Dyfyniad brych mochyn yn cynyddu'r lefelau NAD Cellog mewn Keratinocytes Epidermaidd Dynol

Perlysiau Gorau Ar gyfer Gwrth-heneiddio-Cistanche Llysieuol

Nicotinamide adenine dinucleotide(NAD) yn cofactor clasurol ar gyfer llawer o adweithiau rhydocs ac mae'n bresennol ym mhob cell byw yn y ffurfiau ocsidiedig (NAD plus ) a rhydwytho (NADH). Gelwir NAD plus hefyd yn gyd-swbstrad hanfodol ar gyfer ensymau sy'n cymryd llawer o NAD plus fel sirtuin (SIRT) a poly ADP-ribose polymeras (PARP). Oherwydd bod yr ensymau hyn yn chwarae rhan ganolog mewn amrywiol brosesau biolegol, gan gynnwys atgyweirio DNA, metaboledd mitocondriaidd, a gwrthsefyll straen, mae homeostasis NAD anghydbwysedd yn effeithio ar eu prosesau canolog1. Mae lefelau NAD meinwe/organ yn gostwng gydag oedran, gan arwain at homeostasis NAD anghydbwysedd2–6. Felly, mae consensws bellach bod cynnal lefelau NAD yn arwain at atal a thrin heneiddio a chlefydau sy'n gysylltiedig ag oedran7. Mae NAD yn cael ei fiosynthesis trwy amrywiaeth o lwybrau, gan gynnwys biosynthesis de novo o dryptoffan, y llwybr Preiss-Handler o asid nicotinig, a'r llwybr achub o nicotinamid (NAM)8. Mewn mamaliaid, y llwybr achub yw'r prif lwybr ar gyfer cynnal lefelau NAD cellog9. Yn y llwybr hwn, caiff NAM ei drawsnewid i mononucleotid nicotinamid (NMN) gan NAM phosphoribosyltransferase (NAMPT) ac yna caiff ei drawsnewid i NAD gan NMN adenylyltransferases. Mae riboside nicotinamide (NR) yn cael ei drawsnewid yn NMN gan kinases NR ac yna'n cael ei integreiddio i'r llwybr achub. Dangoswyd bod metabolion canolradd NAD, megis NMN ac NR, yn codi lefelau NAD mewn celloedd a meinweoedd amrywiol ac yn gwella clefydau sy'n gysylltiedig ag oedran10,11.

Mae detholiad placental (PE) wedi'i ddefnyddio'n helaeth mewn meddygaeth draddodiadol ar gyfer gwella clwyfau. Mae AG yn ffynhonnell gyfoethog o gydrannau bioactif niferus, gan gynnwys asidau amino, asidau niwclëig, asidau brasterog, mwynau, fitaminau, hormonau, peptidau bioactif, cytocinau, a ffactorau twf. Mae'n hysbys bod ganddo amrywiol weithgareddau ffarmacolegol, megis effeithiau gwrthlidiol, gwrth-ocsidydd, adfywiol ac imiwnofodiwlaidd12. Felly, mae pigiadau isgroenol a mewngyhyrol o PE dynol (HPE) wedi'u defnyddio'n glinigol i drin sawl clefyd, gan gynnwys symptomau diwedd y mislif a chlefyd cronig yr afu13. At hynny, defnyddir HPE yn glinigol fel asiant gwrth-wrinkle yn bennaf mewn gwledydd Asiaidd oherwydd ei effeithiau ar dwf celloedd a synthesis colagen14. Gan fod y defnydd o HPE wedi'i gyfyngu i gymwysiadau meddygol mewn rhai gwledydd fel Japan, datblygwyd porcine PE (PPE) yn ddiweddar fel dewis arall yn lle HPE a'i ddefnyddio fel cynhwysyn crai mewn bwydydd iechyd a cholur. Dangosodd astudiaeth in vivo gan ddefnyddio model dermatitis cyswllt llygoden fod gan PPE cyfoes effeithiau gwrthlidiol a gwrthocsidiol ar y croen15. Mae astudiaethau clinigol wedi nodi bod PPE amserol yn fuddiol ar gyfer trin clwyfau cronig nad ydynt yn gwella ac ar gyfer atal crychau rhag ffurfio16,17. Ymhellach, cynhaliwyd hap-dreial clinigol, dwbl-ddall, wedi’i reoli gan blasebo mewn menywod sy’n oedolion iach i ddilysu buddion croen amlyncu PPE drwy’r geg a dangosodd fod cyflwr croen y grŵp cymeriant PPE wedi gwella’n sylweddol18. Mae'r adroddiadau hyn yn cefnogi'r cysyniad y gall triniaeth PPE liniaru neu atal heneiddio croen.

Mae AG wedi'i ddefnyddio'n gonfensiynol fel anasiant gwrth-heneiddio, ac mae astudiaethau clinigol niferus wedi sefydlu eieiddo gwrth-heneiddio. Fodd bynnag, mae'r mecanwaith sy'n sail i effeithiau gwrth-heneiddio AG yn parhau i fod yn aneglur. Dangosodd yr adroddiad hwn fod PPE yn cynnwys sawl rhagflaenydd NAD, megis NMN ac NR, ac yn cynyddu lefelau NAD mewngellol mewn keratinocytes epidermaidd dynol arferol (NHEKs). Mae ein canfyddiadau yn rhoi mewnwelediadau newydd i'r mecanwaith y mae PE yn ei ddefnyddio i gyflawni ei effeithiau gwrth-heneiddio trwy gynnal homeostasis NAD mewngellol.

Canlyniadau

Mae PPE yn cynyddu lefelau NAD mewngellol. Er mwyn ymchwilio i weld a yw PPE yn newid taleithiau cellog NAD, fe wnaethom feithrin NHEKs mewn cyfrwng wedi'i ategu â PPE a mesur eu lefelau NAD plus a NADH mewngellol. Dangosodd y canlyniadau fod PPE wedi cynyddu'n sylweddol faint o NAD plus a NADH mewn NHEKs mewn modd dos-ddibynnol (Ffig. 1 A). Roedd cyfanswm lefel NAD (NAD plws plws NADH) o'r celloedd a gafodd eu trin ag 1 mg / ml PPE tua 1.5 gwaith yn uwch na'r un o gelloedd heb eu trin (Ffig. 1 A). Yn ogystal, mewn arbrawf cwrs-amser, gwelwyd drychiad sylweddol NAD plus , NADH, a chyfanswm lefelau NAD ar ôl 4 awr o driniaeth gyda 1 mg / ml PPE (Ffig. 1 B). Roedd {{10}}(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-assay bromid diphenyltetrazolium (MTT) yn cadarnhau bod {{20} }.5-2 mg/mL Ni chafodd PPE unrhyw effaith ar weithgaredd metabolig celloedd, tra bod 5 mg/mL PPE neu'r rheolaeth gadarnhaol (0.2 y cant Triton X-100 [TX-100]) yn arddangos gwenwyndra celloedd sylweddol (Ffig. 1C). Gan mai prin y canfuwyd NAD yn PPE ei hun (data heb ei ddangos), nid oedd yn ymddangos bod effaith cynhyrchu NAD o PPE i'w briodoli i'r mewnlifiad o NAD sy'n deillio o PPE i NHEKs. Felly, mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gall PPE gynyddu lefelau NAD mewngellol. Cynhwysion gweithredol PPE yw moleciwlau bach, nid proteinau. Er mwyn pennu a yw PPE yn rhoi hwb i fiosynthesis NAD cellog trwy'r adwaith NAMPT yn llwybr achub NAD, fe wnaethom berfformio assay adferiad NAD gan ddefnyddio atalydd NAMPT FK866 (Ffig. 2A). Gostyngodd FK866 gyfanswm y lefelau NAD yn sylweddol 24 h ar ôl adio (Ffig. 2B).

Yn ddiddorol, er gwaethaf absenoldeb gweithgaredd NAMPT o fewn NHEKs, ataliodd PPE ostyngiad wedi'i achosi gan FK o NAD mewn modd dos-ddibynnol (Ffig. 2B). Mae llawer o adroddiadau wedi dangos bod PE yn cynnwys proteinau fel cytocinau a ffactorau twf13,19,20. Felly, rhagdybiwyd y gallai rhai proteinau bioactif neu mochyn NAMPT a gynhwysir mewn PPE wella biosynthesis NAD mewngellol mewn NHEKs. I gadarnhau ein rhagdybiaeth, fe wnaethom wahanu PPE yn ffracsiynau pwysau moleciwlaidd uchel ac isel (HMW, LMW) gan ddefnyddio dyfais hidlo allgyrchol (toriad: 3 kDa). Gan fod assay adferiad NAD gan ddefnyddio FK866 wedi dangos effaith PPE ar fiosynthesis NAD yn gliriach nag yn absenoldeb FK866 (Ffig. 1A a 2B), aethom ymlaen i nodi'r cynhwysion actif mewn PPE defnyddio'r assay hwn. Yn annisgwyl, roedd angen crynodiad uchel o 1 mg/mL ar HMW-PPE ar gyfer adfer lefelau NAD yn sylweddol, tra bod yr LMW-PPE yn amlwg wedi lleddfu’r disbyddiad NAD a achoswyd gan FK, hyd yn oed ar grynodiad isel o 0.25 mg/mL (Ffig. .2C a D). Felly, mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu mai'r prif gynhwysion gweithredol mewn PPE yw moleciwlau bach o lai na 3 kDa, yn hytrach na phroteinau fel ffactorau twf a cytocinau.

Mae PPE yn cynnwys rhagflaenwyr NAD, megis NMN ac NR. Fe wnaethom ffracsiynu LMW-PPE ymhellach yn 12 ffracsiynau gan ddefnyddio cromatograffaeth hylif perfformiad uchel cam gwrthdro (HPLC) ac ymchwilio i ba ffracsiwn a gyfrannodd at adfer disbyddiad NAD a achoswyd gan FK. Dangosir cromatogram HPLC nodweddiadol o'r LMW-PPE yn Ffig. 3A. Dangosodd asesiad adferiad Te NAD mai dim ond ffracsiwn 3 oedd yn amlwg yn cynyddu lefelau NAD mewn FK866-trin NHEKs (Ffig. 3B). Mae rhagflaenwyr NAD, fel NMN ac NR, yn dyrchafu lefelau NAD mewngellol heb ymyrraeth NAMPT mewn llinellau cell amrywiol gan gynnwys NHEKs10,21. Gan fod LMW-PPE yn dal i gynyddu cynnwys NAD mewn NHEKs, hyd yn oed pan gafodd NAMPT ei atal gan FK866, fe wnaethom ddamcaniaethu bod rhagflaenwyr NAD a gynhwysir mewn PPE yn gwella cynhyrchiad NAD mewngellol. I brofi'r ddamcaniaeth hon, dadansoddwyd ffracsiwn 3 gan ddefnyddio cromatograffaeth hylif - sbectrometreg màs tandem (LC-MS/MS) i ganfod rhagflaenwyr NAD. Dangosodd y canlyniadau fod tri brig ïon sy'n gyson â NMN (m/z 335→123), NR (m/z 255→123), a NAM (m/z 123→8{0) wedi'u canfod yn ffracsiwn 3 ( Ffig. 3C). Datgelodd y dadansoddiadau meintioli mai'r crynodiad o NMN, NR, a NAM sydd wedi'u cynnwys mewn PPE cyfan oedd 0.22, 17.62, a 0.14 ng/mg, yn y drefn honno (Tabl 1). Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu bod o leiaf dri rhagflaenydd NAD, NMN, NR, a NAM, yn bresennol mewn PPE ac yn cymryd rhan mewn hybu NAD mewngellol.

Ffigur 2. Mae PPE yn lleddfu'r disbyddiad NAD fesul FK866 mewn NHEKs. (A) Llwybr achub biosynthesis NAD. Cafodd te NHEKs eu trin ymlaen llaw gyda FK866 am 30 munud a'u deor â PPE cyfan (B), HMW-PPE (C), neu LMW-PPE (D) ar y crynodiadau a nodir am 24 h. Pennwyd cyfanswm y lefelau NAD gan ddefnyddio pecyn assay NAD plus/NADH. †p<0.05 and ††p<0.01, in comparison with the indicated groups.

Mae rhoi PPE yn amserol ar epidermis dynol wedi'i ail-greu yn cynyddu lefelau meinweoedd NAD. Mae'r prif gynhwysion gweithredol yn effaith PPE sy'n rhoi hwb i NAD yn foleciwlau bach, y gellir disgwyl y bydd ganddynt amsugnedd trawsdermol uwch na phroteinau mwy fel ffactorau twf. Felly, mae'n ymddangos bod defnyddio PPE yn amserol ar y croen yn opsiwn addas ar gyfer cynyddu lefelau NAD mewn meinweoedd croen. Er mwyn ymchwilio i weld a yw rhoi PPE yn amserol yn effeithio ar lefelau NAD yn yr epidermis islaw'r stratum corneum, cafodd yr epidermis dynol wedi'i ail-greu 3-ddimensiwn (RHE) ei drin â PPE ar ochr y stratum corneum a'i feithrin mewn cyfrwng gyda phresenoldeb neu absenoldeb. o FK866 (Ffig. 4A). Cynyddodd cymhwyso PPE yn amserol lefelau NAD 9.1 y cant (ddim yn arwyddocaol) neu 7.3 y cant (sylweddol) yn absenoldeb neu bresenoldeb FK866, yn y drefn honno (Ffig. 4B). Ni chafodd PPE unrhyw effaith ar weithgaredd metabolig celloedd pan brofwyd hyd at 10 mg/mL, tra gostyngodd 1 y cant TX-100 yn sylweddol (Ffig. 4C). Mae canlyniadau Tese yn awgrymu y gallai'r cynhwysion actif mewn PPE ymdreiddio i'r croen is-cornenol a chynyddu lefelau NAD y croen heb achosi effeithiau niweidiol.

Gofynnwch am fwy:

E-bost:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Ffôn: ynghyd â 86 15292862950