lacT gyfradd ddad-liwio uwch na'r rhai ag un grŵp methoxy, tra dangosodd asid p-coumarig â lacM y gyfradd ddad-liwio isaf yn yr adwaith 5 h. Mae Fillat et al. hefyd yn dangos canlyniadau tebyg ar gyfer dad-liwio inciau fflecsograffig gan lacasau ffwngaidd gyda chyfryngwyr naturiol [36]. Cafodd y cyfryngwyr naturiol ffenolig (acetosyringone, chwistrell methyl, a syringaldehyde) gyda dau eilydd methoxy yn y cylch eu ocsideiddio gan laccas yn gyflymach nag asid p-coumarig heb unrhyw grŵp methoxy. Mae hyn yn dangos bod grwpiau methocsi yn chwarae rhan bwysicach fel rhoddwyr electronau na bond dwbl y gadwyn ochrol o asid p-coumarig. Pan gymharwyd y cyfryngwyr ag un grŵp methoxy, cynyddodd y cynnyrch dad-liwio yn y drefn ganlynol: acetovanillone> vanillin> alcohol vanillyl> asid vanillic. Dangosodd Acetovanillone, sydd â grŵp ceton, gyfradd dad-liwio a chynnyrch uwch na'r cyfryngwyr â grwpiau aldehyd, hydrocsyl, a charboxyl. Roedd acetosyringone gyda grŵp ceton hefyd yn dangos cyfradd dad-liwio uwch a chynnyrch na syringaldehyde gyda grŵp aldehyde.

Yn yr arbrofion canlynol, dewiswyd acetosyringone, syringaldehyde, ac acetovanillone, a ddangosodd allu decolorization melanin uchel, fel cyfryngwyr ar gyfer LMS i ddad-liwio melanin. Ymchwiliwyd dros amser i effaith y cyfryngwr ar yr adwaith dadliwio gan LMS (Ffigur S1). Arweiniodd yr adwaith dad-liwio gan ddefnyddio lacT ag acetosyringone, syringaldehyde, ac acetovanillone at 21 y cant , 18 y cant , ac 1 y cant o gynnyrch dadliwio ar ôl 1 awr o adwaith, yn y drefn honno. Arweiniodd yr adwaith dad-liwio gan ddefnyddio lacM gydag acetosyringone a syringaldehyde at gynnyrch dad-liwio 19 y cant a 18 y cant ar ôl 1 awr o adwaith, yn y drefn honno. Dangosodd y ddau lacas broffiliau adwaith tebyg pan ddefnyddiwyd yr un cyfryngwr. Fe wnaeth acetosyringone a syringaldehyde wella'r gyfradd dad-liwio yn sylweddol yn ystod yr adwaith cychwynnol. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod acetosyringone a syringaldehyde sy'n cynnwys grwpiau dimethoxy yn fwy effeithlon wrth wella'r gyfradd ddadliwio gychwynnol gan LMS nag asetovanillone sy'n cynnwys un grŵp methoxy. Mae Fillat et al. hefyd fod y grwpiau methoxy yn strwythurau cylch cyfryngwyr yn gweithredu fel cyflymwyr ar gyfer ocsidiad swbstradau [36]. Ar y llaw arall, roedd y cynnyrch dad-liwio ar ôl 24 awr o adwaith gan acetovanillone yn debyg i'r hyn gan syringaldehyde, er bod asetovanillone wedi gwella'r gyfradd adwaith yn gymedrol.

Am ragor o wybodaeth: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501