Cludo Echinacoside Ac Acteoside-sensitif i Phloridzin A Llwybr Amsugno'r Berfedd wedi'i Newid Ar ôl Defnyddio Detholiad Cistanche Tubulosa

Am ragor o wybodaeth:ali.ma@wecistanche.com

Mae Tadatoshi Tanino et al

Amcanion Haniaethol

Amcan yr astudiaeth hon oedd mynd i'r afael ag effeithiau buddiolDyfyniad Cistanche tubulosaar wella athreiddedd berfeddol isel ofechinacoside (ECH) ac acteoside (ACT).

Dulliau

Amsugno ECH ac ACT ynDyfyniad Cistanche tubulosawedi'i nodweddu gan ddefnyddio monohaenau celloedd Caco-2 perfedd dynol gyda chyfansoddion cyfan. Cadarnhawyd amsugno ECH ac ACT sy'n ddibynnol ar glucosetransporter gan dechneg darlifiad yn y fan a'r lle.

Canfyddiadau allweddol

Nid oedd yr athreiddedd ymddangosiadol (Papp) yn sylweddol wahanol rhwng ECH cyfan ac ACT gyfan. Ym mhresenoldeb phloridzin, gostyngwyd y Papp of theECH ac ACT ar ddogn uchel i 20 y cant o'r diffyg triniaeth priodol ond ni chafodd ei newid gan ffloretin a verapamil.Dyfyniad Cistanche tubulosaar ddosau isel ac uchel gwella Papp ECH ac ACT (y ddau gan driphlyg), gan arwain at eu cyfranogiad mawr mewn sodiwm-ddibynnol ar amsugno glwcos cludwr-annibynnol. Ar grynodiad isel, cafodd lefelau ECH ac ACT cydredol mewn gwaed porthol eu hatal yn sylweddol gan ffloridzin.

Casgliad

Y dietegol a meddyginiaetholDyfyniad Cistanche tubulosagall gwella amsugno coluddol ECH ac ACT helpu i reoli iechyd pobl yn well, er y dylid lleihau cyfranogiad cludiant sy'n sensitif i ffloridzin.

Geiriau allweddolacteosid; Unhaenau celloedd Caco-2;Dyfyniad Cistanchetubulosa; echinacosidecludwr glwcos sy'n sensitif i ffloridzin

Dyfyniad Cistanche tubulosa

Cliciwch i Cistanche tubulosa powdr

Rhagymadrodd

Yn draddodiadol, defnyddiwyd gwreiddiau Cistanche tubulosa ar gyfer meddygaeth a bwyd.Dyfyniad Cistanche tubulosaMae'n hysbys bod ganddo effeithiau ffarmacolegol mewn amrywiol glefydau'r ymennydd, swyddogaethau gwrth-heneiddio, metaboledd braster, a thwf gwallt.Cistanche tubulosa[5,6] Glysosidau ffenylethanoid, dosbarth o gyfansoddion polyphenolig, yw'r prif gynhwysion cemegol mewn rhywogaethau Cistanche,[7] er bod eu symiau'n amrywio rhwng gwahanol rywogaethau. Echinacoside (ECH; Ffigur 1) yw un o'r prif glycosidau ffenylethanoid yn HerbaCistanchis. Mae'n cael ei hydroleiddio i acteoside (ACT; a elwir hefyd yn verbascoside) gan ensymau o darddiad bacteriol yn y berfedd fawr.[8,9] Mae ECH ac ACT yn meddu ar y gweithgaredd buddiol o amddiffyniad hepato[10] a gwrth-llid[11] mewn anifeiliaid cnofilod. Yn syndod, mae ECH tra-hydawdd mewn dŵr yn gwella canlyniadau ymddygiadol a niwrocemegol mewn model llygoden o glefyd Parkinson ac yn atal actifadu caspase-3 acaspase{-8 mewn niwronau gronynnog serebelaidd.[9] Mae'n hysbys bod y rhwystr gwaed-ymennydd yn cyfyngu'n llym ar fynediad a dosbarthiad senobiotig i'r ymennydd o'r gwaed. Wu et al.[12] hefyd yn dangos bod ACT sy'n hydoddi mewn dŵr yn cael ei ddosbarthu'n gyflym ym meinwe ymennydd llygod mawr. Felly, gellir cludo ECHand ACT i'r ymennydd, y coluddion a'r afu gan y system(au) penodol.

Er bod tystiolaeth gref i awgrymu bod defnydd oDyfyniad Cistanche tubulosao fudd i iechyd dynol, mae athreiddedd ECH pur ar draws haenau cellmono-Caco ar grynodiad apigol o 8.4 ± 1.6 ug/ml yn hafal i neu'n is nag un y marciwrnitol trafnidiaeth paragellog.[13] Pan fydd ECH pur yn cael ei roi ar lafar i lygod mawr (dos, 1{{10}}0 mg/kg), mae'r amsugniad yn hynod o gyflym (Tmax, 15 munud), ac mae'r crynodiad serwm uchaf yn isel iawn (Cmax, 0.61 ± 0.32 ug/ml).[14] Dim ond 0.83 y cant yw bioargaeledd absoliwt ECH . Yn yr un modd, pan fydd celloedd Caco yn cael eu deori â ffracsiwn ffenolig wedi'i buro'n rhannol â dŵr gwastraff melin oolydd, mae'r nifer sy'n derbyn ACT pur yn gyflym gyda chroniad brig yn digwydd ar ôl 30 munud a chyfanswm effeithlonrwydd cronni o 0.1 y cant, gan ddarparu lefelau mewngellol o 130 protein cell pmol/mg.[15] Mewn llygod mawr, cyrhaeddwyd y crynodiad uchaf (0.13 ± 0.03 ug/ml) o ACT pur o fewn 30 munud ar ôl dosio trwy'r geg gyda 100 mg/kg, [12] sy'n awgrymu amsugno perfeddol cyflym. Mae bio-argaeledd llafar ACT, yn ogystal ag ECH, yn eithaf isel (0.12 ± 0.04 y cant ), gan awgrymu y posibilrwydd o effeithiau pas cyntaf yn y llwybr berfeddol a'r afu. Mewn bustl llygod mawr, mae cyfuniadau methylation a glucuronidation ECH yn fetabolion mawr,[16] er bod graddau metaboledd hepatig yn parhau i fod yn aneglur. Canfuom yn rhagarweiniol fod ECH ac ACT yn eithaf sefydlog yn yr homogenadau o fwcosa berfeddol llygod mawr a gastrigasid artiffisial (data heb ei ddangos). Najar et al.[17] dangos bod ACT yn atal gweithgaredd P-glycoprotein (P-gp)-ATPase mewn amanner tebyg i verapamil (atalydd P-gp cynrychioliadol), gan awgrymu modulator P-gp; fodd bynnag, mae'n ansicr a yw ACT ar gael fel swbstrad P-gp. Yn ddiddorol, dangosodd canfyddiadau diweddar flavonoid-D-glucosides dietegol fod protein ymwrthedd aml-gyffuriau (MRP2) yn cuddio'r cludwr glwcos sy'n dibynnu ar sodiwm (SGLT)1-yn derbyn quercetin 4′-O{{- -glwcos,[18) ,19] sy'n gyfrifol am amsugno gwael iawn. Fodd bynnag, ychydig iawn a wyddys am sensitifrwydd glwcosidau polyphenolig i gludwyr amsugnol, gan gynnwys cludwyr glwcos. Fe'n hysgogwyd gan wybodaeth am nodweddion amsugno quercetin4′-glucoside a rhwystr-athraidd gwaed-ymennydd yn gyflym i ymchwilio i'r defnydd o glycosidau ffenylethanoid sy'n sensitif i gludwr mewn C dietegol C. .tubulosa.

Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio i amsugno glwcos trwy gyfryngu gan gludwr o ECH ac ACT cyfan gan ddefnyddio monohaenau celloedd Caco-2 dynol. Ar yr un pryd, mae'r cludiant amsugno ECH ac ACT cydredol indietaryDyfyniad Cistanche tubulosawedi'i nodweddu gan system darlifiad berfeddol in-vitromodel ac yn y fan a'r lle gyda samplu gwaed porthol, sy'n gallu gwahaniaethu'n hawdd rhwng maint yr amsugno ac osgoi tueddiad hepatig-cyntaf.

Defnyddiau a Dulliau

Defnyddiau

Roedd Intact ECH ac ACT yn rhoddion hael gan EishinTrading Co., Ltd (Osaka, Japan). Prynwyd phloridzin a phloretin oddi wrth Tokyo Kasei Co., Ltd. (Tokyo, Japan). Cafwyd Verapamil ac asid p-coumaric, a ddefnyddir fel safonau mewnol ar gyfer asesiad cromatograffaeth hylif perfformiad uchel (HPLC) gan Sigma-Aldrich (St Louis, MO). , UDA). Roedd yr holl gemegau eraill a ddefnyddiwyd o radd ddadansoddol ac ar gael yn fasnachol.

Deunydd planhigion a pharatoi dyfyniad themethanolig

Mae C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) yn blanhigyn parasitig lluosflwydd sy'n tyfu ar wreiddiau rhywogaethau Salvadoraor Calotropis, ac wedi'i ddosbarthu yng ngwledydd Gogledd Affrica, Arabaidd ac Asiaidd. Roedd coesynnau sych y C. tubulosa yn cael eu powdro a'u tynnu dair gwaith gyda methanol o dan adlif am 3 h. Roedd anweddiad y toddydd wedi'i dan-leihau'n bwysau a ddarperir y dyfyniad methanolig. Roedd dyfyniad Themethanolic (gradd fasnachol, Swp Rhif 20070130; enw masnach gofrestr, Sabaku Ninnjinn Kanka) yn anrheg hael gan Eishin Trading Co., Ltd trwy Muraoka andMorikawa (Prifysgol Kinki, Japan), a gwnaed gwaith adnabod botanegol gan yr Athro Jia Xiaoguang yn Sefydliad Meddyginiaethau Tsieinëeg ac Ethnologic Traddodiadol Xinjiang.

Dadansoddiad echdynnu planhigion: cromatograffaeth

Fe wnaethom bennu cynnwys ECH ac ACT yn yDyfyniad Cistanche tubulosa(Swp Rhif 20070130) gan ddadansoddiad HPLC a ddisgrifir isod. Mae’r data a gafwyd i’w gweld yn Nhabl 1.

Diwylliant celloedd

Defnyddiwyd celloedd caco, a brynwyd o'r American Type CultureCollection (ATCC, Rockville, MD, USA), ar fannau 38–53. Cawsant eu tyfu mewn cyfrwng diwylliant a oedd yn cynnwys cyfrwng addasedig Dulbecco's Eagle's (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japan) wedi'i ategu â0.1 mM asidau amino anhanfodol, 10 y cant o serwm buchol ffetws anweithredol gwres, 100 U/ml penisilin G, a 0.1 mg/mlstreptomycin sylffad.

Astudiaethau trafnidiaeth

Cafodd celloedd caco{0}} eu platio ar ddwysedd o 6.4 × 103 o hidlwyr polycarbonad celloedd/cm2on. Defnyddiwyd monolayers ar gyfer arbrofion trafnidiaeth 21-25 diwrnod ar ôl hadu. ECH acACT cyfan a oedd yn cyfateb i'w cynnwys ynDyfyniad Cistanche tubulosa (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

Echinacoside ynDyfyniad Cistanche tubulosa

Darlifiad berfeddol yn y fan a'r lle

Cafwyd llygod mawr Wistar gwrywaidd (230-250 g) o SLCJapan (Hamamatsu, Japan). Câi anifeiliaid eu cadw mewn ystafell aerdymheru o dan gylchred golau/tywyll 12 awr am 1 wythnos cyn ei defnyddio. Cafodd llygod mawr eu bwydo â bwyd labordy safonol (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japan) â dŵr ad libitum a chawsant eu cyflymu dros nos cyn y prawf. Perfformiwyd yr astudiaeth darlifiad mewn-gylchredeg yn unol â'r weithdrefn addasedig a ddisgrifiwyd gan Mihara et al.[20] Yn gryno, anestheteiddiwyd llygod mawr gyda 25 y cant o doddiant urethane (1 mg/kg) i osgoi gostyngiadau mewn pwysedd gwaed. Gwnaed toriad canol llinell yr abdomen a datgelwyd y coluddyn bach. Clymwyd dwythell y bustl er mwyn osgoi secretion bustl i'r darlifiad. Roedd y coluddyn bach cyfan fel un segment (o'r dwodenwm i'r ilewm) yn cael ei rinsio â halwynog arferol ar 37 gradd am 10 munud nes bod y golchiad yn ymddangos yn glir. Yna cafodd tiwbiau gwydr wedi'u cysylltu â thiwbiau silicon eu tunio i ddau ben y coluddyn bach a'u cysylltu ag edau pwythau. Yna, disodlwyd y coluddyn bach yn yr abdomen, ac roedd y caniwlau wedi'u cysylltu â phwmp peristaltig. Cafodd y wythïen borthol ei channu â thiwbiau polyethylen (PE10).Dyfyniad Cistanche tubulosaar gael yn fasnachol wedi'i atal yn byffer bicarbonad Krebs-Henseleit (pH 7.4) i gynhyrchu crynodiad terfynol o 4.5 mg/ml a chafodd ei allgyrchu am 10 mun ar8000 rpm i gael gwared ar gydrannau anhydawdd. Supernatant yn absenoldeb neu bresenoldeb ffloridzin (1 mM) ei atgofio i mewn i gronfa ddŵr, a gynhaliwyd ar dymheredd o 37 ± 0.5 gradd trwy gydol yr arbrawf. Ar yr adegau a nodwyd, cludwyd gwaed trwy ganiwla'r wythïen borthol. Ar ôl centrifugio samplau gwaed, cafodd y plasma canlyniadol ei ddadbroteinio agacetonitrile yn cynnwys y safon fewnol a chafodd ei allgyrchu ar 3000 rpm. Cafodd supernatants eu anweddu, a datryswyd y gweddill gyda chyfnod symudol yn cynnwys ofacetonitrile a 0.5 y cant asid asetig. Llwythwyd yr ateb cymysg ar golofn HPLC. Defnyddiwyd llygod mawr yn unol â gweithdrefnau moesegol yn dilyn y Canllawiau ar gyfer Gofalu a Defnyddio Anifeiliaid Labordy a gyhoeddwyd gan lywodraeth Japan a Phrifysgol Kinki.

Dadansoddiad HPLC

Perfformiwyd dadansoddiad HPLC ar system sy'n cynnwys aShimadzu SPD{{{{-10}}A, synhwyrydd UV, pwmp Shimadzu LC-10A, ac integreiddiwr cromatopac Shimadzu C-R4A (Kyoto, Japan). Gwahanwyd ECH ac ACT gan ddefnyddio ODScolumn Inertsil (5 μm, 4.6 × 150 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japan). Defnyddiwyd cyfnod symudol o asetonitrile a 0.5 y cant o asid asetig ar gymhareb o 15:85 (v/v) ar gyfradd llif o 1.0 ml/mun. Perfformiwyd y canfod ar 334 nm

Dadansoddiad cinetig

Amcangyfrifwyd cyfernodau athreiddedd ymddangosiadol (Papp) o lethr y rhan linol o'r cwrs amser o gludo cyfansawdd ar draws monolayers cell Caco{0}}, fel a ganlyn: P dQ dt AC ap=( ) ( )

lle dQ/dt yw'r gyfradd athreiddedd, C0 yw crynodiad cychwynnol yr hydoddyn yn siambr y rhoddwr, ac A yw arwynebedd arwyneb y bilen (4.7 cm2).

Yn yr astudiaeth darlifiad berfeddol yn y fan a'r lle llygod mawr, cyfrifwyd yr ardal o dan y gromlin amser crynodiad plasma (AUC0-90) yn y wythïen porth o amser sero i'r olaf a fesurwyd yn unol â'r rheol trapesoidol llinol.

Acteoside i mewnDyfyniad Cistanche tubulosa

Priodweddau ffisicocemegol

Cyfrifwyd arwynebedd arwyneb pegynol ac arwynebedd arwyneb nad yw'n begynol cyfansoddion gan ddefnyddio'r rhaglen SAS (fersiwn 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Gweinyddu Synthesis a Strwythur, 1997-2001, AstraZeneca, Cary , NC, UDA). Cafwyd gwerthoedd log P a pKa a bennwyd yn arbrofol o'r llenyddiaeth.

Dadansoddiad ystadegol

Dadansoddwyd data gan ddadansoddiad un ffordd o amrywiant ac yna prawf ôl-hoc Tukey. Ystyriwyd gwerthoedd tebygolrwydd llai na 5 y cant yn arwyddocaol.

Canlyniadau

Cludo echinacoside acacteoside yn amsugnol trwy haenau mono celloedd Caco

Mewn llygod a llygod mawr, mae ECH[10,14] ac ACT[12,21] cyfan yn cael eu gweinyddu ar lafar ar ddosau o 100–1000 mg/kg. Mae'rDyfyniad Cistanche tubulosaa ddefnyddiwyd yn cynnwys tua 30 y cant ECH a 15 y cant ACT fesul dos. Ers i'r dyfyniad newid pwysedd osmotig a pH yn y cyfrwng deori, penderfynwyd crynodiadau o 4.5 a 13.5 mg/ml yn seiliedig ar y dos llafar (cyfansoddion cyflawn: 2–20 mg/2{{2{{31}) }}} g pwysau corff) mewn llygod. Roedd y detholiad ar ddosau isel (4.5 mg/ml) a dosau uchel (13.5 mg/ml) yn cynnwys 2.0 a 6.1 mg ar gyfer ECH ac 1.0 a 3.0 mg forACT, yn y drefn honno. Fe wnaethom gymhwyso symiau echdynnu C. tubulosa a oedd yn llawer is na'r dos llafar o ECH andACT a adroddwyd mewn bodau dynol (dyfyniad lwfans dietegol o: 150 mg yn cynnwys tua 45 mg forECH a 22.5 mg ar gyfer ACT). Ar ddosau isel ac uchel o gyfansoddion cyfan, nid oedd proffiliau amsugno (Ffigur 2) a Papp yn sylweddol wahanol rhwng ECH ac ACT fel cywerth ag ECH (Tabl 2). Pan lwythwyd detholiad C. tubulosa ar ddogn uchel o 13.5 mg/ml i'r cyfrwng, Pappvalues ​​(1.27 ± 0.13 a 0.34 ± 0.03 × 10−6 cm/s, yn y drefn honno) o gydredol ECH a ACT yn deirgwaith yn uwch na'r rhai (0.38 ± 0.09 a 0.10 ± 0.03 × 10−6 cm/s, yn y drefn honno)o ECH cyfan ac ACT (Tabl 2). Roedd y dyfyniad, yn wahanol i gyfansoddion cyfan, yn gwella cludiant amsugno ECH ac ACT yn sylweddol.

Effaith ataliol phloridzin, phloretin, a verapamil

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>Ni ellid defnyddio 0.3 mM) o ffloretin oherwydd gwenwyndra celloedd amlwg. Yn ogystal, mae P-gp wedi'i nodi fel chwaraewr pwysig sy'n gyfrifol am y rhyngweithio rhwng meddyginiaethau llysieuol a P-gpsubstrates sy'n bwysig yn glinigol. Nid oedd Verapamil yn gwella cludiant amsugnol cyfansoddion cyfan (Ffigur 3).

Cafodd cludiant amsugnol ECH ac ACT yn y dyfyniad (dos isel) ei atal yn sylweddol gan phloridzin (Tabl 2 a Ffigur 4). Roedd y dyfyniad ar y dos uchel yn atal ataliad sensitif i ffloridzin, er bod cludo ECH ac ACT yn gyfan yn fwy sensitif i ffloridzin (Tabl 2).

Yr astudiaeth darlifiad berfeddol in-situ

Mewn astudiaeth in-situ, gwnaethom brofi a oedd ECH ac ACT i mewnDyfyniad Cistanche tubulosaeu cludo gan SGLT1 lleoli ar ochr apical y coluddyn bach. Pan gafodd y detholiad dietegol ar y dos isel (4.5 mg/ml) ei ddarlifo, ymddangosodd ECH andACT yn gyflym mewn gwaed porth (Ffigur 5). Pennwyd yr AUC fel 2702.8 ± 384.1 ± 384.1 μm·min ar gyfer ECH a698.3 ± 197.2 ± 197.2 μm·min ar gyfer yr ACT. Ar ôl i'r AUC gael ei normaleiddio gyda chynnwys oDyfyniad Cistanche tubulosa, nid oedd y swm amsugnol yn sylweddol wahanol rhwng ECH andACT. Fe wnaeth SGLT{0}}phloridzin sensitif, yn wahanol i ffloretin, atal yn sylweddol gludiant amsugnol concomitantECH (AUC, 649.4 ± 248.2 μm·min) ac ACT (heb ei ganfod).

Trafodaeth

Mae rhai cynhwysion llysieuol yn swbstradau o P-gp a fynegir yn uchel yn yr afu, y coluddyn, yr ymennydd a'r arennau. P-gp yw'r ffactor sy'n penderfynu ar fio-argaeledd in-vivo, gwarediad a dosbarthiad meddyginiaethau llysieuol, gan gynnwys llysiau'r Sant Ioan, curcumin, echinacea, ginseng, ginkgo, a sinsir.[22,23]Bio-argaeledd genistein{{5} Roedd }glucoside, sef deilliad flavonoid, hefyd wedi'i gyfyngu gan y cludwr MRP2 berfeddol.[24] Felly, cynlluniwyd yr astudiaeth hon i ymchwilio i briodweddau amsugno bwyd anifeiliaid a meddyginiaethol cydredol ECH ac ACT.Dyfyniad Cistanche tubulosa.

Mae monohaenau celloedd Caco wedi'u pegynu, yn ogystal â'r coluddyn,[25], yn mynegi cludwyr efflux cyffuriau coluddol mawr, megis P-gp, MRPs, a phrotein ymwrthedd canser y fron.[26]flavonoids dietegol dangoswyd bod quercetin[27] a myricetin[28] yn atal efflux cyfrwng P-gp yn y llinellau cell a'r modelau anifeiliaid. Ni newidiodd Verapamil, atalydd P-gp, athreiddedd ACT ac ECH ar draws monohaenau celloedd Caco (Ffigur 3), sy'n nodi nad oedd ECH andACT cyfan yn cael eu cyfyngu gan y pwmp efflux P-gp. Dangosodd ein hastudiaethau blaenorol nad oedd proteinau MRP2 yn cael eu mynegi mewn monohaenau celloedd Caco.[29] Gallai alllif cyfryngol P-gp ac MRP gael eu heithrio o fewn trafnidiaeth ECH ac ACT. Cafodd rhaiglycosidau o quercetin â lipoffiligedd isel eu hamsugno'n fwy effeithlon na quercetin ei hun.[30] Mae hefyd yn bwysig nodi bod ACT â moiety siwgr yn cael ei ddosbarthu'n gyflym ym meinweoedd yr ymennydd. Mae ein sylw wedi'i ganolbwyntio ar weithred gyfunol dau gludwr glwcos mewnenterocytes: SGLT yn y bilen ymyl brwsh a chludiant glwcos tryledol wedi'i hwyluso (GLUT) yn y bilen basoochrog. Gellir defnyddio meithriniad celloedd caco-2 fel model ar gyfer astudio cludwyr GLUT2, SGLT1 a 2 sy'n sensitif i ffloretin, sy'n sensitif i ffloretin a 2. ar gyfradd uchel gyda Pappof 36.8 ± 1.1×10−6 cm/s.[35] Mae ganddo Pappranolol uwch na'r marciwr trafnidiaeth trawsgellog (23.4 ± 2.8 × 10 -6 cm/s). Fel y dangosir yn Nhabl 2, roedd gan ECHand ACT gyflawn Papp llawer is na'r hyn a adroddwyd mewn glwcos a propranolol goddefol. Rydym yn cyfrifo logarithm y cyfernod rhaniad (octanol-dŵr), log P, ei gyfrifo i fod yn −2.32 a 0.077 ar gyfer ECH ac ACT, yn y drefn honno. Credir bod cyfansoddion hydroffilig pegynol yn cael eu cludo trwy lwybr paragellog (ar draws cyffyrdd tynn). Mae'n ymddangos bod y glycosidau dwyphenylethanoid, fel mannitol, yn cael eu cludo trwy lwybr paragellog. Fodd bynnag, gostyngodd ffloridzin athreiddedd amsugnol ECH ac ACT cyfan yn ddramatig (Tabl 2), gan awgrymu bod apicalSGLT1 yn chwarae rhan fawr yn yr amsugniad berfeddol o ECH ac ACT cyfan. Ar ddogn cyfatebol, roedd athreiddedd ACT hydroffobig uwch yn agos at athreiddedd ECH (Ffigur 2 a Thabl 2). Yoshikawa et al.[36] wedi dangos bod cludwyr hwyluso (GLUT 1 a 2), yn ogystal â SGLT1 sy'n sensitif i ffloridzin, yn cael eu mynegi'n ddwys yn y coluddyn bach. Gan fod symiau o gyfansoddion sy'n cael eu hamsugno yn seiliedig ar y cydbwysedd màs rhwng derbyn a dileu, gwnaethom werthuso cyfranogiad GLUT2. Glucosecrosses y pilenni apical o enterocytes gan SGLT1 withhigh affinity a chynhwysedd isel ac allanfeydd ar draws thebasolateral bilen drwy GLUT2 gyda affinityand isel capasiti uchel. Nid oedd Phloretin (atalydd penodol o GLUT2) yn diddymu cludo ECH andACT cyfan (Ffigur 3). Funes et al.[37] dangos bod ACT yn rhyngweithio'n gryf â'r grwpiau ffosffad o bilenni ffosffolipid. Gan fod grwpiau hydroxyl yn doreithiog yn strwythur ACT, bondiau hydrogen rhwng y grwpiau hyn a'r pennau pegynol glyserol neu'r grwpiau ffosffad o ffosffolipidau yw'r rhyngweithiadau mwyaf tebygol o ddigwydd. Pan ddeorwyd ECH yn gyfan a'i ACT cyfatebol gyda monohaenau Caco am 11 h, roedd croniad cellog ACT(0.24 ± 0.04 nmol/cm2) deirgwaith yn fwy na'r hyn a ECH (0.07 ± 0.01 nmol/cm2). Roeddem yn meddwl bod SGLT1-ECH sensitif ac ACT yn cael eu symud yn araf o enterocytes i'r llif gwaed, gan arwain o bosibl at y Papp isel a welwyd. O'i gymharu ag ECH hydroffilig iawn, gall athreiddedd isel ACT fod oherwydd rhyng-gyfnewid pilenni i mewn i'r celloedd.

Dyfyniad Cistanche tubulosa

Mae cyfansoddion polyphenolic yn cael eu bwyta mewn cymysgeddau llysieuol yn ystod eu cymhwysiad clinigol ac maent ar gael yn fasnachol fel atchwanegiadau dietegol. Mewn astudiaeth in-vitro, dangoswyd nad oedd cyfansoddiad cynhwysion deunyddiau bwyd diod yn dylanwadu ar amsugno epicatechin ffenolig.[38] Mewn cyferbyniad, Hypericum perforatumL. mae matricsau cynnyrch yn effeithio ar gludo quercetinglucosides (rutin ac isoquercitrin) a hyperosideacross celloedd Caco oherwydd gwahaniaethau mewn cyfansoddiad matricsffytocemegol a nodweddion trafnidiaeth, hy trosglwyddiad paragellog a chludwyr-cyfryngol neu actif.[39] Yn yr astudiaeth hon, darparodd C. tubulosa gludiant transepithelial triphlyg yn uwch nag ECH ac ACT cyfan (Ffigur 2 a Thabl 2). Rydym yn dyfalu bod cydrannau yn yDyfyniad Cistanche tubulosaactifadu'r cludwr sy'n sensitif i ffloridzin a/neu gyflymu'r broses o ddileu ECH mewngellol ac ACT.Dyfyniad Cistanche tubulosaar y dos uchel fel petai'n cuddio nerth cludiant sy'n sensitif i ffloridzin yn fawr (Tabl 2). Mae carbohydradau dietegol[40] a phroteinau[41] yn rhyngweithio â rhai polyffenolau yn y llwybrau gastroberfeddol.Morikawa et al.[10] dangos y gallai pum iridoid, kankanosides AD, a kankanol, glycosid monoterpene, kankanoside E, dau oligoglycosidau ffenylethanoid, kankanosides F a G, a siwgr oligo acylated, cancanose, gael eu hynysu o'rDyfyniad Cistanche tubulosa

a ddefnyddir ar hyn o bryd. Cynhwysion eraill, gan gynnwys proteinau yn yDyfyniad Cistanche tubulosa, aros yn aneglur. Ynghyd â'r dyfalu uchod, rydym wedi'n cynllunio i archwilio a yw cydrannau eraill yn rhyngweithio â SGLT1 ac yn atal amsugno ECH ac ACT.

Ni all arbrofion in-vivo wahaniaethu'n hawdd rhwng graddau amsugno ac osgoi gwarediad pas cyntaf trwy'r afu. Mae gan y model darlifiad berfeddol in-situ fantais dros fodelau in-vivo ac in-vitro oherwydd bod paramedrau'r arbrawf yn cael eu rheoli'n hawdd a'r ffaith nad yw effaith organau eraill a chynnal cyflenwad gwaed coluddol anghyflawn.[22] Gwerthuswyd cyfranogiad cludwr glwcos sy'n sensitif i theffloridzin mewn system darlifiad berfeddol anin-situ. Fel y dangosir yn Ffigur 5, wedi amsugno symiau o gydredol ECH ac ACT i mewnDyfyniad Cistanche tubulosa (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >Mae 1 × 10 - 6 cm / s yn cael ei amsugno'n llwyr mewn bodau dynol, tra'n amsugno cyffuriau a pheptidau yn wael (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10−6 cm/s(Tabl 2), sy'n awgrymu bio-argaeledd geneuol uchel mewn anifeiliaid a phobl. Crespy et al.[43] dangos nad oedd efflux mewn astudiaeth darlifiad perfeddol yn y fan a'r lle yn sylweddol wahanol rhwng phloridzin a phloretin. [44] dangosasant hefyd mai dim ond 10 y cant oedd bio-argaeledd ffloridzin trwy'r geg gyda sensitifrwydd uchel i SGLT1 mewn llygod mawr. Mae angen i astudiaethau yn y dyfodol werthuso bio-argaeledd ac effaith pasio cyntaf hepatig y cydredol ECH ar ôl rhoi'r echdyniad dietegol ar lafar ar y dos uchel. Mae canlyniadau in-situ yn awgrymu bod y cymeriant oDyfyniad Cistanche tubulosagall wella'r amsugniad llafar isel o ECH ac ACT cyfan.

Casgliad

Y dietegol a meddyginiaetholDyfyniad Cistanche tubulosagall gwella amsugniad perfeddol ECH ac ACT helpu i reoli iechyd pobl yn well, er y dylid lleihau cyfranogiad cludiant sy'n sensitif i ffloridzin.

Datganiadau

Gwrthdaro buddiannau

Mae'r Awdur(on) yn datgan nad oes ganddynt unrhyw wrthdaro buddiannau i'w ddatgelu

Ariannu

Cefnogwyd y gwaith hwn yn rhannol gan y Ganolfan Ymchwil Uwch-Dechnoleg o Brifysgol Kinki.

Diolchiadau

Hoffai'r awduron ddiolch i Osamu Muraoka (Prifysgol Kinki, Osaka, Japan) a Toshio Morikawa (Prifysgol Kinki, Osaka, Japan) am y cyflenwad oDyfyniad Cistanche tubulosaac etholwyr pur. Rydym yn ddiolchgar iawn i Masahiro Iwaki (Prifysgol Kinki) am y gefnogaeth astudio.

Dyfyniad Cistanche tubulosacynnyrch

O: ' Cludo echinacoside ac acteosid sy'n sensitif i ffloridzin a llwybr amsugno coluddol wedi'i newid ar ôl cymhwysoDyfyniad Cistanche tubulosa' ganMae Tadatoshi Tanino et al

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, tt. 1457–1465,Glwcosidau ffenylethanoid a gludir gan SGLT1

Cyfeiriadau

1. Tanaka J et al. EffaithDyfyniad Cistanche tubulosaar wahanol afiechydon yr ymennydd. Arddull Bwyd 21 2008; 12:24–26.

2. Tanaka J et al. Swyddogaethau gwrth-heneiddio oDyfyniad Cistanche tubulosa. Arddull Bwyd 21 2008; 12:27–29.
3. Tanaka J et al. Harddwch a swyddogaethau twf gwallt oDyfyniad Cistanche tubulosa. Arddull Bwyd 21 2008; 12:29–32.
4. Tanaka J et al. Effaith metabolizing braster oDyfyniad Cistanche tubulosa. Arddull Bwyd 21 2008; 12:30–33.
5. Yoshizawa F et al. Mae etholwyr Cistanche tubulosa Schrenk (Hook) f.II. ynysu a strwythur glycosid ffenylethanoid newydd a glycosid neolignan newydd. Tarw Pharm Chem 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M et al. Oligoglycosidau ffenylethanoid ac oligosugars acylated gyda gweithgaredd vasorelaxant o Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14:7468–7475.
7. Tu PF et al. Dadansoddiad o glycosidau ffenylethanoid o gistances Herba gan RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997; 32:294–300.
8. Lei L et al. Rheoleiddio metabolaidd glycosidau ffenylethanoid o gistanches Herba ym gastroberfeddol ci. Yao Xue Xue Bao 2001; 36:432–435.
9. Geng X et al. Effeithiau niwro-amddiffynnol echinacoside yn y model MPTP llygoden o glefyd Parkinson. Eur J Pharmacol 2007; 564:66–74.
10. Morikawa T et al. Oligoglycosidau ffenylethanoid acylated gyda gweithgaredd hepatoprotective o'r planhigyn anialwch Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18:1882–1890.
11. Paola RD et al. Effeithiau verbascoside, wedi'i buro'n fiodechnolegol gan ddiwylliannau celloedd planhigion syringa Vulgaris, mewn model cnofilod o periodontitis. J Pharm Pharmacol 2011; 63:707–717.
12. Wu YT et al. Pennu acteoside yn Cistanche deserticola a Boschniakia rossica a'i ffarmacocineteg mewn llygod mawr sy'n symud yn rhydd gan ddefnyddio LC-MS/MS. J Chromatogr B Technoleg Analyt Biomed Sci 2006; 844:89–95.
13. Matthias A et al. Astudiaethau athreiddedd o alkylamidau a chyfuniadau asid caffeic o echinacea gan ddefnyddio model monolayer cell caco-2. Therapeut J Clin Pharm 2004; 29:7–13.
14. Jia C et al. Pennu echinacoside mewn serwm llygod mawr trwy gromatograffi hylif perfformiad uchel cam gwrthdro gyda chanfod uwchfioled a'i gymhwysiad i ffarmacocineteg a bioargaeledd. J Chromatogr 2006; 844:308–313.
15. Cardinali A et al. Verbascosides o ddŵr melin olewydd: asesiad o'u biohygyrchedd a'r defnydd o berfeddol gan ddefnyddio system fodel treuliad in vitro/caco-2. J Food Sci 2011; 176: H48–H54.
16. Jia C et al. Metabolaeth echinacoside, gwrthocsidydd da, mewn llygod mawr: ynysu ac adnabod ei fetabolion bustlog. Dispos Metab Cyffuriau 2009; 37:431–438.
17. Najar IA et al. Modiwleiddio gweithgaredd P-glycoprotein ATPase gan rai ffytocyfansoddion. Phytother Res 2009; 24:454–458.
18. Walgren RA et al. Alllifiad o flavonoid quercetin 4′-beta-glucoside dietegol ar draws monohaenau celloedd coluddol dynol gan brotein apigol sy'n gysylltiedig â gwrthiant amlgyffuriau-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA et al. Defnydd cellog o flavonoid dietegol quercetin 4′-beta-glucosidase gan cludwr glwcos sodiwm-ddibynnol SGLT1. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837–843.
20. Mihara K et al. Metaboledd pas-cyntaf berfeddol eperisone yn y llygoden fawr. Pharm Res 2001; 18:1131–1137.
21. Isacchi B et al. Gweithgaredd gwrthhyperalgesig verbascoside mewn dau fodel o boen niwropathig. J Pharm Pharmacol 2011; 63:594–601.

22. Cogydd TJ et al. Athreiddedd perfedd clorpyrifos gan ddefnyddio'r dull darlifiad berfeddol un-pas yn y llygoden fawr. Tocsicoleg 2003; 184:125–133.

23. Kumar YS et al. Rhyngweithiad cyffuriau llysieuol wedi'i gyfryngu gan P-glycoprotein a cytochrome P{3}. Metabol Cyffuriau Rhyngweithio Cyffuriau 2010; 25:3–16.
24. Walle UK et al. Cludo genistein-7-glwcosidau gan gelloedd CACO coluddol dynol-2: rôl bosibl ar gyfer MRP2. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103:45–56.
25. Ito K et al. Mynegiant arwyneb apigol/basoochrol o gludwyr cyffuriau a'i rôl mewn cludo cyffuriau fectoraidd. Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L et al. Diwylliannau celloedd caco wrth asesu amsugniad berfeddol: effeithiau rhai cyffuriau a weinyddir ar y cyd a chyfansoddion naturiol mewn matricsau biolegol. (Prifysgol Helsinki, Y Ffindir, 2006) Traethawd Hir Academaidd, tt. 1–66.
27. Sgambia G et al. Mae Quercetin yn cryfhau effaith adriamycin mewn llinell gell canser y fron dynol MCF sy'n gwrthsefyll aml-gyffuriau: P-glycoprotein fel targed posibl. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34:459–464.
28. Choi DH et al. Effaith myricetin, gwrthocsidydd, ar ffarmacocineteg losartan a'i metabolyn gweithredol, EXP-3174, mewn llygod mawr: rôl bosibl cytochrome P450 3A4, cytochrome P450 2C9 a P- ataliad glycoprotein gan myricetin. J Pharm Pharmacol 2010; 62:908–914.
29. Tanino T et al. Gall cynnyrch Paclitaxel-2′-ethylcarbonate prodrug osgoi alllif cellog P-glycoprotein-gyfryngol i gynyddu sytowenwyndra cyffuriau. Pharm Res 2007; 24:555–565.
30. Hollman PC et al. Amsugno glycosidau quercetin dietegol a quercetin mewn gwirfoddolwyr ileostomi iach. Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL et al. Mae cydran tryledol amsugno glwcos yn y coluddion yn cael ei gyfryngu gan recriwtio GLUT2 a achosir gan glwcos i bilen y bwrdd brwsh. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Mater K et al. Mae didoli proteinau plasma-bilen mewndarddol yn digwydd o ddau safle mewn celloedd epithelial berfeddol dynol diwylliedig (Caco-2). Cell 1990; 60:429–437.
33. Mahraoui L et al. Presenoldeb a mynegiant gwahaniaethol mRNAs cludwr hecsos SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3, a GLUT5 mewn clonau celloedd Caco-2 mewn perthynas â thwf celloedd a defnydd glwcos. Biochem J 1994; 298: 629–633.

34. Mesonero J et al. Mynegiant dibynnol ar siwgr o'r cludwr ffrwctos GLUT 5 yng nghelloedd Cac-2. Biochem J 1995; 312:757–762.

35. Walgren RA et al. Cludo quercetin a'i glwcosidau ar draws celloedd Caco-2 epithelial coluddol dynol. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T et al. Mynegiant cymharol o gludwyr hecsos (SGLT1, GLUT1, GLUT2, a GLUT5) trwy gydol llwybr gastroberfeddol y llygoden. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L et al. Effeithiau verbascoside, glycosid ffenylpropanoid o lemon verbena, ar bilenni model ffosffolipidau. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP et al. Dylanwad cyfansoddiad matrics siocled ar flafan coco-3-’ biohygyrchedd in vitro a bio-argaeledd mewn pobl. J Cemegydd Bwyd Amaeth 2009; 57:9418–9426.
39. Gao S et al. Mae cynnwys hynod amrywiol ffenolig yng nghynhyrchion eurinllys St. John's yn effeithio ar eu cludiant yn y model cell Caco-2 perfeddol dynol: rhesymeg fferyllol a biofferyllol dros safoni cynnyrch. J Cemegydd Bwyd Amaeth 2010; 58:6650–6659.
40. Schramm DD et al. Effeithiau bwyd ar amsugniad a ffarmacocineteg flavanols coco. Life Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C et al. Mae matrics gwin rhydd o ethanol a polyphenolig yn ysgogi gwahaniaethu celloedd Caco-2 perfedd dynol. Dylanwad eu cysylltiad â detholiad hadau grawnwin llawn procyanidin. J Cemegydd Bwyd Amaeth 2005; 53:5541–5548.
42. Artursson P et al. Cydberthynas rhwng amsugno cyffuriau llafar mewn pobl a chyfernodau athreiddedd cyffuriau ymddangosiadol mewn celloedd epithelial mewnol dynol (Caco-2). Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V et al. Cymhariaeth o amsugno coluddol quercetin, phloretin, a'u glwcosidau mewn llygod mawr. J Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V et al. Bio-argaeledd ffloretin a phloridzin mewn llygod mawr. J Nutr 2001b; 131: 3227–3230.