Rhan 1: Mae Echinacoside yn Atal Rhyddhau Glwtamad Trwy Atal Ca2 sy'n Ddibynnol ar Foltedd ynghyd â Mynediad A Protein Kinase C mewn Terfynellau Nerfau Cerebrocortical Rat
Mar 05, 2022
Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com
Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 a Su Jane Wang 3,*
Crynodeb:
Gall y system glwtamatergig fod yn rhan o effeithiau therapïau niwro-amddiffynnol.Echinacoside, glycoside ffenylethanoid wedi'i dynnu o'r perlysiau meddyginiaethol TsieineaiddHerba Cistanche, yn cael effeithiau niwro-amddiffynnol. Ymchwiliodd yr astudiaeth hon i effeithiauechinacosidear 4-rhyddhau glwtamad a achosir gan aminopyridin mewn terfynellau nerfau cerebrocortical llygod mawr (synaptosomau). Roedd Echinacoside yn atal rhyddhau o glwtamad Ca2 plus -dependent, ond nid Ca2 plus -independent, 4- mewn modd sy'n dibynnu ar grynodiad. Fe wnaeth Echinacoside hefyd leihau'r 4-cynnydd a ysgogwyd gan aminopyridin mewn crynodiad Ca2 a mwy rhydd o sytoplasmig ond ni newidiodd botensial y bilen synaptosomaidd. Cafodd effaith ataliol echinacoside ar 4-rhyddhau glwtamad sy'n deillio o aminopyridin ei atal gan o-conotocsin MVIIC, atalydd sbectrwm eang o sianeli Cav2.2 (math N) a Cav2.1 (math P/Q). , ond roedd yn ansensitif i'r Ca2 mewngellol ynghyd ag atalyddion rhyddhau dantrolene a 7-chloro-5-(2-chlorophenyl)-1,5-dihydro-4 ,1-benzodiazepine-2(3H)-un (CGP37157). At hynny, gostyngodd echinacoside y ffosfforyleiddiad o brotein Cinase C a achosir gan aminopyridine, a diddymodd atalyddion protein kinase C effaith echinacoside ar ryddhau glwtamad. Yn ôl y canlyniadau hyn, rydym yn awgrymu bod effaith ataliol echinacoside ar ryddhau glwtamad ysgogedig yn gysylltiedig â llai o foltedd-ddibynnol Ca2 ynghyd â mynediad ac atal dilynol gweithgaredd protein kinase C.
Geiriau allweddol:echinacoside; rhyddhau glwtamad; terfynellau nerfol cerebrocortical; sianeli Ca2 a mwy sy'n ddibynnol ar foltedd; protein kinase C
1. Rhagymadrodd
Echinacosideyn glycoside ffenylethanoid mawr sy'n bresennol ynHerbaCistanche, meddyginiaeth Tsieineaidd draddodiadol adnabyddus a ddefnyddir i drin anghofrwydd, analluedd, a rhwymedd cronig [1].Echinacosideyn meddu ar amrywiol fioweithgareddau megis gwrthocsidiad, gwrth-lid, gwrthganser, hepatoprotection, a modiwleiddio imiwnedd [2-4]. Yn nodedig, mae gan echinacoside effeithiau niwro-amddiffynnol; er enghraifft, gall amddiffyn rhag niwrowenwyndra ocsideiddiol a achosir gan straen neu niwrotocsin mewn niwronau cortigol llygod mawr, celloedd niwroblastoma dynol SH-SY5Y, a chelloedd pheochromocytoma (PC12) [5-8]. Ar ben hynny, mae echinacoside yn gwanhau niwed i'r ymennydd ac yn gwella swyddogaeth wybyddol mewn modelau anifeiliaid o glefyd Parkinson, clefyd Alzheimer, ac achludiad rhydweli ymennydd canol [9-12]. Fodd bynnag, mae'r mecanwaith trwy baechinacosidesy'n achosi niwroprotection nid yw'n cael ei ddeall yn llawn.
Mae niwroamddiffyniad yn broses gymhleth o gadw strwythur a swyddogaeth niwronaidd ar sarhad gwenwynig. Ystyrir bod lleihau excitotoxicity glwtamad yn fecanwaith posibl sy'n ymwneud â niwro-amddiffyniad yr ymennydd. Mae gan Glutamad, niwrodrosglwyddydd asid amino cyffrous, rôl hanfodol mewn sawl swyddogaeth ymennydd [13]. Fodd bynnag, mae gor-actifadu derbynyddion glwtamad o dan grynodiadau glwtamad uchel yn achosi gorlwytho Ca2 ynghyd â mewngellol, camweithrediad mitocondriaidd, cynhyrchu radical rhydd, a marwolaeth niwronaidd [14,15]. Mae'r broses patholegol hon yn gysylltiedig â nifer o anhwylderau'r ymennydd gan gynnwys isgemia cerebral, anaf trawmatig i'r ymennydd, epilepsi, a chlefyd niwroddirywiol [16,17]. Felly, mae atalyddion sy'n rhwystro trosglwyddiad glwtamatergig pathoffisiolegol yn cael eu hystyried yn gyffuriau niwro-amddiffynnol posibl. Enghreifftiau nodedig o'r rhain yw antagonyddion derbynyddion glwtamad [18,19]; fodd bynnag, mae treialon clinigol ar gyfer y cyffuriau hyn wedi methu oherwydd llai o effeithiolrwydd a sgîl-effeithiau annymunol, neu hyd yn oed sytotocsig [20,21]. Yn ogystal â rhwystr uniongyrchol derbynyddion glwtamad, gall ataliad rhyddhau glwtamad fod yn strategaeth effeithiol ar gyfer niwro-amddiffyniad. Gall nifer o niwro-amddiffynyddion (ee, memantine a riluzole) leihau rhyddhau glwtamad ym meinweoedd ymennydd llygod mawr [22-24].
O ystyried rôl glwtamad mewn cynhyrfedd a phroffil niwro-amddiffynnol echinacoside, defnyddiodd yr astudiaeth bresennol derfynellau nerfau ynysig (synaptosomau) wedi'u puro o'r cortecs cerebral llygod mawr i ymchwilio i effaith echinacoside ar ryddhau glwtamad ac archwilio mecanweithiau posibl ymhellach. Mae'r paratoad terfynell nerfol ynysig yn fodel sefydledig ar gyfer astudio rheoleiddio presynaptig rhyddhau niwrodrosglwyddydd gan gyffuriau yn absenoldeb unrhyw effeithiau postsynaptig [25]. Trwy ddefnyddio'r model hwn, fe wnaethom werthuso effaith echinacoside ar ryddhau glwtamad, potensial pilen, mewnlifiad presynaptig Ca2 ynghyd â gweithgaredd protein kinase C. Yn ôl ein hadolygiad o'r llenyddiaeth, dyma'r adroddiad cyntaf sy'n dogfennu'r mecanwaith y mae echinacoside yn ei ddefnyddio i atal rhyddhau glwtamad mewndarddol ar y lefel presynaptig.
2. Canlyniadau
2.1. EchinacosideYn atal 4-Rhyddhau Glwtamad Wedi'i Deffro â Aminopyridin o Derfynellau Nerfau Cerebrocortical Llygoden Fawr trwy Leihau Ecsocytosis Pothellog
Mae Ffigur 1 yn dangos effaith echinacoside sy'n ddibynnol ar grynodiad ar 4-rhyddhau glwtamad wedi'i ysgogi gan aminopyridin o synaptosomau cerebrocortical llygod mawr pur. Mewn synaptosomau wedi'u deor â 1 mM CaCl2, roedd 1 mM 4-aminopyridine yn achosi gollyngiad glwtamad o 7.4 ± {{1{{20}}}}.1 nmol/mg/5 mun, a gafodd ei leihau gan 1, 5, 10, 30, a 50 uM echinacoside i 6.5 ± 0.2, 5.8 ± 0.3, 4.8 ± 0.2,
4.1 ± 0.1, neu 2.3 ± 0.4 nmol/mg/5 mun, yn y drefn honno (F(5,24)=67.1, p=0. 000). Gwerth IC50 ar gyfer ataliad cyfryngol echinacoside o 4-rhyddhau glwtamad wedi'i ysgogi gan aminopyridine, yn deillio o gromlin ymateb dos, oedd 24 uM. Ar ben hynny, mae'r rhyddhad glwtamad a ysgogwyd gan 1 mM 4- aminopyridine mewn hydoddiant allgellog Ca2 plws -yn cynnwys 300 uM ethylene glycol bis (-aminoethyl ether) -N, N, N/, N/- asid tetraacetig (EGTA) oedd 2.1 0.2 nmol/mg/5 mun (F(2,12)=310.65, p=0.000),
ac ni effeithiodd 20 uM echinacoside (1.8 ± 0.2 nmol/mg/5 mun; p - uM echinacoside (1.8 ± 0.2 nmol/mg/5 min; p {{ 1} 0}}.58; Ffigur 1). Mewn synaptosomau sy'n cael eu trin â 0.1 uM bafilomycin A1, atalydd cludo pothellog [26], gostyngwyd yn sylweddol rhyddhau glwtamad wedi'i ysgogi gan aminopyridine (2.2 ± 0.2 nmol/mg/ 5 mun; F (2,12)=249.518, p=0.000). Ym mhresenoldeb bafilomycin A1, methodd 20 uM echinacoside atal rhyddhau glwtamad yn sylweddol (2.1 ± 0.2 nmol/mg/5 min; p=0.94; Ffigur 1). Mewn cyferbyniad, cynyddodd 10 uM DL-threo-beta-benzyl-oxyaspartate (DL-TBOA, atalydd aildderbyn glwtamad) [27], 4-rhyddhau glwtamad a ysgogwyd gan aminopyridine i 11.8 ± 0.4 nmol/mg/5 min ( t(8)=-11.31, p=0.000). Hyd yn oed ym mhresenoldeb DL-TBOA, rhwystrodd 20 uM echinacoside 4-rhyddhau glwtamad a ysgogwyd gan aminopyridine yn arwyddocaol (7.7 ± 0.2 nmol/mg/5 mun; F(2,12)=87.23, t=0.000; Ffigur 1).
2.2 Mae Echinacoside yn Lleihau Ca2 Sytosolig ynghyd â Crynodiad ond Nid yw'n Newid Potensial Pilenni Synaptosomaidd
Dadbolariad synaptosome a achosir gan 1 mM 4-cynnydd aminopyridine Ca2 ynghyd â chrynodiad (p=0.000; Tabl 1). Nid oedd cymhwyso 20 uM echinacoside yn effeithio'n sylweddol ar grynodiad Ca2 sylfaenol ynghyd â chrynodiad (t(8)=0.06, p=0.95) ond wedi lleihau'n sylweddol y cynnydd 4- a achosir gan aminopyridin mewn Ca2 plws crynodiad (t(10)=6.16, p=0.000). Yn ogystal, cynyddodd 1 mM 4-aminopyridine mewn 3',3',3'-dipropylthiadicarbocyanine ïodid [DiSC3(5)] fflworoleuedd (p=0.000). Ni wnaeth ychwanegu 20 uM echinacoside newid potensial y bilen gorffwys (t(8)=0.976, p=0.36) nac yn newid yn sylweddol y cynnydd 4-cyfrwng aminopyridin yn DiSC3 (5) fflworoleuedd (t(8)=-0.014, p=0.99; Tabl 1).
2.3 Gall Llai o Ca2 plws Mewnlifiad trwy'r Sianeli Cav2.2 (N-Type) a Cav2.1 (P/Q-Type) Fod yn Gysylltiedig ag Atal 4-Rhyddhau Glwtamad Wedi'i Droi â Aminopyridin gan Echinacoside
Mae Ffigur 2 yn dangos bod 2 uM o-conotocsin MVIIC, atalydd sianel math N- a P/Q-Ca2 plws, wedi lleihau 4-rhyddhau glwtamad aminopyridin o 7.4 ± {{10}}. 2 i 2.0 ± 0.1 nmol/mg/5 mun (t(9)=25.35, p=0.000). Ym mhresenoldeb o-conotocsin MVIIC, nid oedd effaith 20 uM echinacoside ar 4-rhyddhau glwtamad a ysgogwyd gan aminopyridine yn arwyddocaol (1.8 2± plws 0.2 nmol/mg/5 mun; t(8)=1.06,p=0.32). Dantrolene (10 uM), atalydd rhyddhau Ca mewngellol o'r endoplasmig
reticwlwm [28], gostyngiad o 4-rhyddhau glwtamad sy'n deillio o aminopyridine (5.6 ± 0.3 nmol/mg/5 mun; F(2,14) {{10}}. 95, p=0.000). Fodd bynnag, ym mhresenoldeb dantrolene, gallai 20 uM echinacoside ddal i atal rhyddhau glwtamad yn sylweddol (3.3 ± 0.2 nmol/mg/5 min; p=0.000). Gwelwyd canlyniadau tebyg gan ddefnyddio 100 uM 7-chloro-5-(2-chloropheny)-1,5-dihydro-4,1-benzothiazepin) -2(3H)-one (CGP37157), rhwystrwr pilen-athraidd o Na a chyfnewid mitocondriaidd /Ca2 plws. Yn y pum paratoad synaptosomaidd a archwiliwyd, gostyngodd 20 uM echinacoside ynghyd â 100 uM CGP37157 4-rhyddhau glwtamad aminopyridine-daledig gan 48.3 y cant ± 5.2 y cant (F(2,13) = 136. 49}}.000), yn debyg i'r ataliad gan echinacoside yn unig (46.2 y cant ± 2.3 y cant; p=0.89; Ffigur 2).
2.4 EchinacosideYn atal 4-Rhyddhau Glwtamad Wedi'i Deffro â Aminopyridin trwy Signalu trwy Protein Kinase C
Fel y dangosir yn Ffigur 3, 10 uM 2-[1-(3-dimethylaminopropyl)indol-3-yl]-3-(indol-3-yl) maleimide (GF109203X), atalydd protein kinase C cyffredinol [29], wedi gostwng 4-rhyddhau glwtamad aminopyridine-daledig (F(2,13) = 19.46, p=0.{{17} }}). Yn y synaptosomau a driniwyd gan GF109203X, gostyngodd 20 uM echinacoside 4-rhyddhau glwtamad a aminopyridine-atgofio o ddim ond 5.5 y cant ± 1.8 y cant (p=0.89), llai na hynny gan echinacoside yn unig (42.43 y cant ± ± 42.43 y cant ± ± ± 42.43 y cant yn unig). y cant ;p=0.000). Cafwyd canlyniadau tebyg gyda 5,6,7,13-tetrahydro-13-methyl-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pyrrolo[3 ,4-c]carbazole-12-propanenitrile (Go6976), sy'n ddetholus ar gyfer isoformau kinase protein protein-ddibynnol Ca2 ( , I, II, y) [29]. Ym mhresenoldeb 3 uM Go6976, gostyngodd 20 uM echinacoside ryddhad glwtamad 11.9 y cant ± 2.9 y cant (p=0.59), sy'n golygu gostyngiad sylweddol o'i gymharu â hynny gan echinacoside yn unig (42.4 y cant 2.3 y cant; p {{ }; 65}}.000; Ffigur 3). Mewn cyferbyniad, ni wnaeth 3 uM rottlerin, atalydd protein kinase C6 Ca2 plus-annibynnol [30], newid yn sylweddol 4- aminopyridine (1 mM)-rhyddhau glwtamad wedi'i ysgogi (p=0.45). Serch hynny, ym mhresenoldeb rottlerin, achosodd 20 uM echinacoside ataliad cyfartalog o 37.1 y cant ± 5.6 y cant o'r datganiad (F(2,13) = 19.72, p=0.{{88) }}), yn debyg i'r un gan echinacoside yn unig (p=0.41; Ffigur 3). Yn ogystal, mae'r atalydd kinase protein a weithredir gan mitogen 2-(2-amino-3-methoxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one) (PD98059 ) (50 uM) a'r atalydd protein kinase A N-[{2-(p-bromocinnamylamino)ethyl]-5-isoquinolinesulfonamide (H89) (100 uM) wedi lleihau 4-rhyddhau glwtamad a aminopyridin (p=0.000). Hyd yn oed ym mhresenoldeb PD98059 neu H89, fe wnaeth 20 uM echinacoside leihau'r rhyddhad i bob pwrpas (F(2,13) = 52.3, p=0.000; Ffigur 3).
Dengys Ffigur 4 fod 1 mM 4-aminopyridine wedi cynyddu ffosfforyleiddiad protein kinase C mewn synaptosomau (t(4)=-6.871, p=0.002). Pan gafodd synaptosomau eu trin ymlaen llaw ag 20 uM echinacoside am 10 munud cyn ychwanegu 4-aminopyridine, 4-ffosfforyleiddiad a achosir gan aminopyridine o brotein kinase C wedi gostwng yn sylweddol (F(2,6)=29.202 , p=0.001).
2.5 Nid yw Ataliad Echinacoside-Canoledig rhag Rhyddhau Glwtamad yn Cynnwys Derbynnydd Math A Gama-Aminobutyrig Asid A (GABAA)
Yn Ffigur 5, cymharwyd effaith echinacoside ar 4-rhyddhau glwtamad a achosir gan aminopyridine yn absenoldeb neu bresenoldeb SR95531 (gwrthwynebydd derbynnydd GABAA). Yn ogystal, ni wnaeth 100 uM SR95531 newid yn sylweddol 4-rhyddhau glwtamad aminopyridine (1 mM). Yn y synaptosomau SR95531-wedi'u trin, arweiniodd defnyddio 20 uM echinacoside at ataliad o 43 y cant ar 4-rhyddhau glwtamad wedi'i ysgogi gan aminopyridin (F(2,12)=42.63, p { {18}}.000), nad oedd yn arwyddocaol wahanol i'r ataliad a gynhyrchwyd gan echinacoside yn unig (40 y cant; p=0.000). Cafwyd canlyniad tebyg gydag antagonydd derbynnydd GABAA arall, bicwculline (50 uM). Roedd y gollyngiad a fesurwyd ym mhresenoldeb bicuculline ac echinacoside yn sylweddol wahanol i'r hyn a gafwyd ym mhresenoldeb bicuculline yn unig (p=0.000).
3. Trafodaeth
Yn yr astudiaeth hon,echinacoside, cyfansawdd gweithredol yn HerbaCistanche, atal 4-rhyddhau glwtamad sy'n deillio o aminopyridin yn nherfynellau nerf cortecs yr ymennydd llygod mawr. Mae'r mecanweithiau sylfaenol posibl ar gyfer yechinacoside-mae ataliad cyfryngol o ryddhau glwtamad yn cael ei ymchwilio ymhellach a'i drafod yma.
3.1 Mecanweithiau sy'n Sail i Atal Rhyddhau Glwtamad oherwydd Echinacoside
Mae rhyddhau glwtamad a ysgogwyd gan 4-yn cynnwys dwy gydran: cydran Ca2 plws-ddibynnol sy'n berthnasol yn ffisiolegol, a gynhyrchir trwy ecsocytosis fesiglau synaptig sy'n cynnwys glwtamad; a chydran Ca2 plus -annibynnol, sy'n tarddu o ddadbolariad hirfaith gan achosi symudiad cyfryngol posibl o bilen cyflwr cyson y cludwr glwtamad tuag at y cyfeiriad allanol, gan effeithio felly ar elifiad glwtamad sytosolig [31]. Yma, gwelsom nad oedd echinacoside yn atal rhyddhau glwtamad wedi'i ysgogi gan aminopyridin yn sylweddol ym mhresenoldeb cyfrwng di-Ca2 plws (Ca2 plus -independent release). At hynny, cafodd yr ataliad a arsylwyd trwy echinacoside-cyfryngol o ryddhau glwtamad aminopyridine-codiedig ei atal yn effeithiol gan bafilomycin A1 (sy'n disbyddu cynnwys glwtamad fesiglau synaptig), ond nid gan DL-TBOA (sy'n atal pob asid amino cyffrous yn ddetholus. isdeipiau cludwr). Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu bod echinacoside yn effeithio ar yr ecsocytosis Ca2 plus -ddibynnol o ryddhau glwtamad heb effeithio ar yr alllifiad sytosolig Ca2 plus-annibynnol o glwtamad trwy wrthdroi'r cludwr glwtamad pilen plasma nerf terfynell. Mewn terfynellau synaptig, mae ataliad sianel Na plus neu actifadu sianel K plus yn sefydlogi cyffro'r bilen ac o ganlyniad yn lleihau'r mynediad at Ca2 ynghyd â mynediad a rhyddhau niwrodrosglwyddydd [32,33]. Felly, mae'r mecanwaith posibl sy'n sail i ataliad rhyddhau glwtamad trwy gyfrwng echinacoside yn cynnwys gostyngiad mewn cyffroedd synaptosomaidd. Fodd bynnag, mae'r posibilrwydd hwn yn anghynaladwy ar sail dau arsylwad: (1) Nid oedd ychwanegu echinacoside wedi effeithio ar ddadbolariad potensial pilen wedi'i ysgogi gan aminopyridin, wedi'i fesur â llifyn sensitif y bilen DiSC3(5); a (2) nid oedd echinacoside yn effeithio ar y 4-rhyddhau glutamate-annibynnol Ca2 a aminopyridine a ysgogwyd gan aminopyridine, sef cydran rhyddhau sy'n dibynnu ar botensial y bilen yn unig [31]. Os nad yw'r effaith yn cael ei achosi gan ataliad cyffroedd synaptosomaidd, gellir ei amlygu trwy leihad yng ngweithgaredd Cav2.2 (math N) a sianeli Cav2.1 (math P / Q) Ca2 ynghyd ag ecsocytosis glwtamad yn y terfynellau nerfau [34–36]. Trwy ddefnyddio fura-2, rydym yn dangos bod echinacoside yn lleihau'n sylweddol y cynnydd o 4- aminopyridine mewn crynodiad Ca2 plws. Yn ogystal, mae ein data'n dangos bod effaith ataliol echinacoside ar ryddhad glwtamad sy'n deillio o aminopyridine wedi gostwng o 42.4 y cant 2.3 y cant i 12.1 y cant 3.9 y cant ar ôl dod i gysylltiad â rhwystrwr o Cav2.2 (math N) a Cav2 .1 (math P/Q) Ca2 plws sianeli. Ar ben hynny, gwelsom fod echinacoside yn parhau i atal yn sylweddol 4-rhyddhau glwtamad a ysgogwyd gan aminopyridine ym mhresenoldeb atalyddion rhyddhau mewngellol Ca2 ynghyd â rhyddhau. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos mai ataliad ar yr un pryd o weithgaredd sianel Cav2.2 (math N) a Cav2.1 (math P / Q) Ca2 plus yw'r mecanwaith posibl sy'n sail i ataliad rhyddhau glwtamad trwy gyfrwng echinacoside. Fodd bynnag, ni allai actifadu cyfunol gweithgaredd sianel Cav2.2 (math N) a Cav2.1 (math P/Q) Ca2 plus rwystro gweithred echinacoside yn llwyr. Felly, gall mathau anhysbys eraill o sianeli Ca2 plus neu lwybrau presynaptig eraill fod yn rhan o'r ataliad. Er enghraifft, mae derbynyddion GABAA yn bresennol ar y lefel presynaptig, a dangoswyd bod eu hactifadu yn atal rhyddhau mewnlifiad a glwtamad Ca2 plus [37]. Yn yr astudiaeth bresennol, ni rwystrodd antagonyddion derbynyddion GABAA SR95531 a bicuculline ataliad echinacoside rhag rhyddhau glwtamad, gan awgrymu nad yw derbynyddion GABAA yn ymwneud â lleihau gweithgaredd sianel Ca2 plus sy'n ddibynnol ar foltedd ac yn yr ataliad dilynol o ryddhau glwtamad. Mae Ca2 ynghyd â mynediad trwy sianeli Ca2 plus sy'n ddibynnol ar foltedd yn actifadu sawl cines protein sy'n gysylltiedig â rhyddhau glwtamad mewn terfynellau nerfau gan gynnwys protein kinase a weithredir gan mitogen, protein kinase C, a phrotein kinase A. Yma, rydym yn dangos bod atalyddion protein kinase C yn gwrthweithio'r echinacoside yn effeithiol - ataliad cyfryngol o ryddhau glwtamad; serch hynny, roedd yr atalydd protein kinase a weithredir gan mitogen PD98059 neu'r atalydd protein kinase A H89 yn aneffeithiol. At hynny, gostyngodd y 4-ffosfforyleiddiad protein kinase C a achosir gan aminopyridine mewn synaptosomau ar ôl rhag-drin ag echinacoside mewn crynodiad sy'n effeithiol ar gyfer atal rhyddhau glwtamad. Felly, gall llwybr signalau'r ataliad rhyddhau glwtamad trwy gyfrwng echinacoside gynnwys protein kinase C. Mae protein kinase C yn system signalau mewngellol bwysig sy'n bresennol ar y lefel presynaptig ac mae ganddo rôl hanfodol mewn ecsocytosis niwrodrosglwyddydd. Er enghraifft, mae nifer o broteinau synaptig sy'n ymwneud â masnachu mewn fesigl synaptig neu recriwtio ac ecsocytosis, fel y swbstrad C kinase llawn myristoylated alanine, yn cael eu ffosfforyleiddio gan brotein kinase C [38,39]. Gellir cynyddu'r broses ffosfforyleiddiad hon trwy fynediad Ca2 ynghyd â dadbolariad, sy'n hwyluso rhyddhau glwtamad [40]. Felly, gallwn yn rhesymol ddyfalu y gallai effaith ataliol echinacoside ar Ca2 ynghyd â mynediad a welir yma leihau gweithgaredd protein kinase C ac o ganlyniad rhyddhau glwtamad.
