Effaith Gwynnu Cymysgedd Peptid Newydd Trwy Reoleiddio Biogenesis Melanosome, Trosglwyddo A Diraddio Rhan 1

ABSENOLDEB

Mae peptidau yn gadwyni byr o asidau amino sydd wedi'u cysylltu gan fondiau peptid. Fe'u defnyddir yn eang fel cynhwysion gweithredol effeithiol a biocompatible yn y diwydiant cosmetig. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ddatblygu cymysgedd peptid newydd a nodi ei effaith gwrth-bigmentu ar felanocytes a keratinocytes. Datgelodd ein canlyniadau fod cymysgedd peptid yn atal biogenesis melanosom trwy reoleiddio ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia, ffactor allweddol o melanogenesis mewn melanocytes. A gwelsom fod y cymysgedd peptid yn atal y nifer sy'n cymryd melanosom trwy leihau derbynnydd a weithredir gan broteas 2, derbynnydd sy'n gysylltiedig â ffagocytosis mewn keratinocytes. Ar ben hynny, fe wnaeth y cymysgedd peptid actifadu'r system awtophagy gan arwain at ddiraddio melanosomau a drosglwyddwyd mewn keratinocytes. Aseswyd effaith gwrth-bigmentu cymysgedd peptid aml-darged mewn model cyfatebol croen dynol (MelanoDerm). Gostyngwyd cynnwys melanin yn yr haen epidermaidd yn sylweddol trwy driniaeth amserol o gymysgedd peptid, sy'n awgrymu y gellir ei gymhwyso fel deunydd colur newydd sydd âgwynnuswyddogaeth.

Yn ôl astudiaethau perthnasol,cistancheyn llysieuyn cyffredin sy'n cael ei adnabod fel "y llysieuyn gwyrthiol sy'n ymestyn bywyd". Ei brif gydran ywcistanoside, sydd ag effeithiau amrywiol megis gwrthocsidiol, gwrthlidiol, a hyrwyddo swyddogaeth imiwnedd. Y mecanwaith rhwng cistanche agwynnu croenyn gorwedd yn yr effaith gwrthocsidiol ocistancheglycosidau. Mae melanin mewn croen dynol yn cael ei gynhyrchu gan ocsidiadtyrosincataleiddio gantyrosinase, ac mae'r adwaith ocsideiddio yn gofyn am gyfranogiad ocsigen, felly mae'r radicalau di-ocsigen yn y corff yn dod yn ffactor pwysig sy'n effeithio ar gynhyrchu melanin. Mae cistanche yn cynnwys cistanoside, sy'n gwrthocsidydd a gall leihau'r genhedlaeth o radicalau rhydd yn y corff, fellyatal cynhyrchu melanin.

Cliciwch Ar cong rong Cistanche For Whitening

Gofynnwch am fwy:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Geiriau Allweddol

Autophagy · Melanosome · Ffactor trawsgrifio cysylltiedig â microphthalmia ·PAR-2· Peptid

RHAGARWEINIAD

Cynhyrchir melanin gan felanocytes sydd wedi'u lleoli yn haen waelodol yr epidermis i amddiffyn celloedd croen rhag asiantau allanol niweidiol, gan gynnwys pelydrau uwchfioled (UV), llwch mân, a chyfansoddion cemegol amrywiol [1]. Mae'r ffactorau sy'n cael eu secretu o keratinocytes yn bennaf gan arbelydru UV, gan gynnwys hormon ysgogol alffa-melanocyte (MSH), hormon adrenocorticotropic, ffactor bôn-gelloedd, endothelin 1, ffactor twf hepatocyte, ffactor twf ffibroblast sylfaenol, a ffactor ysgogol cytref granulocyte-macrophage, ysgogi mae pob derbynnydd ar wyneb melanocytes a melanin yn cael ei gynhyrchu mewn organelle sy'n gysylltiedig â lysosom o'r enw melanosom [2-7]. Ymhlith y ffactorau hyn, mae MSH yn hormon peptid bach sy'n deillio o pro-opiomelanocortin. Mae rhwymo -MSH i dderbynnydd melanocortin 1 yn cynyddu'r lefel cylchol adenosine monophosphate (cAMP) sy'n actifadu protein kinase A (PKA) [8,9]. Yna mae PKA ffosfforylates protein rhwymo elfen ymatebol cAMP (CREB) a thrawsgrifio o ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microphthalmia (MITF) yn cael ei achosi gan phospho-CREB [10]. Mae MITF yn gweithredu fel ffactor trawsgrifio ar gyfer tyrosinase, protein sy'n gysylltiedig â tyrosinase 1 (TYRP1), a dopachrome tautomerase (Dct neu TYRP2), ensymau allweddol mewn melanogenesis, ac yn cymell eu mynegiant [11]. Mae'r melanosom aeddfed yn symud tuag at y blaen dendrite, ac mae'r cymhleth protein modur melanosom sy'n cynnwys Rab27a, Melanophilin, a Myosin Va yn chwarae rhan yn y broses hon [{12-14]. Mae melanophilin, sydd â pharthau rhwymol ar gyfer Rab27a, Myosin Va, ac actin, ar yr un pryd yn rhwymo Rab27a ar yr wyneb melanosom ac â Myosin Va gan ryngweithio â'r ffilament actin. Mae angen cydosod y proteinau modur hyn ar gyfer cludo melanosom i'r blaenau dendrite ar hyd y ffilament actin [15- 19]. Yn dilyn hynny, trosglwyddwyd melanosomau o flaenau dendrite melanocytes i keratinocytes cyfagos ac mae melanosomau corfforedig wedi'u lleoli yn ardal periniwclear keratinocytes [20,21]. Er bod ffurfio melanin yn iawn yn bwysig ar gyfer amddiffyn celloedd arferol, mae cynhyrchu melanin yn ormodol yn achosi hyperpigmentation, gan gynnwys melasma, brychni haul, a lentigo solar, a all arwain at straen meddwl ac ansawdd bywyd gwael [22,23]. Felly, mae galw am ddatblygu asiantau gwynnu boddhaol heb sgîl-effeithiau megis llid y croen, anwythiad alergedd, a charcinogenesis, ac mae llawer o astudiaethau sy'n targedu gwahanol fecanweithiau gwynnu wedi'u cynnal [24,25].

Mae peptidau yn gadwyni byr o asidau amino, yr uned leiaf o brotein, wedi'i gysylltu â'i gilydd gan fondiau peptid. Yn ddiweddar, mae ymchwil a datblygiad helaeth ynghylch peptidau fel cynhwysion gweithredol wedi'u perfformio yn y diwydiannau colur a fferyllol oherwydd eu gallu biocompatibility uchel a dynwared protein [26,27].

Fe wnaethon ni sgrinio ein llyfrgell peptidau a dod o hyd i bedwar peptid sy'n effeithio ar atal synthesis melanin, mudo a throsglwyddo yn ogystal â gweithgaredd sy'n hyrwyddo diraddio melanosom. Yn dilyn hynny, nod yr astudiaeth hon oedd ymchwilio i weithgaredd gwynnu cymysgedd peptid sy'n cynnwys pedwar peptid â'r un gymhareb molar.

DULLIAU

Defnyddiau

Prynwyd y resin CTC 2- a ddefnyddir yn y synthesis peptid gan BeadTech (Seoul, Korea). Prynwyd asid Fmoc-amino, hydroxy benzotriazole (HOBt), ac N, N, N’, N’-tetramethyl-O-(1H-benzotriazole- 1-yl)wronium hexafluorophosphate (HBTU) gan CS Bio Co. San Francisco, CA, UDA). Yr adweithyddion a ddefnyddir yn y synthesis, gan gynnwys dimethylformamide (DMF), N, N-diisopropylethylamine (DIEA), piperidine, asid trifluoroacetic (TFA), thioanisole, ffenol, ethan dithiol (EDT), triisopropylsilane (TIS), ac ether diethyl, oedd prynu oddi wrth Daejung Chemical & Metal Co, Ltd (Seoul, Korea).

Prynwyd powdwr Eryr Addasedig (DMEM) Dulbecco ar gyfer melanocytes a serwm buchol ffetws (FBS) gan Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, UDA), a phrynwyd cyfryngau hylif DMEM a phenisilin / streptomycin gan Welgene Inc. (Gyeongsan, Korea) . Sodiwm deucarbonad, sodiwm hydrocsid, arbutin, 3-[4,5-dimethylthiazole-2-yl]-2,{5}}bromid diphenyltetrazolium (MTT), 3,{{ Prynwyd 7}}dihydroxy-L-phenylalanine (LDOPA), trypsin, a rapamycin oddi wrth Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, UDA), a phrynwyd Solvable oddi wrth PerkinElmer (Waltham, MA, UDA). Prynwyd gwrthgyrff yn erbyn Rab27A, Melanophilin, MITF, Tyrosinase, ac Actin gan Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, UDA), a gwrthgyrff yn erbyn Beclin-1, LC3, t62, p-CREB, a p-ERK1/2 eu prynu oddi wrth Cell Signaling Technology (Danvers, MA, UDA). Perfformiwyd synthesis preimio yn Cosmo GENETECH (Seoul, Korea) a'i ddefnyddio ymhellach yn yr arbrawf (Tabl 1).

Synthesis peptid

Roedd resin CTC â chynhwysedd o 0.84 mmol/g yn destun adwaith chwyddo mewn adweithydd yn cynnwys hydoddydd DMF. Yna, ychwanegwyd 2 gyfwerth o asid amino terfynol Fmoc-C a 2.5 cyfwerth â DIEA yn DMF i'r adweithydd a bu'n destun adwaith pellach am 2 h. Cadarnhawyd terfyniad yr adwaith gyda phecyn prawf Kaiser (Sigma-Aldrich), a golchwyd y resin â DMF. Tynnwyd y Fmoc trwy ychwanegu 20 y cant piperidine / DMF ddwywaith at y resin wedi'i olchi. Cadarnhawyd terfyniad yr adwaith gyda phecyn prawf Kaiser, a golchwyd y resin gyda DMF. Yn dilyn hynny, ailadroddwyd y broses ganlynol yn ôl y dilyniant o asidau amino yn y derfynell C i gyfeiriad terfynell N. Ar ôl 2 gyfwerth ag asid Fmoc-amino, 2 gyfwerth â HBTU, 2 gyfwerth â HOBt, a 2.5 cyfwerth â DIEA yn DMF, perfformiwyd yr adwaith am 2 h. Cadarnhawyd terfyniad yr adwaith gyda phecyn prawf Kaiser, a golchwyd y resin gyda DMF. Tynnwyd y Fmoc o asid amino trwy ychwanegu 20 y cant piperidine / DMF ddwywaith i'r resin wedi'i olchi. Cadarnhawyd terfyniad yr adwaith gyda phecyn prawf Kaiser, a golchwyd y resin gyda DMF. Yn achos Pep-3, perfformiwyd cydlyniad asid Ferulic drwy'r weithdrefn ganlynol. Ar ôl 2 gyfwerth o asid Ferulic, 2 gyfwerth â HBTU, 2 gyfwerth â HOBt, a 2.5 cyfwerth â DIEA eu hychwanegu yn DMF, perfformiwyd yr adwaith am 2 h. Cadarnhawyd terfyniad yr adwaith gyda phecyn prawf Kaiser, a golchwyd y resin gyda DMF. Ar ôl cwblhau'r synthesis terfynol, ychwanegwyd hydoddiant holltiad (TFA:H2O: Ohioans ole:phenol:EDT: TIS=81.5:5:5:5:2.5:1) i wahanu'r peptid o'r resin . Yna cafodd y peptid ei waddodi gan ddefnyddio ether diethyl a'i olchi bum gwaith. Yn dilyn hynny, perfformiwyd sychu i adennill y cynnyrch peptid terfynol.

Nodwyd purdeb y peptid wedi'i syntheseiddio gan ddadansoddiad HPLC (Thermo Fisher Scientific/U{{0}}), a chafodd ei ganfod ar UV 214 nm o dan y gyfradd llif o 1 ml/munud o dan y cyfnod symudol {{ 5}}.1 y cant TFA mewn dŵr / 0.1 y cant TFA mewn asetonitrile gan ddefnyddio colofn C18 (Agilent, Pursuit XRs, 250 × 4.6 mm, 5 m, 100Å).

Er mwyn canfod y pwysau moleciwlaidd, cynhaliwyd dadansoddiad LC-MS/MS (AB SCIEX, 3200 Q-trap), a chafodd ei ganfod gan MS/MS ar gyfradd llif o {{7 }}.25 ml/munud o dan y cyfnod symudol 0.1 y cant asid fformig mewn dŵr/0.1 y cant asid ffurfig mewn graddiant asetonitrile gan ddefnyddio colofn C18 (Agilent, Pursuit XRs, 100 × 2.0 mm, 5 m, 100Å) . Roedd yr amodau dadansoddi MS/MS yn cynnwys modd ESI Positive, Ffynhonnell/ Nwy: CUR=20, CAD=Uchel, IS=5500, TEM=350, GS1=50 , GS2=50/Compound DP=50–80, EP=10, CE=10–50, a CES=1–10 (Tabl 2).

Diwylliant celloedd

Prynwyd y celloedd melanoma B16F10 a ddefnyddiwyd yn yr arbrawf hwn gan ATCC (Manassas, VA, UDA). Deorwyd celloedd B16F10 mewn cyfryngau DMEM sy'n cynnwys 10 y cant o FBS anweithredol â gwres, 1 y cant penisilin / streptomycin, a 1.5 g/L sodiwm bicarbonad ar 37 gradd ac o dan yr amod o 5 y cant CO2.

Prynwyd keratinocytes HaCaT gan CLS (Eppelheim, yr Almaen). Deorwyd celloedd HaCaT mewn cyfryngau DMEM sy'n cynnwys 10 y cant o FBS anweithredol â gwres ac 1 y cant penisilin / streptomycin ar 37 gradd ac o dan yr amod o 5 y cant CO2.

Hyfywedd cell

Cafodd celloedd B16F10 eu hadu mewn 48-plât ffynnon ar ddwysedd o 8 × 103 o gelloedd/ffynnon a'u deor am 16 awr. Yna cawsant eu trin â chrynodiadau amrywiol o gymysgedd peptid mewn cyfryngau sy'n cynnwys 2 y cant o FBS am 3 diwrnod. Ar ôl deori, cafodd 20 l o 4 mg/ml MTT ei drin ym mhob ffynnon am 4 awr a chafodd y cyfrwng ei dynnu. Yn dilyn hynny, cafodd celloedd eu trin â 500 l o DMSO i ddiddymu formazan. Mesurwyd amsugnedd ar 570 nm gan ddefnyddio sbectroffotomedr (Dyfeisiau Moleciwlaidd, San Jose, CA, UDA).

Assay cynnwys Melanin

Cafodd celloedd B16F10 eu hadu mewn 6-plât ffynnon ar ddwysedd o 5 × 104 cell/ffynnon a'u deor am 16 h. Yna cawsant eu trin â chrynodiadau amrywiol o gymysgedd peptid mewn cyfryngau sy'n cynnwys 2 y cant o FBS am 3 diwrnod. I gymell cynhyrchu melanin, cafodd 100 ng/ml -MSH ei gyd-drin a defnyddiwyd 200 M arbutin fel rheolaeth gadarnhaol. Casglwyd a lysiwyd y celloedd trwy eu trin â 200 l o 1 M NaOH a mesurwyd amsugnedd ar gyfer lysate ar 490 nm gyda sbectroffotomedr.

Prawf gweithgaredd tyrosinase

Cafodd celloedd B16F10 eu hadu mewn 6-plât ffynnon ar ddwysedd o 5 × 104 cell/ffynnon a'u deor am 16 h. Yna cawsant eu trin â chrynodiadau amrywiol o gymysgedd peptid mewn cyfryngau sy'n cynnwys 2 y cant o FBS am 3 diwrnod. I gymell cynhyrchu melanin, cafodd 100 ng/ml-MSH ei gyd-drin a defnyddiwyd 200 M arbutin fel rheolaeth gadarnhaol. Cafodd pob ffynnon ei thrin â 200 l o glustog lysis (Sigma-Aldrich) i gasglu'r lysate. Ar ôl meintioli'r protein gan ddefnyddio pecyn BCA (Thermo Fisher Scientific), deorwyd 90 g o brotein o bob grŵp gyda 20 l o 10 mM L-DOPA mewn 96- plât ffynnon am 30 munud ar 37 gradd . Mesurwyd amsugnedd y cymysgedd ar 475 nm gyda sbectroffotomedr.

Arwahanrwydd melanosome

Cafodd celloedd B16F1{{10}} eu hadu mewn 6-plât ffynnon ar ddwysedd o 5 × 104 cell/ffynnon a'u deor am 16 h. Cafodd celloedd eu trin â 100 ng/ ml-MSH am 72 h i ysgogi synthesis melanin a'u cynaeafu trwy driniaeth trypsin / EDTA. Yna golchwyd celloedd â 10 ml o swcros 0.25 M (mewn byffer HEPES 10 mM) a'u hailddarparu mewn 10 ml o hydoddiant swcros 0.25 M. Yn dilyn hynny, ar ôl rhewi gyda nitrogen hylifol, perfformiwyd dadmer ar 37 gradd, a ailadroddwyd 10 gwaith. Ar ôl centrifugio ar 1,000 g am 10 munud, casglwyd y supernatant a'i allgyrchu ymhellach am 45 munud ar 20,630 g a 4 gradd . Yn dilyn hynny, cafodd y belen ei hail-ategu gyda DPBS a'i storio ar -80 gradd cyn ei ddefnyddio.

Prawf derbyn melanosom

Cafodd celloedd HaCaT eu hadu mewn 6-plât ffynnon ar ddwysedd o 1 × 105 o gelloedd/ffynnon a'u deor am 16 h. Yna cawsant eu trin â'r cymysgedd peptid mewn cyfryngau di-serwm am 1 h a'u trin ymhellach â melanosomau ynysig am 40 h. Cafodd y celloedd eu lysed trwy drin â 200 l o 1 M NaOH a mesurwyd amsugnedd ar gyfer lysate ar 490 nm gyda sbectroffotomedr. At hynny, perfformiwyd staenio melanosom gan ddefnyddio Pecyn Stain Fontana-Masson (ScyTek Laboratories, Logan, UT, UDA), a chanfuwyd delweddau o gelloedd gan ficrosgop ysgafn.

Prawf diraddio melanosom

Cafodd celloedd HaCaT eu hadu mewn 6-plât ffynnon ar ddwysedd o 1 × 105 o gelloedd/ffynnon a'u deor am 16 h. Cawsant eu trin ymlaen llaw â melanosomau ynysig mewn cyfryngau di-serwm am 48 h a'u trin hefyd â'r cymysgedd peptid am 72 h. Defnyddiwyd un micromole o rapamycin fel rheolaeth gadarnhaol. Cafodd y celloedd eu lysed trwy drin â 200 l o 1 M NaOH a mesurwyd amsugnedd ar gyfer lysate ar 490 nm gyda sbectroffotomedr. At hynny, perfformiwyd staenio melanosom gan ddefnyddio Pecyn Stain Fontana-Masson, a chanfuwyd delweddau o gelloedd gan ficrosgop ysgafn.

Dadansoddiad mynegiant genynnau (RT-PCR)

Cafodd celloedd B16F10 eu hadu mewn 6-plât ffynnon ar ddwysedd o 5 × 104 cell/ffynnon a'u deor am 16 h. Yna cawsant eu trin â chrynodiadau amrywiol o gymysgedd peptid mewn cyfryngau sy'n cynnwys 2 y cant o FBS am 3 diwrnod. I gymell cynhyrchu melanin, cafodd 100 ng/ml-MSH ei gyd-drin a defnyddiwyd 200 M arbutin fel rheolaeth gadarnhaol. Cafodd RNA ei ynysu o gelloedd gan ddefnyddio pecyn echdynnu RNA (Qiagen, yr Almaen), a pherfformiwyd synthesis cDNA gan ddefnyddio premix RT-PCR (iNtRON Biotechnology, Seongnam, Korea). Ar ôl paratoi'r cymysgedd adwaith gyda PCR premix (iNtRON Biotechnology) a primers ar gyfer pob genyn, perfformiwyd PCR gan ddefnyddio peiriant PCR (Eppendorf, yr Almaen). Yn dilyn hynny, penderfynwyd patrymau mynegiant mRNA gan electrofforesis gel agarose.

Cafodd celloedd HaCaT eu hadu mewn 6-plât ffynnon ar ddwysedd o 3 × 105 o gelloedd/ffynnon a'u deor am 16 h. Yna cawsant eu trin â chrynodiadau amrywiol o gymysgedd peptid yn y cyfryngau di-serwm am 1 h a'u trin hefyd â trypsin 4U am 16 h. Casglwyd y celloedd a pherfformiwyd RT-PCR yn yr un modd ag a ddisgrifir uchod.

Dadansoddiad mynegiant protein (blotio gorllewinol)

Cafodd celloedd B16F10 eu hadu mewn 6-plât ffynnon ar ddwysedd o 5 × 104 cell/ffynnon a'u deor am 1 diwrnod. Yna cawsant eu trin â chrynodiadau amrywiol o gymysgedd peptid mewn cyfryngau sy'n cynnwys 2 y cant o FBS am 3 diwrnod. I gymell cynhyrchu melanin, cafodd 100 ng/ml -MSH ei gyd-drin a defnyddiwyd 200 M arbutin fel rheolaeth gadarnhaol. Cafodd y celloedd eu gorchuddio â byffer lysis a chafodd y protein ei fesur gan ddefnyddio pecyn BCA. Gwahanwyd ugain microgram o brotein ar gel polyacrylamid 8 y cant a'i drosglwyddo'n electrofforetig i bilenni fflworid polyvinylidene. Cafodd pilenni eu rhwystro mewn 5 y cant w/v llaeth sgim yn PBS gyda 0.5 y cant Tween 20 (PBS-T). Perfformiwyd deori gyda gwrthgyrff cynradd wedi'i wanhau mewn hydoddiant blocio dros nos ar 4 gradd ac yna golchi â PBS-T. Cafodd y gwrthgyrff eilaidd priodol eu gwanhau mewn toddiannau blocio a'u deor â'r pilenni am 1 awr ar dymheredd yr ystafell ac yna eu golchi â PBS-T. Delweddwyd y pilenni trwy adweithydd canfod Gorllewinol (Elpis Biotech, Daejeon, Korea) gyda Gel Doc (Bio-Rad, Hercules, CA, UDA).

Ar gyfer dadansoddi p-CREB a p-ERK, cafodd celloedd B16F10 eu hadu mewn 6-plât ffynnon ar ddwysedd o 3 × 105 o gelloedd/ffynnon a'u deor am 1 diwrnod. Yna cawsant eu trin â chrynodiadau amrywiol o gymysgedd peptid mewn cyfryngau sy'n cynnwys 2 y cant o FBS. Yr amseroedd deori oedd 30 munud ar gyfer dadansoddi p-CREB a 10 munud ar gyfer dadansoddi p-ERK. I gymell cynhyrchu melanin, cafodd 100 ng/ml -MSH ei drin ar y cyd, a defnyddiwyd 200 M arbutin fel rheolaeth gadarnhaol. Perfformiwyd blotio gorllewinol gan ddefnyddio proteinau ynysig yn yr un modd ag a ddisgrifir uchod.

Cafodd celloedd HaCaT eu hadu mewn 6-plât ffynnon ar ddwysedd o 3 × 105 o gelloedd/ffynnon a'u deor am 16 h. Yna cawsant eu trin â chrynodiadau amrywiol o gymysgedd peptid mewn cyfryngau di-serwm am 3 diwrnod. Cafodd dau gant o nanogramau o rapamycin eu trin am 3 awr fel rheolaeth gadarnhaol. Perfformiwyd blotio gorllewinol gan ddefnyddio proteinau ynysig yn yr un modd ag a ddisgrifir uchod.

Dadansoddiad cyfatebol croen

I brofi effaith gwynnu cymysgedd peptid gan ddefnyddio cyfwerth croen, paratowyd sampl liposome fel a ganlyn. Cafodd y cymysgedd peptid ei hydoddi mewn dŵr distyll ar grynodiad o 2,000 g/ml a'i addasu i pH 7. Ar ôl hidlo gan ddefnyddio hidlydd maint mandwll 0.{4}}m, 1 y cant cymysgwyd byffer phosphatidylcholine hydrogenaidd ar gymhareb o 10 y cant . Paratowyd y sampl liposom maint nano trwy basio trwy'r celloedd 75-m bum gwaith ar 1,000 bar gan ddefnyddio'r Microfluidizer.

Cafodd MelanoDerm MEL-300-B (MatTek Corporation, Ashland, MA, UDA) ei drin yn topig gyda 25 l neu 50 l o liposome yn cynnwys cymysgedd peptid 2,000 g/ml dair gwaith yr wythnos am bythefnos. Defnyddiwyd yr un cyfaint o gerbyd i reoli meinwe. Golchwyd y croen cyfatebol a gafodd ei drin â DPBS a pherfformiwyd microsgopeg ysgafn i wirio morffoleg melanocytes. Yn dilyn hynny, i ddadansoddi cynhyrchiad melanin, cafodd y croen cyfatebol ei rewi ar -80 gradd am 30 munud a'i ddadmer ar dymheredd yr ystafell. Deorwyd samplau meinwe â sodiwm bicarbonad 1 y cant am 30 munud a'u sychu. Ar ôl triniaeth gyda 300 l o Solvable, gadawyd y samplau dros nos ar 95 gradd ac yna eu hoeri ar dymheredd yr ystafell. Mesurwyd amsugnedd y darn meinwe ar 490 nm gyda sbectroffotomedr.

Er mwyn arsylwi ar y dosbarthiad melanin yn y meinweoedd trwy histoleg, gosodwyd yr holl samplau mewn fformalin wedi'i glustogi â ffosffad 4 y cant am 24 h. Cafodd samplau sefydlog eu plannu â pharaffin a'u torri'n adran 5-m gan ddefnyddio microtome (Leica Biosystems, Wetzlar, yr Almaen). Cafodd darnau paraffin eu staenio gan ddefnyddio Pecyn Stain Fontana-Masson yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr a pherfformiwyd microsgopeg ysgafn.

Ystadegau

Ailadroddwyd yr arbrofion a gynhaliwyd yn yr astudiaeth hon dair gwaith neu fwy. Profwyd arwyddocâd ystadegol y data trwy brawf t Myfyriwr. Mynegwyd y gwerthoedd canlyniadol fel gwyriad safonol cymedrig ± ac fe'u hystyriwyd yn ystadegol arwyddocaol pan oedd y gwerth-p yn llai na 0.05.

CANLYNIADAU

Mae cymysgedd peptid yn atal synthesis melanin a achosir gan MSH a gweithgaredd tyrosinase mewn celloedd B16F10

Er mwyn pennu effaith y cymysgedd peptid ar hyfywedd celloedd, cafodd celloedd melanoma B16F10, a keratinocytes HaCaT eu trin â'r cymysgedd peptid mewn crynodiadau o 10, 50, 100, a 200 M, a chynhaliwyd assay MTT. Dangosodd y canlyniadau nad oedd y gymysgedd peptid yn sytotocsig yn y crynodiadau triniaeth cyffredinol, a chynhaliwyd arbrofion dilynol yn yr ystod crynodiad uchod (Ffig. 1A).

Er mwyn nodi effaith ataliol y cymysgedd peptid ar synthesis melanin, cafodd celloedd B16F10 eu trin mewn crynodiadau o 10, 50, 100, a 200 M i gymharu cyfraddau cynhyrchu melanin. Dangosodd y canlyniadau ataliad dos-ddibynnol o gynhyrchu melanin gan y cymysgedd peptid. Cyfraddau atal oedd 3 y cant ar y crynodiad isaf o 10 M a 26 y cant ar y crynodiad uchaf o 200 M (Ffig. 1 B).

Tyrosinase yw un o'r ensymau allweddol mewn synthesis melanin. Perfformiwyd assay gweithgaredd tyrosinase i wirio bod effaith ataliol melanogenesis y cymysgedd peptid yn cael ei achosi gan reoleiddio tyrosinase. Dangosodd y canlyniadau ataliad sylweddol o weithgaredd tyrosinase gan y cymysgedd peptid mewn celloedd B16F10. Cyfraddau atal oedd 8 y cant ar y crynodiad isaf o 10 M a 33 y cant ar y crynodiad uchaf o 200 M (Ffig. 1 C).

Gofynnwch am fwy: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501