Cynnwys Cyfansoddion Ffenolig Ac Amrywiaeth Genetig Ar Lefel Poblogaeth Ar Draws Ystod Dosbarthiad Naturiol Bearberry (Arctostaphylos Uva-ursi, Ericaceae) ym Mhenrhyn Iberia

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

Crynodeb:Mae Bearberry (Arctostaphylos uva-ursi) yn blanhigyn meddyginiaethol a ddefnyddir yn draddodiadol i drin heintiau'r llwybr wrinol oherwydd cynnwys uchelarbutin(hydroquinone -D-glucoside), sydd bellach yn cael ei ddefnyddio'n bennaf fel asiant gwynu croen naturiol mewn colur. Mae Bearberry hefyd wedi'i gynnig fel rhywbeth naturiolgwrthocsidiolychwanegyn oherwydd cynnwys uchel cyfansoddion ffenolig mewn dail.Astudiom yr amrywiad ar gyfansoddion ffenolig mewn 42 o boblogaethau gwyllt o eirin Mair, gan anelu at egluro a yw ffactorau biolegol, hinsoddol, a/neu ddaearyddol cynhenid ​​yn effeithio ar gynnwys ffenolig ar draws ei ddosbarthiad naturiol ym Mhenrhyn Iberia. Casglwyd dail Bearberry yn ystod yr hydref dros gyfnod o dair blynedd (2014-2016) mewn poblogaethau ar draws graddiant lledred ac uchder. Dangosodd methanolicextracts ystod eang o amrywiad yng nghyfanswm cynnwys ffenolau, a phroffiliau ffenolig gwahanolarbutin(Roedd lefelau'r cyfansoddyn mawr hwn yn amrywio o 87 i 232 mg/g dr wt), ond hefyd cynnwys catechin a myricetin, yr effeithiwyd arnynt gan ffactorau daearyddol a hinsoddol. Canfuwyd lefelau cymedrol o amrywiad ar faint genom - a aseswyd gan sytometreg llif - ac ar ddau ranbarth DNA plastid ymhlith poblogaethau hefyd. Roedd gwahaniaethu genetig a sytogenetig poblogaethau yn wan ond yn gysylltiedig yn arwyddocaol ag amrywiaeth ffytocemegol. Genoteipiau bearberry elitaidd gyda uwchgwrthocsidiolcanfuwyd capasiti wedyn.

Geiriau allweddol: arbutin; amrywioldeb genetig a ffytocemegol; maint genom; haploteipiau; naturiolgwrthocsidyddion

mae cistanche yn gwrthocsidyddion naturiol

1. Rhagymadrodd

Mae synthesis metabolion planhigion arbenigol yn amrywio o ran amser (hy, ontogeni, ffenoleg, a chymhellion dioddefaint), a gofod, gan ei fod yn chwarae rhan hanfodol wrth addasu planhigion i amodau amgylcheddol, tra bod amrywiad genetig hefyd yn cyfrif am gemamrywiaeth [1]. Ymhlith y cyfansoddion hyn, mae gan ffenols amrywiaeth eang o strwythurau mono- a pholymerig sy'n cyflawni ystod eang o rolau ffisiolegol [2]. Mae biosynthesis metabolion arbenigol yn cael ei effeithio'n fawr gan ffactorau amgylcheddol megis tymheredd, dyodiad, neu ymbelydredd solar, sydd yn eu tro yn aml yn destun graddiannau lledredol, hydredol neu uchder. Yn benodol, mae cronni cyfansoddion ffenolig yn ymateb cyffredinol i lefelau uwch o ymbelydredd UV-B (280-315 nm). Mae amrywiad cyfansawdd penodol wedi'i adrodd mewn planhigion sy'n tyfu yn rhanbarth Môr y Canoldir yn ystod yr haf ac ar uchderau uchel, lle mae mwy o achosion o UV-B yn digwydd a dangosodd asidau sinamig a flavonoidau y cyfraddau amsugno UV uchaf [3].

Arbutin(hydroquinone -D-glucoside) yn gyfansoddyn ffenol syml gyda digwyddiad cyfyngedig yn y dail rhai rhywogaethau sy'n perthyn i genera megis Arbutus, Arctostaphylos, Pyrus, neu Vaccinium. Prif ffynhonnell naturiol arbutin, yr eirin Mair (Arctostaphylos uva-ursi). L.) Spreng.) wedi'i ddefnyddio ers canrifoedd i drin heintiau llwybr wrinol a chlefydau arennol eraill [4], ac mae fformwleiddiadau llysieuol yn dal i gael eu paratoi y dyddiau hyn [5]. Dros y blynyddoedd diwethaf, mae sbectrwm ceisiadau oarbutinwedi ehangu, yn bennaf fel asiant gwynu croen naturiol yn y diwydiant cosmetig [6] ac mewn therapïau clinigol oherwydd eigwrthocsidiol, eiddo gwrthfiotig, gwrthlidiol, ac antitumor [7]. O ganlyniad, mae diddordeb cynyddol mewn dod o hyd i ffynonellau naturiol ychwanegol oarbutin, yn ogystal â phrosesau biotechnolegol a all ddisodli synthesis cemegol [8,9]. Yn y cyd-destun hwn, mae cynhyrchu in vitro o arbutin gan ddefnyddio diwylliannau celloedd inocsiaDatura wedi cyrraedd y raddfa beilot [10].

Yn ogystal âarbutin, mae cyfansoddion ffenolig eraill yn cyfrannu at briodweddau gweithredol A. uva-ursi, megis flavonoids a thanin [11,12], y mae catechin a chorilagin yn eu defnyddio fel y mewndail mwyaf perthnasol, yn y drefn honno [13]. Yn y diwydiant bwyd mae cyfansoddion naturiol fel ffenolau planhigion yn cael eu disodli'n synthetiggwrthocsidiolcadwolion [14]. Mae A. uva-ursi wedi'i ddefnyddio fel ychwanegyn, yn enwedig mewn cynhyrchion cig [15-19] ond hefyd mewn pecynnu gweithredol [20]. Yn olaf, mae potensial A. uva-ursi fel ffynhonnell asiantau lliw haul ar gyfer y diwydiant lledr wedi'i gynnig yn ddiweddar [21].

Cynigiodd monograff "dail bearberry" yr Asiantaeth Meddyginiaethau Ewropeaidd [5] isafswm o 7 y cant oarbutincynnwys mewn dail sych fel y gofyniad ar gyfer paratoadau llysieuol. Disgrifiodd astudiaethau a berfformiwyd dros y degawdau diwethaf gynnwys arbutin mewn dail bearberry yn amrywio o 0 y cant i 18 y cant , wedi'i esbonio gan weithdrefnau dadansoddol, amrywioldeb naturiol, amodau twf, a dyddiad cynaeafu [4]. Mae cynnwys arbutin fel arfer yn cael ei bennu gan gromatograffeg hylif perfformiad uchel [4,12,22-24], ac astudiaethau blaenorol yn canfod yn uwcharbutincynnwys mewn planhigion bearberry a gasglwyd yn disgyn nag yn y rhai a gasglwyd yn y gwanwyn [4].Cemoteipiau bearberry amrywiol wedi'u disgrifio, sy'n gysylltiedig â dosbarthiad daearyddol a i'r gwahaniaethu intraspecific mewn isrywogaeth o A. uva-ursi. Yr amrywiad ffytocemegol mwyaf trawiadol a adroddwyd yw absenoldeb arbutin yn A. uva-ursi subsp. stipitata Packer a Denford, ond hefyd mae gwahaniaethau mewn methyl-arbutin, asid ellagic, neu gynnwys myricetin wedi'u cyfeirio. Mae quercetin hefyd yn bresennol mewn dail bearberry, lle mae'r ddau aglycones, yn ogystal â'u 3-O-glycosidau yw'r flavonoids a geir yn fwy cyffredin [4]. Fodd bynnag, perfformiwyd y rhan fwyaf o'r astudiaethau hyn sawl degawd yn ôl, a'r dyddiau hyn ystyrir bod amrywiad mewnbenodol mewn bearberry yn barhaus. Mae'r 14 isrywogaeth a ddisgrifiwyd, gan gynnwys un o Sbaen (A. uva-ursi subsp. crassifolius (Braun-Blanq.) Rivas Mart. ex Torre, Alcaraz a MB Crespo), yn enwau nas derbynnir ar hyn o bryd ac yn gyfystyr ag A. uva-ursi [ 25].Mae angen ymchwiliadau newydd felly i wella ein gwybodaeth am y cyfansoddion sy'n bresennol mewn gwirionedd yn y deunydd crai a gynaeafir o wahanol leoliadau at ddibenion diwydiannol gan fod proffil cemegol dail A. uva-ursi wedi'i ddisgrifio i gynnwys amrywiaeth amrywiol o ffenolau, taninau, a flavonoidsin astudiaethau mwy diweddar a berfformiwyd i ymchwilio i wahaniaethau ar y lefel rhyng-benodol [23,26,27].

Mae amrywiaeth genetig (gan gynnwys sytogenetig) ar lefel y boblogaeth yn hyrwyddo addasu i wahanol amodau amgylcheddol [28]. Yn ddiweddar, adolygwyd effeithiau polyploidization ar gynhyrchu metabolion arbenigol mewn planhigion meddyginiaethol ac aromatig [29]. Yn y cyd-destun hwn, mae maint genom yn baramedr a ddefnyddir yn helaeth mewn asesiadau amrywioldeb planhigion, gan fod yr amrywiad mewnrywogaethol yn cael ei ganfod yn aml ([30], a chyfeiriadau ynddo), yn cydberthyn â llawer o nodweddion biolegol eraill, ac yn chwarae rhan berthnasol mewn prosesau esblygiadol [31-35] ]. Fodd bynnag, mae astudiaethau sy'n mynd i'r afael â'r cysylltiad rhwng swm DNA niwclear (hy maint genom) ac amrywiaeth ffytocemegol yn brin iawn [36,37]. Mae'r berthynas rhwng amrywiaeth ffytocemegol a genetig wedi'i asesu gan ddefnyddio marcwyr niwclear ond yn enwedig plastidDNA [38], yn enwedig mewn rhywogaethau planhigion meddyginiaethol [39] a thyfu [40].

Mae Bearberry wedi'i ddosbarthu'n eang ledled yr ardal circumboreal, ond mae'r rhan fwyaf o'r poblogaethau gwyllt a gasglwyd yn Ewrop wedi'u lleoli yng ngwledydd y Dwyrain, Awstria, y Swistir, yr Eidal, a Spain.Arctostaphylos uva-ursi yn tyfu yn rhan ganol dwyreiniol Sbaen, mewn mynyddoedd, yn uchder yn amrywio o 550 i 2350 m uwch lefel y môr (ASL). Mae'n fwy cyffredin yn y Gogledd gan fod poblogaethau sydd wedi'u lleoli ar lledredau is yn llai aml ac fel arfer mae ganddynt lai o unigolion. Cyfeiriodd yr astudiaethau presennol ynghylch yr amrywioldeb cynnwys arbutin yn Sbaen at werthoedd yn amrywio o 8 y cant mewn poblogaethau gogledd-ddwyreiniol [41] a 19 y cant mewn deunydd planhigion Sbaenaidd a werthuswyd mewn astudiaeth a berfformiwyd yn yr Almaen [42]. Nod ein hastudiaeth yw egluro ffactorau, gan gynnwys maint genom ac amrywiaeth enetig, gan egluro amrywiadau ffytocemegol ar draws dosbarthiad naturiol bearberry yn Sbaen. Gallai ein canlyniadau gyfrannu at ddewis deunydd planhigion ar gyfer y diwydiannau fferyllol, cosmetig a bwyd.

bwyd gwynnu croen: CISATNCHE

2. Canlyniadau a Thrafodaeth

2.1. Dadansoddiad Amrywiaeth Cemegol

Samplwyd dail Bearberry o gyfanswm o 249 o blanhigion a oedd yn tyfu mewn 42 o leoliadau yn Sbaen, ac ar draws y cyfnod o dair blynedd, dangosodd 2014–2016 (Ffigur 1, Tabl S1), ganrannau pwysau sych gwahanol (dr wt), yn amrywio o 46.7 (LO) i 55.1 y cant (CP), gyda chyfartaledd o 50.1 ± 2.7 y cant (data heb ei ddangos). Defnyddiwyd echdynion methanolice a baratowyd o samplau a gasglwyd yn 2014 a 2015 ar gyfer cyfanswm penderfyniadau ffenolau a chynnwys arbutan. Gwelsom ystod eang o amrywiadau parhaus ar gyfer y ddau baramedr gyda gwahaniaethau sylweddol (p < 0.001)="" ymhlith="" planhigion.="" dangosodd="" detholiadau="" dail="" o="" 80="" o="" blanhigion="" a="" samplwyd="" yn="" hydref="" 2014="" (ffigur="" 2a)="" gyfanswm="" cynnwys="" ffenolig="" yn="" amrywio="" o="" 103.3="" ±="" 4.8="" mg="" gae/g="" dr="" wt="" (sampl="" li-4)="" i206.4="" ±="" 6.5="" mg="" gae/g="" dr="" wt="" (sr="" -2),="">arbutinroedd y cynnwys yn amrywio o 92.0 ± 3.0 mg/g dr wt (AN-6)i 194.2 ± 5.6 mg/g dr wt (SE-8). Dangosodd dadansoddiad o echdynion a baratowyd o ddail a gasglwyd mewn 2015 o 94 planhigyn (Ffigur 2b) amrywiad ffytocemegol eang hefyd, o 110.5 ± 3.6 mg GAE/g dr wt(PI-4) i 200.9 ± 9.8 mg GAE/g dr wt (LO-4) mewn cyfanswm cynnwys ffenolig, tra bod cynnwys arbutin yn amrywio rhwng 87.1 ± 0.4 mg/g dr wt (ET-2) a 211.5 ± 5.9 mg/g dr wt (LI -2). Ar ben hynny, waeth beth fo'r flwyddyn gasglu, mae gwahaniaethau sylweddol yng nghyfanswm ffenolau aarbutincanfuwyd y cynnwys ymhlith planhigion eirin Mair a oedd yn tyfu yn yr un lleoliad ar gyfer y rhan fwyaf o'r poblogaethau (data heb ei ddangos). Roedd cydberthynas sylweddol rhwng lefelau Arbutin a chyfanswm cynnwys ffenolau mewn echdynion dail bearberry ers i ni amcangyfrif cyfernodau Pearson sylweddol o {{{{{}}}} .332 (p=0.003) ar gyfer 2014, a 0.289 ar gyfer data 2015 (p=0.005). Nid oedd cynnwys arbutin o'r 48 o weithfeydd a samplwyd yn y ddwy flynedd yn amrywio'n sylweddol (p=0.380).

Er gwaethaf yr amrywioldeb a ganfuwyd o fewn poblogaethau, a beth bynnag oedd blwyddyn y cynhaeaf, dangosodd dadansoddiad o amrywiant fod cynnwys arbutin o echdynion dail bearberry hefyd yn dibynnu (p < {{0}}.00="" 1)="" lleoliad="" y="" boblogaeth="" (ffigur="" 3a,b),="" fel="" y="" digwyddodd="" ar="" gyfer="" cyfanswm="" cynnwys="" ffenolau="" dail="" bearberry="" wedi'i="" ddadansoddi="" mewn="" 2015="" (p="">< 0.001,="" ffigur="" 3b).="" mewn="" cyferbyniad,="" ni="" welwyd="" gwahaniaethau="" sylweddol="" yng="" nghyfanswm="" cynnwys="" ffenolau="" (p="0.080)" ymhlith="" y="" 10="" poblogaeth="" a="" samplwyd="" yn="" 2014,="" a="" oedd="" wedi'u="" lleoli="" mewn="" ardal="" gymharol="" fach,="" ond="" wedi'u="" dosbarthu="" mewn="" ystod="" eang="" o="" uchder,="" o="" 424="" (ba="" poblogaeth)="" i="" 1410m="" asl="" (poblogaeth="" pa).="" roedd="" yr="" amrywiad="" hwn="" mewn="" uchder="" yn="" gysylltiedig="" â="" gwahaniaethau="" mewn="" amodau="" hinsoddol="" (tabl="" s1),="" gan="" fod="" lleoliadau="" ar="" uchderau="" uwch="" wedi'u="" nodweddu="" gan="" dymheredd="" cymedrig="" is="" (cyfernod="" cydberthynas="" pearson,="" r="−0.666," p="">< 0.001)="" a="" dyddodiad="" blynyddol="" uwch="" (="" r="0.485," p="">< 0.001),="" a="" arweiniodd="" yn="" ei="" dro="" at="" lefelau="" ymbelydredd="" byd-eang="" is="" (r="−0.390," p="">< 0.001).="" ymhellach,="" o'r="" set="" ddata="" hon,="" fe="" wnaethom="" amcangyfrif="" cydberthynas="" gadarnhaol="" isel="" ond="" arwyddocaol="" rhwng="" glawiad="" blynyddol="" a="" chyfanswm="" cynnwys="" ffenolau="" planhigion="" eirin="" mair="" (cyfernod="" spearman="" rho="0.256," p="0.022)," ond="" o="" set="" ddata="" 2015="" pan="" wnaethom="" samplu="" poblogaethau="" mewn="" ardal="" fwy,="" canfuom="" gydberthynas="" gadarnhaol="" sylweddol="" rhwng="" glawiad="" blynyddol="" a="" chynnwys="" arbutin="" (rho="0.246," p="0.017)." mae'r="" gydberthynas="" arwyddocaol="" hon="" yn="" dangos="" bod="" planhigion="" aeron="" a="" oedd="" yn="" tyfu="" mewn="" lleoliadau="" gogleddol="" ac="" ar="" uchderau="" cymharol="" uwch="" yn="" aml="" yn="">arbutincynnwys (rho=0.217, p=0.035 a rho=0.269, p=0.009, yn y drefn honno). Fel y crybwyllwyd, roedd cydberthynas sylweddol rhwng y cynnwys arbutin uwch hyn a chyfanswm cynnwys ffenolau uwch o ddail yr arth, a oedd yn debyg (ar gyfartaledd 154.4 ± 19.6 mg GAE/g dr wt) i'r rhai a geir mewn echdyniad dyfrllyd o rywogaethau planhigion eraill a ddefnyddir felgwrthocsidiolychwanegion yn y diwydiant bwyd [43], megis asrosemary (185.0 mg GAE/g dr wt), te (149.3 mg GAE/g dr wt), neu guava (154.4 mg GAE/g dr wt). Mae'r canlyniadau hyn yn cyd-fynd â chyfeiriadau blaenorol ac fe'u cadarnhawyd mewn astudiaeth a gynhaliwyd gan Wrona et al. [20] gan ddefnyddio rhai o'r samplau dail bearberry Sbaeneg a gasglwyd yn 2015, y mae uwchgwrthocsidiolroedd capasiti yn gysylltiedig ag uwcharbutincynnwys. Gellid nodi genoteipiau bearberry elitaidd at y diben hwn hefyd, megis unigolion 1, 4, 7, ac 8 o'r boblogaeth LO, a gronnodd ar gyfartaledd 183.3 ± 16.4 mg GAE/g dr wt yn ystod dwy flynedd yr astudiaeth.

Er mwyn egluro ymhellach y ffactorau hinsoddol a daearyddol sy'n effeithio ar batrymau amrywiad ffenolig, gwnaethom gasgliad mwy cynhwysfawr o samplau yn hydref 2016:140 planhigion eirin yn tyfu mewn 29 lleoliad, a gwnaethom feintioli pum cyfansoddyn ffenolig (Ffigur S1a) a nodwyd trwy gyd-elution â safonau mewn graddiant asetonitrile/dŵr (Ffigur S1b). Dangosodd y dadansoddiad ystod eang o amrywiad parhaus ar gyfer arbutin, asid caffeic, catechin, myricetin, a chynnwys glwcosid quercetin, gyda gwahaniaethau sylweddol ymhlith planhigion a welwyd yn gyffredinol hefyd o fewn poblogaethau (data heb ei ddangos). Ar gyfer y prif gyfansoddion ffenolig, canfuom fod cynnwys arbutin yn amrywio o 91.1 ± 5.0 (LB{{10}}) i 232.4 ± 2.8 mg/g dr wt (PT{{15) }}), tra bod cynnwys catechin yn amrywio o 4.1 ± 0.1 (AF{{20}}) i 45.5 ± 1.4 mg/g dr wt (LB{-5). O ran y ddau flavonoid arall a bennwyd, ni chanfuwyd myricetin mewn rhai planhigion o nifer o boblogaethau, tra cyrhaeddodd 21.2 ± 1.2 mg/g dr wt mewn PO{{3{0}}, ac roedd quercetin glucoside yn amrywio o 3.8 ± 0.1 (CO -3) i 22.8 ± 0.8 mg/g dr wt (BT-3). Pennwyd cynnwys is o asid caffeic mewn darnau dail bearberry, a oedd yn amrywio o 1.8 ± 0.0 (IZ-1) i7.1 ± 0.3 mgPlants /g dr wt (SI-4).

Er gwaethaf yr amrywiad a welwyd ymhlith unigolion, amcangyfrifwyd gwahaniaethau sylweddol ymhlith poblogaethau hefyd ar gyfer y pum cyfansoddyn hyn (profion Kruskal-Wallis, p < {{{0}}.001,="" a="" p="0." 009="" cynnwys="" asid="" fforcaffeic).="" pennwyd="" cynnwys="" arbutin="" uwch,="" ar="" gyfartaledd,="" mewn="" planhigion="" o="" boblogaethau="" naturiol="" ab,="" gu,="" ln,="" a="" lo="" (ffigur="" 4a),="" a="" oedd="" yn="" wahanol="" iawn="" (ar="" ôl="" bonferronicorrection)="" i'r="" cynnwys="" isel="" a="" geir="" mewn="" planhigion="" o'r="" boblogaeth="" lb="" (186.7="" ±="" 22.3,="" 193.9="" ±="" 12.1,169.5="" ±="" 10.0,="" a="" 169.2="" ±="" 5.2="" mg/g="" dr="" wt="" blaen="" i="" 111.8="" ±="" 16.0="" mg/g="" dr="" wt,="" yn="" y="" drefn="" honno).="" unwaith="">arbutinnid oedd cynnwys planhigion a samplwyd hefyd yn 2015 yn amrywio'n sylweddol rhwng blynyddoedd(p=0.821). Dangosodd y boblogaeth LB yn ei dro lefel catechin cymedrig uwch (Ffigur 4b), a oedd yn wahanol iawn i gynnwys cymedrig isel y flavonoid hwn a ganfuwyd mewn poblogaethau AF ac LC (32.8 ± 9.8front i 5.7 ± 1.9 a 5.3 ± {{2{{62}) }}}.5 mg/g dr wt, yn y drefn honno). Dangosir cynnwys cymedrig myricetin a quercetin glwcosidin yn Ffigur 4c, gyda gwahaniaethau sylweddol ymhlith poblogaethau AB, CG, LB, a PO, gyda chynnwys myricetin uwch (15.1 ± 4.0, 14.6 ± 5.7, 10 .7 ± 2.8, a 17.2 ± 3.9 mg/g dr wt, yn y drefn honno), o gymharu â'r lefelau isel a gronnodd blanhigion ar gyfartaledd o boblogaethau CO ac OD (1.2 ± 1.5 a 2.4 ± 3.6 mg/g dr wt, yn y drefn honno) , a hefyd yn golygu cynnwys quercetin glwcosid pennir mewnpopulations AA, BT, CP, IZ, a LB (15.2 ± 3.7, 15.9 ± 4.6, 11.8 ± 2.3, 15.7 ± 3.4, a 13.1 ± spective ± 3.4, a 13.1 ± spective ± ± 3.4, a 13.1 ± ± 3.4, a 13.1 ± ± spective) yn sylweddol wahanol o hynny yn y boblogaeth CO (4.0 ± 0.1 mg/g dr wt). Mewn cyferbyniad, mae cynnwys asid caffeig cymedrig wedi'i osgiladu o 2.1 ± 0.2 mg / g dr wt mewn poblogaethau AB, CE, PT, a SA, i 3.5 ± 1.2 mg / g dr wt yn y boblogaeth AF neu 3.4 ± 2.2 mg / g dr wt mewn poblogaeth OS; felly, ni welwyd gwahaniaethau arwyddocaol oherwydd amrywiad mewnboblogi (cynnwys cyfartalog 2.7 ± 0.8 mg/g dr wt). Mae'r canlyniadau hyn yn ategu'r amrywiad ar fetabolion ffenolig a welwyd gan Wrona et al. [20], ar gyfer wyth o'r lleoliadau bearberry a samplwyd yn 2015 a ddadansoddwyd gan ddefnyddio technoleg UPLC®-ESI-Q-TOF withMSE.

Mewn cyferbyniad â chanlyniadau a gafwyd yn y dadansoddiad a gynhaliwyd gyda samplau bearberry o 2014 a 2015,arbutincynnwys a bennwyd mewn 2{{10}}Dangosodd 16 sampl gydberthynas gadarnhaol isel ond arwyddocaol ag ymbelydredd (rho=0.256, p=0.002), a thymereddau cymedrig uchaf (rho{ {5}}.183, p=0.030), ac felly roedd cydberthynas gwrthdro â gwerthoedd glawiad blynyddol (rho=−0.265, p=0.002). Roedd y gwahaniaethau hyn hefyd yn gysylltiedig ag amrywiad mewn uchder (rho=−0.192, p=0.023), ond eglurwyd y gydberthynas negyddol hon gan yr isel a grybwyllwydarbutincynnwys planhigion o'r boblogaeth LB sydd wedi'u lleoli ar 1720m. Gwelwyd patrwm tebyg o amrywiad ar gyfer cynnwys myricetin gan fod lefelau uwch o'r cyfansoddyn hwn yn gysylltiedig yn arwyddocaol â phlanhigion eirin Mair yn tyfu mewn lleoliadau o dan lefelau ymbelydredd uwch (rho=0.226, p=0.{{1{{{{}). 12}}}}07). Gwelwyd y patrwm gwrthgyferbyniol i arbutin ar gyfer catechin,gan yr amcangyfrifwyd cydberthynas bositif rhwng y flavonoid hwn a'r glawiad blynyddol (rho=0.398,p < 0.0{{23)="" }}1),="" a="" chanfuwyd="" cydberthyniadau="" negyddol="" yn="" unol="" â="" hynny="" ag="" ymbelydredd="" a="" chyda="" thymheredd="" cymedrig="" uchaf="" (rho="−0.307," p="">< 0.001="" a="" rho="−0.470," p="">< 0.001,="" yn="" y="" drefn="" honno).="" esboniodd="" yr="" amrywiad="" hwn="" mewn="" ffactorau="" hinsoddol="" fod="" uchder="" a="" lledred="" yn="" effeithio="" ar="" gynnwys="" catechin="" dail="" berberry="" (rho="0.410" a="" 0.490,="" yn="" y="" drefn="" honno,="" p="">< 0.001).="" cadarnhaodd="" dadansoddiad="" prif="" gydrannau="" a="" gynhaliwyd="" gyda="" data="" ffytocemegol,="" hinsoddol="" a="" daearyddol="" sy'n="" cyfateb="" i'r="" 29="" lleoliad="" a="" samplwyd="" yn="" 2016,="" lle="" esboniodd="" y="" ddwy="" gydran="" gyntaf="" 60="" y="" cant="" o'r="" amrywiad="" a="" arsylwyd,="" y="" canlyniadau="" hyn="" (ffigur="" 5).="" ni="" wnaethom="" ganfod="" unrhyw="" gydberthynas="" arwyddocaol="" rhwng="" asid="" caffeic="" neu="" quercetin="" cynnwys="" glwcosidin="" planhigion="" eirin="" mair="" a="" naill="" ai="" ffactorau="" hinsoddol="" neu="" ddaearyddol,="" er="" i="" ni="" amcangyfrif="" cydberthynasau="" bach="" ond="" arwyddocaol="" rhwng="" cynnwys="" glwcosid="" myricetin="" a="" quercetin="" (rho="0.184," p="" {{31}).="" }.030)a="" rhwng="" myricetin="" ac="" asid="" caffeic="" cynnwys="" (rho="−0.176," p="0.037)" o="" blanhigion="">

Y patrymau hinsoddol cyferbyniol o amrywiad a welwyd mewnarbutincynnwys planhigion eirin yn awgrymu, er bod biosynthesis o'r metabolyn hwn yn debygol o gynyddu o dan amodau o ymbelydredd a thymheredd uwch, mae'n debyg bod prinder dŵr yn ffactor sy'n cyfyngu ar A. uva-ursi yn rhanbarthau Môr y Canoldir a'r De. Roedd Del Valle et al. [44] adroddodd batrwm lledredol o flavonoidau cronni Silene littorea (Caryophyllaceae) yn Sbaen, lle pennwyd cynnwys flavonoids uwch mewn poblogaethau deheuol, gan fod lledred yn cydberthyn yn negyddol ag ymbelydredd UV-B a thymheredd, ac yn gadarnhaol â dyddodiad. Mae ymbelydredd byd-eang yn dangos graddiant lledredol clir gyda mynychder uwch yn Ne a Dwyrain Penrhyn Iberia, ac mae hefyd effaith sylweddolorograffegol gan fod dyfalbarhad cymylau yn modylu amledd yr ymbelydredd hwn ar uchderau uwch. Map pelydriad UV o Sbaen [45] cyfeirio cydberthynas uchel (r > 0.9) rhwng UV-B a data ymbelydredd byd-eang. Yn ôl y cyfeiriad hwn, poblogaethau bearberry a oedd yn dangos cymedr uwcharbutinmae cynnwys ein hastudiaeth wedi'u lleoli'n bennaf mewn ardaloedd o dan lefelau ymbelydredd UV-B o 2403-2451 J/m2.

Dangosodd ein canlyniadau ar gyfer amrywiad catechin mewn bearberry batrwm daearyddol (Ffigur 5) ac yn cytuno ag astudiaethau a gynhaliwyd mewn rhywogaethau planhigion eraill o wledydd gogledd Ewrop. Adroddwyd am gynnwys uwch metabolion arbenigol, megis flavonoids ac anthocyaninau, mewn planhigion sy'n tyfu lledredau uwch, yn ôl pob tebyg oherwydd cyfnodau golau dydd hirach a thymheredd nos is [46]. Felly, cynyddodd cynnwys ffenolig hydawdd mewn nodwyddau Juniperus communis gyda lledred ac uchder ym mhoblogaethau'r Ffindir [47], a hefyd canfuwyd cynnwys ffenolig 10-19 y cant uwch ar lledred uwch mewn ffrwythau ofthree Ribes spp. cyltifarau wedi'u dadansoddi mewn dau leoliad yn y Ffindir [48]. Roedd yr awduron hyn yn ymwneud â chynnwys ffenolsawdd is â lefelau uwch o ymbelydredd a thymheredd. Roedd cynnwys flavonoid mewn ffrwythau dwy rywogaeth o Vaccinium (hefyd o'r teulu Ericaceae) yn dangos graddiant daearyddol, gyda symiau uwch o oflavonoidau yn lledredau gogleddol [49,50].

Mewn perthynas ag amrywiad uchder, pennwyd lefelau uwch o flavonoidau mewn poblogaethau o rywogaethau Ericaceae eraill, Calluna vulgaris, sy'n tyfu ar uchderau uwch [51]. Roedd graddiannau uchder hefyd yn effeithio ar fetaboledd arbenigol poblogaethau Sbaenaidd Arnica montana [52] a Quercus robur[53]. Cyfeiriodd y gwaith olaf at gysylltiad cadarnhaol arwyddocaol rhwng crynodiad cyfanswm ffenolics dail a drychiad, sef y graddiant yn dibynnu ar flavonoidau yn unig, gan awgrymu felly bod y rhain gyrrodd cyfansoddion y berthynas ar gyfer cyfanswm ffenolig. Mae'r canlyniadau hyn yn cyd-fynd â'n hamcangyfrifon ar gyfer y patrwm cynnwys catechin. Yn olaf, roedd graddiant glawiad yn gysylltiedig â gwahaniaethau sylweddol mewn cyfansoddiad polyffenolau mewn llwyn meddyginiaethol Affricanaidd (Myrothamnus flabellifolia) yr oedd gwahaniaethau metabolomaidd yn cyd-fynd â strwythur genetig poblogaethau [54].

GALL CISTANCHE WRTH-HENEIDDIO

2.2. Maint Genom a Dadansoddiad Data Dilyniant

Roedd gwerthoedd genom maint 2C o blanhigion bearberry yn amrywio o 2.50 i 3.15 pg (Tabl 1). Mae mân wahaniaethau mewn maint DNA niwclear wedi'u canfod ymhlith poblogaethau (Kruskal-Wallis χ2=87.639, df=36,p=3.39 × 10−6). Datgelodd prawf Dunn gyda chywiriad Bonferroni wahaniaethau ystadegol arwyddocaol rhwng: poblogaethau AL ac SI (Z=−3.972, p=0.024), LE a SI (Z=−4.196, p {{ 21}}.009), a SEand SI (Z=−4.236, p=0.008). Poblogaeth Pontils (PO) yw lleoliad teip A. uva-ursi var.crassifolius, a gyfunwyd wedyn fel A. uva-ursi subsp. mae gan crassifolius, ac nad yw'n cael ei ystyried yn dacsonomaidd ar hyn o bryd (gweler y cyflwyniad), werth canolraddol (2.88 tg), o fewn yr ystod o werthoedd a geir mewn poblogaethau eraill o'r rhywogaeth. Dyma'r astudiaeth boblogaeth helaeth gyntaf o swm DNA niwclear y rhywogaeth a'r genws cyfan gan fod yr unig wybodaeth sydd ar gael hyd yma yn dod o un boblogaeth Balcanaidd o'r un tacson [55]. Mae'r gwerth 2C a adroddwyd yno, 2.49 tud, wedi'i osod yn union ar derfyn isaf ystod amrywiad y set ddata a archwilir yma. Ni ddarganfuwyd unrhyw gydberthynas rhwng gwerthoedd maint genom ac uchder y boblogaeth. Roedd swm DNA unigolion yn dangos cydberthynas arwyddocaol gadarnhaol wan â'rarbutincynnwys pan gymharwyd data o 158 o blanhigion bearberry (rho=0.187, p=0.018), tra na ddarganfuwyd unrhyw gydberthynas arwyddocaol arall rhwng genomesize a newidynnau eraill. Mae'r canlyniad hwn yn cyd-fynd â'r cynnydd a adroddwyd mewn cynhyrchu metabolion arbenigol a welir yn gyffredinol mewn planhigion meddyginiaethol ac aromatig ar ôl polyploidization [29].

Roedd dilyniannau newydd eu cynhyrchu ar gyfer bylchau rhynggenig rpl{{0}}trnL a psbE-petN wedi'u halinio mewn dau fatrics (yn cynnwys 566 a 874 bp) a gafodd eu cydgadwynu mewn un matrics o 1440 bp.Moderate canfuwyd lefelau amrywiad yn y rhanbarthau plastid hyn (chwech amnewid niwcleotid a phedwar indel). Canfuwyd deg haploteip gwahanol gyda chyfanswm amrywiaeth haploteip (Hd) o0.468 (Tabl 1). Roedd y rhan fwyaf o boblogaethau (21) yn cynnwys un haploteip yn unig, tra bod pump ohonynt yn arddangos rhywfaint o amrywiaeth ymhlith unigolion. Yr haploteip mwyaf niferus 1 oedd yn dangos yr amledd uchaf (71.4 y cant ), ac yna haploteip 2 (15.2 y cant ), tra bod y gweddill ohonynt yn dangos amleddau llawer is (0.04-0.01 y cant ). Dangosir dosbarthiad daearyddol haploteipiau yn Ffigur 6. Canfuwyd Haploteip 1 mewn 32 o boblogaethau—fe'i gosodwyd mewn 18 ohonynt—wedi'i ddosbarthu ar draws yr holl ranbarthau a samplwyd ac eithrio'r ardaloedd mwyaf deheuol. Canfuwyd Haploteip 2 mewn deg poblogaeth a hwn oedd yr haploteip unigryw yn y ddwy boblogaeth fwyaf deheuol (HU ac LV) yn ogystal ag mewn PR. Roedd Haploteip 4 yn breifat o dair poblogaeth o'r Pyrenees, tra bod haploteip 8 yn ymddangos mewn dwy boblogaeth o ddwyrain Penrhyn Iberia. O ran y perthnasoedd esblygiadol a ddangosir yn y rhwydwaith parsimony (Ffigur 6), mae'r rhan fwyaf o'r haploteipiau wedi'u cysylltu gan un neu ddau o gamau treiglo. Mae Haploteip 1 mewn lleoliad canolog, gyda saith haploteip yn gysylltiedig ag ef.

Dangosodd prawf Mantel rhwng matricsau pellter pâr pDNA genetig a chemegol gydberthynas wan ond arwyddocaol (r=0.301; p=0.048) ymhlith gwahaniaethu genetig a chrynodiad y pum cydran gemegol a fesurwyd ar gyfer y Set ddata 2016. Ni ddatgelodd prawf Mantel unrhyw gydberthynas arwyddocaol rhwng pellter genetig a daearyddol ymhlith y 25 o boblogaethau a samplwyd yn 2016 (r=0.103, p=0.207) na rhwng y pellteroedd pâr cemegol a daearyddol ymhlith y rhain 25 poblogaeth (r=0.191, p=0.050). Felly ategir yr amrywioldeb ffytocemegol a adroddir yma ar gyfer poblogaethau gwyllt eirin ledled Sbaen gan lefelau cymedrol o amrywiad haploteip pDNA, sef y gwahaniaeth genetig gogledd-de a geir mewn poblogaethau bearberry sy'n debyg i batrymau ffylogeograffeg a geir mewn planhigion eraill (ee, [56-58]. Disgwylir yr holl homogenedd hwn mewn planhigion â chynhwysedd atgenhedlu isel [59], fel A. uva-ursi, sy'n arddangos cyfraddau egino gwael a chyfraddau marwolaethau uchel o eginblanhigion ifanc [4]. Serch hynny, roedd y gwahaniaeth genetig cymedrol a ddangoswyd gan pDNA yn cydberthyn â biocemegol amcangyfrif pellteroedd pâr o broffiliau o bum ffenolig Ffigur 6. Dosbarthiad daearyddol haploteipiau pDNA ar boblogaethau Iberia o uva-ursi Arctostaphylos.Mae codau poblogaeth yn cyfateb i'r rhai yn Nhabl S1, ac mae siartiau cylch yn cynrychioli canran yr unigolion sy'n dangos pob haploteip ym mhob poblogaeth. petryal, y rhwydwaith parsimony ystadegol yn dangos perthnasoedd esblygiadol y te n haploteipiau plastid a ddarganfuwyd mewn poblogaethau uva-wrsi A. a gynrychiolir. Mae pob streipen ar hyd y llinellau sy'n cysylltu'r haploteipiau yn nodi un cam treiglo yn y rhanbarthau pDNA a ddilynwyd yn yr astudiaeth hon. Dangosodd prawf Mantel rhwng matricsau pellter pâr genetig a chemegol pDNA gydberthynas wan ond arwyddocaol (r=0.301; p {{28 }}.048) ymhlith gwahaniaethu genetig a chrynodiad y pum cydran gemegol a fesurwyd ar gyfer set ddata 2016. Ni ddatgelodd prawf Mantel unrhyw gydberthynas arwyddocaol rhwng pellter genetig a daearyddol ymhlith y 25 o boblogaethau a samplwyd yn 2016 (r=0.103, p=0.207) na rhwng y pellteroedd pâr cemegol a daearyddol ymhlith y 25 poblogaeth hyn ( r=0.191,p=0.050). Felly ategir yr amrywioldeb ffytocemegol a adroddir yma ar gyfer poblogaethau bearberrywild ar draws Sbaen gan lefelau cymedrol o amrywiad haploteip pDNA, sef y gwahaniaeth genetig gogledd-de a geir mewn poblogaethau bearberry sy'n debyg i batrymau ffylogeograffeg a geir mewn planhigion eraill (ee, [56-58]. disgwylir mewnblaniadau gyda chynhwysedd atgenhedlu isel [59], fel A. uva-ursi, sy'n arddangos cyfraddau egino gwael a chyfraddau marwolaethau eginblanhigion ifanc [4]. Serch hynny, mae'r gwahaniaethu genetig cymedrol showsby pDNA cydberthyn â phellteroedd pairwise biocemegol a amcangyfrifwyd o broffiliau o bum cyfansoddyn ffenolig Gall y patrwm hwn o amrywiad genetig a ffytocemegol (nad oedd, fel y crybwyllwyd, yn gysylltiedig â phellteroedd daearyddol), yn ogystal â'r gydberthynas wan ond arwyddocaol rhwng genomesize a chynnwys arbutin, ddangos bod amrywioldeb genomig naturiol yn effeithio ar gynnyrch cyfansoddion ffenolig mewn uva-ursi A. Fodd bynnag, moleciwlaidd gor-amrywiol m mae angen arcwyr mewn samplu poblogaeth ehangach i gadarnhau'r patrymau ffylogeograffeg hyn a'r cysylltiad rhwng amrywioldeb genetig a biocemegol.

MAE CISTANCHE YN CAEL EFFEITHIAU GWRTH-OXIDATION

3. Defnyddiau a Dulliau

3.1. Deunydd Planhigion

Ar gyfer dadansoddiad ffytocemegol, samplwyd cyfanswm o 249 o blanhigion bearberry a oedd yn tyfu mewn 42 o boblogaethau yn hydref 2014, 2015, a 2016, sy'n gynrychioliadol o ddosbarthiad naturiol y rhywogaeth hon o blanhigion ym Mhenrhyn Iberia (Ffigur 1 a Thabl S1). Yn gyntaf, yn hydref 2014, casglwyd terfynellau o 80 o blanhigion mewn deg poblogaeth Sbaenaidd (AG, AN, BA, LI, LO, PE, PÁ, SR, SC, a SE) mewn ardal gymharol fach (tua 80 × 50 km) yng Ngogledd Sbaen ond mewn ystod eang o uchder (424–1410 m uwch). Yn ail, yn hydref 2015, casglwyd 48 o blanhigion o chwech o'r poblogaethau hyn (AG, LI, LO, PA, SE, ac SR) a 46 o blanhigion bearberry o chwe phoblogaeth sydd wedi'u lleoli ar lledredau is (AL, CH, ET, HU, LV , a PI). Ar gyfer pob poblogaeth, gwnaethom samplu wyth o blanhigion wedi'u gwahanu o leiaf 5 m, ac eithrio yn HU, lle canfuwyd dim ond chwe unigolyn. Yn drydydd, yn hydref 2016, samplwyd cyfanswm o 140 o blanhigion mewn 29 o wahanol leoliadau (1-6 o unigolion o bob un) gan gynnwys 26 o ardaloedd newydd yn Sbaen (IZ, CE, BT, MO, AA, GU, SI, AF, SA, PT, AB, CG, OD, PS, LB, CO, LE, MA, CP, PO, MZ, AV, LC, AY, LN, a ZU). Mae ein samplu yn rhychwantu ystod uchder o 534 i 1750 m. Gyda'i gilydd, mae'r 42 poblogaeth yn cynrychioli ystod eang o amodau hinsoddol (Tabl S1): dangosodd y tymheredd cymedrig uchaf 2-amrywiad plyg (13-26 ◦C) a dyddodiad blynyddol wedi'i osgiladu o 399 (ZU) i 1589 mm (PT). Roedd ymbelydredd byd-eang yn amrywio o 4.2 i 5.1 kWh/m2d. Casglwyd chwech i ddeg egin terfynol (15-20 cm o hyd) ar gyfer pob planhigyn i gael 6-15 go ddail iach, a gafodd eu torri a'u sychu wedi hynny ar 60 ◦C pwysau cyson (3-4 diwrnod). Ar ôl pennu pwysau sych, cafodd dail eu homogeneiddio â llaw mewn morter a'u storio ar 4 ◦C nes eu dadansoddi. Defnyddiwyd y deunydd planhigion hwn ar gyfer cyfanswm ffenolau a phenderfyniadau HPLC.

Cafwyd deunyddiau dail ar gyfer asesiadau llif cytometrig o ddail ffres o 178 o unigolion yn perthyn i gyfanswm o 37 o boblogaethau (Tabl 1). Cafwyd samplau o 33 o’r poblogaethau a grybwyllwyd uchod, ac o bedair poblogaeth newydd (BE, JO, a PR yn Sbaen, ac EN yn Andorra) lle casglwyd dail yng ngwanwyn 2017, ac felly ni chawsant eu cynnwys yn y dadansoddiad ffytocemegol (Ffigur 1 a Tabl S1). Mesurwyd o un i chwe unigolyn fesul poblogaeth yn ddyblyg. Sychwyd deunyddiau dail ar gyfer echdynnu DNA mewn gel silica a'u storio ar dymheredd ystafell. Perfformiwyd dadansoddiadau amrywiaeth DNA mewn cyfanswm o 105 o blanhigion o 35 lleoliad (Tabl 1).

Mae talebau planhigion o'r 46 poblogaeth eirin a astudiwyd yn cael eu hadneuo yn llysieufa CC, yr Institut Botànic de Barcelona, ​​yn llysieufa BCN, y Centre de Documentació de BiodiversitatVegetal, Universitat de Barcelona neu yn llysieufa JACA, yr Instituto Pirenaico de Ecología( CSIC).

3.2. Paratoi Detholiad Dail a Phenderfyniad Cyfanswm Ffenolau

Paratowyd tri atgynhyrchiad o echdynion dail bearberry trwy ddefnyddio 50 mg o sampl sych a 10 mL o 80 y cant o fethanol. Cafodd tiwbiau eu deor am 30 munud mewn baddon ultrasonic, ac yna cafodd yr echdynion eu hidlo (0.45 mm) a'u storio ar 4 ◦C nes eu dadansoddi. Penderfynwyd ar gyfanswm y cynnwys ffenolig yn y darnau a baratowyd o samplau a gasglwyd yn 2014 a 2015. Dilynwyd Folin-Ciocalteumethod [60,61] gydag ychydig o addasiadau: i 0.1 mL o echdyniad, 0.4 mL o fethanol (80 y cant), 0.5 mLof Folin– Ychwanegwyd adweithydd Ciocalteu ac 8 ml o ddŵr pur iawn. Ar ôl 5 munud mewn bath ultrasonic, ychwanegwyd 1 ml o Na2CO3 20 y cant (w/v). Gadawyd y samplau yn y tywyllwch am 30 munud cyn mesur amsugnedd ar 760 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer UV-gweladwy (CARY 50 BIO, Varian, AgilentTechnologies). Mynegwyd canlyniadau mewn cyfwerth asid galig (GAE); hynny yw, mg asid galig/g dr wt,gan ddefnyddio cromlin safonol asid galig (40–340 µg/g).

3.3. Penderfyniad Arbutin a Metabolitau Ffenolig Eraill

Cafodd cynnwys ffenolig echdynion methanolig deilen bearberry ei feintioli gan RP-HPLC gan ddefnyddio system HPLC-UV/Vis (LaChrom Merck Hitachi L-7400) gyda Kinetex 5 µm-EVO C18(250 mm × 4.6 mm ) colofn ac amsugnedd wedi'i bennu ar 280 nm. Cafodd detholiadau o samplau a gasglwyd yn 2014 a 2015 eu gwanhau 1:10 (v/v) a'u chwistrellu â chyfnod symudol o fethanol ac acetonitrile. Roedd y rhaglen graddiant yn cynnwys 0-5 min, 25 y cant o fethanol; 5–6 mun, 100 y cant; 6-10 munud, 100 y cant; a 10-20 munud, eto 25 y cant o fethanol. Cyfradd y llif oedd 1 mL/munud a chyfaint y pigiad oedd 20 µL. Yn yr amodau hyn, mae amser cadwarbutinoedd 2.6 mun, gan ein galluogi i bennu crynodiad y cyfansoddyn hwn gan ddefnyddio cromlin raddnodi a sefydlwyd gyda 6 gwanediad o safon, o 40 i 340 µg/g, gyda chyfernod cydberthynas o r=0. 9997. Dadansoddwyd darnau o samplau a gasglwyd yn 2016 gan ddefnyddio cyfnod symudol o fethanol a dŵr gyda'r rhaglen graddiant ganlynol: 0-5 min, 10 y cant o fethanol; 5–6 mun, 20 y cant; 6–10 mun, 20 y cant; 10–11 mun, 30 y cant; 11–15 mun, 30 y cant; 15–16 mun, 40 y cant; 16–20 mun, 40 y cant; 20–21 mun, 50 y cant; 21–25 mun, 50 y cant; 25–26 mun, 60 y cant; 26–30 mun, 60 y cant; 30–31 mun, 10 y cant; a 31-36 mun, eto 10 y cant o fethanol. Yn yr amodau hyn, fe wnaethom benderfynuarbutin a4 cyfansoddyn ffenolig arall: asid caffeic, catechin, myricetin, a quercetin-3-O-glucopyranosidein gan ddefnyddio'r cromliniau graddnodi cyfatebol a sefydlwyd gyda 5 gwanediad o safonau (25–500 µg/mL) , a ddangosodd cyfernodau cydberthynas o {{10}}.9992 ar gyfer catechin (amser cadw 12.0 mun), 0.9924 ar gyfer caffeinacid (amser cadw 13.4 mun), 0.9981 ar gyfer quercetin{{16} }O-glucoside (amser cadw 23.4 munud), a 0.9997 ar gyfer myricetin (amser cadw 25.1 munud).

Roedd methanol ac asetonitrile mewn gradd HPLC ac wedi'u prynu gan Panreac (Barcelona, ​​Sbaen). Safonau (purdeb Yn fwy na neu'n hafal i 98 y cant) oarbutin, asid caffeic, ac asid galig, yn ogystal ag adweithydd Folin-Ciocalteu a brynwyd gan Sigma-Aldrich (Barcelona, ​​Sbaen). Prynwyd safonau Catechin a quercetin o Extrasynthese (Genay Cedex, Ffrainc), a phrynwyd myricetin oddi wrth Alfa Aesar (Karlsruhe, yr Almaen).

Dadansoddwyd canlyniadau penderfyniadau cemegol gan ddefnyddio meddalwedd SPSS v. 25 ac R 3.5.2.Ar ôl profi data ar gyfer normalrwydd a homoscedasticity, gwnaethom ddadansoddi amrywiant setiau gwahanol o ddata a phrofion gwahanu modd (Tukey a Tamhane) neu brofion nad ydynt yn baramedrig. fel Kruskal-Wallis, a phrawf cymhariaeth lluosog Dunn gyda chywiriad Bonferroni. Gwnaethom hefyd amcangyfrif cyfernodau cydberthynas (Pearson neu Spearman yn dibynnu a oedd data'n dilyn dosbarthiad arferol) rhwng newidynnau, gan gynnwys maint y genom.

MAE CISTANCHE YN CAEL EFFEITHIAU GWRTH-OXIDATION

3.4. Amcangyfrifon Maint Genom a Dilyniannu DNA

Amcangyfrifwyd maint genom planhigion eirin Mair gan sytometreg llif yn y Centres Científicsi Tecnològics, Universitat de Barcelona (CCiTUB) gan ddilyn y gweithdrefnau a eglurwyd yn Pellicer et al. [62].Petunia hybrida Vilm. Defnyddiwyd 'PxPc6' (2C=2.85 pg) fel safon fewnol. Darparwyd hadau o'r safon gan y Plateforme de cytométrie d'Imagerie-Gif, CNRS-I2BC (Gif-sur-Yvette, Ffrainc). Cyfrifwyd cynnwys DNA niwclear (2C) trwy luosi cynnwys DNA hysbys y safon â'r cyniferydd rhwng y safleoedd brig (modd) y rhywogaeth darged a'r safon yn yr histogram o ddwyster fflworoleuedd, gan dybio bod cydberthynas llinol rhwng y signalau fflwroleuol o niwclysau lliw y sbesimen anhysbys, y safon fewnol hysbys a'r swm DNA [63].

Defnyddiwyd tua 20 mg o feinwe dail wedi'i sychu gan silica ar gyfer echdynnu DNA gan ddefnyddio protocol CTAB [64] gyda mân addasiadau. Gwiriwyd ansawdd cyfanswm y DNA gyda sbectrophotometer NanoDrop 1000 (ThermoScientific, Wilmington, DE, UDA). Cafodd y rhanbarthau rhynggenig plastid rpl32-trnLand psbE-petN, yn ogystal â'r rhanbarth DNA ribosomaidd niwclear ITS, eu chwyddo a'u dilyniannu ar gyfer tri unigolyn fesul poblogaeth. Ni chyflwynodd dilyniannau ITS unrhyw amrywioldeb o fewn y 105 o unigolion dadansoddi, ac eithrio ychydig o safleoedd yn dangos amryffurfedd niwcleotid mewngenomig. Felly, ni chafodd y rhanbarth DNA ribosomaidd niwclear hwn ei ddadansoddi ymhellach. Profwyd rhanbarthau DNA plastid eraill (hy, ndhF; ndhF-rpl32; psbA-trnH; psbD-trnT; rps16; a trnL-trnF) hefyd ond cawsant eu taflu oherwydd amrywioldeb isel neu broblemau dilyniannu. Perfformiwyd gweithdrefn ymhelaethu fel y disgrifiwyd yn Vitales et al. [65]. Perfformiwyd dilyniant uniongyrchol o'r segmentau DNA chwyddedig gyda Dilyniant Beic Terfynydd Big Dye v 3.1 (PE Biosystems, Foster City, California, UDA) yn Unitatde Genòmica, CCiTUB, ar ddadansoddwr DNA ABI PRISM 3700 (PE Biosystems). Cafodd y dilyniannau rpl32-trnL andpsbE-petN eu cydosod gyda fersiwn BioEdit 7.1.3.0 [66], wedi'u halinio â ClustalW MultipleAlignment v1.4 [67] a'u haddasu â llaw. Darperir rhifau derbyn GenBank yn Nhabl S2.

3.5. Maint Genom a Dadansoddiad Genetig

Perfformiwyd prawf Kruskal-Wallis nad oedd yn baramedrig i wirio am wahaniaethau ystadegol arwyddocaol mewn gwerthoedd 2C ymhlith poblogaethau. Perfformiwyd profion cymharu lluosog Dunn hefyd i bennu pa boblogaethau oedd yn dangos gwahaniaethau sylweddol rhyngddynt. Cymhwyswyd y cywiriad Bonferroni i leihau'r gwall math I (cadarnhaol ffug).

Amcangyfrifwyd paramedrau amrywiaeth genetig (safleoedd polymorffig, safleoedd gwybodaeth parsimony, nifer yr haploteipiau, a chyfanswm amrywiaeth haploteip) gan ddefnyddio DnaSP v6 [68]. Pennwyd haploteipiau plastid mewn set ddata gyfunol a oedd yn cynnwys y rhanbarthau rpl32-trnL a psbE-petN. Cafodd indels eu codeiddio â FastGap v.1.2 [69] a'u trin fel digwyddiadau treiglad sengl. Casglwyd y berthynas esblygiadol ymhlith haploteipiau yn seiliedig ar rwydwaith parsimony a adeiladwyd gan ddefnyddioTCS [70] fel y'i gweithredwyd yn PopArt [71]. Cyfrifwyd uchafswm nifer y gwahaniaethau o ganlyniad i amnewidiadau sengl ymhlith haploteipiau gyda therfynau hyder o 95 y cant.

Er mwyn dadansoddi'r berthynas rhwng data genetig a chemegol cynhaliwyd prawf Mantel. Yn gyntaf, gwnaethom amcangyfrif y pellter ffenoteipaidd ymhlith 25 o boblogaethau gan ddefnyddio data o blanhigion bearberry a gasglwyd yn 2016, a oedd wedi'i fesur ar gyfer pum cydran ffenolig (h.y.arbutin, catechin, asid caffeic, quercetin, a myricetin). Fe wnaethom ddefnyddio R Commander i safoni'r data hyn [72], ac wedi hynny, i gyfrifo'r pellter cemegol sy'n deillio o'r matrics safonol gyda'r swyddogaeth "Dist" onR yn seiliedig ar bellteroedd Ewclidaidd. Yn ail, cafodd matrics pellter pâr genetig poblogaeth Nei ei gyfrifo rhwng y 25 poblogaeth gan ddefnyddio DnaSP v6. Yn olaf, fe wnaethom gyfrifo'r pellteroedd daearyddol pârwise ymhlith y poblogaethau hyn gan ddefnyddio'r pecyn "geodist" yn R. Cyfrifwyd cydberthyniadau Pairwise rhwng matricsau pellter gan ddefnyddio prawf Mantel gyda 10,000 trynewidiadau gyda'r mantel swyddogaeth sydd ar gael yn y pecyn R "fegan" [ 73].

4. Casgliadau

Dangosodd yr holl blanhigion bearberry dadansoddiarbutincynnwys uwch na 7 y cant; felly, mae'r deunydd planhigion hwn yn briodol ar gyfer paratoadau llysieuol. Datgelodd ein dadansoddiad gynnwys arbutin uwch na'r rhai (hyd at 9 y cant) a gyfeiriwyd gan Parejo et al. [40], a ddadansoddodd bedair poblogaeth a leolir yn y Pyrenees gogledd-ddwyreiniol ar 1580-2030 m a chanfod gwahaniaethau isel mewn cynnwys arbutin ymhlith poblogaethau. Ar ben hynny, mae'r rhan fwyaf o'r gwerthoedd a bennir yma yn ystod y deunydd planhigion a ddewiswyd i'w drin yng Ngwlad Pwyl [74] ac mewn cytundeb â'r uchel.arbutincynnwys samplau dail berberry Sbaeneg a adroddwyd gan Sonnenschein a Tegtmeier [42] wrth ddewis planhigion ar gyfer tyfu yn yr Almaen. Gallai genoteipiau elitaidd A. uva-ursi gael eu lluosogi'n llystyfol, ond methodd y rhan fwyaf o'r clonau a gafwyd yn ystod sefydlu'r caeau, a oedd yn cyfyngu ar y defnydd o'r adnoddau hyn. Disgrifiwyd hefyd yr amrywiad presennol yng nghynnwys tri flavonoid (catechin, myricetin, a quercetinglucoside), yn ogystal ag asid caffeic, ymhlith poblogaethau eirin Mair Sbaen, a sut mae ffactorau hinsoddol (ymbelydredd byd-eang a glawiad yn bennaf), a oedd yn cyfateb i lledred ac uchder. graddiannau, yn effeithio ar yr amrywiad hwnnw. Ar yr un pryd, er gwaethaf y lefelau isel o haploteip a maint genom amrywioldeb a bennwyd yn Iberia A. uva-ursi, gwahaniaethu genetig a sytogenetig o boblogaethau yn wan ond yn sylweddol gysylltiedig ag amrywiaeth ffytocemegol. Ar y cyfan, mae'r canlyniadau hyn yn amlygu bod yn rhaid ystyried effaith ffactorau genetig ac anfiotig i egluro amrywioldeb ffytocemegol mewnbenodol a geir mewn planhigion o boblogaethau gwyllt.

EFFEITHIAU CISTANCHE

Cyfeiriadau

1. Moore, BD; Andrew, RL; Külheim, C.; Foley, WJ Esbonio amrywiaeth fewnbenodol mewn metabolion eilaidd planhigion mewn cyd-destun ecolegol. Ffytol Newydd. 2014, 201, 733–750. [CrossRef] [PubMed]

2. Cheynier, V. ; Comte, G. ; Davies, KM; Lattanzio, V. Ffenoleg planhigion: datblygiadau diweddar ar eu biosynthesis, geneteg, ac ecoffisioleg. Physiol Planhigion. Biocemeg. 2013, 72, 1–20. [CrossRef]

3. Bernal, M. ; Llorens, L.; Julkunen-Tiitto, R.; Badosa, J.; Verdaguer, D. Newidiadau uchderol a thymhorol o gyfansoddion ffenolig mewn dail a chwtiglau Buxus sempervirens. Physiol Planhigion. Biocemeg. 2013, 70, 471–482.[CrossRef] [PubMed]

4. Upton, R. (gol.) Uva-ursi Leaf. Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. Safon Dadansoddi, Rheoli Ansawdd, a Therapiwteg; Pharmacopoeia Llysieuol America: Scotts Valley, CA, UDA, 2008; 30p.

5. Asiantaeth Meddyginiaethau Ewrop. Adroddiad Asesu ar Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. Ffoliwm. LCA/HMPC/750266/2016; Asiantaeth Meddyginiaethau Ewropeaidd: Amsterdam, Yr Iseldiroedd, 2018.6. Kanlayavatanakul, M.; Lourith, N. Planhigion a chynhyrchion naturiol ar gyfer trin gor-pigmentation - Adolygiad. Med Planta. 2018, 84, 988–1006. [CrossRef]

7. Migas, P. ; Krauze-Baranowska, M. Arwyddocâd arbutin a'i ddeilliadau mewn therapi a cholur.Phytochem. Lett. 2015, 13, 35–40. [CrossRef]

8. Yma, DH; Jung, JH; Lee, JE; Jeon, EJ; Kim, W.; Park, CS Cynhyrchu biotechnolegol arbutin ( - ac -arbutin), cyfryngau ysgafnhau croen, a'u deilliadau. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2012, 95, 1417–1425.[CrossRef]

9. Zhu, X. ; Tian, ​​Y. ; Zhang, W.; Zhang, T.; Guang, C. ; Mu, W. Cynnydd diweddar ar gynhyrchu biolegol o -arbutin. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2018, 102, 8145–8152. [CrossRef] [PubMed]

10. Davey, M. Metaboledd eilaidd mewn diwylliannau celloedd planhigion. Yn Gwyddoniadur Gwyddorau Planhigion Cymhwysol, 2il arg.;Thomas, B., Murphy, DJ, Murray, BG, Eds.; Elsevier: Llundain, DU, 2017; Cyfrol 2, pp. 462–467. [CrossRef]

11. Kurkin, VA; Ryazanova, TK; Daeva, ED; Kadentsev, VI Cyfansoddwyr Arctostaphylos uva-ursi leaves.Chem. Nat. Compd. 2018, 54, 278–280. [CrossRef]

12. Panda, A. ; Petrucci, R.; Marrosu, G. ; Multari, G. ; Romana-Gallo, F. HPLC-PDAESI-TOF/MS Proffilio metabolaidd o Arctostaphylos pungens ac Arctostaphylos uva-ursi: Astudiaeth gymharol o gyfansoddion ffenolig o echdyniad metabolig dail. Ffytocemeg 2015, 115, 79–88. [CrossRef]

13. Olennikov, DN; Chekhirova, GV 60-Galloylpicein a chyfansoddion ffenolig eraill o Arctostaphylos uva-ursi.Chem. Nat. Compd. 2013, 49, 1–7. [CrossRef]

14. Brewer, MS Gwrthocsidyddion naturiol: ffynonellau, cyfansoddion, mecanweithiau gweithredu, a chymwysiadau posibl.Compr. Gwydd Bwyd y Parch. Bwyd Saf. 2011, 10, 221–247. [CrossRef]

15. Amarowicz, R. ; Pegg, RB; Rahimi-Moghaddam, P.; Bare, B. ; Weil, JA Capasiti chwilota radical rhad ac am ddim a gweithgaredd gwrthocsidiol rhywogaethau planhigion dethol o'r prairies Canada. Cemegydd Bwyd. 2004, 84, 551–562.[CrossRef]

16. Saer, R. ; O'Grady, MN; O'Callaghan, YC; O'Brien, NM; Kerry, JP Gwerthusiad o botensial gwrthocsidiol hadau grawnwin a darnau bearberry mewn porc amrwd a phorc wedi'i goginio. Sci Cig. 2007, 76, 604–610. [CrossRef][PubMed]

17. Mekini’c, IG; Skroza, D.; Ljubenkov, I. ; Katalini’c, V. ; Šimat, V. Antioxidant, a photensial gwrthficrobaidd metabolion ffenolig o berlysiau a sbeisys Môr y Canoldir a ddefnyddir yn draddodiadol. Bwydydd 2019, 8, 579. [CrossRef]

18. Mohd Azman, NA; Gallego, MG; Segovia, F.; Abdullah, A.S.; Shaarani, SM; Almajano, AS Astudiaeth o briodweddau echdyniad dail bearberry fel gwrthocsidydd naturiol mewn bwydydd enghreifftiol. Gwrthocsidyddion 2016, 5, 11.[CrossRef] [PubMed]

19. Pegg, RB; Amarowicz, R.; Naczk, M. Gweithgaredd gwrthocsidiol polyphenolics o echdyniad deilen bearberry (Arctostaphylos uva-ursi L. Sprengel) mewn systemau cig. Mewn Cyfansoddion Ffenolig mewn Bwydydd a Chynhyrchion Iechyd Naturiol; Shahidi, F., Ho, CT, Eds.; Cymdeithas Cemegol America: Washington, DC, UDA, 2005; tt. 67–82.[CrossRef]

20. Wrona, M.; Blasco, S.; Becerril, R.; Nerín, C. ; Gwerthiant, E.; Asensio, E. Marcwyr gwrthocsidiol a gwrthficrobaidd byUPLC®-ESI-Q-TOF-MSE o becynnu gweithredol amlhaenog newydd yn seiliedig ar Arctostaphylos uva-ursi. Talanta2019, 196, 498–509. [CrossRef]

21. Maier, M. ; Olbermann, AL; Renner, M.; Weidner, E. Sgrinio perlysiau meddyginiaethol Ewropeaidd ar eu cynnwys tanni—Asiantau lliw haul posibl newydd ar gyfer y diwydiant lledr. Cnwd Ddiwydiannol. Prod. 2017, 99, 19–26. [CrossRef]

22. Boros, B. ; Jakabová, S.; Madarasz, T.; Molnár, R.; Galambos, B. ; Kilár, F.; Fellinger, A. ; Farkas, A. Dull HPLC wedi'i ddilysu ar gyfer meintioli bergenin, arbutin ac asid galig ar yr un pryd mewn dail o wahanol rywogaethau Bergenia. Cromatograffia 2014, 77, 1129–1135. [CrossRef]

23. Miaw-Ling, C. ; Chur-Min, C. Penderfyniad HPLC ar yr un pryd o asiant gwynnu hydroffilig mewn cynnyrch cosmetig. J. Pharm. Biomed. Rhefrol. 2003, 33, 617–626. [CrossRef]

24. Parejo, I. ; Viladomat, F.; Bastida, J.; Codina, C. Mae un cam echdynnu yn y dadansoddiad meintiol o arbutinin bearberry (Arctostaphylos uva-ursi) yn gadael gan cromatograffaeth hylif perfformiad uchel. Ffytochem. Rhefrol.2001, 12, 336–339. [CrossRef]

25. GRYM. Planhigion y Byd Ar-lein. Ar gael ar-lein: http://www.plantsoftheworldonline.org/ (cyrchwyd ar 29 Ebrill 2020).

26. Saleem, A. ; Harris, CS; Asim, M. ; Cuerrier, A. ; Martineau, L.; Haddad, PS; Arnason, dull JTRP-HPLC-DAD-APCI/MSD ar gyfer nodweddu Ericaceae meddyginiaethol a ddefnyddir gan Gwledydd Cyntaf Eeyou IstcheeCree. Ffytochem. Rhefrol. 2010, 21, 328–339. [CrossRef] [PubMed]

27. Stefanescu, BE; Szabo, K.; Mocan, A. ; Crisan, G. Cyfansoddion ffenolig o bum rhywogaeth Ericaceae yn gadael a'u bioargaeledd a'u buddion iechyd cysylltiedig. Moleciwlau 2019, 24, 2046. [CrossRef] [PubMed]

28. Onda, Y. ; Mochida, K. Archwilio amrywiaeth genetig mewn planhigion gan ddefnyddio technegau dilyniannu trwybwn uchel.Curr. Genom. 2016, 17, 358–367. [CrossRef] [PubMed]

29. Iannicelli, J. ; Guariniello, J.; Tossib, VE; Regalado, JJ; Di Ciaccioa, L.; van Barene, CM; Pitta Álvarez, SI; Escandón, AS Yr "effaith polyploid" wrth fridio rhywogaethau aromatig a meddyginiaethol. Sci. Hortig. 2020,260, 108854. [CrossRef]

30. Leitch, IJ; Leitch, AR Genom amrywiaeth maint ac esblygiad mewn planhigion tir. Amrywiaeth Genom Mewn Planhigion Cyfrol 2, Adeiledd Ffisegol, Ymddygiad ac Esblygiad Genomau Planhigion; Leitch, IJ, Greilhuber, J., Doležel, J., Wendel, JF, Eds.; Springer: Fienna, Awstria, 2013; pp. 307–322. [CrossRef]

31. Bennett, MD; Leitch, IJ Cyfanswm DNA niwclear mewn angiospermau - Cynnydd, problemau a rhagolygon. Ann. Bot. 2005, 95, 45–90. [CrossRef]

32. Gregory, TR (Gol.) Esblygiad y Genom; Elsevier: San Diego, CA, UDA, 2005.

33. Hoang, PN; Schubert, V.; Meister, A. ; Fuchs, J.; Shubert, I. Amrywiad ym maint y genom, cyfaint celloedd a chnewyllyn, rhif cromosom a loci rDNA ymhlith hwyaid. Sci. Rep. 2019, 9, 3234. [CrossRef]

34. Marchog, CA; Molinari, N.; Petrov, DA Y ddamcaniaeth cyfyngiad genom mawr: Esblygiad, ecoleg, a ffenoteip. Ann. Bot. 2005, 95, 177–190. [CrossRef]

35. Pellicer, J. ; Hidalgo, O.; Dodsworth, A.S.; Leitch, IJ Amrywiaeth maint genom a'i effaith ar esblygiad planhigion tir. Genes 2018, 9, 88. [CrossRef]

36. Carev, I. ; Rušˇci’c, M.; Skoˇcibuši’c, M.; Maravi´c, A. ; Siljak-Yakovlev, A.S.; Politico, O. Nodweddion ffytocemegol a sytogenetig Centaurea solstitialis (Asteraceae) o Croatia. Cemeg. Biobifwyr. 2017, 14, e1600213.[CrossRef]

37. Cole, IB; Cao, J.; Alan, RA; Saxena, PK; Murch, SJ Cymariaethau Scutellaria baicalensis, Scutellarialateriflora a Scutellaria racemosa: Maint genom, potensial gwrthocsidiol a ffytocemeg. Med Planta. 2008,74, 474–481. [CrossRef]

38. Carvalho, YGS; Vitorino, LC; de Souza, UJB; Bessa, ALl Tueddiadau diweddar mewn ymchwil ar amrywiaeth genetig planhigion: Goblygiadau ar gyfer cadwraeth. Amrywiaeth 2019, 11, 62. [CrossRef]

39. Wei, S. ; Yang, W.; Wang, X. ; Hou, Y. Amrywiaeth genetig uchel mewn planhigyn meddyginiaethol dan fygythiad, Saussureainvolucrata (Saussurea, Asteraceae), yng ngorllewin Mynyddoedd Tianshan, Tsieina. cadwraeth. Genet. 2017, 18,1435–1447. [CrossRef]

40. Chang, YJ; Cao, YF; Zhang, JM; Tian, ​​LM; Dong, XG; Zhang, Y.; Qi, D.; Zhang, XS Astudiaeth ar amrywiaeth cloroplastDNA o gellyg wedi'u hamaethu a gwyllt (Pyrus L.) yng Ngogledd Tsieina. Genet Coed. Genomau 2017, 13, 44.[CrossRef]

41. Parejo, I. ; Viladomat, F.; Bastida, J.; Codina, C. Amrywiad yn y cynnwys arbutin mewn gwahanol boblogaethau gwyllt o Arctostaphylos uva-ursi yng Nghatalonia, Sbaen. J. Perlysiau Sbeis Med. Planhigion 2002, 9, 329–333. [CrossRef]

42. Sonnenschein, M. ; Tegtmeier, M. Arbrofion ar ddofi eirin Mair (Arctostaphylos uva-ursi (L.)Spreng.). J. Med. Planhigion Sbeis 2012, 17, 124–128.

43. Chen, HY; Lin, YC; Hsieh, CL Gwerthusiad o weithgaredd gwrthocsidiol o echdyniad dyfrllyd o rai perlysiau maethol dethol. Cemegydd Bwyd. 2008, 104, 1418–1424. [CrossRef]

44. Del Valle, JC; Buide, ML; Casimiro-Soriguer, I.; Whittall, JB; Narbona, E. Ar groniad flavonoid mewn gwahanol rannau o blanhigion: Patrymau amrywiad ymhlith unigolion a phoblogaethau yn y gludlys lan (Silene littorea). Blaen. Gwydd Planhigion. 2015, 6, 939. [CrossRef]

45. Martínez-Cadenas, C.; López, S.; Ribas, G. ; Flores, C. ; García, O. ; Sevilla, A.; Smith-Zubiaga, I.;Ibarrola-Villaba, M.; Pino-Yanes, MM; Gardeazabal, J.; et al. Detholiad puro ar yr un pryd ar yr alel MC1R hynafiadol a detholiad cadarnhaol ar yr alel risg melanoma v60l yn ne Ewropeaid.Mol. Biol. Evol. 2013, 30, 2654–2665. [CrossRef]

46. ​​Jakaaola, L. ; Hohtola, A. Effaith lledred ar flavonoid biosynthesis mewn planhigion. Amgylchedd Cell Planhigion. 2010, 33,1239–1247. [Croesgyfeir]47. Martz, F.; Peltola, R.; Fontana, S.; Duval, AG; Julkunen-Tiitto, R.; Stark, S. Effaith lledred ac uchder ar gyfansoddiad ffenolig terpenoid a hydawdd nodwyddau merywen (Juniperus communis) a gwerthusiad o'u gweithgaredd gwrthfacterol yn y parth boreal. J. Amaeth. Cemegydd Bwyd. 2009, 57, 9575–9584. [CrossRef]

48. Yang, B. ; Zheng, J. ; Laaksonen, O.; Tahvonen, R.; Kallio, H. Effeithiau lledred a thywydd cyfansoddion onffenolig mewn cyltifarau cyrens (Ribes spp.). J. Amaeth. Cemegydd Bwyd. 2013, 61, 3517–3532. [CrossRef][PubMed]

49. Lätti, AK; Jaakola, L.; Riihinen, KR; Kainulainen, PS Anthocyanin ac amrywiad flavonol mewn aeron cors (Vaccinium uliginosum L.) yn y Ffindir. J. Amaeth. Cemegydd Bwyd. 2010, 58, 427–433. [CrossRef] [PubMed]

50. Lätti, AK; Riihinen, KR; Kainulainen, PS Dadansoddiad o amrywiad anthocyanin mewn poblogaethau gwyllt o lus (Vaccinium myrtillus L.) yn y Ffindir. J. Amaeth. Cemegydd Bwyd. 2008, 56, 190–196. [CrossRef]

51. Monschein, M. ; Iglesias, J. ; Kunert, O. ; Bucar, F. Ffytocemeg grug (Calluna vulgaris (L.) Hull) a'i newid altitudinal. Ffytochem. Parch 2010, 9, 205–215. [CrossRef]

52. Perry, DS; Burgess, EJ; Rodríguez Guitián, MA; Romero Franco, R.; López Mosquera, E.; Smallfield, BM; Joyce, GI; Littlejohn, RP Sesquiterpene lactones yn Arnica montana: Helenalin a dihydrohelenalinchemotypes yn Sbaen. Med Planta. 2009, 75, 660–666. [CrossRef] [PubMed]

53. Abdala-Roberts, L.; Assmann, A.S.; Berny-Mier, Y.; Terán, JC; Covelo, F.; Glauser, G. ; Moreira, X. Ffactorau biotig ac anabiotig sy'n gysylltiedig ag amrywiad uchder mewn nodweddion planhigion a llysysydd mewn rhywogaeth dderw amlycaf. J. Bot. 2016, 103, 2070–2078. [CrossRef] [PubMed]

54. Bentley, J. ; Moore, YH; Farrant, JM Metabolomeg fel ategiad i ffylogeneteg ar gyfer asesu ffiniau mewnrywogaethol yn y llwyn meddyginiaethol sy'n goddef dysychiad Myrothamnus flabellifolia (Myrothamnaceae). Ffytocemeg 2019, 159, 127–136. [CrossRef] [PubMed]

55. Siljak-Yakovlev, A.S.; Pwstahija, F.; Šoli’c, EM; Boguni’c, F.; Muratovi’c, E.; Baši’c, N.; Catrice, O.; Brown, CSTowards cronfa ddata o faint genom a nifer cromosom o fflora Balcanaidd: gwerthoedd C mewn 343 tacsa gyda gwerthoedd newydd ar gyfer 252. Adv. Sci. Lett. 2010, 3, 190–213. [CrossRef]

56. Garrido, JL; Alcántara, JM; Rey, PJ; Medrano, M.A.; Guitián, J. ; Castellanos, MC; Bastida, JM; Jaime, R.; Herrera, CM Strwythur genetig daearyddol columbines Iberia (gen. Aquilegia). Syst Planhigion. Evol. 2017,303, 1145–1160. [Croesgyf

57. Listl, D. ; Poschlod, P. ; Reisch, C. Ffylogeography goroeswr craig galed mewn glaswelltiroedd sych Ewropeaidd.PLoS ONE 2017, 12, e0179961. [CrossRef]

58. Olalde, M.; Herrán, A. ; Espinel, S.; Goicoechea, P. Ffylogaeograffeg derw gwyn ym Mhenrhyn Iberia.Ecol. Manag. 2002, 156, 89–102. [CrossRef]

59. Barrett, SCH Dylanwadau cloniaeth ar atgenhedlu rhywiol planhigion. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 2015, 112,8859–8866. [CrossRef] [PubMed]

60. Skowyra, M.; Falguera, V. ; Gallego, G. ; Peiro, A.S.; Almajano, AS Effaith darnau Perilla frutescens ar sefydlogrwydd ocsidiol emylsiynau bwyd enghreifftiol. Gwrthocsidyddion 2014, 3, 38–54. [CrossRef] [PubMed]

61. Pascoal, A. ; Quirantes-Piné, R.; Fernando, AL; Alexopoulou, E.; Segura-Carretero, A. Cyfansoddiad ffenolig a gweithgaredd gwrthocsidiol dail kenaf. Cnwd Ddiwydiannol. Prod. 2015, 78, 116–123. [CrossRef]

62. Pellicer, J. ; Garnatje, T. ; Molero, J.; Pwstahija, F.; Siljak-Yakovlev, A.S.; Vallès, J. Tarddiad, ac esblygiad rhywogaethau Artemisia De America (Asteraceae); tystiolaeth o ffylogeni moleciwlaidd, DNA ribosomaidd a data genomesize. Awst. J. Bot. 2010, 58, 605–616. [CrossRef]

63. Doležel, J. Dadansoddiad cytometrig llif o gynnwys DNA niwclear mewn planhigion uwch. Ffytochem. Rhefrol. 1991, 2,143–154. [CrossRef]

64. Doyle, JJ; Doyle, JL Gweithdrefn ynysu DNA gyflym ar gyfer meintiau bach o feinwe dail ffres. Ffytochem. Tarw.Bot. Soc. Yn. 1987, 19, 11–15.

65. Vitales, D. ; Feliner, GN; Vallès, J.; Garnatje, T. ; Firat, M. ; Álvarez, I. A new circumscription of theMedterranean genws Anacyclus (Anthemidae, Asteraceae) yn seiliedig ar farcwyr DNA plastid a niwclear.Phyotaxa 2018, 349, 1–17. [CrossRef]

66. Hall, TA BioEdit: Golygydd aliniad dilyniant biolegol hawdd ei ddefnyddio a rhaglen ddadansoddi ar gyfer Windows95/98/NT. Symp Asidau Niwcleig. Ser. 1999, 41, 95–98.

67. Thompson, JD; Higgins, DG; Gibson, TJ CLUSTAL W: Gwella sensitifrwydd aliniad lluosog dilyniant cynyddol trwy bwysoli dilyniant, cosbau bwlch safle-benodol, a dewis matrics pwysau. Asidau Niwcleig Res. 1994, 22, 4673–4680. [CrossRef]

68. Rozas, J. ; Ferrer-Mata, A.; Sánchez-DelBarrio, JC; Guirao-Rico, A.S.; Librado, P.; Ramos-Onsins, SE; Sánchez-Gracia, A. DnaSP 6: Dadansoddiad Polymorffedd Dilyniant DNA o Setiau Data Mawr. Mol. Biol. Evol.2017, 34, 3299–3302. [CrossRef] [PubMed]

69. Borchsenius, F. FastGap, Fersiwn 1.2; Adran y Biowyddorau, Prifysgol Aarhus: Aarhus, Denmarc, 2009; Ar gael ar-lein: http://www.aubot.dk/FastGap_home.htm (cyrchwyd ar 1 Gorffennaf 2019).

70. Clement, M. ; Posada, DCKA; Crandall, KA TCS: Rhaglen gyfrifiadurol i amcangyfrif achau genynnau.Mol. Ecol. 2000, 9, 1657–1659. [CrossRef] [PubMed]

71. Leigh, JW; Bryant, D. Popart: Meddalwedd nodwedd lawn ar gyfer adeiladu rhwydwaith haploteip. Dulliau Ecol. Evol.2015, 6, 1110–1116. [CrossRef]

72. Fox, J. Dechrau arni gyda'r comander R: Rhyngwyneb defnyddiwr graffigol ystadegau sylfaenol i RJ Stat. Meddalw.2005, 14, 1–42. [CrossRef]

73. Oksanen, J. ; Blanchet, FG; Kindt, R. ; Legendre, P.; O'Hara, RB; Simpson, GL; Solymos, P.; Stevens, M.; Wagner, H. Fegan: Pecyn Ecoleg Gymunedol. R Pecyn Fersiwn 1.17-4. 2010. Ar gael ar-lein:http://CRAN.R-project.org/package=vegan (cyrchwyd ar 19 Medi 2010).74. Malinowska, H. Y detholiadau o eirin Mair (Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng.) o boblogaethau naturiol yng Ngwlad Pwyl. Acta Soc. Bot. Pol. 1995, 64, 91–96. [CrossRef]