Oligoglycosidau ffenylethanoid Ac Oligosugars wedi'u Asyleiddio Gyda Gweithgaredd Vasorelaxant O Cistanche Tubulosa

am ragor o wybodaeth:ali.ma@wecistanche.com

Mae Masayuki Yoshikawa et al

Haniaethol

Y dyfyniad methanolig o'r coesau sych oCistanche tubulosa(Schrenk) Canfuwyd bod R. Wight yn dangos effaith ataliol ar gyfangiadau a achosir gan noradrenalin mewn stribedi aortig llygod mawr ynysig. O'r dyfyniad, cafodd cyfansoddion aminoglycosidau ffenylethanoid newydd, kankanosides F a G, a siwgr oligo acylated, kankanose, eu hynysu ynghyd â 14 o gyfansoddion hysbys. Pennwyd strwythurau'r cyfansoddion newydd hyn ar sail eu tystiolaeth gemegol a ffisigocemegol. Yn ogystal, dangosodd y prif etholwyr, kankanoside F, kankanose, echinacoside, acteoside, a cistanoside F, weithgaredd vasorelaxant, ac eglurwyd sawl gofyniad strwythurol ar gyfer y gweithgaredd. 2006 Elsevier Ltd. Cedwir pob hawl.

Cliciwch i Cistanche effaith cynhyrchion

Rhagymadrodd

Planhigyn parasitig Orobanchaceae,Cistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight, yn cael ei ddosbarthu yn helaeth yn Ngogledd Affrica, Arabia, a gwledydd Asia, ac y mae bon- enau Mr.Cistanche tubulosa, yn ogystal â C. salsa a C. deserticola, wedi cael eu defnyddio'n draddodiadol fel asiant hyrwyddo cylchrediad gwaed a thrin analluedd, anffrwythlondeb, lumbago, gwendid y corff, a tonic.2,3 Yn ystod ein hastudiaethau nodweddu ar gyfansoddion bioactif o naturiol Tsieineaidd meddyginiaethau, 1,4-14 rydym wedi adrodd ar ynysu ac egluro strwythur pum iridoid, kankanosides AD a kankanol, a monoterpeneglycoside, kkanoside E, ynghyd ag 16 o gyfansoddion hysbys o goesauCistanche tubulosa1 Fel parhad o'r astudiaeth ar y feddyginiaeth lysieuol hon, canfuwyd bod dyfyniad theethanolig yn dangos effaith ataliol ar gyfangiadau a achosir gan noradrenalin mewn stribedi aortig thorasig llygod mawr ynysig. O'r methanolicextract hwn, fe wnaethom hefyd ynysu glycosidau oligo ffenylethanoid, kankanosides F (1) a G (2), a siwgr oligo anacylated, kankanose (3), a 14 cyfansoddyn hysbys, echinacoside (4), acteoside (5), isoacteoside (6). ),20-asetylacteoside (7), tubulosides A (8) a B (9), cistanoside F (10), salidroside (11), (2R,3R)-biwtan-2,{{18 }}diol 2-ObD-glucopyranoside,Meso-butane-2,3-diol2-ObD-glucopyranoside, ethyl bD-glucopyranoside,3-methyl butanol bD-glucopyranoside, ( plws )-pinoresinol40-ObD -glucopyranoside, a ( plws )-syringaresinol 40-ObD-glucopyranoside. Mae'r papur hwn yn ymdrin ag egluro strwythur cyfansoddion newydd (1-3) yn ogystal ag effeithiau fasorelacsydd y prif gyfansoddion (1, 3-6,10, ac 11) ar gyfangiadau a achosir gan stribedi aortig llygod mawr ynysig noradrenalinein yn seiliedig ar y cais traddodiadol ar gyfer cylchrediad y gwaed (Ffig. 1).

Canlyniadau a thrafodaeth

2.1. Effaith vasorelaxant o echdyniad methanolic o'r coesynnau oCistanche tubulosaar y crebachiad a achosir gannoradrenalin mewn aorta thorasig llygod mawr ynysig

Fel y dangosir yn Nhabl 1, mae'r dyfyniad methanolig o'rCistanche tubulosa(a brynwyd yn Urumqi, XinjiangProvince, Tsieina) yn dangos gweithgaredd fasorelacant ar gyfangiadau a achosir gan noradrenalin mewn stribedi aortig ynysig, yn dibynnu ar amser a chrynodiad(30–3{{10}} 0 lg/mL). Cafodd y detholiad methanolig ei buro ymhellach gan dograffeg croma colofn arferol a cham cefn ac yn olaf HPLC i roi 1 (0.016 y cant ), 2(0.{{31}). ! }.68 y cant ),3 6(0.{77}}96 y cant ),3 7 ( 0.017 y cant ),3 8 (0.052 y cant ),3 9 (0.0036 y cant ),3 10(0.025 y cant ),15 11 (0.044 y cant ),16 (2R,3R)-bwtan-2,{44 }}diol2-ObD-glucopyranoside (0.0087 y cant ),17 meso-butane-2,{54}}diol 2-ObD-glucopyranoside (0.0065 y cant ),17 ethylb-D- glucopyranoside (0.055 y cant),17 3-methylbutanol bD-glucopyranoside (0.0030 y cant),17 ( plws )-pinoresinol 40-ObD-glucopyranoside (0.016 y cant),18 a ( plws ) - syringaresinol{{81} }ObD-glucopyranoside (0.022 y cant).15

2.2. Adeileddau cancanosidau F (1) a G (2)

Cafwyd Kankanoside F (1) fel powdr gwyn gyda chylchdro optegol negyddol (½a -28D -44.8- yn MeOH). Dangosodd sbectrwm IR 1 fandiau amsugno yn 156{{69} }, 1508, a 1458 cm-1 y gellir ei briodoli i fandiau aromatig ac amsugno cryf ar 3432, 1075, a 1044 cm-1, sy'n awgrymu strwythur aminoglycosidau. Yn y positif- a negyddol-ion FAB-MS o 1, arsylwyd copaon ïon lled-foleciwlaidd yn m/z 647 (M plws Na) plws a 623 (MH), a dadansoddiad cydraniad uchelFAB-MS datgelodd y fformiwla moleciwlaidd of1 i fod yn C26H40O17. Roedd sbectra 1H a 13C NMR (CD3OD, Tabl 2) o 1, a neilltuwyd gan arbrofion amrywiol NMR,19 yn dangos signalau y gellir eu priodoli i ddaumethylen [d 2.78 (2H, m, H{2-7), 3.70, 4.{{ 39}} (1H yr un, y ddau m, H{2-8)] a phrotonau aromatig math ABC ortho- a meta-gyplu [d 6.56 (1H, dd, J=1.9,7.9 Hz, H-6), 6.67 (1H, d, J=7.9 Hz, H-5), 6.69(1H, d, J=1.9 Hz, H{ {64}})] ynghyd â thri moieties glwcopyranose [d 4.30 (1H, d, J=8.0 Hz, H-10), 4.37(1H, d, J=8. 0 Hz, H-1000), 5.16 (1H, br s, H-100)]. Nodweddwyd adeiledd theaminoglycoside yn 1 gan arbrawf cysylltedd bond lluosog heteroniwclear (HMBC), a ddangosodd gydberthynas hir-amrediad rhwng y parau proton a charbon canlynol (H-10 a C-8; H{-100 a C-30; H-1000 a C-60) fel y dangosir yn Ffigur 2. Dadacysoli ensymatig o echinacoside (4), yr adroddwyd ei stereostrwythur absoliwt yn flaenorol,3 gydatannase13,14 rhoddodd 1. Ar sail y dystiolaeth uchod, penderfynwyd mai strwythur kankanoside F oedd 2-(3,4-) dihydroxy ffenyl)ethyl OaL-rhamnopyranosyl(1-3)[bD-glucopyranosyl(1-6)]-b- D-glucopyranoside (1).

Cafwyd Kankanoside G (2) hefyd fel powdr gwyn gyda chylchdro optegol negyddol (½a-26D-35.0-yn MeOH). Dangosodd sbectrwm IR 2 fandiau amsugno yn3432, 1709, 1638, 1518, 1447, a 1040 cm-1, ascribableto hydroxyl, ester carbonyl cyfun, a swyddogaethau ether a chylch aromatig. Penderfynwyd ar y fformiwla foleciwlaidd, C29H36O14, o 2 o'r FAB-MS positif- andnegative-ion [m/z 631 (M plws Na) plws a 607(MH)-] a chan FAB-MS cydraniad uchel. Deacylation ensymatically o 2 gyda tannas ildio cistanoside G(12), y mae ei stereostrwythur absoliwt adroddwyd yn flaenorol.16 Ar hydrolysis alcalïaidd o 2 gyda 10 y cant dyfrllyd potasiwm hydrocsid (KOH)—50 y cant dyfrllyd 1,4-deuocsan (1:1, v/v), nodwyd asid caffeic gan ddadansoddiad HPLC. Roedd sbectra 1H a 13C NMR (CD3OD, Tabl 2)19 o 2 yn dangos presenoldeb y swyddogaethau canlynol: 4-rhan alcohol hydroxyphenylethyl {twomethylenes [d 2.82 (2H, m, H{{2-7), 3.70, 3.96 ( 1H yr un,y ddau m, H2-8)] ac ortho-cyplu A2B2-protonau aromatig teip [d 6.65, 7.03 (2H yr un, y ddau d, J=8.6 Hz,H{ {62}},5 a H-2,6)]} a dau moieties glwcopyranose [d4.33 (1H, d, J=7.9 Hz, H-10), 5.19 (1H, br s, H-100)]ynghyd â moiety caffeoyl {traws-olefin [d 6.29,7.56 (1H yr un, y ddau d, J=15.9 Hz, H{{84 }} a H-7)] a pyrocatechol-math dihydroxybenzene [d 6.78 (1H, d,J=8.3 Hz, H{-5), 6.89 (1H, dd, J {{ 96}}.9, 8.3 Hz, H-6),7.04 (1H, d, J=1.9 Hz, H-2)]}. Yn arbrawf HMBC ar 2, gwelwyd cydberthynas amrediad hir rhwng y 60-proton [d 4.36 (1H, dd, J=6.1, 11.6 Hz),4.50 (dd, J {{ 119}}.8, 11.6 Hz)] a'r carbonylcarbon cafffeoyl (dC 169.1). O ganlyniad, penderfynwyd mai strwythur kankanoside G oedd 4-hydroxyphenyl-OaL-rhamnopyranosyl(1 ! 3)-(6-O-caffeoyl)-bD-glucopyranoside (2).

2.3. Strwythur cancanos (3)

Cafwyd Kankanose (3), ½a- 27D-35.3- (MeOH), hefyd fel powdr gwyn. Roedd y sbectrwm IR o 3 band amsugno yn dangos ar 343{{30}}, 1702, 1639, 1611, 1458, ac 1071 cm-1, y gellir ei briodoli i hydroxyl, ester carbonyl cyfun, a swyddogaethau ether a chylch aromatig. Dangosodd FAB-MS ïon positif a negyddol 3 brig ïon lled-folecwlaidd ar m/z 673 (M plws Na) ynghyd ag andm/z 649 (MH), yn y drefn honno. Datgelodd y FAB-MS cydraniad uchel o 3 y fformiwla moleciwlaidd i beC27H38O18. Hydrolysis alcalïaidd o 3 gyda 10 y cant KOH–50 y cant dyfrllyd 1,4-asid caffein wedi'i ryddhau deuocsan, a nodwyd gan ddadansoddiad HPLC, ynghyd â siwgr oligo. Rhyddhaodd hydrolysis asid y siwgr oligo hwn gyda 1.0 asid Mhydrochloric (HCl) L-rhamnose a D-glwcos, a nodwyd gan ddadansoddiad HPLC gan ddefnyddio synhwyrydd cylchdro optegol.1,13,14 Sbectra 1H a 13CNMR (CD3OD, Tabl 3)19 o 3 yn dangos signalau y gellir eu haseinio i'r moiety trisacarid {d [5.11 (d,J=3.4 Hz), 4.57 (d, J=7.9 Hz), cymysgedd ffurf-a a b o H{ {52}} (ca. 1:1)], 4.25, 4.27 (y ddau d, J=7.7 Hz, H-1000),5.13, 5.18 (y ddau br s, H{{66 }})} ynghyd â chaffeoylgroup [d 6.28, 6.29 (y ddau d, J=15.9 Hz, H-9), 6.78 (d,J=8.0 Hz, H -5), 6.96 (dd, J=2.0, 8.0 Hz, H-6), 7.06(d, J=2.0 Hz, H{{90} }), 7.60 (d, J=15.9 Hz, H{-7)]. Yn arbrofion HMBC ar 3, gwelwyd cydberthnasau amrediad hir rhwng y 40-proton [d 5.04, 4.99 (dd,J=9.5, 9.8 Hz)] a'r caffeoyl carbonyl carbon (dC168.53 , 168.65). Ar sail y dystiolaeth uchod, eglurwyd strwythur cancanos i bea-L-rhamnopyranosyl(1-3)[bD-glucopyranosyl(1-6)]-O-(4- O-caffeoyl)-D-glwcopyranose (3).

2.4. Effaith fasorelacant y prif gyfansoddion (1, 3-6,10, 11) oCistanche tubulosaar y crebachiad a achosir gannoradrenalin a K plus uchel mewn aorta thorasig llygod mawr ynysig

Fel y dangosir yn Nhabl 4 a Ffigur 3, effeithiau ataliol y prif gyfansoddion, kankanoside F (1) a kankanose (3), echinacoside (4), acteoside (5), isoacteoside (6), cistanoside F (10), a salidroside ( 11) ar gyfangiadau a achosir gan noradrenalin mewn aorta thorasig llygod mawr ynysig. O ganlyniad, roedd cyfansoddion 3–5, a 10 â grŵp caffeoyl yn y 40-sefyllfa wedi atal y cyfangiadau yn sylweddol, yn dibynnu ar amser a/neu ganolbwyntio (10–100 lM), tra bod gan 6 y 60- Dangosodd moiety O-caffeoyl weithgaredd gwan na 4 a 5. Ar y llaw arall, roedd cyfansawdd 1 gyda grŵp catechol yn dangos ataliad sylweddol, ond ni ddangosodd 11 gyda grŵp ffenol effaith o'r fath. Arweiniodd y canlyniadau hyn i ni dybio bod y 40-miety O-caffeoyl a'r 10-miety O-dihydroxyphenethyl yn hanfodol ar gyfer gweithgaredd fasorelaxant cryf. Ar y llaw arall, ni ddangosodd cyfansoddion 1, 3-6, a 10 (100 lM) unrhyw effeithiau ar gyfangiadau a achosir gan grynodiad uchel o potasiwmiad (K uchel a mwy) yn wahanol i nifedipine, atalydd sianel calsiwm sy'n dibynnu ar foltedd, yn y yr un meinweoedd (data heb ei ddangos). Roedd y canfyddiad hwn yn awgrymu bod y cyfansoddion gweithredol hyn yn atal y cyfangiadau trwy sianel galsiwm a weithredir gan dderbynnydd, ond nid trwy sianel galsiwm sy'n dibynnu ar foltedd. Yn ddiweddar, adroddodd Iizuka et al. fod ffenylethanoid, forsythiaside, o ffrwyth Forsythia suspensa yn atal y cyfangiadau a achosir gan noradrenalin mewn paratoadau cylch aortig llygod mawr ac awgrymodd fod yr ataliad gan forsythiaside o gyfangiad a achosir gan noradrenalin yn rhannol oherwydd gostyngiad mewn noradrenalin mewnlifiad calsiwm.20 Fodd bynnag, yn yr astudiaeth bresennol, sylwyd ar effeithiau ymlaciol y cyfansoddion gweithredol ca. 30 munud ar ôl ychwanegu noradrenalin mewn ffordd wahanol i prazosin, antagonist derbynnydd adrenalin. Mae angen edrych ymhellach ar ddulliau gweithredu'r etholwyr gweithredol.

3. Arbrofol

3.1. Gweithdrefn arbrofol gyffredinol

Defnyddiwyd yr offerynnau canlynol i gael data ffisegol: cylchdroadau penodol, polarimedr digidol Horiba SEPA-300 (l=5 cm); sbectra UV, sbectromedr UV Shimadzu; sbectra IR, sbectromedr Shimadzu FTIR-8100; sbectra 1H NMR, sbectromedr JEOL JNM-LA500(500 MHz); sbectra 13C NMR, sbectromedr JEOLJNM-LA500 (125 MHz) gyda tetramethylsilane fel safon fewnol; FABMS ac HR-FAB MS, sbectromedr màs JEOL JMS-SX 102A; Synhwyrydd HPLC, Shimadzu RID-6Mynegai plygiannol a synwyryddion UV-vis SPD 10A. Defnyddiwyd colofn HPLC, YMC-PackODS-A (250 · 4.6 mm id), a (250 · 20 mm id) at ddibenion dadansoddol a pharatoadol, yn y drefn honno

Defnyddiwyd yr amodau arbrofol canlynol ar gyfer cromatograffaeth: cromatograffaeth colofn gel silica cyfnod arferol, gel silica BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd, 150–350 rhwyll); cromatograffaeth colofn gel silica cyfnod gwrthdroi, Chromatorex ODS DM1020T (FujiSilesia Chemical, Ltd, 100–200 rhwyll); TLC, platiau TLC wedi'u gorchuddio ymlaen llaw gyda gel silica 60F254 (Merck, 0.25 mm) (cyfnod arferol) a gel silica RP-18 F254S (Merck, 0.25 mm) (cyfnod gwrthdroi); HPTLC cyfnod gwrthdroi, platiau TLC wedi'u gorchuddio ymlaen llaw gyda gel silica RP-18 WF254S(Merck, 0.25 mm); Cyflawnwyd y canfod trwy chwistrellu ag 1 y cant Ce(SO4) 2-10 y cant H2SO4 dyfrllyd, ac yna gwresogi.

Cistanche tubulosa

3.2. Deunydd planhigion

Coesynnau sych oCistanche tubulosaeu prynu yn Urumqi, Xinjiang Talaith, Tsieina, ym mis Ionawr 2005 drwy EishinTrading Co., Ltd, Osaka, Japan, fel y disgrifiwyd yn flaenorol.1

3.3. Echdynnu ac ynysu

Ffracsiynau {{0}} (590 mg), 2-1 (466 mg), 2-3 (3931 mg), 3-3(3610 mg), 3-4 (190 mg), 4-5 [590echinacoside (4, 2595 mg,0.44 y cant )], 4-6 (1635 mg), 5-2 (1114 mg), {{ Cafwyd 20}} (306 mg), 5-4(347 mg), 5-5 (=4, 1620 mg, 2.03 y cant), a 5-6 (1453 mg) o echdyniad methanolig y coesauofCistanche tubulosafel yr adroddwyd yn flaenorol.1 Cafodd ffracsiwn 1–2(590 mg) ei buro gan HPLC [MeOH/H2O (35:65,v/v)] i roi 3-methylbutanol bD-glucopyranoside(18 mg) , 0.0030 y cant ), ( plws )-pinoresinol 40-ObD-glucopyr anoside (96 mg, 0. 016 y cant ), a ( plws )-syringaresinol 40-O bD-glucopyranoside (129 mg, 0.022 y cant ) gyda'i gilydd cistanochlorin (21 mg, {{ 76}}.{{80}}035 y cant ). Gwahanwyd ffracsiwn 2-1 (466 mg) gan HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)] togive (2R,3R)-butane-2,{{40 }}diol 2-ObD-glucopyranoside(12 mg, {{1{{1{113}}8}}4}}.0087 y cant ), (2R, 3S)-biwtan-2,3-diol 2-ObD glucopyranoside (9 mg, 0.0065 y cant ), ac ethyl bD -gluco pyranoside (76 mg, 0.055 y cant ) ynghyd â wridin(0.0069 y cant ). Ffracsiwn 2-2 (535 mg) ei buro gan HPLC[MeOH/H2O (5:95, v/v)] i fforddio salidroside (11, 41 mg,0.022 y cant) ynghyd â antirrhide (15 mg, 0.0079 y cant) a6-deoxycatalpol (214 mg, 0.11 y cant ). Gwahanwyd ffracsiwn 2-3(535 mg) gan HPLC [MeOH/H2O (5:95,v/v)] i ddodrefnu 11 (17 mg, 0.022 y cant) ynghyd ag ochr gluro (110 mg, 0.14 y cant) a bartsioside (164 mg, 0.21 y cant). Roedd ffracsiwn 3-3 (510 mg) yn destun HPLC [MeOH / H2O (40:60, v / v)] i roi acteoside (5, 257 mg, 0.31 y cant), isoacteoside (6, 79 mg, 0.096 y cant ), a 20-acetylacteoside(7, 14 mg, 0.017 y cant ). Cafodd ffracsiwn 3-4 (190 mg) ei buro ymhellach gan HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)] i roikankanoside G (2, 17 mg, 0.0029 y cant) a tubuloside B (9, 21 mg, 0.0036 y cant). Ffracsiwn 4-6 (75 mg) ei buro gan HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] i fforddio 5 (18 mg,0.065 y cant). Rhoddwyd ffracsiwn 5-2 (1114 mg) i HPLC[MeOH/H2O (10:90, v/v)] i roi 2 (24 mg, 0.030 y cant). Ffracsiwn 5-3 (306 mg) oedd puro gan HPLC [MeOH/H2O (15:85, v/v)] i roi kankanoside F (1, 13 mg,0.016 y cant ). Roedd ffracsiwn 5-4 (347 mg) yn destun HPLC[MeOH/H2O (10:90, v/v)] i roi cancanos (3, 30 mg,0.038 y cant) a cistanoside F (10, 20 mg, 0.025 y cant). Ffracsiwn5-6 (530 mg) ei buro gan HPLC [MeOH/H2O (35:65,v/v)] i fforddio 4 (185 mg, 0.62 y cant), 5 (91 mg, 0.30 y cant), atubuloside A (8, 16 mg, 0.052 y cant ).

3.3.1. Kankanoside F (1).

Powdr gwyn, ½a{{0}}D -44.8- (c0.50, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MSm/z: Calcd ar gyfer C26H40O17Na (M plws Na) plws , 647.2163.Dod o hyd: 647.2160. UV [MeOH, nm (log e)]: 224 (3.83), 283 (3.37). IR (KBr): 3432, 2940, 1560, 1508, 1458,1075, 1044 cm-1. 1H NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 2. 13C data NMR (125 MHz, CD3OD) dC: a roddir yn Nhabl 2. Positif-ion FAB-MS m/z: 647(M plws Na) plws . ïon negyddol FAB-MS m/z: 623 (MH), ,477 (M-C6H11O4)-, 623 (M-C6H11O5)-, 623(M-C12H21O9)-.

3.3.2. Kankanoside G (2).

Powdr gwyn, ½a{{0}}D -35.0-(c 0.80, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MSm/z: Calcd ar gyfer C29H36O14Na (M plws Na) plws , 631.2003.Dod o hyd: 631.1996. UV [MeOH, nm (log e)]: 329 (4.10).IR (KBr): 3432, 2924, 1709, 1638, 1518, 1447, 1264,1040 cm-1. 1H NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 2. 13C data NMR (125 MHz, CD3OD) dC: givenin Tabl 2. Positif-ion FAB-MS m/z: 631 (M plws Na) plws .Negative-ion FAB-MS m/z: 607 (MH)-, 461 (M-C6H11O4).

3.3.3. Kancanose (3).

Powdr gwyn, ½a{{0}}D -35.3- (c0.50, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MSm/z: Calcd ar gyfer C27H38O18Na (M plws Na) plws , 673.1956.Dod o hyd: 673.1959. UV [MeOH, nm (log e)]: 219 (4.10), 247 (3.96), 333 (4.21). IR (KBr): 3430, 2962, 1702, 1639, 1611, 1458, 1264, 1071 cm-1. 1H NMR(500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 3. 13C data NMR(125 MHz, CD3OD) dC: a roddir yn Nhabl 3. Positif-ion FAB-MS m/z: 673 (M plws Na) plws . ïon negyddol FABM-Sm/z: 649 (MH), 487 (M-C9H8O3)-, 325(M-C15H18O8)-.

Cistanche tubulosa

3.4. Deacylation enzymatic o 2 a 4 gyda tannase

Cafodd hydoddiant o 2 (4.8 mg, 0.008 mmol) yn H2O (1.0 mL) ei drin â tannase (3.7 mg, o Aspergillus oryzae , Wako Pure Chemical Ind., Ltd, Osaka, Japan) a chafodd yr ateb ei droi ar 37 gradd am 24 h. Ychwanegwyd AfterEtOH at y cymysgedd adwaith, tynnwyd y toddydd dan bwysau llai a chafodd y gweddill ei buro gan HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] i ddodrefnu cistanoside G (12, 2.8 mg, 80 y cant).16 Trwy triniaeth debyg, cafodd hydoddiant o 4 (9.2 mg, 0.012 mmol) inH2O (2.0 mL) ei drin â tannase (7.5 mg) a chafodd yr hydoddiant ei droi ar 37 gradd am 24 h. Rhoddodd gwaith i fyny'r cymysgedd adwaith fel y disgrifir uchod weddillion, a gafodd ei buro gan HPLC [MeOH / H2O (15:85, v / v)] i ddodrefnu 1 (4.7 mg, 62 y cant).

3.5. Hydrolysis alcalïaidd ac asid 2 a 3

Cafodd hydoddiant o 2 a 3 (pob un 3.5 mg) mewn 50 y cant dyfrllyd 1,4-dioxane (1.0 mL) ei drin â 10 y cant o KOH dyfrllyd (1.{{30}} mL) a'r cyfan wedi'i droi ar 37 C am 1 awr, yn y drefn honno. Roedd tynnu'r toddydd o dan bwysau llai yn rhoi cymysgedd adwaith, a oedd yn destun dadansoddiad HPLC [colofn: YMC-Pack ODS-A,250 · 4.6 mm id; cyfnod symudol: MeOH/H2O (30:70, v/v); canfod: UV (254 nm); cyfradd llif: 1.0 mL/munud] i adnabod asid caffeic (tR: 13.1 munud). Yna cafodd y cymysgedd adwaith o 3 ei hydoddi mewn 1 M HCl (2.0 ml) a'i gynhesu o dan adlif am 3 h. Ar ôl oeri, echdynnwyd cymysgedd yr adwaith gydag EtOAc. Bu'r haen ddŵr yn destun dadansoddiad HPLC o dan yr amodau a ganlyn, yn y drefn honno: colofn HPLC, KaseisorbLC NH2-60-5, 250 · 4.6 mm id (Tokyo Kasei Co., Ltd, Tokyo, Japan); canfod, cylchdroi optegol [ShodexOR-2 (Showa Denko Co, Ltd, Tokyo, Japan); cyfnod symudol, CH3CN/H2O (85:15, v/v); cyfradd llif 0.8 mL/munud]. Cyflawnwyd adnabod L-rhamnose a D-glwcos sy'n bresennol yn yr haen ddyfrllyd trwy gymharu eu hamser cadw a'u cylchdroi optegol â'r samplau dilys hynny, tR: 9.9 min (L-rhamnose, cylchdro negatif) a 17.9 min (D-glwcos, cylchdro optegol positif).

3.6. Gweithgaredd vasorelaxant

3.6.1. Paratoi meinwe.

Sprague Gwryw–Dawley llygod mawr yn pwyso 250–350 g yn cael eu haberthu drwy dorri rhydwelïau bothcarotid o dan anesthesia, ac ynysu’r aortawas thorasig a’i dorri’n stribedi helical (2–3 mm ·15–2{{25 }} mm). Roedd hydoddiant halen ffisiolegol yn cynnwys NaCl(118.0 mM), KCl (4.7 mM), KH2PO4 (1.2 mM), MgSO4(1.2 mM), CaCl2 (2.5 mM), NaHCO3 (25.0 mM), a D-glwcos (10.0 mM). Cafodd yr ateb ei awyru gyda chymysgedd nwy o 95 y cant O2-5 y cant CO2 a'i gadw ar 37 gradd . Er mwyn ymchwilio i'r ymateb mecanyddol, ataliwyd pob paratoad mewn bath organ (6 ml) a bu'n destun llwyth cychwynnol o tua 1 g. Caniatawyd cyfnod ecwilibration awr cyn cychwyn yr arbrofion. Mesurwyd cyfangiadau yn isometrig trwy drawsddygiadur dadleoli grym (AD Instruments) a'u cofnodi ar bolygraff.

3.6.2. Effaith ataliol ar y crebachiad a achosir gan dl-noradrenalin neu K uchel a mwy .

Ar ôl ecwilibreiddio, ychwanegwyd dl-nor-adrenalin (crynodiad terfynol: 1 lM) neu 3 M KCl (0.1 mL, crynodiad terfynol K plws : 54 mM) i'r bath. Cafodd y meinweoedd eu golchi dair gwaith a'u hail-gydbwyso ar ôl i'r crebachiad gyrraedd y lefel uchaf. Ysgogwyd y crebachiad parhaus eto trwy ychwanegu dl-noradrenalin neu KCl, ac yna cymhwyswyd y cyfansoddyn prawf ar 10-100 lM (noradrenalin) neu 100 lM (K uchel a mwy). Cymerwyd bod yr ymateb contractile cyn cymhwyso'r sampl prawf yn 100 y cant. Defnyddiwyd hydroclorid Prazosin a nifedipine fel cyfansoddion cyfeirio.

3.6.3. Dadansoddiad ystadegol.

Mynegir gwerthoedd fel modd ± SEM. Ar gyfer dadansoddiad ystadegol, defnyddiwyd dadansoddiad un ffordd o amrywiant a ddilynwyd gan brawf Dunnett ar gyfer dadansoddiad cymhariaeth luosog. Ystyriwyd gwerthoedd tebygolrwydd (p) llai na0.05 yn arwyddocaol.

Diolchiadau

Cefnogwyd yr ymchwil hwn gan yr 21ain Rhaglen COE, Prosiect Frontier Academaidd, a Chymorth Grant ar gyfer Ymchwil Gwyddonol gan Weinyddiaeth Addysg, Diwylliant, Chwaraeon, Gwyddoniaeth a Thechnoleg Japan.

Cyfeiriadau a nodiadau

1. Y papur hwn yw rhif 19 yn y gyfres 'Cyfansoddion Bioactif o Feddyginiaethau Naturiol Tsieineaidd.' Am papur rhif 18, gweler Xie, H.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Nakamura, S.; Muraoka, O.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Tarw. 2006, 54, 669–675.
2. Namba, T. Yn The Encyclopedia of Wakan-Yaku (Moddion Sino-Siapaneaidd Traddodiadol) gyda Lluniau Lliw; Hokuryusha: Osaka, 1994; Cyf II.
3. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A. ; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Chem. Pharm. Tarw. 1987, 35, 3309–3314.
4. Matsuda, H. ; Morikawa, T.; Tao, J. ; Ueda, K. ; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Tarw. 2002, 50, 208–215.

5. Morikawa, T.; Matsuda, H.; Toguchida, I. ; Ueda, K. ; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2002, 65, 1468–1474.

6. Tao, J. ; Morikawa, T.; Toguchida, I. ; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Bioorg. Med. Cemeg. 2002, 10, 4005–4012.
7. Morikawa, T.; Tao, J. ; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2003, 66, 638–645.
8. Tao, J. ; Morikawa, T.; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Tarw. 2003, 51, 654–662.
9. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Xie, H.; Yoshikawa, M. Planta Med. 2004, 70, 847–855.
10. Haul, B. ; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Tewtrakul, H.; Wu, LJ; Harima, A.S.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2004, 67, 1464–1469.

11. Morikawa, T. ; Haul, B. ; Matsuda, H.; Wu, LJ; Harima, A.S.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Tarw. 2004, 52, 1194–1199.

12. Xie, H. ; Wang, T.; Matsuda, H.; Morikawa, T.; Yoshikawa, M.; Tani, T. Chem. Pharm. Tarw. 2005, 53, 1416–1422.
13. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2006, 69, 881–886.
14. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Wang, T.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Tarw. 2006, 54, 506–513.
15. Kobayashi, H.; Karasawa, H.; Miyase, T.; Fukushima, S. Chem. Pharm. Tarw. 1985, 33, 1452–1457.

16. Karasawa, H. ; Kobayashi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Fukushima, S. Yakugaku Zasshi 1986, 106, 721–724.

17. Kitajima, J. ; Ishikawa, T.; Tanaka, Y. Chem. Pharm. Tarw. 1998, 46, 1643–1646.
18. Chiba, M. ; Hisada, A.S.; Nishibe, S.; Thieme, H. Ffytocemeg 1980, 19, 335–336.
19. Neilltuwyd y sbectra NMR 1H a 13C o 1-3 gyda chymorth gwelliant afluniad trwy drosglwyddo polareiddio (DEPT), sbectrosgopeg cydberthynas hidlo cwantwm dwbl (DQF COSY), a chydlyniad cwantwm lluosog heteronuclear (HMQC), cysylltedd bond lluosog heteroniwclear (HMBC) arbrofion.
20. Iizuka, T. ; Nagai, M. Yakugaku Zasshi 2005, 125, 219–224.