Effeithiau Ataliol Glycosidau Phenylethanol O Cistanche Tubulosa

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

Shu-Ping Chi, et al

Haniaethol

Cefndir:Cistanchetubulosayn feddyginiaeth lysieuol Tsieineaidd traddodiadol a ddefnyddir yn helaeth ar gyfer rheoleiddio imiwnedd.Phenylethanoildglycosidau(CPhGs) o'r planhigyn hwn yw'r deunyddiau mwyaf effeithiol. Nod yr astudiaeth hon oedd gwerthuso effeithiau ataliol a therapiwtig CPhGs ar ffibrosis hepatig a achosir gan BSA mewn llygod mawr a mecanweithiau moleciwlaidd cysylltiedig sy'n cynnwys celloedd stelad hepatig. Defnyddiwyd Biejiarangan (BJRG), meddyginiaeth lysieuol Tsieineaidd draddodiadol arall, fel rheolaeth gadarnhaol.

Dulliau:Mewn arbrofion in vivo, rhannwyd 75 o lygod mawr SD ar hap yn 6 grŵp: normal (wedi'i drin â dŵr distyll), model (wedi'i drin gan BSA), cyffur positif (wedi'i drin gan BSA ynghyd â BJRG 600 mg / kg / dydd), a BSA wedi'i drin ynghyd â grwpiau CPhGs (125, 250, a 500 mg/kg/dydd). Mynegeion yr afu a'r ddueg, lefelau serwm aspartate aminotransferase (AST), aminotransferase alanine (ALT), asid hecsadecenoic (HA), laminin (LN), procollagen math III (PCIII), math IVcollagen (IV-C), hydroxyproline (Hyp). ), a thrawsnewid ffactor twf 1 (TGF- 1) yn cael eu mesur mewn iau llygod mawr. Aseswyd graddau histopatholegol ar gyfer ffibrosis yr afu ar gyfer pob grŵp gan ddefnyddio H&E a staen trichrome Masson. Cafodd mynegiant TGF- 1, colagen I (Col-I), a cholagen III (Col-III) eu pennu gan ddull staenio imiwn-histocemegol. Gwerthuswyd yr effeithiau hyn ymhellach yn vitro trwy bennu lefelau mynegiant NF-κB p65 a Col-I gan ddadansoddiadau PCR amser real meintiol. Archwiliwyd mynegiant protein Col-I hefyd gan blotio gorllewinol.

Canlyniadau: Roedd pob grŵp dos (125, 250, a 500 mg/kg/day) o CPhGs wedi lleihau mynegai'r afu a'r ddueg yn sylweddol, wedi gostwng ALT, AST, HA, LN , PCIII, lefelau serwm IV-C, cynnwys TGF- 1 (P < 0.01,="" p="">< 0.01,="" a="" p="">< 0.01),="" a="" hyp="" cynnwys.="" fe="" wnaeth="" cphgs="" hefyd="" liniaru'n="" sylweddol="" ar="" chwyddo="" celloedd="" yr="" afu="" ac="" atal="" necrosis="" hepatocyte="" ac="" ymdreiddiad="" celloedd="" llidiol="" yn="" effeithiol.="" dangosodd="" canlyniadau="" imiwnohistocemegol="" fod="" cphgs="" wedi="" lleihau="" mynegiant="" tgf-="" 1="" yn="" sylweddol="" (p="">< 0.01,="" p="">< 0.01,="" a="" p="">< 0.01),="" col-="" i,="" a="" col-iii.="" dangosodd="" effeithiau="" in="" vitro="" cphgs="" (100,="" 75,="" 50,="" a="" 25="" ug/ml)="" ar="" hsc-t6="" fod="" cphgs="" wedi="" lleihau="" mynegiant="" mrna="" yn="" sylweddol="" o="" nf-κb="" p65="" a="" col-i,="" ac="" roedd="" cphgs="" hefyd="" yn="" is-reoleiddio="" mynegiant="" protein="">

Casgliadau:Mae CPhGs yn cael effaith ffibrosis gwrth-hepatig sylweddol, a gellir eu defnyddio fel asiantau hepatoprotective ar gyfer trin ffibrosis hepatig.

Geiriau allweddol:Ffibrosis hepatig,Cistanche tubulosa,Phenylethanoildglycosid,Cemocin BSA, Atal a therapi

PhenylethanoildglycosidmewnCistanchetubulosa

Cefndir

Mae ffibrosis hepatig yn ymateb gwella clwyfau i anaf difrifol i'r afu sy'n digwydd yn pathogenesis cronighepatitis a achosir gan amrywiol ffactorau. Y ffactorau hyn yw heintiad firaol, cam-drin alcohol, colestasis, a chlefydau metabolaidd a hunanimiwn [1-3]. Mae croniad cynyddol o fatrics allgellog (ECM) a llai o ailfodelu yn amharu ar bensaernïaeth arferol yr afu, gan arwain at ffibrosis hepatig [4]. Mae ffibrosis hepatig yn hanfodol mewn clefyd cronig yr afu ac yn aml mae'n datblygu'n sirosis a charcinogenesis anadferadwy. Ar hyn o bryd, nid oes unrhyw ddulliau na chyffuriau effeithiol ar gyfer trin ffibrosis hepatig. Felly, mae'n frys dod o hyd i gyffur ffibrosis gwrth-hepatig a fydd yn gwanhau dilyniant anaf i'r afu i ffibrosis a chanser.

CistanchetubulosaMae W (o'r teulu Orobanchaceae) yn blanhigyn parasitig sy'n cael ei dyfu'n eang yn rhanbarth deheuol Xinjiang yn Tsieina [5]. Mae pobl fel arfer yn ei ddefnyddio i fywiogi'r arennau, maethu'r gwaed, ymlacio'r coluddyn, ac oedi henaint. Mae wedi'i restru'n swyddogol yn theChinese Pharmacopoeia [6].Cistanchetubulosayn cynnwys amrywiaeth o gydrannau gweithredol. Mae'r rhain yn cynnwysPhenylethanoildglycosidau(CPhGs), iridoidau, a polysacaridau. Asone o lawer o gydrannau gweithredol ynCistanchetubulosa, Mae CPhGshave wedi arddangos effeithiau gwrthocsidiol, gwrth-blinder, niwro-amddiffynnol a gwrthlidiol argyhoeddiadol yn astudiaethau in vivo ac in vitro [7]. Yn y blynyddoedd diwethaf, adroddwyd bod gan GRhGau effeithiau hepatoprotective. Ymhlith y mecanweithiau posibl sy'n sail i'r effeithiau hyn mae radicalau rhydd, amddiffyn pilenni hepatig, imiwnreoleiddiad, ataliad apoptosis, atal mynegiant HBsAg a HBeAg, ac atal dyblygu DNA HBV ac eraill [8-11]. Fodd bynnag, ychydig o astudiaethau yn y llenyddiaeth sy'n mynd i'r afael ag effaith ffibrosis gwrth-hepatig CFfCs. Felly, nod yr astudiaeth hon oedd ymchwilio i effaith ffibrosis gwrth-hepatig GPhCs trwy ddefnyddio model o albwmin serwm buchol (BSA) a achosir gan ffibrosis hepatig mewn llygod mawr. Ymchwiliwyd i fecanweithiau moleciwlaidd cysylltiedig mewn celloedd HSC-T6.

Dulliau

Cemegau ac adweithyddion

Prynwyd pecyn Hydroxyproline (hydrolysis alcalïaidd) (Lot: 20140616) gan Sefydliad Biobeirianneg Nanjing Jiancheng (Tsieina). Prynwyd citiau brechdanau Rat TGF- 1 (Lot: 238240615) oddi wrthLianke Biotech Co., Ltd. (Tsieina). Darparwyd gwrthgorff Rabbit Anti-CollagenI (Lot: 140619), gwrthgorff Rabbit Anti-Collagen III (Lot: 980788 W), a Rabbit Anti-TGF- 1 gwrthgorff (Lot: 140619) gan Beijing BiosynthesisBiotechnology Co., LTD ( Tsieina). Wedi'i amgáu â serwm defaid arferol (hylif gweithio) (Lot: WP141214), prynwyd PV-6000 (Lot: WK141225), a phecyn DAB (Lot: K136621D) gan Zhongshan Golden Bridge BiotechCo., Ltd. (Tsieina). Canfod gwrthgyrff cynradd ei pherfformio trwy ddefnyddio 2. Datrysiad gwrthgyrff (alc-Phos.Conjugated, Gwrth-gwningen) a 2. Ateb gwrthgyrff (Alc-Phos. Cyfun, Gwrth-llygoden) (lot: 272387) a brynwyd gan Invitrogen Company (UDA) .

Prynwyd albwmin serwm buchol (BSA) (Lot: SLBG8239V) gan Sigma (UDA). Cyn ei ddefnyddio, paratowyd BSA ar 18 g/L mewn halwynog arferol, tynnwyd y bacteria trwy hidlo, a storiwyd BSA ar 4 gradd. Cymysgwyd cymhorthydd anghyflawn Freund yn cynnwys 1 g o lipid o flew dafad (Lot: AF0220LA14, Shanghai yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Tsieina) â 2 g paraffin hylif (Lot: 20130815, Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd (Tsieina),), wedi'i sterileiddio mewn awtoclaf stêm, a'i storio ar 4 gradd. Cafwyd cyffur thepositif BJRG fel tabledi Biejiarangan o Inner Mongolia Furui Medical Science Co., Ltd.(Tsieina) Paratowyd stociau cyffuriau BJRG trwy ddiddymu tablediBJRG yn dŵr distyll ar grynodiad o 600 mg/kg.

Phenylethanoild glycosidmewnCistancheyn cael effeithiau ataliol

Deunyddiau planhigion

Cistanche tubulosa(teulu Orobanchaceae) ei brynu o ranbarth Minfeng yn Xinjiang yn Tsieina. Dilyswyd y deunydd gan yr ymchwilydd Jun Zhao, Labordy Allweddol ar gyfer Meddygaeth Uighur, Sefydliad Materia Medica ofXinjiang. Cafodd sbesimenau talebau eu hadneuo yn Sefydliad Materia Medica o Xinjiang.

Paratoi GRhGau

Risomau wedi'u sychu a'u sleisio oCistanchetubulosa(6.0 kg) yn olynol o dan adlif dair gwaith gyda 70 y cant ethanol, a chafodd y toddydd ei dynnu i gynhyrchu echdyniad theethanol. Cafodd echdynion ethanol eu puro trwy ddefnyddio resin AB-8 i gael yffenylethanoidglycosidau(CPhGs). Diddymwyd datrysiadau stoc o CPhGs a ddefnyddir ar gyfer gwahanol grwpiau dos mewn astudiaethau anifeiliaid (500 mg/kg, 250 mg/kg, a 125 mg/kg, yn y drefn honno) mewn cellwlos carboxymethyl 0.5 y cant (5 g/L). halen sodiwm).

Meintioli GRhGau

Pennwyd cynnwys dwy gydran (echinacoside andacteoside) yn y CPhGs gan HPLC gan ddefnyddio dull a adroddwyd yn flaenorol (Zhang et al. 2{004)[12]. Perfformiwyd HPLC trwy ddefnyddio LC Shimadzu-10AHPLC wedi'i gyfarparu â synhwyrydd UV. Roedd colofn HPLC yn golofn ODS Gemini Phenomenex (250 × 4.6 mm,5 μm). Roedd y cyfnod symudol isocratig yn cynnwys methanol-asetonitrile-1 y cant o asid asetig (15:10:75, v/v/v). Elution oedd am 40 munud a chadwyd y gyfradd llif ar 0.6 mL/munud. Cadwyd tymheredd y golofn yn gyson ar 30 gradd. Roedd canfod UV yn 334 nm.

Anifeiliaid a llinell gell HSC-T6

[Gradd SPF] oedolyn iach Prynwyd llygod mawr Sprague-Dawley (SD) (180-220 g) o Ganolfan Anifeiliaid Prifysgol Feddygol Xinjiang, Rhif Trwydded: SCXK (Newydd) 2011-0004. Roedd llygod mawr yn cael eu bwydo â chow di-pathogen penodol (SPF). Cymeradwywyd yr holl weithdrefnau sy'n ymwneud â'r arbrofion anifeiliaid gan Bwyllgor Moeseg Anifeiliaid Ysbyty Cysylltiedig Cyntaf Prifysgol Feddygol Xinjiang. Roedd llygod mawr yn cael eu cadw mewn cewyll o dan amodau amgylcheddol rheoledig (25 gradd a chylch golau/tywyll 12 h) ac roedd ganddynt fynediad am ddim i fwyd pelenni llygod mawr safonol a dŵr tap. Roedd llygod mawr yn gyfarwydd cyn triniaeth.

Cafwyd llinell gell stelate hepatig llygod mawr anfarwoledig, HSC-T6, gan Wuhan Procell Gene BiotechnologyCo., LTD. (Wuhan, Tsieina). Roedd celloedd HSC-T6 yn ddiwylliant Canolig Eryr Addasedig Dulbecco (Glwcos Uchel) (DMEM, Beijing, Tsieina) wedi'i ategu â serwm ffetalbovine 10 y cant (Gibco, De America), penisilin 100 IU/ml, a streptomycin 100 ug/ml (Beijing, Tsieina). ) mewn deorydd wedi'i wlychu ar 37 gradd gyda 5 y cant o CO2.

Anafiadau a thriniaethau i'r iau a achosir gan y BSA

Rhannwyd saith deg pump o lygod mawr SD ar hap yn chwe grŵp: Normal (wedi'i drin â dŵr distyll), model (triniaeth BSA), cyffur positif (wedi'i drin â BSA ynghyd â BJRG 600 mg/kg/day) , a grwpiau CPhG wedi'u trin gan yr Asiantaeth Sgiliau Sylfaenol a hefyd (125, 250, 5{00 mg/kg/day). Roedd gan grwpiau a gafodd eu trin gan y BSA ynghyd â CPhGs (125, 250, 500 mg/kg/diwrnod) 13 o lygod mawr ym mhob grŵp, ac roedd gan y grŵp arall 12 o lygod mawr ym mhob grŵp. Rhennir y model anaf i'r afu a achosir gan y BSA yn sensiteiddio cynradd wedi'i ddilyn gan ymosodiad imiwnolegol) [13]. Ac eithrio'r grŵp arferol, rhoddwyd pigiadau isgroenol lluosog i'r grwpiau eraill gyda 0.5 ml (9 mg/ml) o gynorthwyydd anghyflawn BSAFreund ar ddiwrnod 1, diwrnod 15, diwrnod 22, diwrnod 29, a diwrnod 36 ar gyfer sensiteiddio cynradd. Saith diwrnod ar ôl y pumed pigiad, cafwyd gwaed trwy plexws y wythïen ratretinal a'i brofi am wrthgyrff albwmin serwm. Canfuwyd gwrthgorff BSA mewn serwm llygod mawr trwy ddull tryledu agar dwbl. Perfformiwyd y pigiad ymosodiad trwy roi 0.4 ml o BSA mewn salin normal trwy'r wythïen gron mewn llygod mawr gwrthgyrff-bositif BSA ddwywaith yr wythnos am ddeg gwaith. Roedd crynodiadau ac amseroedd y pigiadau yn 5.00, 5.50, 6.00, 6.50,7.00, 7.50, 8.50, 9.00, 9.50 a 10.00 g/L ar ddiwrnod 46 , diwrnod 50, diwrnod 53, diwrnod 57, diwrnod 60, diwrnod 64, diwrnod 67, diwrnod 71, diwrnod 74 a diwrnod 78, yn y drefn honno. Yn y grŵp arferol, defnyddiwyd saline arferol ar gyfer pigiadau imiwnolegol cynradd (sensiteiddio) ac eilaidd (ymosodiad) yn lle BSA, ac roedd amodau eraill yr un fath â'r rhai yn y grŵp model.

Rhoddwyd dŵr distyll i'r grŵp arferol ar lafar gyda dos o 10 ml/kg/diwrnod. Mae'r grŵp model yn cael ei roi ar lafar 10 ml/kg/dydd 0.5 y cant CMC-Na solution.The grŵp cyffuriau cadarnhaol ei weinyddu ar lafar 600 mg/kg/dydd BJRG. Rhoddwyd CPhGs 125, 250, a 500 mg/kg/dydd ar lafar i'r grwpiau CPhG a gafodd eu trin gan yr BSA a hefyd (125,250, a 500 mg/kg/dydd), yn y drefn honno. Parhaodd dosio llygod mawr bob dydd am bythefnos ar ôl y pigiad olaf.

Ar ôl y cyfnod arbrofol, cafodd llygod mawr eu cyflymu am 12 awr cyn 10 y cant o hydrad cloral ac yna eu rhoi ar unwaith. Casglwyd samplau serwm o bob ratand a ddefnyddiwyd ar unwaith. Afu eu cynaeafu ar gyfer dau ddiben: (1) cadw mewn nitrogen hylifol ar gyfer Hyp kitsand (2) obsesiwn mewn fformaldehyd 10 y cant ar gyfer arholiadau histologicaland immunohistochemical. Hyd yr astudiaethau anifeiliaid oedd 93 diwrnod.

Phenylethanoild glycosidmewnCistancheyn cael effeithiau ataliol

Mynegeion yr afu a'r ddueg

Cafodd yr afu a'r ddueg eu dyrannu gan laparotomi a'u golchi â halwynau 4 gradd arferol. Ar ôl amsugno gormod o ddŵr â phapur hidlo, cafodd yr afu a'r ddueg eu pwyso i gyfrifo'r mynegeion cyfatebol: Pwysau organ cymharol=màs organ (g)/màs corff unigol (g) × 100 y cant [14].

Dadansoddiad o farcwyr ffibrosis yr afu

Gwerthuswyd effaith amddiffynnol CPhGs yn erbyn anaf afu a achosir gan BSA trwy fesur ALT ac AST (dadansoddwr biocemegol awtomatig pelydr meddwl, A086A0182). Penderfynwyd ar ddatblygiad ffibrosis yr afu ac effeithiau triniaeth trwy archwilio HA, LN, PC III, ac IV-C (dadansoddwr Chemiluminescence, TaiGeKeXin, MP2808).

Cynnwys hyp a dadansoddiad TGF- 1

Pennwyd lefel Hyp ym meinwe'r afu gan ddull sbectroffotometrig yn unol â chyfarwyddiadau'r pecyn. Mynegwyd lefel Hyp fel Hyp (ug)/protein (mg).Hyp (ug/mg)=(OD Wedi'i Fesur - OD gwag)/(OD safonol OD gwag) × 5 (ug/ml) × 10/pwysau gwlyb meinwe (ml/mg). Canfuwyd crynodiad hepatig TGF- 1 trwy ddefnyddio citiau ELISA yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Cadarnhawyd effaith ataliol CPhGs ar ffibrosis gan lefelau mynegiant TGF- 1.

Archwiliad histopatholegol

Cafodd meinwe'r afu yn yr un rhan o'r llabed chwith ei echdori a'i osod mewn hydoddiant fformaldehyd 10 y cant. Cafodd meinweoedd eu staenio â staen H&E confensiynol a Masson'strichrome i arsylwi newidiadau histopatholegol o dan ficrosgop ysgafn. Dadansoddwyd mynegiant colagen math I, colagen math III, a TGF- 1 mewn meinweoedd yr afu gan staenio imiwn-histocemegol [15].

Perfformiwyd imiwn-histocemeg lled-feintiol yn unol â dulliau a adroddwyd [16, 17]. Defnyddiwyd y dosbarthiadau canlynol ar gyfer TGF- 1 celloedd positif: " -" yn dynodi bron dim mynegiant, 20=l; Mae " plws " yn dynodi celloedd positif a gasglwyd yn unigol yn ardal y briw, 21=2; Mae " plws plws " yn dynodi celloedd positif mewn grwpiau bach wedi eu casglu o amgylch ardal y briw, 22=4; Mae " plws plws " yn dynodi celloedd positif gwasgaredig wedi'u mynegi, fel 23=8. Mae'r canlyniadau'n cynrychioli integreiddiad hierarchaidd. Troswyd gradd a sgôp cromogenig math colagen Iand colagen math III yn CRI ar gyfer dadansoddiad ystadegol (gradd cromogenig × ystod cromogenig). Rhennir y radd cromogenig yn wan " plws", cymedrol " plws plws", a cryf " plws plws ". Rhennir yr amrediad cromogenig yn " plws", ei amrediad cromogenig < golwg="" 1/4;="" "="" plws="" plws="" ",="" ei="" amrediad="" cromogenig="" o="" weledigaeth/4-2/4;="" "="" plws="" plws="" ",="" ei="" amrediad="" cromogenig="" o="" weledigaeth="" 2/4-3/4;="" "="" plws="" plws="" plws="" plws",="" ei="" amrediad="" cromogenig=""> 3/4. Perfformiwyd sgorau dall gan ddau berson lle mae " plws " yn 1; " plws plws " yw 2, " plws plws " yw 3, a " plws plws " yw 4. Dewiswyd tri maes arsylwi microsgop (chwyddiad × 200) ar hap ar gyfer pob adran, gyda lefel gyfartalog y thesamples yn cael eu defnyddio fel a lefel lled feintiol.

Arbrofion cell

Cafodd celloedd HSC-T6 eu platio mewn 96-plât ffynnon. I ddechrau, cafodd celloedd eu meithrin gyda DMEM yn cynnwys 10 y cant FBS am 48 h. Yna disodlwyd y cyfrwng gyda DMEMwithout FBS i newynu'r celloedd am 12 h. Yna cafodd y celloedd eu meithrin â DMEM a oedd yn cynnwys 5.0 ng/mLTGF- 1 (heb FBS) am 24 awr. Yn olaf, mae crynodiadau gwahanol o CPhGs (100ug/ml, 50ug/ml, a 25ug/ml), acteoside (6 ug/ml, 3 ug/ml, a 1.5 ug/ml), andechinacoside (500ug/ml, 250ug/ml, a 125ug/ml) yn cael eu cario allan yn y plât mewn ffynhonnau pedwarplyg a'u deor am 48 h.

Dadansoddiad PCR amser real

Pennwyd lefel mynegiant mRNA NF-κB, p65, a cholagenI gan PCR amser real. Er mwyn pennu mynegiadaumRNA mewn celloedd HSC-T6, cafodd y celloedd (4 × 105cells) eu hadu mewn platiau chwe ffynnon gyda 3 mL DMEM gyda 10 y cant FBS a'u deor dros nos ar 37 gradd a 5 y cant CO2, ac wedi hynny y newidiwyd cyfryngau diwylliant celloedd DMEM di-doserwm. Nesaf, CPhGs (100 ug/ml, 50 ug/ml, a 25 ug/ml), acteoside (6 ug/ml, 3 ug/ml, a 1.5 ug/ml), ac echinacoside (500 ug/ml, 250 ug /ml, a 125ug/ml) eu hychwanegu at y ffynhonnau. Ar ôl 48 h o ddeor gyda CPhGs neu gyfansoddiadau monomerig, cafodd cyfanswm yr RNA ei echdynnu gan ddefnyddio adweithydd TRIzol (Invitrogen, UDA) a chynhyrfu'n egnïol â chlorofform am 15 s. Ar ôl eistedd ar dymheredd yr ystafell am 3 munud, cafodd y lysate ei allgyrchu ar 12,000 × g am 15 munud ar 4 gradd . Cafodd RNA yn y cyfnod dyfrllyd ei waddodi ag isopropanol, a throsglwyddwyd y cyfnod dyfrllyd uchaf i diwb newmicrocentrifuge. RNA ei waddodi gan ychwanegu 0.75 y cant ethanol, ac ar ôl hynny y tiwb microcentrifuge andcentrifuge ar 12,000 × g ar 4 gradd am ddim mwy na 5 munud. Tynnwyd y supernatant a sychwyd yr RNA ar dymheredd ystafell am 5-10 munud. Setiau penodol o primers (Sangon, Shanghai, Tsieina) a ddefnyddiwyd i ymhelaethu ar lygod mawr -actin [GenBank: NM_031144.3], Collagen I [GenBank: NM_ 053304.1], a NF- κB p65[GenBank: NM_199267.2] cynlluniwyd genynnau gan ddefnyddio Batch Primer 3. Roedd y preimwyr ymlaen (FW) a gwrthdroi (RV) fel a ganlyn: Collagen I (FW: GGA GAGAGC ATG ACC GAT GG, RV: DEDDF GGG TCT TGAGGT TGC CA), NF-κB p65 (FW: CAT ACG CTG ACCCTA GCC TG, RV: TTT CTT CAA TCC GGT GGCGA), -actin (FW: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GATG, RV: AGA GGC ATA) CAG GGA CAA CAC A). Cafodd canlyniadau eu normaleiddio i mRNA y genyn cadw tŷ -actin fel rheolaeth fewnol a chyflwynir lefelau mRNA tebyg iddynt

Perfformiwyd adweithiau gyda 8 μL IQ SYBR GreenSupermix, 1 μL 10 pM pâr preimio, 8.5 μL dŵr distyll, a 2.5 μL cDNA. Perfformiwyd pob adwaith cadwyn polymeras o dan yr amodau canlynol: 95 gradd am 3 munud, yna 40 cylch o 10 s ar 95 gradd, 30 s ar 55 gradd, a 10 s ar 55 gradd - 95 gradd ar gyfer estyniad, ac yna mesuriad fflworoleuedd sengl. Disgrifiwyd y canlyniadau terfynol gyda'r gwerthoedd cymharol (2-ΔΔCt). Perfformiwyd cyfrifo a dadansoddi gan System Canfod PCR Amser Real iQ5.

Dadansoddiad o blotiau gorllewinol

Pennwyd lefelau mynegiant protein Collagen I (Abcam, Caergrawnt, y DU, Art No: ab34710)gan Westernblotting [gyda -actin (Lot: 60008-1-lg; Proteintech, China) fel rheolaeth cadw tŷ. Paratowyd echdynion cell gyfan gan ddefnyddio byffer assay radioimmunoprecipitation (RIPA) (Thermo Scientific, UDA) gyda choctel atalydd Haltprotease 1 y cant (Thermo Scientific, UDA) ac 1 y cant coctels atalydd ffosffatas Halt (Thermo Scientific, UDA). Cafodd y crynodiad protein ei fesur a'i feintioli gan ddull Bradford [18]. Gwahanwyd protein(10-50 ug) ar gel SDS-PAGE 10 y cant a'i drosglwyddo i bilenni PVDF (Millipore, UDA). Cafodd pilenni eu rhwystro am 1 h ar dymheredd ystafell gyda 5 y cant BSA, a'r gwrthgyrff cynradd (Anti-Colla gen I). gwrthgorff, gwanediad 1:200 neu llygoden mAb o -actin, gwanhad 1:5000) yn cael eu deor ar 4 gradd dros nos. Thecorresponding Alc-Phos. deorwyd gwrthgyrff eilaidd cyfun ar dymheredd ystafell. Yn olaf, golchwyd labeli thema dair gwaith gyda 1 × Tris-HClsaline gyda 0.1 y cant Tween 20, a chafodd signalau eu sganio a'u delweddu gan System Ddelweddu GEL DOC XR (Bio-Rad). Perfformiwyd dadansoddiad densitometrig ar y proteinau o ddiddordeb a'i normaleiddio i -actin gan feddalwedd GEL DOCImage Studio (Bio-Rad). -defnyddiwyd Actin fel y rheolaeth fewnol.

Dadansoddiad ystadegol

Cymhwyswyd prawf normalrwydd Shapiro-Wilk a phrawf amrywiaeth homogeneity Levene i wirio normalrwydd a homogenedd amrywiant. Defnyddiwyd dadansoddiad o amrywiant (ANOVA) a ddilynwyd gan brawf post hoc Tukey i nodi gwahaniaethau ystadegol mewn data homogenaidd, a ddosberthir fel arfer. Defnyddiwyd prawf an-barametrig Kruskal-Wallis i ddadansoddi data nad yw'n cael ei ddosbarthu'n normal neu'n homogenaidd. Mynegwyd canlyniadau fel cymedrig ± SD. Gosodwyd arwyddocâd yn P < 0.05.="" dadansoddwyd="" yr="" holl="" ddata="" gan="" feddalwedd="" spss="" 16.0="" (prifysgol="" feddygol="">

Canlyniadau

Penderfyniad meintiol o CPhGsCPhGs ynCistanchetubulosayn cynnwys dauPhenylethanoildglycosidau, echinacoside, ac acteoside, a phenderfynwyd bod eu cynnwys yn y CPhGs gan ddadansoddiad HPLC (Ffig. 1) yn 42.71 ± 0.42 y cant a 14.27 ± 0.18 y cant , yn y drefn honno.

Mynegeion yr afu a'r ddueg

Fel y dangoswyd Tabl 1, roedd mynegeion yr afu a'r ddueg ar gyfer y grŵp model wedi'u codi'n sylweddol [P < 0.01,p="">< 0.05].="" cafodd="" mynegeion="" yr="" iau="" a'r="" ddueg="" y="" cyffur="" positif="" bjrg="" a="" cphgs="" mewn="" gwahanol="" grwpiau="" dos="" eu="" lleihau'n="" sylweddol="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" model[pliver="0.004," pliver="0.003," pliver="0.004," pliver="0.005;" pspleen="0.017," pspleen="0.027," pspleen="0.024,PSpleen=0.070," yn="" y="" drefn="" honno].="" roedd="" mynegeion="" yr="" afu="" a'r="" ddueg="" yn="" is="" na="" rhai'r="" grŵp="">

Effeithiau CPhGs ar ALT, gweithgareddau AST, a marcwyr ffibrosis yr afu

Yn yr astudiaeth bresennol, cynyddwyd lefelau serwm yr en zymes hepatig AST ac ALT yn sylweddol yn y grŵp model, gan adlewyrchu difrod hepatogellog mewn llygod mawr ffibrosis yr afu a achosir gan BSA. Fodd bynnag, dangosodd yr arbrofion fod triniaeth gyda BJRG (600 mg/kg) a CPhGs(125, 250, a 500 mg/kg) wedi lleihau'n sylweddol AST[PAST < 0.001,="" gorffennol="">< 0.001,="" gorffennol="">< 0.001,="" gorffennol="">< 0.001,="" yn="" benodol]="" ac="" alt="" [palt="0.117," palt="0.139," palt="0.189" ,="" palt="0.255," yn="" y="" drefn="" honno]="" lefelau="" mewn="" ffibrosisrats="" hepatig.="" (tabl="">

Cynyddodd lefelau HA, LN, PC ac IV-C mewn llygod mawr model yn sylweddol [PHA < 0.001,="" pln="">< 0.{39}="" }01,="" ppciii="0.002," piv-c="">< 0.001,="" yn="" y="" drefn="" honno].="" o'u="" cymharu="" â'r="" grŵp="" model,="" mae="" lefelau="" ha="" [pha="0.009," pha="0.007," pha="0.009," pha="0.023," yn="" y="" drefn="" honno],="" ln="" [pln="0.011," pln="0.004," p="" ln="0.026," p="" ln="0.069," yn="" y="" drefn="" honno],="" pc="" iii[p="" pciii="" {{26}="" }}.006,="" p="" pciii="0.067," p="" pciii="0.136," p="" pciii="0.296," yn="" y="" drefn="" honno],="" a="" iv-c="" [p="" iv-c="">< 0.001,="" roedd="" p="" iv-c="">< 0.001,="" p="" iv-c="">< 0.001,="" p="" iv-c="">< 0.001,="" yn="" y="" drefn="" honno]="" mewn="" llygod="" mawr="" wedi="" gostwng="" yn="" sylweddol="" gan="" grwpiau="" dos="" gwahanol="" bjrg="" (600="" mg/kg)="" a="" cphgs="" (125,="" 250,="" a="" 500="" mg/kg="" )="" (tabl="">

Cynnwys Hyp a TGF- 1

Canfuwyd cynnwys colagen hefyd trwy fesur Hyplevels ym meinwe'r afu. Fel y dangosir yn Nhabl 4, roedd lefel gymedrig Hyp yn y grŵp model yn sylweddol uwch na'r grŵp arferol, ond bu gostyngiad sylweddol yn y grŵp BJRG a'r gwahanol grwpiau dos CPhGs.

Cynyddwyd crynodiad hepatig TGF{{0}} y grŵp model mewn llygod mawr [P < 0.001].="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" model,="" roedd="" lefelau="" tgf-="" 1="" o'r="" cyffur="" positif="" a'r="" gwahanol="" grwpiau="" dos="" cphgs="" wedi="" gostwng="" yn="" sylweddol="" [p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" p="" tgf-="" 1="">< 0.001,p="" tgf{{10="" }}="">< 0.001,="" ptgf-="" 1="">< 0.001,="" yn="" y="" drefn="" honno].="" crynhoir="" y="" canlyniadau="" yn="" nhabl="">

Archwiliad histopatholegol

Mae arsylwadau o ddarnau arferol o feinwe'r iau sydd wedi'u staenio â H&E a thrichrom Masson yn dangos hepaticobwlau a sinwsoidau hepatig gwahanol. Roedd anhwylder ar strwythur meinwe'r afu yn y llygod mawr, a disodlwyd meinwe'r afu a sinwsoidau hepatig gan lawer iawn o feinwe gyswllt. Fodd bynnag, canfuwyd mwy o sytosaernïaeth arferol a llai o feinwe gyswllt yn y grŵp triniaeth na'r rhai yn y grŵp model.

Staenio H&E

Yn y grŵp arferol, arsylwyd cyfanrwydd strwythurol llabedi hepatig heb ardaloedd porth annormal a sinwsoidau hepatig. Roedd y cortynnau hepatig wedi'u trefnu'n drefnus, gyda'r craidd yn grwn ac yn glir. Mae'r niwclysau wedi'u lleoli yng nghanol y gell, gyda digonedd o cytoplasm. Dim ond ardal y porth sydd ag ychydig bach o feinwe ffibrog (Ffig. 2a).

Yn y grŵp model, roedd y strwythur lobular wedi'i ddifrodi'n ddifrifol. Roedd celloedd yr afu yn dangos dirywiad dyfrllyd ysgafn, dirywiad balŵn yn bennaf a/neu ddirywiad brasterog. Gwelwyd hefyd ffurfio ymdreiddiad celloedd llidiol, hyperplasia meinwe ffibrog helaeth, ffurfio nifer fawr o'r septwm ffibrog, llabedi hollt, a lluosogiad sylweddol o gelloedd yr afu. Cadarnhaodd yr arsylwadau hyn lwyddiant sefydlu'r model anifail anaf imiwnedd llygod mawr. ffibrosis hepatig (Ffig. 2b).

O'i gymharu â'r grŵp model, bu gostyngiad mewn ymdreiddiad celloedd llidiol yn y gwahanol CPhGs. Hefyd a welwyd roedd llai o necrosis a dirywiad brasterog celloedd yr afu yn ogystal â lleddfu ffibrosis. Fe wnaeth CPhGs liniaru patholeg ffibrosis anwytholedig BSA mewn llygod mawr yn sylweddol, lleddfu chwyddo celloedd yr afu, ac atal ymdreiddiad celloedd necrosis hepatocyte a llidiol yn effeithiol, gan awgrymu bod CPhGsexert yn cael effaith amddiffynnol ar ffibrosis hepatig llygod mawr a achosir gan BSA. (Ffig. 2c–f ).

Staeniad trichrom Masson

Yn y grŵp arferol, roedd meinwe'r afu yn normal. Dangosodd ardal porth Thehepatig nifer fach o ffibrau bluecollagen, ac roedd meinwe'r afu wedi'i strwythuro fel arfer (Ffig. 3a). O'i gymharu â meinwe iau y grŵp arferol, meinwe ffibrog amlhau gan y daflen ganolog ac ehangu i mewn i'r parenchyma afu. Roedd ffibrau colagen yn ymestyn ac yn cysylltu ac yn gorchuddio'r llabed cyfan ac yn amgylchynu'r wythïen ganolog. Darparodd yr effeithiau hyn, ynghyd â ffibrosis hepatocyte, difrod strwythurol llabedog, ffibrosis periportal, a ffurfio pseudolobule (Ffig. 3b) dystiolaeth bod y model wedi'i sefydlu.

O'i gymharu â'r grŵp model, cafodd y ffibrau colagen yn y grŵp rheoli cyffuriau cadarnhaol eu hymestyn ychydig allan o'r ardal porth ymylol (Ffig. 3c). O'i gymharu â'r grŵp model, gostyngwyd y ffibrau colagen yn y gwahanol grwpiau dos CPhGs yn sylweddol, rhwystrwyd amlhau ffibr, a gostyngodd amlder meinwe ffibrog o fewn parenchyma'r afu yn sylweddol. Roedd y canlyniadau hyn yn awgrymu bod CPhGs yn gwarchod llygod mawr rhag ffibrosis hepatig a achosir gan y BSA (Ffig. 3d–f ).

Staenio imiwnohistocemegol

Yn bwysig, mae mynegiant colagen math I a colagen math III yn chwarae rhan hanfodol yn natblygiad ffibrosis hepatig, a gallai eu cynhyrchu a'u dyddodiad ym meinwe'r afu fod yn benderfynydd pwysig o effeithiolrwydd ffibrosis gwrth-hepatig. Crynhoir y canlyniadau yn Nhabl 5.

Collagen math I

Mynegodd y grŵp arferol colagen math I pibellau gwaed yn bennaf ac ardal y porth. Mynegodd y grŵp model ffibrosis fasgwlaidd math I colagen yn uchel mewn ardaloedd porthol. Yng ngofod Disse, gwelwyd staen colagen math I fel rhediad neu ddosbarthiad anghyson. Collagen wedi'i amgáu ffibroussepta i ffurfio pseudolobule. Yn yr arbrofion hyn, ffurfiwyd llai o septa ffibrog ar gyfer BJRJ (600 mg/kg) a grwpiau dos gwahanol o CPhGs (125, 250, a 500 mg/kg) [PCol I= 0.002, PCol I {{6 }}.001, PCol I=0.023, a PCol I=0.044, parthed yn benodol]. Datgelodd y canlyniadau hanner meintiol fod y mynegiant o'u math colagen I yn sylweddol is o'i gymharu â'r grŵp model (Ffig. 4).

Colagen math III

Mynegwyd colagen math III yn wan yn y grŵp normal, ac roedd yr ardaloedd ymylol o amgylch y gwythiennau porthol a hepatig yn dangos ychydig o felyn mân yn lle ffibrau parhaus (Ffig. 5a). Yn y grŵp model, roedd ffibrau colagen yn arddangos cordiau llydan a thrwchus, gan ddangos mynegiant cryf, wedi'i leoli'n bennaf yn yr ardaloedd porthol a meinwe ffibrog (Ffig. 5b).

Roedd ffibrau colagen o BJRJ (600 mg / kg) a gwahanol grwpiau dos o CPhGs (125, 250, a 500 mg / kg) yn ffilamentaidd ac wedi'u dosbarthu o amgylch ardaloedd y wythïen ganolog a'r porth. O'i gymharu â'r grŵp model, gostyngwyd y ffibrau colagen yn sylweddol, roedd y staenio yn welw ac yn denau, ac roedd staenio imiwn-histocemegol yn wan-gadarnhaol (Ffig. 5c-f ). Mae'r canlyniadau lled-meintiol hyn yn dangos bod y celloedd a fynegir yn gadarnhaol yn y grwpiau dos cadarnhaol a gwahanol [PCol III=0.015, PCol III=0.001, PColIII=0.010, a PCol III Roedd=0.037, yn ôl eu trefn] yn wahanol i'r rhai yn y grŵp model.

TGF- 1

Ychydig iawn o fynegiant o TGIF- 1 a gafwyd mewn celloedd iau llygod mawr arferol. Roedd mynegiant yn gyfyngedig i nifer fach o gelloedd rhyng-raniadol (Ffig. 6a). Yn y grŵp model, roedd mynegiant TGF- 1 wedi'i ddosbarthu'n eang yn ardal y porth, gofodau ffibrog, celloedd stellate hepatig, celloedd llidiol, y wal sinwsoidal, a cytoplasm. Roedd ardal porth penodol yn dangos mynegiant cadarnhaol iawn gyda staen melyn-frown (Ffig. 6b)

Roedd ychydig bach o fynegiant yn ardal y porth a septa ffibrog o BJRJ (600 mg/kg) a grwpiau dos gwahanol o CPhGs (125, 250, a 500 mg/kg). Lleihawyd maint y staenio cadarnhaol yn y grwpiau hyn yn sylweddol o gymharu â'r grŵp model. Roedd staenio yn y celloedd interstitial yn y septa ffibrog a'r cytoplasm o gelloedd llidiol yn gostwng ( Ffig. 6c - f ). Datgelodd canlyniadau lled-feintiol fod BJRJ a gwahanol grwpiau dos o CPhGs [P TGF- 1=0.001, P TGF- 1 < 0.001,="" p="" tgf-="" 1="0.009," ptgf-="" 1="0." 004,="" yn="" y="" drefn="" honno]="" yn="" arwyddocaol="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="">

Fel y soniwyd yn gynharach yn yr erthygl, mae TGF- 1 yn cytocin pwysig yn pathoffisioleg ffibrosis yr afu, gan ysgogi cynhyrchu extracellularmatrix [19]. Fe wnaethom ddangos bod lefel y TGF- 1 wedi cynyddu yn y grŵp model mewn modd sy'n gyson â difrifoldeb ffibrosis yr afu. Roedd lefelau mynegiant TGF- 1 yn yr afu yn gyson â lefelau serumTGF- 1. Mae hyn yn dangos y gall CPhGs leihau ffibrosis yr afu yn sylweddol oherwydd mynegiant TGF- 1 trwy gymryd rhan yn y synthesis a diraddio ECM.

Gall mynegiant colagen math I, colagen math III, a TGF- 1 ganfod proses patholegol ffibrosis hepatig. Gostyngwyd eu lefelau mynegiant yn y grwpiau triniaeth yn sylweddol a dangoswyd y gall CPhGs wella gweithgaredd colagenas, gan gynnal cydbwysedd deinamig synthesis a diraddiad ECM yr afu, gan oedi ac atal ffurfio ffibrosis yr afu.

NF-κB p65 a mynegiant colagen I ar ôl ymyriad cyffuriau mewn celloedd HSC-T6

Er mwyn nodweddu signalau ffibrosis hepatig, pennwyd dau enyn rheoleiddiol allweddol yn yr afu trwy assay RT-PCR. Dangosodd y data fod gan gelloedd tHSC-T6 o'r grŵp rheoli lefelau is o NF κB a mRNA math colagen I. I'r gwrthwyneb, ysgogodd TGF- 1 gelloedd HSC-T6 i uwchreoleiddio NF-κB (P < 0.01)="" a="" col-i="" (p="">< 0.01)="" mrna="" yn="" sylweddol,="" gyda="" lefelau="" uwch="" na="" rhai="" yn="" y="" grŵp="" rheoli.="" ym="" mhresenoldeb="" crynodiadau="" gwahanol="" o="" cphgs="" ,="" canlyniadau="" nf-κb="" p65="" [p="" nf-κb="0.001" am="" 100="" ug/ml,="" p="" nf-κb="0.002" ar="" gyfer="" 75="" ug/ml="" ,="" p="" nf-κb="0.007" am="" 50="" ug/="" ml,="" a="" p="" nf-κb="0.012" am="" 25="" ug/ml,="" yn="" y="" drefn="" honno]="" a="" col-i="" [p="" col-i="" {{32="" }}.006,="" p="" col-i="0.009," p="" col-i="0.014," p="" col-i="0.019," yn="" y="" drefn="" honno]="" yn="" dangos="" mynegiadau="" llai="" o'r="" mrnas="" hyn="" (="" ffig.="">

Dadansoddiad blot gorllewinol o lefel colagen I ar ôl ymyriad cyffuriau mewn celloedd HSC-T6

Mae Ffigur 8 yn dangos lefelau mynegiant protein colagen I mewn celloedd HSC-T6 o'r gwahanol grwpiau arbrofol. Gostyngwyd lefel mynegiant protein colagen I yn sylweddol yn y gwahanol grwpiau dogn o CPhGs (100 ug/ml, 75 ug/ml, 50 ug/ml, a 25 ug/ml) o gymharu â'r grŵp TGF- 1.

Trafodaeth

Mae CPhGs yn glycosid ffenylethanoid wedi'i ynysu a'i buro o risom Cistanche, a ddefnyddir fel meddyginiaeth lysieuol Tsieineaidd traddodiadol. Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, dangoswyd bod gan CPhGs allu pwerus i atal anafiadau i'r afu [20]. Felly, ein nod oedd ymchwilio i weld a yw CPhGs yn cael effeithiau ataliol ar ffibrosis hepatitis gan ffibrosis hepatig a achosir gan BSA mewn llygod mawr. Defnyddir BJRG yn gyffredin fel cyffur therapiwtig ar gyfer ffibrosisin hepatig Tsieina. Mae wedi'i wneud o gregyn crwban. Mae Radix PaeoniaRubra, Cordyceps Sinensis, Radix isatidis, ac ati yn cael effeithiau ailgyflenwi Qi a gwaed, lleddfu blinder, meddalu nodau. Yn ogystal, mae astudiaethau blaenorol yn dangos bod ganddo'r swyddogaeth amlwg o rwystro ffibrosis cynnar yr iau, atal toreth o gelloedd storio braster, a lleihau synthesis colagen [21]. Felly, defnyddiwyd BJRG fel cyffur positif yn yr astudiaeth hon.

Mae newidiadau patholegol ffibrosis hepatig mewn llygod mawr a achosir gan bigiadau BSA yn debyg i'r rhai mewn sirosis porthol dynol [22]. Fe wnaeth CPhGs leddfu graddfa ffibrosis yr afu yn ddibynnol ar ddos ​​ac atal trawsnewid HSC yn gelloedd tebyg i myofibroblast, lleihau lefelau uchel serwm ALT, AST, HA, LN, CIV, TGF- 1, a mynegai'r afu, a mynegiant colagen wedi'i atal yn sylweddol I, colagen III, a TGF- 1 ym meinwe'r afu.

Mae camau ffibrosis hepatig yn cydberthyn â'r lefelau hyn o HA, LN, ac IV-C, a all, fel marcwyr, chwarae rhan wrth ganfod graddau ffibrosis hepatig [23]. Dywedwyd mai HA yw prif adnodd y matrics allgellog. Bydd IV-C fel elfen hanfodol y bilen islawr yn cael ei syntheseiddio'n helaeth a'i ddyddodi'n drwm yng nghamau cynharach sirosis yr afu. Lefelau serwm LN a IV-C yw'r mynegeion o gyfradd trosiant y bilen islawr ac maent yn dangos graddau ffibrosis yn ardal y porth a chapilarïau sinwsoidaidd [24]. Mae PC III yn farciwr wrth wneud diagnosis o ffibrosis hepatig a sirosis cynnar, ond nid yw ei sensitifrwydd a'i benodolrwydd yn uchel, ac nid oes gwahaniaeth arwyddocaol rhwng y gwahanol gamau o ffibrosis mewn llawer o gyfeiriadau [24, 25]. Cafodd yr astudiaeth hon ganlyniad tebyg.

Yn ogystal, mae arsylwadau trychrome-staen yr H&E a Masson yn dangos meinweoedd arferol yr iau gyda llabedau hepatig gwahanol a sinwsoidau hepatig. Roedd anhwylder ar strwythur meinwe'r afu yn y grŵp model, a disodlwyd meinwe'r afu a'r sinwsoid hepatig gan lawer iawn o feinwe gyswllt. Fodd bynnag, gwelwyd gwelliant sylweddol yn y grwpiau triniaeth o'u cymharu â'r grŵp model.

Yn bwysig, mae colagen math I a mynegiant colagen math III yn chwarae rhan hanfodol yn natblygiad ffibrosis hepatig, y gall ei rwystro atal a thrin ffibrosis hepatig. Felly, gallai cynhyrchu a dyddodiad colagen math I a cholagen math III ym meinwe'r afu fod yn benderfynydd pwysig o effeithiolrwydd ffibrosis gwrth-hepatig. Mae TGF- 1 hefyd yn cytocin profbrogenig pwysig mewn anaf i'r afu ac mae'n weithgar yn fiolegol gyda chamau ffarmacolegol lluosog[26]. Mae angen cydbwysedd rhwng y camau hyn i gynnal homeostasis meinwe. Mae mynegiant aberrant TGF 1 yn ymwneud â pathogenesis clefydau'r afu [27, 28]. Mae'n hysbys bod TGF- 1 yn cytocin hanfodol sy'n ymwneud â chyfnodau cynnar ffibrosis yr afu. Sbardunau straen ocsideiddiol TGF- 1, gan arwain at yr olaf yn ysgogi cynhyrchu a dyddodiad ECM [29]. Felly, un o'r strategaethau effeithiol ar gyfer cynhyrchu cyffur ffibrosis gwrth-hepatig yw nodi cyfryngau gwrth-TGF- 1. Dangosodd dadansoddiad imiwnohistocemegol y gallai mynegiadau colagen math I, colagen math III, a TGF- 1 ganfod proses patholegol ffibrosis hepatig. Mae mynegiadau'r colagentype I, colagen math III, a TGF- 1 yn y grwpiau triniaeth yn cael eu lleihau, a oedd yn sylweddol is yn y grŵp triniaeth CPhGs dos uchel yn benodol, ac yn awgrymu bod CPhGs yn golagen math I effeithiol, math colagen III. , ac atalydd TGF- 1. Yn ôl pob tebyg, mae CPhGscan yn gwella gweithgaredd colagenas, gan gynnal cydbwysedd deinamig synthesis a diraddio ECM, gan felly oedi ac atal ffurfio ffibrosis yr afu.

Nid yn unig y gallai CPhGs leddfu ffibrosis hepatig a achosir gan BSA mewn llygod mawr ond gallent hefyd fod yn gysylltiedig ag atal actifadu HSC in vitro. Credir bod actifadu HSC yn cynrychioli cam hanfodol ffibrogenesis. Yn yr astudiaeth hon, dangosodd y canlyniadau fod gweinyddu CPhGs o 25 i 100 ug/ml wedi gwanhau'n rhyfeddol y gostyngiad NF-κB p65, mynegiant colagen I mRNA, a mynegiant protein colagen I mewn HSC.

Mae NF-κB yn chwarae rhan bwysig wrth fodiwleiddio'r ymateb imiwn i haint neu ysgogiadau [30]. Gall cronni NF-κB mewn celloedd yr afu arwain at recriwtio cytocinau / cyfryngwyr llidiol, gan ysgogi datblygiad ffibrosis [31, 32]. Ar ben hynny, mae colagen hefyd yn fynegai sensitif sy'n adlewyrchu'r lefel ffibrosis ac yn cyfrif am tua 50 y cant o gyfanswm y protein yn yr afu ffibrog [33]. O ganlyniad, gwnaethom ragdybio bod y mecanwaith moleciwlaidd yn erbyn ffibrosis hepatig yn gysylltiedig ag anactifadu mynegiant NF-κB wedi'i gyfryngu gan CPhGs, lle mae'r budd yn cyfrannu at rolau synergaidd gwanhau imiwnwenwyndra a straen llid mewn meinwe afu â briw BSA, gan gywiro dysmetaboledd ymhellach i swyddogaethau ameliorateliver.

Casgliadau

I gloi, mae ein hastudiaethau'n dangos bod CPhGs yn lleihau'n sylweddol faint o ffibrosis hepatig a achosir ganBSA mewn llygod mawr. Gall ei fecanwaith fod yn rhannol o leiaf oherwydd effaith ataliol CPhGs ar gyfansoddiad ECM ac ysgogi diraddio ECM, a/neu drwy ataliad uniongyrchol rhag synthesis colagen typeI, colagen math III, a mynegiant TGF{{0 }}. Felly, roeddem yn disgwyl y gellir defnyddio CPhGs mewn cynhyrchion gofal iechyd neu mewn meddyginiaethau clinigol i atal ffibrosis yr afu dynol. Mae angen astudiaethau yn y dyfodol i sefydlu effeithiolrwydd CPhGs fel cyffur gwrth-hepatig ffibrosis cryf.

Byrfoddau

CPhGs: glycosidau anol o cistanche;

ASS: Albwm serwm buchol;

HSC-T6: Celloedd stelate hepatig;

Hyp: Hydroxyproline;

BJRG: tabledi CompoundBiejiarangan;

TGF- 1: Trawsnewid ffactor twf 1;

ALT: Alanineaminotransferase;

AST: Aspartate aminotransferase;

HA: Asid hyaluronig;

LN: Laminin; PC III: Procolagen Math III;

IV-C: Colagen Math IV;

NF-κB: Niwclearfactor kappa-golau-gadwyn-gwelliant o gelloedd B actifedig;

RT-PCR: adwaith cadwynol Reversetranscriptase-polymerase;

SDS-TUDALEN: Sodiwm dodecyl sylffad-polyacrylamide gel electrofforesis.

Diddordebau cystadleuol

Mae'r awduron yn datgan nad oes ganddynt unrhyw fuddiannau cystadleuol

Cyfraniadau awduron

TL, JZ, SPY, LM, MT, a SLZ lluniodd a dyluniodd yr arbrofion.SPY, TL, a dadansoddodd JZ y data. Ysgrifennodd SPY a JZ y llawysgrif. Adolygodd TL, LM a JZ y llawysgrif. Darllenodd a chymeradwywyd y llawysgrif derfynol gan bob awdur.

Cydnabyddiaeth

Cefnogwyd yr ymchwil hwn gan Sefydliad Cenedlaethol Gwyddoniaeth Naturiol Tsieina (81260624). Hoffai’r awduron ddiolch yn ddiffuant i’r Athro Tao Liu am y gwelliannau a awgrymwyd ganddo ar gyfer ysgrifennu’r papur hwn.

Manylion Awdur

1Adran Tocsicoleg, Ysgol Iechyd y Cyhoedd, Prifysgol Feddygol Xinjiang, Rhif 393 Xinyi Road, Urumqi 830011Xinjiang Uyghur AutonomousRegion, China. Labordy 2Key ar gyfer Meddygaeth Uighur, Sefydliad MateriaMedica o Xinjiang, Urumqi 830004, Tsieina. 3Naddo. 140 Xinhua South Road, Ardal Tianshan, Urumqi 830000 Rhanbarth Ymreolaethol Xinjiang Uyghur, Tsieina.

Cliciwch yma i wirioCistanchetubulosacynnyrch

Cyfeiriadau
1. Cohen-Naftaly M, Friedman SL. Statws presennol therapïau gwrthfibrotig newydd mewn cleifion â chlefyd cronig yr afu. Ther Adv Gastroenterol. 2011; 4(6):391–417.
2. Puche JE, Saiman Y, Friedman SL. Celloedd stellate hepatig a ffibrosis yr afu. Compr Physiol. 2013; 3(4):1473–92.
3. Hernandez-Gea V, Friedman SL. Pathogenesis o ffibrosis yr afu. Annu Parch Pathol. 2011; 6:425–56.
4. Sohrabpour AA, Mohamadnejad M, Malekzadeh R. Adolygu erthygl: gwrthdroadwyedd sirosis. Bwyd Pharmacol Ther. 2012; 36(9):824–32.
5. Raven PH, Zhang LB, Ventenat O. academi gwyddorau Tsieineaidd. 23ain arg. Tsieina: Pwyllgor Golygyddol Flora of China; 2013. t. 1–16.
6. Tseiniaidd Pharmacopoeia Comisiwn Glanweithdra Gweriniaeth Pobl Tsieina. Pharmacopoeia Tsieineaidd, Rhan 1. Tsieina: Tŷ Cyhoeddi'r Diwydiant Cemegol; 2010. t. 126.
7. Yan GH, Tian JH, Long BW, Li N. Cynnydd ymchwil offenylethanoidglycosidaurhagCistanchetubulosa. Pharm Canol De. 2012; 10:692–5.
8. Li J, Huang D, He L. Effaith Rou Cong Rong (Herba Cistanches Deserticolae) ar wenwyndra atgenhedlu mewn llygod a achosir gan glycoside o Leigongteng (Radix et Rhizoma Tripterygii). J Tradit Chin Med. 2014; 34(3):324–32.
9. Xing Y, Liao J, Tang Y, Zhang P, Tan C, Ni H, et al. ACE, ac atalyddion agregu platennau o Tamarix hohenackeri Bunge (planhigyn gwesteiwr oHerbaCistanches) tyfu yn Xinjiang. Pharmacogn Mag. 2014; 10(38):111–7.
10. Jia Y, Guan Q, Jiang Y, Salh B, Guo Y, Tu P, et al. Lleddfu colitis a achosir gan sodiwm sylffad dextran mewn llygod trwy echdyniad wedi'i gyfoethogi gan echinacoside oCistanchetubulosa. Phytother Res. 2014; 28(1):110–9.
11. Wong HS, Ko KM. Mae Herba Cistanches yn ysgogi beicio redox glutathione cellog gan rywogaethau ocsigen adweithiol a gynhyrchir o resbiradaeth mitocondriaidd mewn cardiomyocytes H9c2. Pharm Biol. 2013; 51(1):64–73.
12. Zhang SJ, Liu L, Yu JY. ARP: Dull RP-HPLC ar gyfer pennu echinacoside ac acteoside ar yr un pryd yn Herbie Cistanches. Chin Pharm J 2004; 39(10): 740-741.
13. Zhu QG, Fang BW, Zhu QN, Wu HS, Fu QL. Astudiaeth o'r model imiwnedd anifail ffibrosis yr afu a achosir gan albwmin serwm buchol. Chin J Pathol. 1993; 22: 121-2.
14. Qin DM, Wen ZP, Nie YR, Yao GM. Effaith echdynion Cichorium glandulosum ar ffibrosis hepatig a achosir gan CCl. Iran Red Crescent Med J. 2013;15, e10908.
15. Niu HM, Zeng DQ, Long CL, Peng YH, Wang YH, Luo JF, et al. Diterpenoids Clerodane a flavonoids prenylated o Dodonaea viscosa. J Asiaidd Nat Prod Res. 2010; 12(1):7–14.
16. Li WW, Cân XW, Wang HW, Shen BS, Wang QC. Cydberthynas NF-κB a chyfnod patholegol ffibrosis yr afu mewn cleifion â hepatitis B cronig. Immunol Chin J. 2013; 29(3): 251–4.
17. Zhang GL, Shi XF, Ran CQ, Xu M, Zhu ZJ. Effeithiau cyfanswm saponinau Panax notoginseng yn erbyn ffibrosis yr afu mewn llygod mawr. Acta Academiae Medicinae Militaris Trydyddol. 2007; 29: 2212-4.
18. Rossi O, Maggiore L, Necci F, Koberling O, CA MacLennan, et al. Cymharu profion lliwimetrig â dadansoddiad meintiol o asid amino ar gyfer meintioli protein o fodiwlau cyffredinol ar gyfer antigenau pilen (GMMA). Mol Biotechnol. 2015; 57(1):84–93.
19. Dang SS, Li YP. Datblygiadau o ran deall rôl trawsnewid ffactor twf- 1 yn pathogenesis ffibrosis yr afu. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi. 2010; 18:1631–6.
20. Zhao J, Liu T, Ma L, Yan M, Zhao Y, Gu Z, et al. Effaith amddiffynnol acteoside ar anaf imiwnolegol i'r afu a achosir gan Bacillus Calmette-Guerin ynghyd â lipopolysaccharide. Med Planta. 2009; 75(14): 1463–9.
21. Yang FR, Fang BW, Lou JS. Effeithiau pils Fufang Biejia Ruangan ar ffibrosis hepatig in vivo ac in vitro. Byd J Gastroenterol. 2013; 19(32):5326–33.

22. Liu P, Fang BW, Liu C. Rôl trawsnewid ffactor twf 1 a'i dderbynnydd mewn ffibrogenesis afu a achosir gan imiwnolegol mewn llygod mawr ac effaith polysacarid cordyceps arnynt. Chin J Hepatol. 1998; 6:232-3.

23. Xu GG, Luo CY, Wu SM, Wang CL. Y berthynas rhwng llwyfannu hepatigffibrosis a lefelau biocemeg serwm. HBPD INT. 2002; 1:246–8.Rydych chi et al. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences (2015) 23:52 Tudalen 12 o 13

24. Liu J, Wang JY, Lu Y. Marcwyr ffibrosis serwm wrth wneud diagnosis o ffibrosis yr afu. GênJ Med Intern. 2006; 145:475-7.

25. Li CZ, Wan MB, Zeng MD, Mao YM, Fan ZP, Cao AP, et al. Astudiaeth ragarweiniol o'r cyfuniad o baramedrau anfewnwthiol wrth wneud diagnosis o ffibrosis yr afu. Chin J Hepatol. 2001; 9:261–3.

26. Chen YL, Li ZY. Y berthynas rhwng TGF- 1, PDGF-BB, CTGF, a hepatitis B cronig â ffibrosis. Chin J Diffic Compl Cas. 2010; 9:19–20.

27. Sferra R, Vetuschi A, Catitti V, Ammanniti S, Pompili S, Melideo D, et al. Mae echdynion Boswellia serrata a Salvia miltiorrhiza yn lleihau ffibrosis hepatig a achosir gan DMN mewn llygod trwy ddadreoleiddio TGF-beta1. Eur Parch Med Pharmacol Sci. 2012; 16(11):1484–98.
28. Liu L, Li XM, Chen L, Feng Q, Xu LL, Hu YY, et al. Effaith Gypenosides ar lwybr TGF- 1/Smad mewn ffibrosis yr afu a achosir gan garbon tetraclorid mewn llygod mawr. Intern J Integr Med. 2013; 1:1–6.
29. Zhang BJ, Xu D, Guo Y, Ping J, Chen LB, Wang H. Amddiffyn trwy fecanwaith gwrthocsidiol berberine yn erbyn ffibrosis yr afu llygod mawr a achosir gan ffactorau hepatotoxic lluosog. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2008; 35(3):303–9.
30. Tornatore L, Thotakura AK, Bennett J, Moretti M, Franzoso G. Y llwybr signalau ffactor niwclear kappa B: integreiddio metaboledd â llid. Tueddiadau Cell Biol. 2012; 22(11):557–66.
31. Luedde T, Schwabe RF. NF-κB yn yr anaf sy'n cysylltu'r afu, ffibrosis, a charsinoma hepatogellog. Nat Parch Gastroenterol Hepatol. 2011; 8(2):108–18.
32. Petrasek J, Csak T, Szabo G. Derbynyddion tebyg i dollau mewn clefyd yr afu. Adv Clin Chem. 2013; 59: 155-201.
33. Wang Y, Cheng M, Zhang B, Nie F, Jiang H. Mae ychwanegiad dietegol sudd llus yn gwella mynegiant hepatig o metallothionein ac yn gwanhau ffibrosis yr afu mewn llygod mawr. PLoS Un. 2013;8, e58659.