Gweithgareddau Nodweddu Metabolit, Gwrthocsidiol, Gwrth-ymledol Ac Ataliol o Ensym Lophira Lanceolata Tiegh. Ex Ex Key Extracts

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Kouadio Ibrahime Sinan a,1, Lara Safti’c Martinovi’cb,1, Zeljka ˇ Perˇsuri´cb, Sandra Kraljevi´c Paveli´cb, Petra Grbˇci´cb, Dario Matulja b, Ouattara Katinan Etienne c, Mohamad Fawzi Mahomoodally d, e, Devina Lobine e, Tapan Behl f, Gokhan Zengin a, *

ABSENOLDEB

Lophira lanceolata Tiegh. ex Key, planhigyn trofannol brodorol i'r gorllewin a chanol Affrica, yn blanhigyn amlswyddogaethol a ddefnyddir fel pren a hefyd yn cael ei ecsbloetio mewn meddygaeth draddodiadol yn Affrica. Mae'r astudiaeth bresennol yn cyflwyno priodweddau ffarmacolegolLophira lanceolatadarnau rhisgl dail a choesynnau a baratowyd o wahanol weithdrefnau echdynnu (trwythiad, echdynnu gyda chymorth homogenizer, maceration, soxhlet). Y cyfansoddiad ffytocemegol manwl, in vitrogwrthocsidiola phrofion gwrth- amlhau, yn gystal a'r cywairensym(cholinesterases, tyrosinase, -amylase a -glucosidase) potensial ataliol y darnau eu gwerthuso. Cadarnhaodd proffilio cemegol bresenoldeb lansolatinau a lophirones ym mhob rhan o blanhigion a ddadansoddwyd. Lefelau uwch o gyfanswm ffenolig (156.42 mg cyfwerth ag asid galig (GAE)/g ar gyfer dŵr maceration), asidau ffenolig (165.84 mg cyfwerth ag asid caffeic (CE)/g ar gyfer dŵr maceration) a fflavanols (cyfwerth â catechin 101.51 mg (CAE) /g ar gyfer soxhlet-methanol (MeOH)) yn yr echdynion rhisgl coesyn.Gwrthocsidyddprofion yn dangos radical rhad ac am ddim rhyfeddol gweithgareddau chwilota a lleihau pŵer ar gyfer pob dyfyniad, ymhlith y rhisgl coesyn dangosodd y potensial uchaf. Roedd echdynion rhisgl coesyn (gwerthoedd IC50: 57.55-93.10 ug/ml ar gyfer adenocarcinoma colorefrol (HT29) a 78.18-89.58 ug/ml ar gyfer llinell gell canser y fron metastatig (MCF7))) hefyd yn dangos gwell effaith gwrth-ymlediad na dail (424.14-790. ar gyfer HT29 a 374.46-943.09 ug/ml ar gyfer MCF7) ar gelloedd carcinoma tra'u bod yn achosi amlhau mewn llinellau celloedd dynol arferol (ffibrofblastau croen arferol (HFF)). Yn y profion atal ensymau, cadarnhawyd bod echdynion methanol y ddwy ran o blanhigyn yn effeithiol yn erbyn AChE, BChE (dim ond darnau rhisgl coesyn) a -glucosidaseensymau. O ran effeithiau gwrth-tyrosinase, dangosodd y darnau dail methanol (122.21-131.17 mg asid kojic cyfatebol (KAE) / g) a'r holl echdynion rhisgl coesyn (94.58-153.21 mg KAE/g) effeithiau ataliol. Mae'r canfyddiadau a gesglir yma yn tueddu i ddilysu'r defnydd traddodiadol oL. lanceolataac eiriol dros ddatblygu ffyto-feddygaeth yn seiliedig ar ei ddetholiadau.

cistanche herbadyfyniadyn gwrthocsidiol.

1. Rhagymadrodd

Meddygaeth draddodiadol Affricanaidd yw un o'r systemau gofal iechyd hynaf a mwyaf amrywiol (Mothibe a Sibanda, 2019). Ers canrifoedd, mae poblogaeth Affrica wedi manteisio ar fioamrywiaeth planhigion unigryw a chyfoethog ar gyfer eu hanghenion gofal iechyd. Mae bioamrywiaeth planhigion Affricanaidd, ynghyd â gwybodaeth ethnobotanegol Affrica sydd wedi'i gwreiddio'n ddwfn, wedi cynhyrchu sawl cyfansoddyn newydd sy'n weithredol yn fiolegol sydd bellach yn gydrannau o'r cyffuriau modern; mae enghreifftiau nodedig yn cynnwys vinblastine a vincristine asiantau gwrth-tiwmor sy'n deillio o Catharanthus roseus (Madagascar periwinkle), yohimbine o Pausinystalia Yohimbe a ffysostigmine o ffa calabar, hadau Physostigma venosum (Khalid, 2012). Felly, gyda'r diddordeb mawr mewn meddyginiaethau sy'n deillio o blanhigion, mae Affrica yn parhau i fod yn adnodd addawol ar gyfer adfer endidau cemegol newydd y gellir eu hecsbloetio ar gyfer datblygu cyffuriau newydd ymhellach (Nafiu et al., 2017).

Lophira lanceolata Tiegh. ex Key(teulu Ochnaceae), a elwir yn gyffredin fel ironwood neu dderw coch, yn goeden amlbwrpas, a ddosberthir yn eang yn safanaau coediog Affrica trofannol. Dywedir am ei nodweddion meddyginiaethol mewn meddygaeth draddodiadol Gorllewin Affrica (Dicko et al., 2017; Etuk a Muhammad, 2010; Mapongmetsem, 2007). Coeden fach i ganolig yw'r planhigyn a all dyfu hyd at 12 m o uchder, gyda dail sydd bob yn ail, hirgul, a 11-45 cm × 2-9 cm o ran maint, ac wedi'u clystyru ar ddiwedd canghennau byr neu droellog. . Mae rhisgl coesyn y planhigyn yn llwyd corci, yn arw, ac yn torri'n naddion tra bod y rhisgl mewnol yn felyn i goch brown. Mae'r planhigyn yn blodeuo o fis Hydref i fis Ionawr ac mae'r ffrwyth yn gonigol ac yn eithaf coediog, 0.1 cm mewn diamedr gydag un hedyn hirfaith. Mae ffrwytho yn digwydd rhwng Chwefror ac Ebrill (Etuk a Muhammad, 2010; L’eandre et al., 2013; Mapongmetsem, 2007).

Mae hadauL. lanceolatayn cael eu bwyta'n bennaf gan bobl Gorllewin Affrica, lle caiff ei ddefnyddio'n bennaf fel olew bwytadwy o'r enw 'olew bwydlen'. Defnyddir olew Meni at ddibenion meddyginiaethol neu mewn colur; fe'i defnyddir yn draddodiadol i liniaru dermatosis, y ddannoedd a blinder cyhyrol ac fe'i defnyddir wrth wneud sebon. Yn ogystal, gellir cynnwys yr olew hwn mewn uwd neu ei ddefnyddio fel tonic i fwydo plant (Mapongmetsem, 2007). Yn Nigeria, defnyddir brigau ifanc trwyth i drin twymyn, problemau anadlu a dysentri (Ali et al., 2011). Gellir cymysgu'r powdr gwraidd â blawd a'i fwyta i wella rhwymedd, tra gellir defnyddio ei gymysgedd i wella clwyfau cronig (Onyeto, 2014). Mae defnyddiau ethnofeddygol eraill o blanhigyn L. lanceolata yn cynnwys curadu poen yn yr abdomen, dolur rhydd, cryd cymalau, clefydau cardiofasgwlaidd, a chlefydau ysgyfeiniol (Ali et al., 2011; L’eandre et al., 2013; Mapongmetsem, 2007).

Mae priodoleddau meddyginiaethol amrywiolL. lanceolatawedi denu sylw llawer o ymchwilwyr ac felly, mae'r rhywogaeth hon wedi bod yn ffocws i nifer o astudiaethau ffytocemegol a ffarmacolegol. Datgelodd ymchwiliadau ffytocemegol bresenoldeb digonedd o flavonoidau, alcaloidau, glycosidau, tannin a terpenau (Audu et al., 2007; Garba a Yaro, 2015; Igboeli et al., 2015). Mae ymchwilwyr wedi dangos bod gan L. lanceolata gwrth-falaria (Lopatriello et al., 2019), gwrth-bacteriol (Awachie ac Ugwu, 1997), gwrth-ddolur rhydd, gwrth-plasmodaidd (Igboeli et al., 2015), gwrth-anthelmintig (Ndjonka et al., 2014; Samje et al., 2014),gwrthocsidiol(Onyeto, 2014; Oussou et al., 2016), effeithiau gwrthhyperglycemic (Camille et al., 2017), gwrth-gonfylsiwn (Garba a Yaro, 2015) a gwrth-dwbercwlosis (Nkot et al., 2018). Yn ogystal, mae sawl astudiaeth wedi'u cynnal er mwyn asesu diogelwch defnydd L. lanceolata (Igboeli et al., 2015; Nkot et al., 2018; Onyeto, 2014).

Er bod cryn ymdrech wedi ei wneud i ymchwilio iL. lanceolatacyfansoddion gweithredol a'u gweithgareddau biolegol, hyd y gwyddom orau, nid oes yr un ohonynt wedi gwneud sgrinio ffytocemegol manwl ac wedi ceisio gwerthuso'r effeithiau ataliol yn erbyn allweddensymausy'n ymwneud â pathogenesis clefydau cronig. I'r cyfeiriad hwn, cynlluniwyd yr astudiaeth bresennol i ymchwilio i briodoleddau ffarmacolegol a chynnwys cemegol echdynion rhisgl dail a choesyn L. lanceolata a gafwyd gan ddefnyddio gwahanol ddulliau echdynnu. Roedd ymchwiliadau biolegol yn cynnwys assay sytowenwyndra MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,{5}} deuffenyl tetrazolium bromid),gwrthocsidiolac asesiadau ataliol ensymau (cholinesterases, tyrosinase, -amylase a -glucosidase). Perfformiwyd profion amser hedfan pedwarplyg pigiad uniongyrchol (Q-TOF) a sgrinio ffytocemegol er mwyn darparu mewnwelediad i broffiliau ffytocemegol y gwahanol ddarnau o L. lanceolata.

2. Deunydd a dulliau

2.1. Deunydd planhigion a pharatoi echdynion

L. lanceolatacasglwyd y planhigyn hwn yn Cote ˆ d’Ivoire (rhanbarth Gbˆekˆe, pentref Prikro) a chadarnhawyd y planhigyn hwn gan un cyd-awdur (Dr. Ouattara Katinan Etienne). Adneuwyd y sbesimen taleb yn yr Adran Bioleg, y Gyfadran Wyddoniaeth, Prifysgol Selcuk (KIS-19− 1110). Roedd rhisgl coesyn planhigion dethol a dail yn cael eu sychu ar dymheredd ystafell a'u powdro trwy ddefnyddio melin labordy. Ar gyfer paratoi darnau, perfformiwyd trwyth, Soxhlet (SOX), maceration (MAC), ac echdynnu gyda chymorth homogenizer (HAE). Defnyddiwyd methanol a dŵr fel toddyddion yn y dulliau echdynnu. Rhoddwyd y manylion ar gyfer echdynnu mewn deunydd atodol. Tynnwyd methanol trwy ddefnyddio anweddydd cylchdro, tra bod trwyth yn cael ei lyoffileiddio. Diogelwyd yr holl echdynion sych mewn oergell (ynghyd â 4 ◦C) nes ei ddefnyddio.

2.2. Proffilio ffytocemegol

2.2.1. Sgrinio ffytocemegol

Perfformiwyd y sgrinio ansoddol ffytocemegol er mwyn pennu presenoldeb metabolion bioactif eilaidd trwy brofion penodol: cyfansoddion ffenolig (prawf clorid fferrig), terpenoidau (prawf Salkowski), alcaloidau (prawf Mayer), glycosidau (prawf Keller-Killiani), steroidau ( Prawf Libermann-Burchard) a saponins (prawf ewyn) yn ôl Edeoga et al. gyda mân addasiadau (Edeoga et al., 2005). Rhoddwyd yr holl fanylion mewn defnyddiau atodol. Mesurwyd cyfanswm cynnwys ffenolig, asid ffenolig, flavanol a flavonoid y darnau a disgrifiwyd dulliau manwl yn ein papur blaenorol (Vladimir-Kneˇzevi’c et al., 2011; Zengin ac Aktumsek, 2014). Pennwyd cyfanswm y cynnwys ffenolig trwy ddefnyddio'r dull lliwimetrig Folin-Ciocalteu a chofnodwyd amsugniadau ar 765 nm. Mesurwyd cyfanswm y cynnwys flavonoid gyda dulliau AlCl3 a darllenwyd amsugnedd ar 415 nm. Canfuwyd cyfanswm cynnwys flavanol trwy ddefnyddio DMACA (p-dimethylaminocinnamaldehyde) a darllenwyd amsugnedd ar 640 nm. Pennwyd cyfanswm cynnwys asid ffenolig gan yr adweithydd Arnow a chofnodwyd yr amsugnedd ar 490 nm. Defnyddiwyd safonau, sef asid galig (GAE) ar gyfer ffenolig, asid caffeic (CE) ar gyfer asid ffenolig, catechin (CAE) ar gyfer flavanol a rutin (RE) ar gyfer flavonoidau, i egluro'r canlyniadau. Prynwyd y safonau oddi wrth Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, UDA). Rhoddir y manylion arbrofol mewn deunyddiau atodol.

2.2.2. Dadansoddiad amser hedfan pedwarpôl pigiad uniongyrchol (Q-TOF).

Echdynion planhigion eu toddi mewn methanol i grynodiad o 7.5 mg/ml, sonigated am 10 munud ar dymheredd ystafell (Sonorex digitec, Bandelin, yr Almaen) ac wedi hynny gwanhau 10 gwaith. Ar gyfer proffilio ffytocemegol, defnyddiwyd UPLC cyfres Agilent 1290 wedi'i gyfarparu â degasser, pwmp deuaidd, autosampler a ffwrn golofn ynghyd â sbectromedr màs amser hedfan pedwarpol iFunnel Agilent 6550 iFunnel gyda ffynhonnell AJS ESI deuol (Agilent Technologies). Roedd y dull chwistrellu uniongyrchol Quadrupole Time-Of-Flight (Q-TOF) eisoes wedi’i gyhoeddi yn ein gwaith blaenorol (Safti’c et al., 2019). Gwnaed adnabod y cyfansoddion ffenolig gan ddefnyddio Mass Hunter PCDL Manager (Fersiwn B.04.00), MassBank (MassBank, 2019), mzCloud (mzCloud, 2019) a MassBank of North America (MonA) (MassBank of North America, 2020).

2.3. Profion ar gyfer gweithgaredd biolegol

I ganfodgwrthocsidiolpriodweddau, fe wnaethom ddefnyddio nifer o brofion cemegol gan gynnwys gwahanol fecanweithiau sef, sborionu radical, lleihau pŵer, a chelating metel. Defnyddiwyd Trolox (TE) ac asid ethylenediaminetetraacetig (EDTA) fel cyfansoddion gwrthocsidiol safonol Mynegwyd canlyniadau a gafwyd fel rhai cyfwerth â'r cyfansoddion hyn (Bursal et al., 2019; Eruygur et al., 2019; Grochowski et al., 2017; Topal et al. ., 2016). I ganfod effeithiau ataliol arensymau, defnyddiwyd profion atal ensymau lliwimetrig ac roedd y profion hyn yn cynnwys tyrosinase, -glucosidase, -amylase, a cholinesterases. Defnyddiwyd rhai atalyddion safonol (galatamine (GALAE), asid kojic (KAE) ac acarbose (ACAE)) fel rheolaethau cadarnhaol. Rhoddir y manylion arbrofol mewn deunyddiau atodol.

cistancheperlysiau ymerodraeth coll argwrth-ocsidiad

2.4. Meithrin celloedd a gwerthuso effeithiau gwrth-ymledol a sytotocsig

Llinellau celloedd tiwmor dynol: diwylliwyd adenocarcinoma colorefrol (HT29) a llinell gell canser y fron metastatig (MCF7) yn ogystal â ffibroblastau croen arferol (HFF) a gafwyd gan ATCC (Casgliad Diwylliant Math America), yng nghyfrwng Eryr addasedig Dulbecco (DMEM) wedi'i ategu â 10 y cant o serwm buchol ffetws (FBS), 2 mM L-glutamin, 100 U/ mL penisilin a 100 ug/mL streptomycin (Capricorn Scientific, yr Almaen) gyda 5 y cant o CO2 ar 37 ◦C mewn awyrgylch llaith. Paratowyd samplau mewn cyfrwng twf celloedd mewn crynodiad stoc 10 mg / mL a'u toddi ymhellach yn y bath ultrasonic am 30 munud cyn yr arbrawf. Ar gyfer yr arbrawf, cafodd llinellau celloedd carsinoma a llinellau celloedd dynol arferol eu hadu mewn 96-blatiau microteitr ffynnon ar ddwysedd o 5000 o gelloedd fesul ffynnon. Yna ychwanegwyd cyfansoddion prawf mewn pum gwanediad, 10-plyg (0.0001–1 mg/ml) a baratowyd yn ffres ar ddiwrnod y prawf mewn cyfrwng twf a'u deor am 72 h arall. Yna, defnyddiwyd assay 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyl tetrazolium bromid (MTT) (Sigma-Aldrich, USA) i gyfrifo cyfradd twf celloedd. Cyfrifwyd canran y twf trwy drawsnewid y gwerthoedd amsugno a bennwyd yn arbrofol gan ddefnyddio'r fformiwlâu a gynigiwyd gan y Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol (NIH) a chyfrifwyd gwerthoedd IC50. Perfformiwyd mesuriadau arbrofol mewn tetraplicadau mewn dau arbrawf biolegol unigol.

2.5. Dadansoddiad ystadegol

Mynegwyd canlyniadau'r holl ddadansoddiadau fel y gwyriadau cymedrig ± safonol. Yn gyntaf, gwnaed y dadansoddiad ystadegol i gyfrifo'r gwahaniaeth rhwng samplau gan ddefnyddio ANOVA unffordd ac yna prawf post hoc Tukey. Yna, cyflwynwyd data i ddadansoddiad archwiliadol o brif gydrannau aml-newidyn (PCA) i nodi'r ffactorau gwahaniaethol. Gwnaethpwyd map delwedd clystyrog i nodweddu'r clystyrau a gafwyd gan PCA. Cyflawnwyd yr holl weithdrefnau dan feddalwedd R v. 3.6.2.

ble alla i brynucistanchecyfarth igwynnucroen

3. Canlyniadau a thrafodaeth

3.1. Cyfansoddiad ffytocemegol

Mae nifer o gyfansoddion sy'n weithredol yn fiolegol wedi'u dogfennu a'u hynysu oddi wrth blanhigion oherwydd eu priodweddau ffarmacolegol penodol a chryf (Bursal a Gülçin, 2011; Bursal et al., 2013; Gülçin et al., 2011; Kose ¨ et al., 2015). Yn benodol, canfuwyd bod gan gyfansoddion ffenolig nifer o briodweddau meddyginiaethol megis gwrthficrobaidd,gwrthocsidyddion, gwrth-llid, gwrth-atherosglerosis, gwrth-heneiddio, cardioprotective, hepatoprotective a gwrth-ganser (Abbas et al., 2017; Han et al., 2007; Quideau et al., 2011). Yn yr astudiaeth hon, echdynnwyd rhisgl dail a choesyn L. lanceolata gan ddefnyddio gwahanol ddulliau echdynnu; trwyth, maceration (MAC), Soxhlet (SOX) ac echdynnu â chymorth homogenizer (HAE) gan ddefnyddio dŵr a methanol fel toddyddion. I ddechrau, sgrinio ffytocemegol rhagarweiniol oL. lanceolataperfformiwyd darnau, a datgelodd y canlyniadau bresenoldeb cyfansoddion ffenolig, steroidau a saponinau ym mhob sampl a brofwyd (Tabl 1). Roedd y darnau rhisgl coesyn hefyd yn cynnwys terpenoidau a glycosidau na chawsant eu canfod ym mhob darn dail. Fodd bynnag, dim ond darnau dail methanol oedd yn gadarnhaol ar gyfer presenoldeb alcaloidau.

Gwnaethpwyd mewnwelediad dyfnach i'r gydberthynas bosibl rhwng gweithgareddau ffarmacolegol a chyfansoddion biolegol sy'n bresennol yn y darnau trwy asesu cyfansoddiad ffytocemegolL. lanceolatadarnau rhisgl dail a choesyn ar gyfer y cynnwys ffenolig cyfan (TPC), cyfanswm cynnwys flavonoid (TFC), cyfanswm asid ffenolig (TPAC), a chyfanswm cynnwys flavonol (TFlvC) a chyflwynir y canlyniadau yn Nhabl 2. Ar gyfer y darnau dail, mae'r Canfuwyd bod y dyfyniad HAE-MeOH (92.13 ± 1.52 mg GAE/g), ac yna'r dyfyniad SOX (81.07 ± 1.64 mg GAE/g) â'r TPC uchaf, tra bod y dyfyniad a gafwyd gan ddefnyddio'r Soxhlet dull (116.58 ± 2.78 mg RE/g), wedi'i ddilyn gan yr HAE-MeOH (113.72 ± 3.00 mg RE/g) a ddangosodd y TFC uchaf. Roedd y TPaC yn amrywio o 13.42 ± 0.72–48.61 ± 3.58 mg CE/g ac roedd y TFlvC yn amrywio o 0.77 ± 0.08–17.77 ± 0.40 mg CAE/g, gyda'r cynnwys uchaf a arsylwyd ar gyfer dyfyniad HAE-MeOH.

The stem bark extracts showed notable TPC, with MAC-water extract, followed by SOX extract displaying the highest content (Table 2). The TFC varied from 1.65 ± 0.40 (MAC-Water) and 33.73 ± 1.35 mg RE/g (MAC-MeOH). A significant amount of TPaC was observed in all the stem bark extracts in the following order: MAC-Water > infusion > SOX > HAE-MeOH > MAC-MeOH >HAE-Dŵr. Ar gyfer y TFlvC, mae gan y SOX-MeOH (1{01.51 ± 2.56 mg CAE/g), HAE-MeOH (92.12 ± 1.03 mg CAE/ g) a MAC-MeOH (88.33 ± 0.69 mg CAE/g) dangosir TFlvC nodedig o'i gymharu â darnau rhisgl bonyn eraill a astudiwyd. Yn gyffredinol, canfuwyd bod y darnau rhisgl coesyn yn meddu ar lefel uwch o gyfansoddion ffenolig.

Yn amlwg, roedd canlyniadau a gafwyd yn dangos bod symiau cyfanswm y cyfansoddion bioactif yn dibynnu ar y dulliau echdynnu a'r toddyddion a ddefnyddiwyd. Yn gyffredinol, gellid ystyried y dull echdynnu gyda chymorth homogenizer fel y dechneg orau ar gyfer paratoi darnau ohonoL. lanceolata. Yn ôl ein canfyddiadau, adroddodd sawl awdur mai'r dechneg â chymorth homogenizer oedd y dechneg fwyaf effeithiol gydag amseroedd echdynnu byr (Dall'Acqua et al., 2020; Rocchetti et al., 2019; Sinan et al., 2020; Zheleva-Dimitrova et al., 2020). Yn ogystal, roedd methanol yn fwy gweithredol na dŵr yn y technegau echdynnu a ddefnyddiwyd. Ategwyd y ffaith hon hefyd gan sawl ymchwilydd a nododd fethanol fel y toddydd echdynnu gorau (Barbouchi et al., 2020; Sarikurkcu et al., 2020). Cyn belled ag y gallai ein harolwg llenyddiaeth ganfod, ychydig o astudiaethau a welsom ar gyfanswm cyfansoddion bioactif echdynion L. lanceolata. Ymhlith yr astudiaethau, mae cyfanswm lefel ffenolig dyfyniad ethanol o ddail oL. lanceolataCanfuwyd bod 414.07 mg GAE/g dyfyniad gan Kalmob´e et al. (2017). Roedd y lefel ffenolig yn uwch na'n canfyddiadau. Gellir esbonio'r gwahaniaeth hwn gan wahaniaethau amgylcheddol a hinsoddol. Yn ogystal, yn ddiweddar, mae dulliau sbectroffotometrig ar gyfer cyfanswm cyfansoddion bioactif wedi cael sawl amheuaeth. Er enghraifft, gallai’r adweithydd Folin-Ciocalteu adweithio â pheptidau neu gemegau eraill yn ogystal â ffenolig (Sanchez-Rangel’et al., 2013). Felly, ni allai'r assay adlewyrchu lefelau cywir o ffenolig yn y darnau a brofwyd. Felly, dylai'r astudiaethau ffytocemegol gael eu cynnwys o leiaf un dull cromatograffig ar gyfer cymhwyso a meintioli cyfansoddion bioactif.

Wedi hynny, canfuwyd y ffytogemegau unigol yn y darnau gan ddefnyddio dadansoddiad QTOF trwyth uniongyrchol (Tabl 3). Yn seiliedig ar y data arbrofol, nodwyd 23 o gyfansoddion yn ôl pob tebyg gyda'r mwyafrif ohonynt yn flavonoidau a bioflavonoidau. Dim ond yn y darnau dail y nodwyd deilliadau Orientin, isovitexin, saporanin, scoparin (a flavone), vitexin a'i ddeilliadau. Canfuwyd Lanceolatin A yn unig mewn darnau dail MAC-dŵr a, trwyth a darnau rhisgl coesyn MAC-MeOH, tra bod y Lanceolatin biflavonoid A yn cael ei gyflwyno yn unig mewn detholiad rhisgl coesyn SOX-MeOH ac ym mhob echdyniad dail (ac eithrio'r HAE-MeOH). Gwelwyd presenoldeb lanceolatin B ym mhob detholiad o'r ddwy ran o blanhigyn ac eithrio yn y darnau dail trwythedig a HAE-MeOH. Canfuwyd y lanceolatin bioflavonoid B ym mhob detholiad ac eithrio yn y rhisgl coesyn macerated. Roedd yr holl ddetholiadau, ac eithrio darnau dail HAE-MeOH a HAE-Water yn cynnwys lanceolatin C. Datgelodd data a gafwyd hefyd fod y darnau'n gyfoethog mewn lophirones. Canfuwyd lophirones A, D, E, I, J ac L yn y rhan fwyaf o'r darnau o'r ddwy ran o blanhigyn. Mae ein canlyniadau yn unol â'r llenyddiaeth lle mae'r achosion o lophirones biflavanoids i mewnL. lanceolataadroddwyd yn flaenorol gan Lopatriello et al. (Lopatriello et al., 2019). Mae lophirones biflavanoids yn cael eu cynhyrchu'n fiogenetig o leihau calconau â regiocemeg gwahanol (Ghogomu et al., 1987; Lopatriello et al., 2019; Tih et al., 1989, 1994). Presenoldeb flavonoids megis orientin a deilliadau vitexin yn unig yn y darnau dail cydberthyn â lefel uwch o gyfanswm cynnwys flavonoid.

3.2. Eiddo gwrthocsidiol

Yn yr astudiaeth bresenol, ygwrthocsidiolpotensial y gwahanol ddetholiadau oL. lanceolataGwerthuswyd rhisgl dail a choesyn gan ddefnyddio ffosphomolybdenwm, chwilota radical rhydd (DPPH ac ABTS), lleihau pŵer (CUPRAC a FRAP), a phrofion celu ïon fferrus. Yn seiliedig ar y canfyddiadau arbrofol (Tabl 3), mae pob darn a astudiwyd wedi dangos chwilota radical rhad ac am ddim rhyfeddol a phŵer lleihau. Ar gyfer y darnau dail, gwelwyd y gweithgaredd sborionio rhydd uchaf yn yr HAE MeOH (DPPH: 93.82 ± 0.23 ac ABTS: 132.25 ± 0.09 mg TE/g) , ac yna trwyth (ar gyfer DPPH: 93.81 ± 0.43 mg TE/g) a SOX-MeOH (ar gyfer ABTS: 132.09 ± 0.07 mg TE/g). Mae dyfyniad HAE-MeOH wedi arddangos y pŵer lleihau cwpanig a ferric uchaf, gyda gwerthoedd o 287.73 ± 21.98 a 231.21 ± 0.57 mg TE/g, yn y drefn honno.

Ymhlith y darnau rhisgl coesyn, dangoswyd y gweithgaredd quenching radicalau rhydd uchaf gan y SOX-MeOH (DPPH: 195.18 ± 0.55 a 265.04 ± 0.99 mg TE /g), ac yna HAE-MeOH (DPPH: 194.83 ± 0.21 a 264.43 ± 0.13 mg TE/g). Dangoswyd gallu lleihau nodedig gan yr holl echdynion rhisgl coesyn a brofwyd, gyda'r echdynion dyfrllyd a gafwyd gan ddefnyddio maceration (CUPRAC: 853.99 ± 13.27 a FRAP: 853.99 ± 13.27 mg TE/g) a homogenizer gyda chymorth (CUPRAC: 683.57.4: 683.57 ± 4 . ± 3.86 mg TE/g) dulliau yn ffynonellau uwch o gyfryngau lleihau mewn assay CUPRAC a FRAP. Cyfanswm cymedrolgwrthocsidioldangoswyd cynhwysedd gan y darnau rhisgl dail a choesyn a brofwyd. O ran priodweddau celu metel, roedd y gweithgaredd yn amrywio rhwng 6.76 ± 1.76 (HAE-Water) a 22.68 ± 0.74 (HAE-MeOH) mg EDTAE/g a 2.09 ± 0.45 ( MAC-MeOH) a 6.15 ± 1.12 mg EDTAE/g ar gyfer y darnau rhisgl dail a choesyn, yn y drefn honno.

Cyn belled ag y gallai'r llenyddiaeth gyfiawnhau, prin yw'r astudiaethau sy'n ymwneud â phriodweddau gwrthocsidiolL. lanceolata(Onyeto, 2014; Oussou et al., 2016). Yn amlwg, mae canlyniadau gwrthocsidiol a gafwyd yn unol â chyfanswm y cynnwys ffenolig a welwyd o'r darnau. Nododd y ffaith hon y gellid ystyried cyfansoddion ffenolig fel y prif gyfranwyr at yr eiddo gwrthocsidiol a arsylwyd. Cafwyd y ffaith hon hefyd gan ddadansoddiad cydberthynas Pearson a rhoddir y canlyniadau yn Ffig. 1. Yn unol â'n canfyddiadau, adroddodd nifer o ymchwilwyr gydberthynas gadarnhaol rhwng cyfanswm y cynnwys ffenolig agwrthocsidioleiddo (Chu et al., 2020; Ribeiro et al., 2020; Thummajitsakul et al., 2020). Yn ogystal â dadansoddiad cydberthynas, gellid priodoli presenoldeb flavonoid (deilliadau lanceolatin) a bioflavonoids (deilliadau lophirone) yn y darnau a brofwyd i'r eiddo gwrthocsidiol. Yn yr un modd, mae Ajiboye et al. (2014) fod lophirone B a C yn arddangos priodweddau gwrthocsidiol sylweddol yn DPPH a llai o brofion pŵer.

3.2.1. Priodweddau ataliol ensymau

Mae'rensympriodweddau ataliol oL. lanceolataYmchwiliwyd i echdynion rhisgl dail a choesyn tuag at golinesterases (AChE a BChE), -amylase, -glucosidase, a tyrosinase, a dangosir y data arbrofol yn Nhabl 4. Ymhlith echdynion dail, dim ond y darnau methanol (HAE-MeOH: 4.4{{) 6}} ±0.10, SOX-MeOH: 4.22 ±{{20}}.21 a MAC-MeOH: 4.01 ±{ Roedd {63}}.30 mg GALAE/g) yn atalyddion cryf o AChE, tra nad oedd yr un o'r detholiadau yn weithredol yn erbyn BChE. Mae'r holl echdynion rhisgl bonyn wedi dangos gweithgaredd ataliol yn erbyn AChE gyda gwerthoedd yn amrywio o 1.93 ± 0.19 (trwythiad) i 5.18 ± 0.03 (HAE-MeOH) mg GALAE/g, tra mai dim ond echdynion methanol (HAE-MeOH: 7.87 ± 1.68, SOX-MeOH: 8.66 ± 1.75 a MAC- MeOH: 7.31 ± 1.33 mg GALAE/g) yn gryf yn erbyn BChE. Arddangoswyd effeithiau gwrth-tyrosinase nodedig ar gyfer y darnau dail methanol, a chofnodwyd y gweithgaredd uchaf ar gyfer echdyniad gan ddefnyddio dull echdynnu Soxhlet (131.17 ± 1.96 mg KAE/g). Ni ddangoswyd unrhyw weithgaredd ataliol yn erbyn tyrosinase gan y darnau HAE-Water a MAC-Water. Dangosodd yr holl echdynion rhisgl coesyn nerth ataliol sylweddol yn erbyn tyrosinase yn y drefn ganlynol: MAC-MeOH > SOX-MeOH > HAE-MeOH > Trwyth > MAC -Water > HAE-Water. O ran effeithiau gwrth-diabetig, roedd yr holl echdynion rhisgl dail a choesyn a brofwyd yn dangos gweithgaredd cymedrol yn erbyn ensym -amylase a dim ond echdynion methanol o'r ddwy ran o blanhigyn oedd yn effeithiol wrth atal -glucosidase, gyda gwerthoedd yn amrywio o 2.77 ± 0.01-2.{{62 }} ± 0.16 mmol ACAE/g ar gyfer echdynion dail a 2.74 ± 0.01–2.76 ± 0.01 mmol ACAE/g ar gyfer echdynion rhisgl bonyn.

Hyd eithaf fy ngwybodaeth, yr honedigensymcanlyniadau ataliol yw'r adroddiad cyntaf ar gyferL. lanceolata. Ar y pwynt hwn, gallai canlyniadau'r astudiaeth hon ddarparu dyddiad gwaelodlin gwerthfawr ar gyfer ymchwiliadau yn y dyfodol. Fel y gwelir yn Ffig. 1, gwelsom gydberthynas sylweddol (R > 0.5) rhwng cyfanswm ffenolig a assay ataliol ensymau (ac eithrio glwcosidase). Yn ogystal, canfuwyd gwerthoedd cyfernod cydberthynas uchel rhwng cyfanswm flavanol a'r profion atal ensymau. Roedd y canfyddiadau hyn yn dangos bod cysylltiad cryf rhwng gweithgareddau biolegol y darnau a brofwyd â'u proffiliau cemegol. Mae ein canfyddiadau yn anghyson â phapurau blaenorol a gynhaliwyd gan nifer o ymchwilwyr, a adroddodd berthynas llinol rhwng cyfanswm cyfansoddion bioactif aensymeffeithiau ataliol (Ali Reza et al., 2018; Kaewnarin et al., 2016; Llorent-Martínez et al., 2020; Muddathir et al., 2017; Wu et al., 2020). Gyda'i gilydd,L. lanceolatagellid ei ystyried fel ffynhonnell bosibl o atalyddion ensymau naturiol (Tabl 5).

3.3. Gwerthusiad o weithgareddau gwrth-ymledol a sytotocsig

Gweithgareddau gwrth-ymledol a sytotocsig rhisgl dail a choesynL. lanceolatagwerthuswyd echdynion ar ddwy linell cell carcinoma, HT29 a MCF7, ac ar linell gell ffibroblast dynol heb ei thrawsnewid (HFF-1). Dangosodd echdynion dail trwythiad a dŵr-dŵr ychydig o weithgaredd gwrth-amlhau a dyma'r rhai mwyaf effeithiol ar bob llinell gell a brofwyd (Tabl 6). Dangosodd detholiadau eraill weithgaredd cymedrol tebyg yn unig ar linellau celloedd carcinoma tra'n ysgogi toreth o ffibroblastau (Ffigur S1). Sylwyd ar yr effeithiau gwrth-ymledol mwyaf grymus ym mhob detholiad rhisgl coesyn, gan ddangos yr un effaith gwrth-ymledol, annetholiadol ar linellau celloedd carcinoma, waeth pa ddull echdynnu a ddefnyddiwyd (Tabl 6). Yn ddiddorol, roedd yr effaith gwrth-ymledol fwy amlwg hon yn cyd-fynd â gweithgaredd lluosogi cryf a welwyd ar y llinell gell ffibroblast heb ei thrawsnewid (Ffigur S2). Nid oedd echdynion rhisgl dail a choesyn yn sytotocsig ar linellau celloedd a brofwyd. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos potensial ar gyfer datblygiad pellach o gyfryngau gwrth-amlhau gyda sytowenwyndra systemig isel yn seiliedig ar y planhigyn L. lanceolata a allai fod yn ddiddorol ym maes datblygu cyffuriau canser.

Mewn astudiaeth gynharach a gynhaliwyd gan Ajiboye et al. (2014), ymchwiliwyd i effeithiau sytotocsig L. alata a lophirones B ac C ar gelloedd carcinoma ascites Ehrlich, lle cofnodwyd priodweddau gwrthganser sylweddol. Dywedodd yr awduron hefyd fod cysylltiad cryf rhwng presenoldeb lophirones B ac C ac effaith sytotocsig y darn a brofwyd. Yng ngoleuni'r wybodaeth hon, gallai'r bioflavonoids (deilliadau lophirone) fod yn gyfrifol am y galluoedd gwrthganser a welwyd oL. lanceolatayn y papur a gyflwynwyd.

3.4. Dadansoddiad aml-amrywedd

Cadarnhaodd dadansoddiad ystadegol unnewidyn wahaniaethau yn y cynnwys ffytocemegol,gwrthocsidiolgweithgareddau ac in vitroensymgweithgareddau ataliol oL. lanceolatasamplau. Yn fwy manwl gywir, gwelwyd y gwahaniaethau hyn rhwng y ddau rannau planhigion a astudiwyd, yn ogystal â rhwng y gwahanol dechneg-hydoddydd a ddefnyddir ar gyfer echdynnu. Mae'n wybodaeth gyffredin bod dosbarthiad moleciwlau mewn planhigion yn newid o un rhan o blanhigyn i'r llall, gan effeithio ar weithgareddau biolegol. Yn ogystal, amlygodd sawl astudiaeth effaith techneg-hydoddydd a ddefnyddir ar gyfer echdynnu ar bresenoldeb a chrynodiadau terfynol cyfansoddion ffytocemegol o ddiddordeb. Ar sail y wybodaeth hon, roedd yn bwysig amcangyfrif lefel effaith y ddau ffactor ar y gweithgareddau biolegol a ddadansoddwyd. Yn hyn o beth, roedd dadansoddiad archwiliadol aml-amrywedd hy dadansoddiad o'r prif gydrannau yn ymddangos yn briodol i'r diben hwnnw.

Gostyngodd PCA y disgrifyddion yn ddau brif gyfrifiadur personol gan amgáu 90.1 y cant o'r amrywioldeb (Ffig. 2A). Roedd PC1, y gydran amlycaf gyda 66.7 y cant o'r amrywioldeb a eglurwyd, wedi'i gysylltu'n gadarnhaol â gwrthocsidydd (phosphomolybdenum (PPBD), 2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6- asid sylffonig) (ABTS), gwrthocsidydd rhydwytho cwpanig (CUPRAC), 2,2- deuffenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) a lleihäwr fferriggwrthocsidiolpwer (FRAP)) a -amylase profion. Canfuwyd bod PC2 wedi'i rwymo'n bositif i -glucosidase a phrofion gallu chelating fferrus (Ffig. 2B). Arsylwyd ar ddau brif glwstwr gwahaniaethol yn cynrychioli pob rhan o blanhigion a astudiwyd ar hyd PC1. Yn ogystal, gwahanwyd samplau o bob rhan planhigyn ar hyd PC2, mewn perthynas â'r toddydd a ddefnyddiwyd yn y broses echdynnu (Ffig. 3A).

Nodweddwyd darnau rhisgl bôn gan y cryfafgwrthocsidiolpriodweddau, tra bod darnau dail yn meddu ar y gallu chelating fferrus uwch (Ffig. 3 B). Yn ogystal, dim ond ychydig o echdynion rhisgl coesyn y canfuwyd eu bod yn cael effaith ataliol ar butyrylcholinesterase (BChE).ensymgweithgaredd. Mae biosynthesis metabolyn eilaidd mewn planhigion yn broses sy'n cael ei dylanwadu gan sawl ffactor, rhai ohonynt yn gysylltiedig â'r planhigyn ei hun a rhai yn cael eu dylanwadu gan yr amgylchedd. Ar gyfer y ffactorau sy'n gysylltiedig â'r planhigyn ei hun, dangoswyd bod dosbarthiad a chrynodiad ffytocyfansoddion mewn planhigion yn amrywio'n fawr yn dibynnu ar eu datblygiad ontogenetig a'u rhan o'r planhigyn (Feduraev et al., 2019).

Yn ogystal, pwysleisiwyd dylanwad y toddydd echdynnu ar weithgareddau biolegol L. lanceolata. Mae'r effaith hon yn fwy amlwg ar y dail (Ffig. 4B). Yn ogystal, dangosodd ein canlyniadau fod methanol yn doddydd mwy digonol ar gyfer echdynnu cyfansoddion bioactif gan ei fod yn darparu darnau cyfoethocach yn ansoddol ac yn feintiol. Gellir priodoli'r canfyddiad hwn i hydoddedd uwch cyfansoddion ffytocemegol oL. lanceolatamewn methanol, gan awgrymu eu natur lipoffilig. Gyda'i gilydd, roedd y canfyddiadau hyn yn cydnabod rhisgl coesyn L. lanceolata fel y rhan gyfoethocaf o blanhigion mewn ffytonutrients a methanol fel y toddydd addas ar gyfer ei echdynnu.

4. Casgliad

Mae'r astudiaeth hon yn adrodd ar nodweddu ffytocemegolL. lanceolataechdynion dail a choesyn a gwerthusiad o'r effeithiau gwrthocsidiol, ataliad ensymau a gwrth-amlhau/cytotocsig. Canfuwyd lansolatinau a lophirones ym mhob rhan o'r planhigyn a ddadansoddwyd, tra bod nifer o glwcosidau apigenin a luteolin i'w cael mewn darnau dail yn unig. Ar y cyfan, roedd y dyfyniad hefyd yn ddiddorolgwrthocsidiolgweithgareddau lle'r oedd yr echdynion rhisgl bonyn yn dangos yr effaith gwrth-ymledol orau tuag at linellau celloedd carsinoma, a thrwy hynny eirioli am astudiaethau pellach i ddangos ei botensial wrth reoli canser. Ataliad clinigol allweddolensymauhefyd yn dangos potensial y darnau wrth reoli Alzheimer, hyperpigmentation, a diabetes mellitus. Roedd y canfyddiadau hyn yn tystio i hynnyL. lanceolatayn ffynhonnell addawol o gyfansoddion bioactif gyda chymhwysiad posibl wedi'i ragweld mewn fformwleiddiadau tôn croen. Fodd bynnag, dylid cynnal astudiaethau pellach (effeithiolrwydd, gwenwyndra, bio-argaeledd, ac ati) ar L. lanceolata gyda'r nod o ddatblygu newydd-ddyfodiaid.gwrthocsidyddionac atalyddion ensymau sydd â phriodweddau gwell na rhai synthetig.

Mae rhain yncistanche herbatafelli. Cliciwch ar y llun a chael y manylion.