Mae llawer o astudiaethau wedi cadarnhau bod clefydau alergaidd yn ganlyniad nid yn unig ysgogi imiwnedd cynhenid
Sep 01, 2022
Cysylltwchoscar.xiao@wecistanche.comam fwy o wybodaeth
Crynodeb:Mae celloedd mast yn chwarae rhan bwysig iawn mewn alergedd croen a llid, gan gynnwys dermatitis atopig a soriasis. Yn y gorffennol, canfuwyd bod cyfeirio yn cael effeithiau gwrthlidiol a gwrth-heneiddio ar y croen, ond nid yw ei effaith ar gelloedd mast wedi'i astudio'n fanwl eto. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ddefnyddio celloedd mast (RBL-2 celloedd H3) a modelau llygoden i astudio effeithiau gwrth-alergaidd a llidiol cyfeirio. Yn gyntaf, canfuom fod cyfeiriad yn atal dadgraniad celloedd mast a mynegiant cytocinau. Yn ogystal, gwelsom, pan oedd celloedd mast yn cael eu hysgogi gan A23187/phorbol 12-myristate-13-asetad (PMA), roedd uchder calsiwm mewngellol yn cael ei atal gan gyfeiriad. Mae ffosfforyleiddiad y llwybr MAPK/NF-KB hefyd yn cael ei leihau trwy drin cyfeiriad ymlaen llaw. Mae canlyniadau astudiaethau in vivo yn dangos y gall cyfeirio wella ymddangosiad dermatitis ac ymdreiddiad celloedd mast a achosir gan dinitrochlorobenzene (DNCB). Ar ben hynny, mae ymadroddion proteinau rhwystr yn y croen hefyd yn cael eu hadfer.cistanchYn olaf, canfuwyd y gall cyfeirio leihau'r ymddygiad crafu a achosir gan gyfansawdd 48/80. Gyda'i gilydd, mae ein canlyniadau'n dangos bod cyfeirio yn gynnyrch naturiol gwrth-alergaidd a gwrthlidiol da iawn. Mae ei effaith ar gelloedd mast yn cyfrannu at ei fecanwaith ffarmacolegol.
Geiriau allweddol:cyfeirio; cynnyrch naturiol; cell mast; dermatitis; cosi
1. Rhagymadrodd
Mae llawer o astudiaethau wedi cadarnhau bod clefydau alergaidd yn ganlyniad nid yn unig actifadu imiwnedd cynhenid ond hefyd actifadu ymaddasol. Yn eu plith, mae celloedd mast yn chwarae rhan bwysig iawn mewn amrywiaeth o glefydau alergaidd megis rhinitis alergaidd, asthma, a dermatitis alergaidd. Mae celloedd mast yn mynegi derbynyddion IgE (FceRI) ar eu cellbilenni, ac mae gan dderbynyddion FceRI affinedd uchel ar gyfer gwrthgyrff IgE [1,2]. Pan fydd IgE antigen-benodol yn clymu i FceRI, mae rhyngweithiad yn digwydd ac mae adwaith alergaidd yn digwydd. Gall cydgasglu FceRI actifadu kinases tyrosine derbynnydd, cychwyn adweithiau i lawr yr afon, a hyrwyddo ffosfforyleiddiad amrywiol broteinau allweddol (fel kinase protein a weithredir gan mitogen; MAPKs), gan arwain yn y pen draw at fewnlifiad ïonau calsiwm (Ca2 plus ), sef a digwyddiad allweddol mewn dirywiad cell mast [3].cistanche AwstraliaMae'r celloedd mast wedi'u actifadu yn dadraneiddio ac yn rhyddhau cyfryngwyr cemegol. Gall y cyfryngwyr cemegol hyn a ddefnyddir mewn adweithiau alergaidd achosi llid [4], felly mae trin symptomau alergaidd yn cynnwys atalyddion digroeniad celloedd mast. Felly, mae ataliad dirywiad cell mast-gyfryngol IgE yn aml yn cael ei ddefnyddio i nodi cyfansoddion newydd i atal a thrin afiechydon alergaidd. Mae wedi'i sefydlu y gall gwrthgyrff ac antigenau gwrth-dinitrophenyl (DNP) IgE ysgogi adweithiau gorsensitifrwydd croen goddefol (PCA) fel model in vivo nodweddiadol o orsensitifrwydd uniongyrchol ac fel cyffur ymchwil ar gyfer potensial alergeddau gwrth-antigenig [5,6 ]. Yn ogystal, gall dadgraeniad celloedd mast hefyd gael ei achosi gan symbylyddion di-imiwn, megis cyfansoddion 48/80 ac A23187. Gwyddys ers tro bod ionoffor calsiwm A23187 yn ysgogi secretiad celloedd mast trwy ryddhau cyfryngwyr rhagffurfiedig, fel histamin o'u gronynnau, gan wasanaethu fel enghraifft [4] Mae cyfansawdd 48/80 yn bolymer cymysg o p-methoxy-N-methylphenethylamine wedi'i groes-gysylltu gan fformaldehyd, a ddefnyddir yn eang ar gyfer ysgogiad annibynnol o gelloedd mast [7,8] Felly, mae symiau priodol o gyfansawdd 48/80 ac A23187 wedi'u defnyddio'n gyffredin fel adweithyddion i astudio mecanwaith adweithiau alergaidd. Yn ôl gwerthusiadau ystadegol, mae tua 15-20 y cant o'r boblogaeth yn dioddef o ddermatitis atopig. Boed yn blant neu’n oedolion sy’n dioddef o’r clefyd hwn, heb driniaeth briodol, gall dermatitis atopig achosi trallod seicolegol i gleifion a rhoi baich ar eu teulu a’u costau iechyd cymdeithasol [9]. Yn anffodus, nid oes dull triniaeth addas i wella dermatitis alergaidd. Mae opsiynau triniaeth presennol yn dal i osgoi alergenau sy'n achosi afiechyd, a defnydd parhaus o steroidau yw safon aur y driniaeth. Mae'r alergenau anochel a sgil-effeithiau cyffuriau wedi ysgogi datblygiad brys cyffuriau therapiwtig newydd. Mae cyfansoddion naturiol sydd wedi'u hynysu o berlysiau a phlanhigion meddyginiaethol yn ffynonellau posibl o gyfryngau therapiwtig i atal a thrin afiechydon llidiol a gwella ansawdd bywyd cleifion ag anhwylderau alergaidd.
Gall Cistanche gwrth-heneiddio
Daw'r cyfeiriad o graidd lotws (embryo'r hedyn) y planhigyn Nelumbo nucifera ac mae'n alcaloid bisbenzylisoquinoline mawr. Mae tystiolaeth bod gan gyfeirio ystod eang o briodweddau ffarmacolegol, megis effeithiau gwrth-ganser, gwrth-ocsidydd, gwrthlidiol a niwro-amddiffynnol, mewn llawer o afiechydon [10-15].manteision cistancheMae Khan et al. Canfuwyd bod cyfeiriad yn cynhyrchu effeithiau gwrth-ffotograffiaeth trwy atal y cynnydd UV-gyfryngol mewn lefelau ROS a malondialdehyde (MDA) mewn keratinocytes dynol a ffibroblasts[16,17] Yn ddiweddar, canfuom fod gan gyfeirnod botensial fel meddyginiaeth amgen ar gyfer trin atopig dermatitis neu glefydau llidiol eraill sy'n gysylltiedig â'r croen[18]. Fodd bynnag, mae p'un a yw cyfeiriad yn chwarae effaith gwrth-alergedd croen mewn celloedd mast yn parhau i fod yn ansicr. Yn yr astudiaeth hon, ein nod oedd ymchwilio i effeithiau cyfeirio ar glefydau alergaidd sy'n cael eu cyfryngu gan fastgelloedd, gan ddefnyddio llinellau mast-gelloedd dynol (RBL-2celloedd H3) a chyfansoddyn 48/{{{{-)ac anaffylacsis a achosir gan DNCB model llygod.
La referencia proviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) de la planta Nelumbo nucifera y es un importante alcaloide de bisbencilisoquinolina. Existe evidencia de que la referencia tiene una amplia gama de propiedades farmacológicas, como efectos anticancerígenos, gwrthocsidyddion, antiinflamatorios a neuroprotectores, yn llawer enfermedades [10-15]. Beneficios de la cistanche Khan et al. encontró que la referencia cynhyrchu efectos gwrth-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS y malondialdehído (MDA) mediado por UV yn queratinocitos a ffibroblastos humanos [16,17] Recientemente, descubrimocias alterna que la que la requite que la tratamina que la la referencia que la tratamina que la la referencia que la tratamina altica. dermatitis atópica u otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la piel[18]. Sin embargo, sigue siendo incierto si la referencia tiene un efecto contra la alergia cutánea en los mastocitos. Mae'r estudio, ymchwil newydd i ymchwilio i effeithiau cyfeirio a enfermedades alérgicas mediadas do mastocitos, defnyddio llinell o mastocitos dynol (células RBL-2H3) a model ratones gyda anafilaxia indouc and B80/B80 .
2. Canlyniadau
2.1.Prawf Sytowenwyndra Neferine ar Gelloedd Mast Llygoden Fawr(RBL-2H3)
Gan fod lewcemia basoffilig llygod mawr (RBL)-2H3 celloedd, analog cell mast sy'n rhyddhau histamin, yn gelloedd addas i archwilio effeithiau llid cyfryngol celloedd mast [19], defnyddiwyd y celloedd hyn i ymchwilio i'r gwrth-alergedd. effeithiau cyfeirio. Yn gyntaf, gwnaethom brofi a all y cyfeirnod gynhyrchu sytowenwyndra mewn celloedd mast. Pan fydd y celloedd yn cael eu rhag-drin gan gyfeirio o 1 i 30 μM am 24 h, ni fydd y driniaeth cyfeirio yn effeithio ar hyfywedd celloedd celloedd (Ffigur 1).
2.2.Mae Neferine yn Lleihau Effaith Digranulation RBL-2H3 Wedi'i Ysgogi gan Weithredwyr Gwahanol
Mae celloedd RBL{0}}H3 yn cael eu defnyddio'n gyffredin ar gyfer astudiaethau in vitro o ddirywiad [20-22]Symbylu'r celloedd RBL-2H3 gydag albwmin serwm dynol gwrth-dinitrophenol (DNP) IgE ac DNP-cyfuniad (HSA) sy'n sbarduno digroeniad. Yn ogystal, mae'n hysbys bod celloedd mast yn dirywio mewn ymateb i gyfansoddion synthetig, megis cyfansawdd 48/80 a'r ionoffor calsiwm A23187, ac mae'r cyfansoddion hyn wedi'u defnyddio fel adweithyddion cyfleus ar gyfer astudiaethau uniongyrchol o fecanweithiau ymatebion alergedd in vitro [23, 24]. Dangosodd y canlyniadau fod y cytoplasm o RBL-2H3 na chafodd ei actifadu gan yr ysgogydd yn cynnwys gronynnau cyfrinachol cyfyngedig.colesterol cistancheNi effeithiodd triniaeth cyfeirnod （10μM） ar ei ben ei hun ar weithgaredd RBL-2H3 (Ffigur 2A, B). Fodd bynnag, roedd ychwanegu gwahanol actifyddion, gan gynnwys cyfansawdd 48/80, A23187, a gwrth-DNP/IgE ynghyd â DNP/HSA, yn amlwg yn llenwi'r cytoplasm â gronynnau cyfrinachol. O dan y microsgop electron, gellir gweld bod nifer fawr o ronynnau secretory yn y cytoplasm, ac mae rhai gronynnau secretory hyd yn oed yn asio â'r gellbilen, gan arwain at ddirywiad (Ffigur 2C-E). Ar ôl rhag-driniaeth gyda chyfeiriad 10 uM, gostyngwyd y gronynnau secretory yn y cytoplasm yn sylweddol (Ffigur 2F-H). Mae'r canlyniadau hyn yn dangos y gall cyfeirio atal actifadu a dirywio RBL-2H3 a ysgogir gan yr actifydd yn effeithiol.
2.3.Neferine yn Atal PMA/A23187-Grychiad Calsiwm Mewngellog Anwythol mewn RBL-2H3
Mae ïonau calsiwm yn chwarae rôl negesydd eilaidd yn y broses o actifadu celloedd. A23187 yw'r ffordd fwyaf effeithiol o gynyddu treiddiad ïonau calsiwm trwy gellbilenni ac ysgogi actifadu celloedd mast. Gall asetad myristate Phorbol (PMA) actifadu protein kinase Cand a chynyddu ïonau calsiwm mewngellol i wella effaith A23187. Mae'r cynnydd mewn ïonau calsiwm mewn celloedd mast hefyd wedi'i ystyried yn ffactor pwysig wrth ysgogi actifadu celloedd mast fel ei fod yn effeithio ar ddirywiad celloedd mast ac yn rhyddhau mwy o cytocinau a chemocinau ymfflamychol.sgîl-effeithiau cistanche deserticola,Felly, ceisiodd yr astudiaeth hon archwilio a all y cyfeiriad atal y crynodiad ïon calsiwm yn RBL-2H3 pan fydd yn atal llid. Rhannwyd y grŵp arbrofol gyda neu heb ragdriniaeth gyfeiriol am 20 munud, ac ychwanegwyd 1 mM CaClz a PMA/A23187 i ysgogi ac actifadu RBL-2H3. Dangosodd y canlyniadau arbrofol nad oedd triniaeth RBL-2H3 gyda chrynodiadau cyfeirio gwahanol yn unig yn effeithio ar y cynnydd mewn crynodiad ïon calsiwm mewngellol. Yn y grŵp mewnlifiad Ca2t a achosir gan PMA/A, cynyddodd y crynodiad ïon calsiwm mewngellol yn sylweddol. RBL-2Cafodd celloedd H3 eu trin ymlaen llaw am 20 munud gyda chyfeiriad （3 μM a 10 μM）, a gostyngwyd y crynodiad ïon calsiwm yn sylweddol (Ffigur 3).
2.4.Neferine Wedi lleihau'r Mynegiant mRNA o Sytocinau Pro-Lidiol yn PMA/A23187 Wedi'i Ysgogi gan RBL-2H3
Bydd ymateb imiwn y croen yn cynyddu nifer y celloedd mast yn y corff, ac yna bydd y celloedd mast yn cynhyrchu cytocinau pro-llidiol ac yn cyflymu cynnydd y clefyd. Mae cytocinau pro-llidiol, yn enwedig TNF-a, IL-6, IL-1 , ac IL-8, nid yn unig yn achosi llid ond hefyd yn achosi ymdreiddiad leukocyte, ffurfio granuloma, a ffibrosis meinwe. Mae PMA/A23187 yn gweithredu ar gelloedd mast ac yn eu cymell i gynhyrchu IL-16, IL-6, TSLP, a TNF- , gan achosi llid sy'n gysylltiedig ag alergedd. Felly, gwnaethom rag-drin RBL-2H3 gyda chyfeiriad am 20 munud a'i ysgogi gyda PMA/A23187 am 6 h i ganfod a all y cyfeirnod is-reoleiddio mynegiant mRNA IL-1 , IL{{ 19}}, TSLP, a TNF-a. Dangosodd y canlyniadau, yn y grŵp a gafodd ei drin â chyfeiriad yn unig, nad effeithiwyd ar fynegiant mRNA cytocin, a chynyddodd mynegiant mRNA yn y grŵp a ysgogodd llid gan PMA/A23187 yn sylweddol. Yn y grŵp a gafodd ei drin â chyfeiriad, sylwyd bod lefelau mynegiant mRNA IL-1 , IL-6, TSLP, a TNF-a wedi'u hatal yn sylweddol (Ffigur 4).
2.5.Neferine yn Atal PMA/A23187-Ffosfforyleiddiad Anwythol o Lwybr MAPK yn RBL-2H3
Mae astudiaethau blaenorol wedi nodi bod angen i gelloedd mast ryddhau ïonau calsiwm mewngellol i actifadu MAPK.Yn ogystal, mae llwybr signalau MAPK yn rheoleiddio mynegiant monocytes, lymffocytau T, lymffocytau B, cytocinau, a chemocinau, ac yn ysgogi hunanimiwnedd. Mae'r mecanwaith hwn yn debyg i lwybr actifadu PMA/A23187. Yn yr astudiaeth hon, gwnaethom archwilio a all y cyfeiriad gymryd rhan yn y gwaith o reoleiddio llwybrau MAPK. Fe wnaethom drin gwahanol grynodiadau cyfeirio (1,3, a 10 uM) i RBL-2H3 am 20 munud ac yna ysgogi gyda PMA/A23187 am 30 munud i achosi llid. Dangosodd y canlyniadau, pan gafodd RBL-2H3 ei drin â chrynodiadau cyfeirio gwahanol yn unig, nad oedd effaith ar actifadu proteinau p38, JNK, ac ERK. Yn y grŵp a gafodd ei drin â PMA/A23187 yn unig, canfuom fod proteinau p38, JNK, ac ERK wedi'u actifadu a bod ganddynt ffosfforyleiddiad sylweddol. Yn y grŵp a ragdriniwyd ymlaen llaw gyda chyfeiriad, sylwyd, ar gyfer crynodiadau cyfeirio uwch, bod ffosfforyleiddiad proteinau p38, JNK, ac ERK wedi'i leihau'n sylweddol (Ffigur 5A-C).
2.6.Neferine yn Atal PMA/A23187-Ffosfforyleiddiad Anwythol o Lwybr NF-B mewn RBL-2H3
Mae mynegiant cytocinau pro-llidiol yn dibynnu ar actifadu'r ffactor trawsgrifio NF-kB mewn celloedd mast. Pan gafodd y protein IKB ei ffosfforyleiddio a'i ddiraddio, cafodd NF-kB ei ryddhau a'i fudo i'r cnewyllyn, gan rwymo â'i elfennau cyfatebol sy'n ymateb i DNA a hyrwyddo trawsgrifio cyfryngwyr proinflammatory. Cynhyrchwyd llawer o cytocinau a chemocinau, sy'n rheoleiddio ymateb imiwn, gwahaniaethu a llid. Felly, gwnaethom archwilio a yw rhag-driniaeth gyda chyfeiriad yn effeithio ar ffosfforyleiddiad protein a achosir gan PMA/A23187. Fe wnaethom drin gwahanol grynodiadau cyfeirio (1,3, a 10 μM) i RBL-2H3. Ar ôl 20 munud, ysgogodd PMA/A23187 RBL-2H3 am 1 awr neu 2 awr i achosi llid. Dangosodd y canlyniadau nad oedd triniaeth RBL-2H3 gyda chrynodiadau cyfeirio gwahanol yn unig yn effeithio ar ffosfforyleiddiad IKBa a NF-KB. Pan ddefnyddiwyd PMA / A23187 ar gyfer symbyliad, gwelwyd cynnydd sylweddol yn ffosfforyleiddiad IkBo a NF-KB. Yn y grŵp a ragdriniwyd ymlaen llaw gyda chyfeiriad, canfuwyd bod ffosfforyleiddiad IkBa (Ffigur 6A) a NF-KB (Ffigur 6B) wedi'i leihau'n sylweddol.
2.7.Effaith Neferine ar 2,4-Dermatitis Atopig a Achosir gan Ddiitroclorobenzene(DNCB)
Yn fodel anifeiliaid ar gyfer ymchwil i glefydau, mae DNCB yn llidiwr cynrychioliadol sy'n achosi dermatitis atopig[25]. Mae ein harbrawf yn defnyddio 1 y cant dinitrochlorobenzene (DNCB) hydoddi mewn 75 y cant o alcohol i gymell cam cyntaf yr ymateb sensiteiddio. Rhoddwyd cyfeirnod (3mg/kg a 10 mg/kg) a dexamethasone (Dexa,{{10}.2 mg/kg) a doddwyd yn DMSO yn fewnberitonig ar y pumed diwrnod am ddeg diwrnod . Ar yr 8fed, 1af, a'r 14eg diwrnod, cymhwyswyd 0.5 y cant DNCB fel ail gam ysgogi llid. Rhannwyd llygod yn bedwar grŵp - grŵp rheoli, grŵp DNCB, grŵp wedi'i drin â chyfeirnod, a grŵp wedi'i drin â dexamethasone - ac yna, ar ôl cymharu ymhlith y grwpiau, nodwyd y gwahaniaethau. Gwelsom fod DNCB wedi achosi adwaith llid y croen atopig ar groen llygod. Ar ôl cymhwyso DNCB, canfuwyd bod croen y llygod yn cynyddu cochni a chrafu. Mae'r rhain i gyd oherwydd ymlediad ceratinocyte annormal, ymdreiddiad, a chyfuno celloedd imiwnedd. Roedd y grŵp a gafodd ei drin â chyfeiriad 3 mg/kg a dexamethasone 0.2mg/kg am bedwar diwrnod wedi lleddfu cochni. Fe wnaethom barhau i arsylwi cyflwr croen dorsal y llygod hyd at ddiwrnod 15. O'i gymharu â'r grŵp rheoli, roedd gan y grŵp DNCB gyflyrau croen coch a chwyddedig difrifol, ac roedd dander a chlwyfau a oedd yn ymddangos yn cael eu hachosi gan gosi a phoen . Gallwn ddod o hyd i duedd o ostyngiad ar ôl triniaethau cyfeirio a dexamethasone (Ffigur 7A). Defnyddiwyd staen glas Toluidine i arsylwi ar nifer y mast-gelloedd a agregwyd. Roedd celloedd y mast yn ymddangos yn borffor pan arsylwyd arnynt o dan ficrosgop. Gellir dangos yn feintiol bod llawer o gelloedd mast wedi ymdreiddio ac wedi cronni yn y dermis yn y grŵp arbrofol DNCB, wedi cynyddu'n sylweddol o gymharu â'r grŵp rheoli. Yn y grŵp a gafodd ei drin â chyfeirnod a dexamethasone, gostyngwyd yr ymdreiddiad, agregiad, a nifer y celloedd mast (Ffigur 7B, C).
2.8.Mae Neferine yn Gwella Mynegiant mRNA o Foleciwlau sy'n Gysylltiedig â Rhwystr ar ôl Trin DNCB
Gall y llid sy'n gysylltiedig â'r croen a achosir gan AD achosi swyddogaeth rhwystr croen annormal. Os yw rhwystr y croen yn ddiffygiol, mae'n haws i antigenau neu lidwyr dreiddio i epidermis y croen a mynd i mewn i'r corff i ysgogi adweithiau sy'n gysylltiedig ag imiwnedd. Ar yr un pryd, bydd cynhyrchu proteinau gwahaniaethu, gan gynnwys filaggrin, loricrin, ac involucrin, yn cael ei atal. Felly, mae adfer y rhwystr croen sydd wedi'i ddifrodi yn bwysig iawn ar gyfer atal a thrin AD [26]. Yn ein hastudiaeth, defnyddiwyd cyfeiriadau at ymyrryd yn y model anifeiliaid o ddermatitis atopig a achosir gan DNCB. Ar ôl aberthu llygod, cafodd y meinwe croen dorsal ei seilio ar gyfer dadansoddiad RI-qPCR i werthuso a all y cyfeiriad wella'r gostyngiad mynegiant mRNA mewn ffilagrin, loricrin, ac involucrin ar ôl trin DNCB. Dangosodd y canlyniadau fod grŵp arbrofol DNCB wedi lleihau mynegiant mRNA o filaggrin, loricrin, ac involucrin yn sylweddol o'i gymharu â'r grŵp rheoli. Cynyddwyd mynegiant mRNA o filaggrin, loricrin, ac involucrin yn sylweddol yn y grŵp a gafodd ei drin â chyfeirnod a dexamethasone o'i gymharu â'r grŵp DNCB (Ffigur 8).
Fe wnaethom brofi ymhellach fod cyfeiriad yn cael effaith crafu gwrth-alergaidd. Fe ddefnyddion ni asiant dirywio mast cell, cyfansawdd 48/80, i ysgogi ymddygiad crafu mewn llygod BALB/c. Fel y dangosir yn Ffigur 9, canfuom fod y driniaeth gyfeirio yn atal yr ymddygiad crafu a achosir gan gyfansawdd 48/80 （50 ug/safle）. Roedd rhoi dosau cyfeirio is ac uwch dro ar ôl tro (3 a 10 mg/kg) am 5 diwrnod yn olynol yn lleihau'n sylweddol nifer y crafiadau a achosir gan gyfansawdd 48/80.
