Detholiad Deilen Olewydd (OLE) Aquaporin-2 a achosir gan Fasopressin â Nam yn Tracio Trwy Ysgogi'r Derbynnydd Synhwyro Calsiwm

Am fwy o wybodaeth. cysylltwch â:tina.xiang@wecistanche.com

Mae Vasopressin(AVP) yn cynyddu athreiddedd dŵr yn yarennoldwythell gasglu trwy reoleiddio masnachu mewn pobl acwaporin-2 (AQP2). Mae nifer o anhwylderau, gan gynnwys gorbwysedd a secretiad hormon gwrth-ddiwretig amhriodol (SIADH), yn gysylltiedig ag annormaleddau mewn cartrefostasis dŵr. Dangoswyd bod rhai ffytocompounds yn fuddiol i iechyd pobl. Yma, mae effeithiau Detholiad Deilen Olewydd (OLE) wedi'u gwerthuso gan ddefnyddio modelau in vitro ac in vivo. Dangosodd astudiaethau confocal fod OLE yn atal y trawsleoli AQP2 a achosir gan fasopressin i'r bilen plasma mewn celloedd MCD4 a llygod mawrarennau. Mae deori ag OLE yn lleihau'r cynnydd AVP-ddibynnol yn y cyfernod athreiddedd dŵr osmotig (Pf). I egluro effeithiau posibl OLE, gwerthuswyd calsiwm mewngellol. Mae OLE yn cynyddu'r calsiwm mewngellol trwy actifadu'r Derbynnydd Synhwyro Calsiwm (CaSR). , atalydd CaSR dethol, diddymu effaith ataliol OLE ar athreiddedd dŵr AVP-ddibynnol. Datgelodd arbrofion in vivo fod triniaeth gydag OLE yn cynyddu mynegiant yr mRNA CaSR ac yn lleihau mRNA AQP2 ochr yn ochr â chynnydd yn yr AQP2-dargedu miRNA-137. Gyda'i gilydd, mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod OLE yn antagonizes gweithredu vasopressin trwy ysgogi'r CaSR sy'n nodi y gallai'r darn hwn fod yn fuddiol i wanhau anhwylderau a nodweddir gan signalau CaSR annormal ac sy'n effeithio ar ail-amsugno dŵr arennol.

Mae dail coed olewydd wedi'u defnyddio'n helaeth fel meddyginiaethau traddodiadol i wella sawl afiechyd, yn enwedig yng ngwledydd Môr y Canoldir. Mae dail yn cael eu bwyta'n gyffredin yn y diet dynol fel detholiad neu bowdr i baratoi arllwysiadau neu de llysieuol. Datgelodd dadansoddiad nodweddu cemegol fod dail coed olewydd yn cynnwys sawl cyfansoddyn bioactif a allai gael effeithiau buddiol mewn rhai morbidrwydd fel syndrom metabolig, dyslipidemia, a gorbwysedd.Mewn cleifion â gorbwysedd hanfodol, gostyngodd OLE pwysedd gwaed a llai o glycemia a chalcemia'. Mae nifer o polyffenolau fel oleuropein, hydroxytyrosol, a tyrosol wedi'u canfod wedi'u cyfoethogi mewn dyfyniad dail olewydd gwyrdd (OLE)5, a gwyddys eu bod yn ymwneud ag atal rhai afiechydon a nodweddir gan straen ocsideiddiol. Felly, yn ystod yr ychydig flynyddoedd diwethaf, mae'r diddordeb mewn ymchwilio i effeithiau buddiol posibl echdyniad dail olewydd yn cynyddu ymhlith gwyddonwyr mewn gwahanol feysydd ymchwil. Dangosodd OIE effaith gwrth-ymledol sylweddol mewn celloedd mesothelioma malaen trwy newid dynameg calsiwm mewngellol, gan dargedu T- o bosibl. math Ca2 ynghyd â sianeli. Yn ddiddorol, canfuwyd bod OLE yn cael effeithiau gwrthhypertensive ar orbwysedd genetig mewn llygod mawr gorbwysedd digymell (SHR), yn gysylltiedig â gwella swyddogaeth fasgwlaidd*. Mae adamsugniad dŵr gormodol yn chwarae rhan bwysig yn pathogenesis pwysedd gwaed uwch. Mewn cleifion gorbwysedd, wedi'u trin â dyfyniad dail olewydd, canfuwyd gostyngiad sylweddol o sawl ffactor llidiol sy'n gysylltiedig â gostyngiad mewn pwysedd gwaed. Yn ogystal, mae cadw dŵr gormodol yn nodweddu sawl anhwylder fel sirosis yr afu, methiant y galon, a secretiad hormon gwrth-ddiwretig amhriodol (SIADH). Mae homeostasis dŵr corff yn cael ei reoli'n dynn gan yr hormon gwrth-ddiwretig vasopressin (AVP) sy'n cael ei ryddhau o dan y cyflwr dadhydradedig. Mae AVP yn rhwymo ei dderbynnydd V2R cytras wedi'i leoli ar bilen fasochrolarennolprif gelloedd a thrwy hynny yn actifadu'r llwybr signal cAMP sy'n arwain at drawsleoli'r aquaporin-2(AQP2) sy'n cario fesiglau o bwll mewngellol i'r bilen plasma apigol lle mae dŵr yn cael ei ail-amsugno. Ar lefel foleciwlaidd, gall nifer o ffactorau fodiwleiddio cydbwysedd dŵr arennol, Roedd lefel uchel o galsiwm luminal yn is-reoleiddio masnachu mewn pobl AOP2 tymor byr sy'n ddibynnol ar fasopressin trwy actifadu'r derbynnydd synhwyro calsiwm (CaSR)1,12. Ar y llaw arall, arweiniodd gweithrediad CaSR mewn celloedd epithelial tiwbaidd procsimol arennol anfarwoledig amodol, wedi'u hynysu o'r wrin dynol, gynnydd sylweddol mewn calsiwm cytosolig a gostyngodd yn sylweddol y cynnydd mewn cAMP a achosir gan forskolin (FK), actifydd uniongyrchol adenylate cvclase3 Ar ben hynny , mewn celloedd MCD4 dwythell casglu arennol, gan fynegi'n sefydlog y sianel ddŵr AOP2, gwnaeth ysgogiad y CaSR wanhau'r cynnydd cAMP-ddibynnol mewn ffosfforyleiddiad AQP2 yn serine 256 sy'n ddigwyddiad canolog yn y rhaeadru trawsgludiad signal a weithredir gan vasopressin ac a gynyddodd athreiddedd dŵr yn y pen draw4 ,15 Ymhellach, ynarensleisys o aren y llygoden medwla fewnol, achosodd actifadu'r CaSR â'r NPS-R568 calsimetic gynnydd sylweddol yn yr AQP2-targedu miRNA-137, gan gadarnhau cydadwaith tynn rhwng llwybr signal CaSR ac AQP2- {4}}athreiddedd dŵr dibynnoll.17.Yn yr astudiaeth bresennol, gwerthuswyd effeithiau echdyniad dail olewydd, a gafwyd o'r cyltifar Coratina lleol, ar swyddogaeth AQP2 a achosir gan fasopressin mewn celloedd MCD4 dwythell casglu arennol yn mynegi AOP2 ac mewn dDAVP yn sefydlog llygod mawr wedi'u trin wedi'u chwistrellu â'r dyfyniad. Rydym yn darparu tystiolaeth bod triniaeth OLE yn gwrthweithio ymateb fasopressin mewn celloedd arennol, a allai esbonio'n rhannol ei effaith diwretig. Yn ddiddorol, ymddengys bod yr effaith hon yn gysylltiedig ag actifadu'r CaSR a achosir gan OLE, derbynnydd y gwyddys bod ganddo ryngweithio negyddol â'r receptor vasopressin2.

Dysgwch fwy o effeithiau cistanche ar yr arennau

Canlyniadau

Effeithiau OLE ar swyddogaeth AQP2 a achosir gan fasopressin mewn celloedd MCD4. Ymchwilio i gyfranogiad posibl OLE ar swyddogaeth AQP2 sy'n ddibynnol ar fasopressin,arennolcasglwyd celloedd MCD4 dwythell, gan fynegi'n sefydlog y derbynnydd vasopressin 2(V2R) ac AQP2 dynol, fel model arbrofol18. Datgelodd astudiaethau cydffocal (Ffig. 1A), o gymharu â chelloedd wedi'u trin â dDAVP, lle'r oedd staenio AQP2 wedi'i leoleiddio i'r bilen plasma apigol, roedd triniaeth ag OLE wedi atal lleoleiddio pilen AOP2 a achosir gan ysgogiad gyda dDAVP. Yn gyson â'r arsylwadau hyn, roedd triniaeth OLE yn amharu ar y cynnydd a achoswyd gan dDAVP yn yr ymateb osmotig amserol (a nodir fel 1/t yn Ffig.1B)(OLE/dDAVP=88.70±1.86 y cant , n=292 celloedd yn erbyn dDAVP=206.8±5.49 y cant ,n=186 celloedd;p<0.001).altogether these="" findings="" suggested="" that="" treatment="" with="" ole="" reduced="" principal="" cell="" permeability="" by="" preventing="" aqp2="" translocation="" from="" an="" intracellular="" vesicle="" pool="" to="" the="" apical="" plasma="" membrane.="" vasopressin-induced="" aop2="" trafficking="" is="" controlled="" by="" intracellular="" camp="" which="" stimulated="" the="" camp-dependent="" kinase="" (pka)1.="" further,="" to="" evaluate="" the="" functionality="" of="" the="" v2r="" in="" the="" presence="" of="" ole="" in="" terms="" of="" camp="" production,="" permeable="" 8-br-camp="" was="" used="" as="" an="" external="" source="" of="" camp.="" treatment="" with="" 8-br-camp="" abolished="" the="" inhibitory="" effect="" elicited="" by="" ole="" on="" osmotic="" water="" permeability(ole/8-br-camp="188.7±3.56%,n=293" cells="" vs="" ole="85.93±2.27%," n="238"><0.001).therefore, to="" evaluate="" whether="" treatment="" with="" ole="" regulates="" aqp2="" trafficking="" by="" fine-tuning="" intracellular="" camp="" level,="" fluorescence="" resonance="" energy="" transfer(fret)technology="" was="" applied.="" compared="" to="" untreated="" cells="" (ctr),="" normalized="" netfret="" signals="" are="" reduced="" with="" ddavp="" stimulation(ddavp="77.86±3.13%," n="173" cells="" vs="" ctr="100.00±3.56%,n=276" cells;=""><0.00l; fig.2a),consistent="" with="" a="" significant="" increase="" of="" intracellular="" camp.="" conversely,="" treatment="" with="" ole="" prevented="" the="" ddavp="" dependent="" decrease="" of="" netfront="" signals="" consistent="" with="" a="" decrease="" of="" the="" vasopressin="" dependent="" camp="" release="" (ole/ddavp="92.97±3.46%," n="211" cells="" vs="" ddavp="77.86±3.13%," n="173" cells;=""><0.05; fig.2a).treatment="" with="" ole="" alone="" did="" not="" affect="" the="" intracellular="" cgmp="" level="" compared="" with="" cells="" left="" under="" basal="" conditions(ole="96.15±3.80%," n="184" cells="" vs="" ctr="100.00±3.56%,n=276" cells;=""><0.05).besides, western="" blotting="" studies(fig.2b)revealed="" that="" treatment="" with="" ole="" significantly="" reduced="" the="" ddavp="" induced="" increase="" of="" aqp2="" phosphorylation="" at="" serine="" 256(aqp2-ps256),="" indicating="" that="" aqp2="" phosphorylation="" and="" trafficking,="" in="" response="" to="" ole,="" are="" dependent="" on="" camp-pka="" function.="" the="" phosphorylation="" level="" of="" aqp2-ps256="" in="" response="" to="" ole="" was="" not="" statistically="" different="" from="" the="" control="" even="" though="" it="" tended="" to="" be="" reduced.="" to="" gain="" insight="" into="" the="" molecular="" signals="" underlying="" the="" action="" of="" ole,="" intracellular="" calcium="" dynamics="" were="" evaluated.="" mcd4="" cells="" endogenously="" express="" a="" functional="" calcium-sensing-receptor(casr)20,="" which="" plays="" an="" important="" role="" in="" controlling="" aqp2="" expression="" and="" trafficking'4.long="" term="" incubation="" with="" ole(0.1="" mg/ml)slightly="" increased="" the="" intracellular="" calcium="" level="" compared="" with="" untreated="" cells(fig.3;="" ole="209.0±13.45" nm,n="128" cells="" ys="" ctr="163.3±8.957" nm,n="97cells:"><0.05).co-incubation with="" ole(0.1="" mg/ml)="" and="" the="" selective="" nps2143(1um)antagonist="" of="" the="" casr="" abolished="" the="" ole="" induced="" intracellular="" calcium="" mobilization(ole/nps2143="168.8±11.43" nm,n="144" cells="" ys="" ole="209.0+13.45" nm.="" n="128"><0.05).to dissect="" further="" intracellular="" calcium="" signals="" in="" response="" to="" ole,="" functional="" experiments="" were="" also="" performed="" under="" acute="" stimulation="" with="" ole="" and="" nps2143.="" short-term="" treatment="" with="" ole="" (1="" mg/ml)="" evoked="" specific="" calcium="" oscillations(fig.4a)="" that="" were="" prevented="" when="" cells="" were="" pretreated="" with="" the="" selective="" casr="" inhibitor="" nps2143（10="" μm）.="" statistical="" analysis="" of="" the="" fluorescence="" responses（fig.="" 4b）revealed="" that="" incubation="" with="" ole="" increased="" cytosolic="" calcium="" by="" 97.06±6.93%(vs="" atp="" 100.00±2.28%).pretreatment="" with="" nps2143="" reduced="" the="" ole="" induced="" intracellular="" calcium="" increase(ole/nps2143="18.87±2.17%,n=59" cells="" vs="" ole="97.06±6.93%," n="50" cell;=""><0.001).to deeper="" investigate="" whether="" the="" effect="" of="" ole="" on="" avp-dependent="" water="" reabsorption="" occurred="" through="" the="" activation="" of="" the="" casr="" signaling,="" functional="" studies="" were="" performed="" as="" previously="" shown="" (fig.1b).="" interestingly,="" treatment="" with="" nps2143="" abolished="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ole="" on="" avp-regulated="" osmotic="" water="" permeability="" (fig.5;="" ole/ddavp/nps2143="190.4±7.15%," n="191 cells" vs="" ole/ddavp="88.70±1.86%,n=292"><0.001), suggesting="" that="" treatment="" with="" ole="" attenuated="" the="" avp-dependent="" water="" reabsorption="" through="" the="" activation="" of="" the="" casr="" signaling.="" compared="" to="" untreated="" cells,="" treatment="" with="" only="" nps2143="" did="" not="" affect="" the="" osmotic="" water="" permeability="" (fig.="">

<0.001 vs="" ctr;=""><0.05 vs="" ddavp).="" (b)="" lysates="" from="" mcd4="" cells="" were="" subjected="" to="" immunoblotting="" using="" abs="" against="" aqp2-ps256="" and="" totalaqp2.="" densitometric="" analysis="" of="" aqp2-ps256="" bands="" normalized="" to="" total="" aqp2="" bands="" (total="" aqp2)="" is="" reported="" in="" the="" histogram.="" data="" are="" expressed="" as="" means±s.e.m=""><0.05 or=""><0.001 vs="" ctr;=""><0.001 vs="" ddavp)."="" alt="Figure 2. Efects of OLE on AQP2 phosphorylation and cAMP production in MCD4 cells. (A) Evaluation of cAMP production by FRET experiments in MCD4 cells transiently transfected with H96 as described in the " materials="" and="" methods"="" section.="" histogram="" reports="" netfret="" measured="" in="" cells="" under="" basal="" conditions,="" treated="" with="" ddavp="" (100 nm="" for="" 30 min),="" ole="" (0.1 mg/ml="" o/n),="" or="" co-treated="" with="" ole="" and="" ddavp.="" te="" treatment="" with="" ddavp="" displayed="" a="" signifcantly="" higher="" camp="" production="" depicted="" as="" a="" reduced="" netfret="" signal.="" data="" are="" shown="" as="" single="" values="" in="" a="" scatter="" plot="" reporting="" means±s.e.m=""><0.001 vs="" ctr;=""><0.05 vs="" ddavp).="" (b)="" lysates="" from="" mcd4="" cells="" were="" subjected="" to="" immunoblotting="" using="" abs="" against="" aqp2-ps256="" and="" totalaqp2.="" densitometric="" analysis="" of="" aqp2-ps256="" bands="" normalized="" to="" total="" aqp2="" bands="" (total="" aqp2)="" is="" reported="" in="" the="" histogram.="" data="" are="" expressed="" as="" means±s.e.m=""><0.05 or=""><0.001 vs="" ctr;=""><0.001 vs="" ddavp)."="" width="480" height="320" border="0" vspace="0" style="width: 480px; height: 320px;">

Effeithiau OLE yn arennau llygod mawr sydd wedi'u chwistrellu ag OLE.

Er mwyn ymchwilio ymhellach i weithredoedd OLE, mae astudiaethau in vivo wedi'u cynnal. Yn benodol, mae llygod mawr wedi cael eu chwistrellu ag OLE (250 mg/kg/day) unwaith y dydd am dri diwrnod. Fel arall, cafodd llygod mawr eu trin ar y cyd ag OLE, am 3 diwrnod, a dDAVP, am 30 mun. Datgelodd gwerthusiad o mRNA CaSR a oedd wedi'i ynysu o ddwythell casglu arennol llygod mawr a'i brosesu ar gyfer PCR amser real (Ffig.6) gynnydd sylweddol mewn mRNA CaSR yn OLE(OLE=1.87±0.29, n{{ 10}} llygod mawr yn erbyn CTR=1.02±0.17, n=5 llygod mawr; t<0.05) and="" ole/ddavp(ole/ddavp="2.77±0.25," n="5" rats="" vs="" ctr="1.02±0.17,n=5" rats="" and="" ddavp="1.08±0.11," n="5" rats;=""><0.001)injected rats="" compared="" with="" control="" and="" ddavp="" animals,="" casr="" signaling="" can="" regulate="" the="" expression="" level="" of="" selective="" mirnas,="" which="" downregulated="" the="" expression="" level="" of="" aqp216.based="" on="" these="" findings,="" and="" considering="" that="" treatment="" with="" ole="" attenuated="" aqp2="" function,="" the="" level="" of="" mir-137,="" a="" known="" aqp2-targeting="" mir="" in="" the="" renal="" collecting="" duct,="" was="" evaluated.="" compared="" to="" control="" rats="" (fig.7),="" the="" level="" of="" mir-137="" in="" the="" renal="" collecting="" ducts="" of="" ole(ole="4.18.10-8±1.07.10-8ng,n=5" rats="" vs="" ctr="1.35.10-8±2.89.10-ng," n="5" rats;=""><0.05)and ole/ddavp="" rats="" was="" increased="" indicating="" that="" treatment="" with="" ole="" upregulates="" the="" casr="" signaling="" and="" the="" expression="" level="" of="" the="" mir-137(ole/ddavp="4.38.10-8±47.01·10-9ng," n="5" rats="" vs="" ctr="1.35.10-8±2.89.10-ng," n="5" rats;=""><0.01 and="" vs="" ddavp="2.1610-8±3.52.10-°ng," n="5"><0.05). to="" verify="" whether="" the="" increase="" of="" mir-137="" affected="" the="" expression="" level="" of="" aqp2,="" renal="" samples="" were="" processed="" for="" real-time="" pcr.="" data(fig.8a)revealed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" aqp2="" mrna="" were="" lower="" in="" ole(ole="0.36±0.06,n=5" rats="" vs="" ctr="1.00±0.08," n="5"><0.01)and ole/ddavp(ole/ddavp="0.65±0.12," n="5" rats="" vs="" ctr="1.00±0.08," n="5" rats="" and="" ddavp="1.03±0.16,n=5" rats;=""><0.05)renal samples="" compared="" with="" specimens="" obtained="" from="" control="" animals.="" besides,="" western="" blotting="" analysis(fig.="" 8b)showed="" that="" treatment="" with="" ole="" reduced="" the="" abundance="" of="" aop2="" regardless="" of="" ddavp="" stimulation(ole/ddavp="0.62±0.13,n=5" rats="" vs="" ddavp="1.04±0.16,n=5"><0.05)indicating that="" the="" ole-induced="" reduction="" of="" aqp2="" mrna="" expression="" level="" coincided="" with="" a="" decrease="" of="" aqp2="" protein="" content.="" to="" evaluate="" the="" effect="" of="" ole="" on="" aqp2="" phosphorylation="" and="" trafficking="" in="">aren, dadansoddiad blotio gorllewinol, ac astudiaethau confocal (Ffig.9). Mewn llygod mawr wedi'u chwistrellu gan OLE/dDAVP, gostyngwyd ffosfforyleiddiad AQP2 ar serine 256 yn sylweddol o gymharu â meinweoedd arennol anifeiliaid a gafodd eu trin â dDAVP(OLE/dDAVP=0. 77±0.16, n=5 llygod mawr yn erbyn dDAVP=2.16±0.25,n=5 llygod mawr; t<0.001,fig.9a),thereby confirming="" the="" in="" vitro="" findings(fig.2b).="" besides,="" confocal="" studies="" (fig.9b)="" of="" kidney="" sections="" revealed="" that="" exposure="" to="" ole="" prevented="" the="" aop2="" mem-brane="" localization="" that="" instead="" was="" observed="" in="" ddavp="" treated="">

Trafodaeth

Mae calsiwm yn negesydd mewngellol pwysig sy'n modiwleiddio llu o swyddogaethau cellog2. Gall signalau calsiwm annormal arwain at nifer o afiechydon gan gynnwys methiant y galon, canser, a gorbwysedd23. Mae rheolaeth benodol ar fynegiant a gweithgaredd proteinau sy'n rheoli signalau calsiwm mewngellol lluosog wedi'i brofi'n llwyddiannus i wynebu nifer o anhwylderau ac felly mae'n ddeniadol ar gyfer datblygu cyffuriau. Mae'r astudiaeth hon yn rhoi mewnwelediadau newydd i fecanwaith gweithredu OLE trwy ddangos ei allu i fodiwleiddio signalau calsiwm mewngellol trwy ysgogi'r CaSR sy'n ymwneud â mireinio'r masnachu mewn pobl a mynegiant AQP2 a achosir gan fasopressin. O dan amodau ffisiolegol, mae AQP2 yn chwarae rhan bwysig wrth reoli cartrefostasis dŵr y corff25. Mae ysgogi'r peiriannau mewngellol, sy'n arwain at leoleiddio AQP2 ar y bilen plasma apigol, yn arwain at gadw dŵr annormal a hyponatremia canlyniadol fel yn y syndrom o gyfrinachedd hormon gwrth-ddiwretig amhriodol (SIADH), sirosis yr iau, a methiant gorlenwad y galon -. Mewn llygoden model o SIADH, sy'n gysylltiedig â chlefyd yr arennau polycystic 1 haploinsufficiency, y lefel calsiwm mewngellol gwaelodol ei ostwng yn sylweddol o'i gymharu â'r lefel a fesurwyd yn y dwythellau casglu llygod math gwyllt. Fe wnaeth calsiwm mewngellol isel ddadreoleiddio gweithgaredd rhai ensymau gan gynnwys y protein phosphatase PP2A gan arwain at ddadreoleiddio ffosfforyleiddiad AOP2 yn serine 2561. Mewn cyferbyniad. cynyddodd actifadu'r CaSR gyda'r NPS-R568 calsimimetig y crynodiad calsiwm mewngellol a lleihau'r lefel cAMP mewn celloedd diffygiol PKD1. Yn bwysig, gall calsiwm sytosolig is-reoleiddio'r cyclase3 adenylated calsiwm-ataliadwy a thrwy hynny fireinio lefel fewngellol cAMP.Mewn celloedd MCD4, yn wir, gostyngodd ysgogiad y CaSR ag NPS-R568 AQP{2-pS256 trwy ataliad yr adenylate cyclase4.Yn yr astudiaeth hon, rhwystrodd triniaeth ag OLE y cynnydd yn y cAMP a'r AOP2-pS256 sy'n ddibynnol ar fasopressin, o bosibl yn eilradd i gynnydd yn y crynodiad calsiwm mewngellol. O bwys, roedd dod i gysylltiad â ffynhonnell allanol o cAMP gan ddefnyddio 8-Br-cAMP athraidd, wedi gwrthweithio effaith ataliol OLE ar y llwybr V2R yn sylweddol.

Gall lefel uchel o galsiwm sytosolig arwain at farwolaeth celloedd ac apoptosis. Fodd bynnag, roedd cynnydd parhaus mewn calsiwm mewngellol o 250 nM i fwy na 600 nM yn hybu goroesiad niwronaidd4.Mewn celloedd MCD4, nid yw triniaeth ag OLE ar 0.1 mg/ml yn dangos effaith sytotocsig. Yn y crynodiad hwn, cynyddodd OLE (0.1 mg / ml) y lefel calsiwm mewngellol ychydig. Datgelodd delweddu calsiwm fod ysgogiad acíwt gydag OLE wedi achosi cynnydd dros dro o galsiwm mewngellol trwy actifadu'r CaSR sy'n cael ei ddiddymu pan gafodd celloedd eu cynoreddu â'r antagonist CaSR dethol NPS2143, Mewn celloedd tiwbyn procsimol arennol, actifadu allosteric y CaSR ag I-ornithine lleihau'r cynhyrchiad ROS a thrwy hynny is-reoleiddio'r straen ocsideiddiol mitocondriaidd a achosodd apoptosis celloedd356. Ar ben hynny, dangosodd ein hastudiaeth flaenorol fod mynegiant yr amrywiadau enillion-swyddogaeth o'r CaSR wedi lleihau rhyddhau ROS a S-glutathionylation o AQP237. Gostyngodd deori gydag OLE y genhedlaeth ROS mewn celloedd MCD435 gan ddangos ei allu gwrthocsidiol. Serch hynny, ar hyn o bryd nid yw'n glir a yw OLE yn effeithio ar AOP2-S-glutathionylation. Datgelodd nifer o astudiaethau y gallai fod gan OLE neu oleuropein, sef prif gyfansoddyn OLE, rolau amddiffynnol trwy atal marwolaethau celloedd,39 Fodd bynnag, disgrifiwyd effeithiau dos-ddibynnol mewn llygod mawr sy'n derbyn OLE. Cafwyd ymatebion buddiol ar ddosau o 250 a 500 mg/kg. Mewn cyferbyniad, mewn crynodiadau uwch, gall triniaeth ag OLE gael effeithiau niweidiol o bosibl oherwydd gweithredoedd pro-oxidant sawl ffytocompounds. Yn yr astudiaeth hon, cafodd llygod mawr eu chwistrellu ag OLE ar ddogn o 250 mg / kg am dri diwrnod yn dangos upregulation CaSR. Mae lefel mynegiant y CaSR yn cael ei gynyddu gan gyfansoddion penodol sy'n gweithredu fel actifyddion allosteric y derbynnydd. Gostyngodd calcimimetig, yn wir, y calcheiddiadau fasgwlaidd trwy gynyddu biosynthesis y CaSR mewn celloedd cyhyrau llyfn fasgwlaidd dynol0. Yn y gystadleuaeth hon, ni ellir eithrio'r posibilrwydd y gall rhai cyfansoddion yn OLE weithredu fel modulators allosteric y CaSR. Ar y llaw arall, gall ysgogiad â fasopressin arwain at ryddhau IL-6 a allai gyfrannu at gynyddu lefel mynegiant y CaSR42.

Yn yr aren, mae symbyliad signalau CaSR yn gysylltiedig ag is-reoleiddio mynegiant AQP2 o bosibl trwy'r genhedlaeth miR-137. Disgrifiwyd hefyd nifer o miRNAs fasopressin-ddibynnol sy'n targedu mynegiant AQP243. Roedd trawsnewid gyda miR-32 a miR-137 wedi lleihau lefel mynegiant AOP2 mewn celloedd mpkCCDc14 yn sylweddol. Yn ddiddorol, gall OLE wanhau signalau llidiol a chael effeithiau amddiffynnol trwy fodiwleiddio lefel mynegiant sawl miRNAs". Yn benodol, mewn celloedd glioblastoma multiforme, roedd OLE yn hyrwyddo mynegiant gwahanol miRNA gan gynnwys miR-13745 sy'n ymwneud â is-reoleiddio y llwybr signalau Akt/mTOR 46. Mae'n werth nodi, mae triniaeth ag oleuropein yn atal signalau Akt/mTOR trwy actifadu CAMK ac AMPK a achosir gan galsiwm". Yn gyson â'r canfyddiadau hyn, mae deori ag OLE yn cynyddu calsiwm sytosolig, yn is-reoleiddio gweithgaredd PKA, ac yn lleihau maint y goden mewn model meithrin celloedd 3D48. Gyda'i gilydd mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu y gallai OLE fod yn ddefnyddiol wrth drin anhwylderau a nodweddir gan ddadreoleiddio deinameg calsiwm mewngellol sy'n gysylltiedig ag is-reoleiddio signalau CaSR.

Mae detholiad dail olewydd yn cynnwys sawl cydran bioactif, gan gynnwys polyffenolau, ffibrau a mwynau49. Ar hyn o bryd, nid yw'n glir a allai un cyfansawdd neu gyfuniad synergaidd o ffytocompounds yn OLE fod yn fuddiol wrth fodiwleiddio ymatebion mewngellol. Mae'r dyfyniad a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth hon wedi'i gymhwyso fel ychwanegyn bwyd posibl ac felly mae'n bwysig diffinio effaith ffisiolegol y darn ei hun o ystyried y gall yr aren hidlo sawl ffenol, gan gynnwys hydroxytyrosol, a'u hadfer yn yr wrin50. Bydd astudiaethau pellach yn darparu effeithiolrwydd cydrannau penodol a all reoleiddio signalau calsiwm mewngellol yn weithredol trwy'r CaSR. I gloi, mae'r astudiaeth hon yn darparu tystiolaeth y gellir ystyried OLE yn gynorthwyydd posibl newydd sy'n ddefnyddiol i liniaru anhwylderau a nodweddir gan leihad mewn mynegiant CaSR yn ogystal â signalau ac sy'n effeithio ar athreiddedd dŵr arennol.

Defnyddiau a dulliau

Cemegau a gwrthgyrff.Prynwyd yr holl gemegau a gwrthfiotigau gan Merck (Merck KGaA, Darmstadt, yr Almaen). Prynwyd Calcein-AM, Fura-2-AM, cyfryngau meithrin celloedd, serwm buchol ffetws (FBS), a Super Signal West Pico Chemiluminescent Substrates gan Thermo Fisher Scientific (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA). {2}} (AQP2) wedi'i ganfod gan ddefnyddio gwrthgyrff penodol (C-tail Ab) a godwyd yn erbyn peptid synthetig sy'n cyfateb i'r 15 asid amino C-terminal olaf o AQP2 dynol!. Rhoddwyd gwrthgyrff AQP2-pS256 yn garedig gan yr Athro Peter Deen. Cafwyd gwrthgyrff cyplu perocsidas gwrth-gwningen gafr eilaidd gan Merck (Merck KGaA, Darmstadt, yr Almaen). Prynwyd gwrthgorff gafr-gwrth-gwningen eilaidd ynghyd â Alexa-488 oddi wrth Thermo Fisher Scientific (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA).

Cynhyrchu echdynnu llawn ffenolig a nodweddu cemegol.Cynhyrchwyd detholiad llawn ffenolig o ddail olewydd fel yr adroddwyd yn Ranieri et al.35. Ar ôl melino gyda chymysgydd (Waring-Commercial, Torrington, CT, UDA), ychwanegwyd dŵr ddH2O (cymhareb 1/20, w/y) ac yna'n destun uwchsain (CEIA, Viciomaggio, yr Eidal) dair gwaith , am 30 munud ar 35±5 gradd bob tro. Yn olaf, cafodd y darnau eu hidlo trwy bapur hidlo, eu lyoffileiddio, a'u storio ar -20 gradd C. Cafodd y darnau a gafwyd eu hidlo â hidlwyr neilon o 0.45 μm （Merck KGaA, Darmstadt, yr Almaen） a'u defnyddio ar gyfer nodweddu cemegol. Perfformiwyd cyfanswm y cynnwys ffenol, y gweithgaredd gwrthocsidiol, a'r adnabod cyfansoddion ffenolig sengl yn ôl Difonzo et al.. Dangosodd yr OLE gynnwys polyphenols, a bennir gan Folin-Ciocalteu, sy'n hafal i 195 mg. cywerthyddion asid galig (GAE) a gweithgaredd gwrthocsidiol, a bennir gan ABTS (2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-halen diammoniwm asid sulfonic), sy'n cyfrif am 750 μmol TE (cyfwerth â Trolox) .

Meithriniad celloedd a thriniaethau.Defnyddiwyd celloedd MCD4 dwythell gasglu cortigol y llygoden, sy'n mynegi AQP2 dynol yn sefydlog a'r V2R-Rluc chimerig fel model arbrofol18. Tyfwyd celloedd mewn cymysgedd 1:1 o gyfrwng Eagle's wedi'i addasu gan Dalbec-cos ac F-12 wedi'i ategu â serwm buchol ffetws 5 y cant (y/y). 1 y cant (y/y) L-glutamin ac 1 y cant penisilin/streptomycin, 5 μM dexamethasone,400 ug/ml G418 (ar gyfer ymwrthedd AQP2) ac 1 ug/ml puromycin (ar gyfer ymwrthedd V2R-Rluc) , mewn awyrgylch llaith o 5 y cant CO, ar 37 gradd . Gadawyd celloedd MCD4 o dan gyflwr gwaelodol (CTR) neu eu trin yn hirdymor ag OLE ar 0.1 mg/ml O/N, dDAVP ar 100 nM am 30 munud, neu eu cyd-drin ag OLE a dDAVP neu NPS2143 yn l μM O/N . Fel arall, roedd celloedd yn agored i 8-Br-cAMP ar 500 μM am 45 munud, cynhaliwyd arbrofion tymor byr gydag OLE ar 1 mg/ml am 5 munud ac NPS2143 ar 10 μM am 15 munud. Perfformiwyd arbrofion 3-5 o weithiau annibynnol gan ddefnyddio celloedd o wahanol rannau.

Model a thriniaethau anifeiliaid.Cyflawnwyd yr holl weithdrefnau yn unol â Chanllawiau Cenedlaethol Denmarc ar gyfer gofalu a thrin anifeiliaid arbrofol a chanllawiau cyhoeddedig y Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol, Cymeradwywyd y protocolau gan y Sefydliad Meddygaeth Glinigol. Prifysgol Aarhus, yn ôl y trwyddedau ar gyfer defnyddio anifeiliaid arbrofol a gyhoeddwyd gan Weinyddiaeth cyfiawnder Denmarc (Rhif cymeradwyo 2015-15-0201-00658). Perfformiwyd astudiaethau ar lygod mawr Wistar gwrywaidd sy'n oedolion gyda phwysau cychwynnol o 200-225 g. Roedd anifeiliaid yn cael eu cynnal ar ddeiet cnofilod safonol (Altromin, Lage, yr Almaen) ac roedd ganddynt fynediad am ddim i ddŵr tap. Yn ystod yr arbrofion, cafodd llygod mawr eu cartrefu mewn grwpiau o ddau fesul cawell, gyda chylch tywyll golau 12:12 h, tymheredd o 21 ± 2 gradd C, a lleithder o 55 ± 2 y cant. Cafodd pump o lygod mawr eu trin â chwistrelliad isgroenol o 1 ng dDAVP (Sigma-Aldrich, Glostrup, Denmarc) mewn 200 ul hallt/anifail, ac roedd pum llygoden fawr wedi'i thrin â cherbyd yn gweithredu fel rheolyddion. Ar ôl 30 munud, lladdwyd y llygod mawr, a phroseswyd yr arennau fel y disgrifir isod.

Celloedd a lysates IMCD.Cafodd celloedd eu tyfu ar {{0}} dysglau mm a'u hailddarparu mewn byffer yn cynnwys 220 mM mannitol, 70 mM swcrose, {{1{0}}. 5 M EGTA pH 8.0,0.5 M EDTA pH 8.0,1 M Tris-HCl pH 7.4 ym mhresenoldeb proteasau (1 mM PMSF, 2 mg/ml leupeptin, a 2 mg/ml pepstatin A) a ffosffatas (10 mM NaF a Atalyddion sodiwm orthofanadad 1 mM. Fel arall, paratowyd adrannau arennau o tua 0.5 mm a'u cydbwyso am 10 munud mewn byffer yn cynnwys 1i8 mM NaCl, 16 mM Hepes, 17 mM Na-Hepes, 14 mM glwcos, 3.2 mM KCl, 2.5 mM CaCl2,1.8 mM MgSO4,a 1.8 mM KH2PO4 (pH7.4). Briwgwyd papila arennol â siswrn yn yr un byffer ym mhresenoldeb proteasau (1 mM PMSF, 2 mg/mlleupeptin, a 2mg/mlpepstatin A) a ffosffatasau (10 mM NaF a 1 mM sodiwm orthovanadate) atalyddion.Ar ôl soniga-tion (60 kHz am 5 s), lysates yn centrifuged ar 12,000× g am 10 munud.Casglwyd y supernatants a'u defnyddio ar gyfer astudiaethau immunoblotting'8.

Microsgopeg confocal.Cynhaliwyd astudiaethau confocal fel y disgrifiwyd yn flaenorol1. Yn fyr, tyfwyd celloedd ar fewnosodiadau PET diwylliant celloedd a'u trin fel y disgrifir uchod. Fel arall, bu adrannau arennau a gafwyd o reolaeth, OLE, dDAVP, ac OLE gyda llygod mawr wedi'u trin â dDAVP yn destun arbrofion imiwnofflworoleuedd fel y disgrifiwyd yn flaenorol. Cafwyd delweddau gyda microsgop fflworoleuedd sganio laser confocal Leica TCS SP2 (Leica Microsystems, Heerbrugg, y Swistir). Electrofforesis gel ac imiwnoblotting. Gwahanwyd proteinau ar geliau polyacrylamid di-staen 12 y cant (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, U.D.A.) o dan amodau lleihau fel y disgrifiwyd yn flaenorol=5,52. Yn gryno, trosglwyddwyd bandiau protein i bilenni Immobilon-P (Merck KGaA, Darmstadt, yr Almaen) a'u himiwneiddio gan ddefnyddio gwrthgyrff gwrth-AQP2 (Pre-C-tail Ab) a gwrth-AQP{2-pS256). Cafwyd signalau imiwnoweithredol gan ddefnyddio Is-haenau Chemiluminescent Super Signal West Pico gyda System Chemidoc (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, UDA). Cafodd bandiau eu normaleiddio i gyfanswm protein gan ddefnyddio technoleg di-staen (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, UDA). Perfformiwyd dadansoddiad densitometreg gan ddefnyddio ImageLab (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, UDA) a'i ddadansoddi gan ddefnyddio GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA, UDA).

Assay athreiddedd dŵr.Mesurwyd athreiddedd dŵr osmotig fel y disgrifiwyd yn flaenorol43. Yn gryno, cafodd celloedd MCD4 eu tyfu ar 40- orchuddion slipiau gwydr mm. Ar ôl triniaethau, llwythwyd celloedd â 10 μM o Calcein-AM athraidd pilen am 45 munud ar 37 gradd ,5 y cant CO, yn DMEM/F-12. Cafodd slipiau clawr eu gosod mewn siambr darlifiad (FCS2 Closed Chamber System, BIOPTECHS, Butler, USA). Perfformiwyd mesurau gan ddefnyddio microsgop TE4S gwrthdro (microsgop Nikon Eclipse, Tokyo, Japan) wedi'i gyfarparu ar gyfer mesuriadau fflworoleuedd un gell a dadansoddi delweddu. Roedd y samplau wedi'u llwytho Calcein-AM yn gyffrous ar 490 nm. Mesuriadau fflworoleuedd, yn dilyn isosmotig (140 mM NaCl.5 mM KCl, 1 mM MgCl..1 mM CaCl., 10 mM Hepes asid sylffonig, 5 mM Glwcos,pH7.4) neu hyperosmotig (hydoddiant isosmotig wedi'i ychwanegu gyda 135 mM Mannitol) atebion . eu cynnal gan ddefnyddio meddalwedd Metafluor (Dyfeisiau Moleciwlaidd, MDS Analytical Technologies, Toronto, Canada). Cofnodwyd data fflworoleuedd cwrs amser ar ôl darlifo celloedd ag atebion iso-a hyperosmotig. Mesurwyd cwrs amser crebachu celloedd fel y cysonyn amser (Ki, wedi'i fynegi fel 1/r, eiliad), paramedr sy'n cyfateb i athreiddedd dŵr, a gafwyd trwy osod data â swyddogaeth esbonyddol a ddadansoddwyd gan ddefnyddio GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego , CA, UDA).

Mesuriadau trosglwyddo egni cyseiniant fflworoleuedd.I werthuso newidiadau cAMP mewngellol, defnyddiwyd technoleg trosglwyddo egni cyseiniant fflworoleuedd (FRET). Ar gyfer arbrofion FRET, trosglwyddwyd celloedd ag amgodio plasmid y synhwyrydd H96 yn cynnwys y motiff consensws cAMP-rhwymo o EPAC1 wedi'i ymgorffori rhwng y protein fflworoleuol cyan (CFP) a cp173Venus-Venus fel y dangoswyd yn flaenorol32.33.54. Roedd yr amgodio plasmid y stiliwr H96 yn anrheg gan Dr.K. Jalink. Perfformiwyd delweddu celloedd sy'n mynegi ECFP-a/neu EYFP a chanfod FRET gan ddefnyddio microsgop TE2000-S gwrthdro (microsgop Nikon Eclipse, Tokyo, Japan). Cywirwyd a dadansoddwyd pob delwedd fel y dangoswyd yn flaenorol55.

Mesuriadau calsiwm mewngellol. Perfformiwyd mesuriadau calsiwm mewngellol fel y dangoswyd yn flaenorol56. Yn gryno, cafodd celloedd MCD4 eu llwytho â 4 μM Fura-2 AM am 15 munud ar 37 gradd mewn DMEM/F-12. Defnyddiwyd hydoddiant Ringer i ddarlifo celloedd yn ystod yr arbrawf a oedd yn cynnwys 140 mM NaCl, 5 mM KCl 1 mM MgCl, 10 mM HEPES, 5 mM Glwcos, 1.8 mM CaCl, pH 7.4. Mewn mesuriadau fflworoleuedd, gosodwyd y gorchuddion â chelloedd wedi'u gorlwytho mewn siambr darlifiad (System Siambr Caeedig FCS2. BIOPTECHS. Butler, UDA). Perfformiwyd mesuriadau gan ddefnyddio microsgop gwrthdro TE{2000-S (microsgop Nikon Eclipse, Tokyo. Japan), Cafodd cymhareb dwyster fflworoleuedd ar 340 a 380 nm ei blotio a'i gyfrifo fel y newid mewn fflworoleuedd. Yn benodol, cymharwyd ysgogiad gydag OLE (1 mg/ml) neu NPS2143 (10 μM) yn yr un math o gell â'r rhai a gafwyd ar ôl symbyliad gyda dos mwyaf posibl o'r agonist cyfrwng calsiwm ATP (100 μM) a ddefnyddiwyd fel a. rheolaeth fewnol (100 y cant).

Mesurwyd lefel calsiwm mewngellol ar gyflwr sefydlog a'i raddnodi fel y disgrifiwyd gan Grynkiewicz57. Defnyddiwyd OLE ac NPS2143 yn y tymor hir ar 0.1 mg/ml a l uM, yn y drefn honno, a chafodd pob sampl ei raddnodi trwy ychwanegu 5 μM ionomycin ym mhresenoldeb 1 mM EGTA (Rm.) wedi'i ddilyn gan 5 μM ionomycin mewn 5 mM CaCl, (RMA).

Dadansoddiad PCR amser real o mRNA AQP2 a CaSR mewn llygod mawr sy'n rheoli ac yn cael eu trin.Perfformiwyd arbrofion PCR amser real i fesur mynegiant cymharol mRNA yn y ddwythell casglu medwla fewnol (IMCD) wedi'i hynysu oddi wrth reolaeth a phapillae arennau llygod mawr wedi'u trin. Gwnaed sleisys arennau o tua 0.5 mm a'u cydbwyso am 10 munud mewn byffer yn cynnwys 118 mM NaCl, 16 mM HEPES, 17 mM Na-Hepes, 14 mM glwcos, 3.2 mM KCl, 2.5 mM CaCl2,1.8 mM MgSO4, a 1.8 mM KH2PO4 (pH 7.4). Cafodd y papila arennol ei ynysu o dan stereomicrosgop. Yna cafodd sbesimenau o lygod mawr wedi'u rheoli a'u trin eu briwio â siswrn yn uniongyrchol yn Trizol (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA). UDA), yn unol ag awgrymiadau'r gwneuthurwr (25C am 10 munud; 42C am 60 munud; 85C am 5 munud). Perfformiwyd ymhelaethiad PCR amser real trwy ddefnyddio TagMan Fast Advanced Master Mix gyda phrofion CaSR, AOP2, a GAPDH (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA) yn System PCR Real-Time StepOne (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA ), gan osod yr amodau beicio thermol fel y nodir gan y gwneuthurwr (95 gradd C am 20 s; 40 cylch yn ail ar 95·C am 1 s a 60 gradd C am 20 s). Mynegwyd y canlyniadau fel 2- gwerthoedd (meintioli cymharol) gyda △ACt=(Ct target-Ct GAPDH) wedi'i drin-(Ct target-Ct GAPDH)Sham1.

gwerthusiad miRNA{0}} o ran rheoli a thrin llygod mawr.gwerthuswyd cynnwys miRNA{{0}} sy'n rheoli a dwythell casglu medwla mewnol llygod mawr wedi'i drin gan ddefnyddio Assays miRNA Uwch TagMan (has-miR-137; Assay ID; 477904 mir; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA .US.A), a alluogodd hysbysiad hynod sensitif a phenodol o miRNA aeddfed gan ddefnyddio PCR meintiol. Gwnaed sleisys arennau o tua 0.5 mm a'u cydbwyso am 10 munud mewn byffer sy'n cynnwys 118 mM NaCl, 16 mM HEPES, 17 mM Na-Hepes, 14 mM glwcos, 3.2 mM KCl, 2.5 mM CaCl2, 1.8 mM MgSO4, a 1.8 mM KH2PO4(pH7.4).Cafodd y papila arennol ei ynysu o dan stereomicrosgop. Yna cafodd sbesimenau o lygod mawr wedi'u rheoli a'u trin eu briwio â siswrn yn uniongyrchol yn Trizol (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA) i echdynnu cyfanswm RNA. Pecyn Synthesis miRNA cDNA Uwch TaqMan （Catalog n²∶A25576; Defnyddiwyd Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA） i gael synthesis cDNA, yn ôl y protocol a ddarparwyd gan y gwneuthurwr (adwaith cynffon Poly(A); adwaith ligation; adwaith trawsgrifio gwrthdro; adwaith miR-Amp). Cafodd yr RNA synthetig (UUAUUGCUUAAGAAUACGCGUAG) â 59-ffosffor ei syntheseiddio gan Thermo Fisher Scientific a'i ddefnyddio i berfformio cromlin raddnodi i ryngosod gwerthoedd sampl miRNA ac i gael gwerthusiad manwl gywir (mewn nanogramau) o gynnwys miR-137 yn samplau16, trwy ddefnyddio GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA, UDA).

Dadansoddiad ystadegol.Mae'r holl werthoedd yn cael eu hadrodd fel modd ± SEM Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol gan ANOVA un ffordd ac yna prawf cymariaethau lluosog Newman-Keuls gyda *p<0.05 considered="" statistically="" different="">

Datganiadau, cymeradwyaeth foesegol, a chydsyniad i gymryd rhan.Perfformiwyd astudiaethau anifeiliaid yn unol â Chanllawiau Cenedlaethol Denmarc ar gyfer gofalu a thrin anifeiliaid arbrofol a chanllawiau cyhoeddedig y Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol. Cymeradwyodd pwyllgor moeseg gofal anifeiliaid y Sefydliad Meddygaeth Glinigol, Prifysgol Aarhus y protocolau astudio, yn ôl y trwyddedau ar gyfer defnyddio anifeiliaid arbrofol a gyhoeddwyd gan Weinyddiaeth Gyfiawnder Denmarc (Rhif Cymeradwyo 2015-15-0201-00658). Mae'r awduron yn cadarnhau bod pob dull wedi'i wneud yn unol â chanllawiau a rheoliadau perthnasol. Ar ben hynny, mae'r awduron yn cadarnhau bod yr astudiaeth wedi'i chynnal yn unol â chanllawiau ARRIVE.

Cyfeiriadau

1. El, SN a Karakaya, S. Coeden olewydd (Olea europaea) yn gadael effeithiau buddiol posibl ar iechyd dynol. Nutr. Parch 67, 632–638.

2. Javadi, H., Yaghoobzadeh, H., Esfahani, Z., Reza Memarzadeh, M. & Mehdi Mirhashemi, S. Effeithiau dyfyniad dail olewydd ar ymateb metabolig, swyddogaethau'r afu a'r arennau a biomarcwyr llidiol mewn cleifion gorbwysedd. PJBS 22, 342–348.

3. Saibandith, B., Spencer, JPE, Rowland, IR & Commane, DM Olive polyphenols, a'r syndrom metabolig. Moleciwlau

4. Cherif, S. et al. Treial clinigol o echdynnyn Olea titradedig wrth drin gorbwysedd rhydwelïol hanfodol. J. Pharm. Gwlad Belg. 51, 69–71 (1996).

5. Difonzo, GRA et al. Mae darnau gwyrdd o gyltifar olewydd cortina yn gadael nodweddu gwrthocsidiol a gweithgaredd biolegol. J. Funct. Bwydydd 31, 8.

6. Herrero, M. et al. Posibiliadau newydd ar gyfer prisio sgil-gynhyrchion olew olewydd. J. Chromatogr. 1218, 7511–7520.

7. Marchetti, C. et al. Mae detholiad dail olewydd wedi'i gyfoethogi gan Oleuropein yn effeithio ar ddeinameg calsiwm ac yn amharu ar hyfywedd celloedd mesothelioma malaen. eCAM 2015, 908493.

8. Romero, M. et al. Effeithiau gwrthhypertensive dyfyniad dail olewydd wedi'i gyfoethogi ag oleuropein mewn llygod mawr gorbwysedd digymell. Swyddogaeth Bwyd 7, 584–593.

9. Hall, JE Camweithrediad arennol, yn hytrach na chamweithrediad fasgwlaidd anarennol. Yn cyfryngu gorbwysedd a achosir gan halen. Cylchrediad 133, 894–906.

10. Wilson, JL, Miranda, CA & Knepper, MA Vasopressin a rheoleiddio acwaporin-2. Clin. Exp. Nephrol. 17, 751–764.