Mae Phoenix Dactylifera L. Detholiad Hadau yn Arddangos Effeithiau Gwrthocsidiol Ac Yn Gwanhau Melanogenesis

Huey-Chun Huang1 , Shr-Shiuan Wang2, Tsang-Chi Tsai3, Wang-Ping Ko3 a Tsong-Min Chang2,*

Crynodeb:Cefndir: Nid yw dull gweithredu echdyniad hadau dactylifera Phoenix mewn gofal croen erioed wedi'i archwilio. Dulliau: Echdynnwyd hadau P. dactylifera L. trwy echdynnu ultrasonic. Pennwyd nodweddion gwrthocsidiol y dyfyniad gan 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) a 2,2′-azino-di-(3-asid sulfonic ethylbenzthiazoline) (ABTS plus ) profion a dulliau sborion. Ymchwiliwyd hefyd i gyfanswm y cynnwys ffenolig, cynhwysedd lleihau, haearn (II) chelation ïon, a chynhwysedd sborion rhywogaethau ocsigen adweithiol mewngellol (ROS). Gwerthuswyd effeithiau detholiad hadau P. dactylifera L. ar melanogenesis yn sbectroffotometrig gan assay gweithgaredd tyrosinase madarch, pennu gweithgaredd tyrosinase mewngellol, a chynnwys melanin. Dadansoddwyd lefelau mynegiant proteinau cysylltiedig â melanogenesis gan blotio Gorllewinol. Canlyniadau: Datgelodd y canlyniadau fod y P.dactylifera L.creodd echdyniad hadau allu gwrthocsidiol ymddangosiadol a gostyngodd y cynnwys ROS mewngellol yn sylweddol mewn crynodiadau o {{0}}.245 a 0.49 (mg/mL). At hynny, gostyngodd y dyfyniad fynegiant derbynnydd melanocortin 1 (MC1R), ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia (MITF), tyrosinase, protein sy'n gysylltiedig â thyrosinase-1 (TRP1), a phrotein sy'n gysylltiedig â thyrosinase-2 ( TRP2), ac yn atal melanogenesis mewn celloedd B16F10. Casgliadau: Datgelodd ein canlyniadau fod echdyniad hadau P. dactylifera L. yn gwanhau melanogenesis mewn celloedd B16F10 trwy is-reoleiddio llwybrau signalau protein kinase A (PKA). Felly, gellid defnyddio'r dyfyniad fel math o asiant gwynnu croen mewn cynhyrchion gofal croen.

Geiriau allweddol: Phoenix dactylifera;tyrosinase; melanin; ROS; PKA

cistanche pharma specialyn fath o asiant croen-gwyno.

1. Rhagymadrodd

Mae gwrthocsidyddion wedi'u cymhwyso'n eang i atal neu drin anhwylderau ocsideiddiol sy'n gysylltiedig â straen mewn meysydd cosmetig a dermatolegol. Dros yr ychydig ddegawdau diwethaf, mae gwrthocsidyddion hefyd wedi cael eu defnyddio yn y diwydiant cosmetig i atal neu oedi heneiddio croen. Adroddir bod radicalau rhydd a rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) yn gysylltiedig â nifer o afiechydon, megis heneiddio a chlefydau sy'n gysylltiedig ag oedran [1]. Yn ddiddorol, mae difrod radical rhydd ar y croen a achosir gan straen arbelydru UV a ROS yn chwarae rhan bwysig yn y broses o dynnu lluniau croen [2,3]. Adroddir bod gwrthocsidyddion yn ymyrryd â'r broses ocsideiddio trwy chwilota radicalau rhydd a ROS neu drwy chelating metelau ocsideiddio-catalytig [4]. Felly, bu cynnydd dramatig yn nifer y cymwysiadau o gwrthocsidyddion neu atchwanegiadau maeth gwrthocsidiol i leihau straen ocsideiddiol neu ddifrod ocsideiddiol a achosir gan straen yn y corff [5,6]. Fodd bynnag, dangoswyd bod rhai gwrthocsidyddion cemegol, gan gynnwys sodiwm ascorbate, tert-butyl hydroxyanisole (BHA), erythorbate sodiwm, a tert-butyl hydroxytoluene (BHT), yn hyrwyddo effeithiau carcinogenig ar iechyd pobl [7]. Felly, mae twf cyflym astudiaethau ar gwrthocsidyddion naturiol sy'n deillio o blanhigion wedi digwydd dros y degawdau diwethaf. Yn bwysig, canfuwyd y gall cynnydd yn lefel y ROS gyflymu pigmentiad croen. Ymhlith y ROS sy'n deillio o melanocytes a keratinocytes, mae ocsid nitrig, NO, yn ysgogi synthesis melanin trwy wella lefelau mynegiant protein tyrosinase a phrotein sy'n gysylltiedig â tyrosinase 1 (TRP1) [8,9]. Mae effaith ROS ar gynhyrchu melanin wedi'i astudio gan ddefnyddio gwrthocsidyddion amrywiol, megis cystein N-acetyl, i ddileu gweithred hormon sy'n ysgogi melanocyte-ysgogol UVB (-MSH) [10].

Mae melanin yn cael ei gynhyrchu a'i gyfrinachu gan felanocytes sy'n cael eu dosbarthu yn haen waelodol epidermis y croen [11]. Dau gam cyntaf y llwybr melanogenesis mewn pobl yw hydroxylation L-tyrosine i 3-4-dihydroxy phenylalanine (L-DOPA) ac ocsidiad L-DOPA i o-dopaquinone. Mae Tyrosinase (EC 1.14.18.1) yn ensym sy'n cyfyngu ar gyfradd sy'n cataleiddio'r ddau adwaith cyntaf yn ystod melanogenesis [12]. Mae melanin yn chwarae rhan hanfodol wrth amddiffyn y croen rhag difrod golau haul uwchfioled (UV) ac mae hefyd yn gyfrifol am liwio gwallt, croen a llygaid. Adroddwyd bod anhwylderau dermatolegol amrywiol, megis smotiau oedran, melasma, melanoderma ôl-lid, brychni haul, a safleoedd difrod actinig, sy'n deillio o gronni lefel ormodol o melanin epidermaidd [13]. Mae atalwyr synthesis melanin wedi'u cymhwyso'n gynyddol mewn cynhyrchion gofal croen ar gyfer trin neu atal anhwylderau hyperpigmented croen [14,15]. Yn ogystal, mae gwrthocsidyddion, fel arbutin neu asid kojic [16], wedi'u defnyddio wrth drin hyperpigmentation [17]. Yn ddiweddar, mae colur gwynnu croen wedi cyfrif am gyfran fawr o gynhyrchion cosmetig. Nid yn unig menywod â chroen tywyll, ond hefyd y rhai sy'n ceisio ymdopi â smotiau tywyll ar eu croen sy'n deillio o olau UV, beichiogrwydd, neu oedran cynyddol yn eang yn defnyddio'r cynhyrchion croen-gwyno hyn.

Mae melanogenesis yn cael ei reoleiddio gan ffactorau lluosog. Er enghraifft, adroddwyd bod protein sy'n gysylltiedig â tyrosinase-1 (TRP1), ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia (MITF), a phrotein sy'n gysylltiedig â thyrosinase-2 (TRP2) yn rheoleiddio cynhyrchu melanin [18-20 ]. Mae'r derbynnydd melanocortin 1 (MC1R) hefyd yn nodwedd amlwg mewn synthesis melanin a achosir gan -MSH [21]. Mae yna nifer o lwybrau signalau yn ymwneud â chynhyrchu melanin. Ymhlith y gwahanol lwybrau signalau sy'n rheoleiddio cynhyrchu melanin, mae actifadu protein kinase A (PKA) cylchol AMP (cAMP) yn chwarae rhan hanfodol wrth reoleiddio melanogenesis [22]. Yn y llwybr signalau cAM-PKA, mae cAMP yn cymell actifadu PKA [23], a ddilynir gan ffosfforyleiddiad protein elfen-rhwymo elfen ymateb cAMP (CREB). Mae CREB yn ffactor trawsgrifio mewngellol sy'n ysgogi mynegiant y genyn ffactor microffthalmia (MITF), sy'n bwysig mewn melanogenesis. Mae MITF yn ffactor trawsgrifio sy'n clymu i ranbarthau hyrwyddwr y genynnau melanogenig tyrosinase, TRP1, a TRP2, gan ddadreoleiddio eu mynegiant [24,25]. Wedi hynny, mae'r cynnwys melanin mewngellol yn cynyddu [26]. Adroddwyd bod -MSH yn cynyddu lefelau cAMP ac fe'i cymhwysir fel arfer i actifadu ffosfforyleiddiad CREB ac yna gwella lefelau protein MITF [27].

Mae mynegiant MITF yn cael ei reoleiddio gan sawl llwybr signalau. c-Mehefin N-terminal kinase (JNK) a p38 kinase protein-activated mitogen (MAPK) yn ymwneud ag actifadu mynegiant MITF a'r mynegiant tyrosinase cynyddol o ganlyniad. Mae signalau activation kinase ymatebol allgellog (ERK) hefyd yn cynyddu ffosfforyleiddiad CREB a mynegiant MITF dilynol, sy'n modiwleiddio synthesis melanin [28,29]. Felly, adroddwyd bod nifer o gyfryngau croen-gwyno yn atal gweithgaredd trawsgrifio MITF trwy ostwng lefelau mynegiant protein tyrosinase, TRP1, a TRP2 trwy is-reoleiddio ffosfforyleiddiad MITF trwy gyfrwng p38MAPK. Yn ogystal, disgrifiwyd llwybr ERK i fod yn rhan o reoleiddio MITF yn ystod melanogenesis [30,31]. Actifadu ERK phosphorylates MITF, gan arwain at ddiraddio MITF, gan arwain at ostyngiad mewn cynnwys melanin [32,33].

Gall straen ocsideiddiol fod yn ganlyniad i orgynhyrchu ROS neu lai o amddiffyniad gwrthocsidiol [1]. Mae chwilio am a chymhwyso gwrthocsidyddion naturiol yn parhau i fod yn ganolbwynt i nifer o dimau ymchwil ledled y byd. Yn ddiweddar, bu diddordeb cynyddol mewn ymchwil a datblygu ffytochemicals, megis gwrthocsidyddion naturiol a chyfansoddion ffenolig o wahanol ffynonellau naturiol, y gellid eu defnyddio fel nutraceuticals, colur gwrth-heneiddio, a chynhyrchion meddyginiaethol [34]. Mae Phoenix dactylifera L. yn un o'r prif gnydau ffrwythau a gynhyrchir yn y Dwyrain Canol a Gogledd Affrica [35,36]. Mae astudiaethau blaenorol wedi nodi bod ffrwythau P. dactylifera L. yn arddangos gweithgareddau gwrthocsidiol, radical-scavenging, gwrthficrobaidd a gwrthlidiol [37,38]. Mae effeithiau swyddogaethol P. dactylifera L. nid yn unig yn gyfyngedig i'r ffrwythau eu hunain ond hefyd i'w hadau, sy'n fath o sgil-gynnyrch y ffrwythau [39,40]. Oherwydd ei briodweddau gwrthocsidiol, gallai darnau hadau P. dactylifera L. fod yn ffynhonnell sylweddau gwrthocsidiol sy'n gweithredu yn erbyn straen ocsideiddiol [41-43]. Fodd bynnag, ychydig o astudiaethau sydd wedi'u cynnal ar gymhwyso hadau P. dactylifera L. ar gyfer datblygu cynhyrchion cosmeutical. Mae'r hadau hyn fel arfer yn cael eu taflu fel gwastraff, ond mae eu harwyddocâd fel cynhwysyn cosmetig swyddogaethol wedi'i amlygu yma. Hyd yn hyn, ni chafwyd unrhyw adroddiadau ynghylch mecanwaith gweithredu detholiad hadau P. dactylifera L. ym maes colur gofal croen nac effeithiau'r echdyniad hadau ar gynhyrchu melanin. Ffocws yr astudiaeth bresennol oedd pennu potensial echdyniad hadau P. dactylifera L. fel atalydd melanogenesis ar gyfer y diwydiant cosmetig.

Nid yw'r mecanweithiau sy'n sail i effeithiau ataliol echdyniad hadau P. dactylifera L. ar melanogenesis wedi'u hymchwilio eto. Nod yr astudiaeth gyfredol oedd ymchwilio i nodweddion gwrthocsidiol a mecanweithiau gweithredu posibl echdyniad hadau P. dactylifera L. ar melanogenesis trwy archwilio rheoleiddwyr trawsgrifio MITF a ffosfforyleiddiad rheolyddion y llwybrau signalau MAPK a PKA.

cistanche ffres

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1. Cemegau ac Adweithyddion

Prynwyd yr adweithyddion cemegol a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth gan Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MS, UDA). Daeth y gwrthgyrff o Santa Cruz Biotech (Santa Cruz, CA, UDA) ac roedd yr adweithydd ECL o Millipore (Billerica, MA, UDA).

2.2. Paratoi ac Echdynnu Detholiad Hadau P. dactylifera

Cafodd ffrwythau P. dactylifera L. sych eu cynaeafu yn 2019 o siopau traddodiadol yn Ninas Medina, Saudi Arabia. Mae hadau P. dactylifera L. yn cael eu golchi'n llwyr, yn agored i olau'r haul, wedi'u sychu mewn aer am un diwrnod, ac yna'n cael eu sychu ar 80 ◦C am 2 awr mewn popty. Cafodd yr hadau wedi'u dadhydradu eu malurio i bowdr mân (rhwyll #50) gyda melin ymroddedig (Melin Allgyrchol Ultra Retsch a Peiriant Hidlo, Math ZM1, Haan, yr Almaen). Casglwyd y powdr mewn potel wydr wedi'i selio a'i storio ar 25 ◦C nes ei ddefnyddio. Rhoddwyd powdr hadau P. dactylifera L. malurion (2 g) mewn bicer echdynnu sy'n cynnwys 10 ml o ddŵr distyll. Nesaf, cynhaliwyd echdynnu ultrasonic gyda'r model ULTRAsonikTM 57H (250 W, C, ac A Sales Industrial Supplies, Yucaipa, CA, UDA). Yr amledd gweithio oedd 45 kHz am 30 munud. Ar ôl echdynnu, cafodd y samplau eu centrifugio ar 4500 rpm am 50 munud ar 25 ◦C gyda Allgyrchydd Eppendorf 5810 R (Hamburg, yr Almaen). Casglwyd y supernatants a'u hidlo gyda ffilter neilon (maint mandwll: 0.45 μm) a chrynhowyd yr hidlydd i 9.8 mg/mL.

2.3. Cromatograffeg Hylif Ultra-Perfformiad (UPLC) Dadansoddiad o Echdyniad Hadau P. dactylifera ac Asid Ferulic

Dadansoddwyd echdyniad hadau P. dactylifera gan ddefnyddio dosbarth H ACQUITY UPLC gyda chanfyddwr arae ffotodiod (Waters, Milford, MA, UDA). Roedd y golofn yn golofn ACQUITY UPLC BEH C18, 130 Å, 1.7 μm, 2.1 mm × 100 mm. Roedd cam symudol A yn 0.5 y cant o asid asetig, ac roedd cam symudol B yn acetonitrile. Ar gyfer pwyntiau amser 0 a 5 munud, y gymhareb ganrannol o A/B oedd 95/5; am 20 munud, y gymhareb ganrannol o A/B oedd 5/95; ar gyfer pwyntiau amser 21 a 25 munud, y gymhareb ganrannol o A/B oedd 95/5. Defnyddiwyd asid ferulic (1 ppm) fel y safon gadarnhaol.

2.4. Assay Gweithgaredd Sborion DPPH

Yn y assay hwn, defnyddiwyd fitamin C ({{0}}.5 mg/mL) a BHA (0.1 mg/mL) fel safonau gwrthocsidiol. Ychwanegwyd detholiad hadau P. dactylifera L. mewn crynodiadau amrywiol (0.0049, 0.0245, a 0.049 mg/mL) at 2.9 mL o hydoddiant DPPH (60 μM). Gallai cydrannau gwrthocsidiol yn yr echdyniad hadau roi hydrogen i DPPH a throsi DPPH i'r ffurf lai. Cofnodwyd y gostyngiad dilynol mewn amsugnedd ar 517 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer UV-Vis [44].

2.5. ABTS ynghyd ag Assay Capasiti Sborion

Cymharwyd cynhwysedd sborion ABTS ynghyd â detholiad hadau P. dactylifera L. â rhai fitamin C ({{0}}.9 mg/mL) a BHA ({{1{0}}). 9 mg/mL). Ar gyfer yr assay hwn, defnyddiwyd ABTS plus. Cynhyrchwyd cation yn gyntaf trwy adweithio hydoddiant ABTS (7 mM) â pherswlffad potasiwm (2.45 mM), a chaniatawyd i'r cymysgedd sefyll yn y tywyllwch am o leiaf 6 h cyn ei ddefnyddio. Mesurwyd yr amsugnedd ar 734 nm 10 min ar ôl cymysgu crynodiadau gwahanol o'r echdyniad hadau (0.0098, 0.049, a 0.098 mg/mL) gydag 1 mL o ABTS ynghyd â hydoddiant [45].

2.6. Pennu Cyfanswm Cynnwys Ffenolig

Penderfynwyd ar gyfanswm y cynnwys ffenolig gan ddefnyddio'r adweithydd Folin-Ciocalteu [46], a defnyddiwyd asid galig (2 ug / mL) fel safon gadarnhaol. Paratowyd crynodiadau gwahanol o echdyniad hadau P. dactylifera L. (0.0196, 0.098, a 0.196 mg/mL) mewn methanol 80 y cant; Trosglwyddwyd 100 μL o echdyniad i diwb profi ac ychwanegwyd a chymysgwyd 0.5 mL o adweithydd Folin-Ciocalteu (wedi'i wanhau'n flaenorol 10-plyg â dŵr wedi'i ddadïoneiddio). Caniatawyd i'r gymysgedd sefyll ar dymheredd yr ystafell am 5 munud; Ychwanegwyd 1.5 ml o sodiwm carbonad 20 y cant. Ar ôl sefyll ar dymheredd ystafell am 2 h, darllenwyd yr amsugnedd ar 760 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer UV-Vis.

2.7. Penderfynu ar Leihau Cynhwysedd

Defnyddiwyd fitamin C ({{0}}.008 mg/mL) neu BHA (4.8 mg/mL) fel safonau cadarnhaol yn y prawf hwn. Penderfynwyd ar gynhwysedd lleihau'r dyfyniad hadau yn ôl y dull a ddisgrifiwyd gan Oyaizu [47]. Cymysgwyd crynodiadau amrywiol o echdyniad hadau P. dactylifera L. (0.0073, 0.036, 0.073 mg/mL) â byffer ffosffad (2.5 mL, 0.2 M, pH 6.6 ) a photasiwm ferricyanid [K3Fe (CN)6] (2.5 mL, 1 y cant w/v). Deorwyd y gymysgedd ar 50 ◦C am 20 munud. Ychwanegwyd asid trichloroacetig (2.5 mL, 10 y cant w / v) at y cymysgedd, a gafodd ei allgyrchu wedyn ar 1000 × g am 10 munud. Cymysgwyd yr haen uchaf o hydoddiant (2.5 mL) â dŵr distyll (2.5 mL) a FeCl3 (0.5 mL, 0.1 y cant w/v), a mesurwyd yr amsugnedd ar 700 nm.

2.8. Mesur Capasiti Chelating Ïon Haearn (II).

Ar gyfer mesur cynhwysedd chelating Fe2 plws -ion o echdyniad hadau P. dactylifera L., EDTA (0.02, 0.04, a { {10}}.08 mg/mL) yn cael ei ddefnyddio fel safon gadarnhaol. Ychwanegwyd crynodiadau gwahanol o'r echdyniad hadau (0.0196, 0.098, a 0.196 mg/mL) at hydoddiant FeCl2 (0.05 mL, 1 mM). Mae'r cymysgedd adwaith ei adweithio gyda ferrozine (0.1 ml, 1 mM), yna y cymysgedd ei fesur i 1 ml gyda methanol a deor ar 25 ◦ C am 10 munud. Mesurwyd amsugnedd cymysgedd yr adwaith yn 562 nm [48].

2.9. Assay Hyfywedd Celloedd

Perfformiwyd yr assay hyfywedd celloedd gan ddefnyddio'r dull MTT [49]. Amlygwyd y celloedd i grynodiadau amrywiol o echdyniad hadau P. dactylifera L. (0.049, 0.245, a 0.49 mg/mL) am 24 h ar 37 ◦C a 5 y cant o CO2 mewn deorydd llaith ac ychwanegwyd yr ateb MTT at y ffynhonnau. Cafodd deilliad anhydawdd MTT ei hydoddi ag ethanol-DMSO (hydoddiant cymysgedd 1: 1). Mesurwyd amsugnedd y ffynhonnau ar 570 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate. Cafwyd celloedd B16F10 (BCRC60031) o'r Ganolfan Casglu ac Ymchwil Bioadnoddau (BCRC), dinas Hsinchu, Taiwan. Roedd y celloedd yn cael eu cynnal yn DMEM (Hyclone, Logan, UT, UDA) wedi'i ategu â 10 y cant o serwm buchol ffetws ac 1 y cant o wrthfiotigau. Yn ogystal, gwerthuswyd effaith hadau P. dactylifera L. ar hyfywedd celloedd B16F10 hefyd gan y dull assay gwaharddiad glas trypan. Ar ôl triniaeth gyda'r echdyniad hadau, cafodd celloedd eu trypsineiddio a'u centrifugio i gasglu'r belen. Ail-ataliwyd y pelen gell mewn 300 μL o gyfryngau diwylliant celloedd DMEM. Cymysgwyd aliquot bach o ataliad celloedd (20 μL) yn ysgafn gyda 10 μL trypan glas (4 y cant yn PBS). Cafodd rhif y gell ei gyfrif (roedd celloedd anhyfyw yn las a chelloedd hyfyw heb eu staenio) trwy ddefnyddio hemocytomedr o dan y microsgop.

2.10. Mesur Gweithgaredd Tyrosinase Madarch

Ychwanegwyd yr hydoddiant tyrosinase madarch (10 μL, 200 uned) at ficroplat ffynnon 96-. Roedd cymysgedd yr adwaith yn cynnwys 5 mM o L-DOPA wedi'i hydoddi mewn halwynog wedi'i glustogi â ffosffad (PBS) (50 mM, pH 6.8), a detholiad hadau P. dactylifera L. (0.049, 0.245 , a 0.49 mg/mL), asid kojic (200 mM; 0.03 mg/mL), neu arbutin (2 mM; 0.54 mg/mL). Deorwyd y cymysgedd assay ar 37 ◦C am 30 munud a mesurwyd amsugnedd dopacrom a gynhyrchwyd ar 490 nm. Cynhaliwyd mesur gweithgaredd tyrosinase madarch fel y disgrifiwyd yn flaenorol [50].

2.11. Penderfynu Cynnwys Melanin

Cafodd y celloedd B16F10 eu trin â -MSH (100 nM) am 24 awr ac yna eu trin â naill ai echdyniad hadau P. dactylifera L. (0.0245-0.147 mg/mL) neu arbutin (0.54 mg / mL) am 24 awr ychwanegol. Ar ôl triniaeth, cafodd y pelenni celloedd eu hydoddi mewn hydoddiant NaOH (1 N) ar 60 ◦C am 60 munud. Canfuwyd y cynnwys melanin yn 405 nm, fel y disgrifiwyd yn flaenorol gan Tsuboi [51].

Mae Cistanche yn atal cynhyrchu melanin.

2.12. Mesur Gweithgaredd Tyrosinase Mewngellol

Penderfynwyd ar weithgaredd tyrosinase mewngellol fel y disgrifiwyd yn flaenorol [52]. Cafodd y celloedd eu trin â -MSH (100 nM) am 24 awr ac yna gyda detholiad hadau P. dactylifera L. (0.0245–0.147 mg /mL) neu arbutin (0.54 mg/mL) am 24 h. Ar ôl triniaeth, cymysgwyd y darnau celloedd (100 μL) â hydoddiant L-DOPA a baratowyd yn ffres (0.1 y cant yn PBS) a'u deor ar 37 ◦C, a mesurwyd yr amsugnedd ar 490 nm.

2.13. Arbrawf Blotio Gorllewinol

Cafodd y celloedd eu trin â detholiad hadau P. dactylifera L. ({{0}}.0245, 0.0368, 0.{ {14}}49, a 0.147 mg/mL) neu arbutin (0.54 mg/mL) ac yna lysed mewn PBS sy'n cynnwys nondiet P-40 (1 y cant ), sodiwm deoxycholate (0.5 y cant), sodiwm dodecyl sylffad (SDS, 0.1 y cant), aprotinin (5 ug/mL), fflworid ffenylmethylsulfonyl (100 ug/mL), pepstatin A (1 ug/mL), ac EDTA (1 mM) ar 4 ◦C am 20 munud. Mesurwyd cyfanswm y lysates gan ddefnyddio pecyn BCA micro (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA). Cafodd proteinau (30 ug) eu datrys gan electrofforesis gel SDS-polyacrylamid a'u trosglwyddo'n electrofforetig i bilen fflworid polyvinylidene. Cafodd y bilen ei rhwystro mewn llaeth di-fraster 5 y cant yn PBST (PBS gyda 0.05 y cant Tween-20) a'i deor ar 4 ◦C dros nos gyda'r gwrthgyrff sylfaenol canlynol wedi'u gwanhau yn PBST: MITF Ab (1:1000), TRP1 Ab (1:6000), TRP2 Ab (1:1000), MC1R Ab (1:500), GAPDH Ab (1:1500), tyrosinase Ab (1:2000), p-p38 Ab (1:500), t38 Ab (1:500), p-JNK Ab (1:500), JNK Ab (1:500), p-ERK Ab (1:500), ERK Ab (1:500), p-CERB Ab (1: 500), a CERB Ab (1:200), i gyd o Santa Cruz Biotech (Dallas, TX, UDA)). Canfuwyd y gwrthgyrff rhwymedig gan wrthgorff eilaidd cyfuniad perocsidas marchruddygl (Amersham Corp.) ac yna system ganfod ECL (Amersham) yn unol â chyfarwyddyd y gwneuthurwr.

2.14. Assay Atalydd PKA

Cafodd y celloedd eu trin â -MSH (100 nM) am 24 h ac yna ychwanegiad 1 h o 10 μM o reoleiddiwr PKA H89. Ar ôl y driniaeth, ychwanegwyd detholiad hadau P. dactylifera L. (0.147 mg/mL) a H89 at y celloedd a'u deor am 23 h ychwanegol. Penderfynwyd ar y cynnwys melanin fel y disgrifir uchod.

2.15. Dadansoddiad Ystadegol

Cynhaliwyd dadansoddiad ystadegol gan ddefnyddio prawf post hoc Tukey, a ddefnyddiwyd i gymharu data mesuredig, gan ddefnyddio'r Pecyn Ystadegol ar gyfer y Gwyddorau Cymdeithasol (SPSS) fersiwn 22.0 meddalwedd ystadegol (SPSS Inc., Chicago, IL, UDA). *p < 0.05="" yn="" cael="" ei="" ystyried="" yn="" arwyddocaol,="" **="" p="">< 0.01,="" ***="" p=""><>

3. Canlyniadau

3.1. UPLC Dadansoddiad o P. dactylifera L. Detholiad Hadau

Dangosir canlyniadau dadansoddiad UPLC yn Ffigur 1A, B. Mae Ffigur 1A yn dangos y brig gorgyffwrdd o echdyniad hadau P. dactylifera L. ac asid ferulic ar 330 nm. Mae Ffigur 1B yn dangos sbectra sgan tebyg rhwng 220 a 500 nm ar gyfer echdyniad hadau P. dactylifera L. ac asid ferulic.

3.2. Nodweddion Gwrthocsidiol P. dactylifera L. Detholiad Hadau

Datgelodd gweithgaredd gwrthocsidiol dyfyniad hadau P. dactylifera L. in vitro bresenoldeb potensial gwrthocsidiol. Mewn assay DPPH, fitamin C ({{0}}.{5}}5 mM; 0.53 mg/mL) a tert-butyl hydroxyanisole (BHA) (0 .1 mg/mL) fel safonau gwrthocsidiol positif. Cynhwysedd sborion DPPH y darn oedd 49.97 ± 2.9 y cant , 81.36 ± { { { 21}} .56 y cant , a 78.53 ± 3.83 y cant o'r rheolaeth ar gyfer crynodiadau echdyniad o 0.0{{ 31}} 49, 0.0245, a 0.049 (mg/mL), yn y drefn honno. Mewn cymhariaeth, cynhwysedd sborion fitamin C a BHA oedd 90.12 ± 0.31 y cant a 90.44 ± 0.49 y cant, yn y drefn honno (Ffigur 2A).

Mae'r catation radical ABTS hwn yn las ei liw ac mae'n adweithiol i'r rhan fwyaf o wrthocsidyddion. Yn ystod yr adwaith hwn, mae catation radical glas ABTS yn cael ei drawsnewid yn ôl i'w ffurf niwtral di-liw. Cafodd yr adwaith ei fonitro'n sbectroffotometrig. Cynhwysedd sborion ABTS plws y darn oedd 5.69 ± 1.36 y cant , 18.81 ± { { { }} .68 y cant , a 66.82 ± 8.51 y cant o'r rheolaeth ar grynodiadau o 0.0{{16} }}98, 0.{{20}}49, a 0.098 mg/mL, yn y drefn honno. Mewn cyferbyniad, roedd y ABTS ynghyd â chynhwysedd sborion fitamin C (0.9 mg / mL) a BHA (0.9 mg / mL) yn 95.52 ± 0.12 y cant a 40.3 ± 0.83 y cant, yn y drefn honno. Mae'r canlyniadau yn Ffigur 2B yn dangos bod yr echdyniad hadau yn chwilota am swm sylweddol o'r ABTS a'r radical.

Er mwyn pennu cyfanswm cynnwys ffenolig echdyniad hadau P. dactylifera L., defnyddiwyd asid galig (2 ug/mL) fel safon gadarnhaol. Mae'r canlyniadau yn Ffigur 2C yn dangos bod cyfanswm y cynnwys ffenolig yn 0.0196, 0.{{20}}98, a 0. Roedd 196 (mg/mL) o'r dyfyniad yn 33.43 ± 2.33 y cant, 117.22 ± 7.81 y cant, a 195.4 ± 10.91 y cant, yn y drefn honno. Y cywerthyddion asid galig (GAE) o'r crynodiadau o echdynion hadau a grybwyllwyd uchod oedd 0.068 ± 0.01, 0.365 ± 0.01, a 0.642 ± 0.03, yn y drefn honno (Ffigur 2C).

3.3. Effeithiau Ataliol P. dactylifera L. Detholiad Hadau ar Melanogenesis

Mae'r canlyniadau a ddangosir yn Ffigur 4A yn dangos bod 0.049 mg/mL o echdyniad hadau P. dactylifera L.ni chafodd effaith ataliol ar weithgaredd tyrosinase madarch. Ar y llaw arall, canrannau ataliad ensymau oedd 8.34 ± 2.67 y cant a 33 ± 2.36 y cant o'r rheolaeth ar gyfer y 0.245 a 0.49 mg/mLP. dactylifera L. triniaethau echdynnu hadau, yn y drefn honno. Yn ogystal, mae canrannau ataliad tyrosinase o asid kojic (200 μM; 0.03 mg/mL) ac arbutin (2 mM; 0.54 mg/mL ) yn 56.26 ± 5.06 y cant a 64.56 ± 2.88 y cant o'r rheolaeth, yn y drefn honno (Ffigur 4A). Felly, gallai'r crynodiadau uwch o echdyniad hadau P. dactylifera L. (0.245 a 0.49 mg/mL) gynrychioli lefelau ataliol tyrosinase madarch.

Yn Ffigur 4B, dangosodd y canlyniadau mai dim ond 0.147 mg/mL o echdyniad hadau P. dactylifera L. allai leihau cynnwys melanin yn sylweddol mewn celloedd melanoma B16F10. Ar ôl triniaeth, roedd y cynnwys melanin mewn celloedd B16F1{{0} yn 80.66 ± 5.43 y cant o gynnwys y rheolydd. Ar gyfer y safon gadarnhaol, arbutin (0.54 mg/mL), y cynnwys melanin mewngellol sy'n weddill oedd 61.19 ± 8.17 y cant o gynnwys y rheolaeth. Dangosodd y canlyniadau fod 0.147 mg/mL o echdyniad hadau P. dactylifera L. yn dangos effeithiau llai nag arbutin. Y gwerthoedd gweithgaredd tyrosinase mewngellol sy'n weddill oedd 85.1 ± 8.1 y cant a 73.7 ± 11.9 y cant ar gyfer y 0.098 a 0.147 mg / mL o echdyniad hadau P. dactylifera L., yn y drefn honno. Y gweithgaredd tyrosinase mewngellol sy'n weddill oedd 64.3 ± 14.9 y cant o'r rheolaeth ar ôl i'r celloedd gael eu trin ag arbutin (Ffigur 4C). Dangosodd y canlyniadau fod crynodiadau uwch o hadau P. dactylifera L. yn dal i arddangos effaith ataliol lai ar weithgaredd tyrosinase a achosir gan MSH mewn celloedd B16F10 nag arbutin.

3.4. Mae P. dactylifera L. had Extract Yn Atal Lefelau Mynegiant Proteinau sy'n Ymwneud â Melaninogenesis

Defnyddiwyd blotiau gorllewinol i archwilio lefelau mynegiant proteinau cysylltiedig â melanogenesis mewn celloedd B16F10 (Ffigur 5A). Mae'r canlyniadau'n dangos bod triniaeth gyda chrynodiadau amrywiol o echdyniad hadau P. dactylifera L. wedi arwain at lefelau is o MC1R, MITF, tyrosinase, TRP1, a TRP2. Roedd effeithiau ataliol y darn ar fynegiant protein yn amlwg mewn crynodiad o {{10}}.147 mg/mL. Y newid plyg yn lefel mynegiant protein ar gyfer MC1R oedd 0.74 ± 0.02; ar gyfer MITF roedd yn {{20}}.51 ± 0.03; ar gyfer tyrosinase roedd yn 0.54 ± 0.26; ar gyfer TRP-1 roedd yn 0.57 ± 0.15; ac ar gyfer TRP-2 roedd yn 0.49 ± 0.1 (Ffigur 5B).

Archwiliwyd lefelau mynegiant proteinau signalau cysylltiedig â melanogenesis gan ddefnyddio blots y Gorllewin (Ffigur 5C). Mae'r canlyniadau'n dangos bod 0.147 mg/mL o driniaeth echdynnu hadau P. dactylifera L. yn ôl pob golwg wedi arwain at lefelau is o p-p38, p-JNK, p-ERK, a p-CREB. Y newid plyg yn lefel mynegiant protein ar gyfer p-p38 oedd 0.88 ± 0.15; am p-JNK roedd yn 0.68 ±0.39; ar gyfer p-ERK roedd yn 0.65 ±0.23; ac ar gyfer p-CREB roedd yn 0.44 ±0.07 (Ffigur 5D).

3.5. P. dactylifera L. Nid yw Dyfyniad Hadau yn Effeithio ar Fynegiad Genynnau Tyrosinase, TRP1, TRP2, neu MITF

Archwiliwyd lefelau mynegiant genynnau proteinau sy'n gysylltiedig â melanogenesis, megis tyrosinase, TRP1, TRP2, a MITF gan adwaith cadwyn polymeras amser real meintiol (RT-PCR). Lefelau mynegiant cymharol normaleiddio tyrosinase/GAPDH ar gyfer 0.0367, 0.049, a 0.147 mg/mL o P. dactylifera L. triniaethau echdynnu hadau oedd 3.51 ± 0.52, 2.38 ± 0.24, a 1.64 ± 0.55, yn y drefn honno. Ar gyfer TRP-1/GAPDH, y lefelau mynegiant normaleiddiedig cymharol ar gyfer 0.0367, 0.049, a {{4{{43} }}}.147 mg/mL o driniaethau echdynnu hadau P. dactylifera L. oedd 1.64 ± 0.2, 1.15 ± 0.02, a 0. 89 ± 0.07, yn y drefn honno. Lefelau mynegiant normaleiddio cymharol TRP-2/GAPDH ar gyfer 0.0367, 0.049, a 0.147 mg /mL o P. dactylifera L. dyfyniad hadau yn 1.08 ± 0.13, 0.85 ± 0.01, a 0.7 ± 0.05, yn y drefn honno. Ar gyfer MITF/GAPDH, y lefelau mynegiant cymharol normaleiddio ar gyfer 0.0367, 0.049, a 0.147 mg/mL o driniaethau echdynnu hadau P. dactylifera L. oedd 1.48 ± 0.19, 1.03 ± 0.02, a 0.74 ± 0.05 (Fig 6) yn y drefn honno.

4. Trafodaeth

Adroddwyd bod melanogenesis yn cynyddu straen ocsideiddiol cellog. Yn ogystal, gall nifer o gwrthocsidyddion, sborionwyr ROS, sborionwyr atalyddion, ac atalyddion atal synthesis melanin wedi'i gyfryngu gan UV [54]. Felly, mae gwrthocsidyddion, sborionwyr ROS, ac atalyddion melanogenesis wedi'u cymhwyso'n gynyddol i gosmetigau gwyngalchu croen ar gyfer atal hyperpigmentation croen annymunol [14]. Canfuwyd hefyd y gallai symbyliad metallothionein, gwrthocsidydd mewndarddol atal melanogenesis mewn melanocytes [55]. Mae croen dynol yn aml yn agored i lygryddion ocsideiddio amgylcheddol neu olau UV ac yn cael ei niweidio gan ffactorau amgylcheddol anghynhenid. Yn benodol, adroddwyd bod arbelydru UV yn ysgogi cynhyrchu ROS yn y croen ac yn hyrwyddo perocsidiad lipid cellbilen [56]. Er mwyn gwrthweithio straen ocsideiddiol, mae gan y croen systemau gwrthocsidiol penodol [57].

Er mwyn egluro gweithgaredd gwrthocsidiol detholiad hadau P. dactylifera L., penderfynwyd DPPH ac ABTS ynghyd â gweithgaredd scavenging radical, cyfanswm cynnwys ffenolig, lleihau capasiti, a chynhwysedd ïon-chelating metel y dyfyniad fel y disgrifiwyd yn flaenorol [47,48]. Roedd echdyniad hadau P. dactylifera L. yn gwneud llawer o weithgareddau gwrthocsidiol ym mhob un o'r astudiaethau dadansoddol a grybwyllwyd uchod. Dangosodd y canlyniadau botensial gwrthocsidiol echdyniad hadau P. dactylifera L. dros wahanol ystodau gydag effeithlonrwydd penodol. Dangoswyd gweithgaredd chwilota DPPH yr echdyniad hadau yn Ffigur 2A yn wahanol i weithgarwch ABTS plws a ddangosir yn Ffigur 2B, a allai fod wedi deillio o fecanweithiau gwahanol y rhyngweithiadau gwrthocsidiol-radical. Yn ogystal, gall stoichiometreg adweithiau rhwng y cydrannau gwrthocsidiol yn y dyfyniad hadau amrywio, sy'n arwain at wahaniaeth mewn gallu chwilota radical rhad ac am ddim [58]. Gallai'r gwrthocsidyddion posibl yn echdyniad hadau P. dactylifera L. drosi cyfadeilad Fe3 plus /ferricyanide i'r ffurf fferrus, ac roedd y gallu lleihau yn ddangosydd o weithgaredd gwrthocsidiol yr echdyniad hadau a ddangosir yn Ffigur 2D. Canfuwyd bod asid kojic [59] yn gweithredu fel atalydd tyrosinase oherwydd bod asid kojic yn gweithredu fel chelator metel i gelu'r ïonau copr ac atal yr ïonau hynny rhag mynd i mewn i safle gweithredol tyrosinase. Felly, gall gwrthocsidyddion yn y darn hadau ffurfio cyfadeiladau metel anhydawdd gydag ïonau fferrus ac yna atal y rhyngweithio rhwng ïonau metel a lipidau. Nododd cynhwysedd ïon-ïon metel uwch yr echdyniad hadau ei weithgaredd gwrthocsidiol posibl a'i effeithiau ataliol posibl ar weithgaredd tyrosinase (Ffigur 2E).

Egwyddor yr assay o ROS mewngellol yw bod DCFH-DA yn tryledu trwy'r gellbilen ac yn cael ei hydrolysu'n enzymatically i DCFH gan esterase; yna mae DCFH yn adweithio gyda ROS (fel H2O2) i gynhyrchu DCF. Roedd cynnydd cyflym yn DCF yn nodi ocsidiad DCFH gan radicalau mewngellol [60]. Mae'r syniad y tu ôl i chwilio gwrthocsidyddion newydd ar gyfer gweithgareddau gwynnu croen yn gorwedd yn y ddamcaniaeth y gall y straen ocsideiddiol sy'n deillio o arbelydru UV gyfrannu at ysgogi synthesis melanin. Adroddwyd bod arbelydru UV yn cynhyrchu ROS mewn meinweoedd croenol a allai ysgogi cynhyrchu melanin trwy actifadu tyrosinase [61]. Ar ben hynny, dywedwyd y gall nifer o gyfryngau gwynnu croen atal melanogenesis trwy ryngweithio ag ïonau copr ar safle gweithredol tyrosinase neu ag o-quinones i rwystro polymerization canolradd yn y llwybr synthetig melanin [62]. Yn ogystal, gall fitamin C neu fitamin E leihau ocsidiad gronynnau melanin sy'n bodoli eisoes. Felly, mae'r fitaminau hyn wedi'u cymhwyso'n eang mewn cynhyrchion gwynnu croen [63]. Yn ddiddorol, dangosodd ein canlyniadau nodweddion gwrthocsidiol detholiad hadau P. dactylifera L., sy'n dangos y gallai echdyniad hadau P. dactylifera L. weithredu fel cynhwysyn gwynnu croen mewn colur.

Mae'r assay MTT yn assay colorimetrig adnabyddus sy'n mesur gweithgaredd ensymau ocsidoreductase cellog NADH/NADPH-ddibynnol sy'n lleihau MTT i liwiau formazan lliw porffor. Gellid defnyddio'r assay hwn i archwilio sytowenwyndra posibl cyfryngau meddyginiaethol a deunyddiau gwenwynig, gan fod y cyfryngau hyn yn gwella neu'n atal hyfywedd celloedd. Roedd y canlyniadau a ddangosir yn Ffigur 3A yn unol â chanlyniadau assay gwaharddiad glas Trypan yn Ffigur 3B, sy'n nodi nad oedd gan y dyfyniad hadau P. dactylifera L. unrhyw effaith sytotocsig ar hyfywedd celloedd melanoma B16F10.

Defnyddir tyrosinase madarch yn gyffredin fel ensym targed ar gyfer sgrinio atalyddion posibl melanogenesis. Canfuwyd yn gyntaf y gallai ystod dosau ({{0}}.049–0.49 mg/mL) o echdyniad hadau P. dactylifera L. atal gweithgaredd tyrosinase madarch. Mae'r canlyniadau a ddangosir yn Ffigur 4A yn dangos bod yr echdyniad hadau wedi arddangos effeithiau ataliol is ar weithgaredd tyrosinase madarch nag asid kojic. Mae Tyrosinase yn chwarae rhan fawr yn nau gam cyntaf y llwybr melanogenesis. Er mwyn egluro gwir effaith ataliol echdyniad hadau P. dactylifera L. ar gynhyrchu melanin, penderfynwyd cynnwys melanin B16F10 a gweithgaredd tyrosinase mewngellol. Mae'r canlyniadau a gyflwynir yn Ffigur 4B yn dangos bod crynodiad uwch o echdyniad hadau P. dactylifera L. wedi cael effaith ataliol ymddangosiadol ar ffurfio melanin. Dangosodd y data fod detholiad hadau P. dactylifera L. yn wirioneddol yn blocio melanogenesis mewn celloedd melanoma. Gyda hyn, roedd y canlyniadau a welir yn Ffigur 4C yn unol â'r canlyniadau a ddangosir yn Ffigur 4B. Yn yr arbrofion cellog a grybwyllwyd uchod, defnyddiwyd -MSH fel inducer i ysgogi synthesis melanin. -MSH Adroddwyd i rwymo derbynnydd melanocortin 1 (MC1R) ac actifadu cyclase adenylate mewngellol, sydd yn ei dro yn cataleiddio ATP i cAMP ac yn actifadu PKA sy'n ddibynnol ar cAMP. Datgelodd y canlyniadau yn Ffigur 5A fod echdyniad hadau P. dactylifera L. yn atal mynegiant MC1R, a thrwy hynny yn rhwystro cynhyrchu melanin a achosir gan -MSH upregulation cAMP mewngellol wedi'i gyfryngu. At hynny, anactifwyd y llwybr signalau PKA a gyfryngir gan cAMP a chafodd melanogenesis ei atal. I gadarnhau'r casgliad, rydym wedi cynnal yr arbrofion atalydd PKA, ac roedd y data a ddangosir yn Ffigur 4D yn nodi effaith ataliol detholiad hadau P. dactylifera L. (0.147 mg/mL) ar melanogenesis mewn celloedd B16F10 gan H{{ 24}}driniaeth. Mae H89 (N-[2-p-bromocinnamylamino-ethyl]-5-isoquinolinesulphonamide) yn atalydd detholus a grymus o PKA. Mae'r canlyniadau'n dangos bod echdyniad hadau P. dactylifera L. wedi effeithio ar signalau PKA cAMP.

Tyrosinase, TRP1, a TRP2 yw'r tri ensym mawr sy'n rheoleiddio synthesis melanin mewn celloedd mamaliaid [64]. Ar ben hynny, MITF yw'r prif reoleiddiwr trawsgrifio tyrosinase, TRP1, a TRP2, a dyma'r rheolydd pwysicaf o bigmentiad melanocyte [65]. Mae'r canlyniadau yn Ffigur 5A yn dangos bod echdyniad hadau P. dactylifera L. wedi lleihau lefelau mynegiant protein y proteinau hyn sy'n gysylltiedig â melanogenesis, yn atal gweithgaredd tyrosinase, ac wedi lleihau cynnwys melanin mewn celloedd B16F10.

Yn yr astudiaeth hon, P. dactylifera L. dyfyniad hadau atal CREB phosphorylation a PKA activation. Mae'r data hyn yn awgrymu y gall y llwybr cAMP-PKA fod yn gyfrifol am P. dactylifera L. gwrth-melanogenesis a achosir gan hadau (Ffigur 5C).

Adroddwyd bod MAPKs yn modiwleiddio melanogenesis [66]. Mae'r teulu MAPK yn cynnwys tri math o kinases protein, gan gynnwys kinase ymatebol allgellog (ERK), c-Jun N-terminal kinase (JNK), a p38 MAPK. Gall y MAPK p38 actifadu'r protein ymateb cAMP sy'n rhwymo elfen (CREB a CREB yn actifadu mynegiant MITF, sy'n cyfrannu'n gadarnhaol at synthesis melanin [67]. Mae'r canlyniadau yn Ffigur 5C yn darparu tystiolaeth y gallai dyfyniad hadau P. dactylifera L. anactifadu CREB, JNK, a t38, yn eu tro yn atal mynegiant MITF (Ffigur 5A) Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gall effaith antimelanogenig a achosir gan hadau dactylifera L. gael ei gyfryngu trwy is-reoleiddio'r llwybrau PKA. nodwedd amlwg wrth gychwyn nifer o anhwylderau croen, gan gynnwys scaling, wrinkling, a hyperpigmentation [68] Awgrymodd y canlyniadau fod dyfyniad hadau P. dactylifera L. lleihau cynhyrchu melanin, a allai gael ei briodoli i ddisbyddu ROS mewngellol.

Er mwyn asesu effaith dyfyniad hadau P. dactylifera L. ar gynhyrchu melanin cellog, penderfynasom ar y lefelau mRNA mewn celloedd B16F10 a gafodd eu trin â -MSH a P. dactylifera L. dyfyniad hadau. Dangosodd y celloedd a gafodd eu trin gan -MSH lefelau uwch o MITF, tyrosinase, TRP-1, a TRP-2, yn ôl y disgwyl. Yn ddiddorol, dangosodd celloedd echdynnu hadau P. dactylifera L. ostyngiad yn y mynegiant mRNA o'r genynnau hyn sy'n gysylltiedig â melanogenesis. Fodd bynnag, nid oedd unrhyw wahaniaeth ystadegol arwyddocaol rhwng colofnau, a ddangosodd nad yw detholiad hadau P. dactylifera L. yn effeithio ar lefelau mynegiant genynnau MITF, tyrosinase, TRP1, a TRP2.

Dyma ein cynnyrch.

Am fwy o wybodaeth, cliciwch yma.

Adroddwyd mai'r asid ffenolig mawr a geir yn hadau P. dactylifera L. yw asid ferulic [69]. Dangoswyd bod asid ferulic yn atal synthesis melanin yn effeithiol mewn celloedd melanoma B16 trwy atal ffosfforyleiddiad tyrosinase a achosir gan casein kinase 2- mewn modd sy'n dibynnu ar ddos ​​[70]. Mae'r adroddiadau hyn yn cefnogi ein canlyniadau a ddangosir yn Ffigur 1 - cyfrannodd asid ferulic yn echdyniad dŵr hadau P. dactylifera L. at atal melanogenesis mewn celloedd B16F10. Yn sicr, dylid ymchwilio i gydrannau swyddogaethol eraill yn y dyfyniad hadau yn y dyfodol agos.

Dangosodd ein canlyniadau fod echdyniad hadau P. dactylifera L. yn atal melanogenesis mewn celloedd B16F10 trwy is-reoleiddio llwybrau signalau PKA. Felly, gellid defnyddio echdyniad hadau P. dactylifera L. fel cyfrwng gwynnu croen effeithiol.

5. Casgliadau

Dyma'r adroddiad cyntaf ar fecanwaith gweithredu dyfyniad dŵr hadau P. dactylifera L. mewn synthesis melanin. Dangosodd yr astudiaeth bresennol fod y llwybr cAMP/PKA/CREB yn rhan o effaith debigmentu echdyniad hadau P. dactylifera L.. Dangosodd ein canlyniadau fod echdyniad hadau P. dactylifera L. yn atal melanogenesis mewn celloedd B16F10 trwy is-reoleiddio llwybrau signalau PKA. Felly, gellid defnyddio dyfyniad hadau P. dactylifera L. fel asiant antimelanogenesis dermatolegol newydd ac asiant gwynnu croen effeithiol.