Cymeriant Llafar O Esgyrn Cyw Iâr Peptidau Colagen Gwrth-Heneiddio Croen Mewn Llygod Trwy Reoliad Diraddio Colagen A Synthesis, Atal Llid Ac Ysgogi Lysosomau Rhan 1
Jul 01, 2022
Cysylltwchoscar.xiao@wecistanche.comam fwy o wybodaeth
Crynodeb:Mae effaith diet ar heneiddio croen wedi dod yn bwnc ymchwil diddorol. Mae astudiaethau blaenorol wedi canolbwyntio'n bennaf ar effeithiau buddiol peptidau colagen sy'n deillio o organebau morol ar y croen sy'n heneiddio pan gânt eu gweinyddu ar lafar, tra bod effeithiau buddiol peptidau colagen sy'n deillio o ddofednod ar groen sy'n heneiddio wedi cael eu hadrodd yn anaml. Yn yr astudiaeth hon, paratowyd peptidau colagen o asgwrn cyw iâr trwy hydrolysis ensymatig, ac ymchwiliwyd i effaith a mecanwaith gweithredu peptidau colagen a weinyddir ar lafar ar liniaru heneiddio croen a achosir gan UV ynghyd â D-galactose. Dangosodd y canlyniadau fod gan golagen asgwrn cyw iâr nodweddion colagen nodweddiadol, ac roedd y peptidau colagen asgwrn cyw iâr (CPs) yn bennaf yn peptidau moleciwlaidd bach gyda phwysau moleciwlaidd o<3000 da.="">estyniad bywyd cistancheDangosodd arbrofion in vivo fod CPs yn cael effaith liniaru sylweddol ar groen heneiddio, a nodir gan y newidiadau yng nghyfansoddiad a strwythur y croen sy'n heneiddio, gwelliant yn lefel gwrthocsidiol y croen, ac atal llid; roedd cydberthynas gadarnhaol rhwng yr effaith liniaru a'r dos o CPs. Dangosodd ymchwiliad pellach fod CPs yn lleihau lefel ocsidiad croen yn gyntaf, yn atal mynegiant y ffactor trawsgrifio allweddol AP-1 (c-Jun a c-Fos), yna'n actifadu llwybr signalau TGF- /Smad i hyrwyddo synthesis colagen , atal mynegiant MMP-1/3 i atal diraddio colagen, ac atal llid y croen i liniaru heneiddio croen mewn llygod. Ar ben hynny, canfu trawsgrifiad y croen y gallai lysosomau a weithredir ar ôl rhoi CPs drwy'r geg fod yn llwybr pwysig i CPs mewn heneiddio gwrth-groen, ac mae'n deilwng o ymchwil pellach. Roedd y canlyniadau hyn yn awgrymu y gellid defnyddio CPs fel elfen faethol gwrth-heneiddio swyddogaethol.
Geiriau allweddol:peptidau colagen; wrth heneiddio; trawsgrifiad croen; synthesis colagen; lysosomau
1. Rhagymadrodd
Mae'r cyfnod iechyd, yn dilyn diet iach yn gywir, yn pennu rôl maeth mewn heneiddio croen, ac yn penderfynu beth i'w fwyta i gynnal croen ifanc ac iach yn broblemau anodd. Croen yw organ fwyaf y corff, sy'n cynnwys yr epidermis, y dermis a'r haen isgroenol. Mae'n gweithredu fel rhwystr i amddiffyn y corff rhag ffactorau allanol ac mae hefyd yn chwarae rhan mewn iechyd a harddwch[1]. Mae heneiddio croen yn broses gymhleth, sy'n cael ei rhannu'n heneiddio cronolegol a heneiddio ffotograffau ac mae ffactorau mewnol ac allanol yn effeithio arni. Mae'r prif nodweddion yn cynnwys cronni difrod macromoleciwlaidd yn y gell, dirywiad swyddogaeth bôn-gelloedd (hyrwyddo adnewyddu meinwe), a cholli cyfanrwydd corfforol y croen yn raddol [2]. Mae'r prif fecanweithiau moleciwlaidd sy'n achosi heneiddio croen yn bennaf yn cynnwys straen ocsideiddiol, byrhau telomere, difrod DNA, treiglad genetig, rheoleiddio micro-RNA, cronni cynnyrch terfynol glyciad uwch, a heneiddio llidus [3]. Ffoto-heneiddio yw hyperplasia epidermaidd y croen, sychu, a diraddiad matrics allgellog a achosir gan ymbelydredd uwchfioled.cistanche nzPrif achos ffoto-heneiddio yw rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) a gynhyrchir gan ymbelydredd uwchfioled sy'n cyfryngu mynegiant metalloproteinases matrics (MMPs) a pro-colagen math-I trwy lwybrau signal fel y signalau protein kinase-activated mitogen (MAPK) llwybr, gan arwain at ddiraddio'r matrics allgellog (ECM) yn y croen ac apoptosis ffibroblastau [4]. Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae cynnal iechyd y croen ac oedi heneiddio wedi dod yn boblogaidd, ac mae dod o hyd i gynhwysion naturiol fel peptidau bioactif a polyphenolau â swyddogaethau gwrthocsidiol a gwrth-heneiddio wedi dod yn fan cychwyn ymchwil [5].
Fodd bynnag, mae gan golagen bwysau moleciwlaidd mawr ac mae'n anodd ei amsugno a'i ddefnyddio'n uniongyrchol, tra bod gan y peptidau colagen moleciwlaidd bach ar ôl hydrolysis colagen weithgaredd biolegol cryfach a chyfradd amsugno uchel [6]. Yn y cyfamser, mae cymhwysiad eang colagen mewn bwyd, meddygaeth, peirianneg meinwe, colur, a meysydd eraill wedi gwneud peptidau colagen â phwysau moleciwlaidd is, effeithlonrwydd amsugno uwch, a gweithgaredd biolegol cryfach yn ffefryn newydd mewn bwyd swyddogaethol ac ymchwil feddygol[{{1) }}]. Mae peptidau colagen yn fach, sy'n cynnwys 2-20 gweddillion asid amino a geir ar ôl hydrolysis colagen. Fe'u defnyddir fel atodiad dietegol ar gyfer trin heneiddio croen oherwydd eu swyddogaethau gwrthlidiol a gwrthocsidiol posibl a rheoleiddio imiwnedd ac effeithiau gwrthocsidiad ac amlhau ar ffibroblastau croen [10].
Gall Cistanche gwrth-heneiddio
Ar ôl gweinyddiaeth lafar, mae peptidau colagen yn cael eu hamsugno ar ffurf peptidau bach a'u cludo'n gyflym i'r gwaed, ac yn y pen draw, i'r arennau, y croen, y cymalau a meinweoedd eraill i'w storio a'u defnyddio. Ar ôl 14 diwrnod, roedd lefelau ymbelydredd yn parhau i fod yn uchel yng nghroen llygod a oedd wedi'u gosod â pheptidau colagen â label C14-. Gall y peptidau colagen gael eu hamsugno a'u defnyddio bron yn llwyr gan y corff, tra bod cyfradd amsugno a defnyddio colagen yn 50-60 y cant [6,11-13] yn unig. Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae hydrolysadau colagen o groen pysgod, graddfa pysgod, asgwrn buwch, croen buwch, a chroen mochyn wedi'u hadrodd yn eang i gael effeithiau buddiol ar liniaru heneiddio croen ac wedi cael cryn sylw gan ymchwilwyr. Er enghraifft, mae peptidau colagen sydd wedi'u hynysu o groen carp arian yn hyrwyddo synthesis pro-colagen ac yn atal mynegiant protein AP-1, MMP-1, a MMP-3 trwy actifadu llwybr TGF-/Smad i atal diraddio colagen ac atgyweirio celloedd croen â llun [14]. Gall gweinyddu peptidau colagen buchol ar lafar wella ymlacio'r croen, cynyddu cynnwys colagen a gweithgaredd ensymau gwrthocsidiol, atgyweirio ffibr colagen, a normaleiddio cymhareb colagen y croen mewn llygod sy'n heneiddio [15]. Fodd bynnag, mae peptidau colagen o wahanol ffynonellau yn cael effeithiau gwahanol. Mae maint a strwythur peptidau hynod weithgar yn y gwaed ar ôl rhoi peptidau colagen ar lafar yn dibynnu ar ffynhonnell colagen[10]. Roedd effaith amddiffynnol peptid colagen a echdynnwyd o groen ieir yn erbyn anaf ffibroblast a achosir gan UVA yn well nag effaith y peptid colagen a echdynnwyd o groen mochyn, buwch neu tilapia, ac roedd ei effaith yn cyfateb i dripeptid sy'n deillio o golagen (Gly-Pro). -Hyp)[16]. Mae credoau crefyddol a phryderon am glefydau (fel clefyd y gwartheg gwallgof) wedi arwain pobl i symud yn raddol gyfeiriad datblygiad colagen a'i gynhyrchion o famaliaid daearol i ddofednod ac organebau morol [17]. Fel prif sgil-gynnyrch prosesu dofednod, mae asgwrn cyw iâr yn ffynhonnell addawol o gynhyrchion colagen. Mae nid yn unig yn lleihau gwastraff adnoddau a llygredd amgylcheddol ond hefyd yn caniatáu defnydd effeithlon o sgil-gynhyrchion. Felly, yn yr astudiaeth hon, gwnaethom ddefnyddio peptidau colagen asgwrn cyw iâr fel deunyddiau crai, gyda llygod noethlymun yn cael eu trin â D-galactose ac UV i achosi heneiddio'r croen, fel y model i werthuso effaith gweinyddiaeth lafar y peptid colagen ar liniaru heneiddio croen llygod a phenderfynu ar y mecanwaith perthnasol.
2. Defnyddiau a Dulliau
2.1. Defnyddiau, Cemegau, ac Anifeiliaid
Darparodd ffermydd cyw iâr Prifysgol Amaethyddol Yunnan (Kunming, Tsieina) yr ieir wedi'u treulio, a oedd yn cael eu gwahanu, eu sychu a'u malu i gael y pryd asgwrn cyw iâr. Prynwyd citiau Su-peroxide dismutase (SOD), catalase (CAT), a glutathione peroxidase (GSH-PX) gan Soleibao Biotechnology Co., Ltd. (Beijing, Tsieina). Hydroxyproline (HYP), interleukin-1 (IL-1 ), matrics metalloproteinase-1/3 (MMP-1/3), math I pro-colagen, ac asid hyalwronig( Prynwyd pecynnau imiwno-assay (ELISA) sy'n gysylltiedig â ensymau (HA) gan Sefydliad Biobeirianneg Nanjing Jiancheng (Nanjing, Tsieina). Prynwyd llygod benywaidd iach BALB/C heb wallt (18± 2g, chwe wythnos oed) oddi wrth Nanjing Junke Bioengineering Corporation, Ltd. (Nanjing, Tsieina) gyda rhif trwydded: SCXK(SU)2016-0010. Prynwyd Pepsin a papain gan Aladdin Biochemical Technology Co, Ltd. (Shanghai, Tsieina), ac roedd cemegau eraill o radd ddadansoddol. Ymdriniwyd â'r holl lygod yn dilyn Rheoliadau Gofal Anifeiliaid Labordy Talaith Yunnan a'u cymeradwyo gan Bwyllgor Gofal a Defnydd Anifeiliaid Prifysgol Amaethyddol Yunnan (ID cymeradwyo: YAUACUC01).
2.2. Paratoi Collagen a Chyfansoddiad Asid Amino
Dilynodd echdynnu a chyfansoddiad asid amino colagen asgwrn cyw iâr y dull a ddisgrifiwyd gan Lieut al. [18] gyda mân addasiadau. Cafodd y powdr asgwrn cyw iâr ei droi a'i socian mewn 0.05 M NaOH,10 y cant n-hecsan, a 0.25 MEDTA toddiant (pH 7.5) yn cymhareb o 1/10(m/o). Ar bob cam, cafodd y sampl ei drin am 36h, a newidiwyd yr hydoddiant socian bob 6h i chwyddo'r powdr esgyrn a thynnu proteinau, braster a mwynau nad ydynt yn colagen o'r powdr esgyrn. Golchwyd y sampl â dŵr pur i niwtraliaeth ar ôl pob cam. Cymysgwyd y pryd asgwrn cyw iâr wedi'i drin ymlaen llaw â 0.5 M asid asetig rhewlifol yn cynnwys 0.1 y cant (w / v) pepsin ar gymhareb solid-i-hylif o 1:10 (wo/v) a'i droi a'i dynnu'n barhaus ar 4 gradd ar gyfer 48 h. Yna cafodd ei hidlo, a chafodd yr hidlif ei allgyrchu ar 15,000 × g am 15 munud ar 4 gradd .maint pidyn cistancheAddaswyd y supernatant i 7.5-7.8 gyda hydoddiant NaOH, ac ychwanegwyd NaCl at grynodiad terfynol o 1.5 M. Ar ôl i'r cymysgedd gael ei gadw heb ei aflonyddu am 12 h ar 4C i'w halltu, cafodd y gwaddod colagen ei allgyrchu ar 15,000 × g am 15 munud ar 4 gradd , yna hydoddi â 0.5 M asid asetig, dialyzed mewn dŵr pur, rhewi-sychu, a'r cynnyrch gorffenedig oedd colagen asgwrn cyw iâr.
Penderfynwyd ar gyfansoddiad asid amino colagen asgwrn cyw iâr gan ddadansoddwr awtomatig asid amino Sykam S433D (Munich, yr Almaen). Cymerwyd rhywfaint o sampl colagen i'w brofi mewn tiwb wedi'i selio, ei ychwanegu gyda 10 mL6 M HCl, a'i hydrolysu ar 110 gradd am 24 h. Crynhowyd yr hydrolyzate gan chwythu nitrogen a'i ail-hydoddi mewn byffer asid citrig 20 ml. Ar ôl microhidlo â philen microporous 0.22 μm, cymerwyd hydrolyzate 20 μL ar gyfer dadansoddiad sbectrwm asid amino. Mynegwyd y cynnwys asid amino yn y sampl mewn canrannau.
2.3. Paratoi Peptidau Collagen (CPs) a Dosbarthu Pwysau Moleciwlaidd
Yn ôl canlyniadau ein proses optimeiddio flaenorol, paratowyd CPs gan ddefnyddio papain ar gymhareb ensym-i-swbstrad o 1:40(cymhareb màs). Ar ôl addasu'r pH i 7 a hydrolysis enzymatig ar 63 gradd am 5 h, cafodd yr ensym ei anactifadu mewn baddon dŵr berw am 15 munud. Cafodd yr ensym hydrolyzate ei ddihalwyno a'i lyoffileiddio, ei ail-hydoddi mewn hydoddiant asid fformig 0.1 y cant, a'i allgyrchu i gael y supernatant. Defnyddiwyd AQ Exactive HF Orbitrap Sbectrometer Màs Cydraniad Uchel-OE-HF (Thermo Fisher, Waltham, MA, UDA), gyda chyfarpar ïoneiddiad electrochwistrellu (ESI), i ddadansoddi'r hydrolysad colagen yn y modd sgan llawn o 350-1800 m/z, a chafodd y canlyniadau eu hadalw a'u dadansoddi gan ddefnyddio'r Proteome Discoverer
2.1 meddalwedd
2.4.Prawf Anifeiliaid
Cadwyd BALB benywaidd/llygod di-gadair (n {{0}}) mewn ystafell dan amodau tymheredd rheoledig (24±1 gradd ), lleithder (60±5 y cant), a 12 h cylch dydd-nos am wythnos. Cawsant fynediad ad libitum at fwyd a dŵr. Ar ôl un wythnos o addasu, rhannwyd y llygod ar hap i'r pum grŵp canlynol (n =11 fesul grŵp):(i). Grŵp arferol (N): UV heb ei amlygu; gweinyddiaeth lafar o 0.4 mL halwynog bob dydd. (ii). Grŵp model(M): UVexposed a D-galactos (0.2 mL); gweinyddiaeth lafar o 0.4 ml o halen bob dydd. (i). Grŵp peptidau colagen dos isel (LCPs): UVexposed a D-galactose (0.2mL); llafar
rhoi 0.4 mL CPs (dos: 200 mg kg-1 pwysau'r corff) bob dydd. (iv). Grŵp peptidau colagen dos canolig (MCPs): UV agored ynghyd â D-galactos; llafar
rhoi 0.4 mL CPs (dos: 500 mg: kg-1 pwysau'r corff) bob dydd.
(v). Grŵp peptidau colagen dos uchel (HCPs): UV agored ynghyd â D-galactos; gweinyddiaeth lafar o 0.4 mL CPs (dos: 1000 mg·kg-1 pwysau corff) bob dydd.
Perfformiwyd triniaeth D-galactos gan chwistrelliad isgroenol o 0.2 mL o hydoddiant D-galactos 10 y cant yng nghefn gwddf y llygoden (dos: 1.0g/ kg-1pwysau corff) bob dydd. Perfformiwyd arbelydru UV gyda LAMP 40 W UVA-340 (O-panel, Cleveland, UDA, tonfedd brig: 340 nm), y pellter rhwng y lamp a chefn y llygod oedd 30 cm (230 m J/ cm-), a pharhaodd yr arbelydru am 30 munud bob dydd am saith wythnos (49 diwrnod). Mesurwyd dwyster yr ymbelydredd gan radiomedr UVA (Xinbao Keyi Electronic Technology Co, Ltd., Xi'an, Tsieina). Un awr ar ôl triniaeth D-galactose a UV, rhoddwyd 0.4 ml o CPs i'r llygod ar lafar bob dydd. Ar ôl yr arbelydru olaf, cafodd y llygod eu hanestheteiddio, eu pwyso, a samplwyd y meinweoedd i'w dadansoddi wedyn.
2.5. Lleithder Croen, Mynegai Visceral, ac Ennill Pwysau Corff
Pennwyd lleithder y croen gan ISO 1442, a chyfrifwyd y mynegai visceral gan ddefnyddio'r hafaliad canlynol: mynegai visceral (g/kg)=pwysau gweledol/pwysau corff.
2.6.Oxidatioe Straen, HA, a HYP Cynnwys y Croen
Cafodd samplau croen eu homogeneiddio gyda naw gwaith y swm o halwynog arferol (w / w) mewn baddon iâ gyda homogenizer meinwe (TGrinder OSE-Y30, Tiangen Biochemical Technology Co, Ltd, Beijing, Tsieina), ac yna wedi'i allgyrchu yn 2000 ×g a 4 gradd am 10 munud. Pennwyd gweithgareddau superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GSH-PX), a chynnwys asid hyaluronig (HA) a hydroxyproline (HYP) yn y supernatant a gasglwyd yn unol â'r dull a ddisgrifir yn y cyfarwyddiadau yn cyfateb i'r pecynnau priodol.
2.7. Histolegol y Croen
Gosodwyd samplau croen llygoden mewn hydoddiant paraformaldehyd 4 y cant am 24 awr, wedi'u dadhydradu, wedi'u mewnosod mewn paraffin, a'u sleisio. Cafodd rhannau'r croen eu staenio â hematoxylin ac eosin (AU) a'u harsylwi â microsgop fflworoleuedd blaen ECLIPSE CI-E (Nikon, Japan). Gwerthuswyd trwch epidermis a dermis y croen gan ddefnyddio meddalwedd Halcon 13.0.1.1 (MVTec, Munich, yr Almaen).
2.8.Dilyniannu Trawsgrifiad Croen
2.8.1. Echdynnu RNA, Adeiladu Llyfrgell, a Dilyniannu Trawsgrifiadol
Echdynnwyd cyfanswm RNA o groen llygod gan ddefnyddio'r RNeasy Mini Kit (Tiangen Biochemical Technology Co, Ltd, Beijing, China) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Gwiriwyd purdeb a chrynodiad yr RNA gan ddefnyddio'r kaiaoK5500Spectrophoto-meter (Kaiao, Beijing, China); Aseswyd cywirdeb RNA gan ddefnyddio Pecyn Assay RNA Nano 6000 a system Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, UDA). Perfformiwyd y dadansoddiad dilyniannu trawsgrifiadol o bob sampl gan Biolinker Technology Company Limited (Kunming, Tsieina).powdr cistancheYn gryno, cynhaliwyd clystyru'r samplau cod mynegai ar system gynhyrchu clwstwr cBot gan ddefnyddio HiSeq PE Cluster Kit v4-cBot-HS (Illumina) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Ar ôl cynhyrchu clwstwr, trefnwyd y llyfrgelloedd ar lwyfan Illumina, a chynhyrchwyd darlleniadau pen pâr 150 bp.
2.8.2. Biowybodeg Dadansoddiadau o Ddata Dilyniannu RNA
Perfformiwyd dadansoddiad cyfoethogi Gene Ontology(GO) a Gwyddoniadur Genynnau a Genomau Kyoto (KEGG) o enynnau a fynegwyd yn wahaniaethol (DEGs) gan ddefnyddio'r pecyn dadansoddwr clwstwr iaith R. Pan oedd y gwerth-p yn llai na 0.05, ystyriwyd bod yr eitemau a'r llwybrau a gyfoethogwyd gan GO a KEGG yn arwyddocaol.
2.8.3. Adwaith Cadwyn Transcriptase-Polymerase Gwrthdro (qRT-PCR)
Perfformiwyd QRT-PCR fel y disgrifiwyd yn flaenorol [19].
2.9.Wester1 Blot
Yn ôl y dull a ddisgrifiwyd gan Park et al. [20], perfformiwyd dadansoddiad blot Gorllewinol (WB) i feintioli mynegiant proteinau sy'n gysylltiedig â heneiddio croen mewn llygod. Cafodd crynodiad protein lysate croen ym mhob grŵp triniaeth ei feintioli gan ddefnyddio'r pecyn BCA, wedi'i wahanu gan SDS-PAGE (gel acrylamid 10 y cant), wedi'i drosglwyddo i bilen PVDF, wedi'i rwystro â 5 y cant o laeth sgim, a'i ddeor â swm priodol o gynradd gwrthgyrff (TGF-b1, c-Fos, c-Jun, Samd2/3, ac -actin) ar 4 gradd dros nos. Ar ôl golchi gyda TBST, cymysgwyd y samplau â gwrthgyrff eilaidd a'u deor ar dymheredd ystafell am 1 h. Defnyddiwyd y ChemiDoc XRS ynghyd â delweddwr gel cemiluminescence (BioRAD, Hercules, CA, UDA) i ganfod proteinau penodol. Delwedd] defnyddiwyd meddalwedd i feintioli mynegiant y protein targed ym mhob grŵp triniaeth, a chynrychiolwyd y canlyniadau gan y gwerthoedd dwysedd a normaleiddiwyd i -actin protein.
2.10.ELISA
Pennwyd lefelau mynegiant MMP-1, MMP-3, Pro-colagen Math I, ac IL-1 mewn hylif lysis croen gan imiwno-assay sy'n gysylltiedig ag ensymau. Cynhaliwyd yr assay yn unol â'r cyfarwyddiadau a ddarparwyd gyda'r cit.
2.11. Dadansoddiadau Ystadegol
Dadansoddwyd yr holl ganlyniadau gan ddefnyddio meddalwedd SPSS 21 (IBM Inc., Armonk, NY, UDA) trwy ddadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA) a phrawf amrediad lluosog Duncan, gyda'r lefel arwyddocâd wedi'i gosod i t.<0.05. originpro="" 2017="" (originlab,="" northampton,="" ma,="" usa)was="" used="" to="" plot="" the="" data.="" all="" data="" were="" expressed="" as="" the="" mean="" ±standard="" deviation="">
3. Canlyniadau a Thrafodaeth
3.1.Cyfansoddiad Asid Amino o Collagen
Dangosir cyfansoddiad asid amino colagen asgwrn cyw iâr yn Nhabl 1. Gly oedd y prif asid amino yn y samplau, gan gyfrif am bron i draean (27.86 y cant) o gyfanswm yr asidau amino, a Hyp oedd y asid amino arbennig mewn colagen, gan gyfrif am 9.83 y cant. Prif nodweddion moleciwlau colagen oedd y dilyniannau Gly-XY dro ar ôl tro a'r strwythur helical triphlyg unigryw sy'n cynnwys tair cadwyn c. Roedd Gly yn cyfrif am tua thraean o gyfanswm yr asidau amino, roedd X ac Y yn aml yn proline a hydroxyproline, neu gallent fod yn unrhyw weddillion [21]. Roedd cyfansoddiad asid amino y sampl yn debyg i gyfansoddiad colagen asgwrn cyw iâr a adroddwyd mewn astudiaethau blaenorol ac roedd ganddo nodweddion nodweddiadol colagen [22].
3.2. Dosbarthiad Pwysau Moleciwlaidd CPs
Molecular weight distribution reflects the degree of collagen hydrolysis. The molecular weight of the CPs was mainly below 3000 Da(Figure 1), accounting for about 87.61%of all collagen hydrolysates, indicating that almost all of the CPs were small peptides. Many studies claim that collagen peptides with a lower molecular weight have better biological activity [23]. For example, Song et al. [24]. reported that lower molecular weight (200-1000 Da,65%)silver carp skin collagen peptides repaired UV-induced aging skin in mice more effectively than similar peptides with a higher molecular weight(>1000 Da,72 y cant). Fodd bynnag, dangosodd cwmni Gelita yr Almaen trwy nifer o astudiaethau clinigol bod effaith peptidau colagen yn cael ei bennu'n bennaf gan ei radd gyfatebol ag eiddo'r peptidau colagen ar ôl diraddio colagen dynol, yn hytrach na phwysau moleciwlaidd y peptidau colagen. Canfuwyd bod y cynnyrch VERISOL⑧ â phwysau moleciwlaidd cyfartalog o 2000 Da yn cael yr effaith fwyaf ysgogol ar ffibroblastau croen, tra bod y cynnyrch FortigelTM â phwysau moleciwlaidd cyfartalog o 3000 Da yn cael effaith arbennig ar atgyweirio cartilag [25-27].
3.3. Effaith CP Llafar ar Leddfu Heneiddio Croen
3.3.1. Mynegai Pwysau'r Corff a'r Organ
Mae'r mynegai pwysau corff a'r mynegai organau yn bwysig ac yn adlewyrchu statws iechyd llygod. Cynyddodd pwysau llygod ym mhob grŵp fel arfer yn ystod y cyfnod prawf (Tabl 2). Roedd cynnydd pwysau cyfartalog y grŵp M yn is nag un y grŵp N, ac roedd cynnydd y grwpiau triniaeth CP yn uwch nag un y grŵp M, gan awgrymu nad oedd gan CPs unrhyw sgîl-effeithiau ar lygod. Mewn adroddiadau blaenorol, roedd y dos o lygod colagen wedi'u trin â pheptid rhwng 100-1000 mg/kg.bw·d yn bennaf, a chyrhaeddodd y dos diogel o beptidau colagen tilapia 4.07 g/kg.bw·d [{{6} }].dyfyniad salsa cistanche Similarly, the growth of skin-aged mice after gavage with tilapia scale collagen peptides (dose: 500 and 1000 mg/kg.bw·d)was also similar to our results [29]. The spleen plays an important role in humoral and cellular immunity, thus, the spleen index is often used to evaluate immune system function. The liver index was used to evaluate the toxicity of the tested sample. In these tests, the liver and spleen indices in the M group were lower than those in the N group, and both recovered after treatment with CPs, but there was no significant difference across the treatment groups(p>0.05). Roedd y canlyniadau'n debyg i rai astudiaethau blaenorol [30], gan nodi bod CPs yn ddiogel ac y gallent wella imiwnedd llygod ychydig.
3.3.2. Cyfansoddiad y Croen
Gostyngodd y driniaeth UV a D-galactos (grŵp M) yn sylweddol y cynnwys lleithder, HA, a Hyp yn y croen, o'i gymharu â rhai'r grŵp, 13.36 y cant, 24.08 y cant , a 15.83 y cant, yn y drefn honno (t).<0.05)(table 2).the="" contents="" of="" moisture,="" ha,="" and="" hyp="" in="" the="" skin="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" the="" contents="" of="" those="" in="" the="" mice="" of="" the="" m="" group=""><0.05). among="" the="" dose="" groups,="" the="" contents="" of="" the="" three="" skin="" components="" were="" significantly="" different="" between="" the="" lcp="" and="" hcp="" groups="" and="" were="" dependent="" on="" the="" dose="" of="" intake="" of="" cps.="" the="" hcp="" group="" had="" even="" higher="" contents="" than="" the="" n="" group,="" and="" ha="" and="" hyp="" were="" significantly="" different="" between="" the="" two="" groups="" (p=""><>
Mae newidiadau yng nghynnwys lleithder y croen yn achosi crychau a sagging croen ac yn cael eu heffeithio gan gydrannau matrics fel colagen croen a HA[31]. Mae hydroxyproline yn asid amino sefydlog, cyfoethog ac arbennig mewn colagen, a gall ei gynnwys adlewyrchu'n anuniongyrchol cynnwys colagen yn y croen, yn ogystal â heneiddio'r croen. Yn ogystal, mae HA, sy'n cael ei fynegi'n fawr mewn ECM croen, yn chwarae rhan bwysig wrth reoli cydbwysedd dŵr croen, pwysedd osmotig, cadw lleithder, ac elastigedd fel system storio dŵr ac elfen strwythurol croen [32]. Yn yr astudiaeth hon, cynyddodd cynnwys lleithder, HYP, a HA yn y croen yn sylweddol ar ôl cymeriant CP, a allai fod yn gysylltiedig â hyrwyddo synthesis colagen a HA gan CPs. Ar ben hynny, cynyddodd y cynnydd mewn HYP a HA y cynnwys lleithder.
3.3.3. Newidiadau Histolegol Croen
Dangosir y newidiadau histolegol yng nghroen cefn llygod ar ôl saith wythnos o driniaeth barhaus yn Ffigur 2. Roedd croen heneiddio'r grŵp M yn dangos nodweddion arwyneb garw, epidermis trwchus, dermis wedi'i deneuo, a chelloedd gwasgaredig, o'i gymharu â chroen y grŵp N. Fodd bynnag, gwellodd cyflwr croen heneiddio mewn llygod ar ôl rhoi CPs trwy'r geg, gan gynnal strwythur llyfn, trefnus a chyflawn tebyg i'r un yn llygod y grŵp N. Felly, roedd dermis y croen yn sylweddol deneuach, ac roedd yr epidermis yn sylweddol fwy trwchus yn y grŵp M nag yn y grŵp N (t<0.05). the="" change="" in="" skin="" dermis="" and="" epidermal="" thickness="" was="" significantly="" better="" after="" treatment="" with=""><0.05), and="" the="" effect="" was="" more="" obvious="" with="" the="" increase="" in="" the="" dose="" of="" cps="" (figure="" 2).="" the="" effect="" of="" oral="" cps="" on="" the="" histological="" structure="" of="" aging="" skin="" was="" similar="" to="" that="" reported="" previously[4,28,31].="" the="" increase="" in="" the="" thickness="" of="" the="" epidermis="" might="" be="" an="" adaptive="" change="" to="" protect="" the="" skin="" from="" external="" stimuli,="" loss="" of="" skin="" moisture,="" and="" uv="" damage,="" possibly="" due="" to="" the="" increase="" in="" uv-activated="" epidermal="" growth="" factor="" receptor="" (egfr)="" that="" induces="" keratinocyte="" proliferation="" and="" epidermal="" hyperplasia[4].="" however,="" the="" mechanism="" by="" which="" oral="" cps="" alleviate="" the="" increase="" in="" epidermal="" thickness="" remains="" unclear.="" the="" dermis="" imparts="" elasticity="" and="" strength="" to="" the="" skin,="" and="" the="" degradation="" of="" ecm="" and="" the="" reduction="" in="" the="" ability="" to="" repair="" fibroblasts="" are="" the="" main="" causes="" of="" dermal="" thinning="" in="" aging="" skin.="" dermal="" thickness="" increased="" after="" the="" treatment="" with="" cps,="" which="" might="" be="" due="" to="" the="" removal="" of="" ros="" from="" the="" skin="" and="" inhibition="" of="" the="" increase="" of="" mmps="" by="" cps.="" this,="" in="" turn,="" inhibited="" the="" degradation="" of="" skin="" collagen="" and="" elastin="" (figure="" 3),="" the="" entry="" of="" cps="" into="" the="" skin,="" and="" their="" participation="" in="" the="" synthesis="" of="" collagen="" and="" ha="" [6],="" which="" was="" confirmed="" by="" the="" increase="" in="" the="" content="" of="" hyp="" and="" ha="" in="" the="" skin="" (table="">
3.3.4.Skin Lefelau Gwrthocsidiol a Llidiol
Pennu gweithgaredd ensymau gwrthocsidiol yw'r dull a ddefnyddir amlaf i werthuso lefel gwrthocsidiol yn y corff [28]. Fel y dangosir yn Ffigur 3, roedd gweithgareddau cynnwys CAT, SOD, GSH-Px, ac MDA yn y grŵp M yn sylweddol is na'r rhai yn y grŵp N (t.<0.05). administering="" cps="" effectively="" inhibited="" the="" decrease="" of="" cat,="" sod,="" gsh-px="" activities,="" and="" the="" mda="" content="" in="" the="" skin="" of="" mice,="" compared="" to="" those="" in="" the="" mice="" skin="" of="" the="" m="" group,and="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" dose="" of="" cps;="" there="" were="" significant="" differences="" among="" the="" different="" dose="" groups=""><0.05). when="" ros,="" accumulated="" by="" skin="" oxidative="" stress,="" exceed="" the="" antioxidant="" defense="" ability="" of="" the="" body,="" they="" destroy="" the="" ecm,="" which="" is="" the="" key="" cause="" of="" skin="" aging.="" ros="" can="" cause="" the="" oxidation="" of="" lipids="" and="" proteins="" in="" the="" skin,="" resulting="" in="" fibroblast="" degeneration="" and="" changes="" in="" the="" skin.="" ros="" activates="" the="" mapk="" signaling="" pathway="" and="" the="" ap-1="" protein="" to="" upregulate="" the="" expression="" of="" mmps="" and="" promote="" the="" degradation="" of="" matrix="" collagen="" [21].="" although="" the="" antioxidant="" enzymes="" and="" antioxidants="" in="" the="" body="" can="" remove="" ros="" to="" protect="" the="" skin="" from="" damage,="" when="" the="" content="" of="" rosexceeds="" the="" defense="" (antioxidant)="" ability="" of="" the="" body="" or="" the="" body's="" defense="" ability="" declines,="" it="" causes="" oxidative="" stress="" and="" skin="">
Yn ogystal, mae'r ymateb llidiol cellog a achosir gan ROS hefyd yn cyfrannu at heneiddio croen. Ar ôl triniaeth UV a D-galactos (grŵp M), cynyddodd cynnwys IL-1 yng nghroen y llygod yn sylweddol o'i gymharu â'r hyn yn y grŵp N (Ffigur 3D), sy'n dangos bod y croen yn dangos ymateb llidiol sylweddol (t<0.05). the="" cps="" significantly="" reduced="" the="" content="" of="" il-1α="" in="" the="" skin="" in="" a="" dose-dependent="" manner,="" compared="" to="" that="" in="" the="" skin="" of="" mice="" in="" the="" m="" group.="" there="" was="" a="" significant="" difference="" between="" hcps="" and="" lcps=""><0.05), indicating="" that="" cps="" alleviated="" skin="" inflammation.="" the="" o2="" produced="" by="" ultraviolet="" irradiation="" stimulated="" the="" expression="" of="" mmp-1="" in="" dermal="" fibroblasts="" through="" the="" secretion="" of="" il-1α="" and="" il-6,="" thereby="" disrupting="" the="" ecm="" [33].="" therefore,="" this="" study="" suggested="" that="" cps="" significantly="" increased="" the="" activity="" of="" skin="" antioxidant="" enzymes="" and="" inhibited="" inflammatory="" responses,="" which="" might="" be="" important="" in="" delaying="" skin="" aging="" in="">
3.4.Mecanwaith Gweithredu CP Dietegol i Leddfu Heneiddio'r Croen
3.4.1.Dadansoddi a Dilysu Data RNA-Seq
Analysis techniques, such as PCA, HCA, gene GO enrichment, and KEGG pathway enrichment were used to analyze the transcriptome data. Based on the PCA analysis (Figure 4A)and hierarchical clustering analysis (heat map)of 4303 differential genes with average channel strength greater than 100, the relative expression levels of total DEGs between the two treatment groups are shown to provide an overview of the changes in gene expression(Figure 4B).The M group and the HCP group were significantly separated, and the expression patterns of most DEGs in the M and HCP groups were opposite, indicating that there were significant differences between the mouse skin after HCP treatment and the M group(Figure 4A,B).Pairwise comparisons showed that after feeding HCPs, 4303 genes were significantly expressed in the mice's skin, including 1790 upregulated genes and 2513 downregulated genes(Foldchange>2,p<0.05)(figure 4c).among="" the="" six="" genes="" associated="" with="" skin="" aging="" quantified="" by="" qrt-pcr,="" five="" genes(including="" fos,="" jun,="" cxcl1,="" and="" egr1)were="" downregulated,="" and="" one="" gene="" was="" upregulated(figure="" 4d),="" which="" was="" consistent="" with="" the="" overall="" trend="" of="" transcriptomic="" data.="" the="" rna="" expression="" levels="" of="" fos,="" jun,="" and="" cxcll="" were="" significantly="" upregulated="" in="" damaged="" skin="" compared="" to="" that="" in="" intact="" skin="" [34],="" and="" inhibition="" of="" egr1="" expression="" alleviated="" skin="" inflammation="" [35].="" these="" results="" reflected="" the="" reliability="" of="" transcriptome="" sequencing="" data,="" and="" oral="" cps="" effectively="" alleviated="" skin="">
Darparodd dadansoddiad cyfoethogi a dadansoddiad cyfoethogi cronfa ddata KEGG gefnogaeth ar gyfer ymchwilio ymhellach i swyddogaethau biolegol DEGs. Dangosodd dadansoddiad GO fod DEGs wedi'u cyfoethogi'n sylweddol mewn prosesau biolegol megis dyblygu DNA, rheoleiddio hemopoiesis, rheoleiddio gweithgaredd hydrolase, a chynhyrchu cytocin; mewn cydrannau celloedd, a oedd yn cynnwys gwagolyn lytic a lysosome, cyfoethogwyd genynnau sy'n cynnwys colagen a genynnau cysylltiedig eraill yn sylweddol; o ran swyddogaeth foleciwlaidd, cyfoethogwyd gweithgaredd derbynnydd-ligand, gweithgaredd cytocin, a genynnau cysylltiedig eraill yn sylweddol (Ffigur 5). Dangosir dadansoddiad cyfoethogi KEGG o'r 20 llwybr signal cyntaf a newidiwyd yn sylweddol gan DEGs yn Ffigur 5. Rhyngweithiad derbynnydd cytocin, lysosom, rhyngweithio ligand-derbynnydd niwroweithredol, cylchred celloedd, lupus erythematosus systemig, a llwybr TGF(t).<0.05)were closely="" related="" to="" aging,="" especially="" cytokine-receptor="" interactions,="" lysosomes,="" and="" tgf-βsignaling.="" an="" important="" feature="" of="" cellular="" senescence="" is="" the="" accumulation="" of="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates.="" lysosomes="" play="" an="" important="" role="" in="" degrading="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates="" in="" senescent="" cells="" [36].="" cytokine-receptor="" interaction="" is="" the="" main="" pathway="" of="" enrichment="" in="" the="" skin="" after="" being="" affected="" by="" various="" factors="" such="" as="" inflammation="" [37],="" sulfur="" mustard="" exposure="" [38],="" and="" terahertz="" pulse="" [39].="" cytokines,="" as="" small="" molecular="" proteins="" synthesized="" and="" secreted="" by="" various="" tissue="" cells,="" maintain="" skin="" homeostasis="" by="" controlling="" the="" balance="" between="" keratinocyte="" proliferation,="" differentiation,="" and="" apoptosis="" through="" complex="" interactions="" with="" growth="" factors="" [40].="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" is="" also="" important="" for="" regulating="" skin="" aging="" [14].="" gene="" functional="" enrichment="" analysis="" showed="" that="" tgf-β="" was="" highly="" expressed="" during="" cytokine-receptor="" interaction="" and="" in="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway.="" tgf-β="" is="" a="" major="" pro-fibrotic="" cytokine="" that="" regulates="" cell="" differentiation="" and="" proliferation="" while="" inducing="" extracellular="" matrix="" protein="" synthesis="" [41.="" therefore,="" we="" verified="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" and="" some="">
3.4.2. Dilysu Mecanwaith Gweithredu CPs i Leddfu Heneiddio Croen
Er mwyn gwirio rôl llwybr signalau TGF a rhyngweithio derbynnydd cytocin wrth liniaru heneiddio croen gan CPs llafar, cynhaliwyd dadansoddiad WB i wirio'r TGF- a ffactor trawsgrifio Smad2/3 yn llwybr signalau TGF, yn ogystal â'r allwedd. ffactor trawsgrifio AP-1(c-Fos a c-Jun) sy'n rheoleiddio cytocinau. Cafodd cynnwys MMP-1, MMP-3, Pro-colagen Math I, ac I-1 eu pennu gan ELISA. Dangosodd canlyniadau’r dadansoddiad WB fod mynegiant TGF- , Smad2, a Smad3 yng ngrŵp M yn sylweddol is na’r hyn yng ngrŵp N(p.<0.05). the="" expression="" levels="" of="" tgf-β="" and="" smad3="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" their="" levels="" in="" group="" m="" mice;="" additionally,="" smad2="" also="" increased="" significantly=""><0.05), except="" for="" in="" the="" lcps="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (figure="" 6).="" on="" the="" contrary,="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" m="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" n="" group.="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" cp="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" m="" group,="" except="" for="" the="" expression="" of="" c-jun="" in="" the="" lcp=""><0.05), and="" the="" change="" was="" dose-dependent.="" these="" results="" indicated="" that="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" was="" activated="" and="" ap-1="" was="" inhibited="" after="" feeding="">
Mae'r protein AP{0}} yn gymhleth dimeric o broteinau teulu Jun a Fos ac mae'n rheolydd pwysig o lid y croen a mynegiant cytocin. Yn gyffredinol, mae'r cymhleth sy'n cynnwys c-Jun a c-Fos yn dangos y gweithgaredd trawsgrifio uchaf yn y croen [41, A42]. Mae ROS a gynhyrchir mewn celloedd croen sy'n heneiddio yn actifadu protein AP-1 yn gyntaf ac yna'n rheoleiddio cytocinau i lawr yr afon (fel IL-1 ), MMPs, a'r llwybr signalau TGF trwy drawsgrifio a chyfieithu, gan hwyluso heneiddio'r croen [43] ,44]. Mae adwaith signalau TGF-/Smad yn llwybr synthesis colagen clasurol, ac mae ffactor trawsgrifio Smad wrth wraidd y llwybr trawsgludo signal hwn. Mae TGF- yn sbarduno ffosfforyleiddiad ac actifadu Smad2 a Smad3 i lawr yr afon trwy rwymo i'r derbynnydd, a thrwy hynny gynyddu synthesis COLI [14].
Yn ogystal, dangosodd canlyniadau ELISA fod cynnwys MMP-1, MMP-3, ac IL-l yng nghroen y grŵp M yn sylweddol uwch na’r hyn yn y grŵp N, a chynnwys Math Roedd I pro-colagen yn sylweddol is (t<0.05). however,="" the="" contents="" of="" mmp-1,="" mmp-3,="" and="" il-1α(figure="" 3d)in="" the="" skin="" after="" oral="" administration="" of="" cps="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" m="" group="" (p=""><0.05); type="" i="" pro-collagen="" increased="" significantly,="" and="" all="" the="" changes="" were="" dose-dependent="" with="" cps="" (figure="" 7).="" mmps="" are="" involved="" in="" the="" decomposition="" of="" skin="" collagen,="" il-1α="" shows="" the="" level="" of="" inflammation="" of="" the="" skin,="" and="" type="" i="" pro-collagen="" reflects="" the="" synthesis="" of="" skin="" collagen.="" accumulating="" evidence="" suggests="" that="" the="" role="" of="" the="" jun/ap-1="" protein="" pathway="" has="" also="" been="" proposed="" to="" regulate="" skin="" inflammation="" [40].="" the="" elisa="" results="" showed="" that="" the="" combined="" treatment="" of="" uv="" and="" d-galactose="" caused="" skin="" collagen="" degradation,="" decreased="" collagen="" synthesis,="" and="" caused="" skin="" inflammation,="" leading="" to="" skin="" aging.="" however,="" these="" changes="" were="" reversed="" after="" the="" oral="" administration="" of="">
Yn ogystal â'r llwybrau uchod, yn yr astudiaeth hon, cyfoethogwyd y genynnau uwch-reoledig ar ôl triniaeth CP yn sylweddol i'r llwybr lysosom, gan nodi bod triniaeth CP wedi actifadu'r lysosom yn y croen (Ffigur 5). Mae astudiaethau blaenorol yn dangos bod lysosomau wedi'u actifadu yn clirio agregau ac yn cynyddu actifadu bôn-gelloedd niwral senescent yn ystod heneiddio [45]. Yn ogystal â'r rhain, gall swyddogaeth gynyddol lysosomau leihau'r crynodiad o ROS mewngellol i atal cysgadrwydd celloedd. Yn yr un modd, gall unrhyw ostyngiad yn y swyddogaeth lysosome wella crynodiad ROS mewngellol sydd yn y pen draw yn hyrwyddo cysgadrwydd celloedd [46]. Er nad ydym wedi'i wirio'n systematig yn y papur hwn, mae'r canlyniadau hyn ac adroddiadau blaenorol yn awgrymu y gallai actifadu swyddogaeth lysosomaidd fod y brif ffordd i CPs liniaru heneiddio'r croen, a byddwn yn parhau i anelu at ei wirio.
Felly, dangosodd yr astudiaeth hon y gallai CPs dietegol liniaru heneiddio croen a achosir gan UV a D-galactos mewn modd sy'n dibynnu ar ddos. Mae CPs yn lleddfu heneiddio croen trwy ostwng lefelau ocsidiad croen, gan atal mynegiant ffactorau trawsgrifio allweddol AP-1 (c-Jun a c-Fos), gan actifadu llwybr signalau TGF- /Smad i hyrwyddo synthesis colagen, gan atal mynegiant o MMP-1 a MMP-3(sy'n atal diraddio colagen), ac yn atal llid y croen i liniaru heneiddio'r croen (Ffigur 8). Ar ben hynny, mae ein canfyddiadau yn y presennol
4. Casgliadau
I grynhoi, cadarnhaodd yr astudiaeth hon y gallai ychwanegiad dietegol peptidau colagen asgwrn cyw iâr liniaru'n sylweddol heneiddio croen a achosir gan ymbelydredd uwchfioled a D-galactos trwy lwybrau lluosog, sy'n cynnwys hyrwyddo synthesis pro-colagen, atal diraddiad colagen, gwella lefel gwrthocsidiol y croen, ac atal llid; roedd y lliniaru yn dibynnu ar ddos gyda CPs. Dangosodd ymchwiliad manwl fod CPs yn lleihau lefel ocsidiad croen yn gyntaf, yn atal mynegiant y ffactor trawsgrifio allweddol AP-1 (c-Jun a c-Fos), ac yna'n actifadu llwybr signalau TGF- /Smad i hyrwyddo synthesis colagen, yn atal mynegiant MMP-1 a MMP-3 i atal diraddio colagen, ac yn atal llid y croen i liniaru heneiddio croen mewn llygod. Yn ogystal, efallai mai actifadu lysosomau hefyd yw'r prif lwybr ar gyfer CPs i liniaru heneiddio'r croen, sy'n deilwng o ymchwil a gwirio dilynol. Mae'r canlyniadau hyn yn darparu sail ddamcaniaethol ar gyfer gweithredu peptidau colagen i liniaru heneiddio croen ac ehangu'r cwmpas ar gyfer defnydd cynhwysfawr o sgil-gynhyrchion anifeiliaid mewn bwydydd swyddogaethol.
Cyfraniadau Awdur: CC gynlluniodd, mesur, ac ysgrifennodd y llawysgrif; Dyluniodd a diwygiodd ZXand HT y llawysgrif; YLdarparu arweiniad methodolegol; Adolygodd CGand YW y llawysgrif. Mae pob awdur wedi darllen a chytuno i'r fersiwn cyhoeddedig o'r llawysgrif.
Daw'r erthygl hon o Nutrients 2022, 14, 1622. https://doi.org/10.3390/nu14081622 https://www.mdpi.com/journal/nutrients
