Rhan 1: Effeithiau Isorhamnetin Ar Ddiabetes A'i Gymlethdodau Cysylltiedig: Adolygiad O Astudiaethau In Vitro Ac In Vivo A Dadansoddiad Trawsgrifiadol Ôl-hoc O'r Llwybr Moleciwlaidd Cysylltiedig

Am fwy o wybodaeth. cyswllttina.xiang@wecistanche.com

Haniaethol: DiabetesMae mellitus, yn enwedig type2 (T2DM), yn broblem iechyd cyhoeddus fawr yn fyd-eang. Nodweddir DM gan lefelau uchel o glycemia ac inswlinemia oherwydd diffyg secretiad inswlin a sensitifrwydd inswlin y celloedd, a elwir yn ymwrthedd inswlin. Mae T2DM yn achosi cymhlethdodau lluosog a difrifol fel neffropathi, niwroopathi, a retinopathi gan achosi niwed ocsideiddiol celloedd mewn gwahanol feinweoedd mewnol, yn enwedig y pancreas, y galon, meinwe adipose, yr afu a'r arennau. Mae echdynion planhigion a'u ffytogemegau bioactif yn ennyn diddordeb fel dewisiadau therapiwtig ac ataliol newydd ar gyfer T2DM a'i gymhlethdodau cysylltiedig. Yn hyn o beth, isorhamnetin, planhigynflavonoid, wedi'i astudio ers amser maith am ei effeithiau gwrth-diabetig posibl. Mae'r adolygiad hwn yn disgrifio ei effaith ar leihau anhwylderau sy'n gysylltiedig â diabetes trwy ostwng lefelau glwcos, gwella'r statws ocsideiddiol, lleddfu llid, a modiwleiddio metaboledd lipid a gwahaniaethu adipocyte trwy reoleiddio'r llwybrau signalau dan sylw a adroddwyd yn yr astudiaethau in vitro ac in vivo. Yn ogystal, rydym yn cynnwys dadansoddiad trawsgrifio genom cyfan post hoc o weithgareddau biolegol isorhamnetin gan ddefnyddio offeryn sy'n seiliedig ar fôn-gelloedd.

Geiriau allweddol: isorhamnetin; quercetin; gweithgareddau biolegol; diabetes; llwybrau moleciwlaidd; micro-arae

Cliciwch yma i ddysgu mwy o gysylltiadau

1. Rhagymadrodd

Mae planhigion wedi cael eu defnyddio fel meddyginiaethau traddodiadol ym mron pob cyfandir o'r byd ers yr hen amser. Mae ymchwil wyddonol i'r rhesymau dros eu defnydd meddyginiaethol wedi arwain at archwilio moleciwlau bioactif. Ystyrir bod planhigion eithafol sy'n tyfu mewn amodau amgylcheddol eithafol yn ffynhonnell bosibl dda o foleciwlau bioactif o ddiddordeb. Mewn gwirionedd, mae'r cyfyngiadau amgylcheddol hyn ar darddiad metaboledd ocsigen camweithredol, sy'n arwain at straen ocsideiddiol trwy gynyddu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) [1,2]. Mae gan rai planhigion, fel haloffytau, bwerusgwrthocsidiolsystem i ddileu'r cyfansoddion niweidiol hyn. Ymhlith y moleciwlau bioactif o ddiddordeb, mae cyfansoddion ffenolig. Mae sawl astudiaeth wedi gwerthfawrogi planhigion sy'n gyfoethog mewn polyffenolau gyda neu heb amodau cyfyngol yn y labordy [3-10]. Priodolir nifer o effeithiau biolegol i ddetholiadau sy'n gyfoethog mewn polyphenolau, megis gweithgareddau gwrthlidiol a gwrthganser [11-13]. Dangosodd astudiaethau eraill effeithiau gwrthocsidiol, gwrthficrobaidd [8,14-16] yn ogystal ag effeithiau gwrth-ordewdra, gwrth-diabetig a steatotig gwrth-hepatig [17-19] isorhamnetin. Ymhlith y polyphenolau hyn,flavonoidauyn nodedig. Mae'r grŵp hwn yn cynnwys sawl is-grŵp, megis flavonols. Isorhamnetin yw un o brif gyfansoddion flavonols. Mae Isorhamnetin yn flavone monomethoxy neu flavonol O-methylated o'r dosbarth o flavonoidau. Mae'nquercetinlle mae grŵp methoxy yn disodli'r grŵp hydroxy yn safle 3'. Mae rhai deilliadau isorhamnetin yn bresennol mewn natur, megis isorhamnetin 3-O- -d-glucopyranoside, isorhamnetin 3-O-neohesperidoside, ac isorhamnetin 3-O-rutinoside o Calendula officinalis L .[20]. Mae Isorhamnetin yn cyflwyno priodweddau biolegol sylweddol megis gwrthocsidiol [21], gwrthganser [22], gwrthficrobaidd [23], gwrthfeirysol [24], effeithiau gwrthlidiol a gwrth-diabetig [21,25-33].

Yn yr adolygiad hwn, mae'r ffocws cyntaf ar darddiad, strwythur cemegol, ynysu, a dulliau echdynnu, yn ogystal ag agwedd ffytocemegol isorhamnetin. Yna, yn yr ail ran, rydym yn canolbwyntio ar ddisgrifio effeithiau gwrth-diabetig posibl y flavonol hwn trwy leihau anhwylderau sy'n gysylltiedig â diabetes trwy ostwng lefelau glwcos, gwella'r statws ocsideiddiol, lleddfu llid, a modiwleiddio metaboledd lipid a gwahaniaethu adipocyte. Yn olaf, cynhaliom ddadansoddiad eilaidd o'n data micro-arae genom cyfan a gyhoeddwyd yn flaenorol i archwilio bio-weithgareddau isorhamnetin sy'n gysylltiedig â diabetes mewn offeryn sy'n seiliedig ar fôn-gelloedd. Rydym hefyd yn anelu at dynnu sylw at effaith y moleciwl hwn ar reoleiddio'r llwybrau signalau dan sylw trwy adrodd ar yr astudiaethau in vitro ac in vivo a ddefnyddir yn y maes ymchwil hwn. Yn yr adolygiad hwn, gwnaethom ddatgelu nodweddion gweithgaredd gwrth-diabetig isorhamnetin o gymharu âquercetinsy'n cael ei ystyried yn metabolit o isorhamnetin ac yn gyfeiriad pwysig wrth drin diabetes yn naturiol.

2. Trosolwg Cyffredinol o Foleciwlau Bioactif mewn Polyffenolau a Flavonoidau Arbennig

2.1. Straen Ocsidiol fel Tarddiad Moleciwlau Bioactif mewn Planhigion

Gall sawl planhigyn fod yn destun amodau amgylcheddol amrywiol (halltedd, sychder, pelydrau UV, metelau trwm, tymereddau eithafol, diffyg maetholion, llygredd aer, ac ymosodiadau pathogen). Mae'r cyfyngiadau hyn yn deillio o gamweithrediad metaboledd ocsigen, sy'n cynhyrchu straen ocsideiddiol trwy gynyddu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS). Mae'r moleciwl ocsigen (O2) yn chwarae rhan bwysig mewn organebau ffotosynthetig. Yn wreiddiol, mewn planhigion uwch ac algâu, mae cyfnewid nwy sy'n cynnwys electronau yn digwydd mewn cloroplastau trwy ddal carbon deuocsid yn ystod y dydd a chynhyrchu ocsigen. Mae'r cyfnewid nwy hwn yn cynnwys electronau. Yn wir, yn achos cyfyngiadau amgylcheddol difrifol, nid yw rhan fawr o ocsigen yn cael ei leihau a gall felly gynhyrchu ROS mewn rhai organynnau o gelloedd planhigion [1,2] oherwydd anghydbwysedd yng ngweithrediad priodol cloroplastau a throsglwyddo electronau. 1]. Ar ben hynny, o dan y cyfyngiadau amgylcheddol a grybwyllir uchod, cynhyrchir llawer o ROS, megis radical hydroxyl (OH), radicalau anion superoxide (O,-), alcocsyl a radicalau perocsyl (RO: a RO2, yn y drefn honno), hydrogen perocsid (H2O2, ), radical hypochlorit (-OCl), ocsigen singlet (O2), radical nitrig ocsid (NO) a pherocsidau lipid eraill (fel malondialdehyde a 4-hydroxynononenal)[2,34,35]. Weithiau, efallai y bydd gan ROS rôl mewn signalau celloedd yn ymddygiad ffisiolegol planhigion, er enghraifft yn y broses o dyfu a datblygu hadau, datblygu meinweoedd, a'r trawsnewid o amlhau cellog i ehangiad celloedd yn ystod camau cynharach y gwahaniaethu [36] . Ar lefel uchel, mae'r moleciwlau hyn yn achosi difrod moleciwlaidd fel perocsidiad lipid pilenni, newid proteinau a DNA, a marwolaeth celloedd [1,35,37]. Mae gan rai planhigion, fel haloffytau, y gallu i addasu'n dda i'r amodau hyn trwy system gwrthocsidiol bwerus. Mae'n hysbys bod haloffytau yn ffynhonnell metabolion eilaidd megis polyffenolau [3-10]. Mae'r awduron hyn yn dangos bod polyffenolau yn cael eu syntheseiddio o dan amodau difrifol i chwarae rhan bwysig wrth amddiffyn rhag difrod ocsideiddiol a achosir gan straen. Mae biosynthesis, cynnwys, a gweithgareddau'r cyfansoddion ffenolig hyn yn swyddogaeth nifer o baramedrau anghynhenid ​​(golau, tymheredd, halwynedd, a sychder) a chynhenid ​​(genoteip, organ, a chyfnod datblygu) sy'n dylanwadu ar eu cynnwys a'u dosbarthiad mewn planhigion [ 8,38,39]. Er enghraifft, yn Pyracantha coccinea, mae rhai flavonoidau fel flavanones, flavones, a flavonols yn bresennol yn yr egin yn ystod y cyfnod llystyfol ac yn y gwreiddiau yn unig yn ystod yr un atgenhedlu 40]. Ar y llaw arall, mae sawl awdur wedi dangos bod gan y cyfansoddion ffenolig hyn briodweddau biolegol eraill megis gweithgareddau gwrthlidiol a gwrthganser [11-13]. Dangosodd astudiaethau eraill effeithiau gwrthocsidiol, gwrthficrobaidd [8,14-16] yn ogystal ag effeithiau gwrth-diabetig [18,41,42] darnau ffenolig.

2.2. Dosbarthiad Gwrthocsidyddion Naturiol

Gellir dosbarthu'r system gwrthocsidiol yn ôl natur y cydrannau hyn yn gyfansoddion ensymatig neu anensymatig. Mae'r cyntaf yn cynnwys superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbate peroxidase, a glutathione reductase [1,3542-44]. Datgelodd y genynnau sy'n ymwneud â'r ensymau hyn eu pwysigrwydd yn ystod dirywiad ffisiolegol y gwraidd storio ar ôl y cynhaeaf ac mewn ymateb i straen osmotig ac asid abscisig yn ogystal â haint Xanthomonas axonopodis [44]. Mae'r ail grŵp yn cynnwys cyfansoddion ffenolig yn bennaf, carotenoidau, fitaminau, ac osmolytes [1]. Nodweddir cyfansoddion ffenolig gan bresenoldeb un neu fwy o gylchoedd bensen ac maent yn wahanol yng nghymhlethdod y moleciwl sylfaen, nifer a lleoliad yr hydrocsyl, a graddfa'r polymerization. Mae'r cyfansoddion hyn yn fetabolion eilaidd sy'n perthyn i dri grŵp eang: asidau ffenolig (deilliadau o asidau benzoig a sinamig), flavonoids (flavonols, flavonols, flavanones, flavones, anthocyaninau), a thanin (tanin hydrolyzable a proanthocyanidins). Yn ogystal â'r moleciwlau hyn, mae stilbenes, lignans, a coumarins hefyd yn cael eu gwahaniaethu [45].

2.3. Gwreiddiau a Strwythur Biocemegol Flavonoids, yn Arbennig, Isorhamnetin

Mae cyfansoddion ffenolig yn fetabolion eilaidd sy'n gyffredin mewn planhigion. Mae'r cyfansoddion hyn gyda chylch aromatig gydag un neu fwy o grwpiau hydrocsyl (OH) ac yn cynnwys moleciwlau sy'n amrywio o asidau ffenolig syml i gyfansoddion wedi'u polymeru fel tannin. Mae synthesis cyfansoddion ffenolig yn broses gymhleth sy'n mynd trwy sawl cam. Mae cyfansoddion ffenolig yn foleciwlau bioactif gyda dau lwybr tarddiad: ar un ochr yr asid shikimig ac ar yr ochr arall, y moleciwlau ffenylpropanoid. Mae biosynthesis flavonoidau fel isorhamnetin yn seiliedig ar y llwybrau hyn. Mewn gwirionedd, ar y naill law, mae shikimate yn rhoi sgerbwd sylfaenol polyffenolau sydd ag un neu fwy o gylchoedd bensen (C6) sy'n cario un neu fwy o swyddogaethau hydrocsyl. Ar y llaw arall, mae synthesis y sylfaen C6-C3 a ffurfiwyd gan gyddwysiad ffenylalanin i asid sinamig (Ffigur 1)[46].

Yn fwy manwl gywir, mae asid shikimig ar waelod sawl adwaith, sy'n cynrychioli sgerbwd asidau amino aromatig, sef cychwynwyr cyfansoddion ffenolig. Mae'r cam cyntaf yn cynnwys cyfuniad o ddau foleciwl: ffosffoenolpyruvate ac erythrose 4-ffosffad, sydd ar ôl pedwar adwaith, yn arwain at ffurfio sgerbwd cyntaf ffenolig: y shikimate neu asid shikimic (CHOOs). Mae hyn yn ddiweddarach yn cyflwyno'r fodrwy gyntaf, sy'n nodweddu ffenolig â dau grŵp hydrocsyl. Mae'r shikimate yn cael chwe adwaith sy'n gorffen yn yr asid amino cyntaf: ffenylalanin. Diolch i ddau ensym allweddol, ffenylalanin amonia-lyase (PAL) a sinamate-4-hydroxylase(C4H), mae ffenylalanin yn ffurfio sinamate a p-courate yn olynol. cyfansoddion ffenolig. Mae'r moleciwl p-coumate yn tarddiad deilliadau coumarin. Mae'r llwybr ar gyfer synthesis moleciwlau ffenylpropanoid yn cael ei nodweddu gan bresenoldeb ensym allweddol o'r enw 4-coumate CoA ligase (4CL), sy'n cataleiddio ym mhresenoldeb swyddogaeth thiol y coenzyme A(CoA) y p-coumaric asid i mewn i 4-coumaroyl CoA(C30Ha2N-O18P, S). Mae'r cylch A aromatig o flavonoidau yn darparu o anwedd tri moleciwl o malonyl-CoA (-C6).

Yn dilyn hynny, cynhyrchodd y 4-coumaroyl CoA y sialcone naringenin, gan egluro'r cysylltiad rhwng y cylch B aromatig a'r un 3C o chalcone(C6-C3-). Mae sialcon yn elfen allweddol yn y pwnc hwn oherwydd ei fod yn rhagflaenydd yr holl flavonoidau yn seiliedig ar sgerbwd pymtheg carbon sy'n cynnwys dau gylch bensen. Wedi hynny, mae calcone yn cael ei drawsnewid yn naringenin (a elwir hefyd yn flavanone neu trihydroxy flavone) trwy weithred isomerase chalcone (CHI). Ar y naill law, mae blasau fel apigenin, acacetin, chrysin, neu luteolin yn cael eu syntheseiddio o naringenin ym mhresenoldeb flavone synthase(FNS).Ar y llaw arall, cynhyrchir gwahanol flavonols a chyfansoddion asid succinig o naringenin ym mhresenoldeb dau ensym; flavanone 3-dioxygenase (F3D) a flavonol synthase (FS). Ar wahân i ddeilliadau flavonol, cynhyrchir cyfansoddion eraill, megis kaempferol, myricetin, a quercetin. Trwy drosglwyddiad grŵp methyl o'r S-adenosyl-L-methionine, mae'r isorhamnetin yn cael ei gynhyrchu ym mhresenoldeb y flavone 3'-O-methyltransferase (FMT)[47,48]. Yna, mae isorhamnetin yn flavone monomethoxy neu flavonol O-methylated o'r dosbarth o flavonoidau. Mae'n quercetin (rhagflaenydd) lle mae'r grŵp hydroxy yn safle 3' yn cael ei ddisodli gan grŵp methocsi. Mae rhai deilliadau isorhamnetin yn bresennol mewn natur, megis isorhamnetin 3-O- -d-glucopyranoside, isorhamnetin 3-O-neohesperidoside, ac isorhamnetin 3-O-rutinoside o Calendula officinalis L .[20].

Mewn gwirionedd, mae flavonoids yn cael eu hystyried yn un o grwpiau pwysicaf y teulu polyphenol. Mae ganddynt strwythur yn seiliedig ar fath propan deuffenyl gyda dau gylch bensen (cylch A a B, gweler Ffigur 2) wedi'u cysylltu gan gadwyn tri charbon sy'n ffurfio cylch pyran caeedig (cylch C). Felly, cyfeirir at eu strwythur fel C6-C3-C6. Safleoedd O-glycosylation yw C7 mewn flavones, isoflavones, flavanones, a flavonols, a C3 mewn flavonols ac anthocyanidins. Swyddi C-glycosylation yw C6 a C8 mewn flavones [49]. Yn ogystal, mae pwysigrwydd rôl gwrthocsidiol cyfansoddion ffenolig yn gysylltiedig â graddau hydroxylation y moleciwl. Mae flavonoidau yn cynnwys yr isoflavones, flavones, flavanones, a'u glycosidau a'u flavonols fel isorhamnetin, a enwir hefyd yn 3'-methoxy quercetin a 3-methyl quercetin [50]. Mewn planhigion, mae ensym, y glycosyltransferases sy'n ddibynnol ar y CDU, yn gyfrifol am ffurf glycosid isorhamnetin (isorhamnetin 3-O-glucoside). Mae'r ensym hwn yn defnyddio siwgrau diffosffad niwcleotid, fel arfer wridin diffosffad (CDU) - siwgrau, i drosglwyddo'r grŵp methyl i'r cylchred a chysylltu'r swyddogaeth glycosid ag isorhamnetin [51].

2.4.Ynysu a Dadansoddi Ilsorhamnetin sy'n Deillio o Blanhigion Meddyginiaethol

Mae dosbarthiad isorhamnetin mewn planhigion meddyginiaethol yn eang iawn ac mae'r dulliau echdynnu a dadansoddi yn amrywiol. Mae angen deilliadau Isorhamnetin yn arbennig. Mae'r grwpiau hydrocsyl a methyl yn helpu i'w nodweddu. Defnyddir rhai dulliau i echdynnu isorhamnetin, yn eu plith yn seiliedig ar ffracsiynu, gan ddefnyddio dulliau ceometrig, ensymau, ac echdynnu hylif supercritical (SFE-CO2). Yn gyntaf, gellir defnyddio ffracsiynu i symleiddio'r echdynnu trwy dynnu'r holl pigmentau olew a lipoffilig o samplau sy'n cynnwys lipid. Mae'r sampl dihysbydd hefyd yn sonicated cyn maceration mewn cymysgedd o methanol a dŵr. Yna gellir defnyddio cromatograffaeth ar gyfer dadansoddiadau o gyfansoddion ffenolig, yn enwedig flavonoidau [49]. Ar gyfer y cyfansoddion olaf hyn, defnyddir LC-MS ac mae ionization electrospray (ESI) ac ionization cemegol gwasgedd atmosfferig yn cael eu cymhwyso'n aml, a chyflawnir y sensitifrwydd gorau ar gyfer flavonoidau yn gyffredinol yn y modd ïon negyddol [49]. Er enghraifft, mae ffytocemeg ffracsiynau planhigion Calligonum Azel Maire, a gasglwyd o anialwch Tiwnisia, wedi'u hasesu a defnyddiwyd cromatograffaeth hylif perfformiad uchel iawn ynghyd ag amser pedwarplyg o sbectrometreg màs hedfan UHPLC-ESI-QTOF i nodi ffenoligion yn eu plith fflafonau. a flavanols, sef y cyfansoddion ffenolig mwyaf niferus a nodwyd [52]. Yn fwy penodol, cadarnhawyd presenoldeb isorhamnetin glucoside ac isorhamnetin glucosyl-rhamnoside fel y prif gyfansoddion yn nail yr haloffyt bwytadwy Mesembryanthemum edule gan ddefnyddio technoleg LC/ESI-MS/MS [3]. Dilynwyd y gwaith hwn gan eraill sydd wedi defnyddio LC-ESI-TOF-MS i nodweddu llawer o polyffenolau; yn eu plith, nodwyd flavonoidau o rannau o'r awyr o gyfnod blodeuo llawn haloffytau fel Arthrocnemum indicum [5], Tamarix gallica [16], Glaucium flavum [13], a Salsola kali [8]. Yn debyg i'r gweithiau diwethaf, perfformiwyd proffilio LC-ESI-TOF-MS a GC-MS o Artemisia llysieuol i nodi ffenoligau, megis flavones, flavonols, ac alcaloidau flavonoid[7]. Gwnaethpwyd gwaith arall ar Pancratium maritimum a datgelodd y dadansoddiad gan HPLC-DAD-ESI/MS bresenoldeb flavonoidau gan gynnwys flavonol fel isorhamnetin gyda'u cyfuniadau pentocsid a hecsosid fel isorhamnetin di-hexoside [53].

Fel cyfansoddyn nad yw'n frasterog, gallai flavonols gael eu hynysu gan hecsan. Yna, gellir defnyddio toddydd pegynol fel ethanol. Dangosodd astudiaeth ar Limoniastrum guyonianum gan ddefnyddio HPLC bresenoldeb llawer o ffenolig, yn eu plith isorhamnetin-3-O-rutinoside [54].

Ymhell o ddarnau ffenolig, mae cyfansoddion ffenolig hefyd i'w cael mewn olewau fel olew olewydd [55]. Mae gan y cyfansoddion hyn y gallu i amddiffyn olewau rhag ocsideiddio a gwella gwerth maethol yr olew. Mae Isorhamnetin, fel cyfansoddyn ffenolig, hefyd wedi'i ganfod mewn echdyniad olew o hadau cwmin du Tunisiaidd (Nigella sativa L.) a gafwyd gyda hydoddydd gwyrdd fel 2-methyl tetrahydrofuran (MeTHF) fel dewis arall yn lle petrolewm neu hecsan. -toddydd seiliedig ar echdynnu cyfansoddion ffenolig cyfoethogi olew [10]. Cymeradwywyd presenoldeb isorhamnetin gan ddadansoddiad HPLC. Datgelodd dadansoddiadau gan ddefnyddio Cromatograffaeth Hylif gyda Synhwyrydd Array Deuod (LC-DAD) lawer iawn o isorhamnetin yn amrywio rhwng 6.3 a 6.6 (ug/g olew) ar ôl echdynnu olew o gwmin du gan MeTHF a hecsan, yn y drefn honno. Yn ogystal, gan ddefnyddio cyseiniant magnetig niwclear H (HNMR) a chyseiniant magnetig niwclear C (CNMR), rhai glycosidau flavonol megis kaempferol-3-O-rutinoside (nicotiflorin) ac isorhamnetin-3-O-rutinoside (narcissism) wedi'u nodweddu o'r rhannau o'r awyr o Peucedanum aucheri Boiss a gasglwyd yn ninas Marivan, talaith Kurdistan, Iran [56]. Mae'r dull NMR yn canfod yr eiddo y mae rhai niwclysau atomig o'r cyfansoddyn yn rhyngweithio â maes magnetig. Mae'r eiddo hwn, sef cynhyrchu cyseiniant magnetig ar amledd penodol, yn darparu gwybodaeth am strwythur y moleciwl. Yn ail, dewisir modelau mathemategol i werthuso effeithlonrwydd echdynnu flavonol, yn enwedig i ddeall y ffordd orau o gael isorhamnetin-3-O-rutinoside [20]. Cynhaliwyd dadansoddiad ffactoraidd aml-amrywedd gan ddefnyddio blodau Calendula officinalis. Dadansoddwyd modelau llinol, cwadratig, ciwbig llawn, a ciwbig arbennig. Y ciwbig llawn terfynol oedd yr un mwyaf priodol, gan ganiatáu mwy o effeithlonrwydd wrth echdynnu isorhamnetin-3-O-rutinoside o 60 y cant . Ar gyfer yr astudiaeth hon, defnyddiwyd yr ensymau, Rapides Maxi Fruit a Viscozyme o dan rai ffactorau pwysig sy'n effeithio ar weithgaredd yr ensymau o dan amodau CO2 supercritical megis pwysedd, tymheredd, pH, amser, a hydoddiant ethanol dyfrllyd. Yn olaf, defnyddiwyd y dull echdynnu hylif supercritical i echdynnu cyfansoddion ffenolig megis flavonols. Flynyddoedd lawer yn ôl, defnyddiwyd y weithdrefn echdynnu hylif supercritical ar y rhisgl Eucalyptus globulus am y tro cyntaf, gan ddefnyddio CO2 pur ac addasedig gyda dŵr, asetad ethyl, ac ethanol [57]. Dangosodd awduron y gallai'r CO2 supercritical ynghyd ag ethanol echdynnu symiau sylweddol o gyfansoddion ffenolig, gan gynnwys isorhamnetin. Penderfynodd meintioli HPLC-MS rai flavonols, megis isorhamnetin-hecsosid (0.26 gg-I o ex-tract) ac isorhamnetin syml (14.29 mg:gI o echdyniad). Defnyddiwyd ethanol fel cyd-doddydd. Cyflawnwyd y meintioliad gyda chromatograffaeth hylif pwysedd uchel gyda chanfodydd arae ffotodiode. Isorhamnetin 3-O-glucosyl-rhamnosyl-rhamnoside, isorhamnetin 3-O-glucosyl-rhamnosyl-pentoxide, isorhamnetin 3-O-glucosyl-rhamnoside, ac isorhamnetin 3-O-glucosyl -pentoxide oedd y flavonols mwyaf toreithiog a dynnwyd o ddetholiadau supercritical O. ficus-indica. Fel y soniwyd o'r blaen, mae cromatograffaeth hylif pwysedd uchel neu HPLC yn ddull a ddefnyddir yn gyffredin ar gyfer dadansoddi cyfansoddion ffenolig. Mewn sudd afal a sudd gellyg, canfuwyd isorhamnetin 3-O-glucoside. Mewn gwirionedd, datgelodd gwahanu glycosidau flavonol mewn dyfyniad afal "Brettacher" gan HPLC a sbectrometreg màs bresenoldeb dwy ffurf glycosid megis isorhamnetin 3-O-glwcos ac isorhamnetin 3-O-galactosid [ 58].