Mae Morin yn Lliniaru Afflatocsin B1-Anafiadau i'r Afu a'r Arennau Trwy Atal Rhyddhad Trapiau Allgellog Heteroffil, Straen Ocsidiol Ac Ymatebion Llidiol mewn Cywion

Am fwy o wybodaeth, cysylltwchtina.xiang@wecistanche.com

ABSENOLDEBMae afflatocsin B1 (AFB1) yn metabolyn eilaidd a gynhyrchir gan Aspergillus favus ac aspergillus parasitig, sy'n bodoli'n bennaf mewn grawnfwydydd, cnau daear, corn, a chnydau eraill, sy'n peryglu dofednod, iechyd dynol a'r amgylchedd yn ddifrifol. Mae Morin, cyfansoddyn flavonoid wedi'i dynnu o blanhigion Moraceae, yn meddu ar wrthocsidydd, gwrthfacterol, agwrthlidioleffeithiau. Fodd bynnag, a yw morin yn cael effaith amddiffynnol ar AFB1-a achosirIauaniwed i'r arennaumewn cywion wedi cael ei adrodd yn benodol. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom gadarnhau yn bennaf effaith amddiffynnol morin ar niwed i'r afu a'r arennau a achosir gan AFB mewn cywion ac egluro ei fecanwaith. Canfuwyd y gall morin leihau'n sylweddol ddangosyddion biocemegol yr iau o alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), a dangosyddion arennau o lefelau creatinin (CRE) a nitrogen wrea (BUN). Yn y cyfamser, dangosodd archwiliad histopatholegol fod morin i bob pwrpas wedi lleddfu AFB wedi achosi niwed i'r afu, gan gynnwys amhariad hepatocyte, chwyddo, ac ymdreiddiad celloedd llidiol, a lleddfu niwed i'r arennau'n effeithiol, gan gynnwys necrosis celloedd arennol, diblisgo, a gwagio. Dangosodd ymchwiliad pellach i'w fecanwaith fod morin wedi atal rhyddhau trapiau allgellog heteroffil (HETs) a achosir gan AFB yn sylweddol, ac wedi gostwng lefel malondialdehyde (MDA) ond wedi cynyddu lefelau superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-). Px), a catalase(CAT) in vivo. Ar ben hynny, dangosodd dadansoddiad meintiol PCR(qRT-PCR) amser real fod morin hefyd wedi lleihau'n sylweddol ymadroddion mRNA a achosir gan AFB o ffactor necrosis tiwmor- (TNF- ), interleukin-6(I{{10}) }) ac interleukin-1 (IL-1), anwythadwy nitric ocsid synthase(iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2),caspase-1, caspase-2 {16}}, a caspase-11.I gloi, cadarnhaodd yr holl ganlyniadau y gallai morin amddiffyn niwed i'r iau a'r arennau a achosir gan AFB trwy atal rhyddhau HETs, rheoleiddio straen ocsideiddiol, ac atal ymateb llidiol, gan awgrymu bod gellir defnyddio morin fel cyffur posibl ar gyfer atal a thrin aflatoxicosis yn y diwydiant bridio dofednod.

Geiriau allweddol: morin, afflatocsin B1, trapiau allgellog heteroffil, ymateb llidiol, straen ocsideiddiol

RHAGARWEINIAD

Mae afflatocsin yn fath o fetabolyn eilaidd gyda gwenwyndra uchel a phwysau moleciwlaidd isel a gynhyrchir gan ffyngau fel Aspergillus flavus, aspergillus Parasitig, ac aspergillus penodol, sydd â gwenwyndra cryf, mwtagenedd, a charsinogenedd, ac ymhlith y rhain mae gan afflatocsin B1 (AFB1) y gwenwyndra cryfaf. (Rawal et al, 2010).Roedd llygredd AFB1 yn gysylltiedig â diogelwch bwydo, cynhyrchu anifeiliaid, a diogelwch bwyd, a hyd yn oed yn bygwth iechyd pobl. Felly, mae'n bwysig datrys halogiad AFB1 mewn bwyd anifeiliaid a'r problemau gweddilliol mewn anifeiliaid a chynhyrchion da byw. Mae bod yn agored i afflatocsinau yn ystod beichiogrwydd yn fygythiad i iechyd y ffetws, y gellir ei drosglwyddo o'r fam i'r ffetws trwy waed llinyn bogail a llaeth y fron (Dennining et al., 1990). Adroddwyd bod lefel AFB1 mewn serwm clefyd melyn gyda 6-diffyg ffosffoglucose dehydrogenase mewn babanod newydd-anedig, a chanfuwyd bod 58 y cant o fabanod newydd-anedig a 75 y cant o famau wedi profi'n bositif (Raafat et al, 2021). Fel y carsinogen hepatogellog pwysicaf, AFB1 yw prif achos carsinoma hepatogellog (HCC) yn y byd ac mae astudiaethau wedi canfod bod firws AFB1 a hepatitis B (HBV) yn gweithio ar y cyd i wella nifer yr achosion o HCC (Rushing a Selim, 2019) ymhellach. ).AFB{1-wedi'i achosistraen ocsideiddiolyw un o'r ffyrdd pwysig y caiff ei wenwyndra ei roi ar waith (Abdel-Wahhab ac Aly, 2003). Ond erys mecanweithiau dyfnach sy'n sail i aflatoxicosis a chyffuriau mwy effeithlon ar gyfer atal a thrin.

Mae Morin (dangosir y strwythur cemegol yn Ffigur 1), yn fath o pigment naturiol a dynnwyd o blanhigion Moraceae, sy'n perthyn i flavonoids ac sydd â phriodweddau biolegol, gan gynnwys gwrthlidiol (Wei et al), (Li et al, 2020), a gwrthocsidiol 2015), gwrthfacterol (Wei et al, 2015), antiatherosglerosis (Zhou et al, 2017), siwgr gwaed is a gwrth-stress, ac fe'i defnyddiwyd yn helaeth wrth drin clefyd coronaidd y galon, diabetes a chanser yn glinigol. Dywedir y gall morin gael effeithiau gwrthfacterol ar Staphylococcus aureus, Bacillus, a Micrococcus flavus trwy ymyrryd â synthesis DNA bacteriol ac atal gweithgaredd adenosine triphosphate (ATPase)(Xu et al.2001). Mae rhai astudiaethau'n dangos y gall morin atal TLR4 / NF-xB ac actifadu llwybrau signalau Nrf2 a HO i amddiffyn acíwt a achosir gan LPSanaf i'r afumewn llygod (Tian et al, 2017). Gall Morin hefyd wella ffibrosis yr afu a achosir gan amoniwm nitrad diethyl yn effeithiol mewn llygod mawr trwy gymedroli trawsgludiad signal Hippo/YAP a TGF- 1/Smad (Perumal et al,2017). Ar hyn o bryd, adroddir y gall amrywiaeth o gyfansoddion megis fitaminau A, Cand E (Alpsoy ac Yalvac, 2011), ac eugenol, wrthsefyll ystraen ocsideiddiolymateb AFB1. Fodd bynnag, fel cyffur gwrthocsidiol traddodiadol, a allai morin hefyd chwarae rhan amddiffynnol yn yr afu aanaf i'r arennaumewn cywion ag aflatoxicosis heb ei adrodd.

Trapiau allgellog neutrophil (NETs) yw llinell amddiffyn gyntaf y corff yn erbyn pathogenau allanol a ddarganfuwyd yn ystod y blynyddoedd diwethaf. Mae NETs yn strwythur rhwydwaith gyda DNA fel y sgerbwd ac wedi'i addasu gan histone citrullinated 3(citH3) ac elastase (Wei et al.,

2019b), gydag effeithiau gwrthfacterol (Brinkmann et al., 2004), gwrthfeirysol (Saitoh et al, 2012), a gwrthbarasitig (Wei et al, 2016). Mae gan drapiau allgellog heteroffil (HETs) swyddogaeth debyg i NETs, ​​ac eithrio nad oes gan HETs fynegiad myeloperoxidase (MPO)(Chuammitri et al., 2009). Dangoswyd y gall N. canine achosi rhyddhau NETs cwn in vitro i wrthsefyll haint (Wei et al, 2016). Mae astudiaeth hefyd wedi'i chadarnhau a all leihau pyliau anadlol mewn carp abamectin (AVM) trwy atal gweithrediad y llwybr signalau PI3K-ERK, gan atal rhyddhau NETs mewn carp (Zheng et al, 2020). Yn debyg i abamectin, mae morin yn gyffur therapiwtig cydnabyddedig, p'un a yw ei effaith therapiwtig yn gysylltiedig â rhyddhau NETs, ​​mae hyn yn gofyn inni archwilio ymhellach.

Felly, archwiliwyd mecanwaith morin ar anafiadau i'r afu a'r arennau a achosir gan AFB mewn cywion yn ein hastudiaeth, ac archwiliwyd ei effeithiau amddiffynnol. Disgwylir i ddarparu sylfaen arbrofol ar gyfer gweithredu clinigol milfeddygol o morin a darparu data arbrofol a chyfeiriadau ar gyfer atal a rheoli gwenwyn mycotocsin.

DEUNYDDIAU A DULLIAU Adweithyddion a Deunyddiau

AFB1(A6636, purdeb Yn fwy na neu'n hafal i 98 y cant, Sigma-Aldrich [Shang-hail Trading Co, Ltd., Shanghai, China). Prynwyd Morin (purdeb Yn fwy na neu'n hafal i 98 y cant) oddi wrth Chengdu Pusi Biological Co, Ltd (Chengdu, China). Pecyn Assay dsDNA Pico Green (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Cafwyd pecyn AST, ALT, BUN, a CRE gan Sefydliad Peirianneg Fiolegol Nanjing Jiancheng (Nanjing, Tsieina). Cafwyd y pecyn GSH-Px SOD, CAT, ac MDA gan Sefydliad Peirianneg Fiolegol Nanjing Jiancheng (Nanjing, Tsieina). Cafwyd Pecyn Synthesis cDNA Llinyn Cyntaf RevertAid o gymysgedd meistr Thermo.qPCR gan Roche (Mannheim, yr Almaen).

Sefydlu Modelau Anifeiliaid

Prynwyd pump ar hugain o gywion undydd o fferm fridio Foshan (Foshan, Guangdong), a chafodd y cywion eu bwydo'n addasol am ddiwrnod. Dechreuwyd sefydlu'r model cyw heintiedig ar yr ail ddiwrnod. Neilltuwyd y cywion prawf ar hap i 5 grŵp: grŵp rheoli, grŵp AFB1 (5 mg / kg), grŵp triniaeth morin (20 mg / kg, 40mg / kg, 80 mg / kg). Ar ddiwrnod cyntaf y modelu, y driniaeth chwistrellwyd y grŵp â morin yn fewnberitoneol i'w atal a chafodd ei chwistrellu eto 16 awr yn ddiweddarach. Casglwyd gwaed 24 awr yn ddiweddarach, lladdwyd y cywion a chymerwyd meinweoedd yr iau a'r arennau. Cynhaliwyd holl weithrediad yr arbrawf yn unol â chanllawiau Pwyllgor Moeseg Ymchwil Anifeiliaid Prifysgol Foshan (FSueae2019112501).

Canfod HETs mewn Serwm

Roedd y gwaed a gasglwyd yn llonydd, wedi'i allgyrchu ar 12,000 rpm am 10 munud, a chafodd y serwm uchaf ei dynnu, ei wanhau 5-plyg â llifyn TE, ac yna ychwanegwyd yr un faint o Pico Green. Yn olaf, arsylwyd ar y canlyniadau arbrofol gyda darllenydd microplate fflworoleuedd.

Canfod ALT ac AST mewn Serwm

Mesurwyd lefelau ALT ac AST mewn serwm gyda'r pecyn a'r canlyniadau arbrofol ar donfedd 510 nm gan y darllenydd microplate.

Canfod BUN a CRE mewn Serwm

Archwiliwyd lefelau CRE a BUN mewn serwm gyda chitiau cyfatebol a chanfuwyd y canlyniadau arbrofol ar donfedd 510 nm gan y darllenydd microplate.

Asesiad Histopatholegol o Meinwe'r Afu a'r Arennau

Roedd y samplau meinwe afu a'r arennau a gasglwyd yn sefydlog mewn 10 y cant o formalin. Yna, cafodd y meinwe ei ddadhydradu, ei fewnosod, a'i staenio â hematocsilin ac eosin (Wet al, 2021). Yn olaf, defnyddiwyd microsgop hybrid cylchdro i arsylwi newidiadau patholegol.

Canfod Gweithgaredd Ocsidase a Gweithgaredd Ensym Gwrthocsidiol

Canfuwyd lefelau Oxidase MDA a gwrthocsidiol oxidase GSH-Px, SOD, a CAT a archwiliwyd gyda chitiau cyfatebol (Guo et al, 2021). Ymhlith, mesurwyd SOD a CAT gyda serwm, a mesurwyd MDA a GSH-Px gyda meinwe'r afu. Yn ogystal, mae angen inni ddefnyddio adweithyddion TBD ar gyfer dadansoddiad meintiol o grynodiad protein mewn samplau (Cao et al., 2020).

Dadansoddiad PCR Amser Real Meintiol

Defnyddiwyd QRT-PCR i ganfod mynegiant mRNA oymfflamycholffactorau TNF-a, IL-1 , IL-6, cyfryngwr llidiol COX-2, iNOS, a llwybr signalau caspase ffactorau allweddol caspase-1,caspase{{6} }, a caspase-11. Defnyddiwyd offeryn System Amser Real CFX Connect ar gyfer meintioli fflworoleuedd PCR amser real. Mae preimwyr y genyn targed yn Nhabl 1.qRT-mae canfod PCR yn mabwysiadu system Roche 25 μL, roedd y cyflwr yn 50 gradd, 2 funud; 95 gradd, 10 munud; 95 gradd, 15 munud; 60 gradd, y 60au, cyfanswm o 40 cylch. GAPDH fel y cyfeiriad mewnol, a hwn oedd y dull o brosesu'r data a ddefnyddiodd yr AACT (Qianru et al., 2021).

Dadansoddiad Ystadegol

Cyfrifwyd yr holl ddata gan GraphPad Prism 5.0 meddalwedd gan ddefnyddio dadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA) gyda phrawf cymharu lluosog Tukey. Ystyriwyd bod gwahaniaethau rhwng grwpiau yn ystadegol arwyddocaol ar lefelau P<>

CANLYNIADAU

Newid Pwysau Corff a Chyfernod Afu mewn Cywion

Cofnodwyd pwysau corff pob cyw a chyfrifwyd cyfernod yr iau (cyfernod yr afu =pwysau'r afu/pwysau'r corff] × 100). Amlygodd y canlyniadau fod cyfradd twf pwysau corff yn y grŵp trin morin (20 mg / kg, 80 mg / kg) wedi cynyddu'n sylweddol o'i gymharu â'r grŵp AFB1 (Ffigur 2A), gan gadarnhau bod morin yn cael effaith benodol ar bwysau cywion. Fodd bynnag, ni newidiodd cyfernod afu pob grŵp o gywion yn sylweddol (Ffigur 2B).

Mae Morin yn Lleihau'n Sylweddol Lefelau ALT ac AST mewn Serwm

Mae ALT ac AST yn ddangosyddion niwed i'r afu. Dangosodd y data fod AFB1 yn rhoi hwb sylweddol i lefelau ALT ac AST, tra bod morin yn dangos tuedd hollol gyferbyniol o'i gymharu ag AFB1 (Ffigur 3A a B), sy'n awgrymu'n rhagarweiniol fod morin yn cael effaith fuddiol ar anaf i'r afu a achosir gan AFB mewn cywion. .

Mae Morin yn Lliniaru AFB yn Sylweddol1-Ymlyniad i'r Niwed i'r Afu mewn Cywion

I gadarnhau ymhellach effeithiau morin ar anaf i'r iau a achoswyd gan AFB, cynhaliwyd archwiliad histopatholegol. Fel y dangosir yn Ffigur 4, chwydd hepatocyte a achosir gan driniaeth AFB1, darnio, ac ymdreiddiad celloedd llidiol yn yr afu, ond fe wnaeth y morin (20,40, 80 mg/kg) liniaru'r difrod i feinwe'r afu i bob pwrpas, a gadarnhaodd ymhellach fod gan morin a effaith lliniarol ar niwed i'r iau a achosir gan AFB mewn cywion.

Mae Morin yn Lleihau'n Sylweddol Lefelau BUN a CRE mewn Serwm

BUN a CRE fel dangosyddion pwysig o anaf i'r arennau, canfuom fod AFB1 wedi cynyddu lefelau BUN a CRE yn sylweddol o gymharu â'r grŵp rheoli, tra bod morin yn dangos tuedd hollol groes o'i gymharu ag AFB1 (Ffigur 5A a B), sydd hefyd yn awgrymu'n rhagarweiniol bod gan morin a effaith fuddiol ar AFB1-achosi anaf i'r arennau mewn cywion.

Mae Morin yn Lliniaru AFB yn Sylweddol1-Anaf i'r Arennau mewn Cywion

I gadarnhau ymhellach effeithiau morin ar anaf i'r arennau a achoswyd gan AFB, cynhaliwyd archwiliad histopatholegol. Dangosodd aren y grŵp triniaeth AFB1 necrosis celloedd arennol, diblisgo, a gwagio, tra bod y grŵp trin morin, gyda chynnydd y crynodiad morin (20,40,80 mg/kg), wedi lleddfu'r anaf i feinwe'r arennau i bob pwrpas (Ffigur 6 ), a gadarnhaodd ymhellach bod morin yn cael effaith lliniarol ar anaf i'r arennau AFB mewn cywion.

MorinWedi gostwng yn sylweddol lefel yr HETs AFB mewn Serwm

Er mwyn ymchwilio i'r mecanwaith sy'n sail i amddiffyn morin ar anaf i feinwe a achosir gan AFB, canfuwyd HETs a ryddhawyd mewn serwm gan Pico Green. Casglwyd samplau gwaed i ganfod lefel yr HETsserwm. Roedd canlyniad yr arbrawf yn dangos bod AFB1 wedi ysgogi cynhyrchu HETs mewn serwm yn sylweddol, tra bod morin wedi atal cynhyrchu HETs yn sylweddol o gymharu â grŵp AFB1 (Ffigur 7). Felly, gwnaethom gadarnhau yn gyntaf fod morin wedi lleddfu AFB1- wedi achosi anaf i'r afu a'r arennau trwy atal rhyddhau HETs.

Mae Morin yn Lliniaru'n Sylweddol AFB1-Straen Ocsidyddol a Achosir mewn Cywion

Dywedir bod straen ocsideiddiol yn fecanwaith hanfodol yn effeithiau gwenwynig AFB1, canfuwyd swyddogaeth morin ar straen ocsideiddiol a achosir gan AFB. Dangosodd y canlyniad fod AFB1 wedi ychwanegu'n sylweddol y lefel ooxidase MDA, tra'n lleihau'n sylweddol lefelau'r ensym gwrth-ocsidydd GSH-Px, SOD, a CAT. Fodd bynnag, o'i gymharu ag AFB1, roedd morin i bob pwrpas yn lleddfu'r anghydbwysedd rhwng ensymau ocsidas ac gwrthocsidiol (Ffigur 8).

Er mwyn ymchwilio i'r mecanwaith sy'n sail i amddiffyn morin ar anaf i feinwe a achosir gan AFB, canfuwyd HETs a ryddhawyd mewn serwm gan Pico Green. Casglwyd samplau gwaed i ganfod lefel yr HETs

Rhwystrodd Morin yn Sylweddol Lefelau mRNA AFB1-Cyfryngwyr Llidiol a Achosir a Ffactorau Llidiol yn yr Afu

Mae'rymfflamycholymateb yn fecanwaith pwysig yn effeithiau gwenwynig AFB1; archwiliwyd effaith morin ar ymatebion llidiol a achoswyd gan AFB. Defnyddiwyd dadansoddiad qRT-PCR i ganfod mynegiant cyfryngwyr llidiol COX-2 ac iNOS, a ffactorau llidiol TNF-. IL-1 . IL-6. Dangosodd y canlyniadau arbrofol fod AFB1 wedi gwella lefelau mynegiant y cytocinau hyn yn sylweddol, tra bod morin yn atal mynegiant y cytocinau hyn yn sylweddol (Ffigur 9).

AFB wedi'i Atal yn Sylweddol Morin1-Anogodd Mynegiad mRNA o Caspase-1, Caspase-3, a Caspase-11

Adroddwyd hefyd bod llwybr signalau caspase yn rhan o'r broses o straen ocsideiddiol ac ymatebion llidiol. Gall ROS achosi difrod i'r bilen mitocondriaidd, gan arwain at efflux cytochrome c, ac actifadu llwybr signalau caspase. Felly, gwnaethom ganfod mynegiant mRNA o ffactorau allweddol llwybr signalau caspase. Cadarnhaodd y canlyniad fod AFB1 wedi cynyddu mynegiant mRNA caspase-1, caspase-3, a caspase-11 yn sylweddol, tra bod morin wedi lleihau mynegiant y ffactorau hyn yn sylweddol (Ffigur 10).

TRAFODAETH

AFB1 yw'r mycotocsin mwyaf gwenwynig, sef prif achos aspergillosis. Bu llawer o astudiaethau ar wenwyndra AFB1, gan gynnwys hepatotoxicity, niwrowenwyndra, a charsinogenigrwydd. Mae'r afu, fel y prif organ dadwenwyno a phrif safle trawsnewid metaboledd sylweddau mewn anifeiliaid, yn agored iawn i niwed AFB1, sy'n cael ei gyfryngu'n bennaf gan 4 mecanwaith: system ensymau cytochrome P450 (CYP450), mitocondria, system imiwnedd, a radicalau rhydd . Ar ôl i AFB1 fynd i mewn i'r corff, mae'n cael ei amsugno o dwodenwm y llwybr treulio ac yn mynd i mewn i'r afu trwy'r porth gwythiennol, lle caiff ei drawsnewid yn AFBO gan CYP1A2 a CYP3A4 yn system ensym metaboledd cam I ensym CYP450 mewn hepatocytes (Yang et al ..2013). Y broses uchod yw'r rheswm mwyaf arwyddocaol pam mae AFB1 yn achosi anhwylderau'r corff ac yn cynhyrchu gwenwyndra ac effeithiau carcinogenig. Gall AFB1 hefyd gymell apoptosis hepatocyte trwy uwch-reoleiddio mynegiant derbynyddion marwolaeth F AS a TNFR1, ac is-reoleiddio mynegiant derbynyddion antiapoptotig XIAP a Bcl-2(Mughal et al.,2017). Yn yr arbrofion blaenorol. , rydym wedi cadarnhau y gall AFB1 achosi niwed i'r afu a'r arennau mewn cywion a rhagarweiniol wedi egluro'r mecanwaith.

Mae Morin yn fath o flavonoid naturiol, sydd â strwythur gwrthocsidiol naturiol. Mae gan y quinone a ffurfiwyd gan ei ocsidiad weithgaredd gwrthocsidiol cryf, a all amddiffyn yr asidau brasterog annirlawn ar y gellbilen rhag ocsidiad (Xie et al, 2003). Mae astudiaethau wedi cadarnhau y gall morin chwarae rhan amddiffynnol benodol ar niwed i'r afu a achosir gan IFOS mewn llygod trwy atal straen ocsideiddiol. llid yn ogystal ag apoptosis celloedd (Ozdemir et al2020). Gall Morin hefyd liniaru mastitis a achosir gan LPS trwy atal PI3K / AKT, MAPK, NF-kB. a llwybrau signalau NLRP3 (Jiang et al..2020). Fodd bynnag, mae effeithiau amddiffynnol cysylltiedig morin ar AFB1-difrod a achosir yn parhau i fod yn anhysbys. Felly, archwiliodd yr arbrawf hwn yn bennaf effeithiau amddiffynnol morin ar AFB a achosodd niwed i'r afu a'r arennau ac eglurodd ei fecanwaith.

Yn seiliedig ar asesiad mwy cywir o ddos ​​ac effeithiau morin, dewiswyd y pigiad mewnperitoneol. Ar ben hynny, roedd y dull gweinyddu gyda morin yn gyson â'r dull mewn llygod a llygod mawr (Jiang et al..2020;

Khamchai et al, 2020). Yn gyntaf, archwiliwyd lefelau AST, ALT, BUN, a CRE mewn serwm i gadarnhau bod model gwenwyndra AFB1 wedi'i sefydlu'n llwyddiannus. Cynyddwyd mynegeion niwed i'r afu a'r arennau yn y grŵp AFB1 yn sylweddol, tra bod grwpiau morin wedi atal mynegiant yr ensymau hyn yn sylweddol, a gadarnhaodd yn gyntaf rôl morin wrth amddiffyn rhag niwed i'r afu a'r arennau a achosodd AFB mewn cywion. Ar yr un pryd, canfuom, er nad oedd gwahaniaeth rhyfeddol ym mynegai'r afu rhwng y grwpiau, bod cyfradd twf pwysau wedi gwella'n sylweddol yn y grŵp trin morin (20 mg / kg, 80 mg / kg), gan gadarnhau effaith morin ar bwysau cywion. Ar ben hynny, cadarnhaodd archwiliad histopatholegol fod morin i bob pwrpas wedi lleddfu AFB wedi achosi aflonyddwch hepatocyte, chwyddo, ymdreiddiad celloedd llidiol, a necrosis celloedd arennol, diblisgo, a gwagoli, a gadarnhaodd ymhellach effeithiau amddiffynnol morin ar niwed i'r afu a'r arennau mewn cywion. . Nesaf, gwnaethom ymchwilio i fecanwaith amddiffyn morin yn erbyn anaf i'r iau a'r arennau a achosir gan AFB mewn cywion.

Cleddyf daufiniog ar gyfer yr organeb yw NETs, ​​fel y llinell amddiffyn gyntaf ar gyfer imiwnedd cynhenid. Ar y naill law, mae'n chwarae rhan bwysig yn amddiffyniad y corff rhag pathogenau. Ar y llaw arall, bydd yn achosi difrod meinwe ac yn cymryd rhan mewn ffurfio rhai afiechydon, megis atherosglerosis a thrombosis (Moschonas a Tselepis, 2019). Cadarnhaodd yr astudiaeth fod NETs a hisstones yn chwarae rhan bwysig wrth anafu celloedd epithelial mamari buchol (BMEC), a gall atal ffurfio gormod o NETs liniaru anaf sy'n gysylltiedig â mastitis (Wei et al.2019a). Rydym hefyd wedi canfod y gallai AFB1 achosi niwed i'r afu a'r arennau mewn cywion trwy achosi rhyddhau HETs. Mae a yw effaith amddiffynnol morin ar anaf a achosir gan AFB1 mewn cywion yn gysylltiedig â HETs hefyd yn nod pwysig i'n harbrawf. Mae HETs yn gweithio fel ymatebion imiwn cynhenid ​​​​hanfodol cyw iâr, a'r amser gorau i ganfod HETs mewn serwm yw o fewn 24 h, felly dewiswyd amseriad yr astudiaeth. Canfuwyd bod morin wedi lleihau'n sylweddol ffurfio HETs mewn serwm, a chadarnhawyd yn gyntaf bod morin wedi lleddfu AFB1-wedi achosi anaf i gywion trwy atal rhyddhau HET.

Ym mhroses metabolig arferol y corff, mae rhydocs mewn ecwilibriwm deinamig, ond pan fydd cynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) yn y corff yn fwy na'r symiau o gwrthocsidyddion, bydd straen ocsideiddiol yn digwydd. Mae straen ocsideiddiol yn gysylltiedig â llawer o afiechydon yr afu, megis clefyd ffibroproliferative hepatig, clefyd yr afu alcoholig, a chlefyd yr afu brasterog di-alcohol (Cichoz-Lach a Michalak, 2014). MDA yw cynnyrch terfynol perocsidiad lipid a gynhyrchir gan ROS, a gall adlewyrchu'n annibynnol faint o ddifrod i'r system bilen a faint o ymosodiad gan radicalau rhydd ar gelloedd, felly fe'i hystyrir yn farciwr da ar gyfer gwerthuso straen ocsideiddiol (Wang et al , 2019). Mae SOD yn ensym gwrthocsidiol penodol sy'n chwilota anion super-ocsid mewn radicalau rhydd ROS, sy'n edrych yn anuniongyrchol ar allu'r corff i gael gwared ar radicalau di-ocsigen, ac mae ganddo swyddogaeth hynod hanfodol wrth astudio anaf i'r afu (Zhang et al..2018) . Mae GSH-Px yn ddangosydd pwysig i fesur cyflwr rhydocs celloedd, a all wrthweithio gwenwyndra radicalau ocsigen trwy gyflenwi H plus yn uniongyrchol, a lleihau

niwed ocsideiddiol i'r afu. Mae CAT, yn bodoli mewn meinweoedd amrywiol o anifeiliaid, yn enwedig yn yr afu ar grynodiadau uchel, a all ddadelfennu hydrogen perocsid yn garbon deuocsid a dŵr yn effeithiol i amddiffyn celloedd rhag difrod ocsideiddiol (Alfonso-Prieto et al., 2009). Nododd y canlyniad fod AFB1 wedi lleihau'n sylweddol lefelau ensymau gwrthocsidiol GSH-Px, SOD, a CAT, hefyd yn cynyddu lefel yr ensymau gwrthocsidiol MDA, tra bod y grŵp morin yn dangos y duedd gyferbyn, gan leddfu'r anghydbwysedd rhwng ocsidas ac ensymau gwrthocsidiol yn effeithiol, gan nodi y gall morin atal straen ocsideiddiol a achosir gan AFB i bob pwrpas.

Dywedir y gall ROS achosi mynegiant cytocinau llidiol ac actifadu ffactor niwclear kappa B (NF-xB) a llwybrau protein kinase a weithredir gan mitogen (MAPK) (Li et al.2014). Mae protein NF-xB fel arfer yn ffurfio homo/heterodimers o p65 a p50 ac mae mewn cyflwr anactif yn y cytoplasm oherwydd ffurfio cymhlyg trimer gyda'r protein ataliol IkB (Pantano et al., 2006). Ar ôl cael ei ysgogi gan y pathogen, mae IkB yn cael ei ddatgysylltu o'r trimer, ac mae'r dimer NF-kB yn agored i ddilyniannau lleoleiddio niwclear (NLS), sy'n mynd i mewn i'r cnewyllyn o'r cytoplasm yn gyflym ac yn rhwymo dilyniannau penodol ar y DNA niwclear, gan hyrwyddo'r trawsgrifio genynnau cysylltiedig (Zhang a Ghosh, 2001).TNF- yw'r cytocin pro-llidiol pwysicaf sy'n ymwneud ag actifadu NF-B, gan ysgogi mynegiant IL-18, IL-6, COX -2,iNOS, a chyfryngwyr llidiol eraill i lawr yr afon (Rajendran et al 2018). Dangosodd ein canlyniadau fod AFB1 wedi hyrwyddo mynegiant mRNA o ffactorau llidiol TNF-, IL-1 , IL-6, a chyfryngwyr llidiol COX-2 ac iNOS yn sylweddol, ond rhwystrodd y grŵp morin y mynegiant yn sylweddol o'r ffactorau hyn, sy'n dangos y gallai morin atal ymateb llidiol a achosir gan AFB mewn cywion i bob pwrpas.

Mae astudiaethau wedi dangos bod straen ocsideiddiol yn un o'r ffactorau sy'n achosi apoptosis (Chandra et al., 2000), ac mae llawer o sylweddau sy'n achosi apoptosis yn gyffredinol yn ocsidyddion neu'n ysgogiadau ym metabolaeth ocsideiddio celloedd. Gall actifadu NF-kB yrru trawsgrifiad genynnau ffactor proapoptotig neu atal mynegiant proteinau gwrth-apoptotig. Yn y cyfamser, mae llwybr signalau caspase ac ymateb llidiol ar y cyd. Mae Caspase-1 yn chwarae rhan bwysig yn Il-1 secretion a caspase-11 yn homoleg o caspase llidiol dynol-4 ac aelodau o'r teulu caspase-4 caspase{{9} }} (Van Opdenbosch a Lamkanfi, 2019). Gwnaethom gadarnhau bod AFB1 yn rhoi hwb sylweddol i fynegiant caspase-1, caspase-3, a caspase-11, tra bod morin wedi lleihau mynegiant y ffactorau hyn yn sylweddol, gan gadarnhau y gall morin atal actifadu'r ffactorau hyn yn sylweddol. Llwybr signalau caspase a achosir gan AFB mewn cywion.

Yn seiliedig ar y canlyniadau uchod, cadarnhawyd y gall morin liniaru'n effeithiol niwed i'r afu a'r arennau a achosir gan AFB mewn cywion, a all ddarparu sail arbrofol a chyfeiriad damcaniaethol ar gyfer cymhwyso morin yn ymarferol. Yn yr ymchwil nesaf, dylid dewis y dull bwydo â morin, fel dŵr yfed, ac mae angen mwy o gywion ac ieir hŷn i gadarnhau effaith morin mewn ffermio dofednod.

CASGLIAD

Mae Morin, fel cyfansoddyn naturiol a geir yn gyffredin mewn meddyginiaethau llysieuol Tsieineaidd ac atchwanegiadau dietegol, wedi'i ymchwilio'n llawn a'i gadarnhau am ei ddiogelwch ac mae wedi derbyn canlyniadau boddhaol. Dangosodd ein harbrofion ymhellach y gallai morin liniaru'n effeithiol niwed i'r afu a'r arennau a achosir gan AFB trwy atal rhyddhau HETs, straen ocsideiddiol, ymateb llidiol. Felly, mae'r astudiaeth hon yn dangos bod gan morin y potensial fel ychwanegyn porthiant i amddiffyn yr afu a'r plentyn o ddofednod, atal sylweddau niweidiol mewn porthiant, a gwella perfformiad dofednod.