Paratoi Asid Ferulic - Cymhleth Ffosffolipid I Wella Hydoddedd, Diddymiad, A Gweithgaredd Atal Melanogenesis Cellog B16F10

Haniaethol

Cefndir

Asid ferulic(FA; 4-hydroxy-3-methoxy sinamic acid) yn bresennol mewn llawer o fwydydd, gan gynnwys gwenith, reis, haidd, ceirch, ffrwythau sitrws, a thomatos [1]. Dangoswyd bod FA yn amddiffyn y croen yn sylweddol rhag straen ocsideiddiol a achosir gan UV [2]. Mae'n dychwelyd difrod ocsideiddiol cronig a achosir gan UVB mewn tiwmorau croen llygod trwy fodiwleiddio mynegiant ffactor twf endothelaidd fasgwlaidd (VEGF), synthase nitrig ocsid anwythadwy (iNOS), ffactor necrosis tiwmor (TNF) - , a interleukin (IL){{7} } [3]. Mae hefyd yn modiwleiddio mynegiant p53 treigledig, Bcl-2, a Bax mewn tiwmorau croen llygod a achosir gan UVB [4]. Mae sawl astudiaeth wedi sefydlu bod FA yn atal mynegiant ensymau sytotocsig a llid-gysylltiedig [5] a metalloproteinases matrics (MMPs), ac yn gwanhau diraddiad ffibrau colagen [6].

Yn ôl astudiaethau perthnasol,cistancheyn llysieuyn cyffredin sy'n cael ei adnabod fel "y llysieuyn gwyrthiol sy'n ymestyn bywyd". Ei brif gydran ywcistanoside, sydd ag effeithiau amrywiol megis gwrthocsidiol, gwrthlidiol, a hyrwyddo swyddogaeth imiwnedd. Y mecanwaith rhwngcistancheagwynnu croenyn gorwedd yn effaith gwrthocsidiol glycosidau cistanche. Mae melanin mewn croen dynol yn cael ei gynhyrchu gan ocsidiad tyrosine wedi'i gataleiddio gan tyrosinase, ac mae'r adwaith ocsideiddio yn gofyn am gyfranogiad ocsigen, felly mae'r radicalau di-ocsigen yn y corff yn dod yn ffactor pwysig sy'n effeithio ar gynhyrchu melanin.Cistancheyn cynnwys cistanoside, sy'n gwrthocsidydd a gall leihau'r genhedlaeth o radicalau rhydd yn y corff, gan atal cynhyrchu melanin.

Yn ogystal, mae gan cistanche hefyd y swyddogaeth o hyrwyddo cynhyrchu colagen, a all gynyddu elastigedd a llewyrch y croen a helpu i atgyweirio celloedd croen sydd wedi'u difrodi. Mae Glycosidau Cistanche Phenylethanol yn cael effaith is-reoleiddio sylweddol ar weithgaredd tyrosinase, a dangosir bod yr effaith ar tyrosinase yn ataliad cystadleuol a gwrthdroadwy, a all ddarparu sail wyddonol ar gyfer datblygu a defnyddio'r cynhwysion gwynnu yn Cistanche. Felly, mae gan cistanche rôl allweddol mewn gwynnu croen. Gall atal cynhyrchu melanin i leihau afliwiad a diflastod; a hyrwyddo cynhyrchu colagen i wella elastigedd croen a pelydriad. Oherwydd y gydnabyddiaeth eang o effeithiau hyn cistanche, mae llawer o gynhyrchion gwynnu croen wedi dechrau trwytho cynhwysion llysieuol fel Cistanche i gwrdd â galw defnyddwyr, gan gynyddu gwerth masnachol Cistanche yncynhyrchion gwynnu croen. I grynhoi, mae rôl cistanche yngwynnu croenyn hollbwysig. Gall ei effaith gwrthocsidiol a'i effaith cynhyrchu colagen leihau afliwiad a diflastod, gwella hydwythedd croen a llewyrch, a thrwy hynny gyflawni effaith gwynnu. Hefyd, mae cymhwysiad eang Cistanche mewn cynhyrchion gwynnu croen yn dangos na ellir diystyru ei rôl mewn gwerth masnachol.

Cliciwch Ar Cistanche Ar Gyfer Gwyno

Gofynnwch am fwy:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Defnyddir cyfadeiladau ffosffolipid yn eang yn y diwydiant fferyllol. Mae ganddynt athreiddedd a diogelwch da ac maent yn cael sylw cynyddol ar gyfer cymhwyso mewn colur. Gan fod ffosffolipidau yn syrffactyddion bioswyddogaethol sydd â phriodweddau hydoddi da, gellir eu defnyddio fel systemau cludo ar gyfer cyffuriau llai hydawdd [7], gan wella treiddiad trawsdermol a chyfradd treiddiad cronnus cyffuriau cyfoes [8]. Mae treiddiad trawsdermol cyffuriau yn cynnwys diddymu, dosbarthu a thryledu i'r croen. Mae priodweddau ffisegol a chemegol, yn enwedig cyfernod rhaniad olew-dŵr y cyffur sydd i'w roi, yn effeithio ar y broses hon [9].

Dulliau

Defnyddiau

Diwylliant celloedd

Paratoi FA-PC gan ddefnyddio anweddiad toddyddion

Sgrinio ar gyfer y gyfran orau o asid ferulic a ffosffolipidau

Ychwanegwyd FA a ffosffolipidau ar gymarebau molar o 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, ac 1:4 at fflasgiau gwaelod crwn 1{10 mL a'u hydoddi mewn ethanol anhydrus (FA, 2.0 mg/mL). Trowyd y cymysgeddau yn gyson ar 40 gradd am 1 h, ac yna tynnwyd yr ethanol anhydrus trwy anweddiad cylchdro. Gosodwyd y cyfadeiladau FA-PC sych mewn sychwr am 24 awr.

Sgrinio ar gyfer tymheredd adwaith gorau posibl ar gyfer paratoi FA-PC

Sgrinio ar gyfer yr amser ymateb gorau posibl ar gyfer paratoi FA-PC

Sgrinio ar gyfer y crynodiad FA gorau posibl

Nodweddu FA-PC

Calorimetreg sganio gwahaniaethol (DSC)

Cyfernod rhaniad hydoddedd a dŵr olew

Hydoddedd

Penderfynwyd ar hydoddedd powdr FA a FA-PC trwy ychwanegu gormodedd o samplau at 10.0 mL [10] o ddŵr neu n-octanol ac yna ysgwyd ar wely swing am 3 h. ar 37 gradd. Cafodd y cymysgeddau eu centrifugio ar 15,000 rpm am 10 munud i gael gwared ar FA anhydawdd. Yna, cafodd y supernatants eu hidlo trwy bilenni 0.45 µm. Wedi hynny, gwanhawyd yr hidlwyr ddeg gwaith gyda methanol, a phenderfynwyd ar gynnwys yr FA gan ddefnyddio sbectrophotometer UV (UV-3150; Shimadzu; Japan).

Paratowyd samplau (10 ml) o FA a FA-PC mewn n-octanol dirlawn mewn dŵr a'u hysgwyd. n-octanol-dŵr dirlawn (10 ml) ei ychwanegu at bob sampl, a'r hylif miscible ei gynhyrfu am 24 h. Wedi hynny, caniatawyd i'r samplau sefyll ar gyfer haenu. Pennwyd y crynodiad FA ym mhob cam gan sbectrophotometreg UV (UV-3150; Shimadzu; Japan). Cynhaliwyd dadansoddiadau triphlyg.

Trylediad in vitro

Perfformiwyd astudiaethau trylediad in vitro gan ddefnyddio celloedd trylediad Franz (TK-20A; Shanghai Xie Kai Financial Information Service Co., Ltd.; China). Yn ogystal, defnyddiwyd pilenni Strat-M®, sef pilenni synthetig gyda nodweddion trylediad sy'n cyfateb yn agosach i groen dynol na modelau croen anifeiliaid [11]. Clampiwyd y pilenni rhwng siambrau rhoddwr a derbynnydd y celloedd trylediad fertigol, a llenwyd y siambrau derbyn â halwynog wedi'i glustogi â ffosffad (PBS; pH 7.4) i hydoddi FA neu FA-PC a sicrhau amodau sinc.

Cyflawnwyd gwahaniad cromatograffig gan ddefnyddio system cyfres Agilent 1260LC (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, UDA) wedi'i chyfarparu â degasser gwactod ar-lein, pwmp cwaternaidd, awtosampler, adran colofn â thermostat, a chanfod arae deuod (DAD). ). Defnyddiwyd meddalwedd Agilent Technologies ChemStation ar gyfer cromatograffaeth hylif (LC; B.02.01), a pherfformiwyd gwahaniad HPLC gan ddefnyddio colofn Eclipse plus-C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm). Y donfedd canfod oedd 0.05 y cant asid asetig (A) a methanol (B) (40:60, v/v). Y gyfradd llif oedd 1.0 mL/munud. Gosodwyd tymheredd y golofn ar 30 gradd. Gwnaed cywiriadau cronnus i ganfod faint o FA a ryddhawyd bob amser. Perfformiwyd yr holl fesuriadau mewn triphlyg, a chafodd y ganran o FA cronnus a dreiddiodd drwy'r bilen (canran Q) ei blotio fel swyddogaeth amser.

Atal melanogenesis

Assay hyfywedd celloedd B16F10

Gwerthuswyd hyfywedd celloedd ac ymlediad celloedd gan ddefnyddio {{0}}(4,{2}}dimethylthiazol-2-yl)-2,5-bromid diphenyltetrazolium (MTT) assay [2]. Cafodd celloedd B16F10 eu rhag-drin gyda chrynodiadau o 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, a 4.0 mg/mL o FA a FA-PC. Ar ôl deori am 48 h, ychwanegwyd hydoddiant MTT (crynodiad terfynol: 5 mg / mL), a deorwyd y celloedd am 3 h ar 37 gradd. Yn olaf, mesurwyd amsugnedd pob sampl ar ddarllenydd microplate ar 570 nm i gael canran y celloedd hyfyw.

Mesur cynnwys melanin

Mesurwyd cynnwys melanin fel y disgrifiwyd yn flaenorol [6] gyda rhai addasiadau. Cafodd celloedd melanoma B16F10 eu hadu (2 × 105 o gelloedd / ffynnon mewn 3 mL o ganolig) mewn platiau meithrin chwe ffynnon a'u deor dros nos i ganiatáu i gelloedd lynu. Ar ddiwedd y driniaeth, golchwyd y celloedd â PBS a'u gorchuddio â 1 M NaOH sy'n cynnwys 10 y cant dimethyl sulfoxide (DMSO) am 30 munud ar 80 gradd. Mesurwyd yr amsugnedd (dwysedd optegol; OD) ar 475 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate. Cyfrifwyd cynnwys melanin gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol:

Dadansoddi data

Defnyddiwyd prawf-t Dunnett i bennu arwyddocâd ystadegol y gwahaniaethau rhwng mesuriadau cymedrig pob grŵp a gafodd ei drin a mesuriadau'r grŵp rheoli. gwerthoedd P<0.05 were considered statistically significant.

Canlyniadau a thrafodaeth

Y paratoad gorau posibl o FA-PC

Cyfernod rhaniad hydoddedd ac olew-dŵr FA-PC

Mae Tabl 1 yn dangos hydoddedd FA, PM, a FA-PC mewn dŵr ac mewn n-octanol. Dangosodd FA-PC hydoddedd da mewn dŵr a n-octanol (1.68 a 7.77 mg / mL, yn y drefn honno), a chanfuwyd bod hydoddedd FA-PC mewn n-octanol yn sylweddol uwch na hydoddedd FA (1.34 mg / mL) .

Mae lipophilicity fel arfer yn cael ei fesur fel cyfernod rhaniad (P) rhwng dau gyfnod anghymysgadwy. Fe'i mynegir yn nodweddiadol fel log P. Penderfynwyd ar gyfernodau rhaniad ymddangosiadol FA a FA-PC yn y system n-octanol/dŵr. Dangosodd y canlyniadau fod log P yn uwch ar gyfer FA-PC (1.21) nag ar gyfer FA (0.99) o'i fesur ar pH 5.0. Roedd y log P ychydig yn uwch yn gysylltiedig â hydoddedd n-octanol llawer gwell FA-PC o'i gymharu â hydoddedd FA-PC. Gellir esbonio hydoddedd cynyddol FA-PC mewn n-octanol gan nodweddion amorffaidd yr FA-PC. Gan fod cydberthynas dda rhwng lipophilicity a athreiddedd, mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gellid gwella athreiddedd trawsdermol FA trwy ei gymhwyso fel cymhleth ffosffolipid.

DSC 

Mae DSC yn ddull dibynadwy ar gyfer sgrinio cydnawsedd cyffuriau-excipient ac mae'n darparu'r wybodaeth fwyaf posibl am ryngweithio posibl rhwng y cyffuriau a'r sylweddau [10]. Gellir casglu presenoldeb rhyngweithiad o ddileu copaon endothermig, ymddangosiad copaon newydd, newidiadau mewn siâp a dyfodiad brig, tymheredd brig / ymdoddbwynt, ac arwynebedd neu enthalpi cymharol. Mae Ffigur 1 yn dangos thermogramau DSC FA (Ffig. 1a), PC (Ffig. 1b), PM (Ffig. 1c), a FA-PC (Ffig. 1d). Mae gan y gromlin thermol ar gyfer FA pur doddi endothermig miniog nodweddiadol ar tua 172.7 gradd, sy'n arwydd o'i gyflwr anhydrus a grisialaidd, tra bod cyflwr ffosffolipidau yn arddangos mân uchafbwynt endothermig ar 231.7-248.6 gradd. Nid yw'r gromlin DSC ar gyfer PM, sy'n cynnwys y proffiliau thermol arosodedig ar gyfer FA a ffosffolipidau, yn dangos unrhyw arwyddocaolnewidiadau ac eithrio symudiad bach i dymheredd uwch (175.9 gradd ), sy'n dangos nad oes unrhyw ryngweithio rhwng y cydrannau. Mae gan FA-PC un brig mawr ar 158.2 gradd , syddyn wahanol i frig yr FA, sy'n dangos rhyngweithio rhwng FA a PC. Mae ein canlyniadau'n awgrymu bod gwahanol raddau o ryngweithio a/neu amorffeiddio yn wahanolgellir cael cymysgeddau neu gymhlygion yn dibynnu ar eu dull paratoi ac mae hyn yn gysylltiedig â'r gwahaniaethau mewn hydoddedd.

FTIR

Gall sbectrosgopeg FTIR gadarnhau ffurfiant FA-PC trwy gymharu'r sbectrwm FA-PC â sbectrwm FA pur. Mae Ffigur 2 yn dangos sbectra FTIR FA, PC, PM, a FA-PC. Mae'r sbectrwm FA (Ffig. 2a) yn dangos band ymestyn hydrocsyl nodweddiadol ar 3436 cm-1. Daw'r cyfan yn sengl eang yn y sbectrwm FA-PC, PM, a ffosffolipid (Ffig. 2b-d). Mae sbectrwm FA (Ffig. 2a) yn arddangos copaon nodweddiadol ar 1620 cm−1 (C=C ymestyn) a 1450 cm−1 (C2C ymestyn cylch aromatig). Yn y sbectrwm FA-PC (Ffig. 2b), nid yw'r ddau gopa hyn yn weladwy, yn ôl pob tebyg oherwydd gwanhau neu dynnu, neu gysgodi gan y moleciwl ffosffolipid.

Mae'r sbectrwm FA (Ffig. 2a) yn arddangos copaon carboxyl annirlawn nodweddiadol ar 1691 cm−1 (C=O ymestyn), a 1664 cm−1 (C=C ymestyn). Yn y sbectrwm FA-PC (Ffig. 2b), nid yw'r ddau gopa hyn yn weladwy, mae'n debyg oherwydd y grymoedd deniadol rhwng y gwefr carboxyl negyddol yn FA a'r gwefr nitrogen positif mewn ffosffolipidau. Mae'r sbectrwm ffosffolipid (Ffig. 2d) wedi cyrraedd ei anterth ar 1733 cm−1 (C=O ymestyn), 1238 cm−1 (P1691O ymestyn), a 1087 cm−1 (P–O). -C ymestyn). Mae'r

SEM

Ymchwiliwyd i forffolegau arwyneb FA, PC, PM, a FA-PC gan ddefnyddio SEM (Ffig. 3). Yn Ffig. 3c, mae FA yn ymddangos yn grisialog, bron yn hirsgwar, tra bod gronynnau FA-PC (Ffig. 3a) yn ymddangos yn afreolaidd eu siâp gydag arwyneb llyfn. Mae siâp ac arwyneb FA-PC yn sylweddol wahanol o gymharu â siâp FA a PC (Ffig. 3b). Mae'n debyg bod hyn i'w briodoli i gymysgadwyedd llwyr FA yn PC. Yn y sgan PM (Ffig. 3d), mae'n hawdd gwahaniaethu rhwng FA a ffosffolipidau.

Astudiaethau trylediad in vitro

Yn ddiweddar, cyflwynwyd y bilen Strat-M® synthetig yn lle astudiaethau trylediad in vitro croen dynol [11]. Mae'r bilen Strat-M® yn cynnwys dwy haen o polyethersulfone sy'n gallu gwrthsefyll trylediad. Mae'r haenau polyethersulfone yn gorwedd ar un haen o polyolefin, sy'n fwy agored a thryledol. Nodweddir y bilen synthetig hon gan amrywioldeb swp-i-swp isel, gan ddarparu data mwy cyson. Ar ben hynny, dangoswyd bod data trylediad ar gyfer pilenni Strat-M® yn cyd-fynd yn dda â rhai croen dynol [11].

Er mwyn gwerthuso dylanwad PC ar briodweddau trylediad in vitro FA, cynllwyniwyd canran Q FA a FA-PC yn erbyn amser. Dangosodd y canlyniadau yn y papur presennol duedd bod ffosffolipidau wedi cynyddu treiddiad FA yn sylweddol i bilen Strat-M®. Yn ogystal, bu FA-PC yn byw yn hirach ar bilen Strat-M® nag y gwnaeth FA (Ffig. 4). Felly, gall ymgorffori ffosffolipidau yn FA gynyddu ei amser preswylio yn y stratum corneum a'i wneud yn fwy addas ar gyfer treiddiad croen. O ran yr amser treiddio, er y dywedwyd bod gan bilen Strat-M® gydberthynas dda â rhai croen dynol [11], mae ganddi hefyd wahaniaethau gweadedd o'i gymharu â chroen dynol. Gellir cynnwys ffactorau dylanwad yr amseroedd treiddiad hydoddydd, crynodiad y cyfansoddion, gwerth pH, ​​et al. Dylid gwneud mwy o arbrofion wrth ddadansoddi yn y dyfodol.

Atal melanogenesis

Effaith FA-PC ar synthesis melanin

Yn ôl y llenyddiaeth, gall FA atal gweithgaredd tyrosinase cellog a melanogenesis mewn celloedd melanoma B16F10 trwy is-reoleiddio'r proteinau cellog c-kit ac ERK1/2 [12]. Yn yr astudiaeth bresennol, gostyngodd FA-PC gynnwys melanin mewn celloedd B16F1{{10}} yn fwy amlwg na FA mewn crynodiadau a brofwyd o 0.25, 0.5, a 1.0 mg/mL (Tabl 2). Felly, fe wnaethom benderfynu bod FA-PC yn fwy effeithiol na FA wrth atal synthesis melanin mewn celloedd B16F10.

Casgliad

Cyfraniadau awduron

Mae LL a LY wedi gwneud cyfraniadau sylweddol at y broses o lunio a dylunio, neu gaffael data, neu ddadansoddi a dehongli data; Mae XY a WX wedi bod yn ymwneud â drafftio’r llawysgrif neu ei diwygio’n feirniadol ar gyfer cynnwys deallusol pwysig; ac mae ZJ a DY wedi rhoi cymeradwyaeth derfynol i'r fersiwn sydd i'w chyhoeddi. Darllenodd a chymeradwywyd y llawysgrif derfynol gan bob awdur.

Diolchiadau

Cefnogwyd y gwaith hwn gan Sefydliad Cenedlaethol Gwyddoniaeth Naturiol Tsieina (31501402).

Diddordebau cystadleuol

Mae'r awduron yn datgan nad oes ganddynt unrhyw fuddiannau cystadleuol.

Derbyniwyd: 27 Rhagfyr 2016 Derbyniwyd: 14 Mawrth 2017

Wedi'i gyhoeddi ar-lein: 22 Mawrth 2017

Cyfeiriadau