Rhan 1: Cyfansoddion Bioactif O Ephedra Fragilis: Optimization Echdynnu, Nodweddu Cemegol, Gweithgareddau Gwrthocsidiol A AntiGlycation

Am fwy o wybodaeth. cyswllttina.xiang@wecistanche.com

Haniaethol: Defnyddiwyd methodoleg arwyneb ymateb (RSM) gyda dyluniad Box-Behnken (BBD) i optimeiddio echdynnu cyfansoddion bioactif o Ephedra fragilis. Awgrymodd y canlyniadau mai echdynnu gyda 61.93 y cant ethanol ar 44.43 gradd am 15.84 h oedd yr ateb gorau ar gyfer y cyfuniad hwn o newidynnau. Cafodd yr echdyniad ethanol crai (CEE) a gafwyd o dan yr amodau echdynnu optimwm ei ffracsiynu'n ddilyniannol â thoddyddion â pholaredd cynyddol. Mae cynnwys cyfanswm ffenolig (TP) a chyfanswm flavonoid(TF) yn ogystal â'rgwrthocsidiola mesurwyd gweithgareddau gwrthglyciad. Nodweddwyd proffil olion bysedd ffytocemegol y ffracsiwn â'r gweithgaredd uchaf trwy ddefnyddio RP-HPLC. Roedd gan y ffracsiwn ethyl asetad (EAF) y cynnwys TP a TF uchaf ac arddangosodd y gweithgareddau gwrthocsidiol ac antiglycation mwyaf grymus. Dangosodd canlyniadau dadansoddiad cydberthynas Pearson fod cydberthynas arwyddocaol rhwng cynnwys TP a TF a'r gweithgareddau gwrthocsidiol ac antiglycation. Yn gyfan gwbl, nodwyd chwe chyfansoddyn yn yr EAF o E. fragilis, gan gynnwys pedwar asid ffenolig a dau flavonoid. Yn ogystal, dangosodd dadansoddiad tocio moleciwlaidd hefyd y cysylltiad posibl rhwng cyfansoddion bioactif a nodwyd a'u mecanweithiau gweithredu. Mae ein canlyniadau'n awgrymu tystiolaeth newydd ar weithgareddau gwrthocsidiol ac antiglycation cyfansoddion bioactif E. fragilis y gellir eu defnyddio wrth drin ac atal heneiddio a chymhlethdodau sy'n gysylltiedig â glyciad.

Geiriau allweddol: Ephedra fragilis ; methodoleg arwyneb ymateb; Dyluniad Blwch-Behnken; cyfansoddion bioactif; RP-HPLC; gweithgareddau gwrthocsidiol ac antiglycation

Cliciwch yma i ddysgu mwy o gynhyrchion

1. Rhagymadrodd

Gall amlygiad parhaus i ymosodwyr o wahanol ffynonellau arwain at gynnydd mewnradicalau rhyddcynhyrchu yn y corff dynol, gan ragori ar ei allu i'w rheoleiddio, a, thros amser, yn cyfrannu at ddatblygiad nifer o glefydau ocsideiddiol sy'n gysylltiedig â straen gan gynnwys heneiddio a diabetes[1]. Felly,gwrthocsidyddiongall ychwanegiad helpu i gynnal system fiolegol optimaidd trwy gael gwared ar grynodiadau gormodol o radicalau rhydd [2]. Dangoswyd bod radicalau rhydd yn cymryd rhan yn y broses glyciad. Mae glycation, adwaith nonenzymatic digymell rhwng y grwpiau amino sydd ar gael o weddillion asid amino mewn proteinau a siwgrau lleihau, yn digwydd i raddau uwch o dan heneiddio a hyperglycemia, gan arwain at gynhyrchu a chronni cynhyrchion terfynol glyciad uwch (AGEs) 3]. Ar wahân i ymyrryd â phroteinau a newid eu swyddogaethau, gall AGEs hefyd

ymgysylltu â'r derbynnydd ar gyfer AGEs (RAGE), derbynnydd arwyneb aml-ligand-gell 45 KDa sy'n perthyn i'r superfamily imiwnoglobwlin [4], ac actifadu sawl llwybr signalau mewngellol i lawr yr afon ynghyd â chynnydd mewn cynhyrchiad radicalau rhydd sy'n cyfrannu at gymhlethdodau patholegol cysylltiedig i ddiabetes [5].

Mae wedi'i hen sefydlu bod gwrthocsidyddion a moleciwlau sborionwyr radical yn amddiffynwyr da yn erbyn y prosesau hyn [6]. Mae'r defnydd o blanhigion meddyginiaethol i atal a gwrthbwyso afiechydon sy'n gysylltiedig â straen ocsideiddiol yn hen draddodiad meddygol. Yn ddiweddar, mae llawer o astudiaethau wedi dangos bod metabolion eilaidd fel tannin, asidau ffenolig, a flavonoidau â photensial gwrthocsidiol ac antiglycation deuol yn fwy effeithiol wrth drin diabetes mellitus [7]. Felly, mae canfod ffynonellau newydd o ffytogemegau sy'n ysbeilio radicalau rhydd yn effeithiol ac yn lleihau glyciad anensymatig o ddiddordeb mawr.

Mae Ephedra fragilis yn aelod o'r genws Ephedra (teulu Ephedracea) sy'n cynnwys mwy na 60 o rywogaethau sy'n tyfu mewn amodau anialwch a semiarid yn y ddau hemisffer ar draws chwe chyfandir [8]. Am fwy na 5000 o flynyddoedd, mae llawer o rywogaethau yn y genws Ephedra wedi cael eu defnyddio'n gyffredin mewn meddygaeth Tseiniaidd traddodiadol (TCM) ar gyfer trin nifer o afiechydon; bu nifer o astudiaethau yn adrodd am eu buddion iechyd lluosog megis gwrthlidiol [9, gwrth-ymledol, gwrth-angiogenig, [10], gwrthficrobaidd, gwrth-ymledol, pro-apoptotic [11], neuroprotective [12], hepatoprotective, a gwrth eiddo -oxidant [13]. Mae flavonoids, alcaloidau, asidau ffenolig, a chyfansoddion eraill mewn planhigion Ephedra wedi'u hystyried fel y prif gydrannau ffytocemegol ar gyfer yr eiddo ffarmacolegol hyn [14]. Yn y diwydiant fferyllol, defnyddir cromatograffaeth hylif perfformiad uchel cyfnod cefn (RP-HPLC) yn eang fel dull dadansoddol o ganfod ac adnabod cyfansoddion cemegol yn seiliedig ar eu priodweddau hydroffobig gwahanol, er mai ychydig o astudiaethau a ddisgrifir yn y llenyddiaeth ar gyfer dadansoddiad cemegol o Rhywogaethau ephedra.

Proses echdynnu'r cyfansoddion bioactif hyn o wahanol ffynonellau planhigion yw'r cam pwysig cyntaf sy'n gysylltiedig â'u dadansoddiad ansoddol a meintiol [15]. Gwahanol ffactorau sef. gall dull echdynnu, math o doddydd a chrynodiad, tymheredd, amser, ac eraill ddylanwadu'n sylweddol ar gyfansoddiad a chyfradd echdynnu'r cyfansoddion hyn [16]. Felly, mae angen optimeiddio'r prosesau echdynnu i gynhyrchu cynnwys uchel o gyfansoddion gweithredol planhigion. Wedi'i datblygu'n wreiddiol yn y 1950au gan Box a Wilson, methodoleg arwyneb ymateb (RSM) yw'r offeryn a ddefnyddir amlaf heddiw i berfformio, gwella, a gwneud y gorau o brosesau o'r fath lle mae ffactorau annibynnol yn cael effaith gyfunol ar yr ymateb a ddymunir. Un o'r dyluniadau a ddewiswyd amlaf yn RSM gan ymchwilwyr yw dyluniad Box-Behnken (BBD) oherwydd bod angen treial cyfyngedig arno ac, felly, yn cynrychioli dewis arall sy'n osgoi arbrofion hir-amser ac yn lleihau costau [17-19].

Yn gyfredol, nid oes unrhyw astudiaethau ar gael yn y llenyddiaeth ynghylch optimeiddio echdynnu cyfansoddion bioactif E. fragilis. Felly, nod yr astudiaeth hon oedd optimeiddio echdynnu cyfanswm cynnwys ffenolig (TP) a flavonoid (TF) o E.fragilis trwy gymhwyso BBD. Cafodd yr echdyniad ethanol crai (CEE) a gafwyd o dan yr amodau echdynnu gorau posibl ei ffracsiynu'n ddilyniannol â thoddyddion polaredd cynyddol, ac archwiliwyd eu gweithgareddau gwrthocsidiol ac antiglycation gan ddefnyddio gwahanol brofion in vitro. Yn olaf, gwnaethom berfformio mewn dadansoddiad silico i ddeall ymhellach y mecanweithiau y mae cyfansoddion bioactif yn EAE, fel y'u nodwyd gan gromatograffaeth hylif perfformiad uchel cam gwrthdro (RP-HPLC), yn rhwymo i BSA a RAGE fel proteinau targed.

2. Canlyniadau a Thrafodaeth

2.1. Gosod y Modelau

RSM with a BBD was applied to investigate the effect of ethanol concentration (%, Xj), temperature(°C, X2), and time (h, X3)on the extraction yield of TP and TF from E. fragilis. The results of 15 trials after the BBD are given in Table 1. Analysis of variance(ANOVA)(Table 2) indicates that the models were significant as evidenced by F and p-values. The coefficient of multiple determinations (R')of the models were 0.9935 and 0.9939 for TP and TF, respectively, suggesting that only 0.65 and 0.61%of the total variations are not explained by the models. A comparable value of adjusted R2 to R2 represents an excellent statistical model. As given in Table 2, the adjusted R2(0.9818 and 0.983 for TP and TF contents, respectively) is close to R2, which means that the insignificant terms were not included in the models. Moreover, predicted R2(0.9012 and 0.9338 for TP and TF contents, respectively) is in reasonable agreement with adjusted R2 and confirms that the models are highly significant. The"fitness" of the models was also confirmed using the lack of fit test The insignificant p-value for lack of fit (p >Mae {{0}}.05) ar gyfer dau ymateb yn nodi addasrwydd modelau ar gyfer rhagfynegiad cywir o'r amrywiad yn y canlyniadau [20]. Disgrifir cywirdeb da fel cymhareb signal-i-sŵn sy'n fwy na 4, a ystyrir yn ddymunol [21]. Gwerthoedd cywirdeb digonol yw 29.4772 a 28.729 ar gyfer cynnwys TP a TF, yn y drefn honno, gan ddangos signal digonol. Ar yr un pryd, mae'r gwerthoedd llai o gyfernod amrywiad (CV y cant) (1.52 a 0.4246 y cant ar gyfer cynnwys TP a TF, yn y drefn honno) yn dynodi gwell cywirdeb a dibynadwyedd gwerthoedd arbrofol. Ar gyfer pob ffactor ymateb, archwiliwyd dylanwad y ffactorau echdynnu XI (crynodiad ethanol), X2 (tymheredd echdynnu), a X3 (amser echdynnu) yn ofalus (Tabl 2). Profwyd arwyddocâd pob cyfernod gan ddefnyddio gwerthoedd F a-p, gan ystyried bod gwerth-F mwy a gwerth-p llai bob amser yn arwain at gyfatebiaeth fwy arwyddocaol rhwng amrywiol newidynnau annibynnol [22]. Gyda'i gilydd, roedd y canlyniadau hyn yn dangos bod y modelau'n atgynhyrchadwy ac yn addas ar gyfer optimeiddio.

2.2. Effeithiau Newidynnau Echdynnu ar Gynnwys TP

Fel y nodir yn Nhabl 2, dangosodd canlyniadau ANOVA effeithiau llinol sylweddol (X, a X2), cwadratig (Xj, X5, ac X), a rhyngweithiol (X1X, a X2X3) ar gynnwys TP. Ymhlith y rhain, mae cynnwys TP yn dibynnu'n bennaf ar X, X3 yn t<0.001 followed="" by="" x1="" and="" x1x,="" at=""><0.01. the="" following="" second-order="" polynomial="" equation="" could="" be="" used="" to="" express="" the="" relationship="" between="" tp="" content="" and="">

Roedd gwerth diffyg ffit yn anarwyddocaol (gwerth-F =11.02, p-value=0.0843), gan ddangos bod y model wedi'i nodi'n dda gyda rhagfynegiad da (R{ {9}}.9935; Adj R2=0.9818)(Tabl 2).

Mae'r rhyngweithiadau rhwng crynodiad ethanol a thymheredd echdynnu (XjX2) yn cynhyrchu arwyddocaol iawn (t<0.01)effect on="" tp="" content="" (table2).="" as="" ethanol="" concentration="" (x1)="" and="" extraction="" temperature="" (x)increase="" in="" the="" range="" of="" 40-61.80%="" and="" 25-44.30°c="" respectively,="" the="" tp="" content="" increases="" rapidly.="" however,="" beyond="" 61.80%and="" 44.30°c,="" tp="" content="" decreases="" slightly(figure="" 1a).="" however,="" the="" interaction="" of="" the="" extraction="" temperature="" and="" extraction="" time="" (x2x3)showed="" a="" highly=""><0.001) effect="" on="" tp="" content="" (table="" 2).="" as="" shown="" in="" figure="" 1b,="" tp="" content="" slightly="" improved="" with="" increasing="" extraction="" temperature="" (x2)and="" extraction="" time="" (x3)up="" to="" 44.37℃c="" and="" 15.77="" h,="" respectively,="" but="" diminished="" slowly="">

Gallai'r effeithiau hyn fod oherwydd y ffaith bod cyfansoddion ffenolig yn foleciwlau pegynol sy'n digwydd yn naturiol gyda glwcosidau, sy'n eu gwneud yn fwy hydawdd mewn dŵr [23]. Gan fod echdynnu cyfansoddion ffenolig yn dibynnu'n gryf ar bolaredd y toddydd, mae cymysgedd dŵr-alcohol yn fwy effeithiol yn ei echdynnu nag alcohol yn unig [20]. O ran yr egwyddor "tebyg i hydoddi", mae gostyngiad yn y crynodiad ethanol yn arwain at gynnydd ym mholaredd toddyddion, sy'n helpu i hydoddi TP [15]. Serch hynny, gall crynodiad ethanol uchel ddylanwadu ar y gyfradd echdynnu trwy atal diddymu cyfansoddion ffenolig. Yn yr un modd, fe wnaeth cynnydd yn y tymheredd echdynnu wella adferiad cyfansoddion ffenolig targed trwy feddalu meinweoedd, gwanhau cywirdeb y wal gell, trosglwyddo màs a threiddiad toddydd i'r matrics planhigion, a chynyddu hydoddedd a chyfradd trylediad; fodd bynnag, gall tymereddau rhy uchel ar gyfer amser echdynnu estynedig gynyddu'r siawns o'u diraddio [23]. Ar ben hynny, canfuwyd bod cyfnod echdynnu hir o bosibl yn ymestyn amlygiad ocsigen a golau, sydd yn y pen draw yn cynyddu'r risg o ffurfio radicalau rhydd y gellir eu hysbwriel gan gyfansoddion ffenolig [23]. Felly, nid oedd amser echdynnu estynedig yn ddefnyddiol i wneud y mwyaf o'r cynnyrch echdynnu [24].

2.3.Effeithiau Newidynnau Echdynnu ar Gynnwys TF

Fel sy'n amlwg o Dabl 2, effeithiau llinol X a X3; effeithiau cwadratig X, ac X; a dangosodd effaith ryngweithio X1X2 a XjXg effeithiau sylweddol ar gynnwys TF. Ymhlith yr holl ffactorau arwyddocaol, mae TF yn dibynnu'n bennaf ar X3, X, X, X,, a X1X2 yn t.<0.001 followed="" by="" x="" andx1x3="" at=""><0.01. the="" fitted="" second-order="" polynomial="" of="" tf="" content="" is="" as="">

Roedd gwerth anarwyddocaol diffyg ffit(gwerth-F=1.13; p-value=0.5024)yn awgrymu bod y model arfaethedig yn cyd-fynd â dylanwad gofodol y newidynnau i'r ymateb yn dda rhagfynegiad (R2=0.9939; Adj R2= 0.9830) (Tabl 2).

Cynhyrchwyd graffiau arwyneb ymateb 3D amrywiol ar gyfer cynnwys TF ac fe'u dangosir yn Ffigur 1D-F. Roedd effaith ryngweithio crynodiad ethanol a thymheredd echdynnu (X1X2) yn arwyddocaol (t<0.001) effect="" on="" tf="" content.="" from="" figure="" 1d,="" tf="" content="" increased="" at="" first="" and="" then="" decreased="" quickly="" with="" the="" rise="" of="" the="" two="" parameters,="" and="" a="" maximum="" tf="" content="" was="" achieved="" when="" ethanol="" concentration="" (xj)="" and="" extraction="" temperature="" (xo)were="" 61.89%="" and="" 44.23°c,="" respectively.="" this="" phenomenon="" is="" similar="" to="" tp,="" which="" might="" also="" be="" attributed="" to="" the="" fact="" that="" a="" rise="" in="" the="" extraction="" temperature,="" the="" solubility,="" extraction="" rate,="" and="" diffusion="" rate="" increase,="" which="" ultimately="" helps="" tf="" to="" dissolve="" insolvent="">

Yn yr un modd, dangosodd y rhyngweithio rhwng crynodiad ethanol ac amser echdynnu (XIX3) gydberthynas debyg (Ffigur 1F). Cynyddodd cynnyrch echdynnu TF yn raddol gyda chrynodiad ethanol (Xj) ac amser echdynnu (X3) yn cynyddu. Yn agos at bwynt canol y plot ymateb (61.89 y cant a 15.81 h ar gyfer X a X3, yn y drefn honno), cyrhaeddodd cynnyrch TF ei uchaf ond gostyngodd yn araf wedi hynny. Mae'r ffenomen hon yn fwyaf tebygol oherwydd bod ail gyfraith egwyddor trylediad Fick yn datgelu y bydd yr ecwilibriwm terfynol rhwng y crynodiad hydoddiant yn y matrics solet a'r toddydd yn cael ei gyrraedd ar ôl cyfnod penodol, gan arwain at arafiad yn y cynnyrch echdynnu o gyfansoddion targed [26] .

2.4. Dilysu Amodau Optimeiddiedig

Nod yr optimeiddio oedd pennu'r amodau echdynnu a fyddai'n darparu'r cynnwys TP a TF uchaf ar yr un pryd. Defnyddiwyd meddalwedd arbenigwyr dylunio i wneud y gorau. Cynigiodd y BBD y crynodiad ethanol gorau posibl, tymheredd echdynnu, ac amser i fod yn 61.93 y cant, 44.43 gradd, a 15.84h, yn y drefn honno, ar gyfer echdynnu cyfansoddion bioactif E. fragilis. Ar y pwynt optimaidd hwn, y cynnwys TP a TF a ragwelwyd oedd 15.335 mg GAE/g dw a 2.972 mg OE/g dw, yn y drefn honno (Tabl 3). Perfformiwyd dilysu gallu rhagfynegol y modelau yn arbrofol o dan yr amodau gorau posibl a gafwyd gan RSM. Cynhaliwyd arbrofion yn driphlyg o dan yr amodau a gafwyd, a'r cynnwys cymedrig TP a TF oedd 14.98±0.29GAE/g DW a 2.92±0.09 QE/g dw, yn y drefn honno. Roedd gwerthoedd arbrofol yr ymatebion a archwiliwyd yn gymaradwy ac yn unol â rhai'r gwerthoedd a ragfynegwyd, a gadarnhaodd fod y modelau'n ddigonol i adlewyrchu'r optimeiddio disgwyliedig.

2.5. Cynnyrch Echdynnu a Dadansoddi Ffytocemegol

Roedd Tabl 4 yn dangos cynnyrch echdynnu E.fragilis CEE a'i ffracsiynau. Dangosodd ein canlyniadau fod y cynnyrch echdynnu mewn gwahanol ffracsiynau yn wahanol iawn o 0.78 i 10.6 y cant (w/wo). Fel y dangosir yn Nhabl 4, mae'r CEE(1{{{14}) }.6 y cant ) oedd â'r cynnyrch canrannol uchaf, ac yna WF (2.73 y cant ), WBF (2.04 y cant ), DMF(0.64 y cant ), ac EAF (0.93 y cant ), tra bod HF (0.78 y cant ) ) oedd â'r cynnyrch canrannol isaf.

Cafodd cynnwys TP E. fragilis CEE a'i ffracsiynau ei bennu trwy hafaliad atchweliad o gromlin graddnodi (y {{0}}.009x-0.{{ 25}}154; R2=0.9973) ac wedi'i fynegi mewn miligramau cyfwerth ag asid galig (GAE) fesul gram o bwysau sych (Tabl 4). Yn gyffredinol, EAF oedd â'r cynnwys TP uchaf (32.78±0.49 mg GAE/g DW) wedi'i ddilyn yn olynol gan WBF, DMF, a CEE (25.02±1.01,19.21±0.22 a14.98±0.29 mg GAE/g DW), tra mai WF a HF a gyflwynodd y cynnwys isaf (10.47 ± 0.71 a 8.14 ± 0.17 mg GAE/g DW, yn y drefn honno). Gwerthuswyd cynnwys TF E. fragilis CEE a'i ffracsiynau gan ddefnyddio assay colorimetrig alwminiwm clorid gan ddefnyddioquercetinas a standard (y=0.0295x+0.0361; R2=0.9986)(Table 4). Similar to the TP content, the same results were observed in the TF content with the highest and lowest content being detected in the EAF(10.50 ± 0.11 mg OE/g of DW)and HF(1.65± 0.13 mg OE/g of DW), respectively. The TF content is arranged as the following sequence: EAF>WBF>DMF> CEE>WF>HF. Yn ddiddorol, roedd y cynnwys TP a TF yn EAF yn 2.18 a 3.59-plyg yn uwch na chynnwys y CEE, gan awgrymu y gallai asetad ethyl fod y toddydd priodol i grynhoi mwy o gyfansoddion ffenolig a flavonoidau sydd ar gael yn ystod y ffracsiynu CEE. Mae ein data ynghylch cynnwys TP a TF yn gyson â rhai Yao et al. [27] sy'n adrodd bod gan yr EAF a gafwyd o'r planhigyn meddyginiaethol Pyrola asarifolia y lefelau uchaf o ffenolig a flavonoidau o'i gymharu â'r ffracsiynau eraill (ether petrolewm, n-butanol, a dŵr). Yn eu hastudiaeth, roedd Bhardwaj et al. [28] adroddodd hefyd ganlyniadau tebyg wrth ddefnyddio sawl toddyddion â pholaredd cynyddol (n-hecsan, clorofform, asetad ethyl, ac n-butanol) wrth hollti planhigyn meddyginiaethol Codonopsis clematidea. Yn ôl yr awduron hyn, yr EAF sydd â'r cynnwys TP a TF uchaf yn cael ei ddilyn yn bell gan y rhai n-butanol, clorofform a hecsan. Mae'n debyg bod yr amrywiad sylweddol hwn yng nghynnyrch echdynnu, cyfansoddiad, a phurdeb cyfansoddion ffenolig rhwng y ffracsiynau oherwydd y gwahaniaethau ym mholaredd cyfansoddion a geir mewn deunyddiau planhigion, eu strwythur cemegol, eu gradd polymerization, a'u rhyngweithio â'i gilydd [29 ].

2.6. Gweithgaredd Gwrthocsidiol In Vitro

2.6.1.DPPH"Gweithgarwch Sborion

Mae DPPH" yn un o'r ychydig radicalau rhydd sefydlog a ddefnyddir yn helaeth i ymchwilio i botensial gwrthocsidiol echdynion planhigion [30]. Mae potensial sborionydd detholiad yn aml yn gysylltiedig â'i allu i ysbori radicalau rhydd sefydlog, a hynny oherwydd ei allu i roi hydrogen .

Astudiwyd gallu sborion CEE / ffracsiynau yn ogystal â VC mewn gwahanol ddosau ar radical rhydd DPPH *. Mae Ffigur 2A yn dangos bod yr holl ffracsiynau yn arddangos gweithgaredd sborion DPPH·sylweddol mewn modd dibynnol ar ddos ​​yn yr ystod o0.1 i 1 mg/mL.Ar ddogn o 1mg/mL,64.32,44.1{{22} Cafodd },67.24,86.63,80.95,51.37,a99.62 y cant o DPPH"radical eu diffodd gan CEE, HE, DMF, EAF, WBF, WF a VC, yn y drefn honno. Dangoswyd yr IC50 isaf ar gyfer sborionio DPPH"ymysg yr holl ffracsiynau gan EAF(0.116±{{30}}.015 mg/mL )cael ei symud ymlaen gan WBF (0.175 ± 0.03 mg/mL),CEE (0.23 ± 0.065 mg/mL), a DMF (0.297 ±0.044 mg/mL). Dangosodd WFa HF werthoedd IC50 cymharol uwch (0.964 ± 0.178 a 1.245 ± 0.105 mg/mL), yn y drefn honno.

Observed differentials in the scavenging activities of the fractions against the DPPH*radical may be assigned to the structural characteristics and the number of phenolic compounds present in each fraction. Similar results were observed in the medicinal plant Liquidambar formosana Hance leaf since the EAF was more effective than the other fractions (dichloromethane, n-butanol, and water fractions)[31]. As a standard molecule, ascorbic acid (VC) displayed the lowest IC50 value (0.039 ±0.009 mg/mL) in comparison to all fractions. The scavenging potential is in decreasing order of VC>EAF> WBF>DMF >CEE>WF>HF.

Roedd cydberthynas arwyddocaol gadarnhaol rhwng gwerth IC50 ar gyfer chwilota radical DPPH â chynnwys TP (r=0.963;p<0.01) and="" tf="" content(r=""><0.01)as presented="" in="" table="" 5.="" therefore,="" the="" discovered="" antioxidant="" activity="" suggested="" that="" eaf="" can="" be="" a="" source="" of="" numerous="" natural="" compounds="" with="" antioxidant="" properties="" that="" can="" act="" as="" hydrogen="" donors="" to="" terminate="" the="" process="" of="" oxidation="" by="" converting="" the="" free="" radicals="" to="" their="" stable="">

2.6.2.ABTS· ynghyd â Gweithgaredd Sborion

Defnyddir assay sborion ABTS yn helaeth fel mynegai i hysbysu ac ymchwilio i gynhwysedd gwrthocsidiol cyfansoddion pur yn ogystal â darnau naturiol [32,33]. Gall pylu lliw glas/gwyrdd y cromoffor ABTS* ar 734 ym mhresenoldeb echdyniad planhigion fod yn arwydd o weithgaredd gwrthocsidiol.

Fel y dangosir yn Ffigur 2B, dangosodd cromlin sborion CEE/ffracsiynau ar ABTS* ynghyd â thuedd ar i fyny wrth i'r crynodiad gynyddu. Ar 1 mg/mL, cyfraddau sborion CEE, HF, DMF, WBF, EAF, WF, a VC oedd 80.31,40.54,88.76, 9{{2{ {22}}}}.11,82.97, 67.36, a 94.90 y cant , yn y drefn honno. Ymhlith yr holl ffracsiynau, dangoswyd y gwerth lleiaf ICs0 gan EAF(0.11{{30}}±0.014 mg/ mL)cael ei symud ymlaen gan DMF(0.196±0.023 mg/mL),WBF (0.277±0.031 mg/mL), CEE(0.429 ± 0.039 mg / mL), a WF (0.654 ± 0.043 mg / mL), tra dangosodd HF y gwerth ICs0 uchaf (1.314 ± 0.104 mg / mL). Gyda'i gilydd, roedd y canfyddiad hwn yn cyd-fynd â chanfyddiad Kaewseejan a Siriamornpun [29]. Roedd cymhariaeth â chynhwysedd ataliol VC(0.025 ±0.005 mg/mL) yn dangos bod gweithgaredd sborion CEE a'i ffracsiynau ychydig yn wan.

Fel y cyflwynir yn Nhabl 5, cydberthynas hynod arwyddocaol o sborion radical ABTS â chynnwys TP (r=0.921;p<0.01), and="" a="" significant="" correlation="" with="" tf="" content="" (r=""><0.05), were="" shown.="" this="" finding="" confirms="" the="" results="" obtained="" for="" the="" dpph*scavenging="" assay,="" proving="" the="" capacity="" of="" eaf="" to="" scavenge="" free="">

2.6.3. Gweithgaredd Sborion H2O2

Gan ei fod yn brif gyfrannwr at straen ocsideiddiol, mae H2O2 yn gwasgaru'n rhwydd trwy gelloedd ar draws y bilen fel moleciwl negesydd [34]. Gyda'i gilydd, nid yw H2O2 ei hun yn beryglus [35], ond gall adweithio â Fe2 trwy adwaith Fenton ac achosi'r radical hydrocsyl (OH*) adweithiol iawn [36]. Felly, dyma'r ROS mwyaf niweidiol i fiomoleciwlau. Felly, mae angen gwerthuso gallu CCE a'i ffracsiynau amrywiol i chwilio am H2O2.

Scavenging activities of CEE/fractions, as well as standard antioxidants, were presented in Figure 2C. Notably, all extracts showed a strong scavenging activity on HO, which increased with the increase of sample doses ranging from 0.1 to 1 mg/mL. Moreover, the H2O2 scavenging potential decreased in the order of EAF> WBF>DMF>CEE>WF>HF, a'r galluoedd sborionio cyfatebol ar 1.0 mg/mL oedd 84.56,75.24, 67.17,56.18, 50.19, a 34.95 y cant, yn y drefn honno, a oedd yn llawer is na rhai VC (98.03 y cant ).

Ymysg yr holl ffracsiynau, dangosodd EAF y gwerth IC50 isaf (ICs0= 0.098±0.013 mg/mL), ac roedd yn sylweddol uwch nag un VC (0.024 ± 0.006 mg/mL). Gall hyn fod oherwydd presenoldeb cyfansoddion ffenolig a flavonoid uchel yn yr EAF, y gwyddys yn eang eu bod yn chwarae rhan hanfodol fel gwrthocsidyddion mewn systemau biolegol. Yn ein hastudiaeth ddiweddar, fe wnaethom ddangos gallu'r EAF o E.fragilis i amddiffyn Tetrahymena pyriformis yn erbyn difrod ocsideiddiol a achosir gan H2O [37].

Roedd ein dadansoddiad data yn dangos, yn yr un modd â chanlyniadau DPPH" ac ABTS* plus, bod cydberthynas gadarnhaol gref o werth ICs0 ar gyfer chwilota H2O2 gyda chynnwys TP (r=0.926; p<0.01) and="" tf="" content="" (r=""><0.01)(table 5).="" in="" their="" study,="" sroka="" and="" cisowski="" [38]="" reported="" also="" a="" positive="" correlation="" between="" phenolic="" compounds="" with="" ho2-scavenging="" ability.="" according="" to="" these="" authors,="" the="" ho2-scavenging="" depended="" strongly="" on="" the="" number,="" positions,="" and="" the="" model="" of="" substitution="" of="" oh="" bonded="" to="" the="" aromatic="" ring="" of="" phenolic="">

2.6.4. Lleihau Grym

Mae pŵer lleihau detholiad yn gweithredu fel dangosydd o'i weithgaredd gwrthocsidiol posibl [39, A40]. Amcangyfrifir y potensial gwrthocsidiol gan allu gwrthocsidyddion i leihau haearn (Fe3) mewn clorid fferrig i fferrus (Fe2 plus). Yn gyffredinol, priodolir yr eiddo lleihau i bresenoldeb reductones mewn echdynion planhigion, y cydnabyddir eu bod yn gweithredu trwy dorri'r gadwyn radical rhydd trwy roi atom hydrogen [41].

Mae Ffigur 2D yn dangos y gromlin dos-ymateb ar gyfer pŵer lleihau echdynion E. fragilis. Mae'n hysbys po uchaf yw'r amsugnedd ar 700 nm, y mwyaf yw'r gallu lleihau. Yn yr astudiaeth gyfredol, dangosodd CEE a'i bum ffracsiynau bŵer lleihau sylweddol mewn modd sy'n dibynnu ar ganolbwyntio.

Dangosodd yr EAF y gweithgaredd gwrthocsidiol mwyaf (EC{{{0}}.136± 0.{{10}}13 mg/mL) o gymharu â VC(EC{{4) }}.083± 0.005 mg/mL). Dilynwyd hyn yn agos gan WBF (EC50=0.180 ± 0.028 mg/mL), DMF (EC50=0.319 ± 0.031 mg/mL), CEE (EC50=0.334±0.029mg/mL), a WF(EC50=0.398±0.064 mg/mL) .HF ar ei hôl hi gan ddangos gweithgaredd pŵer lleihau lleiaf (EC5s0 =0.626±0.068 mg/mL) o gymharu â ffracsiynau eraill. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu y gall EAF gynnwys gwahanol gyfansoddion unigol sydd â gweithgaredd pŵer lleihau effeithiol a phwerus. Mae gwyddonwyr wedi canfod y gallai darnau asetad ethyl wasanaethu fel gwrthocsidyddion cryf [42].

Gwelwyd cydberthynas gadarnhaol rhwng pŵer rhydwytho a chynnwys TP a TF (r=0.975; p<0.01 and="" r="0.987;"><0.01; respectively).these="" correlations="" confirmed="" the="" contribution="" of="" phenolic="" compounds="" in="" the="" reducing="" power="">

2.6.5. Assay Phosphomolybdenwm

Gwerthuswyd TAC y CEE a'i ffracsiynau yn ogystal â VC gan ddefnyddio'r assay phospho-molybdenwm a'i fynegi fel ECs0, sef y crynodiad sy'n darparu 0.5 o amsugnedd. Roedd y dull yn seiliedig ar leihau Mo(VI) i Mo(V) gan echdynion i ffurfio cymhlyg ffosffad gwyrdd/Mo (V) ar pH asidig gyda'r amsugniad uchaf yn 695 nm [43].

As shown in Figure 2E, the total antioxidant capacity of CCE/fractions and VC correlated well with increasing concentrations in the range of 0.1 to 1 mg/mL.Of the CEE fractions, the ECs0 values ranged from 0.159±0.019 to 0.604±0.073 mg/mL, with a descending order of EAF>WBF> DMF> CEE >WF>HF(t<0.05), which="" indicates="" that="" eaf="" and="" hf="" had="" the="" highest="" and="" lowest="" antioxidant="" activity,="" respectively.="" this="" activity="" could="" be="" due="" to="" the="" presence="" in="" eaf="" of="" various="" phenolic="" compounds="" that="" might="" possess="" antioxidant="" activity.="" vc,="" which="" is="" the="" positive="" control,="" displayed="" the="" lowest="" ec5o="" value="" (0.095±="" 0.008="" mg/ml)="" in="" comparison="" to="" all="">

Gwelwyd cydberthynas arwyddocaol iawn rhwng cyfanswm gweithgaredd gwrthocsidiol a chynnwys TP a chynnwys TF (r=0.978 ar gyfer y ddau;p;<0.01) and="" is="" shown="" as="" presented="" in="">

2.6.6. -Carotene-Linoleate Model System

Yn y model asid -caroten-linoleig, mae'r moleciwlau -caroten hynod annirlawn yn cael eu lliwio'n gyflym oherwydd radicalau rhydd linoleig a gynhyrchir gan ocsidiad asid linoleig [44]. Gallai ychwanegiad â gwrthocsidyddion leihau ocsidiad -caroten trwy niwtraleiddio radicalau rhydd linolead, ac felly atal cannu -caroten [45].

Antioxidant activity of CCE/fractions and BHT, as measured by the β-carotene-linoleate model, are shown in Figure 2F. All tested extracts showed concentration-dependent scavenging activity. The EAF, which contained the highest amount of phenolics and flavonoids contents, showed a significant effect in inhibiting β-carotene bleaching, reaching 74.75%at a concentration of 1mg/mL. WBF, CCE, DMF, HF, and WF inhibited the oxidation of β-carotene by 51.61,58.12,50.09,41.39, and 31.66% respectively, at the same concentration. Overall, decreasing antioxidant activity was depicted as EAF> WBF> CEE>DMF>HF>WF.

Roedd yr EAF yn dangos isafswm gwerth IC50(IC50=0.127 ± 0.{{10}}42 mg/mL) o gymharu â BHT (ICs { {5}}.049 ± 0.001 mg/mL). WBF. CCE. DME. WE. a dangosodd HF werthoedd IC cymharol uwch0 o 0.5±0.111 mg/mL, 0.998 ± 0.101 mg/mL, 1.073± 0.084 mg/mL,1.402±0.058 mg/mL 2.209 ± 0.081 mg/mL, yn y drefn honno.

Gwelwyd cydberthynas arwyddocaol mewn modd cadarnhaol rhwng ysborion ocsidiad -caroten a chynnwys TP (r= 0.850;p<0.05) and="" tf="" content="" (r=""><0.05)(table 5).="" this="" result="" suggests="" that="" eaf="" may="" contain="" some="" antioxidants="" that="" can="" inhibit="" the="" formation="" of="" hydroperoxide="" and="" stop="" the="" radical-chain="" reaction="">

The involvement of reactive oxygen species (ROS) in several pathological situations has been growing recently. Bioactive compounds are gaining interest thanks to their potent antioxidant activity, but their complexity imposes the development of many methods to evaluate the antioxidant activity and the effectiveness of these chemical compounds. Thus, in this study, CEE and its fractions have been investigated for their antioxidant potential using six assays: DPPH, ABTS, H>O, RP, TAC, a -caroten. Felly, gwnaethom ddangos bod gweithgareddau gwrthocsidiol cryf CEE a'i ffracsiynau yn arddangos gweithgareddau chwilota uwch, a gallai hyn fod yn gryf oherwydd eu cyfansoddiad o asid ffenolig a flavonoidau fel asid galig, rutin, a quercetin.